Salmonella Pullorum em criação de galinhas caipiras no Oeste da Bahia, Brasil / Salmonella Pullorum in a free-range chicken farm in Western Bahia, Brazil

Background: Industrial poultry farming has developed progressively in Brazil, conferring the country a prominent position on the national and international scene. Likewise, alternative poultry farming is an important economic activity for small-scale family farmers. However, shortcomings related to sanitary management lead to increased occurrence of avian diseases, such as those caused by Salmonella spp. Despite salmonellosis has been described in industrial establishments, reports in alternative farms are less common, therefore the objective of this study was to describe the occurrence of salmonellosis in free-range chickens in the municipality of Barra, Western Bahia, Brazil. Cases: The poultry farmer reported the occurrence of diarrhoea in his chicken flock since the acquisition of the batch of chicks. Initially, carrying out the medicinal treatment of the birds, there was clinical improvement, however, successive recurrences of clinical signs occurred, such as diarrhoea, apathy, anorexia, and death of some birds. Upon learning about the case, an epidemiological investigation of the flock was carried out, and it was noted that some of the birds were retracted, apathetic, anorexic, and a lot of diarrheic faeces of a yellowish-white appearance were also observed. The entire flock had a history of vaccination against diseases: newcastle disease, infectious bronchitis, gumboro disease, and fowlpox. For better evaluation, five birds were necropsied, enabling the observation that the animals had a good body score. However, the necropsy revealed lesions such as splenomegaly, hepatomegaly, and enteritis in the three birds initially analysed (Animals 1, 2, and 3). The other birds (Animals 4 and 5) were submitted to evaluation for Eimeria sp. oocysts by means of scrapings from the intestinal mucosa, and there were no structures compatible with oocysts. Faecal samples were collected from another six birds in the flock for coproparasitological examination, and the presence of oocysts was not detected. Finally, sera from 20 birds in the flock were collected for the Rapid Serum Agglutination Test (SAR) for the detection anti-Salmonella Pullorum antibodies. Discussion: The diagnosis was based on clinical evaluation, post mortem pathological findings of the necropsied birds, epidemiological data and confirmed with SAR testing, whereby 11 birds were seropositive for Salmonella enterica subspecies enterica serovar Pullorum. The prevalence of S. Pullorum is poorly described in alternative farming. Based on the farmer's report, it is believed that the chicks were purchased already infected, because birds from the same batch, also purchased by neighbouring producers, showed the same clinical signs. The unsatisfactory sanitation in the flock was another factor that may have favoured the persistence of the bacteria, since, the lack of removal of organic matter is a source of nutrients for microorganisms, and this may have favoured the multiplication and maintenance of the bacteria in the down feathers, feed, and water. The elimination of S. Pullorum through the faeces, in addition to the density of the birds, may have led to transmission to the other healthy birds. However, the knowledge and adoption of prophylactic measures in free-range chicken farms is a crucial factor in minimizing the occurrence of outbreaks and thus avoiding a future public Health Problem.

Análise epidemiológica da distribuição dos genes de resistência antimicrobiana de Salmonella typhimurium no Brasil / Epidemiological analysis of the antimicrobial resistance genes distribution of Salmonella typhimurium in Brazil

Salmonella é uma das principais enterobactérias causadoras de gastroenterites no Brasil e no mundo, sendo Typhimurium o principal sorotipo. A disseminação desta bactéria causa perdas econômicas e produtivas. Nos países em desenvolvimento ocorre subnotificação dos surtos de salmoneloses prejudicando a vigilância epidemiológica. O uso de antibióticos é o tratamento mais eficiente contra infecções por Salmonella. Porém, seu uso indiscriminado favorece a seleção de linhagens resistentes e dificulta o tratamento das salmoneloses. Foi realizado um estudo da distribuição epidemiológica dos genes de resistência antimicrobiana adquirida em estirpes de Salmonella Typhimurium isoladas no Brasil, no período de 1983 a 2013. A classe de antibióticos que apresentou maior quantidade de genes de resistência foi a dos aminoglicosídeos, sendo o gene com maior prevalência o aac(6')-Iaa. As estirpes estudadas apresentaram resistência a antibióticos pertencentes entre 1 a 7 classes diferentes.

Salmonella Enteritidis detection and immunological cellular response to experimental inoculation in day-old turkeys / Detecção e resposta imunológica celular à inoculação experimental de Salmonella Enteritidis em perus de um dia

The purpose of this research is to clarify aspects of the pathogenesis of Salmonella Enteritidis in experimentally inoculated day-old turkeys. Three treatments were conducted among a total of 120 turkeys; one control group and two treatment groups in which 6 x 102 CFU mL-1 and 7 x 105 CFU mL-1, respectively, of Salmonella Enteritidis was inoculated in the crops. Two birds from each treatment were sacrificed and necropsied at 1, 3, 4, 12, 18, and 24 hours, and 3, 4, 38, and 49 days post-inoculation. We re-isolated Salmonella, measured lymphocytes, and conducted immunohistochemical tests. Six hours post-inoculation, Salmonella was found in the investigated organs (yolk sac, cecum, fragments of spleen, and bursa of Fabricius) with conventional bacteriology and immunohistochemistry, and was continuously detected in almost all analyzed organs until turkeys were four-days old. Further, Salmonella was detected after 38 days in cecum, when the concentration 7 x 105 CFU mL-1 was given. At both inoculation concentrations, the number of lymphocytes was similar; larger quantities were found in the first hour post-inoculation, followed by a gradual reduction, reaching the lowest levels at 24 hours after inoculation. Afterwards, lymphocytes increased discreetly, remaining at the same level until 49 days after inoculation. In conclusion, inoculation concentration influences mitigation...

O presente trabalho foi desenvolvido com o objetivo elucidar aspectos que envolvem a patogênese da Salmonella Enteritidis em perus de um dia experimentalmente inoculados. Foram conduzidos três tratamentos, constituídos de 120 perus, sendo um grupo controle e outros dois tratamentos onde se inoculou via inglúvio 6,0x102 UFC mL-1 e 7,0x105 UFC mL-1 de Salmonella Enteritidis, respectivamente. Após a inoculação, duas aves de cada tratamento foram submetidas à eutanásia e ao exame necroscópico para realizar a colheita amostras (saco vitelínico, ceco, fragmentos de baço e bursa de Fabricius) com uma, três, seis, 12, 18 e 24 horas e aos três, quatro, 38 e 49 dias. Foi realizado pesquisa da Salmonella, contagem de linfócitos e imuno-histoquímica. Após seis horas da inoculação, Salmonella foi identificada nos órgãos estudados, tanto pelo teste bacteriológico quanto pelo imunoistoquímico e permaneceu até quatro dias de idade em quase todos os órgãos analisados, e até 38 dias no ceco, quando se utilizou 7,0x105 UFC mL-1. Em ambas as concentrações do inóculo, os valores da contagem de linfócitos foram semelhantes, iniciando com maior número de linfócitos na primeira hora pós-inoculação, com redução lenta atingindo menor número às 24h pós-inoculação, e, a partir daí, o número de linfócitos aumentou discretamente, se mantendo até os 49 dias pós-inoculação. Conclui-se que a dose infectante...

Salmonella typhimurium vaccine to control a brazilian Salmonella heidelberg strain in broiler chickens / Vacina de Salmonella typhimurium para controlar cepa brasileira de Salmonella heidelberg em frangos de corte

Foodborne Salmonella infections in humans, which results from the consumption of contaminated poultry meat and eggs, are a major public health concern. Vaccination of animals against Salmonella is one strategy to prevent these infections and reduce the risks to public health. Live attenuated Salmonella enterica vaccines can confer protection against salmonellosis by inducing both cell-mediated and mucosal immune responses. This study assessed a live, attenuated Salmonella enterica Typhimurium (ST) vaccine in broiler chickens against a heterologous challenge with Salmonella Heidelberg (SH) by evaluating bacterial quantification, immune cells infiltration, and cytokine gene expression in the cecum. The treatments were: T1, non-vaccinated, non-challenged; T2, non-vaccinated, SH-challenged; T3, ST-vaccinated and SH-challenged. At 28 days of age, the ST-vaccinated group had significantly recovered reduction of SH in the crop (P<0,01) and cecum (P = 0,021) compared to the non-vaccinated SH-challenged group, with no significant changes (P˃0,05) in macrophages, T CD4+, or T CD8+ cells dynamics during the same period. Aerosol vaccination on the first day promoted greater interleukin-12 expression in the liver (P<0,05) and interleukin-10 expression and T CD8+ cells in the ileum 16 hours after housing. After prime-boosted oral immunization on the 13th day, the vaccinated group had greater expression of macrophages and T CD4+ cells in the liver (P<0,05) than the control group. Two doses of a live ST-attenuated vaccine promoted a partial cross-protective effect against SH strain UFPR1 challenge in broilers.

