Aplicação de suabe oral para o diagnóstico molecular da leishmaniose em gatos

Leishmania spp. são protozoários parasitas causadores de doenças conhecidas como leishmanioses, estas as quais costumam consistir em grande problema à Saúde Pública em vários países, incluindo o Brasil. A forma clínica mais grave da doença, conhecida como leishmaniose visceral, é causada pelo agente etiológico Leishmania infantum, transmitida por vetores do gênero Lutzomyia, sendo o cão o principal reservatório no ambiente urbano. É demonstrado que os gatos também podem ser infectados por este parasita, persistindo a infecção geralmente sem a ocorrência de manifestações clínicas, o que vem a dificultar a obtenção de dados epidemiológicos acurados. Métodos moleculares utilizados para diagnosticar a leishmaniose felina são ainda muito diversos e difíceis de serem comparados. A detecção através de amostras de suabe conjuntival tem retornado bons resultados, com a vantagem do método não ser invasivo, embora especialmente difícil de ser realizado em gatos devido ao seu comportamento intrínseco, o que torna de interesse a hipótese de se realizar procedimento diagnóstico molecular a partir de amostras de suabe oral - este já realizado com sucesso em cães. Foram coletadas amostras de suabe oral, suabe conjuntival e sangue em 100 gatos procedentes de abrigos localizados em Ilha Solteira (município pertencente ao estado de São Paulo), região endêmica para a leishmaniose visceral, para avaliar a Reação em Cadeia da Polimerase realizada a partir de amostras de suabe oral como método diagnóstico da leishmaniose felina, estabelecendo comparações com outros métodos moleculares e sorológicos, utilizados para o diagnóstico nesta espécie.

Leishmania spp. are protozoan parasites that are causative agents of diseases known as leishmaniasis, which usually constitute in a major public health problem in several countries, including Brazil. The most serious clinical form of the disease, known as visceral leishmaniasis, is caused by the etiological agent Leishmania infantum and transmitted by vectors of the genus Lutzomyia, being the dog deemed as its main reservoir in the urban environment. It has been shown that cats can also be infected by this parasite, developing a persisting infection generally without occurrence of clinical signs, which renders difficult to obtain accurate epidemiological data. Molecular methods currently used to diagnose feline leishmaniasis are still very diverse between them and thus difficult to compare. Detection using conjunctival swab samples has shown good results, and theres an advantage because it is a non-invasive method although, sometimes, especially difficult to be performed in cats due to its intrinsic behavior, which favors the hypothesis of performing a molecular diagnostic procedure in cats from oral swab samples - which has already been successfully performed on dogs. Samples of oral swab, conjunctival swab and blood was collected from 100 cats living in shelters located in Ilha Solteira (municipality in the state of São Paulo), an endemic region for visceral leishmaniasis, to evaluate if Polymerase Chain Reaction performed from oral swab samples can be used as a diagnostic method for feline leishmaniasis, as well as establishing comparisons with other molecular and serological methods used for diagnosis in this species.

Identificação da microbiota da cavidade oral de equinos / Oral cavity microbiota identification of horses / Identificación de la microbiota de la cavidad oral de equinos

Este trabalho descreve a recuperação e a identificação de bactérias da microbiota oral de equinos sadios provenientes da Sociedade Rural de Umuarama-PR e de centros de treinamento de Quarto de Milha da região. Foram coletados espécimes orais de 48 animais adultos de ambos os sexos, utilizando suabe estéril que foram semeados em ágar base acrescido de 5-8% de sangue ovino desfibrinado. As cepas isoladas foram identificadas segundo as suas características morfocoloniais, morfotinturiais e testes bioquímicos. Foram isolados a partir desses animais cocos gram-positivos (Staphylococcus spp., Streptococcus spp. E Nocardia spp.) e gram-negativos (Moraxella spp.) além de bastonetes gram-negativos, residentes das regiões periodontal e terço médio da lingua. Os principais isolados bacterianos das amostras periodontais foram Staphylococcus spp. Em 81,25% (39/48) das amostras, seguido por Streptococcus spp. Em 41,67% (20/48) das amostras. Os achados derivados das amostras da lingua mostraram maior colonização de Streptococcus spp. Comparada aos Staphylococcus spp. Os resultados obtidos representaram contribuição original para o conhecimento da microbiota oral de equinos, tendo significado para a microbiologia comparada.

This paper describes the recovery and identification of bacteria from the oral microbiota of healthy horses from the Rural Society (Sociedade Rural) in Umuarama-PR and Quarter Horse training centers in the region. Oral specimens were collected from 48 adult animals of both sexes, using sterile swabs plated on blood agar. Isolates were identified according to their morpho-colonial, staining and biochemical test characteristics. Gram-positive (Staphylococcus spp. and Streptococcus spp., Nocardia spp.) and gram-negative (Moraxella spp.) cocci, as well as periodontal rod cells were isolated from the periodontal and middle third portion of the tongue. The main bacterial isolates from periodontal samples were Staphylococcus spp., found in 81.25% (39/48) samples, followed by Streptococcus spp. in 41.67% (20/48) samples. The findings derived from tongue samples presented higher Streptococcus spp colonization. Compared to Staphylococcus spp., the results represent an original contribution to the knowledge of horse oral microbiota, with significance to compared microbiology.

Esta investigación describe la recuperación y la identificación de bacterias de la microbiota oral en equinos sanos provenientes de la Sociedad Rural de Umuarama-PR y de centros de entrenamiento de Cuarto de Milla de la región. Se ha recolectado muestras orales de 48 animales adultos de ambos sexos, utilizando hisopos estériles que fueron sembrados en ágar base añadido de 5-8% de sangre ovino desfibrinado. Las cepas aisladas fueron identificadas segundo sus características morfo coloniales, morfo tintúrales y pruebas bioquímicas. Se aislaron a partir de esos animales cocos gran positivos (Staphylococcus spp., Streptococcus spp. Y Nocardia spp.) y gran negativos (Moraxella spp.), además de bastones gran negativos, residentes de las regiones periodontal y medio de la lengua. Los principales aislados bacterianos de las muestras periodontales fueron Staphylococcus spp. En 81,25% (39/48) de las muestras, seguido por Streptococcus spp. En 41,67% (20/48) de las muestras. Los hallazgos derivados de las muestras de la lengua presentaron mayor colonización de Streptococcus spp. Comparada a los Streptococcus spp. Los resultados obtenidos representan una contribución original al conocimiento de la microbiota oral de equinos, que tienen significado para la microbiología comparada.

