First record of bovine tuberculosis in the State of Acre, Brazil / Primeiro registro da tuberculose bovina no Estado do Acre, Brasil

Bovine tuberculosis is an infectious disease caused by the bacterium Mycobacterium bovis. It has great health and economic relevance for dairy herds, in addition to being a zoonosis. Therefore, the aim of this study was to check the frequency of bovine tuberculosis in dairy herds in the microregion of Rio Branco, Acre. For diagnosis, the tuberculin skin test wasused through the comparative technique. Of 527 cattle subjected to testing, one animal (0.2%) tested positive for the reagent. According to the results of this preliminary study, which reports the first record of bovine tuberculosis in Acre, it can be seen that the frequency of this disease in the microregion of Rio Branco indicates a low spread of M. bovis in dairy herds. This condition can assist with elimination of possible outbreakswithout incurring high costs to producers and, subsequently, help Acre achieve a tuberculosis-free status through the process of eradication.

A tuberculose bovina é uma doença infectocontagiosa ocasionada pelo Mycobacterium bovis, a qual possui grande relevância sanitária e econômica para rebanhos leiteiros, além de ser uma zoonose. Objetivou-se verificar a freqüência da tuberculose bovina em rebanhos leiteiros da microrregião de Rio Branco, Acre. Para o diagnóstico, foi utilizado o teste tuberculínico pela técnica comparativa. Dos 527 bovinos submetidos ao teste, um animal (0,2%) foi reagente positivo. Conforme os resultados deste estudo preliminar, que se configura o primeiro registro da tuberculose bovina no Acre, observa-se que a frequência da enfermidade na microrregião de Rio Branco denota uma baixa propagaçãodo M. bovis nos rebanhos leiteiros. Esta condição é favorável para eliminar possíveis focos sem elevados custos ao produtor e, posteriormente, alcançar o status de estado livre pelo processo de erradicação.

First record of bovine tuberculosis in the State of Acre, Brazil / Primeiro registro da tuberculose bovina no Estado do Acre, Brasil

Bovine tuberculosis is an infectious disease caused by the bacterium Mycobacterium bovis. It has great health and economic relevance for dairy herds, in addition to being a zoonosis. Therefore, the aim of this study was to check the frequency of bovine tuberculosis in dairy herds in the microregion of Rio Branco, Acre. For diagnosis, the tuberculin skin test wasused through the comparative technique. Of 527 cattle subjected to testing, one animal (0.2%) tested positive for the reagent. According to the results of this preliminary study, which reports the first record of bovine tuberculosis in Acre, it can be seen that the frequency of this disease in the microregion of Rio Branco indicates a low spread of M. bovis in dairy herds. This condition can assist with elimination of possible outbreakswithout incurring high costs to producers and, subsequently, help Acre achieve a tuberculosis-free status through the process of eradication.(AU)

A tuberculose bovina é uma doença infectocontagiosa ocasionada pelo Mycobacterium bovis, a qual possui grande relevância sanitária e econômica para rebanhos leiteiros, além de ser uma zoonose. Objetivou-se verificar a freqüência da tuberculose bovina em rebanhos leiteiros da microrregião de Rio Branco, Acre. Para o diagnóstico, foi utilizado o teste tuberculínico pela técnica comparativa. Dos 527 bovinos submetidos ao teste, um animal (0,2%) foi reagente positivo. Conforme os resultados deste estudo preliminar, que se configura o primeiro registro da tuberculose bovina no Acre, observa-se que a frequência da enfermidade na microrregião de Rio Branco denota uma baixa propagaçãodo M. bovis nos rebanhos leiteiros. Esta condição é favorável para eliminar possíveis focos sem elevados custos ao produtor e, posteriormente, alcançar o status de estado livre pelo processo de erradicação.(AU)

Prevalence of bovine tuberculosis in the Aksu Region of Xinjiang, China, between 1985 and 2016 / Prevalência de tuberculose bovina na região Aksu de Xinjiang, China, entre 1985 e 2016

Prevalence of bovine tuberculosis infection in cattle in Aksu Prefecture determined by intradermal tuberculin skin test (TST), between 1985 and 2016. Cattle were analyzed according to region, feeding pattern, herds and age. A total of 890,009 cattle were tested, with overall bovine tuberculosis prevalence of 0.13% (1172/890009). Statistically significant difference was found in feeding pattern and herds. Prevalence in cows (0.19%, 615/327022) was higher than that in beeves (P< 0.01, OR= 1.903, 95% CI = 1.696 to 2.134). Significant difference (P< 0.01; OR= 2.238, 95%; CI= 1.937 to 2.585) was evident for rates for bovine tuberculosis in the peasant household (0.12%, 942/802343) and farm groups (0.26%, 230/87666). The overall prevalence of bTB was decreased in the Aksu Prefecture, especially the positive rate was under 0.1% in 2010s. We concluded that the control measures forbovine tuberculosis in the Aksu region cattle herds are effective.(AU)

Prevalência de infecção por tuberculose bovina em gado na prefeitura de Aksu determinada por teste cutâneo tuberculínico (TST) entre 1985 e 2016 foi avaliada. O gado foi analisado de acordo com região, padrão alimentar, rebanho e idade. Um total de 890009 animais foram testados, com prevalência de 0,13% de tuberculose bovina (1172/890009). Diferença estatisticamente significativa foi encontrada em padrão alimentar e rebanhos. Prevalência em vacas (0,19%, 615/327022) foi mais alta que em bois (P< 0,01, OR= 1,903, 95% CI = 1,696 a 2,134). Diferenças significativas (P< 0,01; OR= 2,238, 95%; CI= 1,937 a 2,585) foram evidentes em taxas para tuberculose bovina em casas de camponeses (0,12%, 942/802343) e grupos de fazendeiros (0,26%, 230/87666). A prevalência de bTB caiu na prefeitura Aksu, a taxa positiva se encontrava abaixo de 0.1% a partir de 2010. Conclui-se que as medidas de controle para tuberculose bovina na região de Aksu foram eficazes.(AU)

Prevalence of bovine tuberculosis in the Aksu Region of Xinjiang, China, between 1985 and 2016 / Prevalência de tuberculose bovina na região Aksu de Xinjiang, China, entre 1985 e 2016

