Characterization of nonpathological intrascleral cartilage in the domestic sheep (Ovis aries) / Caracterização de cartilagem intraescleral não patológica em ovinos (Ovis aries)

ABSTRACT: Birds, cartilaginous and teleost fish, reptiles, and some amphibians have intrascleral cartilage and/or bone; however, these are rarely reported in therian mammals. This study aimed to investigate and characterize a nonpathological formation of cartilage in the posterior sclera of sheep macroscopically, histologically, and by immunohistochemical exam (IHC). Ninety eyes from 45 domestic sheep were collected, underwent gross examination, fixed in formalin, and embedded in paraffin for the microscopical assessment. Sections with histological shreds of cartilage were selected to perform IHC to confirm the presence of cartilage. Intrascleral cartilage was detected in 60 eyeballs (66.66%) from 37 sheep (82.22%). A slight whitish thickening was grossly seen in the posterior sclera. The histologic exam revealed a few scattered, isolated chondrocytes to larger aggregates of cartilaginous islands in the posterior sclera. Eighteen (30%) of 60 eyeballs revealed marked anti-collagen type II immunolabeling. The development of cartilaginous structures in the eyes is considered rare in mammalian animals. The high occurrence of intrascleral cartilage in the examined sheep eyes suggests that this finding corresponds to an anatomical component of sheep sclera, despite the age, breed, or body condition.

RESUMO: Aves, peixes cartilaginosos e teleósteos e répteis, bem como alguns anfíbios possuem cartilagem e/ou osso intraescleral, contudo, isso é raramente descrito em marsupiais. O objetivo deste trabalho foi investigar e caracterizar a formação não patológica de cartilagem hialina na esclera posterior de ovinos, por exame macroscópico, histológico e imuno-histoquímico. Olhos de 45 ovinos foram coletados, submetidos a exame macroscópico, fixados em formalina a 10% tamponada e incluídos em parafina para o exame histológico. Amostras com evidência de formação cartilaginosa ao exame histológico foram selecionadas para a realização da técnica de imuno-histoquímica para confirmação. Cartilagem intraescleral foi detectada em 60 amostras oculares (66,66%) de 37 ovinos (82,22%), caracterizada na avaliação macroscópica como discretos espessamentos esbranquiçados na esclera posterior. O exame histológico revelou formações que variaram de condrócitos isolados e dispersos a grandes agregados, formando ilhas cartilaginosas na esclera. Dezoito (30%) de 60 bulbos oculares mostraram imunomarcação anti-colágeno tipo II. O desenvolvimento de estruturas cartilaginosas nos bulbos oculares é considerado raro em mamíferos. A identificação de cartilagem intraescleral em 66% dos olhos ovinos avaliados no estudo indica que a formação de cartilagem corresponde a um componente anatômico normal na esclera de ovinos, independente de idade, raça ou condição corporal.

Amelioration of exosome and mesenchymal stem cells in rats infected with diabetic nephropathy by attenuating early markers and aquaporin-1 expression / Melhoria das células-tronco exossomais e mesenquimais em ratos infectados com nefropatia diabética atenuando marcadores precoces e expressão de aquaporina-1

Diabetic nephropathy (DN) is a prevalent diabetic microvascular condition. It is the leading cause of kidney disease in the advanced stages. There is no currently effective treatment available. This research aimed to investigate the curative potentials of exosomes isolated from mesenchymal stem cells affecting DN. This study was performed on 70 male adult albino rats. Adult rats were randomized into seven groups: Group I: Negative control group, Group II: DN group, Group III: Balanites treated group, Group IV: MSCs treated group, Group V: Exosome treated group, Group VI: Balanites + MSCs treated group and Group VII: Balanites + exosome treated group. Following the trial period, blood and renal tissues were subjected to biochemical, gene expression analyses, and histopathological examinations. Results showed that MDA was substantially increased, whereas TAC was significantly decreased in the kidney in the DN group compared to normal health rats. Undesired elevated values of MDA levels and a decrease in TAC were substantially ameliorated in groups co-administered Balanites aegyptiacae with MSCs or exosomes compared to the DN group. A substantial elevation in TNF-α and substantially diminished concentration of IGF-1 were noticed in DN rats compared to normal health rats. Compared to the DN group, the co-administration of Balanites aegyptiacae with MSCs or exosomes substantially improved the undesirable elevated values of TNF-α and IGF-1. Furthermore, in the DN group, the mRNA expression of Vanin-1, Nephrin, and collagen IV was significantly higher than in normal healthy rats. Compared with DN rats, Vanin-1, Nephrin, and collagen IV Upregulation were substantially reduced in groups co-administered Balanites aegyptiacae with MSCs or exosomes. In DN rats, AQP1 expression was significantly lower than in normal healthy rats. Furthermore, the groups co-administered Balanites aegyptiacae with MSCs or exosomes demonstrated a substantial increase in AQP1 mRNA expression compared to DN rats.