Identificação da microbiota da cavidade oral de equinos / Oral cavity microbiota identification of horses / Identificación de la microbiota de la cavidad oral de equinos

Este trabalho descreve a recuperação e a identificação de bactérias da microbiota oral de equinos sadios provenientes da Sociedade Rural de Umuarama-PR e de centros de treinamento de Quarto de Milha da região. Foram coletados espécimes orais de 48 animais adultos de ambos os sexos, utilizando suabe estéril que foram semeados em ágar base acrescido de 5-8% de sangue ovino desfibrinado. As cepas isoladas foram identificadas segundo as suas características morfocoloniais, morfotinturiais e testes bioquímicos. Foram isolados a partir desses animais cocos gram-positivos (Staphylococcus spp., Streptococcus spp. E Nocardia spp.) e gram-negativos (Moraxella spp.) além de bastonetes gram-negativos, residentes das regiões periodontal e terço médio da lingua. Os principais isolados bacterianos das amostras periodontais foram Staphylococcus spp. Em 81,25% (39/48) das amostras, seguido por Streptococcus spp. Em 41,67% (20/48) das amostras. Os achados derivados das amostras da lingua mostraram maior colonização de Streptococcus spp. Comparada aos Staphylococcus spp. Os resultados obtidos representaram contribuição original para o conhecimento da microbiota oral de equinos, tendo significado para a microbiologia comparada.(AU)

This paper describes the recovery and identification of bacteria from the oral microbiota of healthy horses from the Rural Society (Sociedade Rural) in Umuarama-PR and Quarter Horse training centers in the region. Oral specimens were collected from 48 adult animals of both sexes, using sterile swabs plated on blood agar. Isolates were identified according to their morpho-colonial, staining and biochemical test characteristics. Gram-positive (Staphylococcus spp. and Streptococcus spp., Nocardia spp.) and gram-negative (Moraxella spp.) cocci, as well as periodontal rod cells were isolated from the periodontal and middle third portion of the tongue. The main bacterial isolates from periodontal samples were Staphylococcus spp., found in 81.25% (39/48) samples, followed by Streptococcus spp. in 41.67% (20/48) samples. The findings derived from tongue samples presented higher Streptococcus spp colonization. Compared to Staphylococcus spp., the results represent an original contribution to the knowledge of horse oral microbiota, with significance to compared microbiology.(AU)

Esta investigación describe la recuperación y la identificación de bacterias de la microbiota oral en equinos sanos provenientes de la Sociedad Rural de Umuarama-PR y de centros de entrenamiento de Cuarto de Milla de la región. Se ha recolectado muestras orales de 48 animales adultos de ambos sexos, utilizando hisopos estériles que fueron sembrados en ágar base añadido de 5-8% de sangre ovino desfibrinado. Las cepas aisladas fueron identificadas segundo sus características morfo coloniales, morfo tintúrales y pruebas bioquímicas. Se aislaron a partir de esos animales cocos gran positivos (Staphylococcus spp., Streptococcus spp. Y Nocardia spp.) y gran negativos (Moraxella spp.), además de bastones gran negativos, residentes de las regiones periodontal y medio de la lengua. Los principales aislados bacterianos de las muestras periodontales fueron Staphylococcus spp. En 81,25% (39/48) de las muestras, seguido por Streptococcus spp. En 41,67% (20/48) de las muestras. Los hallazgos derivados de las muestras de la lengua presentaron mayor colonización de Streptococcus spp. Comparada a los Streptococcus spp. Los resultados obtenidos representan una contribución original al conocimiento de la microbiota oral de equinos, que tienen significado para la microbiología comparada. (AU)

MÉTODOS ALTERNATIVOS DE MUDA FORÇADA E SUA INFLUÊNCIA NO DESENVOLVIMENTO DA SALMONELLA ENTERITIDIS EM CODORNAS JAPONESAS (Coturnix cortunix japonica)

A muda forçada é uma técnica de manejo utilizada para promover, intencionalmente, a pausa produtiva de ovos, seguida de um rejuvenescimento do aparelho reprodutor de aves de postura comercial, com o intuito de prolongar a vida útil da ave e reduzir custos com a aquisição de novos animais. O método comumente utilizado é o jejum alimentar, no entanto este manejo causa alterações imunológicas na ave o que pode torná-la susceptível a várias infecções. Portanto, a utilização de métodos alternativos, como a oferta de farelo de trigo e óxido de zinco, evitam o estresse do jejum alimentar e, consequentemente, a depressão do sistema imunológico evitando doenças como a Salmonelose. O objetivo do presente estudo foi de verificar a interferência que os variados métodos alternativos de muda forçada tem sobre a excreção da Salmonella Enteritidis em codornas. Foram utilizadas 192 codornas japonesas com 60 semanas de idade distribuídas em oito tratamentos e seis repetições, seguindo: grupos inoculados por via oral com 2x109 unidade formadora de colônia (UFC) de Salmonella Enteritidis submetidos a muda forçada pelo método de jejum alimentar, farelo de trigo, óxido de zinco e controle, assim como grupos de aves não incoculadas utilizando os mesmos métodos de muda forçada citados. Foram coletadas amostras de fezes e esfregaço cloacal nos dias 1, 4, 7 e 14 pós inoculação e os ovos durante os primeiros seis dias da semana na qual se inicia o experimento e duas semanas após a muda. Todas as amostras foram submetidas a análises bacteriológicas para recuperação de Salmonella Enteritidis em esfregaços cloacais, fezes e ovos. A Salmonella Enteritidis foi isolada das amostras de suabe cloacal e de amostras de fezes das codornas inoculadas submetidas aos tratamentos: farelo de trigo, óxido de zinco, controle e jejum alimentar, variando o isolamento entre 16,6 a 100% de positividade. Os ovos recolhidos foram negativos para Salmonella Enteritidis na análise microbiológica. Em conclusão, o estudo reafirma que o jejum reduz a imunidade das codornas japonesas e que, devido à elevada concentração do inóculo bacteriano ingerido, provocou uma excreção contínua de Salmonella Enteritidis, independentemente do método de muda forçada utilizado.

Forced moulting is a management technique used to intentionally promote the production pause of eggs, followed by a rejuvenation of the reproductive apparatus of commercially-laying birds, in order to prolong the bird's life expectancy and reduce costs with the acquisition of new animals. The commonly used method is feeding fasting, however this management causes immunological changes in the bird which may make it susceptible to various infections. Therefore, the use of alternative methods, such as the supply of wheat bran and zinc oxide, avoids the stress of fasting and consequently the depression of the immune system avoiding diseases such as Salmonellosis. The objective of the present study was to verify the interference that the various alternative methods of forced moulting have on the excretion of Salmonella Enteritidis in quails. A total of 192 60-week-old Japanese quails were used in eight treatments and six repetitions following: groups inoculated orally with 2x109 colony forming unit (CFU) of Salmonella Enteritidis submitted to forced moulting using the food fasting method, wheat bran, zinc oxide and control, as well as groups of birds not incoculated using the same forced moulting methods mentioned. Faeces samples and cloacal swabs were collected on days 1, 4, 7 and 14 after inoculation and eggs were collected during the first six days of the week in which the experiment starts and two weeks after the moulting. All samples were subjected to bacteriological analyses for recovery of Salmonella Enteritidis on cloacal swabs, faeces and eggs. Salmonella Enteritidis was isolated from cloacal swabs and faeces samples from the inoculated quails submitted to the treatments: wheat bran, zinc oxide, control and food fasting, the isolation ranging from 16.6 to 100% positivity. The eggs collected were negative for Salmonella Enteritidis in microbiological analysis. In conclusion, the study reaffirms that fasting reduces the immunity of Japanese quails and that, due to the high concentration of the ingested bacterial inoculum, it caused a continuous excretion of Salmonella Enteritidis, regardless of the forced moulting method used.