Prevalence of bovine tuberculosis infection in cattle in Aksu Prefecture determined by intradermal tuberculin skin test (TST), between 1985 and 2016. Cattle were analyzed according to region, feeding pattern, herds and age. A total of 890,009 cattle were tested, with overall bovine tuberculosis prevalence of 0.13% (1172/890009). Statistically significant difference was found in feeding pattern and herds. Prevalence in cows (0.19%, 615/327022) was higher than that in beeves (P< 0.01, OR= 1.903, 95% CI = 1.696 to 2.134). Significant difference (P< 0.01; OR= 2.238, 95%; CI= 1.937 to 2.585) was evident for rates for bovine tuberculosis in the peasant household (0.12%, 942/802343) and farm groups (0.26%, 230/87666). The overall prevalence of bTB was decreased in the Aksu Prefecture, especially the positive rate was under 0.1% in 2010s. We concluded that the control measures forbovine tuberculosis in the Aksu region cattle herds are effective.(AU)

Prevalência de infecção por tuberculose bovina em gado na prefeitura de Aksu determinada por teste cutâneo tuberculínico (TST) entre 1985 e 2016 foi avaliada. O gado foi analisado de acordo com região, padrão alimentar, rebanho e idade. Um total de 890009 animais foram testados, com prevalência de 0,13% de tuberculose bovina (1172/890009). Diferença estatisticamente significativa foi encontrada em padrão alimentar e rebanhos. Prevalência em vacas (0,19%, 615/327022) foi mais alta que em bois (P< 0,01, OR= 1,903, 95% CI = 1,696 a 2,134). Diferenças significativas (P< 0,01; OR= 2,238, 95%; CI= 1,937 a 2,585) foram evidentes em taxas para tuberculose bovina em casas de camponeses (0,12%, 942/802343) e grupos de fazendeiros (0,26%, 230/87666). A prevalência de bTB caiu na prefeitura Aksu, a taxa positiva se encontrava abaixo de 0.1% a partir de 2010. Conclui-se que as medidas de controle para tuberculose bovina na região de Aksu foram eficazes.(AU)

Diagnostics of tuberculosis and differentiation of nonspecific tuberculin reactions in animals

Abstract Tuberculosis is a serious disease of humans and animals, caused by bacteria of the Mycobacterium genus. This leads to complications in the life of the sick person, and subsequently to death. The cattle, who have been diagnosed with this bacterium, are usually sent to the slaughter, with the result that their livestock is reduced. Mycobacteriosis is also a disease, after determining which cattle are most often sent to slaughter. Such a reduction in livestock numbers has a negative effect on the economy. Of the 300 samples from the animals, 25 cultures of atypical bacteria responding to tuberculin were isolated. A series of tests - intravenous tuberculin test, ophthalmic test, palpebral test, "ZhAT" test, showed that most of the tuberculosis changes in cattle were found in regional lymph nodes more often than in internal organs. In healthy for tuberculosis cows, at the age of 4-9 years, seasonal nonspecific sensitivity to tuberculin is observed. Implementation of the developed express method of glutaraldehyde test on farms in healthy tuberculosis will speed up the diagnosis of tuberculosis and mycobacteriosis in animals that reacted to tuberculin and will exclude short-term nonspecific sensitization of their organism to tuberculin. The introduction of this methodology can be used to diagnose and clearly differentiate the diagnoses of "tuberculosis" and "mycobacteriosis" in cattle. This will cure part of the livestock and reduce the amount of slaughter.

Diagnostics of tuberculosis and differentiation of nonspecific tuberculin reactions in animals

Tuberculosis is a serious disease of humans and animals, caused by bacteria of the Mycobacterium genus. This leads to complications in the life of the sick person, and subsequently to death. The cattle, who have been diagnosed with this bacterium, are usually sent to the slaughter, with the result that their livestock is reduced. Mycobacteriosis is also a disease, after determining which cattle are most often sent to slaughter. Such a reduction in livestock numbers has a negative effect on the economy. Of the 300 samples from the animals, 25 cultures of atypical bacteria responding to tuberculin were isolated. A series of tests - intravenous tuberculin test, ophthalmic test, palpebral test, "ZhAT" test, showed that most of the tuberculosis changes in cattle were found in regional lymph nodes more often than in internal organs. In healthy for tuberculosis cows, at the age of 4-9 years, seasonal nonspecific sensitivity to tuberculin is observed. Implementation of the developed express method of glutaraldehyde test on farms in healthy tuberculosis will speed up the diagnosis of tuberculosis and mycobacteriosis in animals that reacted to tuberculin and will exclude short-term nonspecific sensitization of their organism to tuberculin. The introduction of this methodology can be used to diagnose and clearly differentiate the diagnoses of "tuberculosis" and "mycobacteriosis" in cattle. This will cure part of the livestock and reduce the amount of slaughter.(AU)

Comparison Of The Cutaneous Response Of The Comparative Cervical Tuberculin (Cct) Test With Different Reading Times In Buffaloes

Tuberculosis is an infectious disease that affects ruminants, causing losses in milk and meat production. Thus, the aim of this research was to compare the cutaneous response of the comparative cervical tuberculin test in buffaloes. Thus, the Comparative Cervical Test (CCT) examined 473 buffaloes, with 440 females and 33 males of different ages and races. Measurement of the allergic skin response was performed at 24, 48, 72 and 96 hours after tuberculinization. For avian tuberculin, the mean skin increases ranged from 12.24mm (0 hour) to 14.82mm (96 hours). As for bovine tuberculin ranged from 11.99mm (0 hour) to 13.68mm (96 hours). The maximum point of measurement of the allergic skin reaction was observed at 72 hours after the application of avian tuberculin, the same was observed for bovine tuberculin. However, there was no statistically significant difference in relation to the amplitude of the reactions observed at 48, 72 and 96 hours. Therefore, it was concluded that the skin allergic reaction occurred in a gradual manner and that the maximum amplitude value of the cutaneous allergic response in buffalo in the diagnosis of tuberculosis was at 72 hours.

