Influence of garlic extract on larval performance and survival of juvenile angelfish Pterophyllum scalare during transport / Influência do extrato de alho no desempenho larval e na sobrevivência durante o transporte de juvenis de acará bandeira Pterophyllum scalare

Abstract The objective of this study was to evaluate the properties of garlic as a growth promoter in larvae of angelfish Pterophyllum scalare and its benefits during transport of juveniles of this species. The experiment was conducted in recirculation aquaculture system, consisting of 20 tanks of 40 L equipped with independent water input and output. We used 1,400 larvae distributed among five treatments, with four repetitions, which totaled 20 experimental units. The treatments were 0, 50, 100, 200, and 400 mg of garlic extract per kilo of feed. The results showed that the inclusion of levels of garlic extract in the feed did not significantly effect the fish's development or their transport. Neither did the inclusion of levels of garlic extract affect the survival of the larvae during the trial period. New research with extracts of higher dosages should be performed to elucidate the effect of garlic extract as a growth promoter.

Resumo O estudo teve como objetivo avaliar as propriedades do alho como promotor de crescimento em larvas de acará bandeira Pterophyllum scalare e seus benefícios no transporte de juvenis da mesma espécie. O experimento foi conduzido em sistema de recirculação composto por 20 aquários de 40 L de volume útil, dotado de entrada e saída de água independentes e teve a duração de 40 dias. O delineamento experimental adotado foi o inteiramente casualizado (DIC), com cinco tratamentos e quatro repetições, totalizando 20 unidades experimentais. Foram utilizadas 1.400 larvas de acará bandeira (Pterophyllum scalare) divididas entre os tratamentos. Os tratamentos consistiram em: 0, 50, 100, 200 e 400 mg de extrato de alho por quilo de ração. Os resultados mostraram que não houve efeito significativo dos níveis de inclusão do extrato do alho sobre os índices zootécnicos avaliados e posteriormente no transporte dos juvenis. Também não foi observado influência na sobrevivência das larvas durante o período experimental. Novas pesquisas com dosagens maiores de extratos devem ser realizados para melhor elucidação do efeito do extrato de alho como promotor de crescimento.

How omnivory affects the survival and choices of earwig Doru luteipes (Scudder) (Dermaptera: Forficulidae)? / Como a onivoria afeta a sobrevivência e escolhas da tesourinha Doru luteipes (Scudder) (Dermaptera: Forficulidae)?

Abstract Doru luteipes (Scudder, 1876) is an omnivorous predator that finds different food resources in the corn plant: eggs of Spodoptera frugiperda (J.E. Smith, 1797), uredospores of Puccinia polysora (Underw, 1897), and pollen. Knowing the survival and food preferences of this predator is essential to define its relevance as a biological control agent. We hypothesize that the foraging behavior and predatory capacity of D. luteipes may be affected when several food resources, especially eggs of S. frugiperda, uredospores of P. polysora, and pollen are concurrently in the same plant. The survival of D. luteipes in the nymph stage and their preference among food resources, often available in corn plants, were determined. To verify the survival of D. luteipes, newly hatched nymphs were fed exclusively with 1- uredospores of P. polysora, 2- eggs of S. frugiperda, 3- corn pollen, 4- a combination of uredospores + eggs, and 5- artificial diet (control). In another experiment, nymphs and adults of D. luteipes with 24 and 48 hours of fasting were individually released in the center of a container with four diets: 1- uredospores of P. polysora, 2- eggs of S. frugiperda, 3- corn pollen, 4- artificial diet, and maintained for 10 minutes, to evaluate the food choice and feeding time. The exclusive feeding with S. frugiperda eggs caused low nymph survival (8%), but the combination of P. polysora uredospores + S. frugiperda eggs allowed 58.3% survival. D. luteipes preferred feeding during the nighttime and the most significant proportions of choices by nymphs and adults were for pollen and diet, with adults spending more time eating pollen. These findings indicate that the trophic choices of D. luteipes are relevant to understand its contribution as an agent to control pest insects and fungal diseases in corn.

Resumo Doru luteipes (Scudder, 1876) é um predador onívoro, que encontra na planta do milho diferentes recursos alimentares: ovos de Spodoptera frugiperda (J.E. Smith, 1797), uredósporos de Puccinia polysora (Underw, 1897) e pólen. Para definição da relevância desse predador como agente de controle biológico, conhecer a sobrevivência e preferência alimentar é essencial. Nós hipotetizamos que o comportamento de forrageamento e a capacidade de predação de D. luteipes podem ser afetados quando uma mesma planta oferece ovos, uredósporos e pólen, concomitantemente. A sobrevivência de D. luteipes na fase de ninfa e sua preferência entre os recursos alimentares, frequentemente disponíveis nas plantas de milho, foram determinados. Para verificar a sobrevivência de D. luteipes, ninfas recém eclodidas foram alimentadas exclusivamente com 1- uredósporos de P. polysora, 2- ovos de S. frugiperda, 3- pólen de milho, 4- combinação de uredósporos + ovos e 5- dieta artificial (controle). Em outro experimento, ninfas e adultos de D. luteipes com 24 e 48 horas de jejum foram liberadas individualmente, em recipientes contendo quatro dietas: 1- uredósporos de P. polysora, 2- ovos de S. frugiperda, 3- pólen de milho, 4- dieta artificial e mantidas durante 10 min, sendo avaliados a escolha pelo alimento e o tempo de alimentação. A alimentação exclusiva com ovos de S. frugiperda ocasionou baixa sobrevivência das ninfas (8%), porém a combinação de uredósporos de P. polysora + ovos de S. frugiperda possibilitou sobrevivência de 58,3%. D. luteipes preferiu se alimentar durante o período noturno e as maiores proporções de escolhas das ninfas e dos adultos ocorreram no pólen e na dieta, sendo que os adultos gastaram mais tempo se alimentando de pólen. Estas descobertas indicam que as escolhas tróficas de D. luteipes são relevantes para compreender sua contribuição como agente de controle de insetos-praga e doença fúngicas em milho.

