Caracterização fenotípica pela técnica de MALDI-TOF de Staphylococcus coagulase negativa isolados de mastite bovina em rebanhos leiteiros do Sul de Minas Gerais / Phenotypic characterization by the MALDI-TOF technique of Staphylococcus coagulase negative isolated from bovine mastitis in dairy herds of the South of Minas Gerais

O objetivo deste trabalho foi identificar espécies de Staphylococcus coagulase negativa em leite de vacas leiteiras com mastite por testes fenotípicos e pela técnica de MALDI-TOF MS. Foram utilizadas 85 isolados de estafilococos provenientes de leite de vacas com mastite. Todos os isolados foram caracterizados fenotipicamente por avaliação da morfologia das colônias, coloração de Gram, testes de oxidase, catalase e coagulase. Posteriormente, foram analisados os espectros de proteínas gerados no MALDI-TOF MS, seguida pela separação e detecção de íons pelo tempo de voo (TOF).Foram identificadas sete espécies, sendo a de maior ocorrência S. chromogenes 65 (76%), seguida por, S. hyicus 5 (6%), S. epidermidis 4 (5%).A técnica de MALDI-TOF demonstrou-se efetiva na caracterização de espécies de Staphylococcus causadores de mastite bovina.(AU)

Caracterização fenotípica pela técnica de MALDI-TOF de Staphylococcus coagulase negativa isolados de mastite bovina em rebanhos leiteiros do Sul de Minas Gerais / Phenotypic characterization by the MALDI-TOF technique of Staphylococcus coagulase negative isolated from bovine mastitis in dairy herds of the South of Minas Gerais

O objetivo deste trabalho foi identificar espécies de Staphylococcus coagulase negativa em leite de vacas leiteiras com mastite por testes fenotípicos e pela técnica de MALDI-TOF MS. Foram utilizadas 85 isolados de estafilococos provenientes de leite de vacas com mastite. Todos os isolados foram caracterizados fenotipicamente por avaliação da morfologia das colônias, coloração de Gram, testes de oxidase, catalase e coagulase. Posteriormente, foram analisados os espectros de proteínas gerados no MALDI-TOF MS, seguida pela separação e detecção de íons pelo tempo de voo (TOF).Foram identificadas sete espécies, sendo a de maior ocorrência S. chromogenes 65 (76%), seguida por, S. hyicus 5 (6%), S. epidermidis 4 (5%).A técnica de MALDI-TOF demonstrou-se efetiva na caracterização de espécies de Staphylococcus causadores de mastite bovina.

Mammary botryomycosis: two concomitant cases in mares: case report / Botriomicose mamária: dois casos concomitantes em éguas: relato de caso

Mammary disorders in mares are rare and usually only one animal per paddock is affected. In this report, two mares with 7 and 9 years old, were concomitantly diagnosis of chronic pyogranulomatous mastitis, associated with the Splendore-Hoeppli reaction, indicative of botryomycosis a rare, chronic suppurative disease with microabscess formation, characterized by in vivo formation of eosinophilic materials around microorganisms or biologically inert material. Various bacteria can cause botryomycosis in horses, and the most frequently isolated one is Staphylococcussp., particularly S. aureus. This report confirms the role of Staphylococcus sp.; however, specifically S. hyicus and S. cohnii that prior to the current report, had not been associated with cases of botryomycosis.(AU)

Enfermidades mamárias em éguas são raras e, normalmente, apenas um animal é afetado. Neste relato, duas éguas, de sete e nove anos, foram diagnosticadas concomitantemente com mastite crônica piogranulomatosa, associada com reação de Splendore - Hoeppli, indicativa de botriomicose, uma doença crônica supurativa rara, com formação de microabscessos caracterizados pela presença de material eosinofílico em torno dos microrganismos ou de material biologicamente inerte. Várias bactérias podem causar botriomicose em cavalos, sendo Staphylococcus sp., particularmente S. aureus, as mais frequentemente isoladas. Este relato confirma o papel do Staphylococcus sp, no entanto este é o primeiro relato em que S. hyicus e S. cohnii foram identificados em lesões relacionadas à botriomicose.(AU)

Mammary botryomycosis: two concomitant cases in mares: case report / Botriomicose mamária: dois casos concomitantes em éguas: relato de caso

Mammary disorders in mares are rare and usually only one animal per paddock is affected. In this report, two mares with 7 and 9 years old, were concomitantly diagnosis of chronic pyogranulomatous mastitis, associated with the Splendore-Hoeppli reaction, indicative of botryomycosis a rare, chronic suppurative disease with microabscess formation, characterized by in vivo formation of eosinophilic materials around microorganisms or biologically inert material. Various bacteria can cause botryomycosis in horses, and the most frequently isolated one is Staphylococcussp., particularly S. aureus. This report confirms the role of Staphylococcus sp.; however, specifically S. hyicus and S. cohnii that prior to the current report, had not been associated with cases of botryomycosis.(AU)

Enfermidades mamárias em éguas são raras e, normalmente, apenas um animal é afetado. Neste relato, duas éguas, de sete e nove anos, foram diagnosticadas concomitantemente com mastite crônica piogranulomatosa, associada com reação de Splendore - Hoeppli, indicativa de botriomicose, uma doença crônica supurativa rara, com formação de microabscessos caracterizados pela presença de material eosinofílico em torno dos microrganismos ou de material biologicamente inerte. Várias bactérias podem causar botriomicose em cavalos, sendo Staphylococcus sp., particularmente S. aureus, as mais frequentemente isoladas. Este relato confirma o papel do Staphylococcus sp, no entanto este é o primeiro relato em que S. hyicus e S. cohnii foram identificados em lesões relacionadas à botriomicose.(AU)

In vitro and in vivo efficacy of tea tree essential oil for bacterial and yeast ear infections in dogs / Uso in vitro e in vivo do óleo essencial de Melaleuca (Melaleuca alternifolia) em otites bacterianas e por leveduras