DIAGNÓSTICO MOLECULAR DA LEUCEMIA VIRAL FELINA POR MEIO DA UTILIZAÇÃO DE SUABE ORAL, CONJUNTIVAL E RETAL

A infecção pelo Feline leukemia virus (FeLV), agente causador da Leucemia Viral Felina, pode levar a neoplasias fatais, doenças degenerativas do sistema hematopoiético e imunossupressão. O contato próximo favorece a transmissão do FeLV entre gatos que compartilham o mesmo espaço e instalações. Para a execução de testes diagnósticos, atualmente, o sangue e seus derivados são as principais amostras biológicas utilizadas. A coleta de sangue é geralmente por punção venosa, exigindo contenção física ou química do animal. Tornar o diagnóstico das retroviroses felinas mais prático e fácil é crucial para reduzir os impactos negativos na saúde animal e aumentar o número de animais testados. O objetivo deste estudo foi avaliar o uso de amostras de swab de mucosa oral, conjuntival e retal, no diagnóstico molecular da infecção pelo FeLV. Além do sangue total utilizado como amostra de referência, foram coletados de cada animal dois swab orais, dois conjuntivais e um retal. Todas as amostras séricas foram submetidas a testes imunoenzimáticos e à reação em cadeia da polimerase (PCR) para a amplificação do fragmento do gene gag do DNA proviral. A mesma PCR também foi realizada em todas as amostras obtidas por swab. Foram selecionados para o experimento 145 animais de forma aleatória. A ocorrência para o FeLV na população estudada foi de 49,66% por diagnóstico molecular em capa leucocitária, e 22,76% por identificação da antigenemia (p27 circulante). A acurácia para cada metodologia avaliada foi igual a 91,72% para a PCR de amostras obtidas por swab oral; 91,23% para as de swab conjuntival e de 85,50% para as obtidas por swab retal. A sensibilidade e a especificidade de cada PCR avaliada em relação à PCR de referência foram, respectivamente, 86,11% e 97,26% para a PCR de swab oral; 90% e 92,59% para a PCR de swab conjuntival; e 74,24% e 95,77% para a PCR de swab retal. Os valores do coeficiente Kappa para PCR de Swab Oral, PCR de Swab Conjuntival e PCR de Swab Retal foram, respectivamente, 0,89; 0,89 e 0,82. A obtenção de amostras por meio de swab de mucosas oral, conjuntival e retal, para o diagnóstico molecular da infecção pelo FeLV, constitui uma excelente alternativa à venopunção, especialmente em locais onde a presença de profissionais treinados e habilitados é limitada ou inexistente, ou em abrigos onde a população de felinos é grande. Além disso, trata-se de uma metodologia mais rápida, menos laboriosa, de menor custo e melhor aceitação pelo animal. Outro achado relevante desse estudo foi a detecção do DNA proviral do FeLV em células das mucosas oral e conjuntival, possibilitando o diagnóstico de animais em fase regressiva da infecção.

Feline leukemia virus (FeLV) infection can lead to fatal neoplasms, degenerative diseases of the hematopoietic system and immunosuppression. FeLV transmission is favored by close contact among cats that share the same space and facilities. To perform diagnostic tests, blood and its derivatives are the main specimens used currently. Blood collection, usually by venipuncture, requires physical or chemicalrestraint. Making diagnoses of feline retroviruses more practical and easier is crucial to reducing negative impacts on the cats health and will allow for an increased number of animals to be tested. The aim of this study was to evaluate the use of oral, conjunctival and rectal swab samples for the molecular diagnosis of FeLV infection. In addition to the whole blood used as reference sample, two oral swab, two conjunctival swab and one rectal swab were collected from each animal. All serum samples were submitted to immunochromatographic and PCR tests for amplification of the proviral DNA gag gene fragment. The same PCR was also performed on all swab samples. A total of 145 random animals were selected for the experiment. The occurrence of FeLV in the studied population was 49.66% by molecular diagnosis in peripheral blood mononuclear cell samples and 22.76% through the identification of the antigenemia (p27). The accuracy for each methodology evaluated was 91.72% for the PCR of samples obtained by oral swabbing; 91.23% for those from conjunctival swab and 85.50% for those obtained by rectal swabbing. The sensitivity and specificity of each PCR evaluated in relation to the reference PCR were, respectively, 86.11% and 97.26% for the oral swab PCR; 90% and 92.59% for conjunctival swab PCR; and 74.24% and 95.77% for rectal swab PCR. Kappa values for oral swab PCR, conjunctival swab PCR and rectal swab PCR were 0.89, 0.89 and 0.82, respectively. Sampling using oral, conjunctival and rectal mucosal 11 swabs for the molecular diagnosis of FeLV infection is an excellent alternative to the venipuncture, especially in places where the presence of trained and qualified professionals is limited or not available, or even for shelters with a large feline population. In addition, the methodology is faster, less laborious,less expensive and well accepted by the animal. Another relevant finding of this study was the detection of FeLV proviral DNA in oral and conjunctival mucosal cells, allowing the diagnosis of animals in the regressive phase of infection.

Identificação da microbiota da cavidade oral de equinos / Oral cavity microbiota identification of horses / Identificación de la microbiota de la cavidad oral de equinos

Este trabalho descreve a recuperação e a identificação de bactérias da microbiota oral de equinos sadios provenientes da Sociedade Rural de Umuarama-PR e de centros de treinamento de Quarto de Milha da região. Foram coletados espécimes orais de 48 animais adultos de ambos os sexos, utilizando suabe estéril que foram semeados em ágar base acrescido de 5-8% de sangue ovino desfibrinado. As cepas isoladas foram identificadas segundo as suas características morfocoloniais, morfotinturiais e testes bioquímicos. Foram isolados a partir desses animais cocos gram-positivos (Staphylococcus spp., Streptococcus spp. E Nocardia spp.) e gram-negativos (Moraxella spp.) além de bastonetes gram-negativos, residentes das regiões periodontal e terço médio da lingua. Os principais isolados bacterianos das amostras periodontais foram Staphylococcus spp. Em 81,25% (39/48) das amostras, seguido por Streptococcus spp. Em 41,67% (20/48) das amostras. Os achados derivados das amostras da lingua mostraram maior colonização de Streptococcus spp. Comparada aos Staphylococcus spp. Os resultados obtidos representaram contribuição original para o conhecimento da microbiota oral de equinos, tendo significado para a microbiologia comparada.(AU)

This paper describes the recovery and identification of bacteria from the oral microbiota of healthy horses from the Rural Society (Sociedade Rural) in Umuarama-PR and Quarter Horse training centers in the region. Oral specimens were collected from 48 adult animals of both sexes, using sterile swabs plated on blood agar. Isolates were identified according to their morpho-colonial, staining and biochemical test characteristics. Gram-positive (Staphylococcus spp. and Streptococcus spp., Nocardia spp.) and gram-negative (Moraxella spp.) cocci, as well as periodontal rod cells were isolated from the periodontal and middle third portion of the tongue. The main bacterial isolates from periodontal samples were Staphylococcus spp., found in 81.25% (39/48) samples, followed by Streptococcus spp. in 41.67% (20/48) samples. The findings derived from tongue samples presented higher Streptococcus spp colonization. Compared to Staphylococcus spp., the results represent an original contribution to the knowledge of horse oral microbiota, with significance to compared microbiology. KEYWORDS: Horses. Microbiota. Oral. Staphylococcus spp. Streptococcus spp.(AU)