Estimating the relationship of sugarcane borer larvae and crop damage based on adult captures and climate variables

ABSTRACT: Sugarcane borer Diatraea saccharalis (F.) is the primary sugarcane pest in Brazil. To estimate the relationship between larvae in sugarcane stalks and captures of male adults of D. saccharalis, we collected samples weekly: (1) adults with one delta trap with three virgin females and three female pupae and (2) larvae in 120 stalks per plot of 12.6 hectares (355 × 355 m). The study was conducted in two sites with five plots each, in the municipalities of Nova Ponte and Tupaciguara, Minas Gerais State, Brazil, from July 2016 to May 2017. Relationships between (1) males trapped per week and the number of larvae outside of stalks (LOS) were estimated and (2) we evaluated climate variables, namely average temperature, average relative air humidity, hours with relative air humidity below 30 %, rainfall and number of rainy days, and adults and larvae of D. saccharalis. We obtained generalized linear models for LOS in autumn and for larvae inside the stalks (LIS) in spring and autumn and trapped males in both sites. A significant and direct relationship between LIS and males trapped allows predicting larvae density based on captures of males. In addition, plant damage can be estimated based on accumulated captures of males. There was a negative relationship between hours of air humidity < 30 % and larvae outside of stalks. Densities of LIS can be estimated from male captures and by the humidity variables in the trapping week. Nevertheless, the models require validation in the field.

Toxicity and larvicidal activity on Aedes aegypti of citronella essential oil submitted to enzymatic esterification / Toxicidade e atividade larvicida sobre Aedes aegypti de óleo essencial de citronella submetido à esterificação enzimática

Abstract The essential oil of citronella (Cymbopogon winterianus) has several biological activities, among them the insect repellent action. Some studies showed that cinnamic acid esters can be applied as natural pesticides, insecticides and fungicides. In this context, the objective of the present work was to evaluate the production of esters from citronella essential oil with cinnamic acid via enzymatic esterification. Besides, the essential oil toxicity before and after esterification against Artemia salina and larvicidal action on Aedes aegypti was investigated. Esters were produced using cinnamic acid as the acylating agent and citronella essential oil (3:1) in heptane and 15 wt% NS 88011 enzyme as biocatalysts, at 70 °C and 150 rpm. Conversion rates of citronellyl and geranyl cinnamates were 58.7 and 69.0% for NS 88011, respectively. For the toxicity to Artemia salina LC50 results of 5.29 μg mL-1 were obtained for the essential oil and 4.36 μg mL-1 for the esterified oils obtained with NS 88011. In the insecticidal activity against Aedes aegypti larvae, was obtained LC50 of 111.84 μg mL-1 for the essential oil of citronella and 86.30 μg mL-1 for the esterified oils obtained with the enzyme NS 88011, indicating high toxicity of the esters. The results demonstrated that the evaluated samples present potential of application as bioinsecticide.

Resumo O óleo essencial de citronela (Cymbopogon winterianus) possui diversas atividades biológicas, entre elas a ação repelente a insetos. Alguns estudos mostraram que os ésteres do ácido cinâmico podem ser aplicados como pesticidas naturais, inseticidas e fungicidas. Nesse contexto, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a produção de ésteres a partir do óleo essencial de citronela com ácido cinâmico via esterificação enzimática. Além disso, foi investigada a toxicidade do óleo essencial antes e após a esterificação contra Artemia salina e a ação larvicida sobre Aedes aegypti. Os ésteres foram produzidos utilizando ácido cinâmico como agente acilante e óleo essencial de citronela (3: 1) em heptano e 15% em peso da enzima NS 88011 como biocatalisadores, a 70 ° C e 150 rpm. As taxas de conversão de cinamatos de citronelil e geranil foram 58,7 e 69,0% para NS 88011, respectivamente. Para a toxicidade sobre Artemia salina foram obtidos CL50 de 5,29 μg mL-1 para o óleo essencial e 4,36 μg mL-1 para os óleos esterificados com NS 88011. Na atividade inseticida contra larvas de Aedes aegypti, obteve-se CL50 de 111,84 μg mL-1 para o óleo essencial de citronela e 86,30 μg mL-1 para os óleos esterificados com a enzima NS 88011, indicando alta toxicidade dos ésteres. Os resultados demonstraram que as amostras avaliadas apresentam potencial de aplicação como bioinseticida.

Identification of locally isolated entomopathogenic Fusarium species from the soil of Changa Manga Forest, Pakistan and evaluation of their larvicidal efficacy against Aedes aegypti / Identificação de espécies de Fusarium entomopatogênicas localmente isoladas do solo da Floresta de Changa Manga, Paquistão e avaliação de sua eficácia larvicida contra Aedes aegypti

Abstract Dengue fever vectored by the mosquito Aedes aegypti is one of the most rapidly spreading insect-borne diseases. Current reliance of dengue vector control is mostly on chemical insecticides. Growing insecticide resistance in the primary mosquito vector, Aedes aegypti, limits the effectiveness of vector control through chemical insecticides. These chemical insecticides also have negative environmental impacts on animals, plants and human health. Myco-biocontrol agents are naturally occurring organisms and are found to be less damaging to the environment as compared to chemical insecticides. In the present study, entomopathogenic potential of local strains of fungi isolated from soil was assessed for the control of dengue vector. Local fungal isolates presents better alternative to introducing a foreign biocontrol strain, as they may be better adapted to environmental conditions of the area to survive and may have more entomopathogenic efficacy against target organism. Larvicidal efficacy of Fusarium equiseti and Fusarium proliferatum was evaluated against Aedes aegypti. Local strains of F. equiseti (MK371718) and F. proliferatum (MK371715) were isolated from the soil of Changa Manga Forest, Pakistan by using insect bait method. Larvicidal activity of two Fusarium spp. was tested against forth instar larvae of A. aegypti in the laboratory, using concentrations 105, 106, 107 and 108 conidia /ml. LC50 values for F. equiseti after 24h, 48h, 72h and 96h of exposure were recorded as 3.8x 108, 2.9x107, 2.0x107, and 7.1x106 conidia /ml respectively while LC50 values for F. proliferatum were recorded as 1.21x108, 9.6x107, 4.2x107, 2.6x107 conidia /ml respectively after 24h, 48h, 72h and 96h of exposure. The results indicate that among two fungal strains F. equiseti was found to be more effective in terms of its larvicidal activity than F. proliferatum against larvae of A. aegypti.