Comparison Of The Cutaneous Response Of The Comparative Cervical Tuberculin (Cct) Test With Different Reading Times In Buffaloes

Tuberculosis is an infectious disease that affects ruminants, causing losses in milk and meat production. Thus, the aim of this research was to compare the cutaneous response of the comparative cervical tuberculin test in buffaloes. Thus, the Comparative Cervical Test (CCT) examined 473 buffaloes, with 440 females and 33 males of different ages and races. Measurement of the allergic skin response was performed at 24, 48, 72 and 96 hours after tuberculinization. For avian tuberculin, the mean skin increases ranged from 12.24mm (0 hour) to 14.82mm (96 hours). As for bovine tuberculin ranged from 11.99mm (0 hour) to 13.68mm (96 hours). The maximum point of measurement of the allergic skin reaction was observed at 72 hours after the application of avian tuberculin, the same was observed for bovine tuberculin. However, there was no statistically significant difference in relation to the amplitude of the reactions observed at 48, 72 and 96 hours. Therefore, it was concluded that the skin allergic reaction occurred in a gradual manner and that the maximum amplitude value of the cutaneous allergic response in buffalo in the diagnosis of tuberculosis was at 72 hours.(AU)

Nasal swab real-time PCR is not suitable for in vivo diagnosis of bovine tuberculosis

ABSTRACT: Bovine tuberculosis (bTB) is a zoonosis causing economic losses and public health risks in many countries. The disease diagnosis in live animals is performed by intradermal tuberculin test, which is based on delayed hypersensitivity reactions. As tuberculosis has complex immune response, this test has limitations in sensitivity and specificity. This study sought to test an alternative approach for in vivo diagnosis of bovine tuberculosis, based on real-time polymerase chain reaction (PCR). DNA samples, extracted from nasal swabs of live cows, were used for SYBR® Green real-time PCR, which is able to differentiate between Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium avium complexes. Statistical analysis was performed to compare the results of tuberculin test, the in vivo gold standard bTB diagnosis method, with real-time PCR, thereby determining the specificity and sensitivity of molecular method. Cervical comparative test (CCT) was performed in 238 animals, of which 193 had suitable DNA from nasal swabs for molecular analysis, as indicated by amplification of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) gene, and were included in the study. In total, 25 (10.5%) of the animals were CCT reactive, of which none was positive in the molecular test. Of the 168 CCT negative animals, four were positive for M. tuberculosis complex at real time PCR from nasal swabs. The comparison of these results generated values of sensitivity and specificity of 0% and 97.6%, respectively; moreover, low coefficients of agreement and correlation (-0.029 and -0.049, respectively) between the results obtained with both tests were also observed. This study showed that real-time PCR from nasal swabs is not suitable for in vivo diagnosis of bovine tuberculosis; thus tuberculin skin test is still the best option for this purpose.

RESUMO: A tuberculose bovina (bTB) é uma zoonose que causa perdas econômicas e riscos à saúde pública em muitos países. O diagnóstico da doença em animais vivos é realizado pelo teste intradérmico da tuberculina, que é baseado em reações de hipersensibilidade tardia. Como a tuberculose tem resposta imunológica complexa, este teste tem limitações em termos de sensibilidade e especificidade. Este estudo procurou desenvolver uma abordagem alternativa para o diagnóstico in vivo da tuberculose bovina, com base na reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real. As amostras de DNA, extraídas de suabes nasais de vacas vivas, foram usadas para PCR em tempo real com SYBR® Green, capaz de diferenciar os complexos Mycobacterium tuberculosis e Mycobacterium avium. A análise estatística foi realizada para comparar os resultados de teste de tuberculina, padrão ouro para o diagnóstico in vivo da bTB, com PCR em tempo real, determinando-se assim a especificidade e sensibilidade do método molecular. O teste cervical comparativo (TCC) foi realizado em 238 animais, dos quais 193 tiveram DNA dos suabes nasais adequados para análise molecular, como indicado pela amplificação do gene gliceraldeído-3-fosfato-desidrogenase (GAPDH), e foram incluídos no estudo. No total, 25 (10,5%) animais foram reativos no TCC, dos quais nenhum foi positivo no teste molecular. Dos 168 animais negativos no TCC, quatro foram positivos para o complexo M. tuberculosis na PCR em tempo real a partir dos suabes nasais. A comparação destes resultados gerou valores de sensibilidade e especificidade de 0% e 97,6%, respectivamente; além disso, baixos coeficientes de concordância e correlação (-0,029 e -0,049, respectivamente) entre os resultados obtidos com ambos os testes também foram observados. Este estudo mostrou que a PCR em tempo real a partir de suabes nasais não é adequada para o diagnóstico in vivo da tuberculose bovina; portanto, o teste da tuberculina ainda é a melhor opção para este fim.

Nasal swab real-time PCR is not suitable for in vivo diagnosis of bovine tuberculosis / A PCR em tempo real de swab nasal não é adequada para o diagnóstico in vivo de tuberculose bovina

Bovine tuberculosis (bTB) is a zoonosis causing economic losses and public health risks in many countries. The disease diagnosis in live animals is performed by intradermal tuberculin test, which is based on delayed hypersensitivity reactions. As tuberculosis has complex immune response, this test has limitations in sensitivity and specificity. This study sought to test an alternative approach for in vivo diagnosis of bovine tuberculosis, based on real-time polymerase chain reaction (PCR). DNA samples, extracted from nasal swabs of live cows, were used for SYBR® Green real-time PCR, which is able to differentiate between Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium avium complexes. Statistical analysis was performed to compare the results of tuberculin test, the in vivo gold standard bTB diagnosis method, with real-time PCR, thereby determining the specificity and sensitivity of molecular method. Cervical comparative test (CCT) was performed in 238 animals, of which 193 had suitable DNA from nasal swabs for molecular analysis, as indicated by amplification of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) gene, and were included in the study. In total, 25 (10.5%) of the animals were CCT reactive, of which none was positive in the molecular test. Of the 168 CCT negative animals, four were positive for M. tuberculosis complex at real time PCR from nasal swabs. The comparison of these results generated values of sensitivity and specificity of 0% and 97.6%, respectively; moreover, low coefficients of agreement and correlation (-0.029 and -0.049, respectively) between the results obtained with both tests were also observed. This study showed that real-time PCR from nasal swabs is not suitable for in vivo diagnosis of bovine tuberculosis; thus tuberculin skin test is still the best option for this purpose.(AU)