A nefropatia diabética (ND) é uma condição microvascular diabética prevalente. É a principal causa de doença renal em estágios avançados. Atualmente, não há tratamento eficaz disponível. Esta pesquisa teve como objetivo investigar os potenciais curativos de exossomos isolados de células-tronco mesenquimais que afetam a ND. Este estudo foi realizado em 70 ratos albinos adultos machos. Ratos adultos foram randomizados em sete grupos: Grupo I: Grupo de controle negativo, Grupo II: Grupo DN, Grupo III: Grupo tratado com Balanites, Grupo IV: Grupo tratado com MSCs, Grupo V: Grupo tratado com exossomos, Grupo VI: Grupo tratado com Balanites + MSCs e Grupo VII: Balanites + grupo tratado com exossomas. Após o período experimental, o sangue e os tecidos renais foram submetidos a análises bioquímicas, de expressão gênica e exames histopatológicos. Os resultados mostraram que o MDA aumentou substancialmente, enquanto o TAC diminuiu significativamente no rim no grupo DN em comparação com ratos saudáveis normais. Valores elevados indesejados de níveis de MDA e uma diminuição no TAC foram substancialmente melhorados em grupos coadministrados Balanites aegyptiacae com MSCs ou exossomas em comparação com o grupo DN. Uma elevação substancial em TNF-α e uma concentração substancialmente diminuída de IGF-1 foram observadas em ratos DN em comparação com ratos saudáveis normais. Em comparação com o grupo DN, a coadministração de Balanites aegyptiacae com MSCs ou exossomas melhorou substancialmente os valores elevados indesejáveis de TNF-α e IGF-1. Além disso, no grupo DN a expressão de mRNA de vanina-1, nefrina e colágeno IV foi significativamente maior do que em ratos saudáveis normais. Comparado com ratos DN, Vanin-1, Nephrin e colágeno IV Upregulation foram substancialmente reduzidos em grupos co-administrados Balanites aegyptiacae com MSCs ou exossomos. Em ratos DN, a expressão de AQP1 foi significativamente menor do que em ratos saudáveis normais. Além disso, os grupos que coadministraram Balanites aegyptiacae com MSCs ou exossomos demonstraram um aumento substancial na expressão de mRNA de AQP1 em comparação com ratos DN.

Lateral patellar luxation and Ehlers Danlos Syndrome (EDS) in a dog

Background: Ehlers Danlos Syndrome (EDS) is a rare genetic disease characterized by a deficiency in collagen synthesis,which can result in joint laxity. Patellar luxation is one of the main orthopedic conditions that affect the canine knee joint,with limited descriptions of its association with EDS in dogs. The purpose of this report is to describe the surgical management and postoperative evolution of a 1-year-old Chow Chow dog with grade II patellar luxation, tibial valgus and EDS.Case: A 1-year-old Chow Chow dog was referred to the University Veterinary Hospital due to lameness of the left pelvicfor 3 months. At the orthopedic examination were verified severe lameness and lateral deviation of the left stifle joint during the ambulation of the animal. Additionally, it was verified bilateral hyperextension of the tibiotarsal joint and grade IIpatellar luxation of both pelvic limbs with painful hyperextension of the left stifle joint. Radiographic evaluation showedlateral displacement of the patella from both femoral trochlear groove, and a valgus deviation of the proximal left tibialshaft. In addition, it was verified cutaneous hyperextensibility and an extensibility index suggestive of EDS. The animalwas submitted to trochlear block resection technique and medial imbrication, followed by corrective tibial osteotomy.Furthermore, skin biopsies of the scapular and lumbar folds were performed during the corrective tibial osteotomy. Thesamples were sent for histopathological examination, which revealed fragmented and unorganized collagen fibers in thedermis. Histopathological findings were compatible with EDS. The absence of lameness and correct positioning of thepatella in the trochlear sulcus were verified in the post-surgical follow-up. Complete bone consolidation of the closingwedge osteotomy to correct the tibial...

