Down-regulation of complement genes in lipopolysaccharide-challenged zebrafish (Danio rerio) larvae exposed to Indonesian propolis

Abstract Although propolis has been reported for having anti-inflammatory activities, its effects on complement system has not been much studied. This research was conducted to find out the effects of Indonesian propolis on the expression levels of C3, C1r/s, Bf, MBL, and C6 in zebrafish larvae which were induced by lipopolysaccharide (LPS). Counting of macrophages migrating to yolk sac and liver histology were carried out. Larvae were divided into four groups: CON (cultured in E3 medium only), LPS (cultured in a medium containing 0.5 g/L LPS), LPSIBU (cultured in a medium containing LPS, and then treated with 100 g/L ibuprofen for 24 hours), and LPSPRO (cultured in a medium containing LPS, and then immersed in 14,000 g/L propolis for 24 hours) groups. The results showed that complement gene expression in larvae from the LPSIBU and LPSPRO groups were generally lower than in larvae from the LPS group. The number of macrophage migrations to the yolk in the LPSPRO group was also lower than in the LPS group. Histological structure of liver in all groups were considered normal. This study shows that Indonesian propolis has the potential to be used as an alternative to the substitution of NSAIDs.

Resumo Embora a própolis tenha sido relatada por ter atividade anti-inflamatória, seus efeitos no sistema complemento, uma parte do sistema imunológico inato, não foram muito estudados. Esta pesquisa foi conduzida para descobrir os efeitos da própolis da Indonésia nos níveis de expressão de C3, C1r/s, Bf, MBL e C6 em larvas de peixe-zebra induzidas por lipopolissacarídeo (LPS). Foram realizadas contagens de macrófagos que migram para o saco vitelino e histologia do fígado. As larvas foram divididas em quatro grupos: CON (cultivadas apenas em meio E3), LPS (cultivadas em meio contendo 0,5 g/L de LPS), LPSIBU (cultivadas em meio contendo LPS e, em seguida, tratadas com 100 g/L de ibuprofeno por 24 horas) e LPSPRO (cultivado em meio contendo LPS, e então imerso em própolis 14,000 g/L por 24 horas). Os resultados mostraram que a expressão do gene do complemento em larvas dos grupos LPSIBU e LPSPRO foi geralmente menor que em larvas do grupo LPS. O número de migrações de macrófagos para a gema no grupo LPSPRO também foi menor que no grupo LPS. A estrutura histológica do fígado em todos os grupos foi considerada normal. Este estudo mostra que a própolis indonésia tem potencial para ser utilizada como alternativa na substituição dos AINEs (anti-inflamatórios não esteroides).

Down-regulation of complement genes in lipopolysaccharidechallenged zebrafish (Danio rerio) larvae exposed to Indonesian propolis / Regulação negativa dos genes do complemento em larvas de peixe-zebra (Danio rerio) desafiadas com lipopolissacarídeo expostas à própolis indonésia

Although propolis has been reported for having anti-inflammatory activities, its effects on complement system has not been much studied. This research was conducted to find out the effects of Indonesian propolis on the expression levels of C3, C1r/s, Bf, MBL, and C6 in zebrafish larvae which were induced by lipopolysaccharide (LPS). Counting of macrophages migrating to yolk sac and liver histology were carried out. Larvae were divided into four groups: CON (cultured in E3 medium only), LPS (cultured in a medium containing 0.5 μg/L LPS), LPSIBU (cultured in a medium containing LPS, and then treated with 100 μg/L ibuprofen for 24 hours), and LPSPRO (cultured in a medium containing LPS, and then immersed in 14,000 μg/L propolis for 24 hours) groups. The results showed that complement gene expression in larvae from the LPSIBU and LPSPRO groups were generally lower than in larvae from the LPS group. The number of macrophage migrations to the yolk in the LPSPRO group was also lower than in the LPS group. Histological structure of liver in all groups were considered normal. This study shows that Indonesian propolis has the potential to be used as an alternative to the substitution of NSAIDs.

Embora a própolis tenha sido relatada por ter atividade anti-inflamatória, seus efeitos no sistema complemento, uma parte do sistema imunológico inato, não foram muito estudados. Esta pesquisa foi conduzida para descobrir os efeitos da própolis da Indonésia nos níveis de expressão de C3, C1r/s, Bf, MBL e C6 em larvas de peixe-zebra induzidas por lipopolissacarídeo (LPS). Foram realizadas contagens de macrófagos que migram para o saco vitelino e histologia do fígado. As larvas foram divididas em quatro grupos: CON (cultivadas apenas em meio E3), LPS (cultivadas em meio contendo 0,5 μg/L de LPS), LPSIBU (cultivadas em meio contendo LPS e, em seguida, tratadas com 100 μg/L de ibuprofeno por 24 horas) e LPSPRO (cultivado em meio contendo LPS, e então imerso em própolis 14,000 μg/L por 24 horas). Os resultados mostraram que a expressão do gene do complemento em larvas dos grupos LPSIBU e LPSPRO foi geralmente menor que em larvas do grupo LPS. O número de migrações de macrófagos para a gema no grupo LPSPRO também foi menor que no grupo LPS. A estrutura histológica do fígado em todos os grupos foi considerada normal. Este estudo mostra que a própolis indonésia tem potencial para ser utilizada como alternativa na substituição dos AINEs (anti-inflamatórios não esteroides).

Down-regulation of complement genes in lipopolysaccharidechallenged zebrafish (Danio rerio) larvae exposed to Indonesian propolis / Regulação negativa dos genes do complemento em larvas de peixe-zebra (Danio rerio) desafiadas com lipopolissacarídeo expostas à própolis indonésia

Although propolis has been reported for having anti-inflammatory activities, its effects on complement system has not been much studied. This research was conducted to find out the effects of Indonesian propolis on the expression levels of C3, C1r/s, Bf, MBL, and C6 in zebrafish larvae which were induced by lipopolysaccharide (LPS). Counting of macrophages migrating to yolk sac and liver histology were carried out. Larvae were divided into four groups: CON (cultured in E3 medium only), LPS (cultured in a medium containing 0.5 μg/L LPS), LPSIBU (cultured in a medium containing LPS, and then treated with 100 μg/L ibuprofen for 24 hours), and LPSPRO (cultured in a medium containing LPS, and then immersed in 14,000 μg/L propolis for 24 hours) groups. The results showed that complement gene expression in larvae from the LPSIBU and LPSPRO groups were generally lower than in larvae from the LPS group. The number of macrophage migrations to the yolk in the LPSPRO group was also lower than in the LPS group. Histological structure of liver in all groups were considered normal. This study shows that Indonesian propolis has the potential to be used as an alternative to the substitution of NSAIDs.(AU)