Infecções por Salmonella transmitidas por alimentos como consumo de carne de frango e ovos contaminados em seres humanos constituem um importante problema de saúde pública. A vacinação de animais contra Salmonella é uma estratégia para prevenir essas infecções e reduzir o risco para a saúde pública. As vacinas vivas atenuadas de Salmonella enterica podem conferir proteção contra a salmonelose, induzindo respostas imunológicas mediadas por células e em mucosas. Este estudo avaliou uma vacina viva e atenuada de Salmonella enterica Typhimurium (ST) em frangos de corte contra um desafio heterólogo com Salmonella Heidelberg (SH), avaliando a quantificação de Salmonella, infiltração de células imunes e a expressão de genes de citocinas no ceco. Os tratamentos foram: T1, não vacinado, não desafiado; T2, não vacinado, desafiado com SH; T3, ST-vacinado, desafiado com SH. Aos 28 dias de idade, o grupo vacinado com ST apresentou significativa redução de SH no papo (P<0,01) e no ceco (P = 0,021) comparado ao grupo T2-não vacinado SH-desafiado, sem alterações significativas na dinâmica celular de macrófagos, T CD4+ ou T CD8+ (P˃0,05) durante o mesmo período. A vacinação por aerossol no primeiro dia promoveu maior expressão de IL-12 no fígado (P<0,05), maior expressão de IL-10 e células T CD8+ no íleo, 16 horas após o alojamento. Após o reforço de imunização oral ao 13º dia, o grupo vacinado apresentou maior expressão de macrófagos e células T CD4+ no fígado (P<0,05) do que o grupo controle. Duas doses de uma vacina viva atenuada de ST promoveram um efeito de proteção cruzada parcial contra o desafio da cepa de Salmonella Heidelberg cepa UFPR1 em frangos de corte.

Salmonella Enteritidis detection and immunological cellular response to experimental inoculation in day-old turkeys / Detecção e resposta imunológica celular à inoculação experimental de Salmonella Enteritidis em perus de um dia

The purpose of this research is to clarify aspects of the pathogenesis of Salmonella Enteritidis in experimentally inoculated day-old turkeys. Three treatments were conducted among a total of 120 turkeys; one control group and two treatment groups in which 6 x 102 CFU mL-1 and 7 x 105 CFU mL-1, respectively, of Salmonella Enteritidis was inoculated in the crops. Two birds from each treatment were sacrificed and necropsied at 1, 3, 4, 12, 18, and 24 hours, and 3, 4, 38, and 49 days post-inoculation. We re-isolated Salmonella, measured lymphocytes, and conducted immunohistochemical tests. Six hours post-inoculation, Salmonella was found in the investigated organs (yolk sac, cecum, fragments of spleen, and bursa of Fabricius) with conventional bacteriology and immunohistochemistry, and was continuously detected in almost all analyzed organs until turkeys were four-days old. Further, Salmonella was detected after 38 days in cecum, when the concentration 7 x 105 CFU mL-1 was given. At both inoculation concentrations, the number of lymphocytes was similar; larger quantities were found in the first hour post-inoculation, followed by a gradual reduction, reaching the lowest levels at 24 hours after inoculation. Afterwards, lymphocytes increased discreetly, remaining at the same level until 49 days after inoculation. In conclusion, inoculation concentration influences mitigation...(AU)

O presente trabalho foi desenvolvido com o objetivo elucidar aspectos que envolvem a patogênese da Salmonella Enteritidis em perus de um dia experimentalmente inoculados. Foram conduzidos três tratamentos, constituídos de 120 perus, sendo um grupo controle e outros dois tratamentos onde se inoculou via inglúvio 6,0x102 UFC mL-1 e 7,0x105 UFC mL-1 de Salmonella Enteritidis, respectivamente. Após a inoculação, duas aves de cada tratamento foram submetidas à eutanásia e ao exame necroscópico para realizar a colheita amostras (saco vitelínico, ceco, fragmentos de baço e bursa de Fabricius) com uma, três, seis, 12, 18 e 24 horas e aos três, quatro, 38 e 49 dias. Foi realizado pesquisa da Salmonella, contagem de linfócitos e imuno-histoquímica. Após seis horas da inoculação, Salmonella foi identificada nos órgãos estudados, tanto pelo teste bacteriológico quanto pelo imunoistoquímico e permaneceu até quatro dias de idade em quase todos os órgãos analisados, e até 38 dias no ceco, quando se utilizou 7,0x105 UFC mL-1. Em ambas as concentrações do inóculo, os valores da contagem de linfócitos foram semelhantes, iniciando com maior número de linfócitos na primeira hora pós-inoculação, com redução lenta atingindo menor número às 24h pós-inoculação, e, a partir daí, o número de linfócitos aumentou discretamente, se mantendo até os 49 dias pós-inoculação. Conclui-se que a dose infectante...(AU)

Salmonella typhimurium vaccine to control a brazilian Salmonella heidelberg strain in broiler chickens / Vacina de Salmonella typhimurium para controlar cepa brasileira de Salmonella heidelberg em frangos de corte

Foodborne Salmonella infections in humans, which results from the consumption of contaminated poultry meat and eggs, are a major public health concern. Vaccination of animals against Salmonella is one strategy to prevent these infections and reduce the risks to public health. Live attenuated Salmonella enterica vaccines can confer protection against salmonellosis by inducing both cell-mediated and mucosal immune responses. This study assessed a live, attenuated Salmonella enterica Typhimurium (ST) vaccine in broiler chickens against a heterologous challenge with Salmonella Heidelberg (SH) by evaluating bacterial quantification, immune cells infiltration, and cytokine gene expression in the cecum. The treatments were: T1, non-vaccinated, non-challenged; T2, non-vaccinated, SH-challenged; T3, ST-vaccinated and SH-challenged. At 28 days of age, the ST-vaccinated group had significantly recovered reduction of SH in the crop (P<0,01) and cecum (P = 0,021) compared to the non-vaccinated SH-challenged group, with no significant changes (P˃0,05) in macrophages, T CD4+, or T CD8+ cells dynamics during the same period. Aerosol vaccination on the first day promoted greater interleukin-12 expression in the liver (P<0,05) and interleukin-10 expression and T CD8+ cells in the ileum 16 hours after housing. After prime-boosted oral immunization on the 13th day, the vaccinated group had greater expression of macrophages and T CD4+ cells in the liver (P<0,05) than the control group. Two doses of a live ST-attenuated vaccine promoted a partial cross-protective effect against SH strain UFPR1 challenge in broilers.(AU)

Infecções por Salmonella transmitidas por alimentos como consumo de carne de frango e ovos contaminados em seres humanos constituem um importante problema de saúde pública. A vacinação de animais contra Salmonella é uma estratégia para prevenir essas infecções e reduzir o risco para a saúde pública. As vacinas vivas atenuadas de Salmonella enterica podem conferir proteção contra a salmonelose, induzindo respostas imunológicas mediadas por células e em mucosas. Este estudo avaliou uma vacina viva e atenuada de Salmonella enterica Typhimurium (ST) em frangos de corte contra um desafio heterólogo com Salmonella Heidelberg (SH), avaliando a quantificação de Salmonella, infiltração de células imunes e a expressão de genes de citocinas no ceco. Os tratamentos foram: T1, não vacinado, não desafiado; T2, não vacinado, desafiado com SH; T3, ST-vacinado, desafiado com SH. Aos 28 dias de idade, o grupo vacinado com ST apresentou significativa redução de SH no papo (P<0,01) e no ceco (P = 0,021) comparado ao grupo T2-não vacinado SH-desafiado, sem alterações significativas na dinâmica celular de macrófagos, T CD4+ ou T CD8+ (P˃0,05) durante o mesmo período. A vacinação por aerossol no primeiro dia promoveu maior expressão de IL-12 no fígado (P<0,05), maior expressão de IL-10 e células T CD8+ no íleo, 16 horas após o alojamento. Após o reforço de imunização oral ao 13º dia, o grupo vacinado apresentou maior expressão de macrófagos e células T CD4+ no fígado (P<0,05) do que o grupo controle. Duas doses de uma vacina viva atenuada de ST promoveram um efeito de proteção cruzada parcial contra o desafio da cepa de Salmonella Heidelberg cepa UFPR1 em frangos de corte.(AU)