Esta investigación describe la recuperación y la identificación de bacterias de la microbiota oral en equinos sanos provenientes de la Sociedad Rural de Umuarama-PR y de centros de entrenamiento de Cuarto de Milla de la región. Se ha recolectado muestras orales de 48 animales adultos de ambos sexos, utilizando hisopos estériles que fueron sembrados en ágar base añadido de 5-8% de sangre ovino desfibrinado. Las cepas aisladas fueron identificadas segundo sus características morfo coloniales, morfo tintúrales y pruebas bioquímicas. Se aislaron a partir de esos animales cocos gran positivos (Staphylococcus spp., Streptococcus spp. Y Nocardia spp.) y gran negativos (Moraxella spp.), además de bastones gran negativos, residentes de las regiones periodontal y medio de la lengua. Los principales aislados bacterianos de las muestras periodontales fueron Staphylococcus spp. En 81,25% (39/48) de las muestras, seguido por Streptococcus spp. En 41,67% (20/48) de las muestras. Los hallazgos derivados de las muestras de la lengua presentaron mayor colonización de Streptococcus spp. Comparada a los Streptococcus spp. Los resultados obtenidos representan una contribución original al conocimiento de la microbiota oral de equinos, que tienen significado para la microbiología comparada.(AU)

Estudo da esporotricose em gatos domésticos no município de Guarulhos, estado de São Paulo

A esporotricose é uma micose zoonótica que afeta centros urbanos. O gato tem papel chave na transmissão fúngica desta doença. Nos últimos 3 anos, a cidade de Guarulhos já registrou mais de 1500 casos em gatos e assumiu o status de notificação compulsória. O objetivo do presente trabalho foi analisar a epidemiologia das cepas do complexo Sporothrix schenckii em relação aos aspectos fenotípicos, moleculares e de suscetibilidade aos fármacos das amostras isoladas de gatos no município de Guarulhos (São Paulo). O estudo foi dividido em dois experimentos, sendo o primeiro composto por 119 gatos divididos em três grupos: Caso, Contactante e Não-Contactante. As amostras foram obtidas por meio de suabe nas lesões dos animais do grupo Caso e dos demais grupos de suabe oral e submetidas à cultura micológica; em paralelo, amostras foram obtidas para processamento de citologia em meio líquido por emblocado celular (CB). As amostras isoladas foram submetidas a PCR para identificação da espécie, bem como aos testes de sensibilidade aos fármacos microdiluição e E-Test. Durante as colheitas 25 gatos foram eutanasiados e as amostras de pele e órgãos submetidos à análise histopatológica e imunohistoquímica. O segundo estudo foi composto por 135 gatos divididos em dois grupos: Sintomático e Assintomático. As amostras obtidas foram processadas para cultura micológica e PCR, só que desta vez, a PCR foi realizada diretamente da lesão e não após o isolamento fúngico. Neste estudo, foi obtido 92,31% de positividade dentre os gatos suspeitos com esporotricose em cultivo micológico. No projeto, 100% das amostras foram identificadas como S. brasiliensis. A técnica proposta de citologia em meio líquido por emblocado celular (CB) apresentou 93% de positividade para Sporothrix spp, com sensibilidade de 97,50% entre o isolamento fúngico e 94,87% para a imunocitoquímica. Concluindo deste modo, que o CB pode ser uma boa opção para diagnóstico em saúde pública. As dosagens de itraconazol utilizadas in vivo para os gatos diagnosticados com a esporotricose são maiores do que a concentração mínima inibitória in vitro. As amostras submetidas à histopatologia e imunhistoquímica demonstraram presença do Sporothrix spp em pele, linfonodo mesentérico, baço, fígado, pulmão e coração. Não foi observado elemento fúngico no rim. Não foi estabelecida relação entre intensidade de infiltrado inflamatório e intensidade de Sporothrix na pele. Conclui-se que a PCR realizada de amostra diretamente de lesão pode ser utilizada em áreas cuja frequência da doença é alta, visto que a sensibilidade diagnóstica foi de 90,20%, contudo a especificidade foi de 42,11%. Sendo assim, em áreas de baixa frequência da esporotricose, recomenda-se o emprego do padrão ouro que é a cultura micológica para pesquisa de Sporothrix spp e com a realização da PCR para as amostras cuja isolamento for obtido. As variáveis de tipo de lesão e início do tratamento interferem no resultado diagnóstico de PCR direto da lesão.

Sporotrichosis is a zoonotic mycosis that affects urban centers. The cat plays key role in the fungal transmission of this disease. In the last 3 years, the city of Guarulhos has registered more than 1500 cases in cats and this situation received a status of compulsory notification. The objective of the present work was to analyze the epidemiology from the strains of Sporothrix schenckii complex in relation to the phenotypic, molecular and drug susceptibility aspects of isolated samples collected in cats from Guarulhos city (São Paulo). The study was divided in two experiments: the first one consisting of 119 cats divided into three groups: Case, Contacting and Non-Contacting. Samples were obtained by swab lesions from the cats of Case group and from the other oral swab groups and submitted to mycological culture; at the same time, samples were obtained for cytology processing in liquid medium by cell block (CB). The isolated samples were submitted to PCR for species identification, as well the drug sensibility tests - microdilution and E-Test. During the process, 25 cats were euthanized and skin and organ samples were submitted to histopathological and immunohistochemical analysis. The second study was made with 135 cats divided into two groups: Symptomatic and Asymptomatic. The obtained samples were processed for mycological culture and PCR, but this time PCR was performed directly from the lesion and not after fungal isolation. This study obtained 92.31% of positivity among the cats with suspected of sporotrichosis in mycological culture. In this project, 100% of the samples were identified as S. brasiliensis. The proposed technique of cytology in liquid medium by cell block (CB) presented 93% of positivity for Sporothrix spp, with sensitivity of 97.50% between fungal isolation and 94.87% for immunocytochemistry. In conclusion, CB may be a good option for public health diagnosis. The dosages of itraconazole used in vivo for cats diagnosed with sporotrichosis are greater than the minimum inhibitory concentration in vitro. Samples submitted to histopathology and immunhistochemistry pointed the presence of Sporothrix spp on the skin, mesenteric lymph node, spleen, liver, lung and heart. No fungal element was observed in the kidney. There was no relationship between inflammatory infiltrate intensity and Sporothrix intensity in the skin. It is concluded that the PCR performed directly from the lesion can be used in areas with a high disease frequency, since the diagnostic sensitivity was 90.20%, but the specificity was 42.11%. Thus, in areas of low frequency of sporotrichosis, it is recommended to use the gold standard, which is the mycological culture for Sporothrix spp research, and to perform the PCR for samples whose isolation is obtained. The variables of lesions type and beginning of the treatment interfere in the diagnostic result of direct PCR of the lesion.