Embora a própolis tenha sido relatada por ter atividade anti-inflamatória, seus efeitos no sistema complemento, uma parte do sistema imunológico inato, não foram muito estudados. Esta pesquisa foi conduzida para descobrir os efeitos da própolis da Indonésia nos níveis de expressão de C3, C1r/s, Bf, MBL e C6 em larvas de peixe-zebra induzidas por lipopolissacarídeo (LPS). Foram realizadas contagens de macrófagos que migram para o saco vitelino e histologia do fígado. As larvas foram divididas em quatro grupos: CON (cultivadas apenas em meio E3), LPS (cultivadas em meio contendo 0,5 μg/L de LPS), LPSIBU (cultivadas em meio contendo LPS e, em seguida, tratadas com 100 μg/L de ibuprofeno por 24 horas) e LPSPRO (cultivado em meio contendo LPS, e então imerso em própolis 14,000 μg/L por 24 horas). Os resultados mostraram que a expressão do gene do complemento em larvas dos grupos LPSIBU e LPSPRO foi geralmente menor que em larvas do grupo LPS. O número de migrações de macrófagos para a gema no grupo LPSPRO também foi menor que no grupo LPS. A estrutura histológica do fígado em todos os grupos foi considerada normal. Este estudo mostra que a própolis indonésia tem potencial para ser utilizada como alternativa na substituição dos AINEs (anti-inflamatórios não esteroides).(AU)

Early ontogeny of tetra Markiana nigripinnis (Characiformes: Characidae)

The early development of Markiana nigripinnis is described by morphological characters, pigmentation, and morphometry. Larvae were obtained through semi-natural breeding, collected, fixed, and identified according to their development. Eighty individuals with standard lengths ranging from 3.1 to 24.3 mm were analyzed. Larvae are poorly developed at hatching, with a relatively large yolk sac and finfold. At the preflexion stage, the eyes are pigmented, the mouth and anus are functional, the yolk is completely absorbed, and the pectoral fin bud emerges. At flexion, the first rays of the caudal, anal, and dorsal fins become evident. The pelvic fin bud emerges only at the postflexion stage, in addition to the complete absorption of the finfold. Pigmentation is distributed throughout the body, with a greater concentration on the top of the head, around the mouth, and at the base of the caudal fin. The myomere total number ranged from 34 to 49 (16-23 preanal, and 18-27 postanal). Juveniles show morphological characteristics like adults. The fins ray number are pectoral: 11-13, pelvic: 5-7, dorsal: 8-11, caudal: 16-27, and anal 30-47. The morphometric relationships reveal variations in growth along the early ontogeny of the species.

O desenvolvimento inicial de Markiana nigripinnis foi descrito considerando os caracteres morfológicos, a pigmentação e a morfometria. Indivíduos foram obtidos por meio de reprodução seminatural, coletados, acondicionados, fixados e identificados conforme seu período e estágio de desenvolvimento. Foram analisados 80 indivíduos com comprimento padrão variando de 3,1 a 24,3 mm. As larvas são pouco desenvolvidas à eclosão, com saco vitelino relativamente grande e presença de membrana embrionária. Em pré-flexão, os olhos estão pigmentados, a boca e o ânus são funcionais, o vitelo é completamente absorvido e surge o botão da nadadeira peitoral. Em flexão, os primeiros raios das nadadeiras caudal, anal e dorsal tornam-se evidentes. O botão da nadadeira pélvica aparece somente em pós-flexão, além da completa absorção da nadadeira embrionária. A pigmentação se distribui pelo corpo todo, com maior concentração no topo da cabeça, ao redor da boca e na base da nadadeira caudal. O número total de miômeros variou de 34 a 49 (16-23 pré e 18-27 pós-anal). Os juvenis apresentaram características morfológicas semelhantes ao adulto. O número de raios das nadadeiras é peitoral: 11-13, pélvica: 5-7, dorsal: 8-11, caudal: 16-27 e anal 30-47. As relações morfométricas revelam variações no crescimento ao longo da ontogenia inicial da espécie.

Down-regulation of complement genes in lipopolysaccharide-challenged zebrafish (Danio rerio) larvae exposed to Indonesian propolis / Regulação negativa dos genes do complemento em larvas de peixe-zebra (Danio rerio) desafiadas com lipopolissacarídeo expostas à própolis indonésia

Abstract Although propolis has been reported for having anti-inflammatory activities, its effects on complement system has not been much studied. This research was conducted to find out the effects of Indonesian propolis on the expression levels of C3, C1r/s, Bf, MBL, and C6 in zebrafish larvae which were induced by lipopolysaccharide (LPS). Counting of macrophages migrating to yolk sac and liver histology were carried out. Larvae were divided into four groups: CON (cultured in E3 medium only), LPS (cultured in a medium containing 0.5 μg/L LPS), LPSIBU (cultured in a medium containing LPS, and then treated with 100 μg/L ibuprofen for 24 hours), and LPSPRO (cultured in a medium containing LPS, and then immersed in 14,000 μg/L propolis for 24 hours) groups. The results showed that complement gene expression in larvae from the LPSIBU and LPSPRO groups were generally lower than in larvae from the LPS group. The number of macrophage migrations to the yolk in the LPSPRO group was also lower than in the LPS group. Histological structure of liver in all groups were considered normal. This study shows that Indonesian propolis has the potential to be used as an alternative to the substitution of NSAIDs.

Resumo Embora a própolis tenha sido relatada por ter atividade anti-inflamatória, seus efeitos no sistema complemento, uma parte do sistema imunológico inato, não foram muito estudados. Esta pesquisa foi conduzida para descobrir os efeitos da própolis da Indonésia nos níveis de expressão de C3, C1r/s, Bf, MBL e C6 em larvas de peixe-zebra induzidas por lipopolissacarídeo (LPS). Foram realizadas contagens de macrófagos que migram para o saco vitelino e histologia do fígado. As larvas foram divididas em quatro grupos: CON (cultivadas apenas em meio E3), LPS (cultivadas em meio contendo 0,5 μg/L de LPS), LPSIBU (cultivadas em meio contendo LPS e, em seguida, tratadas com 100 μg/L de ibuprofeno por 24 horas) e LPSPRO (cultivado em meio contendo LPS, e então imerso em própolis 14,000 μg/L por 24 horas). Os resultados mostraram que a expressão do gene do complemento em larvas dos grupos LPSIBU e LPSPRO foi geralmente menor que em larvas do grupo LPS. O número de migrações de macrófagos para a gema no grupo LPSPRO também foi menor que no grupo LPS. A estrutura histológica do fígado em todos os grupos foi considerada normal. Este estudo mostra que a própolis indonésia tem potencial para ser utilizada como alternativa na substituição dos AINEs (anti-inflamatórios não esteroides).

Characterization of hematopoietic stem cells from the canine yolk sac

The characterization of hematopoietic stem cells (HSC) from the canine yolk sac (cYS) can contribute to future gene therapies because it is possible to obtain information about the beginning of the development of the circulatory system through the characterization. The cYS is a likely source of HSC, which is a source of blood cell development in mammals. Studies in this field have been conducted for decades; however, interest in cellular therapy is currently at its peak with greater visibility, and these cells are a promising therapeutic tool for the treatment of diseases related to animals and humans. The aim of this study was to isolate and characterize HSC from the cYS embryos at 30 to 45 days of gestational age. Our results showed that the cYS was macroscopically located in the ventral region with a central portion and extremities. The cells in culture presented a circular morphology and cell clusters. The average cell viability was 22.55% dead cells out of 6.5 × 104 total cells. The cells were also able to form colonies on methylcellulose. Flow cytometry analysis revealed the expression of CD34, CD117, and CD45. Our results suggest that the cYS can be used as a source of hematopoietic cells, and this study is very important to understand the mechanism and development of the hematopoietic system in dogs.(AU)

Sodium butyrate in post-hatch feed for broiler chicks / [Uso de butirato de sódio em rações pós-eclosão para pintos de corte]