Resumo A dengue transmitida pelo mosquito Aedes aegypti é uma das doenças transmitidas por insetos de propagação mais rápida. A dependência atual do controle do vetor da dengue é principalmente de inseticidas químicos. O aumento da resistência a inseticidas no principal vetor do mosquito, Aedes aegypti, limita a eficácia do controle do vetor por meio de inseticidas químicos. Esses inseticidas químicos também têm impactos ambientais negativos sobre os animais, plantas e saúde humana. Os agentes de micobiocontrole são organismos que ocorrem naturalmente e são menos prejudiciais ao meio ambiente em comparação com os inseticidas químicos. No presente estudo, avaliou-se o potencial entomopatogênico de cepas locais de fungos isolados do solo para o controle do vetor da dengue. Isolados de fungos locais apresentam melhor alternativa para a introdução de uma cepa de biocontrole estrangeira, pois podem ser mais bem adaptados às condições ambientais da área para sobreviver e podem ter maior eficácia entomopatogênica contra o organismo-alvo. A eficácia larvicida de Fusarium equiseti e Fusarium proliferatum foi avaliada contra Aedes aegypti. Cepas locais de F. equiseti (MK371718) e F. proliferatum (MK371715) foram isoladas do solo de Changa Manga Forest, Paquistão, usando o método de isca para insetos. Atividade larvicida de dois Fusarium spp. foi testado contra larvas de quarto ínstar de A. aegypti em laboratório, nas concentrações 105, 106, 107 e 108 conídios / ml. Os valores de LC50 para F. equiseti após 24 h, 48 h, 72 h e 96 h de exposição foram registrados como 3,8x 108, 2,9x107, 2,0x107 e 7,1x106 conídios / ml, respectivamente, enquanto os valores de LC50 para F. proliferatum foram registrados como 1,21x108, 9,6 x107, 4,2x107, 2,6x107 conídios / ml, respectivamente, após 24 h, 48 h, 72 h e 96 h de exposição. Os resultados indicam que entre duas cepas de fungos F. equiseti se mostrou mais eficaz em termos de atividade larvicida do que F. proliferatum contra larvas de A. aegypti.

Mosquitocidal activities of Chenopodium botrys whole plant n-hexane extract against Culex quinquefasciatus / Atividades mosquitocidas do extrato de n-hexano de planta inteira de Chenopodium botrys contra Culex quinquefasciatus

Abstract This research aimed to investigate various mosquitocidal activities of Chenopodium botrys whole- plant n-hexane extract against Culex quinquefasciatus. The extract showed remarkable larvicidal, pupicidal, adulticidal, oviposition deterrent and adult emergence inhibitory activities against Cx. quinquefasciatus. During the larvicidal and pupicidal activities, the 24-hour lethal concentration (LC50) of extract against 2nd instar larvae, 4th instar larvae and pupae were 324.6, 495.6 and 950.8 ppm, respectively. During the CDC (Centers for Disease Control and Prevention) bottle bioassay for adulticidal activity, the median knockdown times (KDT50) at 1.25% concentration was 123.4 minutes. During the filter paper impregnation bioassay for adulticidal activity, the KDT50 value at 0.138 mg/cm2 concentration was 48.6 minutes. The extract was fractionated into 14 fractions through silica gel column chromatography which were then combined into six fractions on the basis of similar retention factor (Rf) value. These fractions were screened for adulticidal activity by applying CDC bottle bioassay. The fraction obtained through 60:40 to 50:50% n-hexanes-chloroform mobile phase with 0.5 Rf value showed 100% adulticidal activity at 0.2% concentration. During oviposition deterrent activity, the highest concentration (1000 ppm) showed 71.3 ± 4.4% effective repellence and 0.6 ± 0.1 oviposition activity index. During adult emergence inhibition activity, the median emergence inhibition (EI50) value was 312.3 ppm. From the outcome of the present investigation, it is concluded that the n-hexane extract of C. botrys whole- plant possesses strong larvicidal, pupicidal, adulticidal, oviposition deterrent and adult emergence inhibitory activities against Cx. quinquefasciatus.

Resumo Esta pesquisa teve como objetivo investigar várias atividades mosquitocidas do extrato n-hexano de planta inteira de Chenopodium botrys contra Culex quinquefasciatus. O extrato mostrou atividades larvicida, pupicida, adulticida, dissuasora de oviposição e inibidora da emergência de adultos contra a Cx. quinquefasciatus. Durante as atividades larvicida e pupicida, a concentração letal de 24 horas (CL50) do extrato contra larvas de 2º estádio, larvas de 4º estádio e pupa foi de 324,6, 495,6 e 950,8 ppm, respectivamente. Durante o bioensaio com frasco do CDC (Centros para Controle e Prevenção de Doenças) para adulticida, o tempo médio de desativação (KDT50) na concentração de 1,25% foi de 123,4 minutos. Durante o bioensaio de impregnação com papel de filtro para a atividade adulticida do extrato, o valor KDT50 na concentração de 0,138 mg / cm2 foi de 48,6 minutos. O extrato foi fracionado em 14 frações através de cromatografia em coluna de gel de sílica que foram então combinadas em seis frações com base em um valor de fator de retenção (Rf) semelhante. Essas frações foram selecionadas quanto à atividade adulticida por meio da aplicação do bioensaio com garrafa do CDC. A fração obtida através da fase móvel de n-hexanos-clorofórmio 60:40% a 50:50% com valor de 0,5 Rf apresentou atividade adulticida de 100% na concentração de 0,2%. Durante a atividade de dissuasão da oviposição, a maior concentração de extrato (1000 ppm) apresentou repelência efetiva de 71,3 ± 4,4% e índice de atividade de oviposição de 0,6 ± 0,1. Durante a atividade de inibição da emergência de adultos, o valor médio de inibição da emergência (EI50) foi de 312,3 ppm. A partir do resultado da presente investigação, conclui-se que o extrato de n-hexano da planta inteira de C. botrys possui fortes atividades larvicida, pupicida, adulticida, dissuasora da oviposição e inibidora da emergência de adultos contra a Cx. quinquefasciatus.

