Towards the micropropagation of Euphorbia cyathophora Murray: a wild plant species with medicinal and ornamental potential / Micropropagação de Euphorbia cyathophora Murray: uma espécie de planta selvagem com potencial medicinal e ornamental

Euphorbia cyathophora Murray is a plant species with medicinal and ornamental potential but whose in vitro propagation is unknown. Two experiments were performed to know 1) the effect of light (WL) at 25±2 °C and 20 μmol m-2 s-1 luminous intensity, or darkness at 20±2 °C, for the first 20 days and subsequent placement in light (DKL) as previously described, and 2) the best combination of plant growth regulators: benzyl amino purine (BAP), kynetin (KIN), 2-isopentenyl adenine (2iP) and thidiazuron (TDZ) in combination with naphthaleneacetic acid (NAA) and the effect of both light conditions. The DKL treatment did not promote the growth of leaves, cotyledons, or plantlet height; in contrast, WL produced a more developed root system with early appearance of tertiary roots. In regards to the interaction of plant regulators and light effect, only the treatment with 1 mg BAP L-1 and 0.1 mg NAA L-1 generated shoots in both light conditions (DKL and WL). Darkness (DKL) generated more indirect greatest morphogenic responses (callus formation).(AU)

Euphorbia cyathophora Murray é uma espécie vegetal com potencial medicinal e ornamental, mas cuja propagação in vitro é desconhecida. Dois experimentos foram realizados para conhecer 1) o efeito da luz (WL) a 25±2 °C e 20 μmol m-2 s-1 intensidade luminosa, ou escuridão a 20±2 °C, nos primeiros 20 dias e posterior colocação em luz (DKL) como descrito anteriormente, e 2) a melhor combinação de reguladores de crescimento vegetal: benzil amina purina (BAP), kynetina (KIN), 2-isopentenil adenina (2iP) e thidiazuron (TDZ) em combinação com ácido naftalenoacético (ANA) e o efeito de ambas as condições de luz. O tratamento com DKL não promoveu o crescimento de folhas, cotilédones ou altura das plântulas. Em contraste, a WL produziu um sistema radicular mais desenvolvido com o aparecimento precoce de raízes terciárias. Com relação à interação dos reguladores vegetais e efeito luminoso, apenas o tratamento com 1 mg de BAP L-1 e 0,1 mg de NAA L-1 gerou brotações em ambas as condições de luz (DKL e WL). Escuridão (DKL) gerou mais respostas morfogênicas mais diretas (formação de calo).(AU)

Breaking of the dormancy of 'Daiane' apples by using thidiazuron / Quebra da dormência de macieiras 'Daiane' pelo uso do tidiazurom

The aim of this study was to evaluate the effect of different concentrations of thidiazuron (TDZ) combined with mineral oil (MO) or calcium nitrate on phenology, bud breaking and fruit production in Daiane apple trees. The experiment was carried in Caçador, SC, during the 2013/2014 and 2014/2015 seasons. The treatments evaluated were control (without application); TDZ 250 mg L-1 + MO 3,5%; TDZ 125 mg L-1 + MO 3,5%; TDZ 250 mg L-1 + calcium nitrate 5%; hydrogen cyanamide (HC) 0,7% + MO 3,5%. A randomized block design was used, with six repetitions. The application of bud break promoters reduced the flowering period in 2013/2014 season, leading to a higher bud break of axillary buds than control in the two seasons. TDZ + MO was more effective for bud break in axillary buds than the other treatments. TDZ + MO and HC + MO had similar effect on bud break in terminal buds, with higher values than TDZ + calcium nitrate applications. In 2013/2014 season, the control and TDZ 250 mg L-1 + MO and HC + MO treatments showed similar fruit production, being higher when compared to the other treatments. For 2014/2015, the fruit weight was higher in plants submitted to applications of TDZ 250 mg L-1 + MO and HC + MO. The TDZ combined with MO is efficient in bud break induction of Daiane apples, being a viable alternative to HC application.

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de diferentes concentrações de tidiazurom (TDZ) combinados com óleo mineral (OM) ou nitrato de cálcio na fenologia, indução da brotação e produção de frutos em macieira Daiane. O experimento foi conduzido no município de Caçador, SC, durante os ciclos 2013/2014 e 2014/2015. Os tratamentos avaliados foram: testemunha; TDZ 250 mg L-1 + OM 3,5%; TDZ 125 mg L-1 + OM 3,5%; TDZ 250 mg L-1 + nitrato de cálcio 5%; cianamida hidrogenada (CH) 0,7% + OM 3,5%. O delineamento experimental foi em blocos ao acaso, com seis repetições. A aplicação de indutores de brotação reduziu o período de florescimento na safra 2013/2014, ocasionando ainda maior brotação de gemas axilares em relação à testemunha, para as duas safras avaliadas. O TDZ + OM foi mais eficiente na brotação de gemas axilares comparativamente aos demais tratamentos. O TDZ + OM e a CH + OM apresentaram efeito similar na brotação de gemas terminais, sendo superiores à aplicação de TDZ + nitrato de Ca. No ciclo 2013/2014, a testemunha e os tratamentos TDZ 250 mg L-1 + OM e CH + OM apresentaram produção de frutos semelhantes, com maiores valores em comparação aos demais tratamentos. Para a safra 2014/2015, a massa média de frutos foi superior nas plantas submetidas às aplicações de TDZ 250 mg L-1 + OM e CH + OM. O TDZ, em combinação com o OM, é eficiente na indução da brotação de macieiras‘Daiane’, constituindo uma alternativa viável à aplicação de CH.

