Antiparasitic action of ivermectin, moxidectin and piperazine against Parascaris spp. in foals at southern Rio Grande do Sul, Brazil / Ação antiparasitária de Ivermectina, Moxidectina e Piperazina contra Parascaris spp. em potros no sul do Rio Grande do Sul, Brasil

Parascaris spp. are the most dangerous parasites of foals, and their presence is related to poor growth, weight loss, colics and death after impaction or intestinal perforation.The reduction in the effectiveness of antiparasitics has become a serious threat to animal health and there is little prospect of the emergence of a new anthelmintic for horses. Therefore, the objective was to evaluate the effectiveness of active principles used in the control of ascarids in Creole foals, in a ownership located in the south of Rio Grande do Sul, Brazil. The Gordon and Whitlock technique was used on 12 samples of foal faeces that were collected on the date of administration of the antiparasitic and 14 days afterwards. The evaluation of the effectiveness of the active principles was carried out through the Faecal Egg Count Reduction Test (FECRT). All the anthelmintics used failed against Parascaris spp. and therefore should not be used to control infections caused by these helminths in the population studied. In addition, generalized resistance of ascarids to avermectins was observed. The results also show that other management practices should be implemented on the ownership, in an attempt to reduce infections by these helminths.

Parascaris spp. são os parasitas mais perigosos dos potros e estão relacionados ao baixo crescimento, perda de peso, cólicas e morte após impactação ou perfuração intestinal. A redução da eficácia dos antiparasitários tornou-se uma séria ameaça à saúde animal e há poucas perspectivas de surgimento de um novo anti-helmíntico para equinos. Portanto, objetivou-se avaliar a eficácia dos princípios ativos utilizados no controle de ascarídeos em potros crioulos, em uma propriedade localizada no sul do Rio Grande do Sul, Brasil. Foram utilizados os resultados da técnica de Gordon e Whitlock de 12 amostras de fezes de potros, que foram coletadas na data da administração do antiparasitário e 14 dias após. A avaliação da eficácia dos princípios ativos foi realizada por meio do Teste de Redução de Contagem de Ovos nas Fezes (TRCOF). Todos os anti-helmínticos utilizados falharam contra Parascaris spp. e não devem ser usados para controlar as infecções desses helmintos na população estudada, além disso, há uma resistência generalizada dos ascarídeos contra as avermectinas. Os resultados também mostram que outras práticas de manejo devem ser implementadas na propriedade, na tentativa de reduzir as infecções por esses helmintos.

Anthelmintic resistance of Haemonchus contortus from sheep flocks in Brazil: concordance of in vivo and in vitro (RESISTA-Test©) methods / Resistência anti-helmíntica de Haemonchus contortus em rebanhos ovinos noBrasil: concordância de métodos in vivo e in vitro (RESISTA-Test©)

This study evaluated the resistance status of Haemonchus contortus from sheep flocks in the state of São Paulo, Brazil, through comparison between the fecal egg count reduction test (FECRT) and the larval development test (LDT). For the FECRT, 35 sheep were selected in each of five flocks and divided into groups treated with: benzimidazole, levamisole, ivermectin, monepantel and control. Feces were collected for EPG and fecal cultures. The LDT was performed using thiabendazole (TBZ), levamisole (LEV), ivermectin aglycone (IVM-A) and Zolvix (ZLV). Resistance to all drugs was detected using FECRT in 100% of the flocks, except in relation to ZLV (40% resistant and 20% suspected of resistance). LDT indicated resistance to TBZ and IVM-A in all flocks, to LEV in 80% of flocks and to ZLV in 10%. Total agreement was obtained between the two tests for TBZ and IVM (k = 1.0), while for LEV (k = 0.8) and ZLV (k = 0.9), substantial and almost perfect agreement were obtained, respectively. The concordance between the tests was significant, thus showing that it is possible to use the outcome of the LDT to predict the FECRT, and hence validating the former as a fast diagnostic test for use by sheep farmers in Brazil.(AU)

Este estudo avaliou o status de resistência de Haemonchus contortus em rebanhos ovinos do estado de São Paulo, Brasil, através de um estudo comparativo entre o teste de redução da contagem de ovos nas fezes (TRCOF) e o teste de desenvolvimento larvar (TDL). Para o TRCOF, 35 ovinos foram selecionados em cada um dos cinco rebanhos e divididos em grupos tratados com: benzimidazol, levamisol, ivermectina, monepantel e controle. Fezes foram coletadas para OPG e coproculturas. O TDL foi realizado com tiabendazol-TBZ, levamisol-LEV, ivermectina aglicona-IVM-A e Zolvix-ZLV. Resistência a todos os fármacos foi detectada por meio do TRCOF em 100% dos rebanhos, exceto para ZLV (40% resistentes e 20% suspeitos de resistência). O LDT indicou resistência ao TBZ e IVM-A em todos os rebanhos; em 80% dos rebanhos ao LEV e 10% ao ZLV. Foi obtida concordância total entre os dois testes para TBZ e IVM (k = 1,0), enquanto para LEV (k = 0,8) e ZLV (k = 0,9) foram obtidas concordância substancial e quase perfeita, respectivamente. A concordância entre os testes foi significante, sendo possível usar o resultado do LDT para prever o do TRCOF, validando-se o primeiro como um teste diagnóstico rápido para criadores de ovinos no Brasil.(AU)

Phenotypic and genotypic approaches for detection of anthelmintic resistant sheep gastrointestinal nematodes from Brazilian northeast / Abordagens fenotípica e genotípica para detecção de resistência anti-helmíntica em nematoides gastrintestinais de ovinos no nordeste do Brasil

Abstract The aim of this study was to characterize the anthelmintic resistance (AR) of a sheep gastrointestinal nematode population, named Caucaia, from northeastern Brazil. Phenotypic tests performed were: egg hatch (EHT), larval development (LDT) and fecal egg count reduction (FECRT). Benzimidazoles (BZs) genotypic evaluation was by frequency of single nucleotide polymorphisms (SNPs) F200Y, F167Y and E198A, and for levamisole (LEV), by frequency of resistance alleles of Hco-acr-8 gene. The primers were designed specifically for Haemonchus contortus. Effective concentrations 50% (EC50) for BZs (EHT), and for macrocyclic lactones (MLs) and LEV (LDT) were 1.02 µg/mL, 1.81 ng/mL and 0.04 µg/mL, respectively. Resistance ratios for MLs and LEV were 0.91 and 3.07, respectively. FECRT efficacies of BZs, MLs, monepantel (MPTL) and LEV were 52.4; 87.0; 94.5 and 99.6%, respectively. qPCR for BZs demonstrated resistance allele frequencies of 0%, 26.24% and 69.08% for SNPs E198A, F200Y and F167Y, respectively. For LEV, 54.37% of resistance alleles were found. There was agreement between EHT, FECRT and qPCR for BZs, and agreement between LDT and qPCR for LEV. Thus, based on higher sensitivity of qPCR, and phenotypic evaluation, the Caucaia population was considered resistant to BZs, MLs, LEV and suspect for MPTL.

Resumo O objetivo deste estudo foi caracterizar a resistência anti-helmíntica (RA) da população de nematoides gastrintestinais de ovinos, denominada Caucaia, do Nordeste brasileiro. Os testes fenotípicos foram: eclosão de ovos (TEO), desenvolvimento larvar (TDL) e redução da contagem de ovos nas fezes (TRCOF). A avaliação genotípica para benzimidazóis (BZs) foi por frequência de polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) F200Y, F167Y e E198A; e para levamisol (LEV), pela frequência alélica para resistência no gene Hco-acr-8. Os "primers" foram específicos para Haemonchus contortus. As concentrações efetivas 50% (CE50) para BZs (TEO) e para lactonas macrocíclicas (LMs) e LEV (TDL) foram 1,02 µg/mL, 1,81 ng/mL e 0,04 µg/mL, respectivamente. Os fatores de resistência para LMs e LEV foram 0,91 e 3,07, respectivamente. As eficácias para BZs, LMs, monepantel (MPTL) e LEV no TRCOF foram 52,4; 87,0; 94,5 e 99,6%, respectivamente. A qPCR para BZs demonstrou frequências de 0%, 26,24% e 69,08% para SNPs E198A, F200Y e F167Y, respectivamente. Para LEV foram encontrados 54,37% de alelos resistentes. Houve concordância entre TEO, TRCOF e qPCR para BZs, e entre TDL e qPCR para LEV. Baseada na maior sensibilidade da qPCR e avaliação fenotípica, a população Caucaia foi considerada resistente a BZs, LMs, LEV e suspeita para MPTL.

