Molecular characterization of Toxoplasma gondii and Sarcocystis spp. in raw kibbeh and other meat samples commercialized in Botucatu, Southeastern Brazil / Caracterização molecular de Toxoplasma gondii e Sarcocystis spp. em amostras de quibe cru e de outras carnes comercializadas em Botucatu, Região Sudeste do Brasil

Abstract Toxoplasmosis occurs worldwide causing economic losses to the animal production and problems to the public health. The study aimed to detect Toxoplasma gondii and Sarcocystis spp.in 141 meat products from commercial meat cuts of pork, beef, and kibbeh sold in commercial markets from Botucatu, SP, Brazil. Samples were bioassayed in mice to isolate the parasite, and the parasite DNA detected by PCR targeting the 529 base pairs repeat element region (PCR-529-bp). All samples resulted negative on bioassay, whereas PCR positive for 9 (6,38%), distributed as 5/48 beef, 3/49 pork, and 1/44 kibbeh. PCR-positive were investigated for the the parasite genotype using multiplex-, nested-, and RFLP-PCR for 11 markers (SAG1, 5'-3'SAG2, alt.SAG2, SAG3, B-TUB, GRA6, L358, c22-8, c29-6, PK1, Apico). Complete genotype was determined on just one PCR-positive sample that matched MAS, TgCkBr89 and TgCkBr147 isolates already identified. In addition, nested- and RFLP-PCR targeting 18S rRNA was run for all PCR-positive samples and, the products, sequenced and aligned to the GenBank at NCBI website. Four samples showed 100% homology with T. gondii (GenBank #L37415.1), three with Sarcocystis hominis (GenBank #AF006471.1), two Sarcocystis cruzi (GenBank #AF176934.1), and one Sarcocystis hirsuta (GenBank #AF006469.1), indicating the circulation of T. gondii and Sarcocystis spp.

Resumo A toxoplasmose está mundialmente distribuída e causa perdas na produção animal e problemas de saúde pública. Objetivou-se detectar Toxoplasma gondii e Sarcocystis spp. em 141 produtos cárneos de origem suína (49), bovina (48) e de quibe cru (44), comercializados em mercados de Botucatu, SP, Brazil. Realizou-se bioensaio das amostras em camundongos para isolamento do parasita, e detecção do DNA pela reação em cadeia pela polimerase, tendo como alvo a região do elemento repetitivo de 529 pares de bases (PCR-529-bp). Todas as amostras foram negativas ao bioensaio e 9 (6,38%) positivas à PCR, sendo 5/48 bovinas, 3/49 suínas e 1/44 quibe. Determinou-se a genotipagem das amostras positivas pela multiplex-, nested- e RFLP-PCR com 11 marcadores (SAG1, 5'-3'SAG2, alt.SAG2, SAG3, B-TUB, GRA6, L358, c22-8, c29-6, PK1, Apico). Obteve-se genótipo completo em uma amostra, semelhante a outros já identificados (MAS, TgCkBr89 e TgCkBr147). Nested- e RFLP-PCR do gene 18S rRNA das amostras positivas à PCR foram realizadas, e os produtos da nested-PCR, sequenciados e alinhados com dados do GenBank no NCBI. Quatro apresentaram 100% de homologia com T. gondii (L37415.1), duas Sarcocystis hominis (AF006471.1), duas Sarcocystis cruzi (AF176934.1), uma Sarcocystis hirsuta (AF006469.1), indicando a circulação de T. gondii e Sarcocystis spp.

Macroscopic, histological, and molecular aspects of Sarcocystis spp. infection in tissues of cattle and sheep / Aspecto Macroscópico, histológico e molecular de Sarcocystis spp. em tecidos de bovinos e ovinos

Abstract The macroscopic, histological, and molecular aspects of Sarcocystis spp. were examined in the tissues of two cattle and four sheep, 16 and eight fragments analyzed respectively, condemned in the slaughterhouse. All 24 samples were collected and analyzed for detecting macrocysts and macroscopic lesions. Subsequently, subdivided for direct examination, polymerase chain reaction and histopathological examination. All sheep tissues samples had grossly white round to oval tissue cysts, ranging from 0.3 to 1 cm in diameter. In contrast, cattle tissues did not present grossly visible cysts but had randomly distributed white-yellow foci with irregular contours. All samples from cattle and sheep had microscopic cysts. In the histological examination of sheep tissues, circular to elongated, encapsulated, basophilic structures ranging from 30 to 3,000 µm in length and 20 to 1,000 µm in width were observed within the skeletal muscle fibers. In cattle tissues, all cardiac muscle four fragments analyzed contained circular to elongated basophilic structures inside cardiomyocytes and in some Purkinje fibers. PCR were performed using the primers: 2L and 3H. In conclusion, all 24 tissues were infected with Sarcocystis spp., and S. gigantea (in sheep) and S. cruzi (in cattle). were the identified species by sequencing.