This study was designed to determine adequate levels for sodium butyrate inclusion in pre-hatching and pre-starter feed in order to minimize the negative effects of post-hatch delayed placement on broiler chicks. Newly-hatched chicks were allotted in a completely randomized design, with five treatments, each comprising five replicates of ten birds each. Five dietetic levels of sodium butyrate (control, 0.050, 0.075, 0.100 and 0.200%) were used in the pre-starter feed offered to the chicks in the transporting box and during the pre-starter phase. Performance, yolk sac retraction, plasma glucose concentration, weight and histomorphometry of the small intestine were evaluated after 24 hours of feed access and at 7 days of age. A metabolic trial was performed when the chicks were seven to ten days of age. Supplementation of 0.1% sodium butyrate increased the development of broiler chicks' intestinal villi at seven days of age but was not able to improve performance in the pre-starter phase. Supplementation with sodium butyrate in a diet offered in the transportation box does not improve broiler performance in the pre-starter phase. Supplementation of up to 0.16% is recommended, in order to improve the metabolizability of the ether extract for broilers at seven days of age.(AU)

Objetivou-se, com este estudo, encontrar níveis adequados de inclusão de butirato de sódio em ração pós-eclosão e pré-inicial, buscando minimizar os efeitos negativos do jejum de pintos de corte. Os animais foram distribuídos em delineamento inteiramente ao acaso, com cinco tratamentos e cinco repetições de 10 aves cada. Foram utilizadas cinco suplementações de butirato de sódio (controle; 0,05; 0,075; 0,100 e 0,200%) na ração pré-inicial, fornecidas aos pintos na caixa de transporte e durante a fase pré-inicial. Após 24 horas de acesso ao alimento e aos sete dias de idade, foram avaliados desempenho, retração do saco vitelino, concentração de glicose plasmática, peso e histomorfometria do intestino delgado. De sete a 10 dias de idade, realizou-se ensaio de metabolizabilidade. A suplementação de 0,10% de butirato de sódio aumentou o desenvolvimento das vilosidades intestinais dos pintos de corte aos sete dias de idade, mas não foi capaz de melhorar o desempenho na fase pré-inicial. A suplementação com butirato de sódio em dieta oferecida na caixa de transporte não melhora o desempenho dos frangos na fase pré-inicial. Recomenda-se suplementação de até 0,16%, a fim de melhorar a metabolizabilidade do extrato etéreo para frangos de corte aos sete dias de idade.(AU)

Effects of breeder age and short-term temperature stimulation during incubation on performance, organ weight, and carcass yield in male and female broilers / Efeitos da idade da matriz e de alterações curtas de temperatura de incubação no desempenho, peso dos órgãos e rendimento de carcaça em frangos de corte machos e fêmeas

Birds develop thermoregulatory control during the last days of incubation. Different temperature conditioning programs have been proposed to prepare broiler chicks for post-hatch life. This study aimed to investigate the effects of short-term temperature (STT) stimulation and breeder age on hatching performance, embryo development, yolk absorption, and post-hatch performance of male and female broilers. A 2 × 2 factorial completely randomized design was used, with two breeder ages (30 and 60 wk), two temperature incubation programs (control and STT), and 2,520 eggs per treatment. Eggs were distributed in two large-scale commercial incubators with a capacity of 120,960 eggs. The control group was subjected to a standard single-stage incubation program (37.2-37.4 °C), whereas the STT group was subjected to a temperature increment of 1 °C for 4 h on embryonic days 16, 17, 18, and 19. Embryos were analyzed at 16 and 19 days of incubation, and chicks at hatch. At 19 days of incubation, STT conditioning resulted in lower yolk sac weight in embryos from 60-wk-old breeders and higher relative weight of the gastrointestinal tract in embryos from 30-wk-old breeders. At hatch, males had lower residual yolk weight, females had greater length, and chicks from 60-wk-old breeders subjected to STT had higher body weight and relative weight of the gastrointestinal tract. Eggs from 30-wk-old breeders showed higher fertility and hatchability and lower infertility, mortality, and second-grade chick percentages. Regarding performance, it was found that males had higher body weight from 7 to 42 days of age and higher whole leg yields. Females, on the other hand, had higher fat yields. Breeder age and sex influenced gastrointestinal tract development, carcass yield, and performance. A 1 °C increase in incubation temperature for 4 h from days 16 to 19 of incubation affected yolk absorption and digestive tract development in chicks from 60-wk-old breeders without, however, influencing performance results.(AU)

As aves desenvolvem o controle do sistema termorregulatório durante os últimos dias de incubação, dessa forma, diferentes programas temperatura de incubação têm sido descritos para preparar os pintos de corte para a vida pós-eclosão. Objetivou-se nesse estudo, estabelecer os efeitos de alterações curtas na temperatura de incubação e da idade da matriz no desempenho de eclosão, desenvolvimento embrionário, absorção da gema e desempenho pós-eclosão de frangos de corte machos e fêmeas. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado em fatorial 2 x 2 com 2 idades de matriz (30 e 60 semanas) e 2 programas de incubação de temperatura, controle (CT) e grupo de treinamento de temperatura de curto prazo (STT) e 2.520 ovos em cada tratamento. Os ovos foram distribuídos em 2 incubadoras comerciais de grande escala com capacidade para 120.960 ovos. O grupo CT seguiu um programa de incubação de estágio único padrão (37,2-37,4°C) e o STT teve um incremento em + 1 ° C por 4 hs nos dias 16, 17, 18 e 19 de incubação. Os embriões foram analisados aos 16 e 19 dias e pintinhos na eclosão. Aos 19 dias de incubação, embriões de matrizes com 60 semanas apresentaram menor peso do saco vitelino e embriões de matrizes com 30 semanas apresentaram maior porcentagem de trato gastrointestinal quando em STT. Na eclosão, os machos apresentaram menor vitelo residual, e as fêmeas apresentaram maior comprimento, pintinhos mais pesados e maior trato gastrointestinal quando originárias de matrizes de 60 semanas de idade e expostos ao STT. Na eclosão, os ovos com 30 semanas de idade apresentaram maior porcentagem de fertilidade e eclodibilidade e menor infertilidade, mortalidade e pintos de secunda categoria. No desempenho, os machos apresentaram maior peso corporal do 7° ao 42° dia e maiores valores de porcentagem de pernas e as fêmeas maiores valores de porcentagem de gordura. A idade das matrizes e o sexo influenciaram o desenvolvimento visceral, o rendimento de carcaça e o desempenho dos frangos de corte. O aumento de 1°C durante 4 horas entre os dias 16 e 19 de incubação afetou a absorção da gema e o trato digestivo em pintos de matrizes com 60 semanas de idade, sem refletir nos resultados de desempenho.(AU)

BPA toxicity during development of zebrafish embryo / Toxicidade do BPA durante o desenvolvimento de embriões de zebrafish

