Salinomycin intoxication in pigs associated with the use of tiamulin in the State of Santa Catarina, Brazil / Intoxicação por salinomicina em suínos associado ao uso de tiamulina no Estado de Santa Catarina

This paper describes a spontaneous outbreak of toxic myopathy in finishing pigs due to the ingestion of feed with salinomycin associated with tiamulin and addresses the control methods performed during the outbreak to minimize economic losses resulting from the intoxication. A lot of 940 pigs fed feed containing 30 ppm salinomycin received 100 ppm tiamulin (via water) to control recurrent respiratory diseases on the farm. After ingesting tiamulin, some animals manifested clinical signs of motor incoordination, stiff gait, reluctance to move, muscle weakness and tremors, dyspnea, depression, and decubitus, remaining in "sitting-dog position" or with the abduction of the pelvic limbs, and rested on tip-toes when in a standing position. Two animals were euthanized for macro-and microscopic evaluation. The other sick animals received supportive anti-inflammatory treatment. The most relevant macroscopic finding observed during necropsy was the slight pallor of the pelvic limb muscles. The main histopathological findings consisted of multifocal areas of hyaline degeneration and marked necrosis of skeletal myofibers, with macrophage infiltrate associated with cell regeneration and skeletal fiber phagocytosis. These lesions were more intense in the longissimus dorsi, diaphragm, and masseter muscles. The definitive diagnosis was based on epidemiological aspects and clinical lesional conditions compatible with toxic myopathy secondary to ionophore intoxication.(AU)

Este trabalho descreve um surto espontâneo de miopatia tóxica em suínos na fase de terminação, decorrente da ingestão de ração contendo salinomicina associada a tiamulina e aborda os métodos de controle realizados durante o surto, para minimizar os prejuízos econômicos decorrentes da intoxicação. Um lote de 940 suínos alimentados com ração contendo 30 ppm de salinomicina recebeu tiamulina na dose de 100 ppm (via água) para controle de doenças respiratórias recorrentes na granja. Após a ingestão da tiamulina, alguns animais manifestaram sinais clínicos de incoordenação motora, andar rígido, relutância ao movimento, fraqueza e tremores musculares, dispneia, depressão e decúbito, permanecendo em "posição de cão sentado" ou com abdução dos membros pélvicos, e quando em estação, apoiavam-se nas pinças dos cascos. Dois animais foram eutanasiados para avaliação macro e microscópica. Os demais animais doentes receberam tratamento suporte com anti-inflamatório. O achado macroscópico mais relevante observado durante a necropsia foi palidez leve dos músculos dos membros pélvicos. Os principais achados histopatológicos foram áreas multifocais de degeneração hialina e necrose acentuada de miofibras esqueléticas, com infiltrado de macrófagos associado às figuras de regeneração celular e à fagocitose de fibras esqueléticas. Essas lesões foram mais intensas nos músculos longissimus dorsi, diafragma e masseter. O diagnóstico definitivo baseou-se nos aspectos epidemiológicos e no quadro clínico-lesional compatíveis com miopatia tóxica secundária a intoxicação por ionóforo.(AU)

Minimum inhibitory concentration of Brazilian Brachyspira hyodysenteriae strains

ABSTRACT: The objectives of this study were to characterize Brachyspira hyodysenteriae isolates and to evaluate the antimicrobial susceptibility patterns of strains obtained from pigs in Brazil based on the minimal inhibitory concentration test (MIC). The MIC was performed for 22 B. hyodysenteriae isolates obtained from 2011 to 2013 using the following antimicrobial drugs: tylosin, tiamulin, valnemulin, doxycycline, lincomycin and tylvalosin. Outbreaks of swine dysentery were diagnosed based on clinical presentation, bacterial isolation, gross and microscopic lesions, duplex PCR for B. hyodysenteriae and B. pilosicoli and nox gene sequencing. All obtained MIC values were consistently higher or equal to the microbiological cut-off described in the literature. The MIC 90 values for the tested drugs were 8g/ml for doxycycline, >4g/ml for valnemulin, 8g/ml for tiamulin, 32g/ml for tylvalosin, >64g/ml for lincomycin and >128g/ml for tylosin. These results largely corroborate those reported in the literature. Tiamulin, doxycycline and tylvalosin showed the lowest MIC results. All of the samples subjected to phylogenetic analysis based on the nox gene sequence exhibited similar results, showing 100% identity to B. hyodysenteriae. This is the first study describing the MIC pattern of B. hyodysenteriae isolated in Brazil.

RESUMO: Os objetivos deste trabalho foram a caracterização de isolados de Brachyspira hyodysenteriae e avaliar os padrões de sensibilidade antimicrobiana de isolados obtidos a partir de suínos no Brasil com base no teste de concentração inibitória mínima (MIC). A MIC foi realizada em 22 isolados de B. hyodysenteriae obtidos entre 2011 a 2013 usando os seguintes antimicrobianos: tilosina, tiamulina, valnemulina, doxiciclina, lincomicina e tilvalosina. Surtos de disenteria suína foram diagnosticados com base na apresentação clínica, isolamento bacteriano, lesões macroscópicas e microscópicas, PCR duplex para B. hyodysenteriae e B. pilosicoli e sequenciamento do gene nox. Todos os valores de MIC obtidos foram consistentemente mais elevados ou igual ao ponto de corte microbiológica descrito na literatura. Os valores de MIC 90 para os fármacos testados foram de 8 g / mL para a doxiciclina, > 4 g/ml de valnemulina, 8 g / mL para a tiamulina, 32 g / ml para tilvalosina, > 64 g / ml para a lincomicina e > 128 g / ml de tilosina. Estes resultados corroboram em grande parte com os relatados na literatura. Tiamulina, doxiciclina e tilvalosina apresentaram os menores resultados de MIC. Todas as amostras submetidas à análise filogenética com base na sequência do gene nox exibiram resultados semelhantes, indicando 100% de identidade com B. hyodysenteriae. Este é o primeiro estudo que descreve o padrão MIC de B. hyodysenteriae isoladas no Brasil.

Minimum inhibitory concentration of Brazilian Brachyspira hyodysenteriae strains / Concentração inibitória mínima de cepas Brachyspira hyodysenteriae brasileiras

The objectives of this study were to characterize Brachyspira hyodysenteriae isolates and to evaluate the antimicrobial susceptibility patterns of strains obtained from pigs in Brazil based on the minimal inhibitory concentration test (MIC). The MIC was performed for 22 B. hyodysenteriae isolates obtained from 2011 to 2013 using the following antimicrobial drugs: tylosin, tiamulin, valnemulin, doxycycline, lincomycin and tylvalosin. Outbreaks of swine dysentery were diagnosed based on clinical presentation, bacterial isolation, gross and microscopic lesions, duplex PCR for B. hyodysenteriae and B. pilosicoli and nox gene sequencing. All obtained MIC values were consistently higher or equal to the microbiological cut-off described in the literature. The MIC 90 values for the tested drugs were 8µg/ml for doxycycline, >4µg/ml for valnemulin, 8µg/ml for tiamulin, 32µg/ml for tylvalosin, >64µg/ml for lincomycin and >128µg/ml for tylosin. These results largely corroborate those reported in the literature. Tiamulin, doxycycline and tylvalosin showed the lowest MIC results. All of the samples subjected to phylogenetic analysis based on the nox gene sequence exhibited similar results, showing 100% identity to B. hyodysenteriae. This is the first study describing the MIC pattern of B. hyodysenteriae isolated in Brazil.(AU)

Os objetivos deste trabalho foram a caracterização de isolados de Brachyspira hyodysenteriae e avaliar os padrões de sensibilidade antimicrobiana de isolados obtidos a partir de suínos no Brasil com base no teste de concentração inibitória mínima (MIC). A MIC foi realizada em 22 isolados de B. hyodysenteriae obtidos entre 2011 a 2013 usando os seguintes antimicrobianos: tilosina, tiamulina, valnemulina, doxiciclina, lincomicina e tilvalosina. Surtos de disenteria suína foram diagnosticados com base na apresentação clínica, isolamento bacteriano, lesões macroscópicas e microscópicas, PCR duplex para B. hyodysenteriae e B. pilosicoli e sequenciamento do gene nox. Todos os valores de MIC obtidos foram consistentemente mais elevados ou igual ao ponto de corte microbiológica descrito na literatura. Os valores de MIC 90 para os fármacos testados foram de 8 µg / mL para a doxiciclina, > 4 µg/ml de valnemulina, 8 µg / mL para a tiamulina, 32 µg / ml para tilvalosina, > 64 µg / ml para a lincomicina e > 128 µg / ml de tilosina. Estes resultados corroboram em grande parte com os relatados na literatura. Tiamulina, doxiciclina e tilvalosina apresentaram os menores resultados de MIC. Todas as amostras submetidas à análise filogenética com base na sequência do gene nox exibiram resultados semelhantes, indicando 100% de identidade com B. hyodysenteriae. Este é o primeiro estudo que descreve o padrão MIC de B. hyodysenteriae isoladas no Brasil.(AU)

Minimum inhibitory concentration of Brazilian Brachyspira hyodysenteriae strains / Concentração inibitória mínima de cepas Brachyspira hyodysenteriae brasileiras