A tuberculose bovina (bTB) é uma zoonose que causa perdas econômicas e riscos à saúde pública em muitos países. O diagnóstico da doença em animais vivos é realizado pelo teste intradérmico da tuberculina, que é baseado em reações de hipersensibilidade tardia. Como a tuberculose tem resposta imunológica complexa, este teste tem limitações em termos de sensibilidade e especificidade. Este estudo procurou desenvolver uma abordagem alternativa para o diagnóstico in vivo da tuberculose bovina, com base na reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real. As amostras de DNA, extraídas de suabes nasais de vacas vivas, foram usadas para PCR em tempo real com SYBR® Green, capaz de diferenciar os complexos Mycobacterium tuberculosis e Mycobacterium avium. A análise estatística foi realizada para comparar os resultados de teste de tuberculina, padrão ouro para o diagnóstico in vivo da bTB, com PCR em tempo real, determinando-se assim a especificidade e sensibilidade do método molecular. O teste cervical comparativo (TCC) foi realizado em 238 animais, dos quais 193 tiveram DNA dos suabes nasais adequados para análise molecular, como indicado pela amplificação do gene gliceraldeído-3-fosfato-desidrogenase (GAPDH), e foram incluídos no estudo. No total, 25 (10,5%) animais foram reativos no TCC, dos quais nenhum foi positivo no teste molecular. Dos 168 animais negativos no TCC, quatro foram positivos para o complexo M. tuberculosis na PCR em tempo real a partir dos suabes nasais. A comparação destes resultados gerou valores de sensibilidade e especificidade de 0% e 97,6%, respectivamente; além disso, baixos coeficientes de concordância e correlação (-0,029 e -0,049, respectivamente) entre os resultados obtidos com ambos os testes também foram observados. Este estudo mostrou que a PCR em tempo real a partir de suabes nasais não é adequada para o diagnóstico in vivo da tuberculose bovina; portanto, o teste da tuberculina ainda é a melhor opção para este fim.(AU)

Nasal swab real-time PCR is not suitable for in vivo diagnosis of bovine tuberculosis / A PCR em tempo real de swab nasal não é adequada para o diagnóstico in vivo de tuberculose bovina

Bovine tuberculosis (bTB) is a zoonosis causing economic losses and public health risks in many countries. The disease diagnosis in live animals is performed by intradermal tuberculin test, which is based on delayed hypersensitivity reactions. As tuberculosis has complex immune response, this test has limitations in sensitivity and specificity. This study sought to test an alternative approach for in vivo diagnosis of bovine tuberculosis, based on real-time polymerase chain reaction (PCR). DNA samples, extracted from nasal swabs of live cows, were used for SYBR® Green real-time PCR, which is able to differentiate between Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium avium complexes. Statistical analysis was performed to compare the results of tuberculin test, the in vivo gold standard bTB diagnosis method, with real-time PCR, thereby determining the specificity and sensitivity of molecular method. Cervical comparative test (CCT) was performed in 238 animals, of which 193 had suitable DNA from nasal swabs for molecular analysis, as indicated by amplification of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) gene, and were included in the study. In total, 25 (10.5%) of the animals were CCT reactive, of which none was positive in the molecular test. Of the 168 CCT negative animals, four were positive for M. tuberculosis complex at real time PCR from nasal swabs. The comparison of these results generated values of sensitivity and specificity of 0% and 97.6%, respectively; moreover, low coefficients of agreement and correlation (-0.029 and -0.049, respectively) between the results obtained with both tests were also observed. This study showed that real-time PCR from nasal swabs is not suitable for in vivo diagnosis of bovine tuberculosis; thus tuberculin skin test is still the best option for this purpose.(AU)

A tuberculose bovina (bTB) é uma zoonose que causa perdas econômicas e riscos à saúde pública em muitos países. O diagnóstico da doença em animais vivos é realizado pelo teste intradérmico da tuberculina, que é baseado em reações de hipersensibilidade tardia. Como a tuberculose tem resposta imunológica complexa, este teste tem limitações em termos de sensibilidade e especificidade. Este estudo procurou desenvolver uma abordagem alternativa para o diagnóstico in vivo da tuberculose bovina, com base na reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real. As amostras de DNA, extraídas de suabes nasais de vacas vivas, foram usadas para PCR em tempo real com SYBR® Green, capaz de diferenciar os complexos Mycobacterium tuberculosis e Mycobacterium avium. A análise estatística foi realizada para comparar os resultados de teste de tuberculina, padrão ouro para o diagnóstico in vivo da bTB, com PCR em tempo real, determinando-se assim a especificidade e sensibilidade do método molecular. O teste cervical comparativo (TCC) foi realizado em 238 animais, dos quais 193 tiveram DNA dos suabes nasais adequados para análise molecular, como indicado pela amplificação do gene gliceraldeído-3-fosfato-desidrogenase (GAPDH), e foram incluídos no estudo. No total, 25 (10,5%) animais foram reativos no TCC, dos quais nenhum foi positivo no teste molecular. Dos 168 animais negativos no TCC, quatro foram positivos para o complexo M. tuberculosis na PCR em tempo real a partir dos suabes nasais. A comparação destes resultados gerou valores de sensibilidade e especificidade de 0% e 97,6%, respectivamente; além disso, baixos coeficientes de concordância e correlação (-0,029 e -0,049, respectivamente) entre os resultados obtidos com ambos os testes também foram observados. Este estudo mostrou que a PCR em tempo real a partir de suabes nasais não é adequada para o diagnóstico in vivo da tuberculose bovina; portanto, o teste da tuberculina ainda é a melhor opção para este fim.(AU)

Tuberculosis in water buffalo (Bubalus bubalis) in the Baixo Araguari Region, Amapá, Brazil / Tuberculose em búfalos (Bubalus bubalis) na região do Baixo Araguari, Amapá, Brazil

Water buffalo are of great economic importance in Brazilian Amazonia, which has the largest herd in Brazil. Bovine tuberculosis caused by Mycobacterium bovis is a zoonotic disease that results in severe losses to water buffalo production. Although the disease has already been described in the country, data on the occurrence and distribution of bovine tuberculosis in water buffalo in Brazil is very scarce. The aim of this study was to determine the frequency of bovine tuberculosis in water buffalo in the Baixo Araguari River region of Amapá, Brazil. Thirty herds, randomly selected from the 41 herds of water buffalo in the region, were sampled. From those herds, 212 randomly selected water buffalo were subjected to the comparative tuberculin skin test. The proportion of Baixo Araguari River region herds that were positive for bovine tuberculosis was 50.0% (95% CI 31.3% to 68.7%) and the proportion of animals that were positive was estimated to be 14.8% (95% CI 7.8% to 21.9%). Our results show that bovine tuberculosis is spread widely among water buffalo in the Baixo Araguari River region, which suggests that measures to control the disease should be undertaken in the region.(AU)