DETECÇÃO DE FIV E FeLV EM FELÍDEOS DOMÉSTICOS E SILVESTRES NATURALMENTE INFECTADOS E AVALIAÇÃO DA METODOLOGIA DE DIAGNÓSTICO

A imunodeficiência felina (FIV) e a leucemia felina (FeLV) são duas importantes retroviroses que 17 afetam felídeos mundialmente. Este estudo teve como objetivo avaliar os testes diagnósticos em 18 diferentes amostras e investigar a ocorrência de FIV e FeLV na Baixada Cuiabana. Foram analisados 19 164 gatos e compararam-se as técnicas de sorologia e PCR em diferentes amostras (sangue e saliva) 20 para detecção de DNA proviral. Considerando a PCR e a sorologia nas amostras diferentes biológicas 21 (soro, sangue e saliva), observou-se em pelo menos um teste 21 (12,80%) animais positivos para FIV e 22 22 (13,41%) para FeLV. Somente três animais (1,82%) foram positivos tanto para FIV quanto para 23 FeLV. A ocorrência para FIV foi de 11,58% (19/164) na sorologia, na PCR sangue 8,53% (14/164), e 24 na PCR de suabe oral 6,70% (11/164). FeLV apresentou diagnóstico positivo em 3,65% (6/164), 25 7,31% (12/164) e 7,92% (13/164) das amostras na sorologia, na PCR de sangue e na PCR de suabe 26 oral, respectivamente. Os resultados da PCR em relação as diferentes amostras apresentou variação 27 sendo o FIV mais detectado em amostras de sangue (8,53%) e FeLV mais na saliva (7,92%). O perfil 28 epidemiológico da infecção mostrou que as duas retroviroses FIV e FeLV infectam em iguais 29 condições os animais em relação à raça, idade, esterilização e acesso à rua, havendo, contudo, uma 30 associação significativa entre positividade para FIV na sorologia e PCR com gênero, e entre 31 positividade para FeLV na PCR e convívio com outros animais. Os resultados sugerem que os testes 32 diagnósticos para FIV e FeLV devem ser realizados de preferência em associação entre eles, e a PCR 33 de suabe oral, neste caso pode ser considerada uma importante ferramenta no diagnóstico.

The feline immunodeficiency virus (FIV) and feline leukemia (FeLV) are two important retroviruses 2 affecting felids worldwide. This study aimed to evaluate the diagnostic tests on different samples and 3 investigate the occurrence of FIV and FeLV in the Baixada Cuiabana. The serology and PCR 4 techniques were analyzed and compared 164 cats in different samples (blood and saliva) for proviral 5 DNA detection. Whereas PCR and serology in different biological samples (serum, blood and saliva), 6 there was a test of at least 21 (12,80%) animals positive for FIV and 22 (13,41%) for FeLV. Only 7 three animals (1,82%) were positive for both FIV and FeLV. The occurrence for FIV was 11,58% 8 (19/164) in serology, PCR Blood 8,53% (14/164), and in PCR oral swab 6,70% (11/164). FeLV 9 positive diagnosis presented in 3,65% (6/164), 7,31% (12/164) and 7,92% (13/164) of samples in 10 serology, PCR in blood and oral swab PCR, respectively. The PCR results regarding the different 11 samples showed more variation and FIV detected in blood samples (8,53%) and FeLV more saliva 12 (7,92%). The epidemiological profile of infection showed that the two retroviruses FIV and FeLV 13 infected in equal conditions the animals in relation to race, age, sterilization and access to the street, 14 there is, however, a significant association between positive for FIV in serology and PCR with gender, 15 and between positive for FeLV PCR and socializing with other animals. The results suggest that a 16 diagnostic test for FIV and FeLV should be carried out preferably in combination between them, and 17 PCR oral swab, this case can be considered an important tool in diagnosis.

Transmissão de vaccínia vírus pelo leite em modelo murino, detecção e viabilidade de poxivírus no queijo e leite

A vaccínia bovina (VB) é uma zoonose causada pelo Vaccinia virus (VACV) que afeta principalmente vacas leiteiras e humanos. Estudos prévios têm detectado partículas virais viáveis de VACV em amostras de leite de vacas natural e experimentalmente infectadas. Porém, ainda não se sabe se o leite contaminado pode transmitir VACV após o consumo. Por outro lado, há um estudo que mostra que humanos, inclusive crianças, que vivem em áreas endêmicas de VB, mas que nunca tiveram contato com vacas doentes, apresentaram anticorpos anti-OPXV, sugerindo que o VACV pode ser transmitido por outras vias. Levando em consideração o previamente exposto, esta tese teve como objetivo estudar a transmissão de VACV pelo leite em modelo murino e a detecção e viabilidade de poxvirus no queijo e leite. No capítulo 1, 30 camundongos receberam 100 µl de leite, por via oral, contendo 106 UFP de VACV-GP2. Amostras de suabe oral (SO), fezes, tecidos e sangue foram coletadas e analisadas. Nenhuma alteração clínica foi observada nos camundongos. DNA viral foi detectado, de forma intermitente, nas amostras de SO e de tecidos a partir do 2º d.p.i., enquanto em amostras de sangue e fezes a partir do 5º d.p.i. A detecção ocorreu até o 10ºd.p.i. em SOs e, nas demais amostras, até o 30º d.p.i. Em todos os tecidos dos animais infectados, exceto coração, tonsila, língua, estômago and duodeno, foram observados imunomarcação intracitoplasmática na técnica de IHQ em todos os tempos analisados. Anticorpos neutralizantes (AN) foram detectados no 20º e no 30º d.p.i. em 50% dos camundongos infectados. No capítulo 2, 12 L de leite foram contaminados com 105 UFP/ml de VACV-GP2 e seis queijos foram produzidos. Os queijos foram submetidos ao processo de maturação durante 1, 7, 14, 21, 45 e 60 dias a 25ºC. As amostras de queijo foram quantificadas na qPCR e tituladas em células VERO. A quantificação e a titulação viral apresentaram redução no decorrer do tempo de maturação, porém, não apresentaram diferença estatística. O 3º capítulo refere-se à detecção de VACV em amostras de queijos de campo provenientes de propriedades com e sem surto de VB. Cinquenta e nove queijos frescos e maturados foram coletados e analisados, sendo que dez queijos foram produzidos em propriedades com casos de VB e 49, oriundos de fazendas sem histórico da doença. A técnica de PCR-nested foi utilizada na detecção de DNA viral. As amostras de queijo positivas na PCR-nested foram inoculadas em cultivo celular ou membrana corioalantóide de ovos embrionados (MCA) de galinha. A confirmação do efeito citopático (ECP) foi realizadapelas técnicas de imunoperoxidase em monocamada celular (IPMC) e qPCR, respectivamente. O DNA viral foi detectado em 43 das 59 amostras testadas. Destas, 11 tinham partículas infecciosas do VACV, sendo quatro amostras oriundas de propriedades sem casos de VB. No último capítulo, seis propriedades leiteiras em Minas Gerais, com surtos de doenças vesiculares acometendo vacas em lactação, bezerros e humanos, foram visitadas. Aleatoriamente, foram selecionadas, por propriedade, dez vacas com lesões e amostras de leite foram coletadas, totalizando 60 amostras de leite. Além disso, duas crostas das lesões nos tetos das vacas também foram coletadas em cada fazenda, totalizando 12 crostas. Das seis propriedades estudadas, em todas foi confirmada a presença de OPXV nas amostras de crosta. A existência de coinfecção de PPV e de OPXV foi confirmada em quatro delas. Como duas propriedades foram negativas para PPV, as amostras de leite, provenientes das vacas destas propriedades, não foram analisadas. Com relação aos leites testados, foi observada amplificação para o gene B2L em 12 amostras das 40 analisadas, indicando a presença de PPV em 30% dos leites testados. Destas 12, oito estavam contaminadas tanto com PPV quanto com OPXV. Os resultados mostraram que leite contaminado pode ser fonte de infecçãode VACV em modelo murino, sendo que os animais apresentaram infecção subclínica com distribuição sistêmica e eliminação pelas fezes e mucosa oral. Além disso, o processo de maturação do queijo reduz o número de partículas virais viáveis, mas não foi capaz de inativar o vírus durante os 60 dias testados. Por outro lado, a detecção de VACV em amostras de queijos Minas artesanais mostrou que o VACV pode circular de forma silenciosa, uma vez que houve detecção em amostras de queijos de propriedades sem surto de VB. Além disso, foi possível detectar coinfecção de PPV e VACV em amostras de leite de propriedades com surto de doenças vesiculares. Desta forma, o consumo de leite e queijos contaminados com VACV pode ser um risco para a saúde pública. Porém, mais estudos são necessários para determinar o possível risco de transmissão do vírus para humanos associado ao consumo de leite e queijos artesanais contaminados com VACV.