Evaluation of indigenous plants' extracts for mosquitocidal activity against different stages of Culex quinquefasciatus say (Diptera: Culicidae) / Avaliação de extratos de plantas indígenas quanto à atividade mosquitocida contra diferentes estágios de culex quinquefasciatus say (Diptera: Culicidae)

Abstract Being vector of West Nile Virus and falariasis the control of Culex quinquefasciatus is likely to be essential. Synthetic insecticide treatment is looking most effective for vectors mosquito control. However, these products are toxic to the environment and non-target organisms. Consequently, ecofriendly control of vectors mosquito is needed. In this regard botanical insecticide is looking more fruitful. Therefore, the present research aimed to investigate the effectiveness of methanolic extract and various fractions, including, n-hexane, ethyl-acetate, chloroform, and aqueous fraction, obtained from methanolic extract of Ailanthus altissima, Artemisia scoparia, and Justicia adhatoda using separating funnel against larval, pupal, and adult stages of Culex quinquefasciatus. The larvae and pupae of Culex quinquefasciatus were exposed to various concentrations (31.25-1000 ppm) of methanolic extract and its fractions for 24 hours of exposure period. For knock-down bioassay (filter paper impregnation bioassay) different concentration of the methanolic extract and its various fractions (i.e. 0.0625, 0.125, 0.25, 0.5 and 1mg/mL) were applied for 1 hour exposure period. The results were statistically analysed using standard deviation, probit analysis, and linear regression. The R2 values of larvae, pupae, and adult range from 0.4 to 0.99. The values of LC50 (concentration causing 50% mortality) for late 3rd instar larvae after 24 hours exposure period range from 93-1856.7 ppm, while LC90 values range from 424 -7635.5ppm. The values of LC50for pupae range form 1326.7-6818.4ppm and and values of LC90 range from 3667.3-17427.9ppm, respectively. The KDT50 range from 0.30 to 2.8% and KDT90 values range from1.2 to 110.8%, respectively. In conclusion, Justicia adhatoda may be effective for controlling populations of vector mosquito.

Resumo Por ser o vetor do vírus do Nilo Ocidental e da falaríase, o controle de Culex quinquefasciatus Say é provavelmente essencial. O tratamento com inseticida sintético parece ser mais eficaz para o controle dos mosquitos vetores. No entanto, esses produtos são tóxicos para o meio ambiente e organismos não visados. Consequentemente, o controle ecológico dos mosquitos vetores é necessário. Nesse sentido, o inseticida botânico parece mais produtivo. Portanto, a presente pesquisa teve como objetivo investigar a eficácia do extrato metanólico e de várias frações, incluindo n-hexano, acetato de etila, clorofórmio e fração aquosa, obtidos do extrato metanólico de Ailanthus altissima (Mill.) Swingle, Artemisia scoparia Waldst. & Kit. e Justicia adhatoda L. usando funil de separação contra os estágios larval, pupal e adulto de C. quinquefasciatus. As larvas e pupas de C. quinquefasciatus foram expostas a várias concentrações (31,25-1000 ppm) de extrato metanólico, e suas frações por 24 horas de período de exposição. Para o bioensaio knock-down (bioensaio de impregnação de papel de filtro), diferentes concentrações do extrato metanólico e suas várias frações (ou seja, 0,0625, 0,125, 0,25, 0,5 e 1 mg / mL) foram aplicadas por um período de exposição de 1 hora. Os resultados foram analisados ​​estatisticamente usando desvio padrão, análise Probit e regressão linear. Os valores de R2 de larvas, pupas e adultos variaram de 0,4 a 0,99. Os valores de LC50 (concentração que causa 50% de mortalidade) para larvas de terceiro estádio tardio após 24 horas de período de exposição variaram de 93-1856,7 ppm, enquanto os valores de LC90 variaram de 424-7635,5ppm. Os valores de LC50 para pupas variaram de 1326,7-6818,4 ppm e os valores de LC90 variaram de 3667,3-17427,9 ppm, respectivamente. O KDT50 variou de 0,30 a 2,8% e os valores de KDT90 variaram de 1,2 a 110,8%, respectivamente. Por fim, a espécie J. adhatoda pôde ser eficaz para controlar populações de mosquitos vetores.

Down-regulation of complement genes in lipopolysaccharide-challenged zebrafish (Danio rerio) larvae exposed to Indonesian propolis / Regulação negativa dos genes do complemento em larvas de peixe-zebra (Danio rerio) desafiadas com lipopolissacarídeo expostas à própolis indonésia

Abstract Although propolis has been reported for having anti-inflammatory activities, its effects on complement system has not been much studied. This research was conducted to find out the effects of Indonesian propolis on the expression levels of C3, C1r/s, Bf, MBL, and C6 in zebrafish larvae which were induced by lipopolysaccharide (LPS). Counting of macrophages migrating to yolk sac and liver histology were carried out. Larvae were divided into four groups: CON (cultured in E3 medium only), LPS (cultured in a medium containing 0.5 μg/L LPS), LPSIBU (cultured in a medium containing LPS, and then treated with 100 μg/L ibuprofen for 24 hours), and LPSPRO (cultured in a medium containing LPS, and then immersed in 14,000 μg/L propolis for 24 hours) groups. The results showed that complement gene expression in larvae from the LPSIBU and LPSPRO groups were generally lower than in larvae from the LPS group. The number of macrophage migrations to the yolk in the LPSPRO group was also lower than in the LPS group. Histological structure of liver in all groups were considered normal. This study shows that Indonesian propolis has the potential to be used as an alternative to the substitution of NSAIDs.

Resumo Embora a própolis tenha sido relatada por ter atividade anti-inflamatória, seus efeitos no sistema complemento, uma parte do sistema imunológico inato, não foram muito estudados. Esta pesquisa foi conduzida para descobrir os efeitos da própolis da Indonésia nos níveis de expressão de C3, C1r/s, Bf, MBL e C6 em larvas de peixe-zebra induzidas por lipopolissacarídeo (LPS). Foram realizadas contagens de macrófagos que migram para o saco vitelino e histologia do fígado. As larvas foram divididas em quatro grupos: CON (cultivadas apenas em meio E3), LPS (cultivadas em meio contendo 0,5 μg/L de LPS), LPSIBU (cultivadas em meio contendo LPS e, em seguida, tratadas com 100 μg/L de ibuprofeno por 24 horas) e LPSPRO (cultivado em meio contendo LPS, e então imerso em própolis 14,000 μg/L por 24 horas). Os resultados mostraram que a expressão do gene do complemento em larvas dos grupos LPSIBU e LPSPRO foi geralmente menor que em larvas do grupo LPS. O número de migrações de macrófagos para a gema no grupo LPSPRO também foi menor que no grupo LPS. A estrutura histológica do fígado em todos os grupos foi considerada normal. Este estudo mostra que a própolis indonésia tem potencial para ser utilizada como alternativa na substituição dos AINEs (anti-inflamatórios não esteroides).