A criação de búfalos é de grande importância econômica na Região Amazônica, que abriga o maior rebanho do Brasil. A tuberculose causada pelo Mycobacterium bovis é uma zoonose que leva a perdas severas na criação de búfalos. Apesar de já ter sido descrita no país, dados sobre a ocorrência e distribuição da tuberculose em búfalos no Brasil são escassos. O presente estudo investigou a frequência de tuberculose em búfalos na região do Baixo Araguari, Amapá. Trinta rebanhos, selecionados ao acaso dentre os 41 que criam búfalos na região, foram amostrados. Destes rebanhos, 212 animais selecionados ao acaso foram submetidos à tuberculinização cervical comparativa. A frequência de rebanhos infectados na região do Baixo Araguari foi de 50,0% (CI 95%: 31,3% to 68,7%) e a frequência de animais infectados foi estimada em 14,8% (95% CI: 7,8% to 21,9%). Nossos resultados mostram que a tuberculose está amplamente distribuída em búfalos da região do Baixo Araguari, Amapá e que medidas de controle da doença devem ser implementadas na região.(AU)

Exames complementares no diagnóstico da tuberculose em bovinos reagentes à tuberculinização comparada / Comparison of complementary diagnostic methods of bovine tuberculosis on skin-test reactive cattle

Objetivou-se com este estudo comparar diferentes métodos complementares de diagnóstico (macroscópico, histopatológico, sorológico e molecular) da tuberculose, em bovinos naturalmente infectados. O trabalho deu-se por meio de amostras colhidas em abate sanitário de 40 bovinos reagentes no teste cervical comparativo (TCC) para tuberculose. A inspeção macroscópica post mortem das carcaças foi acompanhada de colheita de amostras de muco nasal, sangue e tecido (fígado, pulmão e linfonodo mediastínico) para realização do exame de reação em cadeia pela polimerase (PCR), de Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) e histopatológico com colorações de hematoxilina-eosina (HE) e Ziehl-Neelsen (ZN), respectivamente. Dos 40 bovinos inspecionados no abate, 22 (55%) animais apresentaram algum tipo de lesão macroscópica sugestiva de tuberculose. Nos achados histopatológicos visualizados em HE, 13 (32,5%) carcaças apontaram alterações histológicas, sendo 6 (15%) nos linfonodos mediastínicos, 5 (12,5%) no fígado e 3 (7,5%) no pulmão. Não foi observada a presença de bacilos álcool-ácido resistentes em nenhuma das amostras avaliadas. O ensaio sorológico de ELISA/IDEXX(r) identificou um (2,5%) animal reagente, e o teste de PCR detectou DNA de Mycobacterium bovis em uma (2,5%) amostra. Concluiu-se que entre os exames complementares de diagnóstico avaliados nenhum foi capaz de detectar todos os animais que estavam positivos na tuberculinização, porém a associação de diferentes métodos pode garantir a confiabilidade do diagnóstico.(AU)

The aim of this study was to compare different complementary diagnostic methods (macroscopic, histological, serological and molecular) of tuberculosis in naturally infected cattle. The study was conducted from samples taken from 40 reagents cattle in cervical comparative intradermal tuberculin test (ITT). The macroscopic post mortem inspection of carcasses was followed by the collection of nasal swabs, blood and tissue samples (liver, lung and mediastinal lymph node) for polymerase chain reaction (PCR) test, Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) and histopathologic test with hematoxylin-eosin (HE) and Ziehl-Neelsen (ZN), respectively. Of the 40 cattle slaughtered, 22 (55%) carcasses had macroscopic lesions suggestive of tuberculosis. The histopathology HE identified 13 (32.5%) carcasses with histological changes: 6 (15%) in the mediastinal lymph nodes, 5 (12.5%) in the liver and 3 (7.5%) in the lung. At ZN, the presence of acid-fast bacilli was not detected in any of the samples tested. The ELISA/IDEXX(r) identified one (2.5%) reagent animal, and the PCR test detected DNA of Mycobacterium bovis in one (2.5%) cow. It is concluded that among the diagnostic methods reviews none was able to detect all animals that were positive in tuberculin test, but the association of different methods can ensure diagnostic accuracy.(AU)

Comparação de três testes de tuberculina usados para o diagnóstico de tuberculose em búfalos de água na Ilha de Marajó / Comparison of three tuberculin skin tests used to diagnose tuberculosis in water buffaloes in Marajó Island / Comparación de tres pruebas de tuberculina utilizadas para diagnóstico de la tuberculosis en búfalos de agua de la Isla de Marajó

O Estado do Pará corresponde a 26 % da região Amazônia brasileira e estima-se que o rebanho de búfalos represente em torno de 45% da população de búfalos do Brasil, principalmente, localizados na ilha de Marajó. Este trabalho teve como objetivo comparar três diferentes tipos de testes tuberculínicos utilizados para o diagnóstico da tuberculose em búfalos de água (Bubalus bubalis) e os resultados comparados com animais com e sem tuberculose. Os resultados deste trabalho permitiram fazer as seguintes conclusões: o teste cervical simples em búfalos não é recomendável devido à baixa especificidade, produzindo uma grande margem de erros (sacrifício de animais falsos positivos); a prova intradérmica dupla tem baixa especificidade e com o inconveniente de aplicar duas vezes tuberculina, sendo assim há necessidade de três visitas a fazenda, elevando o custo e manejo; o teste cervical comparativo é o melhor método, pois possui alta especificidade e sensibilidade, pois as reações à tuberculina em búfalos se caracterizam por elevado número de reações inespecíficas devido ao seu hábito aquático.

The state of Pará corresponds to 26% of the Brazilian Amazon Region and contains a herd of buffaloes that represent around 45% of the buffalo population in Brazil. This herd is located especially in the Marajó Island. The aim of this study was to compare three different types of tuberculin skin tests used for the diagnosis of tuberculosis in buffaloes (Bubalus bubalis) and compare the results with infected and uninfected animals by tuberculosis. The results of this study allows to the following conclusions: The single cervical test in buffaloes is not recommended due to the low specificity, producing a large margin of error (sacrifice of false positive animals); the double intradermal tuberculin test has a low specificity and the inconvenience of applying twice tuberculin, therefore is necessary three visits in the farm, raising the costs. The comparative cervical testis is the best method, because it has high specificity and sensitivity, and the reactions of tuberculin in buffaloes are characterized by a high number of nonspecific reactions, due mainly to the buffalo aquatic habit.