Resumo Os aspectos macroscópicos, histológicos e moleculares de Sarcocystis spp. foram examinados nos tecidos de dois bovinos e quatro ovinos, 16 e oito fragmentos analisados, respectivamente, condenados no matadouro. Todas as 24 amostras foram coletadas e analisadas para detecção de macrocistos e lesões macroscópicas. Posteriormente, subdivididas para exame direto, reação em cadeia da polimerase e exame histopatológico. Todas as amostras de tecidos de ovelha apresentavam cistos grosseiramente visíveis, caracterizados como brancos, de redondos a ovais e estruturas variando de 0,3 a 1 cm de diâmetro. Em contraste, os tecidos de bovinos não apresentavam cistos grosseiramente visíveis, mas tinham focos branco-amarelos com contornos irregulares, distribuídos aleatoriamente. Todas as amostras de bovinos e ovinos apresentavam cistos microscópicos. No exame histológico de tecidos ovinos foram observadas estruturas basofílicas circulares a alongadas, encapsuladas, variando de 30 a 3.000 µm de comprimento e 20 a 1.000 µm de largura dentro das fibras do músculo esquelético. Nos tecidos de bovinos, todos os quatro fragmentos de músculo cardíaco analisados continham estruturas basofílicas circulares a alongadas, dentro dos cardiomiócitos e em algumas fibras de Purkinje. PCRs foram realizadas utilizando-se os "primers" 2L e 3H. Em conclusão, todos os 24 tecidos estavam infectados com Sarcocystis spp., sendo S. gigantea (em ovinos) e S. cruzi (em bovinos) as espécies identificadas por sequenciamento.

Macroscopic, histological, and molecular aspects of Sarcocystis spp. infection in tissues of cattle / Aspecto Macroscópico, histológico e molecular de Sarcocystis spp. em tecidos de bovinos e ovinos

The macroscopic, histological, and molecular aspects of Sarcocystis spp. were examined in the tissues of two cattle and four sheep, 16 and eight fragments analyzed respectively, condemned in the slaughterhouse. All 24 samples were collected and analyzed for detecting macrocysts and macroscopic lesions. Subsequently, subdivided for direct examination, polymerase chain reaction and histopathological examination. All sheep tissues samples had grossly white round to oval tissue cysts, ranging from 0.3 to 1 cm in diameter. In contrast, cattle tissues did not present grossly visible cysts but had randomly distributed white-yellow foci with irregular contours. All samples from cattle and sheep had microscopic cysts. In the histological examination of sheep tissues, circular to elongated, encapsulated, basophilic structures ranging from 30 to 3,000 µm in length and 20 to 1,000 µm in width were observed within the skeletal muscle fibers. In cattle tissues, all cardiac muscle four fragments analyzed contained circular to elongated basophilic structures inside cardiomyocytes and in some Purkinje fibers. PCR were performed using the primers: 2L and 3H. In conclusion, all 24 tissues were infected with Sarcocystis spp., and S. gigantea (in sheep) and S. cruzi (in cattle). were the identified species by sequencing.(AU)

Os aspectos macroscópicos, histológicos e moleculares de Sarcocystis spp. foram examinados nos tecidos de dois bovinos e quatro ovinos, 16 e oito fragmentos analisados, respectivamente, condenados no matadouro. Todas as 24 amostras foram coletadas e analisadas para detecção de macrocistos e lesões macroscópicas. Posteriormente, subdivididas para exame direto, reação em cadeia da polimerase e exame histopatológico. Todas as amostras de tecidos de ovelha apresentavam cistos grosseiramente visíveis, caracterizados como brancos, de redondos a ovais e estruturas variando de 0,3 a 1 cm de diâmetro. Em contraste, os tecidos de bovinos não apresentavam cistos grosseiramente visíveis, mas tinham focos branco-amarelos com contornos irregulares, distribuídos aleatoriamente. Todas as amostras de bovinos e ovinos apresentavam cistos microscópicos. No exame histológico de tecidos ovinos foram observadas estruturas basofílicas circulares a alongadas, encapsuladas, variando de 30 a 3.000 µm de comprimento e 20 a 1.000 µm de largura dentro das fibras do músculo esquelético. Nos tecidos de bovinos, todos os quatro fragmentos de músculo cardíaco analisados continham estruturas basofílicas circulares a alongadas, dentro dos cardiomiócitos e em algumas fibras de Purkinje. PCRs foram realizadas utilizando-se os "primers" 2L e 3H. Em conclusão, todos os 24 tecidos estavam infectados com Sarcocystis spp., sendo S. gigantea (em ovinos) e S. cruzi (em bovinos) as espécies identificadas por sequenciamento.(AU)