Breaking of the dormancy of 'Daiane' apples by using thidiazuron / Quebra da dormência de macieiras 'Daiane' pelo uso do tidiazurom

The aim of this study was to evaluate the effect of different concentrations of thidiazuron (TDZ) combined with mineral oil (MO) or calcium nitrate on phenology, bud breaking and fruit production in Daiane apple trees. The experiment was carried in Caçador, SC, during the 2013/2014 and 2014/2015 seasons. The treatments evaluated were control (without application); TDZ 250 mg L-1 + MO 3,5%; TDZ 125 mg L-1 + MO 3,5%; TDZ 250 mg L-1 + calcium nitrate 5%; hydrogen cyanamide (HC) 0,7% + MO 3,5%. A randomized block design was used, with six repetitions. The application of bud break promoters reduced the flowering period in 2013/2014 season, leading to a higher bud break of axillary buds than control in the two seasons. TDZ + MO was more effective for bud break in axillary buds than the other treatments. TDZ + MO and HC + MO had similar effect on bud break in terminal buds, with higher values than TDZ + calcium nitrate applications. In 2013/2014 season, the control and TDZ 250 mg L-1 + MO and HC + MO treatments showed similar fruit production, being higher when compared to the other treatments. For 2014/2015, the fruit weight was higher in plants submitted to applications of TDZ 250 mg L-1 + MO and HC + MO. The TDZ combined with MO is efficient in bud break induction of Daiane apples, being a viable alternative to HC application.(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de diferentes concentrações de tidiazurom (TDZ) combinados com óleo mineral (OM) ou nitrato de cálcio na fenologia, indução da brotação e produção de frutos em macieira Daiane. O experimento foi conduzido no município de Caçador, SC, durante os ciclos 2013/2014 e 2014/2015. Os tratamentos avaliados foram: testemunha; TDZ 250 mg L-1 + OM 3,5%; TDZ 125 mg L-1 + OM 3,5%; TDZ 250 mg L-1 + nitrato de cálcio 5%; cianamida hidrogenada (CH) 0,7% + OM 3,5%. O delineamento experimental foi em blocos ao acaso, com seis repetições. A aplicação de indutores de brotação reduziu o período de florescimento na safra 2013/2014, ocasionando ainda maior brotação de gemas axilares em relação à testemunha, para as duas safras avaliadas. O TDZ + OM foi mais eficiente na brotação de gemas axilares comparativamente aos demais tratamentos. O TDZ + OM e a CH + OM apresentaram efeito similar na brotação de gemas terminais, sendo superiores à aplicação de TDZ + nitrato de Ca. No ciclo 2013/2014, a testemunha e os tratamentos TDZ 250 mg L-1 + OM e CH + OM apresentaram produção de frutos semelhantes, com maiores valores em comparação aos demais tratamentos. Para a safra 2014/2015, a massa média de frutos foi superior nas plantas submetidas às aplicações de TDZ 250 mg L-1 + OM e CH + OM. O TDZ, em combinação com o OM, é eficiente na indução da brotação de macieiras‘Daiane, constituindo uma alternativa viável à aplicação de CH.(AU)

Organogenesis and plant selection by kanamycin of strawberry in vitro aiming at genetic transformation / Organogênese e seleção por canamicina de plantas de morangueiro in vitro visando a transformação genética

The success of genetic transformation of the strawberry (Fragaria x ananassa) is strongly influenced by the cultivar and depends on efficient regeneration and plant-transformed selection. In plant regeneration, efficient organogenesis depends on the concentrations of plant growth regulators that are present in the culture medium, and the response varies according to the explant type and cultivar. Similarly, in the selection of transformed plants, the sensitivity to selective agents induced by marker genes depends on the concentration of the selective substance in the regeneration medium and must be adjusted according to the chosen cultivar. The aim of this work was to test different combinations and concentrations of TDZ (Thidiazuron) and IBA (indolebutyric-acid) added to the base medium MS (MURASHIGE; SKOOG, 1962) for shoot regeneration of Camiño Real and Festival cultivars from leaf and petiole explants. In the case of Camiño Real, 1.0, 1.5 and 2.0 mg L-1 of TDZ combined with 0.1, 0.3 and 0.5 mg L-1 of IBA were tested. In the case of Festival, 1.0, 1.5 and 2.0 mg L-1 of TDZ combined with 0.1 and 0.3 mg L-1 of IBA were evaluated. Another aim was to define the lowest concentration of the selective agent Kanamycin (marker gene npt II) able to inhibit regeneration of the untransformed shoots. For this purpose, Kanamycin doses of 0, 2, 4, 6, 8 and 10 mg L-1 were added to the...(AU)

O sucesso da transformação genética do morangueiro (Fragaria x ananassa) é grandemente influenciado pela cultivar utilizada e dependente da eficiente regeneração e seleção do material transformado. Na regeneração das plantas, a organogênese depende da concentração de reguladores de crescimento presente no meio de cultivo e varia de acordo com a fonte de explante e a cultivar utilizada. Da mesma forma, na seleção das plantas transformadas, a sensibilidade à agentes seletivos induzida por genes marcadores, depende da concentração da substância seletiva no meio de regeneração e deve ser ajustada de acordo com a cultivar utilizada. O objetivo deste trabalho foi testar diferentes combinações e concentrações de TDZ (Thidiazuron) e AIB (Ácido Indolbutírico) adicionados ao meio básico MS (MURASHIGE; SKOOG, 1962) para a regeneração de brotos das cvs. Camiño Real e Festival a partir de explantes foliares e explantes peciolares. Para a cv. Camiño Real foram testados 1,0; 1,5 e 2,0 mg L-1 de TDZ combinadas com 0,1; 0,3 e 0,5 mg L-1 de AIB e para a cv. Festival foram testados 1,0; 1,5 e 2,0 mg L-1 de TDZ combinados com 0,1 e 0,3 mg L-1 de AIB. A partir dos resultados de regeneração, também se buscou definir a menor concentração do agente seletivo canamicina (gene marcador npt II), capaz de inibir a regeneração de brotos não transformados, testando-se adições de 0, 2, 4, 6, 8 e 10mg L-1 de...(AU)

In vitro propagation of Vriesea reitzii, a native epiphyte bromeliad from the Atlantic rainforest / Propagação in vitro de Vriesea reitzii, uma bromélia epífita nativa da Mata Atlântica

The induction of nodular culture (NC) and the subsequent development of microshoots of V. reitzii are considered an in vitro propagation model-system with high regenerative performance. Current research analyzed the determinant factors of the in vitro morphogenesis control of bromeliads. Seeds excised from mature capsules were grown on medium MS basic (MSB), liquid or gelled, supplemented or not with -naphthaleneacetic acid (NAA), 6-benzilaminopurine (BAP) or thidiazuron (TDZ). The regeneration and elongation of microshoots were evaluated from NC sub-cultivated on MSB medium on liquid culture medium supplemented with different concentrations of indolyl-3-acetic acid (IAA) and gibberellic acid (GA3). Plant growth regulators (PGR) supplemented into the medium MSB inhibited the germination of the seeds and induced NC in the second week of growth. The induced NC on MSB medium with NAA (4 µM) and sub-cultivated on MSB medium with NAA (2 µM) plus N6(2-isopentenyl) adenine (2-iP) (2 µM) showed granular texture and high rate of proliferation. NC sub-culture in MSB medium with IAA (4 µM) provided a higher average number of microshoots (1,478 shoots g-1 of NC). Shoots over 3.0 cm resulted in more than 95% ex vitro survival.(AU)