Bovine vaccinia (BV) is a zoonotic disease caused by Vaccinia virus (VACV) and affect mainly dairy cows and humans. Previous studies have detect viral viable particles of VACV in milk samples of natural and experimentally infectious cows. But, is unknown if the contaminated milk can transmit VACV after consumption. On the other hand, there is a study that detected neutralizing antibodies (NA) against VACV in humans, including children. These people lived in BV endemic áreas, but they never had contact with sick cows what suggesting that VACV can be transmited by others routes. Thus, it becomes important to study the possible transmission of VACV by milk and detection and viability of the vírus in artisan cheeses. This thesis was divided in four chapters and the aims were to study the transmission of VACV by milk in murine model and detection and viability of poxvirus in artisan cheeses and milk. In the chapter 1, thirty mice were inoculated orally with 100 µl of milk containing 106 PFU of VACV-GP2 (infected group). Oral swab (OS), faeces, blood and tissues samples were collected and analised. The mice showed not clinical signs. Viral DNA was detected, intermittently, in OS from 2nd d.p.i. to 10th d.p.i. while in blood and faeces samples from 5th d.p.i. to 30th d.p.i. At all times, viral DNA was detected in tissues samples, except stomach and duodenum. In immunohistochemistry test was observed intracytoplasmic immunostaining in all tissues, except heart, tonsil, tongue, stomach and duodenum. NA were detected on the 20th and 30th d.p.i. in 50% of mice infected. In the chapter 2, 12 litres of milk were contaminated with 105 PFU/ml of VACV-GP2 and six contaminated cheeses were produced. The cheeses were subjected to the process maturation during 1,7,14,21,45 and 60 days to 25ºC. Real time PCR and titration VERO cells were performed. The viral quantification and titration reduced during the maturation process, but there was not statistical difference. The chapter 3 refers to the detection of VACV in artisan cheeses commercial from properties with and without BV outbreaks. Fifty nine fresh and matured artisan cheeses were collected and analyzed, of which 10 and 49 artisan cheeses were produced in properties with and without BV outbreaks, respectively. PCR-nested technique was perfomed for detection viral DNA. Positive samples were inoculated in VERO cells or chorioallantoic membrane of embryonated chicken eggs and immunoperoxidase in monolayer cell assay (IPMA) and real time PCR were used to confirm the cytopathic effect, respectively. Viral DNA was detected in 43 of 59 samples. These, 11 samples had viral infectious particles, of which four artisan cheeses produced in properties without BV outbreaks. In the last chapter, six dairy properties in Minas Gerais state with outbreaks vesicular diseases in dairy cows, calves and human were visited. Ten dairy cows with lesions in teats were selected, randomly, in each property. Milk and crust samples were collected, totalizing 60 and 12 samples, respectively. These six properties were detected VACV in samples crusts. The coinfection between PPV and VACV was confirm in four properties by convencional PCR for gene B2L amplification. Milk samples were analyzed only the four positive farms for PPV, totalizing 40 samples. PPV DNA was detected in 12 samples, accounting for 30% of samples tested. These 12, eight samples had coinfection between PPV and VACV, accounting for 66,7%. The results showed that contaminated milk can be source of transmission of VACV in murine model and mice infected do not present clinical signs and can eliminate vírus by faeces and oral mucosa. Moreover, the maturation processo is able to reduce viral load in cheeses, but it does not inactived VACV at least 60 days. The detection de VACV in commercial artisan cheeses samples, mainly produced in properties without BV outbreaks, suggest that VACV can circular silently between properties. Futhermore, milk samples can be contaminated with two or more poxvirus species. Thus, the consumption of contaminated milk and artisan cheeses with VACV can be public health risk. But, more studies are necessary to determine the possible risk of vírus transmission to humans associated to consumption of milk and artisan cheeses contaminated with VACV.

INFECÇÃO EXPERIMENTAL PARA AVALIAR A EXCREÇÃO DO VÍRUS DA DIARREIA VIRAL BOVINA POR LEITÕES DESMAMADOS E TRANSMISSÃO VIRAL POR VIA AERÓGENA

O vírus da Diarreia Viral Bovina (BVDV), do gênero Pestivírus, pode ocasionar significativas perdas econômicas em bovinos. No entanto, este vírus também pode infectar os suínos, nos quais a infecção por BVDV poderá ocasionar sinais clínicos, afetar a diagnose da PSC (Peste Suína Clássica), além de torná-los fonte de disseminação viral. Tendo em vista esta problemática, este trabalho teve por objetivo verificar se leitões infectados experimentalmente por BVDV podem passar a excretar o vírus e se a disseminação viral pode ocorrer por via aerógena. Para tanto, foram realizados dois experimentos. Em cada experimento, seis leitões foram distribuídos em duplas em três câmaras de isolamento, ligadas por tubos com fluxo de ar contínuo, nas quais os animais introduzidos corresponderam ao controle, infectado e sentinela, respectivamente. Os animais da segunda câmara foram inoculados pela administração de inóculo de BVDV-1 estirpe Singer citopático por via nasal e oral. Foram avaliadas amostras de sangue, suabe nasal e retal, e amostras de tecidos. No primeiro experimento, ambos os animais inoculados soroconverteram e apresentaram sinais clínicos da infecção, mas somente em um animal foi detectadaexcreção do vírus por via nasal e presença de RNA viral nos rins, baço e fígado, avaliadas por RT-PCR. Neste caso, a transmissão do vírus por via aerógena não foi comprovada, uma vez que o experimento foi finalizado um dia após a excreção viral. Já no segundo experimento, os dois animais infectados soroconverteram com nove dias de diferença e apresentaram sinais clínicos da infecção, mas neste caso, não foi detectada a presença do vírus nas secreções coletadas e nos órgãos. A evolução da infecção mais acentuada nos animais do primeiro experimento, incluindo excreção viral, pode estar relacionada à imunossupressão ocasionada pelas elevadas temperaturas ambientais no período do estudo. No segundo experimento, a soroconversão, e a ausência de estresse térmico, podem ter sido suficientes para impedir a evolução da infecção. Como o curso da infecção depende da virulência da cepa viral e da resposta imune do suíno, no segundo experimento, os animais conseguiram debelar a infecção. Nos dois experimentos os animais controle e sentinela não apresentaram sinais clínicos de infecção, não soroconverteram e nem excretaram o vírus. Assim, concluiu-se que o BVDV-1 pode infectar suínos e provocar sinais clínicos de infecção e que esta pode evoluir para excreção viral e, inclusive,atingir os órgãos dos suínos,contudo a cepa viral utilizada demonstrou ser de baixa patogenicidade. Entretanto com o contato de animais com cepas virais de alta virulência, os suínos podem passar a ser uma fonte de infecção para outros suínos e bovinos. Como a transmissão viral pela via aerógena não foi provada, denota-se a necessidade da continuidade de estudos visando elucidar as vias de transmissão do BVDV entre suínos e entre estes e outros animais.