Salmoneloses

Salmoneloses são infecções por bactérias do gênero Salmonella. As salmoneloses mais importantes no que tange à saúde das aves da avicultura industrial (galinha e peru) são o tifo aviário (Salmonella Pullorum) e a pulorose(Salmonella Gallinarum). Ambas foram erradicadas da genética das galinhas e dos perus industriais, tendo em vista as doenças graves que causam nessas espécies. Atualmente, ambas são consideradas soro variedade únicas. Gallinarum-Pullorum (SGP) [4]. O Programa Nacional de Sanidade Avícola(PNSA) determina a norma sanitária para aves industriais, galinhas, perus e outras espécies no Brasil [3]. As soro variedades de maior importância à saúde pública são Salmonella Typhimuriume S. Enteritidis e também alvo de controle oficial. Em humanos, outras soro variedades estão adquirindo relevância,como S. Newport [3]. O PNSA estabelece, em legislação própria, as normas de qualidade para a avicultura industrial, para o controle das doenças de impactos econômicos e sociais mais importantes.

Salmoneloses

Salmoneloses são infecções por bactérias do gênero Salmonella. As salmoneloses mais importantes no que tange à saúde das aves da avicultura industrial (galinha e peru) são o tifo aviário (Salmonella Pullorum) e a pulorose(Salmonella Gallinarum). Ambas foram erradicadas da genética das galinhas e dos perus industriais, tendo em vista as doenças graves que causam nessas espécies. Atualmente, ambas são consideradas soro variedade únicas. Gallinarum-Pullorum (SGP) [4]. O Programa Nacional de Sanidade Avícola(PNSA) determina a norma sanitária para aves industriais, galinhas, perus e outras espécies no Brasil [3]. As soro variedades de maior importância à saúde pública são Salmonella Typhimuriume S. Enteritidis e também alvo de controle oficial. Em humanos, outras soro variedades estão adquirindo relevância,como S. Newport [3]. O PNSA estabelece, em legislação própria, as normas de qualidade para a avicultura industrial, para o controle das doenças de impactos econômicos e sociais mais importantes.

Avaliação da soroconversão induzida por vacinas inativadas comerciais contra Salmonella Enteritidis e Salmonella Typhimurium

As vacinas inativadas têm o propósito de reduzir a contaminação e auxiliar no controle das salmoneloses em aves de postura comercial. O objetivo do trabalho foi avaliar três vacinas inativadas comerciais de Salmonella Enteritidis e Salmonella Typhimurium (Salmonella Se+St), disponíveis no mercado brasileiro. As vacinas foram comparadas pela metodologia ELISA, quanto à produção de anticorpos direcionados aos sorotipos B e D. Na condução do experimento, foram utilizadas aves da linhagem Hisex White com 18 semanas de idade, separadas em quatro tratamentos, contendo 20 aves cada, sendo cada ave considerada uma repetição. Os tratamentos consistiram em T1 - aves vacinadas com a vacina inativada em microemulsão - Gallimune SE + ST® - Boehringer Ingelheim, dose de 0,3 mL/ave para via intramuscular, tratamento T2 - aves vacinadas com vacina inativada de emulsão simples em adjuvante hidróxido de alumínio - Salenvac T® - MSD, dose de 0,5 mL/ave para via intramuscular, tratamento T3 - aves vacinadas com vacina inativada em emulsão dupla - Avisan Secure® - Hipra, dose de 0,5 mL/ave para via intramuscular, e tratamento T4 ou controle - aves não vacinadas. As amostras de soro foram coletadas aos 14, 21, 28, 49, 84, 119 e 161 dias após a última vacinação, para avaliação da soroconversão. O experimento e a coleta de amostras foram realizados na Universidade Federal de Minas Gerais e as análises laboratoriais conduzidas no laboratório da Boehringer Ingelheim em Paulínia. Todos os tratamentos analisados tiveram uma boa soroconversão para os grupos B e D. Ocorreu uma pequena diferença entre as vacinas utilizadas, em relação à persistência do título de anticorpos de proteção durante o tempo de vida das aves. O grupo D apresentou títulos mais altos que o grupo B, desde o início da avaliação, o que pode ter sido provocado pelo primer realizado nas primeiras semanas de vida das aves com a vacina viva para Salmonella Enteritidis. A vacina do tratamento T1 apresentou uma maior concentração e maior persistência de anticorpos circulantes, para os grupos B e D, em relação aos demais tratamentos avaliados. É possível que esta diferença se deva ao tipo de formulação, a diferença de concentração das estirpes utilizadas, aos adjuvantes, métodos de inativação bacteriana ou ao tipo de emulsão utilizado em cada vacina. Conclui-se que as três vacinas avaliadas, mesmo demonstrando resultados diferentes na concentração de anticorpos, são eficientes na produção de anticorpos, provavelmente conferindo proteção parecida nas aves.

Inactivated vaccines are intended to reduce contamination and assist in the control of salmonellosis in birds of commercial laying. The objective of the work was to evaluate three commercial inactivated vaccines of Salmonella Enteritidis and Salmonella Typhimurium (Salmonella Se + St), available in the Brazilian market. The vaccines were compared using the ELISA methodology for the production of antibodies directed to serotypes B and D. In the conduction of the experiment, birds of the Hisex White lineage, 18 weeks old, were used, separated into four treatments, containing 20 birds each, each being bird considered a repetition. The treatments consisted of T1 - birds vaccinated with the inactivated vaccine in microemulsion - Gallimune SE + ST® - Boehringer Ingelheim, dose of 0.3 mL / bird for intramuscular route, T2 treatment - birds vaccinated with inactivated simple emulsion vaccine in hydroxide adjuvant of aluminum - Salenvac T® - MSD, dose of 0.5 mL / bird for intramuscular route, treatment T3 - birds vaccinated with inactivated vaccine in double emulsion - Avisan Secure® - Hipra, dose of 0.5 mL / bird for intramuscular route , and T4 treatment or control - unvaccinated birds. Serum samples were collected at 14, 21, 28, 49, 84, 119 and 161 days after the last vaccination, to evaluate seroconversion. The experiment and the collection of samples were carried out at the Federal University of Minas Gerais and the laboratory analyzes were conducted at the Boehringer Ingelheim laboratory in Paulínia. All treatments analyzed had good seroconversion for groups B and D. There was a small difference between the vaccines used, in relation to the persistence of the protective antibody titer during the birds' life span. Group D, had higher titers than group B, since the beginning of the evaluation, which may have been caused by the primer carried out in the first weeks of life of the birds with the live vaccine for Salmonella Enteritidis. The T1 treatment vaccine showed a higher concentration and greater persistence of circulating antibodies, for groups B and D, in relation to the other treatments evaluated. It is possible that this difference is due to the type of formulation, the difference in concentration of the strains used, the adjuvants, bacterial inactivation methods or the type of emulsion used in each vaccine. It is concluded that the three vaccines evaluated, even showing different results in the concentration of antibodies, are efficient in the production of antibodies, probably providing similar protection in birds.