Investigação de anticorpos contra Sarcocystis neurona e Sarcocystis cruzi em equinos / Investigation of antibodies against Sarcocystis neurona and Sarcocystis cruzi in equines

Sarcocystis neurona is the primary agent for Equine Protozoal Myeloencephalitis (EPM), important neurological disease characterized by behavior or muscular changes, that impairs animal performance and husbandry. Sarcocystis cruzi is a pathogen related to myositis in cattle. Although related the life cycles of the parasites are distinct. S. neurona has opossums (Didelphis spp.) and S. cruzi, dogs as definitive hosts. However, S. neurona and S. cruzi may undergo cross-reactivity in serological tests, interfering on results of EPM ante-mortem diagnostic tests. In the present study, serology of 189 mares was performed by indirect immunofluorescence antibody test, using antigens of S. neurona and S. cruzi in order to assess the exposure degree of animals to antigens. Analyzing the results, it was observed that most of the animals (84.13%) reacted with at least one protozoal species and the number of animals which showed antibodies against S. cruzi was greater than S. neurona (80.42% and 33.86%, respectively) and a third of seropositive animals reacted to antigens of both species.(AU)

Investigação de anticorpos contra Sarcocystis neurona e Sarcocystis cruzi em equinos / Investigation of antibodies against Sarcocystis neurona and Sarcocystis cruzi in equines

Sarcocystis neurona is the primary agent for Equine Protozoal Myeloencephalitis (EPM), important neurological disease characterized by behavior or muscular changes, that impairs animal performance and husbandry. Sarcocystis cruzi is a pathogen related to myositis in cattle. Although related the life cycles of the parasites are distinct. S. neurona has opossums (Didelphis spp.) and S. cruzi, dogs as definitive hosts. However, S. neurona and S. cruzi may undergo cross-reactivity in serological tests, interfering on results of EPM ante-mortem diagnostic tests. In the present study, serology of 189 mares was performed by indirect immunofluorescence antibody test, using antigens of S. neurona and S. cruzi in order to assess the exposure degree of animals to antigens. Analyzing the results, it was observed that most of the animals (84.13%) reacted with at least one protozoal species and the number of animals which showed antibodies against S. cruzi was greater than S. neurona (80.42% and 33.86%, respectively) and a third of seropositive animals reacted to antigens of both species.(AU)

EXPOSIÇÃO DE CÃES A Sarcocystis neurona NA ZONA RURAL DO MUNICÍPIO DE ILHÉUS, BAHIA

OLIVEIRA DEIRÓ, C. M. C. Exposição de cães a Sarcocystis neurona na zona rural do município de Ilhéus, Bahia. Salvador, 2018. 44p. Dissertação (Mestrado em Ciência Animal nos Trópicos. Escola de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal da Bahia. Sarcocystis neurona é um protozoário coccídio, considerado o principal causador da mieloencefalite protozoária equina. A infecção por S. neurona e indução de doença neurológica em cães têm sido relatadas na América do Norte, sendo o cão considerado um hospedeiro aberrante ou acidental do protozoário. Objetivou-se com este estudo testar soros caninos provenientes da zona rural de Ilhéus, Bahia, quanto à reatividade a S. neurona. Avaliou-se também a reatividade cruzada com o protozoário Sarcocystis cruzi, que tem cães como hospedeiros definitivos. Foram testadas 353 amostras de soro caninos pela técnica da reação de imunofluorescência indireta (RIFI) com ponto de corte de 1:25, utilizando-se merozoítos de S. neurona produzidos em cultivo celular e bradizoítos de S. cruzi obtidos a partir de cistos de miocárdio bovino confirmados na PCR e sequenciamento, e 14 amostras aleatórias foram testadas no WB/imunoblot. Os resultados obtidos foram comparados com os seguintes dados dos cães: idade, sexo, domicílio, hábito de caça, contato com cavalos, bovinos e animais silvestres, zona de mata e disfunção neurológica para traçar um perfil epidemiológico. Os resultados da RIFI indicaram uma frequência de animais expostos a S. neurona de 3,39% (12/353) e a S. cruzi de 4,81% (17/353). Duas amostras (0,56%) foram positivas para ambas as espécies. No WB/imunoblot bandas de proteínas específicas para S. neurona foram observadas em oito amostras reativas na RIFI. A análise estatística demonstrou associação entre a variável contato com animais silvestres e a presença de anticorpos anti-S. neurona. Em conclusão, os soros dos cães foram reativos a antígenos de S. neurona e S. cruzi na região estudada, sem evidência de reação sorológica cruzada entre os parasitos na RIFI, porém, apresentam reatividade cruzada no imunoblot. Provavelmente, os animais foram expostos a formas infectantes de ambos os parasitos ou a espécies de Sarcocystis geneticamente semelhantes.