Bisphenol A (BPA) is a monomer used in the production of polycarbonate, a polymer commonly found in plastics, epoxy resins and thermal papers. The presence of BPA in food, water, air and dust has been of great concern in recent years not only due to environmental and ecological issues but also because of its supposed risk to public health related to its mutagenic and carcinogenic potential. In this study we evaluated the toxicity of bisphenol A in zebrafish embryos (Danio rerio) and determined the 50% lethal concentration (LC50) of this chemical. BPA was used at concentrations ranging from 1 M to 100 M in E3 medium/0.5% dimethylsulfoxide (DMSO) from previously prepared stock solutions in 100% DMSO. Controls included embryos exposed only to E3 medium or supplemented with 0.5% DMSO. Camptothecin (CPT), a known inhibitor of cell proliferation was used as positive control at a concentration of 0.001 M in E3 medium/0.5% DMSO. Adults zebrafish were placed for breeding a day before the experimental set up, then, viable embryos were collected and selected for use. Experiments were carried out in triplicates, according to specifications from Organization for Economic Cooperation and Development (OECD). One embryo/well (25 embryos per concentration) was distributed in 96 well microplates in presence or absence of the chemicals. The plates were kept in BOD incubators with a controlled temperature of 28.5 ºC and with photoperiod of 14 h light:10 h dark. After 24h, 48h, 72h and 96h exposure, the exposed embryos were evaluated according to the following parameters: mortality, coagulation, rate of heartbeat, hatching and presence of morphological abnormalities. Photography was obtained by photomicroscopy. Apoptosis was evaluated by DNA ladder assay. DNA was extracted by phenol:chloroform method and analyzed by 2% agarose gel electrophoresis. DNA fragments were visualized after ethidium bromide staining in ultraviolet transilluminator. The LC50 determined for BPA was 70 M after 24 hours, 72 M after 48 hours, 47 M after 72 hours and 31 M after 96 hours exposure. BPA induced morphological and physiological alterations such as yolk sac and pericardial edema, hatching delay or inhibition, spine deformation, decreasing in heartbeat rate and mortality. In conclusion, this study demonstrated that BPA induced marked malformations in zebrafish embryos at concentrations above 25 M corroborating the current concerns related to the widespread presence of BPA in the air, food and water used by humans as well as in the bodily fluids and tissues.(AU)

Bisfenol A (BPA) é um monômero utilizado na produção de policarbonato, um polímero comumente encontrado em plásticos, resinas epóxi e papéis térmicos. A presença de BPA em alimentos, água, ar e poeira tem sido motivo de grande preocupação nos últimos anos, não só devido a questões ambientais e ecológicas, mas também ao suposto risco para a saúde pública relacionado ao seu potencial mutagênico e carcinogênico. Neste estudo avaliamos a toxicidade do bisfenol A em embriões de peixe-zebra (Danio rerio) e determinamos a concentração letal 50% (LC50) deste composto químico. O BPA foi usado na faixa de concentração entre 1 M e 100M em meio E3/0,5% de dimetilsulfóxido (DMSO), preparado a partir de soluções estoques em 100% DMSO. Os controles negativos incluíram embriões expostos apenas ao meio E3 ou suplementado com 0,5% DMSO. Camptotecina (CPT), um conhecido inibidor da proliferação celular, foi usado como controle positivo a uma concentração de 0,001 M em meio E3/0,5% DMSO. Peixes-zebra adultos foram colocados para reprodução um dia antes da montagem experimental, em seguida, embriões viáveis foram coletados e selecionados para uso. Os experimentos foram realizados em triplicata, de acordo com as especificações da Organização para Cooperação e Desenvolvimento Econômico (OCDE). Um embrião/ poço (25 embriões por concentração) foi distribuído em microplacas de 96 poços na presença ou ausência dos compostos químicos. As placas foram mantidas em incubadoras BOD com temperatura controlada de 28,5 ºC e com fotoperíodo de 14h claro:10h escuro. Após 24h, 48h, 72h e 96h, os embriões expostos foram avaliados de acordo com os seguintes parâmetros: mortalidade, presença de coagulação, taxa do batimento cardíaco, eclosão e presença de anormalidades morfológicas. Fotografias foram obtidas por fotomicroscopia. A apoptose foi avaliada pelo ensaio de DNA ladder. O DNA foi extraído pelo método fenol:clorofórmio e analisado por eletroforese em gel de agarose a 2%. Fragmentos de DNA foram visualizadas após coloração com brometo de etídio em um transiluminador ultravioleta. A LC50 determinada para o BPA foi 70 M após 24 horas, 72 M após 48 horas, 47 M após 72 horas e 31 M após exposição por 96 horas. O BPA induziu alterações morfológicas e fisiológicas como edema de saco vitelino e edema pericárdico, atraso no tempo ou inibição da eclosão, deformação da coluna vertebral, diminuição da taxa de batimentos cardíacos e mortalidade. Em conclusão, este estudo demonstrou que o BPA induziu grande número de malformações em embriões de peixe-zebra em concentrações acima de 25 M, corroborando as preocupações atuais relacionadas a presença generalizada do BPA no ar, alimento e água usados pelos seres humanos bem como nos fluidos e tecidos corporais.(AU)

BPA toxicity during development of zebrafish embryo / Toxicidade do BPA durante o desenvolvimento de embriões de Zebrafish

Bisphenol A (BPA) is a monomer used in the production of polycarbonate, a polymer commonly found in plastics, epoxy resins and thermal papers. The presence of BPA in food, water, air and dust has been of great concern in recent years not only due to environmental and ecological issues but also because of its supposed risk to public health related to its mutagenic and carcinogenic potential. In this study we evaluated the toxicity of bisphenol A in zebrafish embryos (Danio rerio) and determined the 50% lethal concentration (LC50) of this chemical. BPA was used at concentrations ranging from 1 µM to 100 µM in E3 medium/0.5% dimethylsulfoxide (DMSO) from previously prepared stock solutions in 100% DMSO. Controls included embryos exposed only to E3 medium or supplemented with 0.5% DMSO. Camptothecin (CPT), a known inhibitor of cell proliferation was used as positive control at a concentration of 0.001 µM in E3 medium/0.5% DMSO. Adults zebrafish were placed for breeding a day before the experimental set up, then, viable embryos were collected and selected for use. Experiments were carried out in triplicates, according to specifications from Organization for Economic Cooperation and Development (OECD). One embryo/well (25 embryos per concentration) was distributed in 96 well microplates in presence or absence of the chemicals. The plates were kept in BOD incubators with a controlled temperature of 28.5 ºC and with photoperiod of 14 h light:10 h dark. After 24h, 48h, 72h and 96h exposure, the exposed embryos were evaluated according to the following parameters: mortality, coagulation, rate of heartbeat, hatching and presence of morphological abnormalities. Photography was obtained by photomicroscopy. Apoptosis was evaluated by DNA ladder assay. DNA was extracted by phenol:chloroform method and analyzed by 2% agarose gel electrophoresis. DNA fragments were visualized after ethidium bromide staining in ultraviolet transilluminator. The LC50 determined for BPA was 70 µM after 24 hours, 72 µM after 48 hours, 47 µM after 72 hours and 31 µM after 96 hours exposure. BPA induced morphological and physiological alterations such as yolk sac and pericardial edema, hatching delay or inhibition, spine deformation, decreasing in heartbeat rate and mortality. In conclusion, this study demonstrated that BPA induced marked malformations in zebrafish embryos at concentrations above 25 µM corroborating the current concerns related to the widespread presence of BPA in the air, food and water used by humans as well as in the bodily fluids and tissues.