The objectives of this study were to characterize Brachyspira hyodysenteriae isolates and to evaluate the antimicrobial susceptibility patterns of strains obtained from pigs in Brazil based on the minimal inhibitory concentration test (MIC). The MIC was performed for 22 B. hyodysenteriae isolates obtained from 2011 to 2013 using the following antimicrobial drugs: tylosin, tiamulin, valnemulin, doxycycline, lincomycin and tylvalosin. Outbreaks of swine dysentery were diagnosed based on clinical presentation, bacterial isolation, gross and microscopic lesions, duplex PCR for B. hyodysenteriae and B. pilosicoli and nox gene sequencing. All obtained MIC values were consistently higher or equal to the microbiological cut-off described in the literature. The MIC 90 values for the tested drugs were 8µg/ml for doxycycline, >4µg/ml for valnemulin, 8µg/ml for tiamulin, 32µg/ml for tylvalosin, >64µg/ml for lincomycin and >128µg/ml for tylosin. These results largely corroborate those reported in the literature. Tiamulin, doxycycline and tylvalosin showed the lowest MIC results. All of the samples subjected to phylogenetic analysis based on the nox gene sequence exhibited similar results, showing 100% identity to B. hyodysenteriae. This is the first study describing the MIC pattern of B. hyodysenteriae isolated in Brazil.(AU)

Os objetivos deste trabalho foram a caracterização de isolados de Brachyspira hyodysenteriae e avaliar os padrões de sensibilidade antimicrobiana de isolados obtidos a partir de suínos no Brasil com base no teste de concentração inibitória mínima (MIC). A MIC foi realizada em 22 isolados de B. hyodysenteriae obtidos entre 2011 a 2013 usando os seguintes antimicrobianos: tilosina, tiamulina, valnemulina, doxiciclina, lincomicina e tilvalosina. Surtos de disenteria suína foram diagnosticados com base na apresentação clínica, isolamento bacteriano, lesões macroscópicas e microscópicas, PCR duplex para B. hyodysenteriae e B. pilosicoli e sequenciamento do gene nox. Todos os valores de MIC obtidos foram consistentemente mais elevados ou igual ao ponto de corte microbiológica descrito na literatura. Os valores de MIC 90 para os fármacos testados foram de 8 µg / mL para a doxiciclina, > 4 µg/ml de valnemulina, 8 µg / mL para a tiamulina, 32 µg / ml para tilvalosina, > 64 µg / ml para a lincomicina e > 128 µg / ml de tilosina. Estes resultados corroboram em grande parte com os relatados na literatura. Tiamulina, doxiciclina e tilvalosina apresentaram os menores resultados de MIC. Todas as amostras submetidas à análise filogenética com base na sequência do gene nox exibiram resultados semelhantes, indicando 100% de identidade com B. hyodysenteriae. Este é o primeiro estudo que descreve o padrão MIC de B. hyodysenteriae isoladas no Brasil.(AU)

Antimicrobial susceptibility patterns of Brazilian Haemophilus parasuis field isolates / Perfil de susceptibilidade antimicrobiana de isolados clínicos brasileiros de Haemophilus parasuis

Haemophilus parasuis is the etiological agent of Glässer's disease (GD), an ubiquitous infection of swine characterized by systemic fibrinous polyserositis, polyarthritis and meningitis. Intensive use of antimicrobial agents in swine husbandries during the last years triggered the development of antibiotic resistances in bacterial pathogens. Thus, regular susceptibility testing is crucial to ensure efficacy of different antimicrobial agents to this porcine pathogen. In this study, 50 clinical isolates from South Brazilian pig herds were characterized and analyzed for their susceptibility to commonly used antibiotic. The identification and typing of clinical isolates was carried out by a modified indirect hemagglutination assay combined with a multiplex PCR. The susceptibility of each isolate was analyzed by broth microdilution method against a panel of 21 antimicrobial compounds. We found that field isolates are highly resistance to gentamycin, bacitracin, lincomycin and tiamulin, but sensitive to ampicillin, clindamycin, neomycin, penicillin, danofloxacin and enrofloxacin. Furthermore, an individual susceptibility analysis indicated that enrofloxacin is effective to treat clinical isolates with the exception of those classified as serovar 1. The results presented here firstly demonstrate the susceptibility of Brazilian clinical isolates of H. parasuis to antimicrobials widely used by swine veterinary practitioners and strengthen the need to perform susceptibility test prior to antibiotic therapy during GD outbreaks. In addition, because only six antimicrobial drugs (28.6%) were found effective against field isolates, a continuous surveillance of the susceptibility profile should be of major concern to the swine industry.(AU)

Haemophilus parasuis é o agente etiológico da doença de Glässer (GD), um processo infeccioso que acomete suínos e que se caracteriza por poliserosites fibrinosas sistêmicas, poliartrites e meningites. O uso intensivo de agentes antimicrobianos na produção de suínos, durante os últimos anos, tem disparado a seleção de cepas bacterianas resistentes a antibióticos. Desta maneira, a avaliação rotineira de susceptibilidade torna-se crucial para assegurar a correta seleção de um antimicrobiano eficaz contra este patógeno. Neste estudo, analisou-se a susceptibilidade antimicrobiana de 50 isolados clínicos de H. parasuis procedentes de granjas localizadas na região sul do Brasil. A identificação e tipificação dos isolados clínicos foi realizada através de uma PCR multiplex combinada com o teste de hemaglutinação indireta modificada. A susceptibilidade de cada isolado foi analisada pelo método de microdiluição em caldo utilizando-se um painel composto por 21 agentes antimicrobianos. Os resultados deste estudo indicam que as cepas clínicas de H. parasuis apresentam alta resistência à gentamicina, bacitracina, lincomicina e tiamulina, no entanto, são susceptíveis a ampicilina, clindamicina, neomicina, penicilina, enrofloxacina e danofloxacina. A análise de susceptibilidade realizada dentro de cada grupo de cepas de um mesmo sorovar indicou que a enrofloxacina é o antibiótico mais efetivo para tratar todos isolados clínicos com exceção daqueles pertencentes ao sorovar 1. Em termos gerais, neste trabalho, demonstra-se o perfil de susceptibilidade de isolados clínicos de H. parasuis aos antimicrobianos comumente utilizados pelos médicos veterinários especialistas em suínos, e reforça-se a necessidade da realização de testes de susceptibilidade antes do início da terapia com antibióticos durante surtos de DG. Além disso, como somente seis antimicrobianos (28.6%) foram efetivos contra os isolados clínicos, uma vigilância contínua do perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos deve ser de grande preocupação para a indústria de suínos.(AU)

Antimicrobial susceptibility patterns of Brazilian Haemophilus parasuis field isolates / Perfil de susceptibilidade antimicrobiana de isolados clínicos brasileiros de Haemophilus parasuis

Haemophilus parasuis is the etiological agent of Glãsser's disease (GD), an ubiquitous infection of swine characterized by systemic fibrinous polyserositis, polyarthritis and meningitis. Intensive use of antimicrobial agents in swine husbandries during the last years triggered the development of antibiotic resistances in bacterial pathogens. Thus, regular susceptibility testing is crucial to ensure efficacy of different antimicrobial agents to this porcine pathogen. In this study, 50 clinical isolates from South Brazilian pig herds were characterized and analyzed for their susceptibility to commonly used antibiotic. The identification and typing of clinical isolates was carried out by a modified indirect hemagglutination assay combined with a multiplex PCR. The susceptibility of each isolate was analyzed by broth microdilution method against a panel of 21 antimicrobial compounds. We found that field isolates are highly resistance to gentamycin, bacitracin, lincomycin and tiamulin, but sensitive to ampicillin, clindamycin, neomycin, penicillin, danofloxacin and enrofloxacin. Furthermore, an individual susceptibility analysis indicated that enrofloxacin is effective to treat clinical isolates with the exception of those classified as serovar 1. The results presented here firstly demonstrate the susceptibility of Brazilian clinical isolates of H. parasuis to antimicrobials widely used by swine veterinary practitioners and strengthen the need to perform susceptibility test prior to antibiotic therapy during GD outbreaks. In addition, because only six antimicrobial drugs (28.6%) were found effective against field isolates, a continuous surveillance of the susceptibility profile should be of major concern to the swine industry.(AU)

Haemophilus parasuis é o agente etiológico da doença de Glãsser (GD), um processo infeccioso que acomete suínos e que se caracteriza por poliserosites fibrinosas sistêmicas, poliartrites e meningites. O uso intensivo de agentes antimicrobianos na produção de suínos, durante os últimos anos, tem disparado a seleção de cepas bacterianas resistentes a antibióticos. Desta maneira, a avaliação rotineira de susceptibilidade torna-se crucial para assegurar a correta seleção de um antimicrobiano eficaz contra este patógeno. Neste estudo, analisou-se a susceptibilidade antimicrobiana de 50 isolados clínicos de H. parasuis procedentes de granjas localizadas na região sul do Brasil. A identificação e tipificação dos isolados clínicos foi realizada através de uma PCR multiplex combinada com o teste de hemaglutinação indireta modificada. A susceptibilidade de cada isolado foi analisada pelo método de microdiluição em caldo utilizando-se um painel composto por 21 agentes antimicrobianos. Os resultados deste estudo indicam que as cepas clínicas de H. parasuis apresentam alta resistência à gentamicina, bacitracina, lincomicina e tiamulina, no entanto, são susceptíveis a ampicilina, clindamicina, neomicina, penicilina, enrofloxacina e danofloxacina. A análise de susceptibilidade realizada dentro de cada grupo de cepas de um mesmo sorovar indicou que a enrofloxacina é o antibiótico mais efetivo para tratar todos isolados clínicos com exceção daqueles pertencentes ao sorovar 1. Em termos gerais, neste trabalho, demonstra-se o perfil de susceptibilidade de isolados clínicos de H. parasuis aos antimicrobianos comumente utilizados pelos médicos veterinários especialistas em suínos, e reforça-se a necessidade da realização de testes de susceptibilidade antes do início da terapia com antibióticos durante surtos de DG. Além disso, como somente seis antimicrobianos (28.6%) foram efetivos contra os isolados clínicos, uma vigilância contínua do perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos deve ser de grande preocupação para a indústria de suínos.(AU)