Resistance of bovine gastrointestinal nematodes to four classes of anthelmintics in the semiarid region of Paraíba state, Brazil / Resistência de nematódeos gastrintestinais de bovinos à quatro classes de anti-helmínticos no semiárido do Estado da Paraíba, Brasil

The effectiveness of four anthelmintic classes on cattle gastrointestinal nematodes in the semi-arid region of Paraiba State, Brazil, was evaluated. Twenty farms were used, testing 40 animals in each one, totaling 800 animals. Cattle were divided into four groups composed with ten animals: I, treated with albendazole sulfoxide 15%; II, treated with ivermectin 1%; III, treated with closantel 25%; IV, treated with levamisole hydrochloride 7.5%. All treatments were administered subcutaneously. For the Fecal Egg Count Reduction Test (FECRT), individual fecal samples were collected on days 0 and 14, and sent for analysis of egg count per gram of feces (EPG) and larval cultures. It was observed that multiresistance was present in 95% (19/20) of the farms. Resistance to ivermectin and albendazole was observed in 95% (19/20), to closantel in 75% (15/20) and to levamisole in 20% (4/20). The most used management system was semi-intensive (75%; 15/20) and the ivermectin was the most reported drug for controlling helminths (65%; 13/20). Haemonchus spp. was the most prevalent helminth genus. It was concluded that the anthelmintic resistance of bovine gastrointestinal nematodes is high in the semi-arid of Paraíba State, Brazil, with multiresistance observed mainly to ivermectin, albendazole and closantel.(AU)

Avaliou-se a eficácia de quatro classes de anti-helmínticos sobre nematódeos gastrintestinais de bovinos na região semiárida da Paraíba, Brasil. Foram utilizadas 20 fazendas, sendo testados 40 animais em cada uma, totalizando 800 animais. Os bovinos foram distribuídos em quatro grupos compostos por dez animais: I, tratado com sulfóxido de albendazol 15%; II, tratado com ivermectina 1%; III, tratado com closantel 25%; IV, tratado com cloridrato de levamisole 7,5%. Para o Teste de Redução da Contagem de Ovos Fecais (TRCOF), amostras fecais individuais foram coletadas nos dias 0 e 14 e enviadas para análises de contagem de ovos por grama de fezes (OPG) e coproculturas. Observou-se que a multirressistência estava presente em 95% (19/20) das fazendas. Foi observada resistência à ivermectina e ao albendazol, em 95% das fazendas (19/20); ao closantel, em 75% (15/20) e, ao levamisole, em 20% (4/20). O sistema de manejo mais utilizado foi o semi-intensivo (75%; 15/20) e a ivermectina foi o fármaco mais relatado para controle de verminose (65%; 13/20). O gênero de helminto mais prevalente foi Haemonchus spp. (76,7%). Conclui-se que é alta a resistência anti-helmíntica por nematódeos gastrintestinais de bovinos no Semiárido da Paraíba, Brasil, com multirressistência observada principalmente à ivermectina, ao albendazol e ao closantel.(AU)

Resistance of bovine gastrointestinal nematodes to four classes of anthelmintics in the semiarid region of Paraíba state, Brazil / Resistência de nematódeos gastrintestinais de bovinos à quatro classes de anti-helmínticos no semiárido do Estado da Paraíba, Brasil

Abstract The effectiveness of four anthelmintic classes on cattle gastrointestinal nematodes in the semi-arid region of Paraiba State, Brazil, was evaluated. Twenty farms were used, testing 40 animals in each one, totaling 800 animals. Cattle were divided into four groups composed with ten animals: I, treated with albendazole sulfoxide 15%; II, treated with ivermectin 1%; III, treated with closantel 25%; IV, treated with levamisole hydrochloride 7.5%. All treatments were administered subcutaneously. For the Fecal Egg Count Reduction Test (FECRT), individual fecal samples were collected on days 0 and 14, and sent for analysis of egg count per gram of feces (EPG) and larval cultures. It was observed that multiresistance was present in 95% (19/20) of the farms. Resistance to ivermectin and albendazole was observed in 95% (19/20), to closantel in 75% (15/20) and to levamisole in 20% (4/20). The most used management system was semi-intensive (75%; 15/20) and the ivermectin was the most reported drug for controlling helminths (65%; 13/20). Haemonchus spp. was the most prevalent helminth genus. It was concluded that the anthelmintic resistance of bovine gastrointestinal nematodes is high in the semi-arid of Paraíba State, Brazil, with multiresistance observed mainly to ivermectin, albendazole and closantel.

Resumo Avaliou-se a eficácia de quatro classes de anti-helmínticos sobre nematódeos gastrintestinais de bovinos na região semiárida da Paraíba, Brasil. Foram utilizadas 20 fazendas, sendo testados 40 animais em cada uma, totalizando 800 animais. Os bovinos foram distribuídos em quatro grupos compostos por dez animais: I, tratado com sulfóxido de albendazol 15%; II, tratado com ivermectina 1%; III, tratado com closantel 25%; IV, tratado com cloridrato de levamisole 7,5%. Para o Teste de Redução da Contagem de Ovos Fecais (TRCOF), amostras fecais individuais foram coletadas nos dias 0 e 14 e enviadas para análises de contagem de ovos por grama de fezes (OPG) e coproculturas. Observou-se que a multirressistência estava presente em 95% (19/20) das fazendas. Foi observada resistência à ivermectina e ao albendazol, em 95% das fazendas (19/20); ao closantel, em 75% (15/20) e, ao levamisole, em 20% (4/20). O sistema de manejo mais utilizado foi o semi-intensivo (75%; 15/20) e a ivermectina foi o fármaco mais relatado para controle de verminose (65%; 13/20). O gênero de helminto mais prevalente foi Haemonchus spp. (76,7%). Conclui-se que é alta a resistência anti-helmíntica por nematódeos gastrintestinais de bovinos no Semiárido da Paraíba, Brasil, com multirressistência observada principalmente à ivermectina, ao albendazol e ao closantel.

Implication of the fecal egg count reduction test (FECRT) in sheep for better use of available drugs / Implicação do teste de redução da contagem de ovos nas fezes (TRCOF) em ovinos para melhor uso dos anti-helmínticos disponíveis

The aim here is to present data on the efficacy of anthelmintics in sheep flocks in Rio de Janeiro, Brazil, and to discuss the interpretation of the fecal egg count reduction test (FECRT) for each nematode genus. Fecal eggs counts and pre- and post-treatment coprocultures were performed, the former to evaluate the efficacy of and the latter to determine the overall parasite prevalence. An additional efficacy test was performed at Farm / 1 a year after the initial test. Severe anthelmintic resistance was found for the flocks, with no FECRT sensitivity at any of the 22 farms evaluated. However, an analysis of the infective larvae showed that some drugs were effective against certain parasitic genera; i.e., levamisole was more effective against Haemonchus spp. and moxidectin against Trichostrongylus spp. In the additional FECRT performed at Farm / 1, moxidectin and nitroxynil were ineffective separately, but when applied in combination they were highly effective due to their efficacy against Haemonchus (nitroxynil) and Trichostrongylus (moxidectin), respectively. The use of the FECRT targeting the parasitic nematode species prevalent on farms may make it possible to choose more effective anthelmintics.(AU)

O objetivo deste trabalho foi apresentar dados sobre a eficácia de anti-helmínticos em rebanhos ovinos no Rio de Janeiro, Brasil, e discutir a interpretação do teste de redução da contagem de ovos nas fezes (TRCOF) para cada gênero de nematoide. A contagem de ovos fecais (OPG) e coprocultura pré e pós-tratamento foram realizadas para avaliar a eficácia e a prevalência geral do parasito, respectivamente. Um teste de eficácia adicional foi realizado na Fazenda / 1 após um ano do teste inicial. Resistência anti-helmíntica grave foi encontrada, não havendo sensibilidade no TRCOF em nenhuma das 22 fazendas avaliadas. No entanto, na análise das larvas infectantes observou-se que algumas drogas foram eficazes contra certos gêneros parasitários; por exemplo, o levamisol foi mais eficaz contra Haemonchus spp. e a moxidectina contra Trichostrongylus spp. No TRCOF adicional realizado na Fazenda 1, a moxidectina e o nitroxinil foram ineficazes separadamente, mas quando aplicados em combinação, foram altamente eficazes devido à sua eficácia contra Haemonchus spp. (nitroxinil) e Trichostrongylus spp. (moxidectina), respectivamente. O TRCOF visando às espécies de nematoides parasitas prevalentes nas fazendas pode possibilitar a escolha de anti-helmínticos mais eficazes.(AU)

Nematode resistance to five anthelmintic classes in naturally infected sheep herds in Northeastern Brazil / Resistência de nematódeos a cinco classes de anti-helmínticos em rebanhos de ovinos naturalmente infectados no Nordeste do Brasil

This study aimed to evaluate the occurrence of nematode resistance to anthelmintics on sheep herds from the semi-arid region of Paraíba, Northeastern Brazil. Fecal Egg Count Reduction Test (FECRT) was carried out on 20 properties. In each herd, 30 animals were divided into five groups containing six animals each: group I, treated with albendazole 10%, 4 mg/kg; group II, ivermectin 0.08%, 0.2 mg/kg; group III, closantel 10%, 10 mg/kg; group IV, levamisole hydrochloride 5%, 5 mg/kg; and group V, monepantel 2.5%, 2.5 mg/kg. All treatments were administered orally as a single dose. Fecal samples were collected on days zero and 10 after treatment, to perform FECRT and coprocultures. Multiresistance was observed in all the properties; 95% had high resistance to albendazole, 85% to ivermectin, 80% to closantel, 40% to levamisole, and 45% to monepantel. On property 15, where monepantel was ineffective, a second FECRT for this anthelmintic was carried out 4 months after the first, resulting in 75% efficacy. Immediately after the FECRT result, two ewes were euthanized and necropsied, and Haemonchus contortus, Trichostrongylus axei, Trichostrongylus colubriformis, Oesophagostomum columbianum, and Trichuris ovis were recovered. It was concluded that the resistance of sheep gastrointestinal nematodes to antthelmintic, including monepantel, is high.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrência de resistência de nematódeos a anti-helmínticos em rebanhos ovinos do semiárido da Paraíba, Nordeste do Brasil. Testes de Redução na Contagem de Ovos Fecais (TRCOF) foram conduzidos em 20 propriedades. Em cada rebanho, 30 animais foram selecionados e foram divididos em cinco grupos contendo seis animais cada: grupo I, tratado com albendazol 10%, 10 mg/kg; grupo II, ivermectina 0,08%, 0,2 mg/kg; grupo III, closantel 10%, 10 mg/kg; grupo IV, cloridrato de levamisol 5%, 5 mg/kg; grupo V, monepantel 2,5%, 2,5 mg/kg. Todos os tratamentos foram administrados via oral, em dose única. Amostras fecais foram coletadas nos dias zero e 10 após os tratamentos, para a realização do TRCOF e coproculturas. Multirresistência foi observada em todas as propriedades; 95% dos rebanhos obtiveram alta resistência ao albendazole, 85% a ivermectina, 80% ao closantel, 40% ao levamisole, e 45% a monepantel. Na propriedade 15, onde o monepantel foi ineficaz, um segundo TRCOF foi conduzido para este fármaco 4 meses após o primeiro, resultando em 75% de eficácia. Imediatamente após o resultado do TRCOF, duas ovelhas foram eutanaziadas e necropsiadas, e Haemonchus contortus, Trichostrongylus axei, Trichostrongylus colubriformis, Oesophagostomum columbianum, e Trichuris ovis foram recuperados. Concluiu-se que a resistência dos nematódeos gastrintestinais de ovinos aos anti-helmínticos, incluindo o monepantel, é alta.(AU)