Chemical composition, in vitro larvicidal and antileishmanial activities of the essential oil from Citrus reticulata Blanco fruit peel / Composição química, atividades larvicida e leishmanicida in vitro do óleo essencial da casca do fruto de Citrus reticulata Blanco

Abstract Numerous studies have investigated the chemical composition and biological activities of essential oils from different Citrus species fruit peel, leaves and flowers. This paper aims to investigate the chemical composition, larvicidal and antileishmanial activities of essential oil from Citrus reticulata fruit peel (CR-EO). CR-EO was obtained by hydrodistillation in a Clevenger-type apparatus and its chemical composition was analyzed by GC-MS and GC-FID. Limonene (85.7%), ɣ-terpinene (6.7%) and myrcene (2.1%) were identified as its major components. CR-EO showed high activity against promastigote forms of Leishmania amazonensis (IC50 = 8.23 µg/mL). CR-EO also exhibited high larvicidal activity against third instar Aedes aegypti larvae at a lethal concentration (LC50 = 58.35 µg/mL) and 100% mortality at 150 µg/mL. This study suggests, for the first time, the potential use of CR-EO against this important mosquito-borne viral disease caused by the genus Aedes.

Resumo Numerosos estudos têm investigado a composição química e as atividades biológicas de óleos essenciais extraídos de cascas dos frutos, folhas e flores de diferentes espécies de Citrus. Este trabalho tem como objetivo investigar a composição química e as atividades larvicida e leishmanicida in vitro do óleo essencial das cascas dos frutos de Citrus reticulata (CR-EO). CR-EO foi obtido pela técnica de extração em aparelho Clevenger e sua composição química foi determinada por CG-EM e CG-DIC. Limoneno (85,7%), ɣ-terpineno (6,7%) and mirceno (2,1%) foram identificados como os constituintes majoritários. CR-EO mostrou alta atividade contra as formas promastigota de Leishmania amazonensis (CI50 = 8,23 µg/mL). CR-EO também exibiu alta atividade larvicida contra as larvas do terceiro estágio do Aedes aegypti com concentração letal (CL50 = 58,35 µg/mL) e mortalidade de 100% em 150 µg/mL. Este estudo sugere, pela primeira vez, o uso potencial de CR-EO contra esta importante doença viral transmitida por mosquitos do gênero Aedes.

Impact of nitrogen and phosphorus fertilizers on Cry1Ac protein contents in transgenic cotton / Impacto de fertilizantes de nitrogênio e fósforo nos conteúdos de proteína Cry1Ac em algodão transgênico

Abstract Application of different fertilizers to check the efficiency of expression of Bt (Bacillus thuringiensis) gene in one of the leading commercialized crops (cotton) against Lepidopteran species is of great concern. The expression of Cry protein level can be controlled by the improvement of nutrients levels. Therefore, the myth of response of Cry toxin to different combinations of NP fertilizers was explored in three Bt cotton cultivars. Combinations include three levels of nitrogen and three levels of phosphorus fertilizers. Immunostrips and Cry gene(s) specific primer based PCR (Polymerase Chain Reaction) analysis were used for the presence of Bt gene that unveiled the presence of Cry1Ac gene only. Further, the ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) kit was used to quantify the expression of Cry1Ac protein. Under various NP fertilizers rates, the level of toxin protein exhibited highly significant differences. The highest toxin level mean was found to be 2.3740 and 2.1732 µg/g under the treatment of N150P75 kg ha-1 combination while the lowest toxin level mean was found to be 0.9158 and 0.7641 µg/g at the N50P25 kg ha-1 level at 80 and 120 DAS (Days After Sowing), respectively. It was concluded from the research that the usage of NP fertilizers has a positive relation with the expression of Cry1Ac toxin in Bt cotton. We recommend using the N150P50 kg ha-1 level as the most economical and practicable fertilizer instead of the standard dose N100P50 kg ha-1 to get the desired level of Cry1Ac level for long lasting plant resistance (<1.5). The revised dose of fertilizer may help farmers to avoid the cross-resistance development in contradiction of insect pests.

Resumo A aplicação de diferentes fertilizantes para verificar a eficiência da expressão do gene Bt (Bacillus thuringiensis) em uma das principais culturas comercializadas (algodão) contra espécies de lepidópteros é uma grande preocupação. A expressão do nível de proteína Cry pode ser controlada pela melhoria dos níveis de nutrientes. Portanto, o mito da resposta da toxina Cry a diferentes combinações de fertilizantes NP foi explorado em três cultivares de algodão Bt. As combinações incluem três níveis de nitrogênio e três níveis de fertilizantes de fósforo. A análise de PCR (reação em cadeia da polimerase) específica para o gene (s) Immunostrips e Cry (s) foi usada para a presença do gene Bt que revelou a presença do gene Cry1Ac apenas. Além disso, o kit ELISA (ensaio de imunoabsorção enzimática) foi usado para quantificar a expressão da proteína Cry1Ac. Sob várias taxas de fertilizantes NP, o nível de proteína de toxina exibiu diferenças altamente significativas. A média do nível mais alto de toxina foi de 2,3740 e 2,1732 µg / g sob o tratamento da combinação N150P75 kg ha-1, enquanto a média do nível mais baixo de toxina foi de 0,9158 e 0,7641 µg / g no nível de N50P25 kg ha-1 em 80 e 120 DAS (dias após a semeadura), respectivamente. Concluiu-se com a pesquisa que o uso de fertilizantes NP tem relação positiva com a expressão da toxina Cry1Ac no algodão Bt. Recomendamos o uso do nível de N150P50 kg ha-1 como o fertilizante mais econômico e praticável em vez da dose padrão N100P50 kg ha-1 para obter o nível desejado de nível de Cry1Ac para resistência de planta de longa duração (<1,5). A dose revisada de fertilizante pode ajudar os agricultores a evitar o desenvolvimento de resistência cruzada em contradição com as pragas de insetos.