EVALUATION OF DIETARY FIBRE SOURCES ON THE PERFORMANCE AND INTESTINAL PERMEABILITY OF PIGLETS DURING NURSERY PHASE

Objetivou-se avaliar o efeito de diferentes fontes de fibras em dietas pós-desmame, associadas ao uso reduzido de ZnO e/ou GEA sobre o desempenho, permeabilidade intestinal, incidência de diarreia, concentração de E. Coli nas fezes, excreção de Zn, cobre e proteína bruta nas fezes e a porcentagem de animais medicados a primeira semana pós-desmame. Um total de 90 leitões desmamados aos 25 dias (7.84±1.71 kg), foram distribuídos em um delineamento em blocos (peso) casualizado e divididos em 5 tratamentos: T1 - Tiamulina como GEA em associação com alta dosagem de ZnO (de 2500 a 1500 ppm); T2 - GEA negativo e fibra de lignocelulose (2%) em associação com alta dosagem de ZnO; T3 - GEA negativo e fibra de lignocelulose eubiótica (2%) em associação com alta dosagem de ZnO; T4 - GEA negativo e fibra de lignocelulose em associação com dosagem reduzida de ZnO (100 ppm); T5 - GEA negativo e fibra de lignocelulose eubiótica em associação com dosagem reduzida de ZnO (100 ppm), com seis repetições e três leitões por baia. O programa nutricional foi dividido em 4 fases (pré-inicial 1: 25 a 32 dias; pré-inicial II: 33 a 39 dias; inicial I: 40 a 53 dias; e inicial II: 54 a 67 dias). Todos os dados passaram pelo teste F. Adotou-se o teste de Tukey (P < 0.05), para comparar as médias. Embora tenha havido diferença entre o consumo de ração diário (CRD) em todos os períodos (P < 0,05), os tratamentos não influenciaram no peso final dos leitões. Na primeira semana, o maior CRD foi nos animais alimentados com fibra de lignocelulose eubiótica e dosagem reduzida de ZnO (T5). O CRD dos outros tratamentos não diferiu entre si. Porém, na segunda fase de creche, os maiores resultados do CRD foram obtidos com os animais do T1, T3 e T5. Analisando a somatória nos dois últimos períodos (0-28 e 0-42 dias), o ZnO influenciou negativamente o CRD dos leitões. O menor valor de ingestão de ração foi observado nos leitões alimentados com dieta contendo fibra de lignocelulose eubiótica e alta dosagem de ZnO (T3). Houve diferenças significativas entre as fases do teste de absorção de galactose (TAG). Quando houve diferença estatística pelo teste F (P < 0.05), Os valores do TAG na segunda fase foram menores em comparação com a primeira. Assim, pode-se inferir que a função de barreira intestinal foi garantida com o uso das fibras alimentares na fase de creche, tanto em altas quanto em baixas dosagens de ZnO. No geral, os animais alimentados com doses reduzidas de ZnO nas dietas tiveram menor excreção de Zn e Cobre nas fezes. Pode-se concluir que a inclusão de fibra eubiótica de lignocelulose nas dietas de leitões na fase de creche permite a retirada total da Tiamulina 80% como melhorador de desempenho e redução de 96% do óxido de zinco como antimicrobiano, sem prejudicar o desempenho dos animais, garantindo a manutenção da função de barreira no intestino e proporcionando menor excreção fecal de Zn no meio ambiente.

This study aimed to evaluate the effect of different fiber sources in post-weaning diets, associated with reduced use of ZnO and/or GEA on performance, intestinal permeability, incidence of diarrhea, E. Coli concentration in feces, Zn excretion, copper and crude protein in feces and the percentage of animals medicated the first week after weaning. A total of 90 piglets weaned at 25 days (7.84±1.71 kg) were distributed in a randomized block design (weight) and divided into 5 treatments: T1 - Tiamulin as GEA in association with high dosage of ZnO (from 2500 to 1500 ppm); T2 - negative GEA and lignocellulose fiber (2%) in association with high dosage of ZnO; T3 - negative GEA and eubiotic lignocellulose fiber (2%) in association with high dosage of ZnO; T4 - negative GEA and lignocellulose fiber in association with reduced dosage of ZnO (100 ppm); T5 - negative GEA and eubiotic lignocellulose fiber in association with reduced dosage of ZnO (100 ppm), with six replicates and three piglets per pen. The nutritional program was divided into 4 phases (pre-initial 1: 25 to 32 days; pre-initial II: 33 to 39 days; initial I: 40 to 53 days; and initial II: 54 to 67 days). All data passed the F test. The Tukey test (P < 0.05) was used to compare the means. Although there was a difference between the average daily feed intake (ADFI) in all periods (P < 0.05), the treatments did not influence the final weight of the piglets. In the first week, the highest ADFI was in animals fed with eubiotic lignocellulose fiber and reduced ZnO dosage (T5). The ADFI of the other treatments did not differ from each other. However, in the second stage of day care, the highest ADFI results were obtained with animals from T1, T3 and T5. Analyzing the sum in the last two periods (0-28 and 0-42 days), ZnO negatively influenced the ADFI of piglets. The lowest feed intake value was observed in piglets fed a diet containing eubiotic lignocellulose fiber and high ZnO (T3). There were significant differences between the phases of the sugar absorption test (SAT). When there was statistical difference by the F test (P < 0.05), SAT values in the second phase were lower compared to the first. Thus, it can be inferred that the intestinal barrier function was guaranteed with the use of dietary fiber in the nursery phase, both in high and low doses of ZnO. In general, animals fed reduced doses of ZnO in the diets had lower excretion of Zn and copper in feces. It can be concluded that the inclusion of eubiotic lignocellulose fiber in the diets of piglets in the nursery phase allows the total withdrawal of Tiamulin 80% as a performance enhancer and a 96% reduction of zinc oxide as an antimicrobial, without harming the performance of the animals, ensuring the maintenance of the barrier function in the intestine and providing less fecal excretion of Zn in the environment.

Padronização da técnica de microdiluição em caldo e avaliação da sensibilidade antimicrobiana a óleos essenciais para isolados brasileiros de Brachyspira hyodysenteriae

O presente trabalho buscou padronizar uma nova técnica de avaliação de sensibilidade antimicrobiana da Brachyspira hyodysenteriae utilizando a técnica de microdiluição em caldo e comparando ao kit comercial VetMIC Brachy SVA. Além disso, utilizando a técnica de microdiluição em caldo avaliou-se a sensibilidade antimicrobiana de isolados brasileiros de B. hyodysenteriae aos óleos essenciais carvacrol, timol e cinamaldeído. Foram utilizadas nove cepas brasileiras, isoladas entre 2012 e 2019, e uma cepa referência. Os isolados foram plaqueados em ágar TSA enriquecido com sangue, incubadas a 37°C em anaerobiose por quatro dias, ressuspendidas em caldo Brain Heart Infusion (BHI) enriquecido com soro fetal bovino e mantidas em anaerobiose a 37°C em placas de 96 poços, com diluições seriadas dos antimicrobianos lincomicina, doxiciclina, tiamulina, valnemulina e tilosina e dos óleos essenciais carvacrol, timol e cinamaldeído. Após quatro dias, a sensibilidade antimicrobiana foi avaliada através da verificação do crescimento bacteriano, visível pela avaliação da turbidez do meio de cultivo. Para o teste comercial, foram seguidas as instruções do fabricante, adicionando 500 l da suspensão de bactérias a cada um dos poços da placa, contendo diluições seriadas dos seguintes antimicrobianos lincomicina, doxiciclina, tiamulina, tilvalosina, valnemulina e tilosina. A avaliação da sensibilidade foi realizada da mesma forma da que o teste de microdiluição. Os resultados obtidos permitem afirmar que o teste de microdiluição é um bom substituto ao kit comercial, tendo boa concordância entre eles, enquanto os óleos essenciais avaliados não apresentam boa atividade antimicrobiana in vitro, sendo necessários estudos in vivo para melhor caracterizar suas ações.