Otitis externa is a common complaint in dogs. Bacteria and yeasts are commonly involved and may perpetuate inflammatory reactions inside the ear canal. Otoscopy, cytological examination of secretion and microbiological culture embody forms of diagnosis. Cytology also has great use in accessing treatment evolution. Therapy usually consists of cleaning ear canals and subsequent use of antibiotics or antifungal products. As some of them may cause hypersensitivity and even ototoxicity, searching for new pharmacological bases is currently necessary and justifies this study, which aimed to evaluate in vitro and in vivo efficacy of tea tree essential oil for bacterial and yeast ear infections in dogs. Twenty-eight dogs from a particular shelter in Cuiabá (Mato Grosso, Brazil), presenting clinical signs of otitis externa, were enrolled in this clinical trial. In all of them, clinical and cytological evaluations, as well as culture and susceptibility testing of the affected ears were carried out. From each dog, one ear was treated with 5% tea tree essential oil lotion and the other with standard otic formulation, according to the type of infection (bacterial, yeast or both). In vitro susceptibility testings of all ear cultures, to the same drugs used in treatment, were also carried out. Culture results showed 62.5% bacterial and fungal infection, 33.9% bacterial infection and 3.6% fungal infection, from the 56 ear samples collected. The most common microorganisms isolated were Staphylococcus intermedius, Staphylococcus aureus, Proteus mirabilis and Malassezia pachydermatis. Gram-positive bacteria were susceptible to gentamycin in 60.5% and resistant in 16.3% of the samples. Five percent tea tree essential oil formulation produced a 5mm clear zone of inhibition around the disks in one of the 63 samples evaluated. Pure (100%) tea tree essential oil formulation produced a 10mm clear zone of inhibition around the disks in four of the 63 samples evaluated, a 9mm zone in three samples, an 8mm zone in 16 samples, a 7mm zone in seven samples, a 6mm zone in two samples and there was no clear zone in 31 samples. Inhibition zones were produced by strains of Staphylococcus intermedius, Staphylococcus hyicus, Corynebacterium sp., Proteus mirabilis and Enterobacter sp. tea tree essential oil ear solution significantly induced remission of clinical signs both in bacterial and yeast ear infections. It also reduced as much Malassezia pachydermatis ear infection as the nystatin solution used in this study, while gentamycin solution showed better antibacterial effect. More studies should be conducted to evaluate in vitro diffusion properties of tea tree essential oil. Good antimicrobial spectrum and the absence of adverse reactions confirm the importance of developing a tea tree formulation as an alternative therapy for ear infections in dogs.(AU)

Otite externa é queixa frequente em cães. Bactérias e leveduras estão comumente envolvidas e podem perpetuar as reações inflamatórias dentro do canal auditivo. Dentre as formas de diagnóstico, encontram-se a otoscopia, o exame citológico da secreção e a cultura microbiológica. Citologia também tem grande utilidade no acesso à evolução do tratamento. A terapia consiste de limpeza dos canais auditivos e posterior utilização de antibióticos ou produtos antifúngicos. Como alguns antimicrobianos utilizados no tratamento podem causar hipersensibilidade e até mesmo ototoxicidade, a busca por novas bases farmacológicas justifica a existência deste estudo, que teve como objetivo avaliar in vitro e in vivo a eficiência do óleo de Melaleuca alternifolia em otites bacterianas e fúngicas de cães. Vinte e oito cães, de um abrigo particular, apresentando sinais clínicos de otite externa, foram incluídos neste estudo clínico. Todos passaram por avaliação clínica, citologia e cultura de material das orelhas afetadas. De cada animal, uma orelha foi tratada com óleo de Melaleuca 5% e a outra com formulação ótica padrão, de acordo com a afecção (bacteriana, fúngica ou mista). As culturas também foram submetidas a testes de susceptibilidade in vitro aos mesmos agentes utilizados no tratamento in vivo. Os resultados da cultura mostraram 62,5% de infecção mista (bacteriana e fúngica), 33,9% de infecção bacteriana e 3,6%, de infecção fúngica a partir das 56 orelhas. Os micro-organismos mais isolados foram Staphylococcus intermedius, Staphylococcus aureus, Proteus mirabilis e Malassezia pachydermatis. As bactérias GRAM-positivas foram sensíveis à gentamicina em 60,5% e resistentes em 16,3% das amostras. A formulação com 5% de óleo essencial de Melaleuca produziu uma zona de inibição de 5mm em torno dos discos em uma das 63 amostras avaliadas. A formulação pura (100%) do mesmo produto produziu uma zona de 10mm de inibição em quatro das 63 amostras analisadas, uma zona de 9 mm em três amostras, uma zona de 8mm em 16 amostras, uma zona de 7mm em sete amostras, uma zona de 6mm em duas amostras e não havia nenhuma zona clara em 31 amostras. Zonas de inibição foram produzidas por estirpes de Staphylococcus intermedius, Staphylococcus hyicus, Corynebacterium sp., Proteus mirabilis e Enterobacter sp. Clinicamente, a formulação com o óleo essencial de melaleuca induziu significativamente uma melhora nas manifestações, tanto nas otites bacterianas quanto nas causadas por leveduras, sendo estatisticamente semelhante ao tratamento com nistatina (nas otites por levedura), mas menos eficaz que a solução de gentamicina nas otites bacterianas. Mais estudos devem ser realizados para avaliar as propriedades de difusão in vitro do óleo essencial de melaleuca. O bom espectro antimicrobiano, a boa resposta clínica e a ausência de reações adversas confirmam a possibilidade de desenvolvimento de formulação ótica com o óleo essencial de melaleuca, como uma alternativa para a terapia de infecções do ouvido em cães.(AU)

In vitro and in vivo efficacy of tea tree essential oil for bacterial and yeast ear infections in dogs / Uso in vitro e in vivo do óleo essencial de Melaleuca (Melaleuca alternifolia) em otites bacterianas e por leveduras