Resistance to monepantel in multiresistant gastrointestinal nematodes in sheep flocks in Rio Grande do Sul / Resistência ao Monepantel em nematoides gastrintestinais multiresistentes em rebanhos ovinos no Rio Grande do Sul

The excessive, indiscriminate, and continued use of anthelmintic drugs as control methods favors parasite resistance, and this phenomenon has been reported in Brazil and worldwide. The current status of parasite resistance to anthelmintic drugs in sheep flocks in Rio Grande do Sul was assessed by calculating the EPG count in the stool to estimate the prevalence of resistance to the anthelmintic drugs closantel, levamisole, fenbendazole, monepantel, and moxidectin in seven properties. The animals from each flock were randomly distributed in six groups according to the anthelminthic drug used, as follows: T1, levamisole; T2, fenbendazole; T3, monepantel; T4, moxidectin; T5, closantel; and T6, control. On day zero, fecal samples were collected, and each animal was treated with one anthelminthic drug. Fecal samples were collected again after 14 days to calculate the efficacy of each active principle. Coproculture was performed using a pool of fecal samples from each group on day 0 and 14 to identify the predominant genera and prevalence of helminths. The genera identified in the coprocultures were Haemonchus, Trichostrongylus, Oesophagostomum, and Teladorsagia. All flocks developed resistance to levamisole, fenbendazole, moxidectin, and closantel. Moreover, resistance to monepantel was found in four of the seven farms. These results demonstrate the critical situation of anthelmintic resistance in sheep flocks in Rio Grande do Sul and the need to adopt other integrated control measures in addition to anthelmintic treatment.(AU)

Uso excessivo, indiscriminado e continuado de anti-helmínticos como métodos de controle favorece o desenvolvimento de isolados de parasitos resistentes, fenômeno relatado no Brasil e no mundo. Com o objetivo de verificar a atual situação da resistência anti-helmíntica em rebanhos ovinos no Rio Grande do Sul, foram realizados testes de redução da contagem de OPG nas fezes (TRCOF), a fim de estimar a prevalência de resistência parasitária em sete propriedades utilizando os seguintes anti-helmínticos: closantel, levamisol, fenbendazol, monepantel e moxidectina. Em cada rebanho os animais foram distribuídos aleatoriamente, respeitando a homogeneidade de categorias, em seis grupos, T1 - levamisol, T2 - fenbendazol, T3 - monepantel, T4 - moxidectina, T5 - closantel e T6 - controle. No dia zero foram coletadas amostras de fezes e os animais foram tratados, após 14 dias foi feita nova coleta de fezes para calcular a eficácia de cada princípio ativo. A coprocultura foi realizada através de um pool de fezes de cada grupo no dia 0 e 14 para identificação dos principais gêneros e as suas prevalências. Os gêneros de helmintos identificados nas coproculturas realizadas foram: Haemonchus, Trichostrongylus, Oesophagostomum e Teladorsagia. Em todos os rebanhos foi diagnosticada resistência ao levamisol, febendazol, moxidectina e closantel, e, em quatro das sete propriedades foi encontrada resistência ao monepantel. Alerta-se para a situação crítica da resistência anti-helmíntica nos rebanhos gaúchos e a necessidade de se adotarem outras medidas de controle integrado além do tratamento exclusivo com anti-helmíntico.(AU)

Anthelmintic efficacy of Cratylia argentea (Desv. ) Kuntze against the gastrointestinal nematodes of sheep / Eficácia anti-helmíntica de Cratylia argentea (Desv. ) Kuntze contra nematódeos gastrintestinais de ovinos

The use of natural products having therapeutic properties can be considered an alternative approach for the control of helminths in ruminants, reducing the indiscriminate use of chemicals as well as production costs. The anthelmintic effectiveness of Cratylia argentea on sheep endoparasites was evaluated both in vitro by assessing the number of third-stage larvae recovered per gram of feces (LPG) from coprocultures treated with pods/ground seeds, macerated leaves or vermiculite (control), and in vivo using the Fecal Egg Count Reduction Test (FECRT) in two groups of lambs (n = 8/group) that received 1 mL kg-1 body weight of C. argentea solution (treated group) or distilled water (control group) orally. When compared to control group, there was a significant reduction in the percentage of LPG in the leaves group (55.88%; p ? 0.05) and pods/ground seeds group (82.48%; p ? 0.01). There was no significant reduction (p > 0.05) in the average count of EPG upon treatment with the aqueous solution of C. argentea. These findings suggest that C. argentea extract mainly obtained from pods/ground seeds has a promising potential for the control of young stages of gastrointestinal nematodes. However, further studies are needed to validate the use of C. argentea as an alternative method for the control of parasitic diseases of ruminants.(AU)

O uso de produtos naturais com propriedades terapêuticas pode ser considerado uma abordagem alternativa no controle de helmintos em ruminantes, reduzindo o uso indiscriminado de produtos químicos, bem como os custos de produção. A eficácia anti-helmíntica de Cratylia argentea sobre endoparasitos de ovinos foi avaliada tanto in vitro, mediante teste de recuperação de larvas infectantes por grama de fezes (LPG) a partir de coproculturas tratadas com vagens/sementes trituradas, folhas maceradas e vermiculita (controle), como in vivo, por meio de Teste de Redução da Contagem de Ovos por Grama de Fezes (TRCOF) em dois grupos de borregas (n = 8/grupo) que receberem por via oral 1 mL kg-1 PV de solução de C. argentea (grupo tratado) ou água destilada (grupo controle). Quando comparado ao grupo controle, houve redução estatisticamente significativa na porcentagem de LPG a partir do grupo tratado com folhas (55,88%; p ? 0,05) e do grupo tratado com vagens/sementes (82,48%; p ? 0,01). Não houve redução significativa (p > 0,05) na contagem média de OPG após o tratamento com a solução aquosa de C. argentea. Essas descobertas sugerem que o extrato de C. argentea obtido principalmente a partir de vagens/sementes tem potencial promissor para o controle de estágios jovens de nematódeos gastrointestinais. Contudo, são necessários novos estudos, a fim de validar o uso desta planta como um método alternativo no controle das parasitoses de ruminantes.(AU)

NANOEMULSÕES DE ALGINATO E ÓLEO ESSENCIAL DE Eucalyptus staigeriana: PRODUÇÃO, CARACTERIZAÇÃO, TOXICIDADE E ATIVIDADE ANTI-HELMÍNTICA SOBRE NEMATOIDES GASTRINTESTINAIS DE PEQUENOS RUMINANTES

O parasitismo por nematoides gastrintestinais (NGI) é uma grave ameaça a ovinocaprinocultura e com o aparecimento e disseminação da resistência anti-helmíntica (RA), novas alternativas de controle são necessárias. O óleo essencial de Eucalyptus staigeriana (OEEs) apresenta atividade anti-helmíntica, e o desenvolvimento de formulações visando o seu encapsulamento usando matriz de alginato de sódio (ALG) pode ser vantajoso para aumentar sua estabilidade e eficácia. Objetivando-se desenvolver emulsões de ALG e OEEs para o controle de NGI de pequenos ruminantes, a metodologia foi realizada em três fases. Na fase 1, cujo objetivo foi caracterizar uma população de Haemonchus contortus, nomeada Caucaia, quanto à RA, realizou-se a comparação entre testes fenotípicos de eclosão de ovos (TEO), desenvolvimento larvar (TDL) e redução de ovos nas fezes (TRCOF) e genotípico por qPCR para benzimidazois (BZs) e levamisol (LEV). Houve concordância entre TEO, TRCOF e qPCR para BZs, e entre TDL e qPCR para LEV. A população Caucaia foi considerada resistente a BZs, lactonas macrocíclicas, LEV e suspeita para monepantel. Na fase 2, objetivou-se desenvolver emulsões de ALG e OEEs, caracterizá-las e avaliar seus efeitos in vitro sobre eclosão de ovos e desenvolvimento larvar de H. contortus. Quatro emulsões foram preparadas com proporções variadas de Tween 80, OEEs e ALG 4%, caracterizadas físico-quimicamente e avaliadas no TEO e TDL. As emulsões foram estáveis, com tamanho de partícula predominantemente nanométrico e potencial zeta negativo. As emulsões foram mais efetivas que o OEEs no TEO, com concentração efetiva 50% (CE50) de 0,088 a 0,150 mg/mL para as emulsões e 0,308 mg/mL para OEEs. No TDL, emulsões e OEEs foram semelhantes, com CE50 variando de 3,91 a 4,60 mg/mL para emulsões e 4,17 mg/mL para OEEs. Portanto, emulsões de ALG e OEEs foram produzidas com sucesso, sendo a emulsão 2 (E2), com menor razão Tween 80/OEEs e ALG/OEEs, considerada a melhor e com potencial para o controle alternativo de H. contortus. Na fase 3, objetivou-se avaliar E2 in vitro contra H. contortus adultos, sua toxicidade aguda e atividade in vivo contra NGI. Foram realizados os testes de motilidade do adulto (TMA), avaliação por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e confocal de varredura a laser (MCVL). A dose letal 50% (DL50) de E2 foi verificada e o TRCOF foi realizado contra NGI da população Caucaia. No TMA, OEEs e E2 inibiram a motilidade de H. contortus e nas concentrações de 0,4 e 0,6 mg/mL, E2 foi mais efetiva que o OEEs. As imagens de MEV e de MCVL demonstraram alterações estruturais, principalmente, enrugamento de cutícula. A DL50 estimada da emulsão foi superior a 2.000 mg/kg. No TRCOF, a eficácia do OEEs e de E2 foram similares, com 54,2% de redução no opg pós-tratamento. Portanto, E2 demonstrou efeito promissor contra H. contortus adultos in vitro, segurança toxicológica e atividade contra NGI in vivo. Dessa forma, foi possível produzir e caracterizar, de forma bem-sucedida, emulsões de ALG e OEEs, que demonstraram estabilidade e atividade anti-helmíntica contra NGI de pequenos ruminantes, com potencial para aplicação em futuros esquemas de tratamento alternativo.