The objective of this study was to standardize a new technique to evaluate the antimicrobial sensitivity of Brachyspira hyodysenteriae using the broth microdilution test comparing it to the commercial kit VetMIC Brachy SVA. In addition, the same broth test was used to evaluate the antimicrobial sensitivity of B. hyodysenteriae for the essential oils carvacrol, thymol and cynnamaldehyde. In order to do that, nine Brazilian strains, isolated between 2012 and 2019, and a reference strain, were harvested on agar, mantained under anaerobiosis atmosphere at 37°C during four days, resuspended in Brain Heart Infusion Broth with foetal bovine serum and inoculated under anaerobiosis atmosphere at 37°C during four days in 96 wells plates, doing serial dilution of the following antimicrobials: lincomycin, doxycycline, tiamulin, valnemulin and tylosin and the essential oils carvacrol, thymol and cynnamaldehyde. After four days, the antimicrobial sensitivity was evaluated by bacterial growth, visible through the media turbidity. For the commercial kit, manufacturer instructions were followed, adding 500 l of the bacterial suspension to each plate well containing two-fold serial dilutions for lincomycin, doxycycline, tiamulin, tilvalosin, valnemulin and tylosin. The evaluation of sensitivity was performed as to the microdilution test. Our results demonstrated that the microdilution test can be a substitute to the commercial kit, having adequate similarity with each other, while the essential oils evaluated did not have satisfatory antimicrobial activity in vitro. Further in vivo studies are required to better understand their effects

USO COMBINADO DE PROBIÓTICO E ANTIMICROBIANO MELHORADOR DE DESEMPENHO EM DIETAS DE LEITÕES NA FASE DE CRECHE

Mudanças relacionadas ao desmame são fatores estressantes e podem causa redução do crescimento dos leitões, principalmente pela incidência de diarreia. Considerando as limitações ao uso de antimicrobianos melhoradores de desempenho, diferentes estratégias têm sido propostas para manter o crescimento e desempenho animal. Neste sentido, objetivou-se avaliar os efeitos do uso de probiótico (Bacillus amyloliquefaciens) na dieta de leitões em fase de creche, associado ou não ao uso de antimicrobiano melhorador de desempenho (tiamulina). Foram distribuídos 84 leitões com idade média de 28 dias em delineamento em blocos casualizados e esquema fatorial 2 x 2, quatro tratamentos, correspondentes à inclusão ou não de antibiótico melhorador de desempenho (tiamulina 80% 150ppm) e o uso de probiótico (Bacillus amyloliquefaciens). Os tratamentos adotados foram: T1 dieta basal (DB, controle); T2 DB + antimicrobiano; T3 DB + probiótico; T4 DB + antimicrobiano + probiótico. Calculou-se o ganho de peso diário (GPD), o consumo e a conversão alimentar (CA). O escore fecal foi monitorado conforme o método proposto por Guedes et al. Amostras de fezes foram coletadas para análise de presença e contagem de Escherichia coli (Quinn et al.). As análises estatísticas foram realizadas utilizando o software R e diferenças consideradas significativas para P<0,05. Para dados não-paramétricos, utilizou-se o teste de Friedman e o teste de Tukey para os demais. Os dados absolutos de contagem microbiológica foram logaritmizados e analisados de forma descritiva. O consumo médio diário de ração foi afetado pelo uso do antimicrobiano, enquanto a utilização do probiótico não resultou em efeito significativo. Ganho de peso e conversão alimentar não foram afetados pelo uso de antimicrobiano ou probiótico. O escore de diarreia foi afetado significativamente na fase final, com menores escores para animais alimentados com antimicrobiano e probiótico. Na avaliação descritiva da contagem de E. coli, houve tendência de maior contagem bacteriana fecal ao longo do período experimental em todos os tratamentos, de forma mais destacada nas amostras provenientes dos animais que não ingeriram probiótico. A utilização de probiótico (B. amyloliquefaciens) é estratégia válida para substituir o uso de antimicrobianos para suínos em fase de creche. A adição do probiótico melhorou o consumo e desempenho dos leitões nas fases iniciais de creche.

Changes related to weaning are stressful factors and may cause reduced piglet growth, mainly due to the incidence of diarrhea. Considering the limitations to the use of antimicrobial performance enhancers, different strategies were proposed to maintain animal growth and performance. The objective of this study was to evaluate the effects of the use of probiotic (Bacillus amyloliquefaciens) on weaned piglets diet, associated or not with the use of antimicrobial performance enhancer (tiamulin). A total of 84 piglets with a mean age of 28 days were randomized in blocks and a factorial scheme 2 x 2, with four treatments, corresponding to the inclusion or not of performance improvement antibiotic (tiamulin 80% 150ppm) and probiotic (Bacillus amyloliquefaciens). The treatments adopted were: T1 - basal diet (DB, control); T2 - DB + antimicrobial; T3 - DB + probiotic; T4 - DB + antimicrobial + probiotic. Avarage daily gain (ADG), feed intake and feed efficiency were calculated. The fecal score was monitored according to the method proposed by Guedes et al. Feces samples were collected for presence and counting analysis of Escherichia coli (Quinn et al.). Statistical analyzes were performed using software R and differences considered significant for P <0.05. For non-parametric data it was used the Friedman test and the Tukey test were used for the others. The absolute data of microbiological counting were logarithmized and analyzed in a descriptive way. The average daily feed intake was affected by the use of antimicrobial, while the use of probiotic did not result in significant effect. Weight gain and feed conversion were not affected by the use of antimicrobial or probiotic. The diarrhea score was significantly affected in the final phase, with lower scores for animals fed with antimicrobial and probiotic. In the descriptive evaluation of the E. coli count, there was a trend of higher fecal bacterial count over the experimental period in all treatments, more prominently in the samples from the animals that did not take probiotic. The use of probiotics (B. amyloliquefaciens) is a valid strategy to replace the use of antimicrobials for weaned pigs. The addition of probiotic improved piglet consumption and performance in the early stages of life.

ISOLAMENTO E CARACTERIZAÇÃO DE ISOLADOS DE Mycoplasma hyopneumoniae PROVENIENTES DE PULMÃO DE SUÍNOS DE MINAS GERAIS, BRASIL

Mycoplasma hyopneumoniae é o agente etiológico da pneumonia enzoótica, responsável por uma das maiores causas de perdas na produção. A bactéria possui um metabolismo limitado e precisa obter moléculas do ambiente de crescimento, acarretando grandes dificuldades para o cultivo in vitro. Essas limitações inviabilizam a execução de técnicas de diagnóstico e a pesquisa e desenvolvimento de novas estratégias para controle e prevenção. Diante disso, este projeto objetivou isolar Mycoplasma hyopneumoniae, realizar o cultivo desta bactéria em laboratório, conhecer o perfil genético e avaliar a susceptibilidade in vitro dos isolados a diferentes antimicrobianos. A coleta de pulmões com suspeita de pneumonia enzoótica foi realizada em animais de abate provenientes de uma mesma propriedade localizada no Vale do Piranga- MG. A confirmação do isolamento foi realizada através de observações visuais de mudança de cor no meio de cultivo, e também através de PCR convencional e sequenciamento parcial do gene 16s de M. hyopneumoniae. Para se conhecer o perfil genético dos isolados foi realizada a técnica de PCR contendo os principais genes envolvidos com a patogenia da bactéria. Para a avaliação da susceptibilidade antimicrobiana dos isolados, utilizou-se a técnica de concentração inibitória mínima (MIC). Foi obtido êxito no processo de isolamento do agente, com a obtenção de 16 isolados, comprovadamente positivos ao PCR convencional e com 100% de identidade com diferentes cepas já conhecidas. Através do PCR de genes de virulência foi criado um dendrograma, e os isolados foram agrupados em 4 clusters, sugerindo uma variabilidade genética entre eles. O MIC foi mais alto para os antimicrobianos tilosina e espiramicina, do que para enrofloxacina e tiamulina. Nossos resultados apresentam o primeiro isolamento de M. hyopneumoniae a partir de amostras de campo nacionais e demonstram uma possível variabilidade genética entre os 4 diferentes isolados, com diferenças na susceptibilidade aos agentes antimicrobianos.

In the context of the swine sector growth in Brazil, the health problems that affect animal health and productivity should receive special attention. Mycoplasma hyopneumoniae is the etiologic agent of enzootic pneumonia, responsible for one of the major causes of production losses. The bacteria have a limited metabolism and need to obtain several different molecules from the environment, causing great complications for in vitro culture. These limitations make it difficult to carry out diagnostic techniques and the research and development of antimicrobials and vaccines. The aim of this project was to isolate Mycoplasma hyopneumoniae, to cultivate this bacterium in the laboratory, to understand the genetic profile and to evaluate the in vitro susceptibility of the isolates to different antimicrobials. The collection of lungs with suspected enzootic pneumonia was performed in slaughter animals from the same farm from Vale do Piranga region. Isolation confirmation was carried out through visual observations of color change in the culture medium, through conventional PCR and partial gene sequencing. To know the genetic profile of the isolates, a PCR was performed containing the main genes involved in the pathogenesis of the bacteria. The antimicrobial susceptibility of the isolates and strains was used the method known as minimum inhibitory concentration (MIC). The isolate was successfully obtained with 16 isolates, proven positive for conventional PCR and with 100% identify with different strains already known. A dendrogram was created after gene PCR technique, and the isolates were distributed in 4 clusters, suggesting a genetic variability among 4 different strains. The MIC was higher for the antimicrobials tylosin and spiramycin than for enrofloxacin and thiamulin. Our results show the first isolation of M. hyopneumoniae from national field samples and also demonstrate a possible genetic variability among the four different isolates, with differences in susceptibility to antimicrobial agents.