Otitis externa is a common complaint in dogs. Bacteria and yeasts are commonly involved and may perpetuate inflammatory reactions inside the ear canal. Otoscopy, cytological examination of secretion and microbiological culture embody forms of diagnosis. Cytology also has great use in accessing treatment evolution. Therapy usually consists of cleaning ear canals and subsequent use of antibiotics or antifungal products. As some of them may cause hypersensitivity and even ototoxicity, searching for new pharmacological bases is currently necessary and justifies this study, which aimed to evaluate in vitro and in vivo efficacy of tea tree essential oil for bacterial and yeast ear infections in dogs. Twenty-eight dogs from a particular shelter in Cuiabá (Mato Grosso, Brazil), presenting clinical signs of otitis externa, were enrolled in this clinical trial. In all of them, clinical and cytological evaluations, as well as culture and susceptibility testing of the affected ears were carried out. From each dog, one ear was treated with 5% tea tree essential oil lotion and the other with standard otic formulation, according to the type of infection (bacterial, yeast or both). In vitro susceptibility testings of all ear cultures, to the same drugs used in treatment, were also carried out. Culture results showed 62.5% bacterial and fungal infection, 33.9% bacterial infection and 3.6% fungal infection, from the 56 ear samples collected. The most common microorganisms isolated were Staphylococcus intermedius, Staphylococcus aureus, Proteus mirabilis and Malassezia pachydermatis. Gram-positive bacteria were susceptible to gentamycin in 60.5% and resistant in 16.3% of the samples. Five percent tea tree essential oil formulation produced a 5mm clear zone of inhibition around the disks in one of the 63 samples evaluated. Pure (100%) tea tree essential oil formulation produced a 10mm clear zone of inhibition around the disks in four of the 63 samples evaluated, a 9mm zone in three samples, an 8mm zone in 16 samples, a 7mm zone in seven samples, a 6mm zone in two samples and there was no clear zone in 31 samples. Inhibition zones were produced by strains of Staphylococcus intermedius, Staphylococcus hyicus, Corynebacterium sp., Proteus mirabilis and Enterobacter sp. tea tree essential oil ear solution significantly induced remission of clinical signs both in bacterial and yeast ear infections. It also reduced as much Malassezia pachydermatis ear infection as the nystatin solution used in this study, while gentamycin solution showed better antibacterial effect. More studies should be conducted to evaluate in vitro diffusion properties of tea tree essential oil. Good antimicrobial spectrum and the absence of adverse reactions confirm the importance of developing a tea tree formulation as an alternative therapy for ear infections in dogs.(AU)

Otite externa é queixa frequente em cães. Bactérias e leveduras estão comumente envolvidas e podem perpetuar as reações inflamatórias dentro do canal auditivo. Dentre as formas de diagnóstico, encontram-se a otoscopia, o exame citológico da secreção e a cultura microbiológica. Citologia também tem grande utilidade no acesso à evolução do tratamento. A terapia consiste de limpeza dos canais auditivos e posterior utilização de antibióticos ou produtos antifúngicos. Como alguns antimicrobianos utilizados no tratamento podem causar hipersensibilidade e até mesmo ototoxicidade, a busca por novas bases farmacológicas justifica a existência deste estudo, que teve como objetivo avaliar in vitro e in vivo a eficiência do óleo de Melaleuca alternifolia em otites bacterianas e fúngicas de cães. Vinte e oito cães, de um abrigo particular, apresentando sinais clínicos de otite externa, foram incluídos neste estudo clínico. Todos passaram por avaliação clínica, citologia e cultura de material das orelhas afetadas. De cada animal, uma orelha foi tratada com óleo de Melaleuca 5% e a outra com formulação ótica padrão, de acordo com a afecção (bacteriana, fúngica ou mista). As culturas também foram submetidas a testes de susceptibilidade in vitro aos mesmos agentes utilizados no tratamento in vivo. Os resultados da cultura mostraram 62,5% de infecção mista (bacteriana e fúngica), 33,9% de infecção bacteriana e 3,6%, de infecção fúngica a partir das 56 orelhas. Os micro-organismos mais isolados foram Staphylococcus intermedius, Staphylococcus aureus, Proteus mirabilis e Malassezia pachydermatis. As bactérias GRAM-positivas foram sensíveis à gentamicina em 60,5% e resistentes em 16,3% das amostras. A formulação com 5% de óleo essencial de Melaleuca produziu uma zona de inibição de 5mm em torno dos discos em uma das 63 amostras avaliadas. A formulação pura (100%) do mesmo produto produziu uma zona de 10mm de inibição em quatro das 63 amostras analisadas, uma zona de 9 mm em três amostras, uma zona de 8mm em 16 amostras, uma zona de 7mm em sete amostras, uma zona de 6mm em duas amostras e não havia nenhuma zona clara em 31 amostras. Zonas de inibição foram produzidas por estirpes de Staphylococcus intermedius, Staphylococcus hyicus, Corynebacterium sp., Proteus mirabilis e Enterobacter sp. Clinicamente, a formulação com o óleo essencial de melaleuca induziu significativamente uma melhora nas manifestações, tanto nas otites bacterianas quanto nas causadas por leveduras, sendo estatisticamente semelhante ao tratamento com nistatina (nas otites por levedura), mas menos eficaz que a solução de gentamicina nas otites bacterianas. Mais estudos devem ser realizados para avaliar as propriedades de difusão in vitro do óleo essencial de melaleuca. O bom espectro antimicrobiano, a boa resposta clínica e a ausência de reações adversas confirmam a possibilidade de desenvolvimento de formulação ótica com o óleo essencial de melaleuca, como uma alternativa para a terapia de infecções do ouvido em cães.(AU)

Characterization of Staphylococcus spp. strains in milk from buffaloes with mastitis in Brazil: the need to identify to species level to avoid misidentification

ABSTRACT Mastitis is an inflammation of the mammary gland that affects dairy cattle worldwide causing economic losses. Coagulase-negative staphylococci (CNS) are the predominant cause of this type of infection. We have recently showed that coagulase-positive staphylococci could be misidentified. So, the aim of this study was to characterize the Staphylococcus spp. strains initially classified as coagulase-negative Staphylococci, isolated from buffalo with subclinical mastitis. Milk of buffaloes with mastitis in herds was collected and 9 strains were identified as CNS by phenotypic tests. Molecular methodologies latter identified the strains as coagulase-negative Staphylococcus chromogenes (5), coagulase-positive Staphylococcus hyicus (2) and coagulase-positive Staphylococcus aureus (2). Our results strongly support the need to identify the isolates to a species level in order to avoid misidentification and to be aware of the classification using the coagulase test alone.