Parasitism by gastrointestinal nematodes (GIN) is a serious threat to sheep and goat farming and due to emergence and spread of anthelmintic resistance (AR), new control alternatives are required. The essential oil of Eucalyptus staigeriana (EsEO) has anthelmintic activity, so the development of formulations aimed at its encapsulation using sodium alginate matrix (ALG) can be advantageous to increase its stability and effectiveness. Aiming to develop emulsions of ALG and EsEO to control GIN in small ruminants, the methodology was developed in three phases. In phase 1, whose objective was to characterize a population of Haemonchus contortus, named Caucaia, regarding AR, a comparison was made between phenotypic tests of egg hatch (EHT), larval development (LDT) and fecal egg reduction (FECRT) and genotypic by qPCR for benzimidazoles (BZs) and levamisole (LEV). There was agreement between EHT, FECRT and qPCR for BZs, and between LDT and qPCR for LEV. The Caucaia population was considered resistant to BZs, macrocyclic lactones, LEV and suspected for monepantel. In phase 2, the aim was to develop emulsions of ALG and EsEO, characterize them and evaluate their in vitro effects on egg hatching and larval development of H. contortus. Four emulsions were prepared by varying proportions between Tween 80, EsEO and 4% ALG, physicochemically characterized and evaluated on EHT and LDT. The emulsions were stable, with predominantly nanometric particle size and negative zeta potential. The emulsions were more effective than EsEO in EHT, with effective concentration 50% (EC50) ranging from 0.088 to 0.150 mg/mL for the emulsions and 0.308 mg/mL for EsEO. In LDT, emulsions and EsEO were similar, with EC50 ranging from 3.91 to 4.60 mg/mL for emulsions and 4.17 mg/mL for EsEO. Therefore, ALG and EsEO emulsions were successfully produced, and emulsion 2 (E2), with low levels of the ratio between Tween 80/EsEO and ALG/EsEO was considered the best and with potential for alternative control of H. contortus. In phase 3, the aim was to evaluate E2 in vitro against adult H. contortus, its acute toxicity and in vivo activity against GIN. Adult worm motility test (AWMT) was performed, evaluation by scanning electron microscopy (SEM) and confocal laser scanning microscopy (CLSM). The lethal dose 50% (LD50) of E2 was assessed and FECRT was performed against the Caucaia population GIN. In AWMT, EsEO and E2 inhibited the motility of H. contortus and at concentrations 0.4 and 0.6 mg/mL, E2 was more effective than EsEO. SEM and CLSM images showed structural changes, mainly cuticle wrinkling. The LD50 of the emulsion was estimated to be greater 2,000 mg/kg. In FECRT, the efficacy of EsEO and E2 were similar, with a 54.2% reduction in epg post-treatment. Therefore, E2 showed promising effect against adult H. contortus in vitro, toxicological safety and activity against GIN in vivo. In this way, it was possible to successfully produce and characterize emulsions of ALG and EsEO, which demonstrated stability and anthelmintic activity gainst GIN of small ruminants, with potential for application in future alternative treatment schemes.

Overview of anthelmintic resistance of gastrointestinal nematodes of small ruminants in Brazil

Abstract Frequent and inappropriate use of all classes of antiparasitic drugs in small ruminants has led to failures in their effectiveness, culminating in a global problem of anthelmintic resistance. Brazil stands out as one of the worlds leaders in publications about anthelmintic resistance, and for having the most numerous reports of this resistance in small ruminants in the Americas. These studies have involved mainly the fecal egg count reduction test (FECRT) and its correlation with field management practices. In vivoeffectiveness testing is conducted in areas where livestock is of greater economic significance, e.g., in the South (sheep) and Northeast (goats), or is important for research and economic centers, such as the Southeast (sheep). The most widely studied species is sheep, for which the widest range of drugs is also evaluated. Despite significant advances achieved in molecular research, laboratory analyses should include knowledge about the reality in the field so that they can become feasible for the producer. Moreover, molecular studies can be underpinned by the analysis of field studies, such as the maintenance of antiparasitic effectiveness over time and the mechanisms involved in this process.

Resumo O uso frequente e inapropriado de todas as classes de antiparasitários em pequenos ruminantes levou a falhas de eficácia, culminando na problemática global de resistência anti-helmíntica. O Brasil destaca-se como sendo um dos pioneiros nas publicações com resistência anti-helmíntica no mundo e por ter o maior número de relatos em pequenos ruminantes na América. Essas pesquisas envolvem principalmente o teste da redução da contagem de ovos nas fezes (TRCOF) e sua correlação com as práticas de manejo utilizadas no campo. Os estudos de testes de eficácia in vivo localizam-se em áreas onde há maior importância dos rebanhos como nas Regiões Sul (ovinos) e Nordeste (caprinos), ou com importância em polos de pesquisa e econômicos, como a região Sudeste (ovinos). Ovina é a espécie mais estudada e com maior gama de drogas avaliadas. Mesmo com grande avanço em pesquisas moleculares, as análises laboratoriais devem envolver o conhecimento da realidade do campo para que possam se tornar viáveis ao produtor. Além disso, a análise dos estudos de campo pode nortear estudos moleculares como, por exemplo, a manutenção da eficácia das drogas ao longo dos anos e os mecanismos envolvidos em tal processo.

ESTUDO DO IMPACTO DA INFECÇÃO POR NEMATÓDEOS GASTRINTESTINAIS NO DESEMPENHO DE CORDEIROS MORADA NOVA PARA DESENVOLVIMENTO DE MÉTODO SELETIVO DE CONTROLE PARASITÁRIO

Os nematódeos gastrintestinais (NGI) são um grande entrave para a ovinocultura. Cordeiros da raça Morada Nova são resilientes aos NGI, podendo apresentar elevadas infecções sem manifestação de sinais clínicos, tais como a anemia, afetando o uso do método FAMACHA. Diante desses fatores, o objetivo deste trabalho foi adequar um método para realizar o controle de NGI dos animais da raça Morada Nova por meio de tratamento seletivo (TST), utilizando a média de ganho de peso diário (GMD) dos cordeiros como parâmetro. Além disso, verificou-se a aplicabilidade da espectroscopia no infravermelho próximo (NIRS) no diagnóstico da infecção por NGI. A partir dos dados obtidos, realizou-se estimativa das perdas econômicas advindas da infecção por NGI nos diferentes grupos experimentais. Para tanto, 114 cordeiros na estação chuvosa e 102 na estação seca foram randomizados em três tratamentos: Controle (TC sem tratamento), Rotineiro (TR - tratados a cada 42 dias) e Seletivo (TST - tratados de acordo com o GMD). Do 63º dia de vida (D63) até o D210, a cada 21 dias, os animais foram pesados e foram coletadas amostras de sangue (mensuração do volume globular (VG) e avaliação de espectros NIRS), de fezes (contagem de ovos por gramas de fezes (OPG) e coproculturas) e leitura do grau FAMACHA. Para averiguar a resistência dos parasitos ao anti-helmíntico utilizado nos grupos experimentais (levamisol 9,4 mg/kg), realizou-se o teste de redução da contagem de OPG (TRCOF), o RESISTA-Test© para o cálculo das concentrações letais (CLs) e o teste molecular (detecção de indel de 63 bp no gene acr-8 em H. contortus). No estudo econômico foram analisados e comparados os parâmetros de custo operacional dos tratamentos anti-helmínticos e o resultado econômico advindo destes. Nos grupos TC, TR e TST, respectivamente, as médias de OPG (p 0,05) foram 4665,1, 3063,5 e 3462,1 na estação chuvosa e de 4475,1, 1341,7 e 2863,4 na estação seca. As médias do VG foram 32,1%, 33,4% e 32,3% na estação chuvosa e 33,9%, 36,0% e 35,1% na estação seca. Os GMD médios foram 0,087 Kg, 0,101 Kg e 0,094 Kg na estação chuvosa e 0,102 Kg, 0,113 Kg e 0,112 Kg na estação seca. A 10 eficácia do levamisol no TRCOF foi de 66,4%, 24,1% e 76,4% nas chuvas e de 90,7%, 12,4% e 64,8% na seca, respectivamente. No RESISTA-Test© as CL50 foram 0,482, 1,926 e 0,117 g/mL na estação chuvosa e 0,437, 0,851 e 0,045 g/mL na estação seca, respectivamente. No teste molecular, a frequência do genótipo homozigoto de resistência foi de 57,1%, 71,4% e 40,0% na estação chuvosa e de 47,8%, 55,9% e 41,9% na seca. Não foi observada diferença significativa entre os tratamentos TST e TR em relação à média de ganho de peso, peso final e GMD, especialmente na estação seca, na qual a carga parasitária foi menor. A eficácia do tratamento anti-helmíntico reduziu de forma mais drástica no TR. Especificidades das raças ovinas e das condições ambientais precisam ser avaliadas antes da aplicação do TST por GMD no controle de NGI. O estudo dos espectros NIRS foi realizado a partir da classificação dos cordeiros Morada Nova entre doentes e saudáveis para a infecção parasitária e apresentou uma sensibilidade de 93,33% e especificidade de 73,21%. A técnica foi capaz de interagir os componentes do sangue e fazer classificações, demonstrando ser uma técnica mais sensível que o FAMACHA, bem como rápida e versátil para aplicação a campo. Em relação ao levantamento econômico, os animais do TR chegaram no D210 mais pesados em relação ao TC, gerando maior faturamento bruto em ambas as estações. Em relação ao TC, pode-se verificar um resultado econômico expressivo a favor do TR de R$ 33,00 por cabeça na estação chuvosa e de R$ 28,45 na estação seca. O TR apresentou resultado econômico 14,4% e 10,9% superior ao TC e 7,2% e 1,9% superior ao TST, no período das águas e da seca, respectivamente, mas o rápido desenvolvimento da resistência inviabilizou seu uso. Os gastos com o uso de anti-helmínticos são estimados em torno de 1,3% no resultado econômico total do sistema de produção. Considerando-se a redução no ganho de peso desencadeada pelos NGI nos rebanhos nacionais, estima-se um potencial impacto econômico R$ 472,6 milhões/ano e que as perdas por mortes na ovinocultura Brasileira sejam de R$ 65 milhões/ano.