INTOXICAÇÃO POR SALINOMICINA EM SUÍNOS NO ESTADO DE SANTA CATARINA

CARVALHO, Amanda Queiroz. Intoxicação por salinomicina em suínos no Estado de Santa Catarina. 2019. 68p. Tese (Doutorado em Ciência Animal Área de Concentração: Saúde Animal). Universidade do Estado de Santa Catarina. Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal. Lages, 2019. A presente tese teve por objetivo estudar os casos de miopatia tóxica que ocorrem em suínos, no estado de Santa Catarina, relacionados ao uso de salinomicina na ração associado ao uso concomitante de antibióticos. Foram descritos dois casos espontâneos de intoxicação por salinomicina, o primeiro deles associado ao uso de tiamulina e o segundo ao florfenicol. Em ambos os casos os animais apresentaram sinais clínicos locomotores caracterizados por incoordenação motora, andar rígido, relutância ao movimento, fraqueza e tremores musculares, dispneia, depressão e decúbito, permanecendo em posição de cão sentado ou com abdução dos membros pélvicos, e quando em estação, apoiavam-se nas pinças dos cascos. O achado macroscópico mais relevante observado durante a necropsia foi palidez leve dos músculos dos membros pélvicos. Os principais achados histopatológicos foram áreas multifocais de degeneração hialina e necrose e necrose flocular acentuadas as vezes associado a fagocitose de fibras e formação de miotubulos. Essas lesões foram mais intensas nos músculos longissimus dorsi e semimembranoso. O diagnóstico de miopatia tóxica secundária a intoxicação por ionóforo baseou-se nos aspectos epidemiológicos e no quadro clínico-lesional. Para estudar a interação do florfenicol na intoxicação por salinomicina foram conduzidos dois experimentos. O primeiro teve o intuito de verificar a capacidade do florfenicol influenciar na toxicidade da salinomicina, e foi denominado Intoxicação aguda por salinomicina e florfenicol. O segundo teve a finalidade de verificar o potencial acumulativo da salinomicina, e foi denominado Intoxicação crônica por salinomicina. A intoxicação por salinomicina e florfenicol foi realizada utilizando 12 suínos, divididos em 4 grupos com 3 animais cada, tratados por 16 dias com rações contendo: Grupo 1: sem aditivos. Grupo 2: 50ppm de salinomicina. Grupo 3: 40ppm de florfenicol. Grupo 4: 50ppm de salinomicina e 40ppm de florfenicol. Dois animais do grupo 3 adoeceram e desenvolveram o quadro clínico lesiona de miopatia tóxica. A intoxicação aguda foi reproduzida a partir da ingestão de 24, 67mg/kg/PV de salinomicina e 19,74 mg/kg/PV de florfenicol, comprovando que o florfenicol foi capaz de influenciar na toxicidade de salinomicina. A intoxicação crônica por salinomicina foi realizada, com 20 suínos, com peso médio de 36,28kg, divididos em 5 grupos com 4 animais cada, alojados em baias individuais de alvenaria. Os animais foram alimentados por 42 dias com rações contendo salinomicina nas seguintes dosagens: Grupo 1: 25 ppm de salinomicina; Grupo 2: 50 ppm de salinomicina; Grupo 3: 75 ppm de salinomicina; Grupo 4: 100 ppm de salinomicina e Grupo 5: 150 ppm de salinomicina. Nesse experimento nenhum animal apresentou sintomatologia clínica, a menor ingestão foi de 40,69 mg/kg, enquanto a maior foi de 289,79 mg/kg. O consumo de ração não foi inibido pela alta ingestão de salinomicina e os suínos apresentaram ganho médio de peso de 46,64 kg em 42 dias, com peso final médio de 82,92 kg. Concluindo-se que nas doses utilizadas, a salinomicina não demonstrou potencial acumulativo nos suínos.

CARVALHO, Amanda Queiroz. Salinomycin intoxication in pigs in the State of Santa Catarina. 2019. 68p. Thesis (Doctorate in Animal Science Area: Animal Health). Santa Catarina State University. Post Graduate Program in Animal Science. Lages, 2019. This study aimed to study cases of toxic myopathy that occurs in Santa Catarina state, related to the use of salinomycin associated with antibiotics. Two spontaneous cases of salinomycin poisoning were described, the first associated with the use of tiamulin and the second with florfenicol. In both cases the animals presented locomotor clinical signs characterized by motor incoordination, rigid walking, reluctance to movement, muscle weakness and tremors, dyspnea, depression and decubitus, remaining in sitting dog position or with abduction of the pelvic limbs, and when in season, they rested on the hooves' tongs. The most relevant macroscopic finding observed during autopsy was mild pallor of the pelvic limb muscles. The main histopathological findings were multifocal areas of hyaline degeneration and marked floccular necrosis, sometimes associated with fiber phagocytosis and myotubule formation. These lesions were more intense in the longissimus dorsi and semimembranosus muscles. The diagnosis of toxic myopathy secondary to ionophore poisoning was based on the epidemiological aspects and the clinical-lesion picture. To study the interaction of florfenicol in salinomycin poisoning, two experiments were conducted. The first was intended to verify the ability of florfenicol to influence salinomycin toxicity and was called Acute salinomycin and florfenicol poisoning. The second was intended to verify the cumulative potential of salinomycin and was called Chronic Salinomycin Poisoning. Salinomycin and florfenicol poisoning was performed using 12 pigs, divided into 4 groups with 3 animals each, treated for 16 days with diets containing: Group 1: no additives. Group 2: 50ppm salinomycin. Group 3: 40ppm florfenicol. Group 4: 50ppm salinomycin and 40ppm florfenicol. Two animals from group 3 became got sick and developed the injured clinical condition of toxic myopathy. Acute intoxication was reproduced from ingestion of 24.67mg/kg/lw of salinomycin and 19.74 mg/kg/lw of florfenicol, proving that florfenicol was able to influence salinomycin toxicity. Chronic salinomycin poisoning was performed with 20 pigs weighing 36.28kg, divided into 5 groups with 4 animals each, housed in individual pen. The animals were fed for 42 days with diets containing salinomycin at the following dosages: Group 1: 25 ppm salinomycin; Group 2: 50 ppm salinomycin; Group 3: 75 ppm salinomycin; Group 4: 100 ppm salinomycin and Group 5: 150 ppm salinomycin. In this experiment no animal presented clinical symptoms, the lowest intake was 40.69 mg/kg, while the highest was 289.79 mg/kg. Feed intake was not inhibited by high salinomycin intake and pigs had average weight gain of 46.64 kg in 42 days, with average final weight of 82.92 kg. In conclusion, at the doses used, salinomycin did not show accumulative potential in pigs.

Sensibilidade antimicrobiana in vitro de isolados brasileiros de Lawsonia intracellularis.

Enterite Proliferativa Suína, causada pela bactéria Lawsonia intracellularis, é uma doença entérica de distribuição mundial, e de alta prevalência. Os sinais clínicos observados são diarreia, redução na conversão alimentar e no ganho de peso diário. A forma mais efetiva de tratamento é a terapia com antimicrobianos. Portanto, objetivo deste estudo foi determinar a concentração mínima inibitória (MIC) in vitro de ciprofloxacina, lincomicina e tiamulina em dois isolados brasileiros de L. intracellularis. Como L. intracellularis é um microrganismo intracelular obrigatório foi realizada avaliação de concentração inibitória mínima para as atividades extracelular e intracelular. A ciprofloxacina e a tiamulina apresentaram os melhores resultados de atividades extracelulares e intracelulares inibindo o crescimento de ambos os isolados brasileiros de L. intracellularis, apesar da ciprofloxacina ter apresentado concentração moderada nas duas duplicatas testadas para o isolado BRPHE02-E8 (variando de 8 e 4 g/mL). O mesmo não ocorreu para lincomicina, que apresentou concentrações elevadas ( 128 g/mL) em todos os testes realizados e para todos os isolados testados. Portanto, os dois isolados brasileiros de L. intracellularis testados nesse estudo têm maior sensibilidade in vitro a ciprofloxacina e tiamulina que a lincomicina.

Porcine Proliferative Enteritis, caused by the bacterium Lawsonia intracellularis, is an enteric disease with worldwide distribution. Several studies showed high prevalence of the disease worldwide. The clinical signs observed are diarrhea, weight loss, emaciation accompanied by reduction in feed conversion and in daily weight gain. The most effective form of treatment is antimicrobial therapy. Therefore, the objective of this study was to determine the minimum inhibitory concentration in vitro of ciprofloxacin, lincomycin and tiamulin against L. intracellularis Brazilian isolates. As L. intracellularis is an obligate intracellular microorganism, a minimum inhibitory concentration evaluation was performed for extracellular and intracellular activities of the antimicrobials. The extracellular and intracellular activities for ciprofloxacin and tiamulin showed the best results. It was shown that the lower concentrations of the active principles were able to inhibit the growth of the bacterium for both isolates, although the ciprofloxacin presented moderate concentration in the two duplicates tested for the isolate BRPHE02-E8 (varying of 8 and 4 g / mL). The same did not occur with lincomycin, which had high concentrations ( 128 g / mL) in all the tests performed and for all tested isolates. Therefore, the two brazilian isolates of L. intracellularis tested in this study had greater sensitivity to ciprofloxacin and tiamulin when compared to lincomycin.