RESUMO A mastite é uma inflamação da glândula mamária que afeta o gado leiteiro em todo o mundo, causando perdas econômicas. Staphylococcus coagulase-negativa (SCN) são a causa predominante desse tipo de infecção. Mostrou-se recentemente que Staphylococcus coagulase-positiva podem ser identificados erroneamente. Assim, o objetivo deste estudo foi caracterizar cepas de Staphylococcus spp. inicialmente classificados como Staphylococcus coagulase-negativa, isolados de búfalas com mastite subclínica. O leite de búfalas com mastite foi coletado, e nove cepas foram identificadas como SCN por testes fenotípicos. Metodologias moleculares identificaram as cepas como Staphylococcus chromogenes coagulase-negativa (5) Staphylococcus hyicus coagulase-positiva (2) e Staphylococcus aureus coagulase-positiva (2). Os resultados reforçam a necessidade de identificar as cepas em termos de espécie, a fim de se evitarem erros de identificação e estar atento à classificação utilizando o teste de coagulase sozinho.

Characterization of Staphylococcus spp. strains in milk from buffaloes with mastitis in Brazil: the need to identify to species level to avoid misidentification / Caracterização de cepas de Staphylococcus spp. isoladas de leite de búfalas com mastites em Brasil: a necessidade de se identificar até nível de espécie para evitar erros de identificação

Mastitis is an inflammation of the mammary gland that affects dairy cattle worldwide causing economic losses. Coagulase-negative staphylococci (CNS) are the predominant cause of this type of infection. We have recently showed that coagulase-positive staphylococci could be misidentified. So, the aim of this study was to characterize the Staphylococcus spp. strains initially classified as coagulase-negative Staphylococci, isolated from buffalo with subclinical mastitis. Milk of buffaloes with mastitis in herds was collected and 9 strains were identified as CNS by phenotypic tests. Molecular methodologies latter identified the strains as coagulase-negative Staphylococcus chromogenes (5), coagulase-positive Staphylococcus hyicus (2) and coagulase-positive Staphylococcus aureus (2). Our results strongly support the need to identify the isolates to a species level in order to avoid misidentification and to be aware of the classification using the coagulase test alone.(AU)

A mastite é uma inflamação da glândula mamária que afeta o gado leiteiro em todo o mundo, causando perdas econômicas. Staphylococcus coagulase-negativa (SCN) são a causa predominante desse tipo de infecção. Mostrou-se recentemente que Staphylococcus coagulase-positiva podem ser identificados erroneamente. Assim, o objetivo deste estudo foi caracterizar cepas de Staphylococcus spp. inicialmente classificados como Staphylococcus coagulase-negativa, isolados de búfalas com mastite subclínica. O leite de búfalas com mastite foi coletado, e nove cepas foram identificadas como SCN por testes fenotípicos. Metodologias moleculares identificaram as cepas como Staphylococcus chromogenes coagulase-negativa (5) Staphylococcus hyicus coagulase-positiva (2) e Staphylococcus aureus coagulase-positiva (2). Os resultados reforçam a necessidade de identificar as cepas em termos de espécie, a fim de se evitarem erros de identificação e estar atento à classificação utilizando o teste de coagulase sozinho.(AU)

Characterization of Staphylococcus spp. strains in milk from buffaloes with mastitis in Brazil: the need to identify to species level to avoid misidentification / Caracterização de cepas de Staphylococcus spp. isoladas de leite de búfalas com mastites em Brasil: a necessidade de se identificar até nível de espécie para evitar erros de identificação

Mastitis is an inflammation of the mammary gland that affects dairy cattle worldwide causing economic losses. Coagulase-negative staphylococci (CNS) are the predominant cause of this type of infection. We have recently showed that coagulase-positive staphylococci could be misidentified. So, the aim of this study was to characterize the Staphylococcus spp. strains initially classified as coagulase-negative Staphylococci, isolated from buffalo with subclinical mastitis. Milk of buffaloes with mastitis in herds was collected and 9 strains were identified as CNS by phenotypic tests. Molecular methodologies latter identified the strains as coagulase-negative Staphylococcus chromogenes (5), coagulase-positive Staphylococcus hyicus (2) and coagulase-positive Staphylococcus aureus (2). Our results strongly support the need to identify the isolates to a species level in order to avoid misidentification and to be aware of the classification using the coagulase test alone.(AU)

A mastite é uma inflamação da glândula mamária que afeta o gado leiteiro em todo o mundo, causando perdas econômicas. Staphylococcus coagulase-negativa (SCN) são a causa predominante desse tipo de infecção. Mostrou-se recentemente que Staphylococcus coagulase-positiva podem ser identificados erroneamente. Assim, o objetivo deste estudo foi caracterizar cepas de Staphylococcus spp. inicialmente classificados como Staphylococcus coagulase-negativa, isolados de búfalas com mastite subclínica. O leite de búfalas com mastite foi coletado, e nove cepas foram identificadas como SCN por testes fenotípicos. Metodologias moleculares identificaram as cepas como Staphylococcus chromogenes coagulase-negativa (5) Staphylococcus hyicus coagulase-positiva (2) e Staphylococcus aureus coagulase-positiva (2). Os resultados reforçam a necessidade de identificar as cepas em termos de espécie, a fim de se evitarem erros de identificação e estar atento à classificação utilizando o teste de coagulase sozinho.(AU)

Detection by multiplex PCR of Staphylococcus aureus, S. intermedius and S. hyicus in artificially contaminated milk / Detecção de Staphylococcus aureus, S. intermedius e S. hyicus em leite contaminado artificialmente por multiplex PCR

This research aimed to detect coagulase-positive Staphylococcus (CPS) directly in samples of artificially contaminated milk, using multiplex PCR (mPCR). Standard and isolated bacterial strains of S. aureus, S. epidermidis, S. hyicus, S. intermedius, Listeria monocytogenes and Escherichia coli species were used, evaluating the specificity and detection limit of mPCR, for artificially contaminated UHT milk. Primers specific for the nuc gene (NUC1-NUC2 were used for S. aureus, NUC3-NUC4 for S. hyicus and NUC5-NUC6 for S. intermedius). It was possible to detect the three target species by mPCR, directly from bovine whole milk, with adequate specificity and acceptable detention limit for identification of coagulase-positive Staphylococcus (CPS) in foods. The specificity was determined by the amplification of species-specific fragments, and the detection limit was assessed by the detection thresholds obtained for the three species (103 CFU mL-1). From these results, the mPCR described, with the proposed set of primers, has the potential for use in precise identification and differentiation between CPSs in milk samples.(AU)