A indução de culturas nodulares (CNs) e subsequente desenvolvimento de microbrotos de V. reitzii configuraram-se em um sistema de alta performance regenerativa in vitro. No presente trabalho foram estudados os fatores determinantes do controle da morfogênese in vitro das CNs. Sementes excisadas de cápsulas maduras foram cultivadas em meio básico MS (MSB) líquido ou geleificado e suplementado ou não com ácido naftalenoacético (ANA), 6-benzilaminopurina (BAP) ou thidiazuron (TDZ). A partir das CNs subcultivadas em meio MSB, foi avaliada a regeneração e o alongamento de microbrotos em meio de cultura líquido suplementado com diferentes concentrações de ácido indolil-3-acético (AIA) combinados com ácido giberélico (AG3). A suplementação de fitorreguladores ao meio MSB inibiram a germinação das sementes e promoveram a indução de CNs na segunda semana de cultivo. As CNs induzidas em meio MSB suplementado com ANA (4 M) e subcultivadas em meio MSB suplementado com ANA (2 M) mais N6 (2-isopentenil) adenina (2-iP) (2 M) apresentaram textura granular e alta taxa de proliferação. O cultivo destas CNs em meio MSB suplementado com AIA (4 M) resultou no maior número médio de microbrotos (1.478 brotos g-1 de CN). Brotos maiores de 3,0 cm resultaram em mais de 95% de sobrevivência em ambiente ex vitro.(AU)

Regeneração in vitro via organogênese direta de Bauhinia cheilantha

Bauhinia cheilantha, known as "pata-de-vaca", is of great economic and ethnopharmacological importance in the semiarid Brazilian. Seeds are dormant which makes it difficult to obtain uniform plants in a short time before this, our study aimed to establish a micropropagation protocol for the species. Cotyledonary and nodal segments of seedlings grown in vitro were inoculated on Woody Plant Medium (WPM) supplemented with various concentrations of 6-benzylaminopurine (BAP), thidiazuron (TDZ) or kinetin (KN) to induce adventitious shoot regeneration. In the rooting phase, different concentrations of indole-3-butyric acid (IBA) and the activated charcoal were tested. The nodal segments showed organogenic capacity greater than the cotyledonary segment. The highest number of shoots (4.3 and 2.1) was obtained at 1.0mg L-1 TDZ and 1.5mg L-1 BAP, respectively. However, in the presence of TDZ was observed the smaller shoots.The use of 2.0mg L-1 IBA within activated charcoal (AC) promoted the highest percentage of rooting (about 60.0%) and number of adventitious roots (2.5). The rooted shoots were transferred to greenhouse and successfully acclimatized.

Bauhinia cheilantha, conhecida como "pata-de-vaca", possui grande relevância econômica e etnofarmacológica no semiárido brasileiro. Nas suas sementes constatou-se dormência, o que dificulta a obtenção de plantas uniformes e em curto período de tempo, diante disso, o presente trabalho objetivou estabelecer um protocolo de micropropagação para a espécie. Os segmentos cotiledonar e nodal de plântulas emergidas in vitro foram inoculados em meio de cultura WPM, suplementado com diferentes concentrações de 6-benzilaminopurina (BAP), thidiazuron (TDZ) ou cinetina (KIN) para induzir a regeneração de brotos adventícios. Na fase de enraizamento foram testadas diferentes concentrações de ácido indol-3-butírico (AIB) e de carvão ativado. Nos segmentos nodais houve maior capacidade organogênica do que no segmento cotiledonar. O maior número de brotos (4,3 e 2,1) foi obtido com 1,0mg L-1 de TDZ e 1,5mg L-1 de BAP, respectivamente. No entanto, na presença de TDZ foram observadas as menores brotações. A presença de 2,0mg L-1 de AIB com carvão ativado (CA) promoveu a maior porcentagem de enraizamento (cerca de 60,0%) e maior número de raízes adventícias (2,5). As brotações enraizadas foram transferidas para casa de vegetação e aclimatizadas com sucesso.

Regeneração in vitro via organogênese direta de Bauhinia cheilantha

Bauhinia cheilantha, known as "pata-de-vaca", is of great economic and ethnopharmacological importance in the semiarid Brazilian. Seeds are dormant which makes it difficult to obtain uniform plants in a short time before this, our study aimed to establish a micropropagation protocol for the species. Cotyledonary and nodal segments of seedlings grown in vitro were inoculated on Woody Plant Medium (WPM) supplemented with various concentrations of 6-benzylaminopurine (BAP), thidiazuron (TDZ) or kinetin (KN) to induce adventitious shoot regeneration. In the rooting phase, different concentrations of indole-3-butyric acid (IBA) and the activated charcoal were tested. The nodal segments showed organogenic capacity greater than the cotyledonary segment. The highest number of shoots (4.3 and 2.1) was obtained at 1.0mg L-1 TDZ and 1.5mg L-1 BAP, respectively. However, in the presence of TDZ was observed the smaller shoots.The use of 2.0mg L-1 IBA within activated charcoal (AC) promoted the highest percentage of rooting (about 60.0%) and number of adventitious roots (2.5). The rooted shoots were transferred to greenhouse and successfully acclimatized.

Bauhinia cheilantha, conhecida como "pata-de-vaca", possui grande relevância econômica e etnofarmacológica no semiárido brasileiro. Nas suas sementes constatou-se dormência, o que dificulta a obtenção de plantas uniformes e em curto período de tempo, diante disso, o presente trabalho objetivou estabelecer um protocolo de micropropagação para a espécie. Os segmentos cotiledonar e nodal de plântulas emergidas in vitro foram inoculados em meio de cultura WPM, suplementado com diferentes concentrações de 6-benzilaminopurina (BAP), thidiazuron (TDZ) ou cinetina (KIN) para induzir a regeneração de brotos adventícios. Na fase de enraizamento foram testadas diferentes concentrações de ácido indol-3-butírico (AIB) e de carvão ativado. Nos segmentos nodais houve maior capacidade organogênica do que no segmento cotiledonar. O maior número de brotos (4,3 e 2,1) foi obtido com 1,0mg L-1 de TDZ e 1,5mg L-1 de BAP, respectivamente. No entanto, na presença de TDZ foram observadas as menores brotações. A presença de 2,0mg L-1 de AIB com carvão ativado (CA) promoveu a maior porcentagem de enraizamento (cerca de 60,0%) e maior número de raízes adventícias (2,5). As brotações enraizadas foram transferidas para casa de vegetação e aclimatizadas com sucesso.