Gastrointestinal nematodes (GIN) are a major obstacle to sheep farming. Morada Nova lambs are resilient to GIN, and may present high infections without clinical signs, such as anemia, affecting the use of the FAMACHA method. In view of these factors, the objective of this study was to adapt a method to GIN control in Morada Nova animals through selective treatment (TST), using the average daily weight gain (DWG) of the lambs as a parameter. In addition, the applicability of near-infrared spectroscopy (NIRS) in the diagnosis of Haemonchus contortus infection was verified. Based on the data obtained, estimates of economic losses resulting from GIN infection were made in the different experimental groups. For this, 114 lambs in the rainy season and 102 in the dry season were randomized into three treatments: Control (CT without treatment), Routine (RT - treated every 42 days), and Selective (TST - treated according to DWG). From the 63rd day of life (D63) to the D210, each 21 days, the animals were weighed and blood samples (packed cell volume (PCV) measurement and NIRS spectra evaluation), feces (egg count per gram of feces (EPG) and coprocultures) and FAMACHA grade reading were collected. To investigate the resistance of parasites to anthelmintic used in the experimental groups (levamisol 9.4 mg/kg), the EPG count reduction test (FECRT), the RESISTA-Test© for lethal concentration (LC) calculation and the molecular test (detection of indel 63 bp in the gene acr-8 in H. contortus) were performed. In the economic study, the parameters of operational cost of anthelmintic treatments and the economic result from them were analyzed and compared. In the CT, RT and TST groups, respectively, the mean EPG (p 0.05) were 4665.1, 3063.5 and 3462.1 in the rainy season and 4475.1, 1341.7 and 2863.4 in the dry season. The averages of the PCV were 32.1%, 33.4% and 32.3% in the rainy season and 33.9%, 36.0% and 35.1% in the dry season. Mean DWG was 0.087 Kg, 0.101 Kg and 0.094 Kg in the rainy season and 0.102 Kg, 0.113 Kg and 0.112 Kg in the dry season. The efficacy of levamisole in the FECRT was 66.4%, 24.1% and 76.4% in rainy and 90.7%, 12.4% and 64.8% in dry, respectively. In the RESISTA-Test© the LC50 were 0.482, 1.926 and 0.117 g/mL in the rainy season and 12 0.437, 0.851 and 0.045 g/mL in the dry season, respectively. In the molecular test, the frequency of homozygous resistance genotype was 57.1%, 71.4% and 40.0% in the rainy season and 47.8%, 55.9% and 41.9% in the dry season. No significant difference was observed between the TST and RT treatments in relation to the mean weight gain, final weight and DWG, especially in the dry season, in which the parasite load was lower. The efficacy of the anthelmintic treatments was more drastically reduced in the RT. Specificities of sheep breeds and environmental conditions need to be assessed prior to the application of TST by DWG for GIN control. The study of the NIRS spectra was performed based on the classification of Morada Nova lambs among sick and healthy for parasitic infection and presented a sensitivity of 93.33% and specificity of 73.21%. The technique was able to interact with blood components and make classifications, demonstrating that it can be more sensitive than FAMACHA, as well as a quick and versatile technique for field application. In relation to the economic survey, the animals of the RT arrived in the D210 heavier in relation to the CT, generating higher gross sales in both seasons. In relation to CT, one can verify an expressive economic result in favor of RT of R$ 33.00 per head in the rainy season and R$ 28.45 in the dry season. The RT presented economic results 14.4% and 10.9% higher than the CT and 7.2% and 1.9% higher than the TST, in the rainy and dry periods, respectively, but the fast development of resistance made its use unfeasible. Expenses with the use of anthelmintics are estimated at around 1.3% in the total economic result of the production system. Considering the reduction in weight gain triggered by GIN in national flocks, it is estimated a potential economic impact of R$ 472.6 million/year and that losses from deaths in the Brazilian sheep production are of R$ 65 million/year.

Overview of anthelmintic resistance of gastrointestinal nematodes of small ruminants in Brazil / Panorama da resistência anti-helmíntica em nematoides gastrointestinais de pequenos ruminantes no Brasil

Frequent and inappropriate use of all classes of antiparasitic drugs in small ruminants has led to failures in their effectiveness, culminating in a global problem of anthelmintic resistance. Brazil stands out as one of the worlds leaders in publications about anthelmintic resistance, and for having the most numerous reports of this resistance in small ruminants in the Americas. These studies have involved mainly the fecal egg count reduction test (FECRT) and its correlation with field management practices. In vivoeffectiveness testing is conducted in areas where livestock is of greater economic significance, e.g., in the South (sheep) and Northeast (goats), or is important for research and economic centers, such as the Southeast (sheep). The most widely studied species is sheep, for which the widest range of drugs is also evaluated. Despite significant advances achieved in molecular research, laboratory analyses should include knowledge about the reality in the field so that they can become feasible for the producer. Moreover, molecular studies can be underpinned by the analysis of field studies, such as the maintenance of antiparasitic effectiveness over time and the mechanisms involved in this process.(AU)

O uso frequente e inapropriado de todas as classes de antiparasitários em pequenos ruminantes levou a falhas de eficácia, culminando na problemática global de resistência anti-helmíntica. O Brasil destaca-se como sendo um dos pioneiros nas publicações com resistência anti-helmíntica no mundo e por ter o maior número de relatos em pequenos ruminantes na América. Essas pesquisas envolvem principalmente o teste da redução da contagem de ovos nas fezes (TRCOF) e sua correlação com as práticas de manejo utilizadas no campo. Os estudos de testes de eficácia in vivo localizam-se em áreas onde há maior importância dos rebanhos como nas Regiões Sul (ovinos) e Nordeste (caprinos), ou com importância em polos de pesquisa e econômicos, como a região Sudeste (ovinos). Ovina é a espécie mais estudada e com maior gama de drogas avaliadas. Mesmo com grande avanço em pesquisas moleculares, as análises laboratoriais devem envolver o conhecimento da realidade do campo para que possam se tornar viáveis ao produtor. Além disso, a análise dos estudos de campo pode nortear estudos moleculares como, por exemplo, a manutenção da eficácia das drogas ao longo dos anos e os mecanismos envolvidos em tal processo.(AU)

Eficácia de anti-helmínticos em estrongilídeos de equídeos na região semiárida de Minas Gerais

Os ciatostomíneos são atualmente os principais nematoides de equídeos. O uso indiscriminado de fármacos na tentativa de controlá-los pode acelerar o surgimento da resistência anti-helmíntica. Objetivou-se analisar a eficácia dos anti-helmínticos closantel, fenbendazol, ivermectina e abamectina em equídeos naturalmente infectados localizados na região semiárida de Minas Gerais. O estudo foi realizado em 24 haras localizados na região do semiárido mineiro. As contagens de OPG foram realizadas nos dias -3, 0 e 14 em 752 equídeos. No dia -3 realizaram-se as contagens de OPG em 752 equídeos. No dia 0, os animais receberam os seguintes anti-helmínticos, considerando o peso corporal: closantel solução oral (20 mg/kg), pasta contendo fenbendazol (7,5 mg/kg), pasta contendo ivermectina (200mcg/kg), pasta contendo abamectina (200mcg/kg). O teste de redução da contagem de ovos nas fezes (TRCOF) foi realizado em 569 equídeos. Os dados foram analisados com o pacote eggCounts 2.3 no RStudio, usando o modelo Bayesiano com design pareado. O tratamento com closantel apresentou resistência anti-helmíntica confirmada em 100%, o fenbendazol apresentou eficácia adequada de 58,5%. Ivermectina e abamectina obtiveram uma eficácia adequada em 77,3% e 69,6% dos haras avaliados, respectivamente. Os resultados encontrados nesse estudo destacam a resistência dos estrongilídeos a todos as drogas utilizadas. O controle destes endoparasitos apenas com a utilização dos anti-helmínticos mostrou-se falho, sendo necessário estabelecer um controle parasitário integrado de forma que preserve a eficácia dos anti-helmínticos disponíveis comercialmente e retarde o desenvolvimento da resistência parasitária.

The cyathostomins are today the mainly nematodes in equines. The indiscriminated uses of drugs in attempt to control these parasites can acelerate the anthelmintic resistance appearance. The aim of this work was to analyse the anthelmintic efficacy of closantel, fenbendazole, invermectin and abamectin anthelmintics in equines naturally infected on the region of semiarid in the state of Minas Gerais. The FEC has been realized on -3, 0 and 14 days in 752 equines. On 0 day, the animals was submited to the following treatments in an oral form, takking into account the healty weight: Closantel oral solution (20 mg/kg), paste containing fenbendazole (7.5 mg/kg), paste containing invermectin (200 mcg/kg), and paste containing abamectin (200 mcg/kg). The faecal egg count reduction test (FECRT) was realized in 569 equines. The datas has been analysed with eggCounts 2.3 package, on RStudio software using Bayesian model with paired design. The treatment with Closantel shows confirmed anthelmintic resistance on 100% of yards analysed, while the treatment with fenbendazole shows 58.5% of proper efficacy. Invermectin and abamectin obtained a proper efficacy of 77.3% and 69.6% on yards analysed. The results found out on this study highlight the strongylides resistance to all drugs administrated. The control of this paraistes only with these drugs shows to be flawed, being necessary to establish an integrated paraiste control in a way that the efficacy of anthelmintic available commercially bhe preserved and parasite resistance will be retarded.