Caracterização de Salmonella enterica subespécie enterica sorovar Cholerasuis provenientes de suínos no Brasil

Salmonella Choleraesuis é o agente causador de um quadro septicêmico em suínos que pode apresentar altas taxas de mortalidade nos animais infectados. No presente estudo foram avaliadas 93 estirpes de S. Choleraesuis provenientes de suínos com sinais clínicos de infecção. Foram avaliadas estirpes originadas de sete granjas localizadas nos Estados de São Paulo, Paraná, Santa Catarina e Minas Gerais obtidas durantes os anos de 2015, 2016 e 2017. As estirpes de Salmonella foram submetidas a reação em cadeia pela polimerase para confirmação do sorovar pela amplificação do gene fliC, em seguida foram caracterizadas quanto ao perfil de resistência a antimicrobianos e a caracterização genotípica pelo polimorfismo do comprimento de fragmentos amplificados (AFLP). A determinação do perfil de resistência a antimicrobianos revelou que as 93 estirpes foram resistentes a penicilina, doxiciclina, sulfadimetoxina, clindamicina, tilosina, tilmicosina e tiamulina, sendo, portanto, todas multirresistentes. Os antimicrobianos com menores taxas de resistência foram cefitiofur (0%), marbofloxacina (1,1%), neomicina (10,8%) e enrofloxacina (18,3%). As estirpes foram discriminadas em 17 perfis de resistência diferentes, o perfil mais frequente reuniu 39 estirpes (42%) resistentes a penicilina, ampicilina, doxiciclina, oxitetraciclina, florfenicol, sulfadimetoxina, gentamicina, tulatromicina, tilosina, tilmicosina, tiamulina e clindamicina. A análise das estirpes pelo AFLP indicou todas as 93 estirpes foram agrupadas em um único perfil com mais de 94% de similaridade. A partir dos dados obtidos é possível verificar que as estirpes de S. Choleraesuis isoladas de suínos apresentaram baixa variabilidade genética e alta frequência de resistência aos antimicrobianos mais usados em suinocultura.

Salmonella Choleraesuis is the causative agent of septicemia in pigs and may present high mortality rates in infected animals. In the present study, 93 strains of S. choleraesuis from pigs with clinical signs of infection were evaluated. Strains from seven farms located in the states of São Paulo, Paraná, Santa Catarina and Minas Gerais obtained during the years 2015, 2016 and 2017 were evaluated. Salmonella strains were submitted to polymerase chain reaction for confirmation of serovar by amplification of the fliC gene were then characterized for antimicrobial resistance profile and genotype characterization by amplified fragment length polymorphism (AFLP). The determination of the antimicrobial resistance profile revealed that the 93 strains were resistant to penicillin, doxycycline, sulfadimethoxine, clindamycin, tylosin, tilmicosin and tiamulin, and were therefore multiresistant. The antimicrobials with the lowest resistance rates were cefitiofur (0%), marbofloxacin (1.1%), neomycin (10.8%) and enrofloxacin (18.3%). The strains were discriminated in 17 different resistance profiles, the most frequent profile consisted of 39 strains (42%) resistant to penicillin, ampicillin, doxycycline, oxytetracycline, florfenicol, sulfadimetoxin, gentamicin, tulathromycin, tylosin, tilmicosin, tiamulin and clindamycin. Analysis of the strains by AFLP indicated that all 93 strains were grouped into a single profile with more than 94% similarity. From the data obtained it is possible to verify that the strains of S. Choleraesuis isolated from pigs presented low genetic variability and high frequency of resistance to the antimicrobials most used in swine production systems.

Presença e perfil de resistência a antibióticos de Escherichia coli diarreiogênicas obtidas de fezes de suínos

A cadeia de produção suína tem grande importância na economia brasileira, incluindo o país no ranking dos maiores exportadores mundiais da carne. Produtos a base de carne suína são consumidos mundialmente e podem carrear diferentes perigos biológicos, como cepas patogênicas de Escherichia coli, responsável por uma variedade de sintomas em humanos, podendo levar à diarréia sanguinolenta e insuficiência renal. E. coli é caracterizada por diferentes patotipos baseados na presença de diferentes fatores de virulência, sendo eae e stx os principais genes de virulência em isolados de alimentos. O objetivo desse trabalho foi o isolamento e caracterização de isolados de E. coli diarreiogênica em suínos, assim como análise filogenética e avaliação da resistência a antibióticos dos isolados. Amostras de fezes de 120 suínos de terminação obtidos de abatedouro-frigorífico localizados na região da Zona da Mata, no Estado de Minas Gerais, foram obtidas com a técnica de swab. Os isolados confirmados bioquimicamente como E. coli foram submetidos a PCR multiplex para detecção de stx1/stx2, eae, ipaH e aggR visando a identificação dos patotipos. E.coli diarreiogênica foram identificados em 12 (10%) suínos, e 17 isolados foram confirmados pela PCR multiplex, sendo 70,6% EPEC (12/17) e 29,4% STEC (5/17). Um total de 37 isolados de suínos (patogênicos e não patogênicos) foram analisados quanto ao perfil de resistência à antibióticos, sendo que100% das amostras de E. coli foram multirresistentes aos antibióticos testados, ou seja, foram resistentes a três ou mais classes de antibióticos e ainda, todos os isolados apresentaram resistência nas concentrações testadas, a ampicilina, tiamulina, ácido nalidíxico e tetraciclina. Constatou-se também que não houve diferença nos perfis de resistência entre os isolados diarreiogênicos e comensais. Os isolados positivos para os patotipos foram caracterizados para identificação de filogrupo de Clermont (A, B1, B2, e D) baseado em um segundo PCR multiplex, objetivando a detecção dos genes chuA, yjaA, TspE4C2 e gadA. Com base na caracterização do filogrupo, os isolados de EPEC e STEC foram categorizados como A (23,5%), B1 (23,5%) e B2 (52,9%). Cepas patogênicas de E. coli pertencentes ao filogrupo B2 e D são altamente virulentas, sendo uma preocupação em qualquer cadeia alimentar. A presença de E. coli patogênica em fezes de suínos é preocupante, uma vez que pode ocorrer uma contaminação cruzada no abate, resultando em contaminação de produtos suínos destinados ao consumo humano. Além disso, a presença de cepas multirresistentes representa uma ameaça à saúde pública, pois essas bactérias e os elementos de resistência podem ser transferidas aos humanos, implicando em maior número de doenças e falhas nos tratamentos.

The pork production chain generates more than one millionReaiseach year to the Brazilian economy, ranking the country as one of the main exporters worldwide. Pork products are widely consumed worldwide, but it can carry different biological hazards, like pathogenic strains of Escherichia coli, responsible for a variety of symptoms in humans, such as by bloody diarrhea and renal failure. E. coli is characterized through different pathotypes based on a variety of virulence factors, being eae and stx the main virulence related genes in strains isolated from foods. The objective of this study was the isolation and characterization of diarrheogenic E. coli isolates in swine, as well as phylogenetic analysis and antimicrobial resistance evaluation of the isolates. Feces from 120 pigs obtained from a pig farm and a slaughterhouse located in the Zona da Mata, Minas Gerais state, were collected using the swab technique. The confirmed isolates in the bacteria were subjected to a multiplex PCR targeting stx1/stx2, eae, ipaH and aggR for pathotype identification. The positive isolates of the pathotypes were characterized to Clermont phylogroup identification (B1, B2, A and D) based on a second multiplex PCR targeting chuA, yjaA, TspE4C2 and gadA.The Diarrheagenic E. coli was identified in 12 (10%) pigs, and 17 isolates were confirmed by the multiplex PCR, representing 70.6% EPEC (12/17) and 29.4% STEC (5/17). A total of 37 isolates of pigs (pathogenic and non-pathogenic) were analyzed for antibiotic resistance profile, and 100% of the E. coli samples were multiresistant to the antibiotics tested, that is, they were resistant to three or more classes of antibiotics and all isolates showed resistance at the concentrations tested, ampicillin, thiamulin, nalidixic acid and tetracycline. It was also verified that there was no difference in the resistance profiles between the diarreiogenic and commensal isolates.Based on the phylogroup characterization, EPEC and STEC isolates were categorized as B1 (23,5%), B2 (52,9%) and A (23,5). Pathogenic E. coli strains belonging to the phylum-group B2 and D are highly virulent, being a concern in any food chain. The presence of pathogenic E. coli in swine feces is of concern, since it is possible that cross-contamination does not decrease, resulting in contamination of products suitable for human consumption. In addition, the presence of multiresistant strains represents a threat to public health, since resistance can be transferred to men, implying a greater number of diseases and tasks in the treatments.

Caracterização genotípica e fenotípica de cepas de Escherichia coli associadas à diarreia pós-desmame em suínos

A Escherichia coli é um dos principais agentes envolvidos na síndrome da diarreia pós-desmame em suínos, sendo a infecção de difícil controle devido à elevada capacidade deste agente em desenvolver e disseminar mecanismos de resistência aos antimicrobianos utilizados para o tratamento da doença. No presente estudo foi estabelecido o perfil de virulência de cepas de E. coli isoladas de 621 leitões com sintomas de diarreia na fase de creche (21 a 40 dias de vida), provenientes de 52 granjas de suínos no Brasil. Foram selecionadas 148 cepas de E. coli, positivas para fímbria F4 e /ou F18 e destas foi determinado o perfil de resistência à antimicrobianos por determinação da concentração inibitória mínima para os seguintes antimicrobianos: ampicilina, clindamicina, clortetraciclina, danofloxacina, enrofloxacina, florfenicol, gentamicina, neomicina, oxitetraciclina, sulfadimetoxina, espectinomicina, trimetoprima / sulfametoxazole, tiamulina, tilmicosina, tulatromicina, tilosina, ceftiofur e enrofloxacina. Dos 621 animais observados, 321 animais foram positivos para pelo menos um fator de virulência. Das cepas estudadas, todas as 148 foram resistentes a tilosina, clindamicina, tiamulina, tilmicosina e sulfadimetoxina. A frequência de cepas resistentes foi elevada também para o oxitetraciclina, clortetraciclina, danofloxacina, ampicilina e ao florfenicol. Considerando-se o fato de 100% das cepas terem apresentado resistência a mais de três classes de antimicrobianos pode-se concluir que todas as cepas de E.coli do presente estudo foram multirresistentes sendo frequente a resistência aos principais antimicrobianos utilizados na terapia da diarreia em leitões de creche.