Thidiazuron affects the quality of 'Gala' apples stored under controlled atmosphere

This work was carried out aiming to evaluate the effect of thidiazuron (TDZ) on the quality of 'Gala' apples stored under controlled atmosphere (CA) conditions. Plants were sprayed at full bloom with TDZ at 0, 10, 20, or 40g ha-1 (a.i.). Harvested fruits were then stored in CA with 1.0+2.5, 1.5+2.5 and 1.5+5.0 (kPa O2+kPa CO2), both at 0.5°C. In addition, the partial pressure of 1.5kPa of O2+2.5kPa of CO2 was also evaluated at -0.5°C. Higher flesh firmness and titratable acidity was obtained by applying 20 or 40g ha-1 TDZ. Furthermore, these TDZ doses decreased the respiration rate as well as the occurrence of flesh breakdown, mealiness and decay. The application of TDZ at doses ranging from 20 to 40g ha-1 maintains higher fruit quality for up to 8 months under CA. In addition, the storage of 'Gala' apples under CA with 1.0kPa O2+2.5kPa CO2 at 0.5°C results in higher flesh firmness and titratable acidity. Moreover, this CA condition reduces the incidence of flesh breakdown, mealiness and postharvest decay in 'Gala' apple fruits.

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da aplicação de thidiazuron (TDZ) na qualidade de maçãs 'Gala' armazenadas em condições de atmosfera controlada (AC). Avaliou-se o efeito do TDZ nas doses de 0, 10, 20 e 40g ha-1 (i.a.), aplicadas no pleno florescimento. Após a colheita, os frutos foram armazenados em condições de AC com 1,0+2,5; 1,5+2,5 ou 1,5+5,0 (kPa de O2+kPa de CO2), ambas a 0,5°C. Além disso, a pressão parcial de 1,5kPa de O2+2,5kPa de CO2 também foi avaliada a -0,5°C. Doses de TDZ entre 20 e 40g ha-1 mantiveram maior firmeza da polpa e acidez titulável. Além disso, essas mesmas doses reduziram a atividade respiratória e a incidência de degenerescência da polpa, de polpa farinhenta e de podridões. A aplicação pré-colheita de TDZ, especialmente em doses entre 20 e 40g ha-1, melhora a qualidade de maçãs 'Gala' armazenadas em AC por até oito meses. Em relação às condições de AC avaliadas, o uso de 1,0kPa de O2+2,5kPa de CO2 a 0,5°C resultou em frutos mais firmes e com maior acidez titulável, além de menor incidência de degenerescência da polpa, de polpa farinhenta e de podridões.

Thidiazuron affects the quality of 'Gala' apples stored under controlled atmosphere

This work was carried out aiming to evaluate the effect of thidiazuron (TDZ) on the quality of 'Gala' apples stored under controlled atmosphere (CA) conditions. Plants were sprayed at full bloom with TDZ at 0, 10, 20, or 40g ha-1 (a.i.). Harvested fruits were then stored in CA with 1.0+2.5, 1.5+2.5 and 1.5+5.0 (kPa O2+kPa CO2), both at 0.5°C. In addition, the partial pressure of 1.5kPa of O2+2.5kPa of CO2 was also evaluated at -0.5°C. Higher flesh firmness and titratable acidity was obtained by applying 20 or 40g ha-1 TDZ. Furthermore, these TDZ doses decreased the respiration rate as well as the occurrence of flesh breakdown, mealiness and decay. The application of TDZ at doses ranging from 20 to 40g ha-1 maintains higher fruit quality for up to 8 months under CA. In addition, the storage of 'Gala' apples under CA with 1.0kPa O2+2.5kPa CO2 at 0.5°C results in higher flesh firmness and titratable acidity. Moreover, this CA condition reduces the incidence of flesh breakdown, mealiness and postharvest decay in 'Gala' apple fruits.

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da aplicação de thidiazuron (TDZ) na qualidade de maçãs 'Gala' armazenadas em condições de atmosfera controlada (AC). Avaliou-se o efeito do TDZ nas doses de 0, 10, 20 e 40g ha-1 (i.a.), aplicadas no pleno florescimento. Após a colheita, os frutos foram armazenados em condições de AC com 1,0+2,5; 1,5+2,5 ou 1,5+5,0 (kPa de O2+kPa de CO2), ambas a 0,5°C. Além disso, a pressão parcial de 1,5kPa de O2+2,5kPa de CO2 também foi avaliada a -0,5°C. Doses de TDZ entre 20 e 40g ha-1 mantiveram maior firmeza da polpa e acidez titulável. Além disso, essas mesmas doses reduziram a atividade respiratória e a incidência de degenerescência da polpa, de polpa farinhenta e de podridões. A aplicação pré-colheita de TDZ, especialmente em doses entre 20 e 40g ha-1, melhora a qualidade de maçãs 'Gala' armazenadas em AC por até oito meses. Em relação às condições de AC avaliadas, o uso de 1,0kPa de O2+2,5kPa de CO2 a 0,5°C resultou em frutos mais firmes e com maior acidez titulável, além de menor incidência de degenerescência da polpa, de polpa farinhenta e de podridões.

In vitro shoot regeneration of boldo from leaf explants

A shoot regeneration system for Plectranthus neochilus was studied from leaf explants. Leaves developed under in vitro conditions were cultured on Wood Plant Medium supplemented with 0.2mg dm-3 -naphthaleneacetic acid (NAA) and different 6-benzilaminopurine (BAP) or thidiazuron (TDZ) concentrations (0, 1.5, 3.0, 4.5 and 6.0mg dm-3). An increase in percentage of responsive explants (85.3%) and in the number of shoots developed per explant (3.2) was observed when the explants were treated with 5.3 and 4.7mg dm-3 BAP, respectively. The leaf explants cultured on media supplemented with TDZ became vitreous and did not form buds. The regeneration system used is efficient for boldo bud induction and shoot development, showing high potential for advanced cellular and molecular studies.