Lateral patellar luxation and Ehlers Danlos Syndrome (EDS) in a dog

Background: Ehlers Danlos Syndrome (EDS) is a rare genetic disease characterized by a deficiency in collagen synthesis,which can result in joint laxity. Patellar luxation is one of the main orthopedic conditions that affect the canine knee joint,with limited descriptions of its association with EDS in dogs. The purpose of this report is to describe the surgical management and postoperative evolution of a 1-year-old Chow Chow dog with grade II patellar luxation, tibial valgus and EDS.Case: A 1-year-old Chow Chow dog was referred to the University Veterinary Hospital due to lameness of the left pelvicfor 3 months. At the orthopedic examination were verified severe lameness and lateral deviation of the left stifle joint during the ambulation of the animal. Additionally, it was verified bilateral hyperextension of the tibiotarsal joint and grade IIpatellar luxation of both pelvic limbs with painful hyperextension of the left stifle joint. Radiographic evaluation showedlateral displacement of the patella from both femoral trochlear groove, and a valgus deviation of the proximal left tibialshaft. In addition, it was verified cutaneous hyperextensibility and an extensibility index suggestive of EDS. The animalwas submitted to trochlear block resection technique and medial imbrication, followed by corrective tibial osteotomy.Furthermore, skin biopsies of the scapular and lumbar folds were performed during the corrective tibial osteotomy. Thesamples were sent for histopathological examination, which revealed fragmented and unorganized collagen fibers in thedermis. Histopathological findings were compatible with EDS. The absence of lameness and correct positioning of thepatella in the trochlear sulcus were verified in the post-surgical follow-up. Complete bone consolidation of the closingwedge osteotomy to correct the tibial...(AU)

Análise ultraestrutural do colágeno de feridas cutâneas de coelhos tratadas com plasma rico em plaquetas de equino / Ultrastructural analysis of the collagen of rabbit skin wounds treated with platelet-rich equine plasma

O colágeno é sintetizado e segregado no espaço extracelular e organizados em fibrilas estriadas de acordo com o tipo de tecido. Utilizaram-se 24 coelhos brancos da raça Nova Zelândia, com idade de 12 meses e com 3,0kg de peso corporal, para avaliar a porcentagem de colágeno das feridas cutâneas tratadas com plasma rico em plaquetas de equino e pomada contendo gentamicina, sulfanilamida, sulfadiazina, ureia e vitamina A. Os animais foram separados em quatro grupos de igual número e submetidos à remoção de pele na região das linhas médias dorsal torácica (feridas tratadas) e lombar (feridas controle). As feridas torácicas foram tratadas com plasma rico em plaqueta de equino e pomada contendo gentamicina, sulfanilamida, sulfadiazina, ureia e vitamina A, e as do grupo controle somente com a pomada. Dos animais do grupo I, foi coletado tecido cutâneo, para a avaliação histológica e a ultraestrutural, com três dias de pós-operatório; dos animais do grupo II, com sete dias; do grupo III, com 14 dias; e do grupo IV, com 21 dias. Decorrido o período de avaliação de cada grupo, foi coletado fragmento de pele para avaliação da porcentagem de colágeno, bem como do diâmetro e da densidade da fibrila de colágeno por microscopia eletrônica de transmissão. O tratamento com PRP de equino associado à aplicação tópica da pomada mostrou-se eficaz na maturação das fibrilas colágenas e na antecipação do processo cicatricial.(AU)