OLIVEIRA DEIRÓ, C. M. C. Dogs exposure to Sarcocystis neurona in rural areas of the city of Ilhéus, Bahia. Salvador, 2018. 44p. Dissertação (Mestrado em Ciência Animal nos Trópicos. Escola de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal da Bahia. Sarcocystis neurona is a coccidian parasite that is the major cause of equine protozoal myeloencephalitis. Infection by S. neurona and induction of neurologic disease in dogs have been reported in North America, where the dog is considered an aberrant or accidental host of the protozoa. The aim of this study was to test dog sera from rural areas of the city of Ilhéus, Bahia, to S. neurona .Potential serologic cross-reactivity to the protozoan Sarcocystis cruzi was also evaluated, as the dog is definitive host of this parasite. Sera from 353 dogs were tested by immunofluorescent antibody technique (IFAT) to S. neurona with a cut of 1:25, using merozoites produced in cell culture, and to S. cruzi, employing bradyzoites extracted from bovine myocardium confirmed by PCR and sequencing, and 14 samples were random chosen for immunoblot. The results obtained were evaluated with the following data about the dogs: age, gender, residence, hunting habits, contact with horses, stockyard and wild animals, inhabiting close to forest and neurological disease in order to gather better epidemiological information. The results obtained by IFAT indicated a frequency of 3.83% (12/353) of dogs exposed to S. neurona, and 4.81% (17/353) to S. cruzi. Two samples (0.56%) were simultaneously positive for both antigens. In the immunoblot, proteins bands for S. neurona were observed in eight samples that tested positive in IFAT. Statistical analysis indicate association between the variable contact with wild animals and antibodies to S. neurona. In conclusion, sera from dogs were reactive to S. neurona and S. cruzi antigens in the studied region, without evidence of serologic cross-reactivity between the parasites by IFAT, however, cross-reactivity occurred in immunoblot. The dogs were probably exposed to infectivity forms from both parasites or to genetically-related Sarcocystis species.

Diagnóstico laboratorial de Sarcocystis spp. em bovinos

Testes sorológicos são frequentemente utilizados para confirmar a infecção por Sarcocystis spp. e também são úteis para avaliação de um grande número de amostras. Testes moleculares proporcionam a detecção e caracterização de espécies de Sarcocystis. Portanto, os objetivos deste estudo foram: (1) investigar a infecção por Sarcocystis spp. em corações de bovinos, através de exame microscópico direto, reação em cadeia pela polimerase (PCR), polimorfismo no comprimento do fragmento de restrição (PCR-RFLP) e sequenciamento de DNA; (2) investigar a infecção por Sarcocystis spp. em bovinos pelo exame microscópico direto, confirmar a identidade dos sarcocistos por PCR e avaliar e correlacionar seus resultados com o diagnóstico sorológico dos bovinos pela imunofluorescência indireta; (3) comparar a imunofluorescência indireta (RIFI) e método de Dot-Blot para diagnóstico sorológico de infecção por Sarcocystis spp. em camundongos experimentalmente infectados e detectar possíveis reações sorológicas cruzadas com N. caninum e T. gondii. No Capítulo 1 desta tese apresenta-se um estudo no qual amostras de miocárdio de 314 bovinos foram coletadas de um frigorífico e analisados quanto a ocorrência de sarcocistos por microscopia óptica. Sarcocistos isolados de 134 destes corações foram submetidos à extração de DNA e PCR. O DNA amplificado foi digerido com enzimas de restrição BclI e RsaI para diferenciação entre S. cruzi, S. hirsuta e S. hominis. A espécie de Sarcocystis identificada foi confirmada por sequenciamento de DNA. Sarcocistos foram detectados em todas as amostras de miocárdio de bovinos avaliadas. A PCR-RFLP e sequenciamnto de DNA resultaram na identificação de S. cruzi. No estudo apresentado no Capítulo 2 foram coletadas amostras de miocárdio e sangue de 50 bovinos adultos de um frigorífico. Cada miocárdio foi submetido a exame microscópico a fresco para pesquisa de cistos compatíveis com Sarcocystis spp. Dez sarcocistos foram coletados de cada amostra e processados para extração de DNA seguida de PCR para diagnóstico molecular de Sarcocystis spp. A presença de anticorpos contra o parasito foi testada pela RIFI no soro sanguíneo. A frequência de detecção de sarcocistos pelo exame a fresco foi de 100% (50/50). Anticorpos específicos contra Sarcocystis spp. foram detectados em 96% (48/50) e 80% (40/50) das amostras de soro testadas na diluição de 1:25 e 1:200, respectivamente. DNA de Sarcocystis spp. foi amplificado pela PCR em 86% (43/50) dos cistos coletados. Os métodos empregados permitiram detectar a infecção por Sarcocystis spp. e a RIFI mostrou uma sensibilidade satisfatória em comparação com exame microscópico a fresco. No estudo apresentado no Capítulo 3, foram realizados exames sorológicos (RIFI e Dot-blot) de camundongos inoculados com Sarcocystis spp. ou N. caninum ou T. gondii. Dot-Blot demonstrou mesma sensibilidade e especificidade que a RIFI para diagnóstico sorológico de Sarcocystis em camundongos experimentalmente infectados e este teste não demonstrou reação sorológica cruzada com N. caninum e T. gondii.