Canibalism in the larval instars of Spodoptera frugiperda (J. E. Smith, 1797) (Lepidoptera: Noctuidae): temperature and food quantity

Cannibalism is a frequent behavior in Spodoptera frugiperda (J. E. Smith, 1797) larvae either in the field or in a laboratory. The purpose of this work was to investigate the factors temperature and food quantity on the cannibal behavior in instars of this insect under laboratory conditions. The neonates were conditioned at temperatures of 22, 25, 28 and 31 ± 1°C until they reached the 3rd, 4th, and 5th instar. The number of 20 larvae were transferred to different gerbox® with the amount of food varying from 0, 5, 10, 15, and 20 g of artificial diet. Cannibalism was evaluated after 72 hours. In all the instars evaluated, the larvae showed cannibalistic behavior as a function of temperature and amount of food. The amount of 15 g of artificial diet is sufficient to feed the 3rd and 4th instar larval for 72h, regardless of temperature. For the 5th instar this amount is 10 g.(AU)

Performance of bullfrog tadpoles (Lithobates catesbeianus) fed balanced diets using alternative energy ingredients containing vegetable mesocarp

ABSTRACT The objective of this study was to evaluate the performance and metamorphosis of bullfrog tadpoles (Lithobates catesbeianus) fed balanced diets, wherein corn flour was replaced with banana, avocado, and pumpkin meal (all made without the epicarp). Using a completely randomized design, the animals were stored in tanks with a capacity of 30 L in a water recirculation system at a density of 1 tadpole/L. Through biweekly biometric measurements, the weight, standard, and total length were evaluated to determine metamorphic development, weight gain, consumption, feed conversion, specific growth rate, survival, physical-chemical parameters of water, and the percentage carcass composition (only at the end). Tadpoles fed rations balanced with pumpkin and banana flour performed the best, followed by those fed avocado meal and those fed the control ration (p 0.05). It can be concluded that growth performance is improved in animals fed diets containing 10% pumpkin and banana meal instead of corn, and tadpoles that received the avocado meal had the same performance as the conventional diets. Research should be carried out to assess other avenues for the replacement of ingredients in rations for bullfrog tadpoles.

RESUMO O objetivo deste trabalho foi avaliar o desempenho e a metamorfose de girinos de rãtouro (Lithobates catesbeianus) alimentados com dietas balanceadas com farinha de banana, abacate e abóbora, todas feitas sem epicarpo, em substituição à farinha de milho. Utilizando um delineamento inteiramente casualizado, os animais foram colocados em tanques com capacidade de 30 litros em sistema de recirculação de água com densidade de 1 girino / L. Por meio de biometria quinzenal foram avaliados peso, comprimento padrão e total, quanto ao desenvolvimento metamórfico, ganho em peso, consumo, conversão alimentar, taxa de crescimento específico, sobrevivência, parâmetros físico-químicos da água e composição centesimal da carcaça (somente no final). Os resultados mostraram melhor desempenho para girinos alimentados com ração balanceada com farinha de abóbora e banana, seguidos daqueles alimentados com farelo de abacate e alimentados com ração controle (p 0,05). Os animais alimentados com as duas últimas rações não diferiram (p> 0,05). Pode-se concluir que houve melhor desempenho nos animais alimentados com dietas contendo 10% de abóbora e farelo de banana ao invés de milho, e aqueles que receberam farelo de abacate com o mesmo desempenho das dietas tradicionais. Pesquisas devem ser realizadas para avaliar outros níveis de reposição desses nutrientes por girinos de rã-touro.

Performance of bullfrog tadpoles (Lithobates catesbeianus) fed balanced diets using alternative energy ingredients containing vegetable mesocarp / Desempenho de girinos de rã-touro (Lithobates catesbeianus) alimentados com dietas balanceadas com ingredientes de energia alternativa utilizando mesocarpo vegetal

The objective of this study was to evaluate the performance and metamorphosis of bullfrog tadpoles (Lithobates catesbeianus) fed balanced diets, wherein corn flour was replaced with banana, avocado, and pumpkin meal (all made without the epicarp). Using a completely randomized design, the animals were stored in tanks with a capacity of 30 L in a water recirculation system at a density of 1 tadpole/L. Through biweekly biometric measurements, the weight, standard, and total length were evaluated to determine metamorphic development, weight gain, consumption, feed conversion, specific growth rate, survival, physical-chemical parameters of water, and the percentage carcass composition (only at the end). Tadpoles fed rations balanced with pumpkin and banana flour performed the best, followed by those fed avocado meal and those fed the control ration (p < 0.05). It can be concluded that growth performance is improved in animals fed diets containing 10% pumpkin and banana meal instead of corn, and tadpoles that received the avocado meal had the same performance as the conventional diets. Research should be carried out to assess other avenues for the replacement of ingredients in rations for bullfrog tadpoles.(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar o desempenho e a metamorfose de girinos de rãtouro (Lithobates catesbeianus) alimentados com dietas balanceadas com farinha de banana, abacate e abóbora, todas feitas sem epicarpo, em substituição à farinha de milho. Utilizando um delineamento inteiramente casualizado, os animais foram colocados em tanques com capacidade de 30 litros em sistema de recirculação de água com densidade de 1 girino / L. Por meio de biometria quinzenal foram avaliados peso, comprimento padrão e total, quanto ao desenvolvimento metamórfico, ganho em peso, consumo, conversão alimentar, taxa de crescimento específico, sobrevivência, parâmetros físico-químicos da água e composição centesimal da carcaça (somente no final). Os resultados mostraram melhor desempenho para girinos alimentados com ração balanceada com farinha de abóbora e banana, seguidos daqueles alimentados com farelo de abacate e alimentados com ração controle (p <0,05). Os animais alimentados com as duas últimas rações não diferiram (p> 0,05). Pode-se concluir que houve melhor desempenho nos animais alimentados com dietas contendo 10% de abóbora e farelo de banana ao invés de milho, e aqueles que receberam farelo de abacate com o mesmo desempenho das dietas tradicionais. Pesquisas devem ser realizadas para avaliar outros níveis de reposição desses nutrientes por girinos de rã-touro.(AU)