Collagen is synthesized and secreted into the extracellular space and organized into striated fibrils according to the tissue type. This study evaluated the concentration of collagen in rabbit skin wounds treated with equine platelet-rich plasma (PRP) and ointment containing gentamicin, sulfanilamide, sulfadiazine, urea, and vitamin A. Twenty-four New Zealand white rabbits aged 2 to 12 months and weighing 3.0kg were included. The animals were allocated equally into four groups and the skin was removed from the thoracic dorsal midline (treated wound) and lumbar (control wound) regions. The thoracic wounds were treated with equine PRP and ointment containing gentamicin, sulfanilamide, sulfadiazine, urea, and vitamin A, and the control group was treated with the ointment alone. For histological and ultrastructural assessment, cutaneous tissue was collected on postoperative days 3 (group I), 7 (group II), 14 (group III), and 21 (group IV). After the evaluation period, in each group, a skin fragment was collected for analysis of the collagen concentration, as well as the collagen fibril diameter and density by transmission electron microscopy. The results indicated that treatment with equine PRP combined with topical application of the ointment was effective in facilitating the maturation of collagen fibrils and the wound healing process.(AU)

Análise ultraestrutural do colágeno de feridas cutâneas de coelhos tratadas com plasma rico em plaquetas de equino / Ultrastructural analysis of the collagen of rabbit skin wounds treated with platelet-rich equine plasma

O colágeno é sintetizado e segregado no espaço extracelular e organizados em fibrilas estriadas de acordo com o tipo de tecido. Utilizaram-se 24 coelhos brancos da raça Nova Zelândia, com idade de 12 meses e com 3,0kg de peso corporal, para avaliar a porcentagem de colágeno das feridas cutâneas tratadas com plasma rico em plaquetas de equino e pomada contendo gentamicina, sulfanilamida, sulfadiazina, ureia e vitamina A. Os animais foram separados em quatro grupos de igual número e submetidos à remoção de pele na região das linhas médias dorsal torácica (feridas tratadas) e lombar (feridas controle). As feridas torácicas foram tratadas com plasma rico em plaqueta de equino e pomada contendo gentamicina, sulfanilamida, sulfadiazina, ureia e vitamina A, e as do grupo controle somente com a pomada. Dos animais do grupo I, foi coletado tecido cutâneo, para a avaliação histológica e a ultraestrutural, com três dias de pós-operatório; dos animais do grupo II, com sete dias; do grupo III, com 14 dias; e do grupo IV, com 21 dias. Decorrido o período de avaliação de cada grupo, foi coletado fragmento de pele para avaliação da porcentagem de colágeno, bem como do diâmetro e da densidade da fibrila de colágeno por microscopia eletrônica de transmissão. O tratamento com PRP de equino associado à aplicação tópica da pomada mostrou-se eficaz na maturação das fibrilas colágenas e na antecipação do processo cicatricial.(AU)

Collagen is synthesized and secreted into the extracellular space and organized into striated fibrils according to the tissue type. This study evaluated the concentration of collagen in rabbit skin wounds treated with equine platelet-rich plasma (PRP) and ointment containing gentamicin, sulfanilamide, sulfadiazine, urea, and vitamin A. Twenty-four New Zealand white rabbits aged 2 to 12 months and weighing 3.0kg were included. The animals were allocated equally into four groups and the skin was removed from the thoracic dorsal midline (treated wound) and lumbar (control wound) regions. The thoracic wounds were treated with equine PRP and ointment containing gentamicin, sulfanilamide, sulfadiazine, urea, and vitamin A, and the control group was treated with the ointment alone. For histological and ultrastructural assessment, cutaneous tissue was collected on postoperative days 3 (group I), 7 (group II), 14 (group III), and 21 (group IV). After the evaluation period, in each group, a skin fragment was collected for analysis of the collagen concentration, as well as the collagen fibril diameter and density by transmission electron microscopy. The results indicated that treatment with equine PRP combined with topical application of the ointment was effective in facilitating the maturation of collagen fibrils and the wound healing process.(AU)

Cartilagem articular, patogênese e tratamento da osteoartrite / Articular cartilage, and pathogenesis and treatment of the osteoarthritis / Cartílago articular, patogénesis y tratamiento de la osteoartritis