Serological tests are frequently performed to confirm Sarcocystis spp. infection and they also are suitable to evaluate a large number of samples. Molecular tests provide detection and characterization of species. Therefore, the aims of the study were: (1) investigate Sarcocystis spp. infection in cattle hearts through direct microscopic examination, polymerase chain reaction (PCR), restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) and DNA sequencing (2) detect Sarcocystis spp. infection in cattle through direct microscopic examination, confirm sarcocysts identity by PCR and evaluate and correlate these results with the serological diagnosis of cattle by indirect immunofluorescence (3) compare indirect imunnofluorescence (IFAT) and Dot-Blot method for serological diagnosis of Sarcocystis spp. in experimentally infected mice and detect serological cross-reactions with N. caninum and T. gondii. Chapter 1 of this thesis presents a study that myocardium samples were collected from 314 bovine in an abattoir and analyzed for the occurrence of sarcocysts by light microscopy. Sarcocysts isolated from 134 of these hearts were submitted to DNA extraction and PCR. PCR-amplified DNA fragments were digested with the restriction enzymes BclI and RsaI aiming the differentiation among S. cruzi, S. hirsuta, and S. hominis and the identified Sarcocystis species was confirmed by DNA sequencing. Sarcocysts were detected in all bovine myocardium samples. PCR-RFLP and DNA sequencing resulted in identification of S. cruzi. In the study presented in Chapter 2, myocardium and blood samples from 50 adult beef cattle were collected from a slaughterhouse. Each myocardium was submitted to fresh microscopic examination for investigation of compatible cysts to Sarcocystis spp. Ten sarcocysts were collected of each sample and processed to DNA extraction followed by PCR for molecular diagnosis of Sarcocystis spp. The presence of antibodies against the parasite was tested by IFAT in the blood serum. The frequency of sarcocysts detection by fresh examination was 100% (50/50). Specific antibodies against Sarcocystis spp. were detected in 96% (48/50) and 80% (40/50) of serum samples examined at 1:25 and 1:200 dilutions, respectively. DNA from Sarcocystis spp. was amplified by PCR in 86% (43/50) of the collected cysts. The methods employed allowed to detect the infection by Sarcocystis spp. and RIFI showed good sensitivity compared to fresh microscopic examination. In the study presented in Chapter 3, serological tests (RIFI and Dot-blot) of mice inoculated with Sarcocystis spp. or N. caninum or T. gondii. Dot-Blot showed same specificity and sensibility as IFAT for immunological diagnostic of Sarcocystis spp. in experimentally infected mice and this immunoblot test did not demonstrate serological cross-reactions with N. caninum and T. gondii.

Miosite eosinofílica em bovinos abatidos para consumo humano / Eosinophilic myositis in cattle slaughtered for human consumption

Miosite eosinofílica é uma condição inflamatória relativamente rara que afeta os músculos estriados de bovinos e ovinos. A lesão é usualmente associada a cistos degenerados de Sarcocystis spp., principalmente S. cruzi embora esse protozoário ocorra associado às miofibras de praticamente qualquer bovino, sem provocar, na grande maioria das vezes, reação inflamatória. Esse artigo relata os achados macro e microscópicos da miosite eosinofílica em três bovinos abatidos para produção de carne para consumo humano. Macroscopicamente, as lesões consistiam de manchas ou linhas amarelo-pálidas, ocasionalmente esverdeadas, de 2-6mm no miocárdio de três bovinos e no músculo masseter de um deles. Microscopicamente, as lesões consistiam de acúmulos inflamatórios granulomatosos circundando um centro constituído por eosinófilos mortos e degenerados e ocasionais fragmentos de Sarcocystis sp. A imuno-histoquímica realizada no miocárdio de um dos bovinos com um anticorpo policlonal anti-Neospora caninum marcou cistos intactos em miofibras normais e fragmentos de cistos em meio a áreas de intensa reação inflamatória. Esse último achado corrobora a opinião dos que apontam Sarcocystis sp. como tendo participação na causa da miosite eosinofílica. (AU)