ATIVIDADE ANTIMICROBIANA DE SUPERFÍCIES DE COBRE FRENTE À FORMAÇÃO DE BIOFILMES POR SALMONELLA ENTERITIDIS E SUA POTENCIAL APLICAÇÃO NA INDÚSTRIA AVÍCOLA

Salmonella é considerada um dos patógenos de maior relevância para o setor avícola, uma vez que a carne de frango representa a principal fonte de infecção desta bactéria para o homem. O sorovar S. Enteritidis é identificado como o mais frequentemente envolvido nas salmoneloses alimentares. Na indústria, o controle de biofilmes é rotineiramente realizado através da higienização com a utilização de desinfetantes, os quais apresentam toxicidade conhecida e eficácia variável, devido à evolução da resistência antimicrobiana. O cobre vem sendo aplicado como superfície de contato com poder antimicrobiano em diversos países e pode ser utilizado como um complemento das práticas padrão de limpeza e desinfecção das superfícies industriais, conferindo redução da formação de biofilmes, diminuição da carga bacteriana persistente e aumentando a segurança dos alimentos. Neste contexto, o presente estudo teve como objetivo avaliar as propriedades antimicrobianas de superfícies de cobre e suas ligas na prevenção da formação do biofilme por S. Enteritidis e avaliar o potencial de corrosão das superfícies, quando em contato com desinfetante. Para avaliação da atividade antimicrobiana, foram utilizados cupons com área de 1 cm2, compostos de cobre 99,9% (C11000), latão (C26000), cobre revestido com estanho e, como controle, aço inoxidável (AISI 316). O método utilizado foi o de diluição, com teste de suspensão de células planctônicas e contagem bacteriana realizada através do método de Drop plate, com posterior incubação em temperaturas que simulam ambientes de processamento avícola (4ºC, 12ºC e 25ºC). Para a avaliação do potencial de corrosão, foram realizados ensaios de polarização potenciostática com as mesmas superfícies. Diferenças estatísticas significativas (p<0,05) na produção de biofilme foram observadas nas superfícies de cobre e latão, quando comparadas ao aço inoxidável e às superfícies revestidas com estanho nas três temperaturas avaliadas. Não foram observadas diferenças no potencial de corrosão das superfícies quando em contato com o desinfetante cloreto de benzalcônio, nas concentrações de 100, 200 e 400 ppm, em relação ao controle. Estes resultados demonstraram efetividade na redução de S. Enteritidis, sugerindo que superfícies de cobre e suas ligas podem ser utilizadas como um método antimicrobiano complementar no setor avícola para controle deste patógeno importante para a saúde pública.

Salmonella is considered one of the most relevant pathogens for the poultry production chain, since poultry meat represents the main source of salmonelosis for humans. Serotype S. Enteritidis is identified as the most frequently involved in food salmonellosis. In the industry, biofilm control is routinely carried out through sanitization using disinfectants, which have known toxicity and variable efficacy, due to the evolution of antimicrobial resistance. Copper has been applied as a contact surface with antimicrobial power in several countries and can be used as a complement to standard practices of cleaning and disinfection of industrial surfaces, conferring reduction of biofilm formation, reduction of persistent bacterial load and increasing food safety. In this context, this study aimed at evaluating the antimicrobial properties of copper surfaces and their alloys in preventing biofilm formation by S. Enteritidis and to evaluate the corrosion potential of surfaces when in contact with disinfectant. To evaluate the antimicrobial activity, coupons with an area of 1 cm2, composed of 99.9% copper (C11000), brass (C26000), tin-coated copper and, as a control, stainless steel (AISI 316) were used. The method used was dilution, with planktonic cell suspension testing and bacterial counting using the Drop plate method, with subsequent incubation at temperatures that simulate poultry processing environments (4 ºC, 12 ºC and 25 ºC). Potentiostatic polarization tests, with the same surfaces were performed to evaluate the corrosion potential. Significant statistical differences (p<0,05) in the production of biofilm were observed on copper and brass surfaces when compared to stainless steel and tin-coated surfaces at the three temperatures evaluated. There were no differences in the potential for surface corrosion when in contact with the benzalkonium chloride disinfectant, at concentrations of 100, 200 and 400 ppm, compared to the control. These results demonstrated effectiveness in reducing S. Enteritidis, suggesting that copper surfaces and their alloys can be used as a complementary antimicrobial method in the poultry sector to control this important pathogen for public health.

Salmonelas Paratíficas: epidemiologia na avicultura de corte do Estado do Paraná

As salmoneloses são enfermidades provocadas por bactérias do gênero Salmonella e amplamente estudadas pela sua grande importância mundial, pelo seu potencial zoonótico e por representar risco às relações internacionais de comercialização de alimentos. Diversos fatores estão relacionados com a ocorrência de Salmonella em aves, incluindo o sorovar, hospedeiro e os fatores geográficos e ambientais. Para compreender alguns aspectos relacionados com a epidemiologia destes micro-organismos foi desenvolvido o presente trabalho. A dissertação está dividida em 2 capítulos. O capítulo 1 contempla uma revisão bibliográfica sobre Salmonella em aves, fatores epidemiológicos e legislação relacionados a estas ocorrências. No capítulo 2 é apresentado um estudo do perfil epidemiológico de 243 unidades epidemiológicas distribuídas em 60 municípios do estado do Paraná segundo à presença de Salmonella enterica em associação a contato com outros animais, densidade avícola na unidade epidemiológica e densidade de aves no entorno. A distribuição espacial foi avaliada com a análise de densidade de Kernel e uma análise espacial que contemplou medidas de distância entre unidades epidemiológicas e entre unidades epidemiológicas e a sede do município, rodovias e rios. Além disso, verificou-se a influência do índice de Desenvolvimento Humano Municipal, temperatura média anual, precipitação e altimetria dos municípios para verificar a interferência sobre a positividade para Salmonella. Estes estudos demonstraram que a densidade de aves nas instalações, proximidade entre unidades epidemiológicas positivas e negativas e altimetria do município podem influenciar na positividade para Salmonella, reforçando a importância da avaliação epidemiológica e o cumprimento da legislação vigente no controle destas bactérias.

Salmonellosis is a disease caused by bacteria of the genus Salmonella and widely studied because of its worldwide importance as zoonosis that affect the food international commercialization. Several factors are related to the occurrence of Salmonella in poultry, including serovar, host, and geographic and environmental factors. To understand some aspects related to the epidemiology of these micro-organisms the present dissertation is divided into 2 chapters. Chapter 1 contemplates a literature review on Salmonella in birds, epidemiological factors and legislation related to these occurrences. In chapter 2 a study of the epidemiological profile of 243 epidemiological units distributed in 60 municipalities in the Paraná State according to the presence of Salmonella enterica in association with contact with other animals, poultry density on the epidemiological units and density in the surrounding area. The spatial distribution was evaluated with the Kernel density analysis and a spatial analysis that included measures of distance between epidemiological units and between epidemiological units and cities, highways and rivers. In addition, the influence of the Municipal Human Development Index, mean annual temperature, precipitation and altimetry of the municipalities was verified to attest the interference on positivity for Salmonella. These studies have demonstrated that the density of poultry farms, proximity between positive and negative epidemiological units and altimetry of the municipality can influence the positivity for Salmonella, reinforcing the importance of the epidemiological evaluation and compliance with the current legislation in the control of these bacteria.

INIBIÇÃO DA ENZIMA D-ALANINA, D-ALANINA LIGASE COMO FORMA DE POTENCIALIZAR A ATIVIDADE DO ANTIBIOTICO D-CICLOSERINA CONTRA CEPAS DE SALMONELLA ENTERICA

As salmoneloses são doenças de grande importância em todo o mundo. São causadas por bactérias do gênero Salmonella, um dos principais agentes causadores de Doenças Transmitidas por Alimentos, sendo a carne de frango e ovos, as principais fontes de contaminação. A administração de antimicrobianos tem sido uma prática que contribui no tratamento e prognóstico das salmoneloses. Contudo, é preocupante o surgimento de sorotipos resistentes a diversas classes de antibióticos, justificando a busca por novas alternativas de tratamento. Nesse contexto, as enzimas Alanina Racemase e a D-alanina, D-alanina ligase (Dal-Dal-ligase), apresentam-se como alvos promissores, devido ao papel essencial na biossíntese do peptidoglicano presente nestas bactérias. O objetivo deste trabalho foi determinar a estrutura da enzima Dal-Dal-ligase de Salmonella spp. com o propósito de identificar novos inibidores com capacidade antimicrobiana contra cepas desta bactéria. A estrutura da enzima Dal-Dal-ligase na presença dos co-fatores Mg2+ e ATP, mais o substrato D-alanil, D-alanina, foi modelada por homologia, a qual foi utilizada em simulações de varredura virtual com moléculas obtidas do banco de dados do Zinc. Foram selecionadas 23 moléculas, as quais foram filtradas com sucesso pelos critérios ADMETox. Duas moléculas: SaDD01 e SaDD02 foram adquiridas para ensaios in vitro contra cepas ATCCs e isolados clínicos resistentes. Nenhuma das moléculas apresentou atividade antibacteriana isoladamente até o limite de 512 g.mL1. Entretanto, quando testados em sinergismo com a D-cicloserina ambas as moléculas apresentaram-se como potencializadores da atividade deste antimicrobiano, diminuindo a Concentração Inibitória Mínima pela metade. Estes resultados sugerem um caminho para o desenvolvimento de novas drogas contra as salmoneloses.