Escherichia coli is one of the agents involved in the syndrome of post-weaning diarrhea in swine. The infection is difficult to control because of high ability of this agent to develop and spread antimicrobial resistance mechanisms against commonly used antibiotics. This study has as goal determine the virulence profile of E. coli strains isolated of 621 piglets with diarrhea symptoms in the nursery with 21-40 days of age, from 52 pig farms in Brazil. Of the isolated strains, we selected 148 strains of E. coli, positive for F4 fimbriae and / or F18 and these were tested for antimicrobial resistance for determining the minimum inhibitory concentration for the following antibiotics: ampicillin, clindamycin, chlortetracycline, danofloxacin, enrofloxacin, florfenicol, gentamicin, neomycin, oxytetracycline, sulfadimethoxin, spectinomycin, trimethoprim / sulfamethoxazole, tiamulin, tilmicosin, tulathromycin, tylosin, ceftiofur and enrofloxacin. Of the 621 observed animals 321 animals were positive for at least one virulence factor. Of the studied strains, all 148 were resistant to tylosin, clindamycin, tiamulin, tilmicosin and sulfadimethoxin. The frequency of resistant strains was also high for oxytetracycline, chlortetracycline, danofloxacin, ampicillin and florfenicol. Considering the fact that 100% of the strains have shown resistance to more than three classes of antimicrobials can be concluded that all E. coli strains in this study were multidrug-resistant and are frequent the resistance to the main antimicrobials used in therapy of diarrhea in nursery pigs.

Caracterização fenotípica e genotípica de isolados de Bordetella bronchiseptica provenientes de diferentes espécies animais

Bordetella bronchiseptica é um agente respiratório zoonótico comumente encontrado em diversars espécies animais domésticos como cães, gatos, coelhos, suínos, aves e equinos. As infecções em humanos ocorrem ocasionalmente, sendo descritas com maior freqüência em indivíduos imunocomprometidos, mas relatos de casos de doença em adultos saudáveis e crianças têm aumentado. O presente estudo teve como objetivos determinar o perfil de resistência antimicrobiana de cepas de B. bronchiseptica isoladas de cães, gatos, coelhos e suínos, caracterizar as cepas pela eletroforese em campo pulsado (PFGE), e comparar os resultados obtidos com os dados epidemiológicos. Foram avaliadas 145 cepas e estas apresentaram 100% de resistência a ampicilina, penicilina, espectinomicina, clindamicina, tiamulina e tilosina. Taxas de resistência superiores a 95% das cepas foram observadas frente a tilmicosina, danofloxacina e ceftiofur. Os antimicrobianos com menores taxas de resistência foram enrofloxacina (2,1%) e clortetraciclina (11%). As cepas isoladas de coelhos apresentaram menores taxas de resistência que as de suínos e de animais de companhia. A caracterização das cepas pela PFGE permitiu a separação de acordo com as espécies de origem em diferentes pulsotipos. A caracterização do agente, principalmente no que se refere à resistência a antimicrobianos, será de grande utilidade para os veterinários no controle das infecções pelo mesmo em suínos, animais de companhia e coelhos, visto que os dados sobre este agente etiológico no Brasil são escassos.

Bordetella bronchiseptica is a zoonotic respiratory agent commonly found in domestic animals as dogs, cats, rabbit, swine, birds and horses. Infections in humans occur rarely and have been described more frequently in immunocompromised individuals, but reports of cases of illness in healthy adults and children have increased. This study aims to characterize the resistance profile of B. bronchiseptica strains isolated from dogs, cats, rabbits and pigs and evaluate the strains by pulsed field gel electrophoresis (PFGE), comparing the results with epidemiological data. From 145 strains tested 100% presented resistance to ampicillin, penicillin, spectinomycin, clindamycin, tiamulin and tylosin. Resistance rates higher than 95% were found against tilmicosin, danofloxacin and ceftiofur. The antimicrobials with lower resistance rates were enrofloxacin (2.1%) and chlortetracycline (11%). Strains isolated from rabbits presented low resistance rates when compared with swine and pet animals. The PFGE analysis separated the strains according specie of origin in different pulsotypes. The agent characterization, mainly in relation with antimicrobial resistance will be of great help to veterinarians in control of infections in swine, pets and rabbits, since data about this bacteria in Brazil are rare.

Indução de mutação por uma substância química em cepas de Escherichia coli para a atenuação e o desenvolvimento de vacina contra a colibacilose aviária / Mutations induced by a chemical in strains of Escherichia coli to the attenuation and vaccine development against avian colibacillosis

A colibacilose aviária caracteriza-se como uma infecção extra-intestinal secundária a outros agentes. É responsável por grandes perdas econômicas na criação de aves comerciais, sendo sua prevenção fundamental para minimizar prejuízos. O objetivo deste estudo foi atenuar cepas virulentas de Escherichia coli aviárias, por indução de mutagênese química. Foram selecionadas nove (09) cepas pertencentes à coleção de cultura do Laboratório de Ornitopatologia da FMVZ-USP. Todas as cepas estudadas foram resistentes à eritromicina, lincomicina, oxaciclina, penicilina, tiamulina e tilmicosin e sensíveis ao ácido nalidíxico, cloranfenicol, ciprofloxacina, colistina, enrofloxacina, florfenicol e gentamicina. Ocorreram resistências nas amostras analisadas de 33,33%, 22,22%, 11,11%, 55,55%, 66,66%, 77,77%, 33,33%, 22,22%, 22,22% e 33,33%, respectivamente, a amoxacilina, a ampicilina, a doxaciclina, a espectiomicina, a estreptomicina, a lincomicina-espectiomicina, a neomicina, a rifampicina, a tetraciclina e ao trimetropin-sulfa. Induziu-se resistência a estreptomicina ou rifampicina ou ácido nalidíxico como marcadores. Não houve o desenvolvimento de resistências a outros antimicrobianos testados, após a exposição a substância mutagênica. Os resultados da amplificação dos genes por PCR, mostraram que todas as cepas foram negativas para papC, cnf e astA e todas foram positivas para iuc e irp2. Duas cepas foram positivas para os genes vat, cinco para iss, quatro para o gene tsh, uma para cvi/cva, duas para sfaI e uma para astA. Após o uso da substância mutagênica duas cepas apresentaram reações negativas para os genes tsh, cvi/cva e sfaI e uma cepa para o gene astA. No teste de AFLP verificaram-se diferenças em similaridade de bandas em oito (08) das nove (09) cepas, quando comparadas com a amostra tratada com a substância mutagênica, sendo que este indice variou de 40% a 96,3%. Embora no teste de patogenicidade em pintinhos de um dia de idade não tenha ocorrido diferenças significativas na mortalidade nos diferentes grupos estudados, houve alteração de patogenicidade em cinco cepas expostas à substância mutagênica. Ocorreram reduções significativas em relação ao escore de lesões quando os grupos foram comparados (p<0,05), indicando atenuação pela substância mutagênica.

The avian colibacillosis is characterized as an extraintestinal infection which is secondary to other agents. It is responsible for considerable economic loss in the breeding of commercial birds, making its prevention essential to reducing damages. The aim of this study was to attenuate viral strains of avian Escherichia coli, using chemical mutagenesis induction. Nine (09) strains were selected from the culture collection of the Ornitopathology Laboratory of the School of Veterinary Medicine of the University of São Paulo. All analyzed strains were resistant to erythromycin, lincomicin, oxacillin, penicillin, tiamulin and tilmicosin and they were sensitive to nalidixic acid, chloramphenicol, ciprofloxacin, colistin, enrofloxacin, florfenicol and gentamicin. The analyzed samples presented the following resistance levels: 33.33%, 22.22%, 11.11%, 55.55%, 66.66%, 77.77%, 33.33%, 22.22%, 22.22% and 33.33% to, respectively, amoxicillin, ampicillin, doxycycline, spectinomycin, streptomycin, lincomycin-spectinomycin, neomycin, rifampicin, tetracycline and trimethoprim-sulfa. The resistance to streptomycin or rifampicin or nalidixic acid was induced as a marker. There was no development of resistance to other tested antimicrobials after the exposure to the mutagenic substance. The results of the PCR gene amplification showed that all strains were negative for papC, cnf and astA and they were all positive for iuc and irp2. Two strains were positive for the vat genes, five for iss, four for the tsh gene, one for cvi/cva, two for sfaI and one for astA. After using the mutagenic substance, two strains presented negative reactions for the tsh, cvi/cva and sfaI genes and one strain for the astA gene. In the AFLP test, differences were found for band similarity in eight (08) out of nine (09) strains, when compared with the samples treated with the mutagenic substance and this rate varied from 40% to 96.3%. Although the pathogenicity test in one-day-old chicks did not present significant differences in the mortality rate in the different analyzed groups, there was a pathogenicity alteration in five strains exposed to the mutagenic substance. There were significant reductions regarding the lesion scores when the groups were compared (p<0,05), indicating an attenuation due to the mutagenic substance.