El estado de Pará corresponde con el 26% en la región Amazonica brasileña y se estima que la manada de búfalos representa al rededor del 45% de la población de búfalos de Brasil, principalmente ubicados en la isla de Marajó. Este estudio tuvo como objetivo comparar tres tipos distinto de pruebas de tuberculina utilizadas para el diagnóstico de la tuberculosis en búfalos de agua (Bubalus bubalis) y los resultados en comparación con los animales con y sin tuberculosis. Los resultados de este estudio proporcionan las siguientes conclusiones: la prueba cervical en los búfalos no se recomienda debido a la baja especificidad, la producción de una gran margen de error (sacrificio de los animales falsos positivos ), la prueba intradérmica doble tiene una baja especificidad y la inconveniencia de aplicar dos veces la tuberculina, lo que no necesita de tres visitas al campo, elevando el costo y la gestión, la prueba cervical comparativa es el mejor método, ya que tiene una alta especificidad y sensibilidad, como las reacciones a la tuberculina en los búfalos se caracterizan por un alto número de reacciones inespecíficas debido a su hábito acuático.

Identificação e genotipagem de Mycobacterium bovis em bovinos positivos no teste intradérmico para tuberculose em Mato Grosso do Sul / Identification and genotyping of Mycobacterium bovis from positive cattle in skin test for tuberculosis in the State of Mato Grosso do Sul, Brazil

Neste estudo, realizou-se genotipagem de isolados de Mycobacterium bovis, provenientes de amostras de tecidos de bovinos positivos no teste cervical comparativo (TCC) para tuberculose em Mato Grosso do Sul, por meio da técnica de spoligotyping. Tecidos de 13 bovinos positivos, oriundos de diferentes municípios do estado, foram cultivados em meio de Stonebrink. As colônias resultantes foram submetidas à coloração de Ziehl-Neelsen e todos os isolados apresentaram características tintoriais de BAAR. Os 13 isolados de BAAR foram identificados por PCR multiplex (mPCR). O gene hsp65 foi alvo para identificação de Mycobacterium spp, a sequência de inserção IS6110 foi alvo para identificação de complexo Mycobacterium tuberculosis (CMT) e a região rvd1rv2031c foi explorada para detecção de M. bovis. Os isolados micobacterianos foram genotipados pela técnica de spoligotyping. Dos 13 bovinos, sete tinham pelo menos uma lesão sugestiva de tuberculose em linfonodos retrofaríngeos, parotídeos e pulmonares ou no pulmão, e em seis não foram encontradas lesões visíveis sugestivas da doença. Na mPCR, 11/13 (84,6%) isolados foram positivos para Mycobacterium spp, 8/13 (61,5%) positivos para CMT e 7/13 (53,8%) positivos para M. bovis. Com base no spoligotyping, oito isolados de BAAR foram agrupados dentro de três diferentes agrupamentos de genótipos e uma amostra remanescente apresentou perfil único, sendo quatro isolados com padrão de espoligotipo SB0121, dois SB1145, dois SB0881 e um SB0140. A técnica de spoligotyping demonstrou que há diversidade genética entre os espoligotipos presentes no estado de Mato Grosso do Sul, embora predomine o perfil SB0121.(AU)

Spoligotyping was performed in the present study to genotype Mycobacterium bovis isolates obtained from tissues of cattle that were positive in the comparative intradermal tuberculin test (CITT) in the state of Mato Grosso do Sul (Brazil). Tissue samples from 13 positive cattle from different municipalities of the state were cultured using a Stonebrink medium. The resulting colonies were subjected to Ziehl-Neelsen staining and all isolates exhibited the staining characteristics of AFB. The 13 isolates of AFB were identified by means of a multiplex PCR (mPCR) assay. The hsp65 gene was targeted for the identification of Mycobacterium spp., whereas the IS6110 insertion sequence was targeted for the identification of the Mycobacterium tuberculosis complex (MTC) and the rvd1rv2031c region was explored for the detection of Mycobacterium bovis. The spoligotyping assay was performed to genotype mycobacterial isolates. Of the 13 cattle, seven had at least one lesion suggestive of tuberculosis in the retropharyngeal, parotid and lung lymph nodes or lung. The remaining six exhibited no lesions suggestive of the disease. In the mPCR, 11 of the 13 isolates (84.6%) were positive for Mycobacterium spp., 8/13 (61.5%) were positive for the MTC and 7/13 (53.8%) were positive for M. bovis. Based on the spoligotyping, eight isolates were grouped into three different groups of genotypes and one isolate exhibited an orphan type. Four isolates exhibited spoligotype pattern SB0121, while two isolates were associated with the pattern SB1145, another two were associated with pattern SB0881 and one was associated with pattern SB0140. Spoligotyping confirmed the genetic diversity present among isolates found in the state of Mato Grosso do Sul. In addition, SB0121 was confirmed as the predominant profile.(AU)

Frequência de lesões macroscópicas em carcaças de bovinos reagentes ao teste tuberculínico / Frequency of macroscopic lesions in cattle positive to the tuberculin skin test

O objetivo deste trabalho foi analisar a frequência de lesões macroscópicas sugestivas de tuberculose em carcaças de bovinos reagentes ao teste intradérmico de tuberculose. Os animais do estudo foram provenientes de rebanhos de exploração leiteira, localizados nos municípios de Perdizes, Patos de Minas, Lagoa Formosa e Uberlândia, Minas Gerais. Foram avaliadas 140 carcaças de bovinos positivos no teste cervical comparativo. Durante o abate sanitário foi realizada inspeção post mortem das carcaças, e as lesões macroscópicas sugestivas de tuberculose foram registradas. Foram avaliados os linfonodos mediastínicos, fígado, pulmão e carcaça. Dos 140 bovinos examinados, 78 (55%) apresentaram algum tipo de lesão macroscópica sugestiva de tuberculose, 38 (49%) ocorreram exclusivamente nos linfonodos mediastínicos, 22 (28%) no fígado e 11 (14%) no pulmão; 5 (6%) carcaças apresentaram lesões no fígado, pulmão e linfonodo mediastínico, e 2 (4%) tiveram lesões no pulmão e linfonodo. Concluem-se que as lesões não visualizadas em bovinos reagentes ao teste tuberculínico podem ocorrer e estariam relacionadas principalmente ao estágio de evolução da doença, tempo insuficiente na inspeção post mortempara detecção, bem como reações inespecíficas para outras micobactérias.(AU)