Eosinophilic myositis is a relatively rare inflammatory condition affecting striated muscle of cattle and sheep. It has been usually associated with degenerating cysts of Sarcocystis spp., mainly S. cruzi, although this protozoan occurs in the myofibers of almost every cattle without provoking an inflammatory reaction. This paper reports the gross and histopathological findings of eosinophilic myositis in three cattle slaughtered for meat production for human consumption. Grossly lesions were pale yellow, occasionally with a greenish hue, 2-6mm spots or strikes in the myocardium of the three cattle and in the masseter muscle of one of them. Microscopically there were granulomatous lesions surrounding a core of dead and degenerating eosinophils and occasional fragment components of Sarcocystis. Immunohistochemistry performed with a policlonal anti-Neospora caninum antibody in the myocardium of one of the cattle marked intact cysts in normal myofibers and intralesional fragments of disrupted cyst amidst areas with strong inflammatory reaction. This latter finding corroborates the opinion of those in favor of Sarcocystis spp. playing a role in the causation of eosinophilic myositis. (AU)

Sarcocystis cruzi (Apicomplexa: Sarcocystidae) no cachorro-do-mato (Cerdocyon thous) / Sarcocystis cruzi (Apicomplexa: Sarcocystidae) in the crab-eating fox (Cerdocyon thous)

Esporocistos de Sarcocystis foram identificados nas amostras fecais de um cachorro-do-mato. Eles foram dados por via oral para um bezerro em aleitamento, sendo observados cistos com morfologia compatível com os de Sarcocystis cruzi na musculatura cardíaca e esquelética, três meses após a infecção. Musculatura cardíaca deste bezerro foi dada para um segundo cão doméstico livre de coccídios, que eliminou esporocistos compatíveis com os de Sarcocystis em suas fezes, tendo com períodos pré-patente e patente 11 e 12 dias após a infecção respectivamente. Para comparar a morfologia dos esporocistos e cistos, um segundo cão, também livre de coccídios, foi alimentado com musculatura cardíaca de um bovino infectando naturalmente e positivo para cistos de S. cruzi. Esporocistos compatíveis com os eliminados pelo primeiro cão foram encontrados nas fezes. Apesar dos esporocistos eliminados pelo cachorro-do-mato serem significativamente diferentes dos eliminados pelos cães infectados experimentalmente, pode se considerar com base na morfologia dos esporocistos, cistos e na transmissão biológica que a espécie encontrada nas fezes do cachorro-do-mato é Sarcocystis cruzi.

Sporocysts of Sarcocystis were identified in feces samples of a crab-eating fox, and were orally given to a suckling calf; after 3 months of infection, sarcocysts morphologically similar to Sarcocystis cruzi were observed in cardiac and skeletal striated muscles. The cardiac muscles of this calf were orally given to a puppy free of coccidia, that shed sporocysts in its feces.with a prepatent and patent period of 11 and 12 days after infection, respectively. To compare the morphology of the sporocysts and cysts, a second puppy was fed on bovine cardiac muscles infected naturally, and sporocysts identical to those shed by the first dog were recovered from its feces. In spite of the significant difference between sporocysts found in the mucosa of the crab-eating fox and those shed by the first and second puppies, the species observed in this study was considered to be Sarcocystis cruzi, based on size of the sporocyts, morphology of the cyst wall, and the pray-predator cycle.

Sarcocystis cruzi (Apicomplexa: Sarcocystidae) no cachorro-do-mato (Cerdocyon thous) / Sarcocystis cruzi (Apicomplexa: Sarcocystidae) in the crab-eating fox (Cerdocyon thous)

Esporocistos de Sarcocystis foram identificados nas amostras fecais de um cachorro-do-mato. Eles foram dados por via oral para um bezerro em aleitamento, sendo observados cistos com morfologia compatível com os de Sarcocystis cruzi na musculatura cardíaca e esquelética, três meses após a infecção. Musculatura cardíaca deste bezerro foi dada para um segundo cão doméstico livre de coccídios, que eliminou esporocistos compatíveis com os de Sarcocystis em suas fezes, tendo com períodos pré-patente e patente 11 e 12 dias após a infecção respectivamente. Para comparar a morfologia dos esporocistos e cistos, um segundo cão, também livre de coccídios, foi alimentado com musculatura cardíaca de um bovino infectando naturalmente e positivo para cistos de S. cruzi. Esporocistos compatíveis com os eliminados pelo primeiro cão foram encontrados nas fezes. Apesar dos esporocistos eliminados pelo cachorro-do-mato serem significativamente diferentes dos eliminados pelos cães infectados experimentalmente, pode se considerar com base na morfologia dos esporocistos, cistos e na transmissão biológica que a espécie encontrada nas fezes do cachorro-do-mato é Sarcocystis cruzi.(AU)