Bisfenol A (BPA) é um monômero utilizado na produção de policarbonato, um polímero comumente encontrado em plásticos, resinas epóxi e papéis térmicos. A presença de BPA em alimentos, água, ar e poeira tem sido motivo de grande preocupação nos últimos anos, não só devido a questões ambientais e ecológicas, mas também ao suposto risco para a saúde pública relacionado ao seu potencial mutagênico e carcinogênico. Neste estudo avaliamos a toxicidade do bisfenol A em embriões de peixe-zebra (Danio rerio) e determinamos a concentração letal 50% (LC50) deste composto químico. O BPA foi usado na faixa de concentração entre 1 µM e 100µM em meio E3/0,5% de dimetilsulfóxido (DMSO), preparado a partir de soluções estoques em 100% DMSO. Os controles negativos incluíram embriões expostos apenas ao meio E3 ou suplementado com 0,5% DMSO. Camptotecina (CPT), um conhecido inibidor da proliferação celular, foi usado como controle positivo a uma concentração de 0,001 µM em meio E3/0,5% DMSO. Peixes-zebra adultos foram colocados para reprodução um dia antes da montagem experimental, em seguida, embriões viáveis foram coletados e selecionados para uso. Os experimentos foram realizados em triplicata, de acordo com as especificações da Organização para Cooperação e Desenvolvimento Econômico (OCDE). Um embrião/ poço (25 embriões por concentração) foi distribuído em microplacas de 96 poços na presença ou ausência dos compostos químicos. As placas foram mantidas em incubadoras BOD com temperatura controlada de 28,5 ºC e com fotoperíodo de 14h claro:10h escuro. Após 24h, 48h, 72h e 96h, os embriões expostos foram avaliados de acordo com os seguintes parâmetros: mortalidade, presença de coagulação, taxa do batimento cardíaco, eclosão e presença de anormalidades morfológicas. Fotografias foram obtidas por fotomicroscopia. A apoptose foi avaliada pelo ensaio de DNA ladder. O DNA foi extraído pelo método fenol:clorofórmio e analisado por eletroforese em gel de agarose a 2%. Fragmentos de DNA foram visualizadas após coloração com brometo de etídio em um transiluminador ultravioleta. A LC50 determinada para o BPA foi 70 µM após 24 horas, 72 µM após 48 horas, 47 µM após 72 horas e 31 µM após exposição por 96 horas. O BPA induziu alterações morfológicas e fisiológicas como edema de saco vitelino e edema pericárdico, atraso no tempo ou inibição da eclosão, deformação da coluna vertebral, diminuição da taxa de batimentos cardíacos e mortalidade. Em conclusão, este estudo demonstrou que o BPA induziu grande número de malformações em embriões de peixe-zebra em concentrações acima de 25 µM, corroborando as preocupações atuais relacionadas a presença generalizada do BPA no ar, alimento e água usados pelos seres humanos bem como nos fluidos e tecidos corporais.

BPA toxicity during development of zebrafish embryo

Abstract Bisphenol A (BPA) is a monomer used in the production of polycarbonate, a polymer commonly found in plastics, epoxy resins and thermal papers. The presence of BPA in food, water, air and dust has been of great concern in recent years not only due to environmental and ecological issues but also because of its supposed risk to public health related to its mutagenic and carcinogenic potential. In this study we evaluated the toxicity of bisphenol A in zebrafish embryos (Danio rerio) and determined the 50% lethal concentration (LC50) of this chemical. BPA was used at concentrations ranging from 1 M to 100 M in E3 medium/0.5% dimethylsulfoxide (DMSO) from previously prepared stock solutions in 100% DMSO. Controls included embryos exposed only to E3 medium or supplemented with 0.5% DMSO. Camptothecin (CPT), a known inhibitor of cell proliferation was used as positive control at a concentration of 0.001 M in E3 medium/0.5% DMSO. Adults zebrafish were placed for breeding a day before the experimental set up, then, viable embryos were collected and selected for use. Experiments were carried out in triplicates, according to specifications from Organization for Economic Cooperation and Development (OECD). One embryo/well (25 embryos per concentration) was distributed in 96 well microplates in presence or absence of the chemicals. The plates were kept in BOD incubators with a controlled temperature of 28.5 ºC and with photoperiod of 14 h light:10 h dark. After 24h, 48h, 72h and 96h exposure, the exposed embryos were evaluated according to the following parameters: mortality, coagulation, rate of heartbeat, hatching and presence of morphological abnormalities. Photography was obtained by photomicroscopy. Apoptosis was evaluated by DNA ladder assay. DNA was extracted by phenol:chloroform method and analyzed by 2% agarose gel electrophoresis. DNA fragments were visualized after ethidium bromide staining in ultraviolet transilluminator. The LC50 determined for BPA was 70 M after 24 hours, 72 M after 48 hours, 47 M after 72 hours and 31 M after 96 hours exposure. BPA induced morphological and physiological alterations such as yolk sac and pericardial edema, hatching delay or inhibition, spine deformation, decreasing in heartbeat rate and mortality. In conclusion, this study demonstrated that BPA induced marked malformations in zebrafish embryos at concentrations above 25 M corroborating the current concerns related to the widespread presence of BPA in the air, food and water used by humans as well as in the bodily fluids and tissues.

Resumo Bisfenol A (BPA) é um monômero utilizado na produção de policarbonato, um polímero comumente encontrado em plásticos, resinas epóxi e papéis térmicos. A presença de BPA em alimentos, água, ar e poeira tem sido motivo de grande preocupação nos últimos anos, não só devido a questões ambientais e ecológicas, mas também ao suposto risco para a saúde pública relacionado ao seu potencial mutagênico e carcinogênico. Neste estudo avaliamos a toxicidade do bisfenol A em embriões de peixe-zebra (Danio rerio) e determinamos a concentração letal 50% (LC50) deste composto químico. O BPA foi usado na faixa de concentração entre 1 M e 100M em meio E3/0,5% de dimetilsulfóxido (DMSO), preparado a partir de soluções estoques em 100% DMSO. Os controles negativos incluíram embriões expostos apenas ao meio E3 ou suplementado com 0,5% DMSO. Camptotecina (CPT), um conhecido inibidor da proliferação celular, foi usado como controle positivo a uma concentração de 0,001 M em meio E3/0,5% DMSO. Peixes-zebra adultos foram colocados para reprodução um dia antes da montagem experimental, em seguida, embriões viáveis foram coletados e selecionados para uso. Os experimentos foram realizados em triplicata, de acordo com as especificações da Organização para Cooperação e Desenvolvimento Econômico (OCDE). Um embrião/ poço (25 embriões por concentração) foi distribuído em microplacas de 96 poços na presença ou ausência dos compostos químicos. As placas foram mantidas em incubadoras BOD com temperatura controlada de 28,5 ºC e com fotoperíodo de 14h claro:10h escuro. Após 24h, 48h, 72h e 96h, os embriões expostos foram avaliados de acordo com os seguintes parâmetros: mortalidade, presença de coagulação, taxa do batimento cardíaco, eclosão e presença de anormalidades morfológicas. Fotografias foram obtidas por fotomicroscopia. A apoptose foi avaliada pelo ensaio de DNA ladder. O DNA foi extraído pelo método fenol:clorofórmio e analisado por eletroforese em gel de agarose a 2%. Fragmentos de DNA foram visualizadas após coloração com brometo de etídio em um transiluminador ultravioleta. A LC50 determinada para o BPA foi 70 M após 24 horas, 72 M após 48 horas, 47 M após 72 horas e 31 M após exposição por 96 horas. O BPA induziu alterações morfológicas e fisiológicas como edema de saco vitelino e edema pericárdico, atraso no tempo ou inibição da eclosão, deformação da coluna vertebral, diminuição da taxa de batimentos cardíacos e mortalidade. Em conclusão, este estudo demonstrou que o BPA induziu grande número de malformações em embriões de peixe-zebra em concentrações acima de 25 M, corroborando as preocupações atuais relacionadas a presença generalizada do BPA no ar, alimento e água usados pelos seres humanos bem como nos fluidos e tecidos corporais.