Salmonelloses are diseases of great importance all over the world. They are caused by bacteria of genus Salmonella, one of the main Foodborne Diseases causing agents, where the chicken eggs and meat are the main sources of contamination. The administration of antimicrobials has been a practice that contributes to the treatment and prognosis of salmonellosis. However, the arising of serotypes resistant to several classes of antibiotics is a concerning matter which justify the search for new alternatives of treatment. In this context, the enzymes Alanine Racemase and D-alanine, D-alanine ligase (Dal-Dal-ligase) are promising targets, due to their essential role in the biosynthesis of peptidoglycan in these bacteria. The objective of this work was to modeling the structure of the enzyme Dal-Dal-ligase of Salmonella spp. aiming the identification of new inhibitors with antimicrobial activity against strains of these bacteria. The structure of the Dal-Dal-ligase enzyme in the presence of the cofactors Mg2+ and ATP plus the D-alanyl, D-alanine substrate was modeled by homology in order to be used on virtual screening simulations using molecules obtained from Zinc database. Twenty three molecules were selected and successfully filtered by the ADMETox criteria. Two molecules: SaDD01 and SaDD02 were purchased for in vitro assays against ATCC strains and also clinical resistant isolates. None of the molecules presented antibacterial activity alone up to the limit of 512 g.mL-1. However, when they were tested in synergism with D-cycloserine both molecules exhibit potentiation effect for the activity of this antimicrobial, where the Minimal Inhibitory Concentration were reduced by half. These results suggest a pathway for the development of new drugs against salmonellosis.

INFECÇÃO POR SALMONELLA HEIDELBERG EM PINTOS DE CORTE ALIMENTADOS COM DIETAS CONTENDO COMPOSTOS BIOATIVOS COMERCIAIS

São conhecidos atualmente mais de 2.600 sorotipos de Salmonella spp., sendo que as salmoneloses em humanos podem estar relacionadas ao consumo de carne de aves ou ovos contaminados, além de provocar doença em plantel de aves, acarretando diminuição na produção e consequentemente gerando prejuízos para cadeia produtiva. A Salmonella Heidelberg é um sorovar emergente e preocupante para a avicultura e saúde pública, mostrando-se mais invasiva quando comparado a outros sorotipos paratíficos. O uso de antimicrobianos empregados para fins terapêuticos e profiláticos no controle da Salmonella spp. na produção avícola pode conduzir à seleção de cepas bacterianas resistentes, no entanto, o seu uso na produção animal pode ser substituído por produtos alernativos com capacidade de reduzir a incidência de enteropatógenos, fornecendo efeitos benéficos sobre a saúde do hospedeiro. O capítulo 1 buscou-se avaliar o efeito do bioproduto adicionados à ração, com o intuito de diminuir multiplicação de Salmonella Heidelberg. Foram realizadas a avaliação da colonização intestinal e infecção sistêmica, através das contagens de colônias por UFC/g em conteúdo cecal, fígado e baço bem como a avaliação das alterações macroscópicas e microscópicas aos 3, 7 e 14 dpi em fígado, ceco e íleo e mensurados os parâmetros histomorfométricos do íleo como altura de vilo, profundidade de cripta, relação vilo:cripta e área de vilosidade em pintainhos de corte desafiados com Salmonella Heidelberg. As menores contagens cecais de SH foram observadas em aves que ingeriram sanguinarina, seguidas daquelas alimentadas com XPC (P>0,05). Não houve efeito sinérgico na redução de SH no ceco quando os dos dois bioprodutos foram adicionados simultaneamente (SANG+XPC). As médias das contagens de SH em fígado e baço não diferiram entre os grupos (P>0,05). De maneira geral, aves de todos x os grupos desafiados com SH apresentaram alterações macroscópicas semelhantes como áreas hemorrágicas, hepato e esplenomegalia, tais alterações foram mais discretas aos 14 dpi. As alterações microscópicas observadas em fígado incluíram congestão de hepatócitos, infiltrado de heterófilos nos sinusóides, áreas de necrosee inflamação mononuclear. Enquanto que no ceco, pôde-se observar infiltrados heterofílico e espessamento de lâmina própria. No íleo as alterações mais encontradas foram congestão de lâmina própria, atrofia de vilosidades, atrofia de cripta e espessamento de lâmina própria. Notou-se que a intensidade de alterações microscópicas foi menor nas aves dos suplementadas com os bioprodutos, quando comparadas as do grupo controle infectado. Aves suplementadas com sanguinarina foram as que menos desenvolveram alterações. Nos parâmetros histomorfométricos do íleo observou-se de maneira geral, ao longo do estudo, médias mais elevadas de altura e área de vilo em aves do grupo controle não infectadas e também do grupo SANG. Enquanto que a profundidade de cripta foi menor em aves do grupo controle negativo. No presente estudo, os resultados indicam que a adição de bioprodutos, sobretudo da sanguinarina, na dieta de aves auxiliou no controle da infecção por SH, reduzindo sua contagem em conteúdo cecal e melhorando aspectos da saúde geral e intestinal das aves.

More than 2.600 serotype of Salmonella spp. A known today, and salmonellosis in humans may be related to the consumption contaminated of poultry eggs, as well as causing disease in poultry, causing a decrease in production and consequently increasing proff loss. Salmonella Heidelberg is an emerging and worrying serotype for poultry and public health, and is more invasive when compared to other paratyphoid serotypes. The use of antimicrobials used for therapeutic and prophylactic purposes in the control of Salmonella spp. in poultry production may lead to the selection of resistant bacterial strains; however, its use in animal production may be replaced by alternative products capable of reducing the incidence of enteropathogens, providing beneficial effects on host health. Chapter 1 sought to evaluate the effect of the bioproduct added to the feed, in order to decrease Salmonella Heidelberg multiplication. The intestinal colonization and systemic infection were evaluated through colony counts by CFU / g in cecal, liver and spleen contents, as well as the evaluation of macroscopic and microscopic alterations at 3, 7 and 14 dpi in liver, cecum and ileum and the ileus histomorphometric parameters such as height of villi, depth of crypt, villus: crypt and villus area in cut chicks challenged with Salmonella Heidelberg were measured.The lowest cecal SH counts were observed in birds that ingested sanguinarin, followed by those fed with XPC (P> 0.05). There was no synergistic effect on SH reduction in the cecum when both bioproducts were added simultaneously (SANG + XPC). Mean scores for SH in liver and spleen did not differ between groups (P> 0.05). In general, birds from all groups challenged with HS presented similar macroscopic alterations such as hemorrhagic areas, hepato and splenomegaly; such changes were more discrete at 14 dpi. Microscopic changes observed in liver included congestion of hepatocytes, infiltration of heterophiles in the sinusoids, necrosis areas of mononuclear xii inflammation. While in the cecum, heterophilic infiltrates and thickening of lamina propria could be observed. In the ileum the most frequent changes were congestion of lamina propria, atrophy of villi, atrophy of crypt and thickening of lamina propria. It was observed that the intensity of microscopic changes was lower in the birds supplemented with the bioproducts, when compared to the infected control group. Birds supplemented with sanguinarine were the ones that developed the least changes. In the histomorphometric parameters of the ileum, it was generally observed throughout the study, higher mean height and villus area in birds from the uninfected control group and also from the SANG group. While the crypt depth was lower in birds of the negative control group. In the present study, the results indicate that the addition of bioproducts, mainly sanguinarin, in the diet of birds assisted in the control of SH infection, reducing its count in cecal content and improving aspects of bird general and intestinal health.