Esta pesquisa teve como objetivo detectar diretamente em amostras de leite contaminado artificialmente Staphylococcus coagulase positiva (ECP) por multiplex PCR (mPCR). Cepas padrão e isolados de S. aureus, S. epidermidis, S. hyicus, S. intermedius, Listeria monocytogenes e Escherichia coli foram utilizados no estudo. Foram utilizados primers específicos para o gene nuc (NUC1-NUC2 para o S. aureus, NUC3-NUC4 para o S. hyicus e NUC5-NUC6 para o S. intermedius ). Foi possível detectar as três espécies-alvo por mPCR, formar diretamente nas amostras de leite integral bovino, com especificidade adequada e limite de detecção aceitável para identificação de espécies de Staphylococcus coagulase positiva (ECP) em alimentos. A especificidade foi determinada por meio da amplificação de fragmentos específicos das espécies e o limite de detecção foi avaliado pelos limiares de detecção obtidos para as três espécies (103 UFC mL-1 para as espécies presentes nas amostras de leite contaminadas artificialmente).(AU)

Comparison phenotypic and genotypic identification of Staphylococcus species isolated from bovine mastitis / Comparação da identificação fenotípica e genotípica de espécies do gênero Staphylococcus isoladas de mastite bovina

In addition to Staphylococcus aureus nowadays other coagulase-positive staphylococci (CoPS) and coagulase-negative staphylococci (CoNS), earlier considered of minor importance, are now accepted as relevant pathogens for humans and animals. The involvement of these microorganisms in bovine mastitis etiology and the possibility their transmission through milk to humans justify the requirement of developing reliable methods for identification of the most frequent species among them. The purpose of this study was to compare the phenotypic techniques with the genotypic method carried out by sequencing of the rpoB gene in identification of several species of the genus Staphylococcus isolated from bovine mastitis. A total of 300 staphylococci isolates of bovine mastitis cases from several Brazilian dairy herds were studied by phenotypic and genotypic techniques, respectively: 150 CoPS and 150 CoNS strains. A total of 18 CoNS different species and 4 CoPS species were identified. Among the CoNS the following species were recognized: 48 (32%) Staphylococcus warneri, 22(15%) S. epidermidis, 20(13%) S. hyicus, 10(7%) S. xylosus, 7(5%) S. haemolyticus, 6(4%) S. simulans, 6(4%) S. schleiferi subsp schleiferi, 6(4%) S. hominis, 5(3%) S. pasteuri, 4(2.7%) S. cohnii, 3(2%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus 3(2%) S. chromogenes 3(2%) S. sciuri, 2(1%) S. saccharolyticus, 2(1%) S. lugdunensi, 1(0,7%) S. auricularis, 1(70%) S. saprophyticus subsp. bovis, 1(0.7%) S. capitis. And among the 150 CoPS were identified respectively: 105 (70%) S. aureus, 21(14%), S. hyicus, 19(13%) S. intermedius e 5(3%) S. schleiferi subsp coagulans. Considering the 150 CoNS isolates, the identifications performed by phenotypic and genotypic tests presented 96.7% of concordance, kappa coefficient of agreement = 0.933, SE (standard error) of kappa=0.021 (95% confidence interval: 0.893 to 0.974), Pearson's correlation coefficient (r) = 0.9977, (confidence interval 95%: 0.9938 a 0.9992) and in relation to 150 CPS isolates it was detected an agreement of 98.7%, kappa = 0.960, SE of kappa = 0.016, (95% confidence interval: 0.929 to 0.992) Pearson's correlation coefficient (r) = 0.9994 (95% confidence interval: 0.9681 to 1.0000). The verified agreement strength between the identification methods can be considered as excellent. These results assure that according to laboratory resources any of them will be suitable to perform the staphylococci identification.(AU)

Além de Staphylococcus aureus atualmente outros estafilococos coagulase positiva (SCP) e estafilococos coagulase-negativos (SCN), anteriormente considerados de menor relevância, são reconhecidos como importantes patógenos para humanos e animais. O envolvimento desses micro-organismos na etiologia da mastite bovina e a possibilidade da sua transmissão através do leite aos humanos justifica a utilização de métodos confiáveis para a identificação das espécies mais frequentes. O objetivo deste estudo foi comparar as técnicas fenotípicas com o método genotípico realizada por sequenciamento do gene rpoB na identificação de espécies do gênero Staphylococcus spp. isolados de mastite bovina. Um total de 300 estafilococos isolados de casos de mastite bovina em diferentes rebanhos leiteiros brasileiros foram estudados por técnicas fenotípicas e genotípicas, respectivamente: 150 linhagens de SCP e 150 linhagens de SCN. Foram identificados um total de 18 espécies de SCN e 4 espécies SCP. Entre os SCN as seguintes espécies identificadas: 48 (32%) Staphylococcus warneri, 22 (15%) S. epidermidis, 20 (13%) S. hyicus, 10 (7%) S. xylosus, 7 (5%) S. haemolyticus, 6 (4%) S. simulans, 6 (4%) S. schleiferi subsp schleiferi, 6 (4%) S. hominis, 5 (3%) S. pasteuri, 4 (2,7%) S. cohnii, 3 (2%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus, 3 (2%) S. chromogenes, 3 (2%) S. sciuri, 2 (1%) S. saccharolyticus, 2 (1%) S. lugdunensi, 1 (0,7%) S. auricularis, 1 (70 %) S. saprophyticus subsp. bovis, 1 (0,7%) S. capitis. E entre as 150 SCP foram identificados, 105 (70%) S. aureus, 21 (14%), S. hyicus, 19 (13%) S. intermedius e 5 (3%) S. schleiferi subsp coagulans. Considerando-se os 150 SCN isolados, as identificações realizadas por testes fenotípicos e genotípicos apresentaram 96,7% de concordância, coeficiente de concordância kappa = 0,933, SE (erro padrão) de kappa = 0,021 (95% intervalo de confiança: 0,893-0,974), coeficiente de correlação de Pearson (r) = 0,9977, (intervalo de confiança de 95%: 0,9938 a 0,9992) e em relação a 150 SCP isolados foi observado uma concordância de 98,7%, kappa = 0,960, sE de kappa = 0,016, (95% de intervalo de confiança: 0,929 a 0,992) coeficiente de correlação de Pearson (r) = 0,9994 (95% intervalo de confiança: 0,9681-1,0000). A correlação entre os métodos de identificação pode ser considerada como excelente. Esses resultados demonstraram que de acordo com os recursos disponíveis no laboratório, poderia ser utilizada qualquer uma das metodologias.(AU)