Avaliação inicial da gestação equina por ultrassonografia 3D Relato de caso / Initial evaluation of equine pregnancy by 3D ultrasound Case report

O presente trabalho objetivou o acompanhamento da gestação inicial na égua entre os dias 12 a35 pós-ovulação por meio da ultrassonografia tridimensional (3D). Após o diagnóstico de gestação no dia12 pós-ovulação, a reprodutora foi examinada diariamente por palpação retal e ultrassonografia paraadquirir imagens no modo B e em 3D. Nas avaliações diárias e com as imagens construídas pela técnicade ultrassonografia tridimensional foi possível acompanhar o crescimento do concepto, a identificação doembrião propriamente dito e a diferenciação de estruturas e membranas (saco vitelino e saco alantoide)permitindo visualizações em 360 graus. Pode-se concluir que na técnica de processamento da imagemtridimensional as imagens geradas fornecem excelente material educacional e acadêmico, precisando demais estudos para permitir uma efetiva aplicação clínica na perda embrionária.(AU)

The present study aimed at monitoring the initial pregnancy in the mare between days 12 to 35after ovulation using three-dimensional (3D) ultrasonography. After the diagnosis of gestation on day 12after ovulation, the reproductive tract was examined daily by rectal palpation and ultrasonography toacquire images in B mode and in 3D. In the daily evaluations and with the images constructed by thetechnique of three-dimensional ultrasonography, it was possible to follow the growth of the concept, theidentification of the embryo proper and the differentiation of structures and membranes (yolk andallantoic sac) allowing visualizations in 360 degrees. It can be concluded that the 3D generated imagesprovide excellent educational and academic material however, more studies are needed to allow aneffective application in embryonic loss.(AU)

Avaliação inicial da gestação equina por ultrassonografia 3D – Relato de caso / Initial evaluation of equine pregnancy by 3D ultrasound – Case report

O presente trabalho objetivou o acompanhamento da gestação inicial na égua entre os dias 12 a35 pós-ovulação por meio da ultrassonografia tridimensional (3D). Após o diagnóstico de gestação no dia12 pós-ovulação, a reprodutora foi examinada diariamente por palpação retal e ultrassonografia paraadquirir imagens no modo B e em 3D. Nas avaliações diárias e com as imagens construídas pela técnicade ultrassonografia tridimensional foi possível acompanhar o crescimento do concepto, a identificação doembrião propriamente dito e a diferenciação de estruturas e membranas (saco vitelino e saco alantoide)permitindo visualizações em 360 graus. Pode-se concluir que na técnica de processamento da imagemtridimensional as imagens geradas fornecem excelente material educacional e acadêmico, precisando demais estudos para permitir uma efetiva aplicação clínica na perda embrionária.

The present study aimed at monitoring the initial pregnancy in the mare between days 12 to 35after ovulation using three-dimensional (3D) ultrasonography. After the diagnosis of gestation on day 12after ovulation, the reproductive tract was examined daily by rectal palpation and ultrasonography toacquire images in B mode and in 3D. In the daily evaluations and with the images constructed by thetechnique of three-dimensional ultrasonography, it was possible to follow the growth of the concept, theidentification of the embryo proper and the differentiation of structures and membranes (yolk andallantoic sac) allowing visualizations in 360 degrees. It can be concluded that the 3D generated imagesprovide excellent educational and academic material however, more studies are needed to allow aneffective application in embryonic loss.

Larval development of the Mexican Snook, Centropomus poeyi (Teleostei: Centropomidae)

We document for the first time the early ontogeny of Centropomus poeyi based on captive raised material representing 0-19 days posthatch (dph). The achievement of early developmental landmarks (i.e., yolk-sac depletion, flexion, development of fins) and changes in pigmentation are described (1.4 mm NL-10.6 mm SL; 0-19 dph) and documented for a subset of individuals using high quality photographs. The ontogeny of the viscerocranium is also described (2.4 mm NL-10.6 mm SL; 6-19 dph). Development in C. poeyi occurs over a short period with attainment of the juvenile stage (i.e., full complement of fin rays present in each fin) occurring by 6.9 mm SL. The ontogeny of external pigmentation in C. poeyi is marked by two trends throughout growth: (1) a decrease in pigmentation dorsally; and (2) an increase in pigmentation ventrally along the midline. Development of the viscerocranium begins with the appearance of the maxilla and dentary in individuals of 2.4 mm NL, coinciding with the depletion of the yolk-sac. By 10.6 mm SL all bones of the viscerocranium are present and teeth are present on all teeth-bearing bones of the adult. Aspects of early development in C. poeyi are compared with the congeners C. undecimalis and C. parallelus.(AU)

Se documentó por primera vez la ontogenia temprana de Centropomus poeyi basada en material obtenido de cautiverio a partir de embriones (0 días después de la eclosión, dde) hasta los 19 dde. Se registró la aparición de puntos de referencia en el desarrollo temprano (p.ej. consumo de saco vitelino, flexión, desarrollo de aletas) y los cambios de pigmentación han sido descritos (1.4 mm NL-10.6 mm SL; 0-19 dde), siendo documentado para un subgrupo de individuos utilizando fotografías de alta calidad. El desarrollo del viscerocráneo también fue descrita (2.4 mm NL-10.6 mm SL; 6-19 dde). El desarrollo en C. poeyi sucede en un periodo corto de tiempo hasta alcanzar una etapa juvenil (p.ej., aparición completa de los radios presentes en cada aleta), lo que se observa a los 6.9 mm SL. La pigmentación externa en C. poeyi esta marcada por dos tendencias en el crecimiento: (1) un descenso en la pigmentación dorsal; y (2) un incremento en la pigmentación ventral a lo largo de la línea media. El desarrollo del viscerocráneo comienza con el aparecimiento del maxilar y el dentario en individuos de 2.4 mm NL, lo cual coincide con el consumo del saco vitelino. A los 10.6 mm SL todos los huesos del viscerocráneo están presentes como se observa en los dientes en los adultos. Algunos aspectos del desarrollo temprano en C. poeyi son comparados con los congéneros C. undecimalis y C. parallelus.(AU)

Larval development of the Mexican Snook, Centropomus poeyi (Teleostei: Centropomidae)