DESENVOLVIMENTO E VALIDAÇÃO DE UM TESTE DE DIAGNÓSTICO PARA MONITORAMENTO DA RESISTÊNCIA ANTI-HELMÍNTICA EM REBANHOS OVINOS

O teste de desenvolvimento larvar (TDL) pode ser uma ferramenta de diagnóstico da resistência anti-helmíntica de rebanhos, permitindo seu monitoramento e ajustes de manejo. O objetivo deste estudo foi desenvolver e validar um teste de diagnóstico in vitro da resistência de Haemonchus contortus a anti-helmínticos comerciais e validar os resultados a campo. A eficácia do tiabendazol (TBZ), levamisol (LEV), ivermectina-monossacárida (IVM-M), monepantel (MPT) e Zolvix® (ZLV) foi avaliada no TDL em isolados de H. contortus susceptível (Echevarria1991-HcEc91) e resistente (Botucatu-HcBot), em placas de cultura de 24 e 96 poços. Testes complementares foram posteriormente realizados com a ivermectina aglicona (IVMA). Para validação do TDL, realizou-se o teste de redução da contagem de ovos nas fezes (TRCOF) em cinco rebanhos ovinos com anti-helmínticos comerciais dos mesmos grupos químicos (grupos de 7 animais com OPG 200). TDL e coproculturas também foram realizadas com as amostras dos rebanhos (HcRebanhos). H. contortus foi o parasita majoritário em todas as fazendas (média de 74%). O fator de resistência (FR) definido para os isolados foi superior a 3, indicando que o teste foi capaz de diferenciar HcEc91 e HcBot para TBZ, LEV, MPT, ZLV, IVM-A, e de maneira menos consistente para IVM-M. A similaridade das curvas dose-resposta entre as placas e interação placa*concentração (R2 de 98,4 a 99,0% para HcEc91/HcBot e de 99,4 a 99,0% para HcRebanhos), bem como baixas diferenças na eficácia média (0,02 a 2,26% para HcEc91/HcBot e 0,02 a 4,90% para HcRebanhos) para todos os anti-helmínticos, exceto para MPT, indicaram concordância confiável do TDL em ambas as placas, tanto para a avaliação de HcEc91/HcBot quanto para HcRebanhos. No último caso, a detecção de resistência pelo ZLV foi mais clara e mais estável do que pelo MPT. A adaptação do teste para placas de 96 poços resultou em economia de pelo menos 51.9%. Por meio do TRCOF, detectou-se resistência a todos os grupos químicos em todos os rebanhos, exceto para ZLV (40% resistentes e 20% suspeitos de resistência). Os resultados do TDL nos rebanhos indicaram resistência a TBZ (100%), LEV (80%), ZLV (20%), IVM-M (0%) e IVM-A (100%). Foi obtida concordância total quanto aos resultados de ambos os testes para TBZ e IVM-A (k=1,00). Já para LEV e ZLV, apesar de haver divergência de resultados em dois rebanhos, esta não foi estatisticamente diferente para ambas as drogas (P= 0,077 e P= 0,197, respectivamente), obtendo-se concordância substancial (k= 0,8 e 0,6, respectivamente). Os dados do presente estudo indicam que os resultados dos dois testes são comparáveis, validando, portanto, esse teste como uma opção para o diagnóstico da resistência anti-helmíntica para produtores de pequenos ruminantes.

The larval development test (LDT) can be a diagnostic tool for anthelmintic resistance in flocks, allowing monitoring and management adjustments. The aim of this study was to develop and validate an in vitro diagnostic test of Haemonchus contortus resistance to commercial anthelmintics and to validate the results at the farm level. The efficacy of thiabendazole (TBZ), levamisole (LEV), ivermectin-monosaccharide (IVM-M), monepantel (MPT) and Zolvix® (ZLV) were evaluated in LDT in susceptible (Echevarria1991-HcEc91) and resistant (BotucatuHcBot) isolates, in 24 and 96 well culture plates. Complementary tests were subsequently performed with ivermectin aglycone (IVM-A). To validate the LDT, the fecal egg count reduction test (FECRT) was performed in five sheep flocks with commercial anthelmintics from the same chemical groups (groups of 7 animals with FEC 200). LDT and fecal cultures were also carried out with the samples of the flocks (HcFlocks). H. contortus was the major parasite on all farms (average of 74%). The resistance factor (RF) defined for the isolates was greater than 3, indicating that the test was able to differentiate HcEc91 and HcBot for TBZ, LEV, MPT, ZLV, IVM-A, and in a less consistent way for IVM-M. The similarity of the dose-response curves between the plates and plate*concentration interaction (R2 from 98.4 to 99.0% for HcEc91/HcBot and from 99.4 to 99.0% for HcFlocks), as well as low differences in efficacy mean (0.02 to 2.26% for HcEc91/HcBot and 0.02 to 4.90% for HcFlocks) for all anthelmintics, except for MPT, indicated a reliable agreement of the LDT in both plates, both for the evaluation of HcEc91/HcBot as for HcFlocks. In the latter case, resistance detection by ZLV was clearer and more stable than by MPT. The adaptation of the test to 96-well plates resulted in savings of at least 51.9%. Through FECRT, resistance to all chemical groups was detected in all flocks, except for ZLV (40% resistant and 20% suspected of resistance). LDT results in flocks indicated resistance to TBZ (100%), LEV (80%), ZLV (20%), IVM-M (0%) and IVM-A (100%). Total agreement was obtained regarding the results of both tests for TBZ and IVM-A (k = 1.00). For LEV and ZLV, although there was a divergence of results in two flocks, this was not statistically different for both drugs (P = 0.077 and P = 0.197, respectively), with substantial agreement (k = 0.8 and 0.6, respectively). The data from the present study indicate that the results of the two tests are comparable, thus validating this test as an option for the diagnosis of resistance for small ruminant farmers.

EXTRATO DE PRÓPOLIS VERDE NO CONTROLE DE HELMINTOS GASTROINTESTINAIS DE OVINOS E CAPRINOS: ESTUDOS IN VITRO E IN VIVO

O uso indiscriminado de anti-helmínticos químicos sem o devido conhecimento do manejo a ser adotado bem como as características do produto e do animal a ser tratado podem ocasionar a resistência parasitária, a qual pode ser diminuída quando se faz a adoção de métodos de controle alternativos, utilizando produtos de origem natural. Neste contexto, o objetivo do trabalho foi avaliar a potencialidade da utilização da própolis verde sobre ovos e larvas de helmintos gastrointestinais de ovinos (in vitro) e sua eficácia anti-helmíntica em caprinos (in vivo). Primeiramente, o percentual de ácidos fenólicos, flavonoides e a atividade antioxidante da própolis verde utilizada foram determinados a fim de estabelecer quais os principais compostos químicos presentes e suas respectivas quantidades. Os efeitos do fitoterápico sobre ovos e larvas de helmintos gastrointestinais de ovinos avaliados por meio de testes que predisseram percentuais de eclodibilidade de ovos e inibição da migração larval dos helmintos. Em uma segunda etapa, os efeitos do extrato de própolis verde foram observados diretamente sobre os animais. Cabras Boer foram divididas em três grupos experimentais, sendo: T1 tratamento com glicerina (animais recebendo glicerina bidestilada líquida), T2 extrato de própolis verde (0,3g/kg PV) e T3 anti-helmíntico químico monepantel. Ambos grupos experimentais receberam os produtos teste no dia sete do período experimental, coletas de ma terial fecal para análises de ovos por grama de fezes (OPG) e coprocultura foram realizadas até o dia 60. A coloração da mucosa ocular foi determinada em todos os dias de coleta, pelo método Famacha. Foram colhidas amostras de sangue para realização de hemograma e perfil bioquímico sérico. O teste de redução de contagem de ovos nas fezes (TRCOF) foi realizado com o objetivo de predizer o grau de redução n a contaminação por helmintos para os diferentes produtos. A própolis utilizada apresentou uma vasta composição química, compostos como taninos e diferentes fenólicos garantiram a atividade anti -helmíntica da mesma. Elevada atividade antioxidante foi observada pela técnica de capacidade antioxidante de redução férrica. Não foi observada eclodibilidade de ovos quando utilizada a concentração de 99,99 mg mL -1 do fitoterápico, a mesma concentração inibiu mais de 97% da migração de larvas. Os valores de OPG e Famacha foram melhores para o monepantel quando comparado à própolis verde. O anti-helmíntico químico apresentou 64% de redução da contaminação no TRCOF. Conforme os resultados de hemograma, a própolis teve efeito positivo sobre o sistema imune dos animais, diminuindo a possível ocorrência de processos inflamatórios ou ainda sua intensidade. As infecções de ambos tratamentos apresentaram maiores proporções de H. contortus em relação às demais espécies de helmintos. A própolis foi eficiente no controle de nema toides gastrointestinais de pequenos ruminantes, ao passo que controlou o vos e larvas de helmintos.