O objetivo do presente trabalho foi adequar um protocolo de regeneração a partir de explantes foliares de Plectranthus neochilus. Folhas desenvolvidas sob condições in vitro foram cultivadas em meio WPM suplementado com 0,2mg L-1 de ácido -naftaleno acético (ANA) e diferentes concentrações (0; 1,5; 3,0; 4,5 e 6,0mg L-1) de 6-benzilaminopurina (BAP) ou thidiazuron (TDZ). Observou-se o aumento na percentagem de explantes regenerantes (85,3%) e no número de brotações por explante (3,2), quando os explantes foliares foram cultivados em meio contendo 5,3 e 4,7mg L-1 de BAP, respectivamente. Os explantes foliares cultivados em TDZ tornaram-se vítreos e não formaram gemas. O protocolo utilizado é eficiente para a indução de gemas e brotações, demonstrando a potencialidade de seu uso para estudos mais avançados de biologia celular e molecular.

In vitro shoot regeneration of boldo from leaf explants

A shoot regeneration system for Plectranthus neochilus was studied from leaf explants. Leaves developed under in vitro conditions were cultured on Wood Plant Medium supplemented with 0.2mg dm-3 -naphthaleneacetic acid (NAA) and different 6-benzilaminopurine (BAP) or thidiazuron (TDZ) concentrations (0, 1.5, 3.0, 4.5 and 6.0mg dm-3). An increase in percentage of responsive explants (85.3%) and in the number of shoots developed per explant (3.2) was observed when the explants were treated with 5.3 and 4.7mg dm-3 BAP, respectively. The leaf explants cultured on media supplemented with TDZ became vitreous and did not form buds. The regeneration system used is efficient for boldo bud induction and shoot development, showing high potential for advanced cellular and molecular studies.

O objetivo do presente trabalho foi adequar um protocolo de regeneração a partir de explantes foliares de Plectranthus neochilus. Folhas desenvolvidas sob condições in vitro foram cultivadas em meio WPM suplementado com 0,2mg L-1 de ácido -naftaleno acético (ANA) e diferentes concentrações (0; 1,5; 3,0; 4,5 e 6,0mg L-1) de 6-benzilaminopurina (BAP) ou thidiazuron (TDZ). Observou-se o aumento na percentagem de explantes regenerantes (85,3%) e no número de brotações por explante (3,2), quando os explantes foliares foram cultivados em meio contendo 5,3 e 4,7mg L-1 de BAP, respectivamente. Os explantes foliares cultivados em TDZ tornaram-se vítreos e não formaram gemas. O protocolo utilizado é eficiente para a indução de gemas e brotações, demonstrando a potencialidade de seu uso para estudos mais avançados de biologia celular e molecular.

In vitro shoot regeneration of boldo from leaf explants

A shoot regeneration system for Plectranthus neochilus was studied from leaf explants. Leaves developed under in vitro conditions were cultured on Wood Plant Medium supplemented with 0.2mg dm-3 -naphthaleneacetic acid (NAA) and different 6-benzilaminopurine (BAP) or thidiazuron (TDZ) concentrations (0, 1.5, 3.0, 4.5 and 6.0mg dm-3). An increase in percentage of responsive explants (85.3%) and in the number of shoots developed per explant (3.2) was observed when the explants were treated with 5.3 and 4.7mg dm-3 BAP, respectively. The leaf explants cultured on media supplemented with TDZ became vitreous and did not form buds. The regeneration system used is efficient for boldo bud induction and shoot development, showing high potential for advanced cellular and molecular studies.

O objetivo do presente trabalho foi adequar um protocolo de regeneração a partir de explantes foliares de Plectranthus neochilus. Folhas desenvolvidas sob condições in vitro foram cultivadas em meio WPM suplementado com 0,2mg L-1 de ácido -naftaleno acético (ANA) e diferentes concentrações (0; 1,5; 3,0; 4,5 e 6,0mg L-1) de 6-benzilaminopurina (BAP) ou thidiazuron (TDZ). Observou-se o aumento na percentagem de explantes regenerantes (85,3%) e no número de brotações por explante (3,2), quando os explantes foliares foram cultivados em meio contendo 5,3 e 4,7mg L-1 de BAP, respectivamente. Os explantes foliares cultivados em TDZ tornaram-se vítreos e não formaram gemas. O protocolo utilizado é eficiente para a indução de gemas e brotações, demonstrando a potencialidade de seu uso para estudos mais avançados de biologia celular e molecular.

Optimization of in vitro organogenesis in passion fruit (Passiflora edulis f. flavicarpa)

In vitro organogenesis of passion fruit was studied by the induction of adventitious buds from leaf discs in culture media supplemented with benzyladenine (BAP) or thidiazuron (TDZ). To minimize adverse effects of ethylene accumulation on shoot development, silver nitrate (AgNO3) was added to the induction media. Both BAP (0; 2.2; 4.4; 6.6 µmol L-1) and TDZ (0; 1.1; 2.2; 3.4 µmol L-1) were effective in promoting shoot development. Although no significant differences were detected using AgNO3 (23.5 µmol L-1), buds grown in AgNO3-supplemented media were more vigorous. The number of explants with buds obtained using TDZ and AgNO3-supplemented media (5.6) were higher than those obtained using BAP and AgNO3 (3.0). MSM + giberrellic acid (GA3), MSM + coconut water, and ½ MSM culture media were tested for shoot bud elongation, incubated in flasks covered with either non-vented or vented lids. Best results were obtained by culturing buds in MSM + coconut water media in flasks covered with vented lids. Plantlets transferred to MSM + indol butyric acid (IBA) media rooted in a 30-day period. Passion fruit organogenesis was enhanced by using TDZ and AgNO3 for bud induction. Transferring the buds to MSM + coconut water media and incubating in flasks with vented lids favored shoot elongation and plantlet development.

A organogênese in vitro de maracujá foi estudada pela indução de gemas adventícias em discos de folha cultivados em meio de cultura suplementado com benziladenina (BAP) ou thidiazuron (TDZ). Nitrato de prata (AgNO3) foi adicionado ao meio de cultura de indução de gemas adventícias para minimizar o efeito do acúmulo de etileno no desenvolvimento dos brotos. Tanto BAP (0; 2,2; 4,4; 6,6 µmol L-1) como TDZ (0; 1,1; 2,2; 3,4 µmol L-1) foram eficientes em promover o desenvolvimento de brotos. Embora diferenças significativas no uso de AgNO3 (23,5 µmol L-1) não tenham sido detectadas, gemas adventícias desenvolvidas em meio de cultura suplementado com AgNO3 eram mais vigorosas. O número de explantes com gemas obtidos no meio de cultura suplementado com TDZ e AgNO3 (5,6) foi maior do que aquele obtido com BAP e AgNO3 (3,0). Os meios de cultura MSM + ácido giberélico (GA3), MSM + água de coco ou ½ MSM foram utilizados para o alongamento dos brotos, os quais foram incubados em frascos com tampas ventiladas ou tampas normais. Os melhores resultados foram obtidos cultivando-se as gemas adventícias no meio de cultura MSM + água de coco em frascos com tampas ventiladas. As plântulas transferidas para meio de cultura MSM + ácido indol butírico enraizaram num período de 30 dias. A organogênese in vitro de maracujazeiro foi otimizada utilizando-se TDZ + AgNO3 para a indução de gemas adventícias. A transferência das gemas para meio de cultura MSM + água de coco e a incubação em frascos com tampas ventiladas favoreceu o alongamento e o desenvolvimento de plântulas.