The aim of this study was to analyze the frequency of macroscopic lesions suggestive of tuberculosis in cattle reacting to the tuberculin test. Cattle of this study were from dairy herds located in the cities of Perdizes, Patos de Minas, Lagoa Formosa and Uberlândia, Minas Gerais, Brazil. We evaluated 140 cattle carcasses positive to the cervical comparative intradermal tuberculin test. During the slaughter a post-mortem inspection of carcasses was done, and the lesions suggestive of tuberculosis were recorded. We evaluated the mediastinal lymph nodes, liver, lung and carcass. Of the 140 cattle examined, 78 (55%) carcasses had some kind of macroscopic lesions suggestive of tuberculosis, 38 (49%) occurred only in the mediastinal lymph nodes, 22 (28%) in the liver and 11 (14%) in the lungs; 5 (6%) carcasses showed lesions in liver, lungs and lymph node, and 2 (4%) showed lesions in lung and lymph nodes. We concluded that lesions that were not visualized in bovine tuberculin skin test reagents may occur and are related mainly to the stage of the disease, insufficient time to detect the lesions, and nonspecific reactions to other mycobacteria.(AU)

Frequência de lesões macroscópicas em carcaças de bovinos reagentes ao teste tuberculínico / Frequency of macroscopic lesions in cattle positive to the tuberculin skin test

O objetivo deste trabalho foi analisar a frequência de lesões macroscópicas sugestivas de tuberculose em carcaças de bovinos reagentes ao teste intradérmico de tuberculose. Os animais do estudo foram provenientes de rebanhos de exploração leiteira, localizados nos municípios de Perdizes, Patos de Minas, Lagoa Formosa e Uberlândia, Minas Gerais. Foram avaliadas 140 carcaças de bovinos positivos no teste cervical comparativo. Durante o abate sanitário foi realizada inspeção post mortem das carcaças, e as lesões macroscópicas sugestivas de tuberculose foram registradas. Foram avaliados os linfonodos mediastínicos, fígado, pulmão e carcaça. Dos 140 bovinos examinados, 78 (55%) apresentaram algum tipo de lesão macroscópica sugestiva de tuberculose, 38 (49%) ocorreram exclusivamente nos linfonodos mediastínicos, 22 (28%) no fígado e 11 (14%) no pulmão; 5 (6%) carcaças apresentaram lesões no fígado, pulmão e linfonodo mediastínico, e 2 (4%) tiveram lesões no pulmão e linfonodo. Concluem-se que as lesões não visualizadas em bovinos reagentes ao teste tuberculínico podem ocorrer e estariam relacionadas principalmente ao estágio de evolução da doença, tempo insuficiente na inspeção post mortempara detecção, bem como reações inespecíficas para outras micobactérias.(AU)

The aim of this study was to analyze the frequency of macroscopic lesions suggestive of tuberculosis in cattle reacting to the tuberculin test. Cattle of this study were from dairy herds located in the cities of Perdizes, Patos de Minas, Lagoa Formosa and Uberlândia, Minas Gerais, Brazil. We evaluated 140 cattle carcasses positive to the cervical comparative intradermal tuberculin test. During the slaughter a post-mortem inspection of carcasses was done, and the lesions suggestive of tuberculosis were recorded. We evaluated the mediastinal lymph nodes, liver, lung and carcass. Of the 140 cattle examined, 78 (55%) carcasses had some kind of macroscopic lesions suggestive of tuberculosis, 38 (49%) occurred only in the mediastinal lymph nodes, 22 (28%) in the liver and 11 (14%) in the lungs; 5 (6%) carcasses showed lesions in liver, lungs and lymph node, and 2 (4%) showed lesions in lung and lymph nodes. We concluded that lesions that were not visualized in bovine tuberculin skin test reagents may occur and are related mainly to the stage of the disease, insufficient time to detect the lesions, and nonspecific reactions to other mycobacteria.(AU)

Padronização do teste imunoalérgico aplicado ao diagnóstico da tuberculose e micobacterioses em suínos (Sus scrofa) experimentalmente sensibilizados com suspensões oleosas de Mycobacterium bovis ou M. avium inativados / Standardization of the immunoallergic skin test applied for the diagnosis of tuberculosis and mycobacterioses in swine (Sus scrofa) experimentally sensitized with oil suspensions of inactivated Mycobacterium bovis or M. avium

Foi investigado o valor diagnóstico da resposta alérgica cutânea em leitões experimentalmente sensibilizados, pela via intramuscular, com suspensões oleosas de Mycobacterium bovis ou M. avium inativados pelo calor.Foram utilizados 91 animais, divididos em quatro grupos: grupos A e B, cada um com 25 indivíduos, grupos C e D com 21 e 20 indivíduos respectivamente, balanceando-se as características de raça, linhagem, faixa etária e sexo. Aos 30 dias de idade, todos os animais foram submetidos a uma triagem com a aplicação de tuberculina PPD bovina, pela via intradérmica na base da orelha e não houve qualquer tipo de reação. Decorridos 60 dias do teste tuberculínico de triagem, o grupo A recebeu injeção intramuscular de 0,5 mL de uma suspensão oleosa de M. avium estirpe D4; o grupo B recebeu 0,5 mL de uma suspensão oleosa de M. bovis estirpe AN5; o grupo C (controle I), recebeu 0,5 mL do adjuvante oleoso; e o grupo D (controle II), recebeu 0,5 mL de solução fisiológica. Após 30 dias da sensibilização foi realizada a prova de tuberculinização comparativa com reação medida pela variação da espessura da pele com cutímetro de mola às 0h, 24h, 48h e 72h, após a aplicação das tuberculinas. No teste comparativo, lido às 48 ou 72 horas, a reação foi considerada negativa quando a diferença das reações entre o PPD bovino e o PPD aviário foi menor que 6,7 mm; suspeito ou inconclusivo quando a diferença se situou na faixa de 6,7 a 7,5 mm; e positiva de acordo com o tipo de PPD, considerando-se tuberculose para PPD M. bovis e micobacteriose para PPD M. avium, quando a diferença da reação foi superior a 7,5 mm.(AU)