Comparison phenotypic and genotypic identification of Staphylococcus species isolated from bovine mastitis / Comparação da identificação fenotípica e genotípica de espécies do gênero Staphylococcus isoladas de mastite bovina

In addition to Staphylococcus aureus nowadays other coagulase-positive staphylococci (CoPS) and coagulase-negative staphylococci (CoNS), earlier considered of minor importance, are now accepted as relevant pathogens for humans and animals. The involvement of these microorganisms in bovine mastitis etiology and the possibility their transmission through milk to humans justify the requirement of developing reliable methods for identification of the most frequent species among them. The purpose of this study was to compare the phenotypic techniques with the genotypic method carried out by sequencing of the rpoB gene in identification of several species of the genus Staphylococcus isolated from bovine mastitis. A total of 300 staphylococci isolates of bovine mastitis cases from several Brazilian dairy herds were studied by phenotypic and genotypic techniques, respectively: 150 CoPS and 150 CoNS strains. A total of 18 CoNS different species and 4 CoPS species were identified. Among the CoNS the following species were recognized: 48 (32%) Staphylococcus warneri, 22(15%) S. epidermidis, 20(13%) S. hyicus, 10(7%) S. xylosus, 7(5%) S. haemolyticus, 6(4%) S. simulans, 6(4%) S. schleiferi subsp schleiferi, 6(4%) S. hominis, 5(3%) S. pasteuri, 4(2.7%) S. cohnii, 3(2%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus 3(2%) S. chromogenes 3(2%) S. sciuri, 2(1%) S. saccharolyticus, 2(1%) S. lugdunensi, 1(0,7%) S. auricularis, 1(70%) S. saprophyticus subsp. bovis, 1(0.7%) S. capitis. And among the 150 CoPS were identified respectively: 105 (70%) S. aureus, 21(14%), S. hyicus, 19(13%) S. intermedius e 5(3%) S. schleiferi subsp coagulans. Considering the 150 CoNS isolates, the identifications performed by phenotypic and genotypic tests presented 96.7% of concordance, kappa coefficient of agreement = 0.933, SE (standard error) of kappa=0.021 (95% confidence interval: 0.893 to 0.974), Pearsons correlation coefficient (r) = 0.9977, (confidence interval 95%: 0.9938 a 0.9992) and [...](AU)

Além de Staphylococcus aureus atualmente outros estafilococos coagulase positiva (SCP) e estafilococos coagulase-negativos (SCN), anteriormente considerados de menor relevância, são reconhecidos como importantes patógenos para humanos e animais. O envolvimento desses micro-organismos na etiologia da mastite bovina e a possibilidade da sua transmissão através do leite aos humanos justifica a utilização de métodos confiáveis para a identificação das espécies mais frequentes. O objetivo deste estudo foi comparar as técnicas fenotípicas com o método genotípico realizada por sequenciamento do gene rpoB na identificação de espécies do gênero Staphylococcus spp. isolados de mastite bovina. Um total de 300 estafilococos isolados de casos de mastite bovina em diferentes rebanhos leiteiros brasileiros foram estudados por técnicas fenotípicas e genotípicas, respectivamente: 150 linhagens de SCP e 150 linhagens de SCN. Foram identificados um total de 18 espécies de SCN e 4 espécies SCP. Entre os SCN as seguintes espécies identificadas: 48 (32%) Staphylococcus warneri, 22 (15%) S. epidermidis, 20 (13%) S. hyicus, 10 (7%) S. xylosus, 7 (5%) S. haemolyticus, 6 (4%) S. simulans, 6 (4%) S. schleiferi subsp schleiferi, 6 (4%) S. hominis, 5 (3%) S. pasteuri, 4 (2,7%) S. cohnii, 3 (2%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus, 3 (2%) S. chromogenes, 3 (2%) S. sciuri, 2 (1%) S. saccharolyticus, 2 (1%) S. lugdunensi, 1 (0,7%) S. auricularis, 1 (70 %) S. saprophyticus subsp. bovis, 1 (0,7%) S. capitis. E entre as 150 SCP foram identificados, 105 (70%) S. aureus, 21 (14%), S. hyicus, 19 (13%) S. intermedius e 5 (3%) S. schleiferi subsp coagulans. Considerando-se os 150 SCN isolados, as identificações realizadas por testes fenotípicos e genotípicos apresentaram 96,7% de concordância, coeficiente de concordância kappa = 0,933, SE (erro padrão) de [...](AU)

Atividade antibacteriana in vitro da própolis marrom / In vitro biological activity of brown propolis

Objetivou-se avaliar a atividade antibacteriana in vitro da própolis marrom, por meio da determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM). O extrato alcoólico de própolis foi obtido de 35 g de própolis bruta macerada em 65 mL de álcool de cereais. As concentrações do extrato de própolis usadas foram: 75mg/mL; 56,4mg/mL; 37,5mg/mL; 18,9mg/mL; 9,3mg/mL; 4,5mg/mL e 2,25mg/mL. Foram utilizados 32 isolados de bactérias Gram-positivas: Rhodococcus equi, Staphylococcus aureus, Staphylococcus hyicus, Staphylococcus spp. e Streptococcus spp., e 32 isolados de bactérias Gram-negativas: Enterobacter agglomerans, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Klebsiella sp., Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas spp., Salmonella spp. e Serratia rubidaea, provenientes de processos clínicos infecciosos de animais domésticos, obtidas e armazenadas no Laboratório de Bacteriologia da FAMEZ/UFMS. O extrato de própolis marrom apresentou atividade antimicrobiana com CIM variando de 2,25 a 18,9mg/mL para as bactérias Gram-positivas e 4,5 a 18,9mg/mL para as bactérias Gram-negativas, sendo as bactérias provenientes de bovinos e caninos as mais resistentes. Conclui-se que a própolis marrom tem ação bactericida, em função da espécie da bactéria e da procedência animal.(AU)