Optimization of in vitro organogenesis in passion fruit (Passiflora edulis f. flavicarpa)

In vitro organogenesis of passion fruit was studied by the induction of adventitious buds from leaf discs in culture media supplemented with benzyladenine (BAP) or thidiazuron (TDZ). To minimize adverse effects of ethylene accumulation on shoot development, silver nitrate (AgNO3) was added to the induction media. Both BAP (0; 2.2; 4.4; 6.6 µmol L-1) and TDZ (0; 1.1; 2.2; 3.4 µmol L-1) were effective in promoting shoot development. Although no significant differences were detected using AgNO3 (23.5 µmol L-1), buds grown in AgNO3-supplemented media were more vigorous. The number of explants with buds obtained using TDZ and AgNO3-supplemented media (5.6) were higher than those obtained using BAP and AgNO3 (3.0). MSM + giberrellic acid (GA3), MSM + coconut water, and ½ MSM culture media were tested for shoot bud elongation, incubated in flasks covered with either non-vented or vented lids. Best results were obtained by culturing buds in MSM + coconut water media in flasks covered with vented lids. Plantlets transferred to MSM + indol butyric acid (IBA) media rooted in a 30-day period. Passion fruit organogenesis was enhanced by using TDZ and AgNO3 for bud induction. Transferring the buds to MSM + coconut water media and incubating in flasks with vented lids favored shoot elongation and plantlet development.

A organogênese in vitro de maracujá foi estudada pela indução de gemas adventícias em discos de folha cultivados em meio de cultura suplementado com benziladenina (BAP) ou thidiazuron (TDZ). Nitrato de prata (AgNO3) foi adicionado ao meio de cultura de indução de gemas adventícias para minimizar o efeito do acúmulo de etileno no desenvolvimento dos brotos. Tanto BAP (0; 2,2; 4,4; 6,6 µmol L-1) como TDZ (0; 1,1; 2,2; 3,4 µmol L-1) foram eficientes em promover o desenvolvimento de brotos. Embora diferenças significativas no uso de AgNO3 (23,5 µmol L-1) não tenham sido detectadas, gemas adventícias desenvolvidas em meio de cultura suplementado com AgNO3 eram mais vigorosas. O número de explantes com gemas obtidos no meio de cultura suplementado com TDZ e AgNO3 (5,6) foi maior do que aquele obtido com BAP e AgNO3 (3,0). Os meios de cultura MSM + ácido giberélico (GA3), MSM + água de coco ou ½ MSM foram utilizados para o alongamento dos brotos, os quais foram incubados em frascos com tampas ventiladas ou tampas normais. Os melhores resultados foram obtidos cultivando-se as gemas adventícias no meio de cultura MSM + água de coco em frascos com tampas ventiladas. As plântulas transferidas para meio de cultura MSM + ácido indol butírico enraizaram num período de 30 dias. A organogênese in vitro de maracujazeiro foi otimizada utilizando-se TDZ + AgNO3 para a indução de gemas adventícias. A transferência das gemas para meio de cultura MSM + água de coco e a incubação em frascos com tampas ventiladas favoreceu o alongamento e o desenvolvimento de plântulas.

Organogênese do caquizeiro a partir de segmentos radiculares

The production of japanese persimmon (Diospyros kaki) plants by grafting on seedling rootstocks results on vegetative variability problems. The goal of this work was to develop a protocol for bud regeneration using buds obtained by indirect root organogenesis. Explants were obtained by root segments of embryos germinated from mature seeds. The breeds were isolated in vitro on MS½NO3 medium. Seeds were sterilized by immersion in 70% ethanol for 1 min following immersion in 2.5% sodium hypochlorite for 20 min. They were then washed four times with autoclaved water. In the first experimento, root segments of 2cm were isolated in MS½NO3 culture medium supplemented with 0.01µM indoleacetic acid and four cytokinins (zeatin, 6-benzylaminopurine, 2-isopentenyladenine and thidiazuron) at concentrations of 1 and 10µM each. The second experiment evaluated four periods in media contaning 10µM indolebutyric acid (0, 5, 10 and 15 days) for shoot rooting. The highest bud regeneration (1.2 buds/explant) was observed when a combination of 1µM zeatin and 0.01µM indoleacetic acid was used. The juvenile buds obtained showed natural potential for rooting, but additional experiments are needed to confirm the auxin effects.

A produção de mudas de caquizeiro (Diospyros kaki) pelo processo da enxertia sobre porta-enxertos provenientes de sementes, ocasiona problemas de desuniformidade vegetativa. O objetivo do trabalho foi contribuir para o desenvolvimento de um protocolo para a regeneração de brotações de caquizeiro do tipo café, a partir de raízes por organogênese indireta. Segmentos radiculares obtidos de embriões germinados in vitro foram isolados de sementes de frutos maduros em meio MS½NO3. As sementes receberam assepsia pela imersão em etanol 70% por um minuto, em solução de hipoclorito de sódio 2,5% por 20 minutos e quatro lavagens em água esterilizada. No primeiro experimento, os segmentos radiculares de 2cm foram isolados em meio de cultura MS½NO3 acrescido de 0,01µM de ácido indolacético e quatro tipos de citocininas nas concentrações 1 e 10µM: zeatina, 6-benzilaminopurina, 2-isopenteniladenina e thidiazuron. No segundo experimento, para o enraizamento das brotações, foram testados quatro períodos de permanência em meio com 10µM de ácido indolbutírico: 0, 5 10 e 15 dias. A maior regeneração de brotos (1,2 brotos por explante) ocorreu na combinação 1µM de zeatina com 0,01µM de ácido indolacético. As brotações juvenis obtidas possuem potencial natural para o enraizamento, sendo necessário novos estudos para confirmar o efeito da aplicação de auxinas.