Ilhas de patogenicidade de Salmonella enterica: uma revisão / Salmonella enterica pathogenicity islands: a review

Salmonella é um bom modelo bacteriano para o estudo das interações entre hospedeiro e agente patogênico. Embora muitos de seus fatores de virulência tenham sido caracterizados, os mecanismos de especificidade aos hospedeiros com o desfecho na doença não estão elucidados. As ilhas de patogenicidade (PAI) são elementos genéticos dos cromossomos de um amplo número de agentes patogênicos. Nas salmonelas, muitos dos fatores de virulência são codificados por genes presentes nas PAI, as quais são referidos como ilhas de patogenicidade da Salmonella (SPI). Nesta revisão, são sumarizados os relatos na literatura específica dos últimos vinte anos sobre o papel das SPI na patogenia da doença e como elas influenciamnos mecanismos envolvidos na invasão e colonização das bactérias patogênicas no hospedeiro. (AU)

UTILIZAÇÃO DE PCR EM TEMPO REAL QUANTITATIVO PARA DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL ENTRE Salmonellaenterica SUBESP. enterica SOROVARES ENTERITIDIS, TYPHIMURIUM E GALLINARUM (BIOVARES GALLINARUM E PULLORUM) EM AVES DOMÉSTICAS (Gallusgallus)

Produtos avícolas são frequentemente associados a surtos alimentares ocasionados por Salmonella spp. e atualmente, existem 2659 sorovares de Salmonella. Os programas existentes para prevenção e controle da infecção por essa bactéria, são complexos devido às várias fontes de contaminação presentes na indústria avícola. A obtenção de um teste diagnóstico rápido para a identificação de bactérias é crucial, para implementar rapidamente as medidas de controle, a fim de conter a propagação bacteriana, reduzir as perdas na produção animal e evitar riscos de infecções transmitidas por alimentos à saúde humana.O objetivo do presente estudo foi realizar a padronização e aplicação da técnica da PCR em tempo real para identificação e quantificação da carga bacteriana em órgãos e fezes de aves comerciais infectadas por Salmonellaentericasubesp. entericasorovaresEnteritidis, Typhimurium e Gallinarum (biovaresGallinarum e Pullorum), em diferentes momentos pós-infecção. O presente estudo realizou a padronização de duas reações multiplex qPCR utilizando SYBr Green, uma reação para quantificação e diagnóstico diferencial entre S. Gallinarum e S. Pullorum, e outra para quantificar e diferenciar S. Enteritidis e S. Typhimurium . Após a padronização da qPCR, quatro grupos experimentais foram inoculados com cada estirpe estudada, por via oral, na 13ª semana de vida das aves. Aos quatro e sete dias após o desafio, três aves de cada grupo foram submetidas à eutanásia, para obtenção de amostras de fígado e conteúdo cecal. Após a colheita das amostras, foram realizadas identificação e quantificação bacteriana pela PCR em tempo real e pela microbiologia convencional. De acordo com a padronização das reações multiplex qPCR, as temperaturas de Melting (Tm) foram avaliadas para obtenção do diagnóstico diferencial. Para a primeira reação, o iniciador pSGP (97pb) obteve Tm de 78°C, para ambos biovars. O iniciador pSG (273pb) obteve 86,2°C de Tm para identificação de S. Gallinarum e o iniciador pSP (260pb) com Tm de 84,8°C para S. Pullorum. Para a segunda reação, observou-se uma Tm de 85°C (206pb) para S. Enteritidis e uma Tm de 79°C (62pb) para S. Typhimurium. Com a obtenção da curva padrão, foi possível evidenciar a alta sensibilidade do teste proposto, uma vez que possibilitou a obtenção de oito pontos de quantificação, iniciando em 108 UFC/mL e finalizando em 101 UFC/mL. Quando as reações foram aplicadas em amostras provenientes de aves infectadas com as respectivas bactérias, foi possível comprovar a alta sensibilidade e especificidade de qPCR, especialmente quando as amostras foram provenientes de fezes, pois permitiu a obtenção de resultados positivos mesmo em amostras com grande quantidade de contaminantes e baixa carga bacteriana. Em decorrência do presente estudo, reações multiplex qPCR com alta sensibilidade, especificidade e com base na fluorescência de SYBr Green foram padronizadas. Além disso, esta metodologia alia baixo custo ao resultado diagnóstico rápido, tornando esse método atraente para aplicação em análises de rotina laboratorial.

Poultry products are often associated with food outbreaks from Salmonella spp. and currently there are 2659 Salmonella serovars. Existing programs for disease prevention and control are complex due to the various sources of contamination within the poultry industry. Obtaining a rapid diagnostic test for identification of bacteria is crucial in order to rapidly implement control measures to contain bacterial spread, to reduce losses in animal production and to avoid risks from food-borne infections to human health. The objective of the present study was to perform a standardization and application of the real-time PCR for indirect diagnosis and quantification of bacterial load in organs and feces of commercial birds infected by Salmonella entericasubesp. entericasorovaresEnteritidis, Typhimurium and Gallinarum (biovaresGallinarum and Pullorum), at different post-infection moments. The present work describes the development of two multiplex qPCR using a low-cost DNA dye (SYBr Green), one for quantification and differential diagnosis between S.Gallinarum and S. Pullorum, and another to quantify and differentiate S. Enteritidis andS. Typhimurium. After qPCR standardization, four experimental groups were inoculated with each strains, orally at the 13th week of life of the birds. At four and seven days post challenge, three birds from each group were euthanasia for liver and cecal content samples collection. After the sampling, was carried out bacterial identification and quantification by real-time PCR and conventional microbiology. According to the multiplex qPCR standardization, the melting temperatures (Tm) was evaluated to obtain the differential diagnosis. For the first reaction, the pSGP amplicon (97 bp) showed Tm of 78°C for both biovars. The pSG amplicon (273 bp) showed a Tm of 86.2°C for S. Gallinarum and pSP amplicon (260 bp) dissociated at 84.8°C for S. Pullorum identification. For the second reaction, a Tm of 85°C (206bp) amplified product for S. Enteritidis and Tm of 79°C (62bp) amplified product for S. Typhimurium. The standard curve showed the high sensitivity of the proposed test, since it was possible to obtain eight quantification points, starting at 108 CFU/mL and ending at 101 CFU/mL. When the reactions were applied in samples from birds infected with each respective bacteria, it was possible to evidence the high sensitivity and specificity of qPCR, especially when the samples came from feces, because obtained positive results even from samples with a large number of contaminants and low bacterial load. As a result of the present study, multiplex qPCR reactions with high sensitivity, specificity and based on the fluorescence of SYBr Green was standardized. In addition, this methodology aligns low cost to the faster diagnostic result, making it attractive for application in routine laboratory analyzes.

DETECÇÃO DE BETA-LACTAMASES DE ESPECTRO ESTENDIDO (ESBLs) EM ISOLADOS DE SALMONELLA PROVENIENTES DE CARNES DE FRANGO

O objetivo deste estudo foi avaliar o perfil fenotípico e genotípico da susceptibilidade antimicrobiana, e o possível envolvimento de enzimas ESBLs em isolados oriundos de carnes de frango. Foram utilizados 18 isolados de Salmonella Heidelberg (SH) e 9 de S.Enteritidis (SE) pertencentes a bacterioteca do Laboratório de Biologia Molecular, Imunologia e Microbiologia (LABMIM) da Universidade do Estado de Santa Catarina (UDESC) também isoladas de carnes de frango no estado do Paraná foram utilizadas. Os 27 isolados de SE e SH foram submetidos aos teste de disco-difusão para definir o Índice de Resistência Múltipla aos Antimicrobianos (IRMA) e a Resistência a Múltiplas Drogas (MDR) utilizando-se os seguintes antimicrobianos: amoxicilina associado ao ácido clavulânico, ácido nalidíxico, cefotazima, ceftazidima, ceftiofur, ceftriaxone, enrofloxacina, estreptomicina, gentamicina, e tetraciclina. Foi considerado multirresistente o isolado que apresentou resistência a três ou mais classes de antimicrobianos. Outro teste realizado foi o disco-aproximação com o intuito de averiguar zonas de inibição interpostas, indicativas da produção de enzimas beta-lactamases de espectro estendido (ESBLs). Nos isolados de SH que apresentaram multirresistência (18/18) foi realizada a pesquisa de genes de resistência relacionados às ESBLs, sendo eles: blaCMY-2, blaSHV-1, blaTEM-1, blaCTX-M2, blaOXA-1, blaPSE-1 e AmpC através da técnica de PCR. A resistência geral encontrada foi de 17,77% e 80,55% para SE e SH, respectivamente. Os maiores níveis de resistência foram observados para o ácido nalidíxico, onde ambos sorovares foram 100% resistentes, seguido do ceftiofur com 22,22% para SE e 100% para SH. O padrão de resistência mais encontrado foi o B, cujo as classes são: penicilina, cefalosporinas, quinolona e tetraciclina, presentes em 42,1 % dos isolados de SH. De acordo com o teste de disco-aproximação não observamos zona de inibição, porém quanto a pesquisa dos genes de resistência via beta-lactamases de espectro estentido (ESBLs), detectamos cinco dos sete genes avaliados sendo que a média de prevalência dos genes estudados foi de 26,18%, onde os genes blaTEM-1, blaCMY-2 e AmpC obtiveram maior amplificação (83,33%, 38,88% e 38,88%, respectivamente). Os genes blaOXA-1 e blaPSE-1 não foram detectados. Estes resultados certamente denotam preocupação por se tratar de uma bactéria que causa doença em humanos e que pode estar presente em carnes de frango, com elevado perfil de resistência as cefalosporinas de terceira geração, sendo esta a classe de antimicrobianos mais utilizada no tratamento e controle das salmoneloses humana e animal.