The aim of this study was to evaluate the in vitro antibacterial activity of brown propolis, by determining the minimum inhibitory concentration (MIC). The alcoholic extract of propolis was obtained from 35g of crude propolis macerated in 65mL of cereals alcohol. Dilutions of propolis extracts used were: 75mg/mL; 56.4mg/mL; 37.5mg/mL; 18.9mg/mL; 9.3mg/mL; 4.5mg/mL, and 2.25mg/mL. Thirty-two Gram-positive bacteria isolates were used: Rhodococcus equi, Staphylococcus aureus, Staphylococcus hyicus, Staphylococcus spp. and Streptococcus spp.; and the thirty-two Gram-negative bacteria isolated were: Enterobacter agglomerans, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Klebsiella sp., Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas sp., Salmonella sp., and Serratia rubidaea, obtained from infectious clinical processes of domestic animals, and stored in the Laboratory of Bacteriology of FAMEZ/UFMS. The brown propolis extract showed antibacterial activity with MIC ranging from 2.25 to 18.9mg/ml for Gram-positive bacteria and 4.5 to 18.9mg/ml for Gram-negative bacteria, and bacteria from cattle and dogs were more resistant. It was concluded that brown propolis has antibacterial action, but the effect depends on the species of the bacterium and its origin.(AU)

Staphylococcus hyicus

ABSTRACT:Staphylococcus hyicus is an important micro organism Veterinary Medicine and public health, because of its ability to cause disease in animals and humans. The present study aims to conduct a literature review to bring together the most current information about S. hyicus. Thus, the specie's characteristics, the pathogenicity factors and their occurrence in animals, food and humans were approached.

RESUMO:Staphylococcus hyicus é um micro-organismo de impor tância em Medicina Veterinária e saúde pública, tendo em vista sua capacidade de causar doenças em animais e seres humanos. O pre sente trabalho teve como objetivo realizar uma revisão de literatura a fim de reunir as informações mais atuais sobre o S. hyicus. Para tanto, foram abordados: características da espécie, fatores de pato- genicidade e sua ocorrência em animais, alimentos e seres humanos.

Staphylococcus hyicus

ABSTRACT:Staphylococcus hyicus is an important micro organism Veterinary Medicine and public health, because of its ability to cause disease in animals and humans. The present study aims to conduct a literature review to bring together the most current information about S. hyicus. Thus, the specie's characteristics, the pathogenicity factors and their occurrence in animals, food and humans were approached.

RESUMO:Staphylococcus hyicus é um micro-organismo de impor tância em Medicina Veterinária e saúde pública, tendo em vista sua capacidade de causar doenças em animais e seres humanos. O pre sente trabalho teve como objetivo realizar uma revisão de literatura a fim de reunir as informações mais atuais sobre o S. hyicus. Para tanto, foram abordados: características da espécie, fatores de pato- genicidade e sua ocorrência em animais, alimentos e seres humanos.

Staphylococcus hyicus / Staphylococcus hyicus

Staphylococcus hyicus é um micro-organismo de importância em Medicina Veterinária e saúde pública, tendo em vista sua capacidade de causar doenças em animais e seres humanos. O presente trabalho teve como objetivo realizar uma revisão de literatura a fim de reunir as informações mais atuais sobre o S. hyicus. Para tanto, foram abordados: características da espécie, fatores de patogenicidade e sua ocorrência em animais, alimentos e seres humanos.(AU)

Staphylococcus hyicus is an important micro organism Veterinary Medicine and public health, because of its ability to cause disease in animals and humans. The present study aims to conduct a literature review to bring together the most current information about S. hyicus. Thus, the specie's characteristics, the pathogenicity factors and their occurrence in animals, food and humans were approached.(AU)

Staphylococcus hyicus / Staphylococcus hyicus

Staphylococcus hyicus is an important microorganism Veterinary Medicine and public health, because of its ability to cause disease in animals and humans. The present study aims to conduct a literature review to bring together the most current information about S. hyicus. Thus, the species characteristics, the pathogenicity factors and their occurrence in animals, food and humans were approached.

Staphylococcus hyicus é um micro-organismo de importância em Medicina Veterinária e saúde pública, tendo em vista sua capacidade de causar doenças em animais e seres humanos. O presente trabalho teve como objetivo realizar uma revisão de literatura a fim de reunir as informações mais atuais sobre o S. hyicus. Para tanto, foram abordados: características da espécie, fatores de patogenicidade e sua ocorrência em animais, alimentos e seres humanos.

Staphylococcus hyicus / Staphylococcus hyicus

Staphylococcus hyicus is an important microorganism Veterinary Medicine and public health, because of its ability to cause disease in animals and humans. The present study aims to conduct a literature review to bring together the most current information about S. hyicus. Thus, the species characteristics, the pathogenicity factors and their occurrence in animals, food and humans were approached.(AU)

Staphylococcus hyicus é um micro-organismo de importância em Medicina Veterinária e saúde pública, tendo em vista sua capacidade de causar doenças em animais e seres humanos. O presente trabalho teve como objetivo realizar uma revisão de literatura a fim de reunir as informações mais atuais sobre o S. hyicus. Para tanto, foram abordados: características da espécie, fatores de patogenicidade e sua ocorrência em animais, alimentos e seres humanos.(AU)

Occurrence of pathogens causing subclinical mastitis in Jaguapitã county, state of Paraná - Brazil / Ocorrência de patógenos causadores de mastite subclínica no município de Jaguapitã, estado do Paraná - Brasil

O objetivo desta pesquisa foi identificar a ocorrência dos patógenos causadores de mastite subclínica em um rebanho leiteiro tipo B no município de Jaguapitã, estado do Paraná, Brasil. Foram realizados 400 testes de Califórnia Mastite Teste (CMT) em amostras de leite de 100 animais, totalizando 400 tetos. Dentre os animais testados 55% reagiram ao CMT apresentando grau dois ou superior, com 157 tetos positivos. Após as amostras de leite dos 157 tetos serem submetidos à cultura em ágar sangue, 25,48% (40/157) não apresentaram crescimento ou houve crescimento de mais de duas colônias bacterianas, 28,03% (44/157) foram observadas Staphylococcus coagulase negativa (CNS), 8,28% (13/157) Streptococcus uberis, 7,64% (12/157) Staphylococcus aureus, 7,64% (12/157) Corynebacterium spp, 7,01% (11/157) Staphylococcus intermedius, 4,46% (7/157) Staphylococcus hyicus, 3,82% (6/157) Bacillus spp., 2,55% (4/157) para Streptococcus dysgalacteae, Enterobactéria e Leveduras. Conclui-se que a CNS é o mais relevante agente causador de mastite subclínica.(AU)