Organogênese do caquizeiro a partir de segmentos radiculares

The production of japanese persimmon (Diospyros kaki) plants by grafting on seedling rootstocks results on vegetative variability problems. The goal of this work was to develop a protocol for bud regeneration using buds obtained by indirect root organogenesis. Explants were obtained by root segments of embryos germinated from mature seeds. The breeds were isolated in vitro on MS½NO3 medium. Seeds were sterilized by immersion in 70% ethanol for 1 min following immersion in 2.5% sodium hypochlorite for 20 min. They were then washed four times with autoclaved water. In the first experimento, root segments of 2cm were isolated in MS½NO3 culture medium supplemented with 0.01µM indoleacetic acid and four cytokinins (zeatin, 6-benzylaminopurine, 2-isopentenyladenine and thidiazuron) at concentrations of 1 and 10µM each. The second experiment evaluated four periods in media contaning 10µM indolebutyric acid (0, 5, 10 and 15 days) for shoot rooting. The highest bud regeneration (1.2 buds/explant) was observed when a combination of 1µM zeatin and 0.01µM indoleacetic acid was used. The juvenile buds obtained showed natural potential for rooting, but additional experiments are needed to confirm the auxin effects.

A produção de mudas de caquizeiro (Diospyros kaki) pelo processo da enxertia sobre porta-enxertos provenientes de sementes, ocasiona problemas de desuniformidade vegetativa. O objetivo do trabalho foi contribuir para o desenvolvimento de um protocolo para a regeneração de brotações de caquizeiro do tipo café, a partir de raízes por organogênese indireta. Segmentos radiculares obtidos de embriões germinados in vitro foram isolados de sementes de frutos maduros em meio MS½NO3. As sementes receberam assepsia pela imersão em etanol 70% por um minuto, em solução de hipoclorito de sódio 2,5% por 20 minutos e quatro lavagens em água esterilizada. No primeiro experimento, os segmentos radiculares de 2cm foram isolados em meio de cultura MS½NO3 acrescido de 0,01µM de ácido indolacético e quatro tipos de citocininas nas concentrações 1 e 10µM: zeatina, 6-benzilaminopurina, 2-isopenteniladenina e thidiazuron. No segundo experimento, para o enraizamento das brotações, foram testados quatro períodos de permanência em meio com 10µM de ácido indolbutírico: 0, 5 10 e 15 dias. A maior regeneração de brotos (1,2 brotos por explante) ocorreu na combinação 1µM de zeatina com 0,01µM de ácido indolacético. As brotações juvenis obtidas possuem potencial natural para o enraizamento, sendo necessário novos estudos para confirmar o efeito da aplicação de auxinas.

Calogênese do híbrido Theobroma grandiflorum x T. obovatum (Sterculiaceae)

Decline of cocoa plantations in Amazonia has been attributed to Witches-broom-disease (Crinipellis perniciosa). An interspecific hybrid (Theobroma grandiflorum x T. obovatum) has demonstrated resistance to this disease. Calogenesis of this hybrid was evaluated, in preparation for its mass propagation. The explants used (tegument, cotyledons and embryos) were developed in sterile conditions in LPm media plus coconut milk (50 ml/l), glucose (20 g/l), 2,4 - D (2 mg/l), Thidiazuron - TDZ at concentrations of 0, 5 e 10 µg/l, and activated charcoal (2 g/l) in gelrite (2 g/l) at pH 5.8. Each concentration of TDZ x kind of explant was considered a treatment and were kept in the dark at a temperature of 22 ± 2 ºC. Explants did not show significant differences in the proportion of callus recovery (p= 0,14) although cotyledons did have the highest value. TDZ level did not influence callus recovery (p= 0,94). Different explants resulted in different frequencies of callus development (p= 0,023) but were not been influenced by the doses of TDZ (p = 0,66). Cotyledon explants displayed the highest values for frequency of callus development. There was also a slight trend that lower levels of TDZ resulted in higher frequencies of callus development. There was no interaction between kind of callus/flasks x doses of TDZ (p = 0,32).

O declínio da cacauicultura na amazônia tem sido causado pela doença vassoura-de-bruxa (Crinipellis perniciosa). Um híbrido interespecífico do mesmo gênero (Theobroma grandiflorum x T. obovatum) tem demonstrando resistência a esta doença. Avaliou-se a calogênese deste híbrido com a finalidade de sua propagação massiva. Os explantes usados (tegumento, cotilédone e embrião) foram postos para desenvolver em condições estéreis em meio de cultura LPm mais água de coco (50 ml/l), glucose (20 g/l), 2,4 - D (2 mg/l), Thidiazuron - TDZ nas concentrações de 0, 5 e 10 µg/l, carvão ativado (2 g/l) em gelrite (2 g/l) a um pH de 5,8. Cada concentração de TDZ x tipo de tecido foi considerado um tratamento. As culturas foram mantidas no escuro, à temperatura de 22 ± 2 ºC. Os tecidos não mostraram diferenças significativas quanto a proporção do explante recoberto por calos (p= 0,14) embora notou-se que nos cotilédones tenha sido maior. A dosagem de TDZ nitidamente não influenciou no recobrimento de calos (p= 0,94). Quanto a freqüência, os tecidos mostraram diferentes capacidades de desenvolver calos (p= 0,02) sem mostrar-se influenciados pela dosagem de TDZ (p = 0,66). Os explantes de cotilédones foram os que formaram calos em maior freqüência. Houve uma leve tendência de que quanto menor a dosagem de TDZ maior a freqüência de calos obtidos. Não foi constatada interação entre tipo de calo/frasco x dosagem de TDZ (p = 0,32).

Calogênese e brotações adventícias em tecido somático de Kiwi suplementados com Thidiazuron

Leaf discs (0.46cm² were collected from adventitious shoots of 'Matua' Kiwi cultivated in vitro and were conditioned during 24 hours in liquid medium with 2.4- D (5mg/l). After this period they were cultured in MS medium additioned with Thidiazuron in the concentrations following: 0; 0.25; 0.5; 1; 2; 4; 8 and 16mg/l. Explants were inoculated with the adaxial surface in contact with the culture medium and were maintained for about three weeks at 25°C in darkness. After this time they were kept for three weeks in a growth room and exposed to a 16 hour photoperiod, light intensity of approximately 2,000 lux and temperature of 23 ± 2°C. The higher concentrations of Thidiazuron (8 and 16mg/l) were phytotoxic, leading to explant death. Rooting was observed only in the control treatment. Callus intensity formation, adventitious shoots number, callus dry matter weight and bud number showed a quadratic response to the Thidiazuron concentrations. Concentrations of Thidimuron were not efficient to increase the adventitious shoot number of Kiwi. Callus intensity increased until 2.21 mg/l Thidiazuron concentrations, and declined afterwards.