The objective of this study was to evaluate the phenotypic and genotypic profile of antimicrobial susceptibility and the possible involvement of ESBLs enzymes in chicken meat isolates. Eighteen isolates of Salmonella Heidelberg (SH) and nine S.Enteritidis (SE) belonging to bacterioteca from the Laboratory of Molecular Biology, Immunology and Microbiology (LABMIM) of the State University of Santa Catarina (UDESC) were also isolated from chicken meats In the state of Paraná were used. The 27 isolates of SE and SH were submitted to the disc-diffusion test to define the Multiple Antimicrobial Resistance Index (IRMA) and Multiple Drug Resistance (MDR) using the following antimicrobial agents: amoxicillin associated with clavulanic acid, Nalidixic, cefotazime, ceftazidime, ceftiofur, ceftriaxone, enrofloxacin, streptomycin, gentamicin, and tetracycline. The isolate that presented resistance to three or more classes of antimicrobials was considered multidrug resistant. Another test was the disc-approximation in order to investigate interposed inhibition zones, indicative of the production of extended spectrum beta-lactamase enzymes (ESBLs). In the isolates of HS that presented multiresistance (18/18) the resistance genes related to ESBLs were investigated: blaCMY-2, blaSHV-1, blaTEM-1, blaCTX-M2, blaOXA-1, blaPSE-1 and AmpC by the PCR technique. Overall resistance was 17.77% and 80.55% for SE and SH, respectively. The highest levels of resistance were observed for nalidixic acid, where both serovars were 100% resistant, followed by ceftiofur with 22.22% for SE and 100% for SH. The most commonly found resistance pattern was B, whose classes are: penicillin, cephalosporins, quinolone and tetracycline, present in 42.1% of SH isolates. We did not observe zone of inhibition according to the disc-approximation test, but when searching for resistance genes via ESBLs, we detected five of the seven genes evaluated, and the mean prevalence of the studied genes was of 26.18%, where the blaTEM-1, blaCMY-2 and AmpC genes obtained higher amplification (83.33%, 38.88% and 38.88%, respectively). The blaOXA-1 and blaPSE-1 genes were not detected. The multiresistance profile possibly justified by the presence of resistance genes involved with ESBLs. These results are certainly of concern because it is a bacterium that causes disease in humans and can be present in chicken meat, with a high resistance profile to third generation cephalosporins, being this the class of antimicrobials most used in the treatment and control of human and animal salmonellosis.

Salmonella spp no processamento tecnológico de tambatinga (Colossoma macropomum x Piaractus brachypomus)

Salmonella spp é um patógeno responsável por grave infecção alimentar que pode ser introduzida na cadeia do pescado, por meio da manipulação e higiene inadequados ou em contato com águas contaminadas, haja vista que não é um contaminante biológico encontrado originalmente no pescado. A segurança microbiológica do pescado é uma preocupação dos consumidores, indústrias e das agências reguladoras em todo mundo pois o pescado pode agir como um veículo para a transmissão de Salmonella spp em toda a cadeia produtiva, sendo uma categoria importante de alimentos no comércio internacional sendo exportados para vários países. Ademais, existe uma preocupação com uso inadequado de antibióticos na aquicultura, resultado do aumento do isolamento de sorovares de Salmonella resistentes e multirresistentes. Nesse contexto, o objetivo desse estudo foi estudar a dinâmica da dispersão e o perfil de resistência antimicrobiana de Salmonella spp no processamento de tambatinga (Colossoma macropomum x Piaractus brachypomus) in natura resfriada, identificar fatores de risco e rotas potenciais de contaminação cruzada. Para tanto, 30 peixes foram monitorados ao longo de todas as etapas do processamento num abatedouro frigorífico de pescado com os programas de autocontrole implantados, um total de 120 amostras de lavado superficial de peixe foram coletadas e submetidas a análise bacteriológica, PCR e confirmação bioquímica dos isolados que também foram submetidos ao antibiograma. Salmonella spp viável foi identificada em todas as etapas do fluxograma, recepção, pós lavagem com água hiperclorada, pós evisceração/descamação e no resfriamento. A ocorrência encontrada de Salmonella spp no peixe in natura resfriado foi de 6,6% (2/30). Concluímos que Salmonella spp não faz parte da microbiota natural da tambatinga, entretanto o peixe contamina-se no tanque de cultivo e ao longo do transporte até o abatedouro frigorífico, transfere a bactéria para outros peixes isentos de contaminação através da água e/ou gelo. A etapa de lavagem com água hiperclorada realizada na etapa de recepção do peixe deve ser considerada um ponto de controle (PC), pois Salmonella não é eliminada caso o tempo e/ou a concentração de cloro não sejam aplicados corretamente. A evisceração/descamação são etapas do processamento que elevam o risco de contaminação cruzada e dispersão de Salmonella spp no abatedouro frigorífico, no entanto, o perigo pode ser eliminado na etapa de lavagem hiperclorada pós-evisceração, essa etapa deve ser considerada um ponto crítico de controle (PCC) e deve ser monitorada frequentemente, uma vez que nenhuma outra etapa posterior do processamento elimina Salmonella spp do produto. Todas as cepas de Salmonella spp (10) isoladas ao longo da linha de abate foram sensíveis as principais classes de antibióticos usados na clínica médica humana e veterinária. Isso indica que existe grande probabilidade de sucesso clínico, caso estes antimicrobianos sejam utilizados para tratamento de salmoneloses em humanos, causada por uma eventual contaminação através do consumo de tambatinga.

Salmonella spp is a pathogen responsible for severe foodborne infection that can be introduced into the fish chain through inadequate handling and hygiene or in contact with contaminated water, since it is not a biological contaminant originally found in fish. Microbiological safety of fish is a concern of consumers, industries and regulatory agencies worldwide because fish can act as a vehicle for the transmission of Salmonella spp throughout the production chain, being an important category of food in international trade and are often exported to several countries. In addition, there is concern about the inadequate use of antibiotics in aquaculture as a result of increased isolation of resistant and multiresistant Salmonella serovars. In this context, the objective of this study was to study the dispersion dynamics and the antimicrobial resistance profile of Salmonella spp in the processing of uncooked Tambatinga (Colossoma macropomum x Piaractus brachypomus), to identify risk factors and potential routes of cross contamination. To this end, 30 fish were monitored during all processing steps in a fish slaughterhouse with the self-control programs implanted. A total of 120 samples were collected and submitted to bacteriological analysis, PCR and biochemical confirmation of Isolates that were also submitted to the antibiogram. Viable salmonella spp was identified in all steps of the flowchart, reception, post-wash with hyperchlorinated water, post evisceration / desquamation and in the cooling. The occurrence of Salmonella spp in the cooled fresh fish was 6.6% (2/30). We conclude that Salmonella spp is not part of the natural microflora of the tambatinga, however the fish contaminates in the culture tank and along the transport to the cold slaughterhouse, transfers the bacteria to other fish free from contamination through water and / or ice. The washing step with hyperchlorinated water performed at the fish reception stage should be considered a control point (PC) because Salmonella is not eliminated if the time and / or chlorine concentration is not applied correctly. Evisceration / desquamation are stages of processing that increase the risk of cross-contamination and dispersion of Salmonella spp in the slaughterhouse, however, the danger can be eliminated in the post-evisceration hyperchlorinated washing stage, this step should be considered a critical point of Control (PCC) and should be monitored frequently, since no further processing steps eliminate Salmonella spp from the product. All strains of Salmonella spp. (10) isolated along the slaughter line were sensitive to the main classes of antibiotics used in human and veterinary medical practice. This indicates that there is a high probability of clinical success if these antimicrobials are used to treat salmonellosis in humans, caused by possible contamination through the consumption of tambatinga.