The indiscriminate use of chemical anthelmintics without proper knowledge of the management to be adopted as well as the characteristics of the product and animal to be treated can cause parasitic resistance, which can be reduced when adopting alternative control methods, using products of natural origin. This work aimed to evaluate the potentiality of the use of green propolis on eggs and larvae of gastrointestinal helminths of sheep (in vitro) and their anthelmintic efficacy in goats (in vivo). First, the percentage of phenolic acids, flavonoids and the antioxidant activity of green propolis used were determined in order to establish the main chemical compounds present and their respective amounts. The effects of the herbal remedy on eggs and larvae of the gastrointestinal helminths of sheep evaluated by means of tests predicted percentages of egg hatchability and inhibition of larval migration of helminths. In a second step, the effects of the green propolis extract were obse rved directly on animals. Boer goats were divided into three experimental groups: T1 glycerin treatment (animals receiving liquid double - distilled glycerin), T2 - green propolis extract (0,3g / kg PV) and T3 - anthelmintic chemical - monepantel. Both experimental groups received the test products on the seventh day of the experimental period, fecal material samples for analysis of eggs per gram of feces (EPG) and coproculture were carried out until the 60th. The ocular mucosa coloration was determined on all days of collection by the Famacha method. Blood samples were collected for hemogram and serum biochemical profile. The FEC reduction test (FECRT) was performed with the objective of predicting the degree of reduction in helminth contamination for the different products. The propolis used presented a great chemical composition, compounds such as tannins and different phenolics guaranteed the anthelmintic activity of the same. High antioxidant activity was observed by the technique of antioxidant capacity of iron reduction. No egg hatchability was observed when the concentration of 99.99 mg mL -1 of the herbal product was used, the same concentration inhibited more than 97% of the larvae migration. The values of EPG and Famacha were better for monepantel when compared to green propolis. The chemical anthelmintic showed a 64% reduction in FECRT contamination. According to the hemogram results, propolis had a positive effect on the immune system of the animals, reducing the possible occurrence of inflammator y processes or even their intensity. Infections of both treatments presented higher proportions of H. contortus in relation to other species of helminths. Propolis was efficient in controlling gastrointestinal nematodes of small ruminants, while controlling eggs and larvae of helminths.

Resistência anti-helmíntica e controle biológico de nematódeos gastrintestinais de ovinos em ambiente semiárido

No capítulo I, o objetivo do trabalho foi avaliar a ação do Monepantel e outros anti-helmínticos sobre nematódeos gastrintestinais de ovinos do Semiárido da Paraíba. O segundo trata-se da influência do tempo de estocagem de três anos de péletes de M. thaumasium sobre a predação de larvas infectantes de tricostrongilideos de ovinos. O primeiro estudo foi desenvolvido em 20 propriedades, onde utilizamos 30 ovinos de cada propriedade sem tratamento anti-helmíntico a pelo menos três meses. Os animais foram divididos em cinco grupos: grupo I, tratados com 2,0 mL / 10 kg de Albendazol 10%; grupo II, tratados com 2,5 mL / 10 kg de Ivermectina 0,08%; grupo III, tratado com 1,0 mL / 10 kg de Closantel 10%; grupo IV, tratado com 1,0 mL / 10 kg de Cloridrato de Levamisole 5%; e o grupo V, tratados com 1,0 mL / 10 kg de Monepantel 2,5%. Amostras fecais foram coletadas nos dias zero e dez para realização das análises fecais. Para avaliar a resistência, aplicou-se o teste de redução na contagem de ovos por grama de fezes (RCOF) e a coprocultura. Foi observada a multirresistência em todas as propriedades avaliadas, onde 95% das fazendas tinham alta resistência ao Albendazol, 85% à Ivermectina, 80% ao Closantel, 40% ao Levamisole e 45% ao Monepantel. O segundo TRCOF para Monepantel foi realizado quatro meses após o primeiro na propriedade 15, onde o vermífugo foi ineficaz, resultando em eficácia de 75%. Duas ovelhas foram eutanaziadas e necropsiadas, e Haemonchus contortus, Trichostrongylus axei, Trichostrongylus colubriformis, Oesophagostomum columbianum e Trichuris ovis foram recuperados. O segundo estudo foi realizado no Instituto Federal da Paraíba, campus Sousa, Foram utilizados oito ovinos com OPG negativo, divididos em quatro grupos experimentais: Grupo I, 3g/10 kg de p.v de péletes de M. thaumasium 36 meses de estocagem, dose única; Grupo II, 3g/ 10 kg de péletes de M. thaumasium - recém produzidos, dose única; Grupo III, 3g/10 kg p.v, de péletes sem fungos; Grupo IV, controle. A cada 24h, até 120 h, as fezes dos animais foram coletadas e enviadas ao Laboratório de Parasitologia Veterinária para realização das análises. Foram pesadas 15 gramas de fezes de cada animal e acrescidas cinco gramas de vermiculite expandida, procedidas as coproculturas e adicionadas 1000 larvas infectantes (L3) de tricostrongilídeos de ovinos, sendo a recuperação larval realizada após sete dias. Observou-se que a predação de larvas no Grupo I (M. thaumasium - 36 meses) não diferiu estatisticamente (p>0,01) do Grupo II (M. thaumasium recente), apresentando respectivamente reduções de 75 e 79%. Ambos os grupos acrescentaram pico de predação larvas às 72h. O gênero de helminto mais recuperado nas coproculturas foi Haemonchus sp. Concluiu-se que os nematódeos gastrintestinais de ovinos estão resistentes ao monepantel e que foi frequente a ocorrência de multirresistência a anti-helmínticos por esses nematódeos. Concluiu-se que o período de estocagem de 3 anos de M. thaumasium na matriz de alginato não influenciou a eficácia da predação de larvas de trichotrongilidea de ovelhas, com alta redução da recuperação larval e presença de atividade fúngica nas fezes até 96 horas após administração aos animais.

In Chapter I, the objective of this study was to evaluate the action of Monepantel and other anthelmintics on gastrointestinal nematodes of sheep of the Paraíba Semi-arid. The second is the influence of the three-year storage time of M. thaumasium pellets on the predation of infective larvae of tricostrongilide sheep. The first study was developed in 20 properties, where we used 30 sheep from each farm without anthelmintic treatment for at least three months. The animals were divided into five groups: group I, treated with 2.0 mL / 10 kg of 10% Albendazole; group II, treated with 2.5 ml / 10 kg Ivermectin 0.08%; Group III treated with 1.0 mL / 10 kg of 10% Closantel; Group IV, treated with 1.0 mL / 10 kg of 5% Levamisole Hydrochloride; and group V treated with 1.0 mL / 10 kg of 2.5% Monepantel. Fecal samples were collected at days zero and ten to perform fecal analyzes. To evaluate the resistance, the reduction test was applied in egg count per gram of feces (RCOF) and coproculture. Multiresistance was observed in all the properties evaluated, where 95% of the farms had high resistance to Albendazole, 85% to Ivermectin, 80% to Closantel, 40% to Levamisole and 45% to Monepantel. The second TRCOF for Monepantel was performed four months after the first one at property 15, where the vermifuge was ineffective, resulting in 75% efficacy. Two sheep were euthanized and necropsied, and Haemonchus contortus, Trichostrongylus axei, Trichostrongylus colubriformis, Oesophagostomum columbianum and Trichuris ovis were recovered. The second study was carried out at the Federal Institute of Paraíba, Sousa campus. Eight negative OPG sheep were divided into four experimental groups: Group I, 3g / 10kg of pellets of M. thaumasium - 36 months of storage, dose only; Group II, 3g / 10 kg of M. thaumasium pellets - freshly produced, single dose; Group III, 3g / 10 kg p.v, of pellets without fungi; Group IV, control. Every 24 hours, up to 120 h, the faeces of the animals were collected and sent to the Veterinary Parasitology Laboratory for analysis. Fifteen grams of feces from each animal were weighed and five grams of expanded vermiculite were added, the coprocultures were added and 1000 infective larvae (L3) of tricostrongilídeos of ovinos, being the larval recovery realized after seven days. It was observed that the predation of larvae in Group I (M. thaumasium - 36 months) did not differ statistically (p> 0.01) from Group II (M. thaumasium - recent), respectively presenting reductions of 75 and 79%. Both groups added peak predation to larvae at 72 h. The genus of helminth most recovered in coprocultures was Haemonchus sp. It was concluded that the gastrointestinal nematodes of sheep are resistant to monepantel and that the occurrence of multi-resistance to anthelmintic by these nematodes was frequent. It was concluded that the 3-year storage period of M. thaumasium in the alginate matrix did not influence the efficacy of predation of sheep trichotrongilide larvae with high reduction of larval recovery and presence of fungal activity in the feces up to 96 hours after administration animals.

Resistência anti-helmíntica em nematoides gastrintestinais de pequenos ruminantes: avanços e limitações para seu diagnóstico / Anthelmintic resistance in gastrointestinal nematodes of small ruminants: advances and limitations for diagnosis

A seleção e a crescente disseminação de nematoides resistentes aos anti-helmínticos mais comumente utilizados, benzimidazóis (BZs), imidazotiazóis e lactonas macrocíclicas (LMs), constituem um sério entrave na produção de pequenos ruminantes em todo o mundo. O uso de métodos eficientes e sensíveis para a detecção e o monitoramento da resistência anti-helmíntica no campo torna-se urgente, especialmente para os grupos de BZs e LMs, devido aos constantes relatos de resistência. A obtenção de um diagnóstico preciso e precoce da resistência é extremamente importante para auxiliar a tomada de decisão em programas de controle parasitário, com o objetivo de preservar a vida útil dos produtos e limitar o desenvolvimento da resistência nas populações de nematoides. Os testes in vivo e, mais recentemente, os testes in vitro têm sido desenvolvidos para a detecção de nematoides resistentes aos principais grupos de anti-helmínticos. No entanto, a disponibilidade de testes in vitro validados e o seu uso prático ainda são muito limitados. Embora o teste de redução na contagem de ovos nas fezes (TRCOF, in vivo - indireto) seja o principal método de escolha para a detecção de resistência no campo, vem recebendo críticas quanto à validade dos resultados, e passa por significativas modificações. Além disso, o desenvolvimento de técnicas moleculares a partir de alterações genômicas gerou avanços consideráveis nessa área de investigação, com o uso de mutações nos códons 167, 198 e 200 do gene da β-tubulina como principais SNPs (polimorfismos de nucleotídeo único; do inglês Single Nucleotide Polymorphisms) associados à resistência aos BZs. A presente revisão tem o objetivo de discutir os métodos de diagnóstico disponíveis para a detecção de resistência anti-helmíntica em nematoides de pequenos ruminantes, destacando progressos e obstáculos para seu uso na rotina laboratorial e no campo. (AU)