Discos foliares com 0.46cm² foram coletados de brotações adventícias de Kiwi cultivados in vitro pertencentes a cv. Matua e condicionados por 24 horas em meio líquido contendo 2,4- D (5mg/l). Após este período o material foi cultivado em meio MS acrescido com Thidiazuron nas seguintes concentrações: 0; 0,25; 0,5; 1; 2; 4; 8 e 16mg/l. Os explantes inoculados com a superfície adaxial em contato com o meio de cultura permaneceram três semanas em ambiente escuro a temperatura de 25°C e, posteriormente, foram transferidos para sala de crescimento com fotoperíodo de 16 horas, 2.000 lux de luminância e temperatura de 23 ± 2°C. Nesse ambiente os tratamentos foram mantidos por mais três semanas e então avaliados. As doses mais elevadas de Thidiazuron (8 e 16 mg/l ) mostraram-se fitotóxicas, levando os explantes à morte. A formação de raízes foi observada apenas no tratamento controle. A intensidade de formação de calos, numero de brotações adventícias, peso da matéria seca e o número de gemas apresentaram comportamento quadrático, em relação às concentrações de Thidiazuron. O Thidiazuron não foi eficiente para formar brotações adventícias de Kiwi. A intensidade de formação de calo aumentou nas concentrações de até 2,21mg/l deThidiazuron, diminuindo a partir deste valor.

Calogênese e brotações adventícias em tecido somático de Kiwi suplementados com Thidiazuron

Leaf discs (0.46cm² were collected from adventitious shoots of 'Matua' Kiwi cultivated in vitro and were conditioned during 24 hours in liquid medium with 2.4- D (5mg/l). After this period they were cultured in MS medium additioned with Thidiazuron in the concentrations following: 0; 0.25; 0.5; 1; 2; 4; 8 and 16mg/l. Explants were inoculated with the adaxial surface in contact with the culture medium and were maintained for about three weeks at 25°C in darkness. After this time they were kept for three weeks in a growth room and exposed to a 16 hour photoperiod, light intensity of approximately 2,000 lux and temperature of 23 ± 2°C. The higher concentrations of Thidiazuron (8 and 16mg/l) were phytotoxic, leading to explant death. Rooting was observed only in the control treatment. Callus intensity formation, adventitious shoots number, callus dry matter weight and bud number showed a quadratic response to the Thidiazuron concentrations. Concentrations of Thidimuron were not efficient to increase the adventitious shoot number of Kiwi. Callus intensity increased until 2.21 mg/l Thidiazuron concentrations, and declined afterwards.

Discos foliares com 0.46cm² foram coletados de brotações adventícias de Kiwi cultivados in vitro pertencentes a cv. Matua e condicionados por 24 horas em meio líquido contendo 2,4- D (5mg/l). Após este período o material foi cultivado em meio MS acrescido com Thidiazuron nas seguintes concentrações: 0; 0,25; 0,5; 1; 2; 4; 8 e 16mg/l. Os explantes inoculados com a superfície adaxial em contato com o meio de cultura permaneceram três semanas em ambiente escuro a temperatura de 25°C e, posteriormente, foram transferidos para sala de crescimento com fotoperíodo de 16 horas, 2.000 lux de luminância e temperatura de 23 ± 2°C. Nesse ambiente os tratamentos foram mantidos por mais três semanas e então avaliados. As doses mais elevadas de Thidiazuron (8 e 16 mg/l ) mostraram-se fitotóxicas, levando os explantes à morte. A formação de raízes foi observada apenas no tratamento controle. A intensidade de formação de calos, numero de brotações adventícias, peso da matéria seca e o número de gemas apresentaram comportamento quadrático, em relação às concentrações de Thidiazuron. O Thidiazuron não foi eficiente para formar brotações adventícias de Kiwi. A intensidade de formação de calo aumentou nas concentrações de até 2,21mg/l deThidiazuron, diminuindo a partir deste valor.

Efeito de thidiazuron na indução e manutenção de calos de erva-baleeira (Cordia verbenacea L.)

The influence of thidiazuron on calius formation and maintenance of Corola verbenacea was evaluated. Stem segments with 3 to 4cm length were excisedfrom greenhouse plants and surface sterilized with 30% commercial sodium hypochiorite for 10 minutes. Explants were inoculated with 5mm on Murashige and Skoog (MVRASHIGE & SKOOG, 1962) - MSsolid médium (0.6%) suppiemented with 0.22, 0.68, 2.04 and 6.13muM TDZ. Calius induction was observed 10 to 15 days after incubation. The media contaming, 2.04 and 6.13uM TDZ induced 75% expiam with calius. The calius when transferred to fresh culture médium exhibited active growth. The treatments containing lower concentration induced 50% expiam with caltus that when transferred to fresh culture médium, showed no development.

O trabalho teve como objetivo avaliar a influência do Thidiazuron (TDZ) na formação e manutenção de calos de Cordia verbenacea. Segmentos caulinares com 3 a 4cm de comprimento provenientes de mudas cultivadas em casa de vegetação foram desinfestados em solução contendo hipoclorito de sódio comercial a 30% e duas gotas de detergente por 10 minutos, sendo 5 minutos em agitação. Posteriormente, foram excisados e inoculados com 5mm de tamanho em meio sólido a 0,6% de Murashige & Skoog (MURASHIGE & SKOOG, 1962) - MS, complementado com 0,22; 0,68: 2,04 e 6,l3uM de TDZ. A formação de calos ocorreu em todos os tratamentos com 10 a 15 dias de cultivo Os tratamentos que apresentaram o explante com a maior área coberta com calos, em média 75%, foram 2,04 e 6,13miM de TDZ. Somente nesses tratamentos os calos aumentaram de volume e mantiveram a coloração inicial quando transferidos para o meio fresco de cultura. Os tratamentos com menores concentrações de TDZ apresentaram explantes com 50% da área coberta com calos e quando transferidos para o meio fresco de cultura ocorreu a paralisação do crescimento com a posterior morte dos calos.