Sporocysts of Sarcocystis were identified in feces samples of a crab-eating fox, and were orally given to a suckling calf; after 3 months of infection, sarcocysts morphologically similar to Sarcocystis cruzi were observed in cardiac and skeletal striated muscles. The cardiac muscles of this calf were orally given to a puppy free of coccidia, that shed sporocysts in its feces.with a prepatent and patent period of 11 and 12 days after infection, respectively. To compare the morphology of the sporocysts and cysts, a second puppy was fed on bovine cardiac muscles infected naturally, and sporocysts identical to those shed by the first dog were recovered from its feces. In spite of the significant difference between sporocysts found in the mucosa of the crab-eating fox and those shed by the first and second puppies, the species observed in this study was considered to be Sarcocystis cruzi, based on size of the sporocyts, morphology of the cyst wall, and the pray-predator cycle.(AU)

Sarcocistose em bovinos abatidos em Londrina Paraná / Sarcocistose em bovinos abatidos em Londrina Paraná

The occurence of Sarcocystis in the hearts of 130 zebus was studied in a slaughterhouse in Londrina - PR. The myocardium of the samples were examined after digestion in a pepsin solution and stainning of histological sections with Hematoxin-Eosin. The examination after digestion in pepsin solution revealed the presence of Sarcocystis sp as pradiozoites (X = 13.3 x 4.1u m) in all the samples. Histological examination detected the cyst in 126 (96,9%) animals with characteristics smooth and thin walls ( 8 um) of the species S. cruzi. None of the samples showed the presence of S. hirsuta and S. hominis. The cysts were always microscopic (X= 127,3 x 44.2 um). The cysts did not show inflamatory reactions around them but slight infiltration of interstitial mononuclear cells was noted in 28 (22, 5%) animals.

Estudou-se a frequência de Sarcocystis em corações, de 130 bovinos abatidos em matadouro em Londrina - PR. As amostras de miocárdio foram examinadas após digestão em solução de pépsina e cortes histológicos cotados pela Hematoxilina - Eosina. O exame após digestão em solução de pepsina revelou a presença de Sarcocystis na forma de bradizoitas (X = 13,3 x 4,1 m), nos 130 (100%) animais examinados. Nos cortes histológicos detectou-se a presença de cistos de Sarcocystis em 126 (% 96,9%) animais, cistos estes de parede lisa e delgada ( 0,8 um) identificados como pertencentes a espécie S. cruzi. Não se registrou a presença em nenhuma das amostras das espécies S. hirsuta e S. hominis. Os cistos observados foram sempre microscópicos (X = 127,3 x 44,2 um) e não apresentaram reações inflamatórias ao seu redor, detectou-se apenas a presença de focos de leves infiltrações de mononucleares em 28 (22,5%) animais.

Sarcocistose em bovinos abatidos em Londrina Paraná / Sarcocistose em bovinos abatidos em Londrina Paraná

The occurence of Sarcocystis in the hearts of 130 zebus was studied in a slaughterhouse in Londrina - PR. The myocardium of the samples were examined after digestion in a pepsin solution and stainning of histological sections with Hematoxin-Eosin. The examination after digestion in pepsin solution revealed the presence of Sarcocystis sp as pradiozoites (X = 13.3 x 4.1u m) in all the samples. Histological examination detected the cyst in 126 (96,9%) animals with characteristics smooth and thin walls ( 8 um) of the species S. cruzi. None of the samples showed the presence of S. hirsuta and S. hominis. The cysts were always microscopic (X= 127,3 x 44.2 um). The cysts did not show inflamatory reactions around them but slight infiltration of interstitial mononuclear cells was noted in 28 (22, 5%) animals.  

Estudou-se a frequência de Sarcocystis em corações, de 130 bovinos abatidos em matadouro em Londrina - PR. As amostras de miocárdio foram examinadas após digestão em solução de pépsina e cortes histológicos cotados pela Hematoxilina - Eosina. O exame após digestão em solução de pepsina revelou a presença de Sarcocystis na forma de bradizoitas (X = 13,3 x 4,1 m), nos 130 (100%) animais examinados. Nos cortes histológicos detectou-se a presença de cistos de Sarcocystis em 126 (% 96,9%) animais, cistos estes de parede lisa e delgada ( 0,8 um) identificados como pertencentes a espécie S. cruzi. Não se registrou a presença em nenhuma das amostras das espécies S. hirsuta e S. hominis. Os cistos observados foram sempre microscópicos (X = 127,3 x 44,2 um) e não apresentaram reações inflamatórias ao seu redor, detectou-se apenas a presença de focos de leves infiltrações de mononucleares em 28 (22,5%) animais.    