We document for the first time the early ontogeny of Centropomus poeyi based on captive raised material representing 0-19 days posthatch (dph). The achievement of early developmental landmarks (i.e., yolk-sac depletion, flexion, development of fins) and changes in pigmentation are described (1.4 mm NL-10.6 mm SL; 0-19 dph) and documented for a subset of individuals using high quality photographs. The ontogeny of the viscerocranium is also described (2.4 mm NL-10.6 mm SL; 6-19 dph). Development in C. poeyi occurs over a short period with attainment of the juvenile stage (i.e., full complement of fin rays present in each fin) occurring by 6.9 mm SL. The ontogeny of external pigmentation in C. poeyi is marked by two trends throughout growth: (1) a decrease in pigmentation dorsally; and (2) an increase in pigmentation ventrally along the midline. Development of the viscerocranium begins with the appearance of the maxilla and dentary in individuals of 2.4 mm NL, coinciding with the depletion of the yolk-sac. By 10.6 mm SL all bones of the viscerocranium are present and teeth are present on all teeth-bearing bones of the adult. Aspects of early development in C. poeyi are compared with the congeners C. undecimalis and C. parallelus.(AU)

Se documentó por primera vez la ontogenia temprana de Centropomus poeyi basada en material obtenido de cautiverio a partir de embriones (0 días después de la eclosión, dde) hasta los 19 dde. Se registró la aparición de puntos de referencia en el desarrollo temprano (p.ej. consumo de saco vitelino, flexión, desarrollo de aletas) y los cambios de pigmentación han sido descritos (1.4 mm NL-10.6 mm SL; 0-19 dde), siendo documentado para un subgrupo de individuos utilizando fotografías de alta calidad. El desarrollo del viscerocráneo también fue descrita (2.4 mm NL-10.6 mm SL; 6-19 dde). El desarrollo en C. poeyi sucede en un periodo corto de tiempo hasta alcanzar una etapa juvenil (p.ej., aparición completa de los radios presentes en cada aleta), lo que se observa a los 6.9 mm SL. La pigmentación externa en C. poeyi esta marcada por dos tendencias en el crecimiento: (1) un descenso en la pigmentación dorsal; y (2) un incremento en la pigmentación ventral a lo largo de la línea media. El desarrollo del viscerocráneo comienza con el aparecimiento del maxilar y el dentario en individuos de 2.4 mm NL, lo cual coincide con el consumo del saco vitelino. A los 10.6 mm SL todos los huesos del viscerocráneo están presentes como se observa en los dientes en los adultos. Algunos aspectos del desarrollo temprano en C. poeyi son comparados con los congéneros C. undecimalis y C. parallelus.(AU)

Powdered coconut water as preservant of semi-heavy cocks semen / Água de coco como preservante de sêmen de galos semipesados

This study aimed to evaluate the effect of powered coconut water as preservant of cocks semen in different times. The experimental method was completely randomized, with treatments constituted by different times (1, 5, 10 and 15 minutes) of powered coconut water as preservant of cocks semen (Rhode Island Red lineage with 30-weeks). After collect and use of powered coconut water as preservant, the semen samples were used for inseminated of breeders of same lineage and age (16 per treatment). 280 eggs were collected for evaluation of effects on chicks (70 eggs per treatment). Were evaluated the incubation yields, chick/egg relation and gastrointestinal tract development of chicks. The data collected were submitted for variance analysis and evaluated by Tukey test at 5% of significance. Differences (p 0.05) were observed in incubation yields, chick/egg relation and gastrointestinal tract development, with the exception (p>0.05) of oropharynx + oesophagus length and yolk sac weight. From these results, it was concluded that the powered coconut water can be used as preservation of cocks semen up to 15 minutes. Cells exposed more time to nutrients provided by the powdered coconut water showed eggs and chicks most heavier, and better results in the incubation yields and embryo development.(AU)

O objetivo com este estudo foi avaliar o efeito da água de coco como preservante do sêmen de galos em diferentes períodos. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, onde os tratamentos consistiam de diferentes períodos (1, 5, 10 e 15 minutos) de ação da água de coco como preservante do sêmen de galos (linhagem Rhode Island Red com 30 semanas). Após a coleta e submissão do sêmen a ação da água de coco, estas foram utilizadas para inseminação de 64 matrizes de mesma linhagem e idade (16 por tratamento). Foram coletados 280 ovos (70 ovos por tratamento) para avaliação dos efeitos da preservação do sêmen sobre a progênie. Foram avaliados os rendimentos de incubação, relação pinto/ovo e o desenvolvimento do trato gastrointestinal dos pintainhos. Os dados coletados foram submetidos à análise de variância e avaliados pelo teste de Tukey a 5% de significância. Diferenças (p 0,05) foram observadas nos resultados dos rendimentos de incubação, relação pinto/ovo e desenvolvimento do trato gastrointestinal, à exceção (p>0,05) dos resultados de comprimento da orofaringe + esôfago e peso do saco vitelino. A partir dos resultados obtidos, concluiu-se que a água de coco em pó pode ser utilizada como preservação do sêmen de galos até 15 minutos. As células expostas por mais tempo aos nutrientes da água de coco em pó proporcionaram ovos e pintos mais pesados, e melhores resultados nos rendimentos de incubação e desenvolvimento embrionário.(AU)

Powdered coconut water as preservant of semi-heavy cocks semen / Água de coco como preservante de sêmen de galos semipesados

This study aimed to evaluate the effect of powered coconut water as preservant of cocks semen in different times. The experimental method was completely randomized, with treatments constituted by different times (1, 5, 10 and 15 minutes) of powered coconut water as preservant of cocks semen (Rhode Island Red lineage with 30-weeks). After collect and use of powered coconut water as preservant, the semen samples were used for inseminated of breeders of same lineage and age (16 per treatment). 280 eggs were collected for evaluation of effects on chicks (70 eggs per treatment). Were evaluated the incubation yields, chick/egg relation and gastrointestinal tract development of chicks. The data collected were submitted for variance analysis and evaluated by Tukey test at 5% of significance. Differences (p 0.05) were observed in incubation yields, chick/egg relation and gastrointestinal tract development, with the exception (p>0.05) of oropharynx + oesophagus length and yolk sac weight. From these results, it was concluded that the powered coconut water can be used as preservation of cocks semen up to 15 minutes. Cells exposed more time to nutrients provided by the powdered coconut water showed eggs and chicks most heavier, and better results in the incubation yields and embryo development.

O objetivo com este estudo foi avaliar o efeito da água de coco como preservante do sêmen de galos em diferentes períodos. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, onde os tratamentos consistiam de diferentes períodos (1, 5, 10 e 15 minutos) de ação da água de coco como preservante do sêmen de galos (linhagem Rhode Island Red com 30 semanas). Após a coleta e submissão do sêmen a ação da água de coco, estas foram utilizadas para inseminação de 64 matrizes de mesma linhagem e idade (16 por tratamento). Foram coletados 280 ovos (70 ovos por tratamento) para avaliação dos efeitos da preservação do sêmen sobre a progênie. Foram avaliados os rendimentos de incubação, relação pinto/ovo e o desenvolvimento do trato gastrointestinal dos pintainhos. Os dados coletados foram submetidos à análise de variância e avaliados pelo teste de Tukey a 5% de significância. Diferenças (p 0,05) foram observadas nos resultados dos rendimentos de incubação, relação pinto/ovo e desenvolvimento do trato gastrointestinal, à exceção (p>0,05) dos resultados de comprimento da orofaringe + esôfago e peso do saco vitelino. A partir dos resultados obtidos, concluiu-se que a água de coco em pó pode ser utilizada como preservação do sêmen de galos até 15 minutos. As células expostas por mais tempo aos nutrientes da água de coco em pó proporcionaram ovos e pintos mais pesados, e melhores resultados nos rendimentos de incubação e desenvolvimento embrionário.