The selection and growing spread of resistant nematodes to the most commonly used anthelmintics, benzimidazoles (BZs), imidazoles and macrocyclic lactones (MLs), constitutes a serious obstacle of small ruminants production worldwide. The use of efficient and sensitive methods for detection and monitoring of anthelmintic resistance in the field becomes urgent, especially for the BZs and MLs groups due to its frequent resistant reports. Obtaining an early and accurate diagnosis of resistance is extremely important to aid decision-making regarding parasite control programs, with the objective to preserve the lifespan of existing products, and to limit the development of resistance in nematode populations. The in vivo tests and the more recent in vitro tests have been developed for the detection of nematode resistant to the major anthelmintic groups. However, the availability of validated in vitro tests and its practical use is still very limited. Although the faecal egg-count reduction test (FECRT, in vivo - indirect) is the primary method of choice for the detection of resistance in the field it has being criticized for its results and is receiving significant modifications. Moreover, the development of molecular techniques from genomic changes have generated considerable advances in this research area, with the use of mutations at codons 167, 198 and 200 of β-tubulin gene as the main SNPs (single nucleotide polymorphisms) associated with BZs resistance. This review aims to discuss the available diagnostic methods for the detection of anthelmintic resistance in nematodes of small ruminants, highlighting key developments and obstacles to its use in the laboratory and in the field. (AU)

RESISTÊNCIA ANTI-HELMÍNTICA EM NEMATÓDEOS GASTRINTESTINAIS DE PEQUENOS RUMINANTES NO ESTADO DE PERNAMBUCO

A caprinovinocultura sofre grande prejuízo econômico devido ao parasitismo por nematódeos gastrintestinais, chegando a inviabilizar esta exploração em algumas regiões. O controle desse parasitismo é feito basicamente com a utilização de drogas anti-helmínticas. A ineficiência neste tipo de controle são os primeiros sinais do aparecimento de resistência anti-helmíntica (RA), que se constitui em um dos principais fatores negativos e limitantes para a produção animal, uma vez que inviabiliza o controle efetivo da helmintose dos pequenos ruminantes, com reflexos desfavoráveis nos índices produtivos. A resistência anti-helmíntica em nematódeos de pequenos ruminantes para os três grupos de drogas mais comumente utilizados: benzimidazóis (BZs), imidazotiazóis (LEV) e lactonas macrocíclicas (LMs) vem sendo relatada e têm crescido rapidamente em diferentes regiões do mundo. O controle eficiente destes parasitos e o diagnóstico precoce da resistência anti-helmíntica, especialmente em Haemonchus contortus, devem ser preconizados a fim de viabilizar economicamente a criação de ovinos e caprinos. O conhecimento dos vários aspectos genéticos deste fenômeno poderá aumentar a vida útil dos fármacos atualmente utilizados, e consequentemente tentar preservar a susceptibilidade dos parasitos. Neste trabalho tem-se como objetivo diagnosticar a resistência anti-helmíntica em propriedades de criação de ovinos e caprinos e analisar a relação com o manejo instituído nas propriedades e identificar a presença do DNA responsável pela resistência anti-helmíntica em populações de helmintos de pequenos ruminantes no estado de Pernambuco. Os procedimentos metodológicos foram aprovados pela Comissão de Ética no Uso de Animais CEUA UFRPE. Amostras de espécimes adultos de H. contortus foram obtidas de animais naturalmente parasitados por helmintos gastrintestinais pertencentes a propriedades localizadas nas cidades do estado de Pernambuco: Sairé (Agreste), Recife (Região Metropolitana), Bonito (Agreste), Moreno (Região Metropolitana), Gameleira (Mata Sul), Camocim de São Félix (Agreste), Serra Talhada (Sertão). Nas propriedades de Recife e Bonito criavam-se apenas caprinos e nas demais apenas ovinos. Para realização da PCR, amostras de espécimes adultos de H. contortus foram obtidas de animais naturalmente parasitados por helmintos gastrintestinais, os quais foram estocados em tubos de eppendorf com PBS a 4ºC, identificados e sexados no Laboratório de Doenças Parasitárias dos Animais Domésticos UFRPE. Formou-se um pool de 20 indivíduos machos adultos de H. contortus de cada propriedade, dos quais procedeu-se à extração de DNA. As amostras de DNA extraídas foram analisadas no Laboratório de Doenças Parasitárias da Universidade Federal do Paraná. Foi realizada a PCR com o objetivo amplificar fragmentos de genes que codificam o isotipo 1 da -tubulina que possuíam as sequências de códon 200, realizando-se também uma PCR para identificação das espécies dos helmintos coletados. As duas reações de amplificação foram conduzidas em termociclador Veriti Life com gradiente. Uma amostra de 20 l de cada reação foi analisada sobre um gel de agarose 0,8 % e visualizada sob luz UV. Os produtos de PCR foram purificados com o kit comercial PureLink® Quick Gel Extraction (Invitrogen, USA) e sequenciados por eletroforese capilar (Método de Sanger) utilizando a plataforma ABI3130 (Life Technologies, USA). Avaliou-se também a eficácia anti-helmíntica por método in vivo por meio do teste de redução do número de ovos por grama de fezes (TRCOF), usando a fórmula: % eficácia = [(média de OPGpré-tratamento - média de OPGpós-tratamento) / média de OPGpré-tratamento)] X 100. Detectou-se DNA responsável pela resistência anti-helmíntica aos benzimidazóis (BZ) em todas as propriedades analisadas. Os percentuais de eficácia anti-helmíntica para a moxidectina apresentaram-se como efetivos apenas aos sete dias pós-tratamento. Diversas falhas de manejo do controle das helmintoses gastrintestinais foram encontradas. Os resultados obtidos confirmam a resistência anti-helmíntica aos benzimidazóis em H. contortus de caprinos e ovinos no estado de Pernambuco, constituindo-se no primeiro registro de diagnóstico molecular da RA em ruminantes no Estado. Caracterizam também o declínio da efetividade anti-helmíntica da moxidectina nos rebanhos. Ambas as situações são favorecida por práticas de manejo inadequadas e uso indiscriminado de produtos químicos para o controle de helmintos gastrintestinais.

In vitro and in vivo anthelmintic response of the seeds of Amomum subulatum roxb and Vitex negundo / Atividade anti-helmíntica in vitro e in vivo das sementes de Amomum subulatum roxb e Vitex negundo

The current study was designed to check the anthelmintic activities of some local plants. Seeds of Amomum (A.) subulatum and Vitex (V.) negundo in different solvents were subjected to in vitro (adult motility assay; AMA and egg hatch assay; EHA) and in vivo (faecal egg count reduction test; FECRT) anthelmintic activity testing protocols using Haemonchus (H.) contortus as an experimental model. The results of AMA, EHA, and FECRT were statistically analysed through linear regression and Duncan multiple range test. In AMA test, at 50 mg mL-1 concentration, the percent mortality of H. contortus was higher in A. subulatum than V. negundo, whereas, in EHA test, A. subulatum was proven better ovicidal (LC50=14.2 µg mL-1) than V. negundo (LC50= 65.7405 µg mL-1). The FECRT also indicated the better efficacy of A. subulatum than V. negundo against natural infection of gastrointestinal (GI) parasites. The crude powder of plants used in this study showed 29.6% to 57.7% anthelmintic. The reduction rate was found higher for A. subulatum (3 g kg-1) as compared to V. negundo (7 g kg-1). Reagrding efficacy analysis of solvents used for plants extract, ethyl acetate and chloroform were found better in increasing ovicidal activity in adult worms (in vitro testing), whereas, the crude aqueous methanol was found better than the crude powders in in vivo testing. It will be beneficial to document the indigenous knowledge to standard scientific procedures for their validation. This study will help to motivate the farmers to make a better choice of cultivation of the indigenous plants because of their varying efficacies as an alternative preventive approach against the GI parasitic infections.

O presente estudo foi desenhado para verificar as propriedades anti-helmínticas de algumas plantas locais. Sementes de Amomum (A.) subulatum e Vitex (V.) negundo em diferentes solventes foram submetidas à análise de atividade anti-helmíntica in vitro (ensaio de motilidade de adultos; AMA e teste de eclosão de ovos; EHA) e in vivo (teste de redução da contagem de ovos nas fezes; TRCOF), usando o Haemonchus (H.) contortus como modelo experimental no protocolo de teste. Os resultados dos testes AMA, EHA e TRCOF foram analisados ​​estatisticamente por meio de regressão linear e teste de Duncan. No teste AMA, na concentração de 50 mg mL-1, o percentual de mortalidade de H. contortus foi maior com o uso de A. subulatum do que com V. negundo, enquanto, no teste EHA, A. subulatum apresentou maior ação ovicida (LC50=14,2 µg mL- 1) do que V. negundo (LC50= 65,7405 µg mL-1). O TRCOF também indicou a melhor eficácia do uso de A. subulatum do que de V. negundo contra a infecção natural de parasitas gastrointestinais (GI). O extrato bruto seco das plantas utilizadas neste estudo apresentou 29,6% a 57,7% de atividade anti-helmíntica. A taxa de redução observada com o uso de A. subulatum (3 g kg-1) foi maior que com o uso de V. negundo (7 g kg-1). Em relação à análise da eficácia dos solventes utilizados para o extrato de plantas, o acetato de etila e o clorofórmio apresentaram maior ação ovicida em vermes adultos (testes in vitro), enquanto o extrato bruto metanólico aquoso apresentou maior eficácia do que os extratos brutos secos em testes in vivo. Consideramos vantajoso documentar o conhecimento indígena relativos aos procedimentos científicos padronizados, para sua validação. Este estudo irá servir de motivação para que os agricultores façam escolhas melhores referentes ao cultivo das plantas indígenas devido às suas diferentes eficácias comprovadas, servindo como alternativa para a abordagem preventiva contra as infecções parasitárias GI.