Indução de mutação por uma substância química em cepas de Escherichia coli para a atenuação e o desenvolvimento de vacina contra a colibacilose aviária / Mutations induced by a chemical in strains of Escherichia coli to the attenuation and vaccine development against avian colibacillosis

A colibacilose aviária caracteriza-se como uma infecção extra-intestinal secundária a outros agentes. É responsável por grandes perdas econômicas na criação de aves comerciais, sendo sua prevenção fundamental para minimizar prejuízos. O objetivo deste estudo foi atenuar cepas virulentas de Escherichia coli aviárias, por indução de mutagênese química. Foram selecionadas nove (09) cepas pertencentes à coleção de cultura do Laboratório de Ornitopatologia da FMVZ-USP. Todas as cepas estudadas foram resistentes à eritromicina, lincomicina, oxaciclina, penicilina, tiamulina e tilmicosin e sensíveis ao ácido nalidíxico, cloranfenicol, ciprofloxacina, colistina, enrofloxacina, florfenicol e gentamicina. Ocorreram resistências nas amostras analisadas de 33,33%, 22,22%, 11,11%, 55,55%, 66,66%, 77,77%, 33,33%, 22,22%, 22,22% e 33,33%, respectivamente, a amoxacilina, a ampicilina, a doxaciclina, a espectiomicina, a estreptomicina, a lincomicina-espectiomicina, a neomicina, a rifampicina, a tetraciclina e ao trimetropin-sulfa. Induziu-se resistência a estreptomicina ou rifampicina ou ácido nalidíxico como marcadores. Não houve o desenvolvimento de resistências a outros antimicrobianos testados, após a exposição a substância mutagênica. Os resultados da amplificação dos genes por PCR, mostraram que todas as cepas foram negativas para papC, cnf e astA e todas foram positivas para iuc e irp2. Duas cepas foram positivas para os genes vat, cinco para iss, quatro para o gene tsh, uma para cvi/cva, duas para sfaI e uma para astA. Após o uso da substância mutagênica duas cepas apresentaram reações negativas para os genes tsh, cvi/cva e sfaI e uma cepa para o gene astA. No teste de AFLP verificaram-se diferenças em similaridade de bandas em oito (08) das nove (09) cepas, quando comparadas com a amostra tratada com a substância mutagênica, sendo que este indice variou de 40% a 96,3%. Embora no teste de patogenicidade em pintinhos de um dia de idade não tenha ocorrido diferenças significativas na mortalidade nos diferentes grupos estudados, houve alteração de patogenicidade em cinco cepas expostas à substância mutagênica. Ocorreram reduções significativas em relação ao escore de lesões quando os grupos foram comparados (p<0,05), indicando atenuação pela substância mutagênica. (AU)

The avian colibacillosis is characterized as an extraintestinal infection which is secondary to other agents. It is responsible for considerable economic loss in the breeding of commercial birds, making its prevention essential to reducing damages. The aim of this study was to attenuate viral strains of avian Escherichia coli, using chemical mutagenesis induction. Nine (09) strains were selected from the culture collection of the Ornitopathology Laboratory of the School of Veterinary Medicine of the University of São Paulo. All analyzed strains were resistant to erythromycin, lincomicin, oxacillin, penicillin, tiamulin and tilmicosin and they were sensitive to nalidixic acid, chloramphenicol, ciprofloxacin, colistin, enrofloxacin, florfenicol and gentamicin. The analyzed samples presented the following resistance levels: 33.33%, 22.22%, 11.11%, 55.55%, 66.66%, 77.77%, 33.33%, 22.22%, 22.22% and 33.33% to, respectively, amoxicillin, ampicillin, doxycycline, spectinomycin, streptomycin, lincomycin-spectinomycin, neomycin, rifampicin, tetracycline and trimethoprim-sulfa. The resistance to streptomycin or rifampicin or nalidixic acid was induced as a marker. There was no development of resistance to other tested antimicrobials after the exposure to the mutagenic substance. The results of the PCR gene amplification showed that all strains were negative for papC, cnf and astA and they were all positive for iuc and irp2. Two strains were positive for the vat genes, five for iss, four for the tsh gene, one for cvi/cva, two for sfaI and one for astA. After using the mutagenic substance, two strains presented negative reactions for the tsh, cvi/cva and sfaI genes and one strain for the astA gene. In the AFLP test, differences were found for band similarity in eight (08) out of nine (09) strains, when compared with the samples treated with the mutagenic substance and this rate varied from 40% to 96.3%. Although the pathogenicity test in one-day-old chicks did not present significant differences in the mortality rate in the different analyzed groups, there was a pathogenicity alteration in five strains exposed to the mutagenic substance. There were significant reductions regarding the lesion scores when the groups were compared (p<0,05), indicating an attenuation due to the mutagenic substance. (AU)

Determinação da concentração inibitória mínima de antibióticos contra ureaplasmas isolados de bovinos pela inibição de crescimento e citometria de fluxo / Determination of minimum inhibitory concentration of ureaplasmas isolated from cattle by inhibition of growth and flow citometry

Os Mollicutes causam doenças em várias espécies animais de importância econômica, inclusive em bovinos. Neste estudo, foi avaliada por concentração inibitória mínima (CIM) e citometria de fluxo, a atividade de oito agentes antibacterianos (enrofloxacina, ciprofloxacina, gentamicina, claritromicina, cloranfenicol, oxitetraclina, tiamulina e tilosina) contra Ureaplasma diversum. Foram analisadas 24 amostras de isolados de campo oriundas da mucosa genital de fêmeas bovinas. As amostras foram confirmadas por crescimento em caldo, placa e por PCR. Os inóculos foram submetidos à analise de suscetibilidade aos antibióticos pelo método da microdiluição em microplaca e posteriormente analisados pelo citômetro de fluxo a fim de avaliar a atividade antimicrobiana nas células. A claritromicina apresentou os maiores índices de inibição in vitro, sendo a gentamicina considerada o antibiótico de menor espectro de ação nesse estudo. De acordo com as análises do citômetro, a gentamicina apresentou o menor número de células viáveis enquanto a tiamulina apresentou o maior número. Embora haja resultados destoantes entre as técnicas utilizadas, o citômetro de fluxo pode ser utilizado como uma boa ferramenta para auxiliar a avaliação da suscetibilidade desses microrganismos a antibióticos.

The Mollicutes cause disease in several economically important species, including cattle. In this study, was evaluated by minimum inhibitory concentration (MIC) and flow cytometry, the activity of eight antibacterial agents (enrofloxacin, ciprofloxacin, gentamicin, clarithromycin, chloramphenicol, oxitetraclina, tiamulin and tylosin) against Ureaplasma diversum. We analyzed 24 samples of field isolates originating from the genital mucosa of cows. The samples were confirmed by growth in broth, plate, and PCR. The inoculations were subjected to analysis of susceptibility to antibiotics by the method of micro-dilution plate and then analyzed by flow cytometry to assess the antimicrobial activity in cells. Clarithromycin showed the highest levels of inhibition in vitro, the antibiotic gentamicin considered lower spectrum of action in this study. According to the analysis of the flow cytometer, gentamicin showed the lowest number of viable cells as tiamulin showed the greatest number. Although there are divergent results between the techniques used, flow cytometry can be used as a good tool even help assess the susceptibility of microorganisms to antibiotics.

Determinação da concentração inibitória mínima de antibióticos contra ureaplasmas isolados de bovinos pela inibição de crescimento e citometria de fluxo / Determination of minimum inhibitory concentration of ureaplasmas isolated from cattle by inhibition of growth and flow citometry

Os Mollicutes causam doenças em várias espécies animais de importância econômica, inclusive em bovinos. Neste estudo, foi avaliada por concentração inibitória mínima (CIM) e citometria de fluxo, a atividade de oito agentes antibacterianos (enrofloxacina, ciprofloxacina, gentamicina, claritromicina, cloranfenicol, oxitetraclina, tiamulina e tilosina) contra Ureaplasma diversum. Foram analisadas 24 amostras de isolados de campo oriundas da mucosa genital de fêmeas bovinas. As amostras foram confirmadas por crescimento em caldo, placa e por PCR. Os inóculos foram submetidos à analise de suscetibilidade aos antibióticos pelo método da microdiluição em microplaca e posteriormente analisados pelo citômetro de fluxo a fim de avaliar a atividade antimicrobiana nas células. A claritromicina apresentou os maiores índices de inibição in vitro, sendo a gentamicina considerada o antibiótico de menor espectro de ação nesse estudo. De acordo com as análises do citômetro, a gentamicina apresentou o menor número de células viáveis enquanto a tiamulina apresentou o maior número. Embora haja resultados destoantes entre as técnicas utilizadas, o citômetro de fluxo pode ser utilizado como uma boa ferramenta para auxiliar a avaliação da suscetibilidade desses microrganismos a antibióticos. (AU)

The Mollicutes cause disease in several economically important species, including cattle. In this study, was evaluated by minimum inhibitory concentration (MIC) and flow cytometry, the activity of eight antibacterial agents (enrofloxacin, ciprofloxacin, gentamicin, clarithromycin, chloramphenicol, oxitetraclina, tiamulin and tylosin) against Ureaplasma diversum. We analyzed 24 samples of field isolates originating from the genital mucosa of cows. The samples were confirmed by growth in broth, plate, and PCR. The inoculations were subjected to analysis of susceptibility to antibiotics by the method of micro-dilution plate and then analyzed by flow cytometry to assess the antimicrobial activity in cells. Clarithromycin showed the highest levels of inhibition in vitro, the antibiotic gentamicin considered lower spectrum of action in this study. According to the analysis of the flow cytometer, gentamicin showed the lowest number of viable cells as tiamulin showed the greatest number. Although there are divergent results between the techniques used, flow cytometry can be used as a good tool even help assess the susceptibility of microorganisms to antibiotics. (AU)