Experimental infection of dogs with Sarcocvstis sp. infected heart of bovine / Infecção experimental de cães com coração de bovino parasitado por Sarcocystis SP

Eight mongrel of both sexes and different ages were used for experimental infection by digestive route with heart containing Sarcocystis sp. Six animals received once raw bovine heart obtained at the slaughter house. The other two animals received during six days bovine heart acquired at open markets. Five other dogs in the same conditions were kept as non-infected controls. Shedding of sporocysts in the faeces of the experimentally infected dogs starting on the tenth day confirmed the infection of the animals. In the single infection the patent period was 59 days and in the multiple infection was 73 and 89 days (in this case the observation was made only in 2 animals). One hundred sporocysts measured 14,1-16,7 µm x 9,3 - 11,1 µm  (x = 15,0 x 10,7 µm). This result confirmed our prior observation demonstrating that sporocysts present in 5,8% of dogs faeces in the city of São Paulo were sporocysts of Sarcocystis, species Sarcocystis cruzi (S. fusiformis).

Oito cães, sem raça definida, de ambos os sexos e de diferentes idades foram utilizados para a infecção experimental, por via digestiva, com coração cru de bovino, contendo Sarcocystis sp. Seis destes animais receberam apenas uma vez, corações de bovinos obtidos de matadouro, enquanto que os outros dois animais receberam, durante 6 dias consecutivos, corações de bovinos adquiridos de feiras livres. Cinco outros animais foram mantidos como controles. A eliminação de esporocistos nas fezes dos cães alimentados com material de matadouro ou de feira livre, observada a partir do 10º dia, confirmou a infecção desses animais. O período de patência observado foi de 59 dias na injeção única e 73 e 89 dias na infecção múltipla (esta última observação feita somente em 2 animais). As dimensões máximas, mínimas e médias de 100 esporocistos foram de 14,1 - 16,7 x 9,3 - 11,1 µm e x = 15,0 x 10,7 µm. Este resultado veio confirmar a observação anterior de que os esporocistos presentes em 5,8% de fezes dos cães na cidade de São Paulo eram esporocistos de Sarcocystis, espécie Sarcocystis cruzi (S. fusiformis).

Experimental infection of dogs with Sarcocvstis sp. infected heart of bovine / Infecção experimental de cães com coração de bovino parasitado por Sarcocystis SP

Eight mongrel of both sexes and different ages were used for experimental infection by digestive route with heart containing Sarcocystis sp. Six animals received once raw bovine heart obtained at the slaughter house. The other two animals received during six days bovine heart acquired at open markets. Five other dogs in the same conditions were kept as non-infected controls. Shedding of sporocysts in the faeces of the experimentally infected dogs starting on the tenth day confirmed the infection of the animals. In the single infection the patent period was 59 days and in the multiple infection was 73 and 89 days (in this case the observation was made only in 2 animals). One hundred sporocysts measured 14,1-16,7 µm x 9,3 - 11,1 µm  (x = 15,0 x 10,7 µm). This result confirmed our prior observation demonstrating that sporocysts present in 5,8% of dogs faeces in the city of São Paulo were sporocysts of Sarcocystis, species Sarcocystis cruzi (S. fusiformis).

Oito cães, sem raça definida, de ambos os sexos e de diferentes idades foram utilizados para a infecção experimental, por via digestiva, com coração cru de bovino, contendo Sarcocystis sp. Seis destes animais receberam apenas uma vez, corações de bovinos obtidos de matadouro, enquanto que os outros dois animais receberam, durante 6 dias consecutivos, corações de bovinos adquiridos de feiras livres. Cinco outros animais foram mantidos como controles. A eliminação de esporocistos nas fezes dos cães alimentados com material de matadouro ou de feira livre, observada a partir do 10º dia, confirmou a infecção desses animais. O período de patência observado foi de 59 dias na injeção única e 73 e 89 dias na infecção múltipla (esta última observação feita somente em 2 animais). As dimensões máximas, mínimas e médias de 100 esporocistos foram de 14,1 - 16,7 x 9,3 - 11,1 µm e x = 15,0 x 10,7 µm. Este resultado veio confirmar a observação anterior de que os esporocistos presentes em 5,8% de fezes dos cães na cidade de São Paulo eram esporocistos de Sarcocystis, espécie Sarcocystis cruzi (S. fusiformis).