Diversity of cellulolytic and xylanolytic fungi associated with the digestive tract of aquatic insect larvae in streams of the Amazon Forest and Cerrado in Brazil / Diversidade de fungos celulolíticos e xilanolíticos associados ao trato digestivo de larvas de insetos aquáticos em riachos de Floresta Amazônica e Cerrado no Brasil

The study of the relationship between fungi and insects brings important contributions to the knowledge of fungal biodiversity and to the understanding of mutualistic ecological interactions. This study reports the occurrence of a community of filamentous fungi in the digestive tract (DT) of mining insect larvae belonging to genus Stenochironomus in streams of two Brazilian biomes. Fungi were obtained from the digestive tract of larvae found on trunks and leaves of low-order streams in the Amazon Forest and Cerrado in the north of Brazil. The fungal community was screened for xylanolytic and cellulolytic activities. The diversity of fungal species in the DT of larvae is possibly related to the diversity of diets of species of that genus and the diversity of substrates in the ecosystems. The diversity and richness of fungal species were influenced by ecological differences between locations more than by the types of substrates in which they were collected (trunk and leaf). Most fungi in the DT of Stenochironomus larvae sampled in leaves exhibited cellulolytic enzyme activity. Such results stress that the mycobiomes of the DT of Stenochiromonus larvae produce enzymes that contribute to the process of breaking down plant remains in their hosts.

O estudo da relação entre fungos e insetos traz importantes contribuições para o conhecimento da biodiversidade fúngica e para o entendimento das interações ecológicas mutualísticas. Este estudo relata a ocorrência de uma comunidade de fungos filamentosos no trato digestivo (TD) de larvas minadoras de insetos do gênero Stenochironomus em riachos de dois biomas brasileiros. Os fungos foram obtidos do trato digestivo de larvas encontradas em troncos e folhas de riachos de baixa ordem na Floresta Amazônica e Cerrado no norte do Brasil. A comunidade fúngica foi triada para atividades xilanolíticas e celulolíticas. A diversidade de espécies fúngicas no TD de larvas possivelmente está relacionada à diversidade de dietas das espécies desse gênero e à diversidade de substratos nos ecossistemas. A diversidade e riqueza de espécies fúngicas foram influenciadas mais pelas diferenças ecológicas entre os locais do que pelos tipos de substratos em que foram coletados (tronco e folha). A maioria dos fungos no TD de larvas de Stenochironomus amostradas em folhas exibiu atividade enzimática celulolítica. Tais resultados reforçam que os micobiomas do DT de larvas de Stenochiromonus produzem enzimas que contribuem para o processo de decomposição de restos vegetais em seus hospedeiros.

First record of Plectris aliena Chapin, 1934 (Coleoptera: Melolonthidae) as a potential sugarcane pest in Brazil

Plectris aliena Chapin, 1934, a white grub that promotes serious damage to a variety of crops in North America and Australia, has been reported for the first time in Brazil. Larvae and adults of P. aliena were recorded in sugarcane crops in the state of Mato Grosso do Sul, sampled by trenches in the soil with light traps, respectively, during 2012 and 2013. Root consumption was also determined for the first, second and third instar larvae. The species is univoltine; adults were found mainly in Aug and the peak of third instar larval density was in Apr in all fields sampled. Pupae and adults of P. aliena were observed in the soil profile at depths of up to 60 and 80 cm, respectively. Larvae of P. aliena of the second and third instar consumed the primary and secondary roots of sugarcane, causing serious damage. Third instar larvae consumed 916 mg of root fresh matter, representing 72 % of the sugarcane root system. These results assist in furthering the understanding of its larval dynamics in the soil and provide support for Integrated Pest Management.

Larval development of Characidium orientale (Actinopterygii: Crenuchidae) a small neotropical fish / Desenvolvimento larval de Characidium orientale (Actinopterygii: Crenuchidae)

The Characidium orientale Buckup & Reis, 1997 larvae development is described using specimens collected in the natural environment of Antas River, in the Taquari-Antas river basin, Rio Grande do Sul, Brazil. Were considerate ontogenetic changes in morphology, pigmentation, fin morphology, and meristic characters. Thirty-six larvae (33 in the preflexion stage, two in flexion, and one in the postflexion stage), with a standard length between 4.24 and 11.26 mm were analyzed. The larvae of C. orientale are altricial and present fusiform body, subterminal mouth, long intestine with anal opening posterior to the vertical line over the median region of the body. Two chromatophores are evident in the interorbital region, as well pigments concentrated on the side of the body, forming a longitudinal stripe, and between the rays of the caudal fin, which intensify during the development. Also, a conspicuous remnant of the embryonic membrane (finfold) in front of the dorsal fin appears to be characteristic of species of the genus during larval development. The total number of myomeres varies from 32 to 35 (18-23 pre; 11-16 postanal). The main changes in morphometry occur during the preflexion stage and suggest physiological and behavioral changes.

O desenvolvimento das larvas de Characidium orientale Buckup & Reis, 1997 é descrito a partir de espécimes coletados no rio Antas, na bacia do rio Taquari-Antas, Rio Grande do Sul, Brasil. Foram consideradas mudanças ontogenéticas na morfologia, pigmentação, morfologia das nadadeiras e caracteres merísticos. Foram analisadas 36 larvas (33 na fase de pré-flexão, duas em flexão e uma em pós-flexão), com comprimento padrão entre 4,24 e 11,26 mm. As larvas de C. orientale são altriciais e apresentam corpo fusiforme, boca subterminal, intestino longo com abertura anal posterior à linha vertical sobre a região mediana do corpo. Dois cromatóforos são evidentes na região interorbital, bem como pigmentos concentrados na lateral do corpo, formando uma faixa longitudinal e entre os raios da nadadeira caudal, que se intensificam durante o desenvolvimento. Além disso, um remanescente conspícuo da membrana embrionária na frente da nadadeira dorsal parece ser característico de espécies do gênero durante o desenvolvimento larval. O número total de miômeros varia de 32 a 35 (18-23 pré; 11-16 pós-anal). As principais mudanças na morfometria ocorrem durante o estágio de pré-flexão e sugerem mudanças fisiológicas e comportamentais.