The aim of this research was to identify the occurrence of pathogens causing subclinical mastitis in grade B milk farms of the Jaguapitã county, state of Paraná, Brazil. California Mastitis Test (CMT) were carried out in 400 milk samples from 100 animals and 157 teats from 55 animals (55%) were positive, showed score two or higher to CMT. When these 157 positive samples to CMT were transported for bacterial culture in blood agar, 25.48% (40/157) samples showed no bacterial growth or more than two types of bacterial colonies grew, 28.03% (44/157) were Coagulase-negative staphylococci (CNS), 8.28% (13/157) were Streptococcus uberis, 7.64% (12/157) were Staphylococcus aureus, 7.64% (12/157) were Corynebacterium spp, 7.01% (11/157) were Staphylococcus intermedius, 4.46% (7/157) were Staphylococcus hyicus, 3.82% (6/157) were Bacillus spp., 2.55% (4/157) were Streptococcus dysgalacteae, Enterobacteria and Yeasts. We conclude that CNS is the most relevant subclinical mastitis causative agent.(AU)

OCORRÊNCIA DE ESTIRPES MULTIRRESISTENTES DE STAPHYLOCOCCUS SP. ASSOCIADAS A PREVALÊNCIA DE MASTITE SUBCLINICA BOVINA EM PROPRIEDADES DO ACRE

A mastite subclínica em bovinos é a inflamação da glândula mamária, de caráter infeccioso ou não, que acarreta principalmente a redução na produção de leite. Bactérias do gênero Staphylococcus sp. multirresistentes têm sido frequentemente associadas com a doença. O objetivo do presente estudo foi identificar as espécies de Staphylococcus sp. e a existência do perfil de multirresistência entre as estripes encontradas em propriedades situadas em 5 municípios na região do baixo Acre associadas a mastite subclínica, e identificar possíveis fatores de risco que possam contribuir para o seu aparecimento. Foram selecionadas 23 propriedades por conveniência em uma amostragem não probabilística. Um total de 339 vacas mestiças foram testadas pelo CMT. Foram identificadas a presença de mastite subclínica em 108 animais, totalizando 229 tetos afetados. As amostras de leite foram semeadas em ágar sangue a 37 ° C, 24-48 horas para isolamento bacteriano. Os isolados sugestivos de Staphylococcus sp. foram submetidos à técnica de MALDI TOF (Dessorção- Ionização por Laser Associada à Matriz - Tempo de Voo - Espectrometria de Massa). Um total de 101 estirpes foram identificadas como pertencentes ao gênero Staphylococcus sp., distribuídas em oito espécies: S. chromogenes (58,4%), S. aureus (19,8%), S. hyicus (7,9%), S. saprophyticus (4,9%); S. haemolyticus (4%), S. epidermidis (3%); S. xylosus (1%) e S. kloosii (1%). O teste de suscetibilidade antimicrobiana foi realizado de acordo com o CLSI (Comitê Nacional para Padrões Clínicos e Laboratoriais) para as classes: beta-lactâmico, aminoglicosídeo, quinolona, lincosamida, macrolídeo, tetraciclina, rifamicina, cloranfenicol e oxazolidinona. Do total de isolados, 19 (18,8%) apresentaram perfil de multirresistência por apresentarem resistência a mais de três classes de antibióticos. Todas as amostras foram sensíveis a gentamicina (100%). Penicilina G foi o antibiótico com menor ação sobre as estirpes testadas (47,5%). Um questionário epidemiológico foi aplicado e constatou-se que fatores ligados a limpeza foram os que mais contribuíram para ordenar as propriedades. Diagnosticar e quantificar os agentes e fatores que levam a ocorrência de mastite permite a implantação e execução de medidas preventivas de modo mais efetivo. Adicionalmente é importante considerar o potencial de transmissão de genes de resistência entre patógenos, visto que o aparecimento de estirpes multirresistente representam um risco a saúde pública e veterinária.

Bovine subclinical mastitis is an inflammation of the mammary glands, caused or not by infections, which results mainly in a reduction on the milk production. Multiresistant bacteria which belong to the genus Staphylococcus sp. have been frequently associated to this disease. The objective of the present study was to identify the species of Staphylococcus sp. and the existence of the profile of multirresistance among the strains found in properties located on the countrified region of Acre associated to subclinical mastitis, and identify possible risk factors which can contribute to its forthcoming. 23 properties were selected by convenience in a non-probabilistic sampling. A total of 339 cows with mixed brands were tested by CMT. The presence of subclinical mastitis was identified in 108 animals, totalizing 229 affected teats. The milk samples were seeded in blood agar at 37 °C, 24-48 hours for bacteria isolation. Those which were suggestive of Staphylococcus sp. were submitted to the technique of MALDI TOF (Matrix Assisted Laser Desorption Ionization - Time of Flight Mass Spectrometry). A total of 101 strains were identified as belonging to the genus Staphylococcus sp., separated in eight species: S. chromogenes (58,4%), S. aureus (19,8%), S. hyicus (7,9%), S. saprophyticus (4,9%); S. haemolyticus (4%), S. epidermidis (3%); S. xylosus (1%) and S. kloosii (1%). The antimicrobial susceptibility test was accomplished according with the CLSI (Clinical & Laboratory Standards Institute) to the classes: beta-lactam, aminoglycoside, quinolone, lincosamide, macrolide, tetracycline, rifamycin, chloramphenicol and oxazolidinone. Among the isolated strains, 19 (18,88%) presented profile of multirresistance by presenting resistance to more than three classes of antibiotics. All the samples were sensible to gentamicin (100%). Penicillin G was the antibiotic with the least effective action against the tested strains (47,5%). An epidemiologic quiz was applied and it was found that factors connected to the cleanup were the ones to contribute the most to order the properties. Diagnosing and quantifying the agents and factors which lead to the occurrence of mastitis allow the implantation and execution of prophylactic measures in a more effective way. Additionally, it is important to consider the potential of transmission of the genes of resistance among the pathogens, since the appearance of multirresistant strains represents a risk to both public health and veterinary health.