The virus of BovineViral Diarrhea (BVDV), belonging to the Pestivirus genus, can cause significant economic losses in cattle. However, this virus can also infect swine, in which infection by BVDV may cause clinical signs, affect the diagnosis of CSF (Classical Swine Fever), and makes them a source of viral spread. Based on these issues, this study aimed to verify whether piglets experimentally infected by BVDV can shed the virus and whether viral airborne transmission is possible. For this, two experiments were carried out. In each experiment, six piglets were distributed in pairs in three isolation chambers, connected by continuous air flow tubes, in which the animals introduced corresponded to control, infected and sentinel, respectively. The animals present in the second chamber were inoculated with BVDV-1 strain Singer cytopathic inoculum by nasally and orally administration. Samples of blood, nasal and rectal swabs, and tissues were evaluated. In the first experiment, both inoculated animals seroconverted and showed clinical signs of infection, but only in one animal nasally virus shedding was detected, as well as, viral RNA presence in kidney, spleen and liver, both identified by RT-PCR. In this case, viral airborne transmission has not been confirmed, since the experiment was finalized one day after the viral shedding. In the second experiment, the two infected animals seroconverted with nine days apart and showed clinical signs of infection, but in this case, the presence of the virus in the collected secretions and organs was not detected. The development of stronger infection in the animals from the first experiment, including viral shedding, may be related to immunosuppression caused by high ambient temperatures during the study period. In the second experiment, seroconversion, and the absence of heat stress, may have been sufficient to prevent the spread of the infection. As the course of the infection depends on the virulence of the virus strain and the piglet immune response of the pig, in the second experiment, the animals were able to overcome the infection. In both experiments the control and sentinel animals did not show clinical signs of infection, did not seroconverted and did not shed virus. Thus, it was concluded that BVDV-1 can infect piglets and cause clinical signs of infection that can evolve to viral shedding and even reach the organs of piglets, but the viral strain used shown to be of low pathogenicity.However with the contact of animals with viral strains of high virulence, pigs can become a source of infection for other piglets and cattle. As viral airborne transmission was unproved, it denotes the need for studies continuation in order to elucidate the routes of BVDV transmission between piglets and between them and other animals.

INFLUENZA A: DETECÇÃO DE ANTICORPOS E SUBTIPOS VIRAIS EM SUÍNOS DO BRASIL E ESTADOS UNIDOS

Nos EUA, os subtipos predominantes do vírus da influenza suína (SIAV) são H1N1, H3N2 e H1N2. No Brasil, após a pandemia de 2009, estudos sorológicos demonstraram a circulação do H1N1 pandêmico (H1N1pdm09), H3N2 e H1N2. Os objetivos deste trabalho foram detectar a presença de anticorpos contra influenza A em suínos em granjas no Brasil e Estados Unidos e detectar subtipos do vírus influenza em populações de leitões lactentes e de creche em granjas vacinadas nos Estados Unidos. Trinta granjas de ciclo completo em Minas Gerais, Brasil, foram selecionadas para a avaliação do perfil sorológico contra H1N109 e H3N2. Quatro granjas do mesmo sistema de produção do Meio-Oeste dos Estados Unidos com rebanho reprodutivo vacinado contra influenza foram selecionadas e amostras de soro de 135 leitões com 12-17 dias de idade e das porcas correspondentes a estes leitões foram coletadas. As amostras foram submetidas à detecção de anticorpos contra a nucleoproteína viral e contra os antígenos da vacina utilizada nas granjas. Suabe nasal dos mesmos leitões amostrados na maternidade e de fluido oral do mesmo grupo de leitões após transferência para a creche foram coletadas para a detecção dos subtipos virais. O percentual de leitões e porcas soronegativas variou independente do uso da vacinação. No Brasil, 26.23% e 1.57% dos animais foram soropositivos para H1N1pdm09 e H3N2, respectivamente, sugerindo circulação viral nas granjas estudadas. Os subtipos H1N2 e H3N2 foram detectados em amostras de suabe nasal e fluido oral dos leitões das granjas nos Estados Unidos e vírus H1N2 similar ao da amostra vacinal foi isolado em uma granja com sintomatologia clínica.

In United States, prevalent subtypes of swine influenza A virus (SIAV) include H1N1, H3N2 e H1N2. In Brazil, after H1N1 pandemic outbreak in 2009, serological studies demonstrated circulation of H1N1pdm09, H3N2 and H1N2. The objectives of this study were to detect the presence of antibodies against influenza A in pigs from farms in Brazil and in United States and to detect the presence of influenza virus in nurseling and nursery piglets in vaccinated farms in United States. Thirty farrow-to-finish farms from Minas Gerais state, Brazil, were selected to the serological profile evaluation for H1N1and H3N2 viruses. Four farms from the same production system in Midwest United States with breeding herds vaccinated against influenza were selected and 135 serum samples were collected from 12-17 days old piglets and from all dams corresponding with the piglets. Serum samples were submitted to detection of antibodies against virus nucleoprotein and against virus strains from the vaccine used in the farms. Nasal swabs from the same nurseling piglets and oral fluid from the same group of piglets after transfer to nursery age were collected to detect influenza virus and different subtypes circulating in these ages. Percentage of seronegative piglets and dams varied despite of the vaccination. In Brazil, 26.23% and 1.57% of the animals were seropositive to H1N1pdm09 and H3N2 viruses, respectively, suggesting virus circulation in the farms. H1N2 and H3N2 subtypes were detected in nasal swabs and oral fluid samples from farms in United States. H1N2 virus similar to the vaccine strain virus was isolated from one farm with influenza clinical disease

Atrofia progressiva de retina associada a mutação no gene PRCD - método de detecção genética em cães / Atrofia progesiva de retina asociada con la mutación en el gen PRCD-metodo de detección genética en los caninos / Progressive retinal atrophy caused by a PRCD gene mutation-genetic-based detection method in dogs

Nos cães, a atrofia progressiva de retina é uma doença causada por uma mutação pontual no gene PRCD, que leva à cegueira no seu estágio final. Na Argentina, o diagnóstico é realizado atualmente por meio de exame clínico e de eletrorretinografia. Essa enfermidade apresenta herança recessiva, com portadores assintomáticos capazes de transmitir a mutação para os seus filhotes, o que evidencia a necessidade de um diagnóstico por meio de teste genético, que permita a detecção precoce de portadores e doentes. No presente trabalho, descreve-se uma técnica para a detecção genética da APR-PRCD, por meio de método de sequenciamento, que determina a sucessão de nucleotídeos na região de PRCD onde se localiza a mutação. Foram utilizadas amostras de suabe bucal de dezoito cães (quinze poodles e três cockers) com atrofia de retina diagnosticada por exame clínico. Como controle foram utilizadas amostras de dez animais das mesmas raças, que não possuíam alterações oftalmológicas.