Description of the immature stages of the flea beetle Omophoita personata (Coleoptera: Chrysomelidae: Galerucinae: Alticini)

Alticini is the most diverse tribe of Chrysomelidae with approximately 8,000 species. Despite of its high diversity, little is known about their natural history and immature stages. Herein, we describe the immatures of Omophoita personata (Illiger, 1807) reared in laboratory from adults sampled in field. We also investigated and compared with immatures of O. octoguttata (Fabricius, 1775). Detailed morphology and chaetotaxy are presented. Larvae of O. personata have their bodies covered with tubercles and the stemmata are absent. These characteristics are shared with other Oedionychina species, reinforcing the stability of these morphological characteristics as diagnostic of this subtribe. This study provides important descriptive and comparative data that increases the knowledge about Alticini immatures.(AU)

In vitro study of Vitex gardneriana schauer toxicity on Artemia salina and its effect on eggs and larvae of Haemonchus contortus

This research aimed to investigate the toxic action of Vitex gardneriana on microcrustacean Artemia salina by using hydroalcoholic extract from leaves (EHF) and acute toxicity test (CL50) concentrations of 100, 500, 1.000, 10.000, 20.000, and 50.000/mL. Sodium hypochlorite (NaClO) at 1% was used as positive control, and saline and 1% DMSO were used as negative control. Vitex gardneriana showed low toxic potential, with 50% mortality in the microcrustacean metanauplii population (concentration: 34.600 mg/mL). A. salina is a seawater microcrustacean widely used in bioassays for determining the toxic dose of bioactive substances because of its low costs and its related simple, aseptic procedures. To determine the toxic action of the hydroalcoholic extract of V. Gardneriana on eggs and larvae of Haemonchus contortus, 2,5mL of EHF with a concentration of 34,600 mg/mL were added into single-species nematode fecal cultures containing approximately 12.000 eggs. Only 26,6% of the eggs hatched, corresponding to an EHF efÀ ciency of 73,3%, whereas the hatchability was 50% in control, with 6.000 larvae recovered. The À ndings show the potential of this plant as an alternative in parasite control.(AU)

A description of the first zoeal stage of Pilumnus vinaceus A. Milne-Edwards, 1880 (Decapoda, Pilumnidae), with a revision of the first zoea morphology of Pilumnus Leach, 1815

The morphology of the first zoeal stage of Pilumnus vinaceus is described and compared with the zoea I of Pilumnus all species in the literature. Two ovigerous females of P. vinaceus were maintained in the aquarium facilities until the larvae hatch. The larvae of each ovigerous female were dissected using a stereoscopic microscope. The zoea I of P. vinaceus has common characteristics among the Pilumnidae as: [1] antenna of type 2; [2] maxilliped 1 with 2+2+3+3 setae on the basis and with 3,2,1,2,5 setae in the endopod; [3] maxilliped 2 with 1+1+1+1 setae on the basis and 1,1,6 setae on the endopod; [4] telson with furcal rami armed with dorsal and lateral spines. Considering the species of Pilumnus that occur in the western Atlantic, it becomes possible to identify P. vinaceus zoea I by means of the verification of the following characteristics: [1] pleonites with mediolateral processes; [2] number of setae on the antennule. It is however, important to consider that there is still a great deficit in the knowledge about the morphology of the larval forms of the species assigned to Pilumnus and we argue in favor of new descriptions to build a more robust dataset on zoeal morphology characters and use it in a phylogenetic context on the genus.(AU)

Notes on the biological development of the darkling beetle Blaps nefrauensis nefrauensis Seidlitz, 1893 (Coleoptera: Tenebrionidae) / Notas sobre o desenvolvimento biológico do besouro escuro Blaps nefrauensis nefrauensis Seidlitz, 1893 (Coleoptera: Tenebrionidae)

Several endemic species of Blaps occur in Tunisia, and the species Blaps nefrauensis nefrauensis has been reported in Moulares (urban zone in west-central Tunisia), where it lives and reproduces in home gardens and old buildings. The aim of this work is to study the life cycle of the darkling beetle, considering both field and laboratory rearing conditions. As a result, the beetle species has different developmental stages (egg, larva, prepupa, pupa, and adult) that last about 15 months. Each year during the same period, adults emerge (early summer) and expire (late autumn), larvae hatch (late summer) and pupate (early summer). There is only one generation per year. Females began laying eggs in late July. The eggs were ovoid, white, and about 2.7 mm in length and 1.5 mm in width. Embryogenesis took an average of nine days. The first instar larvae were at initially only 4.5 mm long and ivory white in color. A brief description of the newly egg hatched larva was provided; thus, the nerve fibers innervating the apical setae in the antennae and ligula were detected. Further light microscopic examination of the embryo before hatching from the egg pointed out that the antennal sensilla are protected during the embryogenesis stage.

Várias espécies endêmicas de Blaps ocorrem na Tunísia, e a espécie Blaps nefrauensis nefrauensis foi relatada em Moulares (zona urbana no centro-oeste da Tunísia), onde vive e se reproduz em jardins domésticos e prédios antigos. O objetivo deste trabalho é estudar o ciclo de vida do besouro escuro, considerando as condições de criação em campo e em laboratório. Como resultado, a espécie de besouro tem diferentes estágios de desenvolvimento (ovo, larva, prepupa, pupa e adulto) que duram cerca de 15 meses. Todos os anos, durante o mesmo período, os adultos emergem (início do verão) e expiram (final do outono), as larvas eclodem (final do verão) e se tornam pupas (início do verão). Existe apenas uma geração por ano. As fêmeas começaram a botar ovos no final de julho. Os ovos eram ovóides, brancos, com cerca de 2,7 mm de comprimento e 1,5 mm de largura. A embriogênese demorou em média nove dias. As larvas de primeiro instar tinham inicialmente apenas 4,5 mm de comprimento e uma cor branca marfim. Foi fornecida uma breve descrição da larva recém-eclodida; assim, as fibras nervosas que inervam as cerdas apicais nas antenas e ligulas foram detectadas. Um exame microscópico de luz posterior do embrião antes da eclosão do ovo mostrou que as sensilas antenais são protegidas durante o estágio de embriogênese.