Avaliação da unidade analítica na detecção de Salmonella spp em frangos a varejo / Evaluation of the analytical unit for detecting Salmonella spp. in poultry at retail

Mais de 95 por cento das salmoneloses humanas são de origem alimentar e, entre os alimentos envolvidos na transmissão estão os produtos de origem animal, especialmente os de maior relevância, os produtos avícolas. Diante desta questão, o Ministério de Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) estabeleceu um programa com a finalidade de reduzir e monitorar a contaminação por Salmonella spp. nas carcaças de aves. Neste estudo, foi comparada a eficiência de duas metodologias de análises (o enxágue da carcaça e a excisão da pele) para recuperação de células da bactéria, bem como para a verificação da ocorrência do agente patogênico em amostras coletadas na região de Botucatu, SP. Em 100 carcaças analisadas, computando-se os resultados de ambas as metodologias, 43 por cento (43/100) estavam contaminadas por Salmonella spp. Por meio de metodologia de enxágue foram detectadas 81,40 por cento (35/43) amostras com resultados positivos e 51,16 por cento (22/43) pela técnica de excisão. Embora a técnica de enxague tenha detectado número superior de amostras positivas, não houve diferença estatística (p > 0,05) entre os resultados obtidos pelas duas metodologias. Estudos adicionais devem ser realizados, dada à importância das carcaças de frango na veiculação de Salmonella spp. e sua consequente introdução no ambiente de preparação de alimentos. (AU)

ALTERAÇÕES HISTOLÓGICAS E IMUNOLÓGICAS DE FRANGOS DESAFIADOS COM DIFERENTES SOROVARES DE SALMONELLA ENTERICA.

São conhecidos atualmente mais de 2500 sorovares de Salmonella, sendo que as salmoneloses em humanos podem estar relacionadas ao consumo de produtos derivados de frango contaminados com tal microrganismo durante as diversas fases da cadeia de produção avícola. O controle deste patógeno apresenta-se bastante complexo, pois além das práticas de biosseguridade, cepas diferentes respondem de forma ímpar frente ás ferramentas de controle como antimicrobianos, ácidos orgânicos, probióticos e prebióticos. Além disso, observa-se alta variabilidade no que diz respeito à endemicidade, genética e fontes de infecção. A presente tese está dividida em 2 capítulos. A Introdução aborda os aspectos básicos sobre a bactéria, epidemiologia e formas de controle. No capítulo 1 foram comparadas as alterações histológicas em frangos desafiados com Salmonella enterica, bem como a resposta de aves frente à infecção por diferentes cepas de Salmonella Enteritidis e Heidelberg utilizadas como desafio. Já no capítulo 2 foi avaliado o efeito de um prebiótico a base de mananoligossacarídeos na resposta imune, histologia da mucosa intestinal e no controle de Salmonella enterica sorovar Enteritidis e sorovar Minnesota em frangos experimentalmente desafiados.

There are over than 2500 serovars of Salmonella with an important relation between salmonellosis in humans. The consumption of poultry products contaminated with this microorganism during all process phases throughout the poultry production chain. The control of this pathogen is very complex due to variables such as biosecurity practices and the different responses of the strains when exposed to varied mechanisms of control: antimicrobials, organic acids, probiotics and prebiotics. Besides, there are high variability on epidemiologic data, diagnosis, genetic and sources of infection. The present thesis is divided in two chapters. The Introduction is about bacteria, epidemiology and forms of control. The first chapter compared histological alterations in chickens challenged with Salmonella enterica and immune response against different strains of Salmonella Enteritidis e Heidelberg used as challenge. In the second chapter it was evaluated the effect of a mananoligossacharides prebiotic on chicken´s immune response, intestinal mucosa histology and control of Salmonella enterica serotypes Enteritidis and Minnesota on chicken experimentally challenged.

Análise filogenética de Salmonella Typhimurium e Escherichia coli diarreiogênica isoladas de pombos (Columba livia) que realizam o forrageamento em recintos de zoológicos: implicações zoonóticas

Pombos (Columba livia) são aves exóticas, sinantrópicas, reservatórios de algumas doenças de caráter zoonótico. O presente trabalho teve por objetivo caracterizar genotipicamente isolados de Salmonella spp. e Escherichia coli diarreiogênicas de pombos domésticos. Foram coletados suabes de 118 pombos provenientes de dois zoológicos de São Paulo. Para a identificação de Salmonella spp, as amostras foram submetidas ao pré-enriquecimento em água peptonada 0,1% e incubadas a 37º C por 24-48 horas, seguida do enriquecimento seletivo em caldo de tetrationato de sódio, com incubação a 37º C por 24-48h e plaqueamento em meio seletivo XLT4, a 37º C por 24-48h. Para o isolamento de E. coli, as amostras foram semeadas em ágar MacConkey, com incubação a 37º C por 24 h. As colônias suspeitas foram identificadas por série bioquímica. A técnica de PCR foi utilizada para a confirmação do gênero Salmonella spp, identificação dos sorovares de S. Enteritidis e S. Typhimurium e para a determinação dos fatores de virulência de Escherichia coli. Dentre os 118 animais analisados, 4,23% (5/118) foram positivos para Salmonella spp, sendo todos do sorovar S. Typhimurium. Foram identificadas estirpes diarreiogênicas de E. coli, positivas para os fatores de virulência eae (8/118), bfp (4/118) e stx2f (3/118). Na análise filogenética pela técnica de AFLP, as estirpes de E. coli diarreiogênicas apresentaram uma diversidade genética, mas as estirpes de S. Typhimurium foram consideradas clonais. Os dados deste trabalho destacam o risco sanitário relacionado ao forrageamento da espécie Columba livia em zoológicos, por meio da confirmação da presença de Salmonella Typhimurium, EPEC típica, EPEC atípica e STEC nas excretas destas aves

Pigeons (Columba livia) are exotic birds, synanthropic and reservoirs of some zoonotic diseases. The aim of this study was to characterize genotypically isolates of Salmonella spp. and diarrheagenic strains of Escherichia coli isolated from domestic pigeons. Fecal swabs of 118 pigeons were collected from two zoos in São Paulo. The samples were subjected to a pre-enrichment step being placed in peptone water solution of 0.1% and incubated for 24-48 h at 37º C. Thereafter it was performed selective enrichment step where the samples were transferred in sodium tetrathionate broth with incubation for 24-48 h at 37º C, followed by plating on selective medium XLT4 incubation for 24-48h at 37º C for isolation and identification of Salmonella spp. The samples were also placed in BHI broth for a period of 24 h and then plated on MacConkey medium with incubation for 24h at 37º C for isolation of E. coli. Subsequent microbiological step, the isolates were subjected to DNA extraction using the methodology described by Boom for PCR. Polymerase chain reaction (PCR) was employed for identification of the Salmonella serovar Enteritidis and Typhimurium and virulence factors of E. coli. Of the 118 animals tested, 4.23% (5/118) were positive for Salmonella spp., all characterized as being serovar S. Typhimurium. Some E. coli strains (8/118) were positive for virulence factors: eae, 3,38% (4/118), bfp and 2.54% (3/118) to stx2f. In phylogenetic analysis by AFLP, strains of diarrheagenic E. coli showed a genetic diversity, but S. Typhimurium presented a clonal relationship. Data from this study highlight the health risk related to the foraging of Columba livia in zoos, because they can be reservoirs of Salmonella Typhimurium, typical and atypical EPEC and STEC