Canine progressive retinal atrophy is a disease caused by a mutation in the PRCD gene, which progresses toward end-stage blindness. In Argentina, the current method of diagnosis is by clinical examination and electroretinography. The fact that this condition is a recessive trait, with unaffected carriers that can transmit the mutation to their offspring, highlights the importance of a genetic screening procedure to detect carriers and affected individuals. This paper shows a PRA-PRCD genetic test based on sequencing the nucleotides around the PRCD mutation, allowing the most accurate diagnosis. Oral swab samples from eighteen dogs (fifteen poodles and three cockers) clinically diagnosed with retinal atrophy were studied. The control group consisted of ten animals of the same breeds without ophthalmic diseases.

La atrofia progresiva de retina en los perros es una enfermedad causada por una mutación puntual en el gen PRCD que conduce en su estadio final a la ceguera. En Argentina el diagnóstico se realiza actualmente a través el examen clínico y la electroretinografía. Presenta herencia recesiva, con portadores asintomáticos capaces de trasmitir la mutación a sus crías, esto torna necesario el desarrollo de un test genético para realizar la detección temprana de portadores y afectados. En el siguiente trabajo se describe una técnica para la detección genética de APR-PRCD a través del método de secuenciación, que determina la sucesión de nucleótidos en la región de PRCD que contiene la mutación. Se emplearon muestras de hisopado bucal provenientes de dieciocho caninos (quince caniches y tres cockers) con atrofia de retina diagnosticada clínicamente y como control se estudiaron muestras de diez animales de las mismas razas sin enfermedad oftalmológica.

Atrofia progressiva de retina associada a mutação no gene PRCD - método de detecção genética em cães / Atrofia progesiva de retina asociada con la mutación en el gen PRCD-metodo de detección genética en los caninos / Progressive retinal atrophy caused by a PRCD gene mutation-genetic-based detection method in dogs

Nos cães, a atrofia progressiva de retina é uma doença causada por uma mutação pontual no gene PRCD, que leva à cegueira no seu estágio final. Na Argentina, o diagnóstico é realizado atualmente por meio de exame clínico e de eletrorretinografia. Essa enfermidade apresenta herança recessiva, com portadores assintomáticos capazes de transmitir a mutação para os seus filhotes, o que evidencia a necessidade de um diagnóstico por meio de teste genético, que permita a detecção precoce de portadores e doentes. No presente trabalho, descreve-se uma técnica para a detecção genética da APR-PRCD, por meio de método de sequenciamento, que determina a sucessão de nucleotídeos na região de PRCD onde se localiza a mutação. Foram utilizadas amostras de suabe bucal de dezoito cães (quinze poodles e três cockers) com atrofia de retina diagnosticada por exame clínico. Como controle foram utilizadas amostras de dez animais das mesmas raças, que não possuíam alterações oftalmológicas.(AU)

Canine progressive retinal atrophy is a disease caused by a mutation in the PRCD gene, which progresses toward end-stage blindness. In Argentina, the current method of diagnosis is by clinical examination and electroretinography. The fact that this condition is a recessive trait, with unaffected carriers that can transmit the mutation to their offspring, highlights the importance of a genetic screening procedure to detect carriers and affected individuals. This paper shows a PRA-PRCD genetic test based on sequencing the nucleotides around the PRCD mutation, allowing the most accurate diagnosis. Oral swab samples from eighteen dogs (fifteen poodles and three cockers) clinically diagnosed with retinal atrophy were studied. The control group consisted of ten animals of the same breeds without ophthalmic diseases.(AU)

La atrofia progresiva de retina en los perros es una enfermedad causada por una mutación puntual en el gen PRCD que conduce en su estadio final a la ceguera. En Argentina el diagnóstico se realiza actualmente a través el examen clínico y la electroretinografía. Presenta herencia recesiva, con portadores asintomáticos capaces de trasmitir la mutación a sus crías, esto torna necesario el desarrollo de un test genético para realizar la detección temprana de portadores y afectados. En el siguiente trabajo se describe una técnica para la detección genética de APR-PRCD a través del método de secuenciación, que determina la sucesión de nucleótidos en la región de PRCD que contiene la mutación. Se emplearon muestras de hisopado bucal provenientes de dieciocho caninos (quince caniches y tres cockers) con atrofia de retina diagnosticada clínicamente y como control se estudiaron muestras de diez animales de las mismas razas sin enfermedad oftalmológica.(AU)

Suscetibilidade in vitro a antibióticos de cepas de Staphylococcus spp e Micrococcus spp isoladas a partir de mucosa oral de macacos-pregos (Cebusapella) mantidos em cativeiro / In vitro susceptibility to antibiotics in Staphylococcus sppe Micrococcus spp strains isolated from oral mucosae ofcaptive capuchin monkeys (Cebus apella)

O estudo foi realizado com 29 macacos-pregos (Cebus apella). Foramcolhidas 50 amostras de suabe da mucosa oral, junto à transiçãomuco-gengival maxilar, com auxílio de zaragatoas esterilizadas,embebidas em caldo Brain Heart Infusion (BHI). Todos os animaisforam submetidos a exame clínico para avaliação periodontal. Asamostras obtidas foram cultivadas em meios apropriados: caldosimples, caldo BHI, e ágar sangue para o isolamento de cocosGram-positivos aeróbios da família Micrococcaceae. Para suaclassificação utilizou-se as provas de catalase, Staphy-test (testerápido para caracterização de Staphylococcus aureus) e sensibilidade àbacitracina. Foram identificados 73,1% de Staphylococcus spp; 15,4%de Staphylococcus aureus; e 11,5% Micrococcus spp. As cepas isoladasforam testadas em relação à sua suscetibilidade a antibióticos pelatécnica de difusão em ágar. Verificou-se para as cepas deStaphylococcus spp, 94,7% de sensibilidade a cefalotina e resistênciade 89,5% à penicilina, 97,4% à oxacilina, 55,3% à tetraciclina, 57,9%à clindamicina e 63,2% à amoxicilina. Os dados obtidosdemonstraram que a cefalotina foi o antibiótico para o qual asamsotras de Staphylococcus spp estudadas apresentaram, in vitro, maiorgrau de sensibilidade.(AU)

Twenty-nine capuchin monkeys (Cebus apella) were used in thisstudy. Fifty samples of oral mucous membrane were collected inarea next to their muco-gingival-maxilar transition using sterilizedswabs soaked in Brain Heart Infusion (BHI). All animals wereclinically examined for periodontal evaluation. The samples werecultivated in appropriate media, namely: simple broth, BHI brothand, blood agar in order to get aerobic Gram positive cocos,from the Micrococcaceae family, isolated. Catalase test, Staphy-test(a quick-test for Staphylococcus aureus characterization) andbactracin-sensitivity test were the tools employed for theirclassification. Data were follows: 73.1% of them were Staphylococcusspp; 15.4% Staphylococcus aureus; and, 11.5% Micrococcus spp. Theisolated were strains tested for their in vitro susceptible toantibiotics by the agar diffusion technique. Concerning theStaphylococcus spp strains, 94.7% were susceptibility to cephalotin;however, 89.5% of them were resistant to penicillin; 97.4% tooxacilin; 55.3% to tetracicline; 57.9% to clindamicine; and 63.2%to amoxiciline. Staphylococcus spp strains studied presented thehighest in vitro sensitivity degree to cephalotin.(AU)