The evolution of fetal membranes and placentation in carnivores and ungulates (Ferungulata)

Molecular phylogenetics has made a substantialcontribution to our understanding of the relationships between mammalian orders and has generated trees that can be used to examine the evolution of anatomical and physiological traits. We here summarize findings on fetal membranes and placen tation in Ferungulata, a clade comprising carnivores, pangolins, and even and odd-toed ungulates. Their Early ontogeny shows several conserve traits such as superficial attachment of the blastocyst, amnion formation by folding, a large allantoic sac and a temporary yolk sac placenta. In contrast, Several characters of the chorioallantoic placenta are derived, including the diffuse and cotyledonary placental types in ungulate sand zonary placenta in carnivores specializations of the interhaemal barrier, the presence of areolae or haemophagous regions and lack of stromal decidual cells. Ungulates Produce large amounts of placental proteins including placental lactogens and pregnancy-associated glycoproteins. Evolutionary in novations of the placental system may contribute to the high diversity of lifestyles within Ferungulata And be linked to the evolution of highly precocial offspring in ungulates.

The evolution of fetal membranes and placentation in carnivores and ungulates (Ferungulata)

Molecular phylogenetics has made a substantialcontribution to our understanding of the relationships between mammalian orders and has generated trees that can be used to examine the evolution of anatomical and physiological traits. We here summarize findings on fetal membranes and placen tation in Ferungulata, a clade comprising carnivores, pangolins, and even and odd-toed ungulates. Their Early ontogeny shows several conserve traits such as superficial attachment of the blastocyst, amnion formation by folding, a large allantoic sac and a temporary yolk sac placenta. In contrast, Several characters of the chorioallantoic placenta are derived, including the diffuse and cotyledonary placental types in ungulate sand zonary placenta in carnivores specializations of the interhaemal barrier, the presence of areolae or haemophagous regions and lack of stromal decidual cells. Ungulates Produce large amounts of placental proteins including placental lactogens and pregnancy-associated glycoproteins. Evolutionary in novations of the placental system may contribute to the high diversity of lifestyles within Ferungulata And be linked to the evolution of highly precocial offspring in ungulates.(AU)

BPA toxicity during development of zebrafish embryo

Abstract Bisphenol A (BPA) is a monomer used in the production of polycarbonate, a polymer commonly found in plastics, epoxy resins and thermal papers. The presence of BPA in food, water, air and dust has been of great concern in recent years not only due to environmental and ecological issues but also because of its supposed risk to public health related to its mutagenic and carcinogenic potential. In this study we evaluated the toxicity of bisphenol A in zebrafish embryos (Danio rerio) and determined the 50% lethal concentration (LC50) of this chemical. BPA was used at concentrations ranging from 1 M to 100 M in E3 medium/0.5% dimethylsulfoxide (DMSO) from previously prepared stock solutions in 100% DMSO. Controls included embryos exposed only to E3 medium or supplemented with 0.5% DMSO. Camptothecin (CPT), a known inhibitor of cell proliferation was used as positive control at a concentration of 0.001 M in E3 medium/0.5% DMSO. Adults zebrafish were placed for breeding a day before the experimental set up, then, viable embryos were collected and selected for use. Experiments were carried out in triplicates, according to specifications from Organization for Economic Cooperation and Development (OECD). One embryo/well (25 embryos per concentration) was distributed in 96 well microplates in presence or absence of the chemicals. The plates were kept in BOD incubators with a controlled temperature of 28.5 ºC and with photoperiod of 14 h light:10 h dark. After 24h, 48h, 72h and 96h exposure, the exposed embryos were evaluated according to the following parameters: mortality, coagulation, rate of heartbeat, hatching and presence of morphological abnormalities. Photography was obtained by photomicroscopy. Apoptosis was evaluated by DNA ladder assay. DNA was extracted by phenol:chloroform method and analyzed by 2% agarose gel electrophoresis. DNA fragments were visualized after ethidium bromide staining in ultraviolet transilluminator. The LC50 determined for BPA was 70 M after 24 hours, 72 M after 48 hours, 47 M after 72 hours and 31 M after 96 hours exposure. BPA induced morphological and physiological alterations such as yolk sac and pericardial edema, hatching delay or inhibition, spine deformation, decreasing in heartbeat rate and mortality. In conclusion, this study demonstrated that BPA induced marked malformations in zebrafish embryos at concentrations above 25 M corroborating the current concerns related to the widespread presence of BPA in the air, food and water used by humans as well as in the bodily fluids and tissues.

Resumo Bisfenol A (BPA) é um monômero utilizado na produção de policarbonato, um polímero comumente encontrado em plásticos, resinas epóxi e papéis térmicos. A presença de BPA em alimentos, água, ar e poeira tem sido motivo de grande preocupação nos últimos anos, não só devido a questões ambientais e ecológicas, mas também ao suposto risco para a saúde pública relacionado ao seu potencial mutagênico e carcinogênico. Neste estudo avaliamos a toxicidade do bisfenol A em embriões de peixe-zebra (Danio rerio) e determinamos a concentração letal 50% (LC50) deste composto químico. O BPA foi usado na faixa de concentração entre 1 M e 100M em meio E3/0,5% de dimetilsulfóxido (DMSO), preparado a partir de soluções estoques em 100% DMSO. Os controles negativos incluíram embriões expostos apenas ao meio E3 ou suplementado com 0,5% DMSO. Camptotecina (CPT), um conhecido inibidor da proliferação celular, foi usado como controle positivo a uma concentração de 0,001 M em meio E3/0,5% DMSO. Peixes-zebra adultos foram colocados para reprodução um dia antes da montagem experimental, em seguida, embriões viáveis foram coletados e selecionados para uso. Os experimentos foram realizados em triplicata, de acordo com as especificações da Organização para Cooperação e Desenvolvimento Econômico (OCDE). Um embrião/ poço (25 embriões por concentração) foi distribuído em microplacas de 96 poços na presença ou ausência dos compostos químicos. As placas foram mantidas em incubadoras BOD com temperatura controlada de 28,5 ºC e com fotoperíodo de 14h claro:10h escuro. Após 24h, 48h, 72h e 96h, os embriões expostos foram avaliados de acordo com os seguintes parâmetros: mortalidade, presença de coagulação, taxa do batimento cardíaco, eclosão e presença de anormalidades morfológicas. Fotografias foram obtidas por fotomicroscopia. A apoptose foi avaliada pelo ensaio de DNA ladder. O DNA foi extraído pelo método fenol:clorofórmio e analisado por eletroforese em gel de agarose a 2%. Fragmentos de DNA foram visualizadas após coloração com brometo de etídio em um transiluminador ultravioleta. A LC50 determinada para o BPA foi 70 M após 24 horas, 72 M após 48 horas, 47 M após 72 horas e 31 M após exposição por 96 horas. O BPA induziu alterações morfológicas e fisiológicas como edema de saco vitelino e edema pericárdico, atraso no tempo ou inibição da eclosão, deformação da coluna vertebral, diminuição da taxa de batimentos cardíacos e mortalidade. Em conclusão, este estudo demonstrou que o BPA induziu grande número de malformações em embriões de peixe-zebra em concentrações acima de 25 M, corroborando as preocupações atuais relacionadas a presença generalizada do BPA no ar, alimento e água usados pelos seres humanos bem como nos fluidos e tecidos corporais.