The diagnostic value of the cutaneous allergic response to tuberculin in piglets experimentally sensitized intramuscularly with the oily suspensions of heat inactivated M. bovis or M. avium was investigated. Ninety-one animals were used and divided into four groups: groups A and B were formed each with 25 individuals, and groups C and D, with 21 and 20 individuals, respectively, balancing the characteristics of race, ancestry, age and sex. At the age of 30 days, all the animals were submitted to the screening test with the use of M. bovis PPD, by the intradermal route at the base of the ear and no reaction was detected. Sixty days after the screening tuberculin test, animals of the group A were injected intramuscularly with 0.5 mL of oily suspension of M. avium D4 strain; animals of the group B received 0.5 mL of an oily suspension of M. bovis, AN5 strain; group C (control I) received 0.5 mL of an oily adjuvant; and the individuals of the group D (control II) received 0.5 mL of saline solution. Following 30 days of sensitization, comparative skin reactions were measured by the variation in skin thickness with a caliper at 0h, 24h, 48h an 72h after applications of tuberculins. In the comparative test measured at 48 or 72h, the reaction was considered negative when the difference of the reactions between bovine PPD and avian PPD was less than 6.7 mm; suspected or inconclusive, when the difference stood in the range of 6.7 to 7.5 mm; and positive according to the type of PPD, considering tuberculosis the M. bovis PPD and mycobacteriosis the M. avium PPD, when the difference of the reaction was greater than 7.5 mm.(AU)

Detection of specific antibodies in cows after injection of PPD / Detecção de anticorpos específicos em vacas após a injeção de PPD

The diagnosis of bovine tuberculosis aims to identify the immune response against mycobacterial antigens. Although Single Intradermal Comparative Cervical Tuberculin test (SICCT) is broadly used for first identification of the disease, the performance of ELISAs has been investigated for diagnosis improvement. The present study expected to find out the influence of intradermal skin tests on the results of ELISAs using the recombinant proteins MPB70 and MPB83 as antigens on cows from a naturally infected herd. Results were analyzed by the F-test, Mann-Whitney and Friedman tests Although comparable to both proteins, results showed that positive animals presented a tendency of augment reactivity to MPB70, representing a tendency for a booster effect, but not to MPB83.(AU)

O diagnóstico da tuberculose bovina baseia-se na identificação da resposta imune do animal frente aos antígenos de Mycobacterium bovis. Embora o teste intradérmico comparativo cervical seja o mais empregado como primeiro teste diagnóstico, outras técnicas, como ELISA, tem sido investigadas para aumentar a detecção de animais infectados. O presente estudo analisou se os testes intradérmicos influenciariam os resultados de ELISAs que utilizaram as proteínas MPB70 e MPB83 como antígenos de captura em um rebanho naturalmente infectado. Os resultados foram analisados por meio de testes estatísticos de comparação e correlação de resultados: teste-F, Mann-Whitney e Friedman. O desempenho de ambos os ELISAs foi comparável; no entanto, os resultados demonstraram que entre os animais positivos, houve um aumento de reatividade ao MPB70, dado este que não foi observado junto ao ELISA-MPB83.(AU)

A multidisciplinary approach to diagnose naturally occurring bovine tuberculosis in Brazil / Uma abordagem multidisciplinar para o diagnóstico de tuberculose bovina em um rebanho naturalmente infectado no Brasil

A herd infected naturally with tuberculosis was investigated by different diagnostic methods. Ninety days after a screening test that identified 21 cows as skin test positive, a Comparative Intradermal Tuberculin Test (CITT) was performed in those 21 cows and in 29 other randomly selected skin test negative cows. Milk samples and nasal swabs were collected prior to the CITT for bacteriological culture and PCR, while blood samples were collected for IFN release and antibody responses to MPB70 and MPB83, at three time points post tuberculin injection. Animals positive by CITT were slaughtered and disease confirmation undertaken. Based on the Kappa test, IFN was comparable to the standard tests (culture, PCR and CITT) at all three sampling points. Results from both antibody ELISAs were similar but were not comparable to the standard tests. T-test analysis of the CITT, IFN and ELISAs demonstrated that their performances were not correlated. There is increasing recognition that individually, available diagnostic tests do not detect all infected cattle. Therefore, a comprehensive strategy for the diagnosis of bovine TB should include test results for the detection of both cellular and humoral immune responses where there may be animals at different stages of infection.(AU)

Um rebanho bovino naturalmente infectado por tuberculose foi analisado através de diferentes métodos diagnósticos. Um teste intradérmico simples (TIC) identificou 21 animais como positivos. Após 90 dias deste resultado, um teste intradérmico comparativo (TIC) foi aplicado nos 21 animais positivos ao TIS, além de outros 29 animais com resultados prévios negativos escolhidos aleatoriamente. De todos estes animais (50), foram coletadas amostras de leite e secreção nasal para isolamento e identificação de microrganismos por cultura e PCR; amostras de sangue de cada um dos animais foram coletadas para exames de ELISA: produção de Interferon-gama (IFN) e pesquisa de anticorpos frente aos antígenos MPB70 e MPB83. Tais amostras sanguíneas foram coletadas em três diferentes momentos: no dia da execução do TIC e nos dias dia 7 e dia 21 após a execução do TIC. Os animais que foram positivos a este teste foram abatidos; exames de identificação do agente, tais como cultivo e PCR foram realizados post-mortem para confirmação da doença. Baseado na análise Kappa, IFN apresentou resultados estatisticamente comparáveis aos resultados de isolamento e identificação bacteriana por cultura e PCR, além do TIC ao longo de todo o experimento. No entanto, TIC, ELISA e IFN não foram estatisticamente comparáveis. Tais resultados sugeriram que nenhum dos atuais métodos de diagnóstico para tuberculose possibilitou a identificação de todos os animais infectados. Por este motivo, uma estratégia mais abrangente deveria incluir métodos de diagnóstico que pudessem identificar a resposta imune celular e humoral, uma vez que animais de um mesmo rebanho poderiam se encontrar em diferentes estágios da infecção.(AU)