A osteoartrite caracteriza-se por dor e claudicação, sendo considerada processo não específico, mais sim uma sequela comum a várias formas de lesão articular, com envolvimento de fatores biológicos e mecânicos. Desta forma, o objetivo da presente revisão foi discorrer sobre alguns aspectos da cartilagem articular (generalidades, histogênese), patogênese da osteoartrite, bem como algumas possibilidades de tratamentos intra-articulares para a osteoatrite. A cartilagem articular, juntamente com o líquido sinovial, tem papel mecânico importante nas articulações diartrodiais. Os condrócitos estão entre os principais componentes da cartilagem articular e são apontados como células altamente diferenciadas com capacidade limitada de proliferação e migração. O outro componente é a matriz extracelular constituída de colágeno tipo II, proteoglicanos, proteínas não colagenosas, glicoproteínas, água e eletrólitos. A osteoartrite é classificada como doença articular não inflamatória, com múltiplas interações bioquímicas e biomecânicas. Todos os componentes da articulação podem ser comprometidos, porém a cartilagem é considerada o tecido alvo. A afecção pode ser classificada como primária, que ocorre predominantemente em animais idosos, e secundária, decorrente de doenças que afetam a articulação e as estruturas de suporte. Entre os tratamentos intra-articulares para a osteoartrite estão a viscossuplementação com ácido hialurônico, o uso de corticosteroides, e a combinação de ácido hialurônico e corticosteroides. Contudo, há ainda várias controvérsias quanto à eficácia.

Osteoarthritis is characterized by pain and lameness, being considered a non-specific process, but rather a common sequel to various forms of joint lesion, with involvement of biological and mechanical factors. Therefore, the purpose of the present review is to discuss some aspects of articular cartilage (generalities and histogenesis), pathogenesis of osteoarthritis, as well as some possibilities of intra-articular treatments for osteoarthritis. The articular cartilage, along with the synovial fluid, have an important mechanical role in diarthrodial joints. Chondrocytes are one of principal components of articular cartilage and are designated as highly differentiated cells with limited proliferation and migration capacity. The other component is the extracellular matrix composed of collagen type II, proteoglycans, non-collagenous proteins, glycoproteins, water and electrolytes. Osteoarthritis is classified as a non-inflammatory joint disease with multiple biochemical and biomechanical interactions. All components of the joint can be compromised, but cartilage is considered the target tissue. The osteoarthritis can be classified as primary, which occurs predominantly in elderly animals, and secondary, due to diseases that affect the joint and supporting structures. Among the intra-articular treatments for osteoarthritis are viscosupplementation with hyaluronic acid, the use of corticosteroids, and the combination of hyaluronic acid and corticosteroids. However, there are still several controversies regarding efficacy.

La osteoartritis se caracteriza por dolor e claudicación, considerándose como un proceso no especifico, y si, una secuela común a varias formas de lesión articular, involucrando factores biológicos e mecánicos. De esta forma, el objetivo de la presente revisión es mencionar algunos aspectos del cartílago articular (generalidades, histogénesis), patogénesis de la osteoartritis, así como algunas posibilidades de tratamientos intra-articulares para la osteoartritis. El cartílago articular, junto con el líquido sinovial, tienen un papel mecánico importante en las articulaciones diartrodiales. Los condrocitos están entre los principales componentes del cartílago articular y son fijados como células altamente diferenciadas con capacidad limitada de proliferación y migración. El otro componente es la matriz extracelular constituida de colágeno tipo II, proteoglicanos, proteínas no colagenosas, glicoproteínas, agua y electrólitos. La osteoartritis es clasificada como una enfermedad articular no inflamatoria, con múltiples interacciones bioquímicas y biomecánicas. Todos los componentes de la articulación pueden ser comprometidos, sin embargo, el cartílago articular es considerado el tejido de interés. La afección puede ser clasificada como primaria, que ocurre predominantemente en animales de edad avanzada, y secundaria, debido a enfermedades que afectan la articulación y las estructuras de soporte. Entre los tratamientos intra-articulares para la osteoartritis esta la viscosuplementación con ácido hialurônico, el uso de corticosteroides, e la combinación de ácido hialurônico e corticosteroides. Sin embargo, hay aun varias controversias en cuanto la eficacia.

Cartilagem articular, patogênese e tratamento da osteoartrite / Articular cartilage, and pathogenesis and treatment of the osteoarthritis / Cartílago articular, patogénesis y tratamiento de la osteoartritis

A osteoartrite caracteriza-se por dor e claudicação, sendo considerada processo não específico, mais sim uma sequela comum a várias formas de lesão articular, com envolvimento de fatores biológicos e mecânicos. Desta forma, o objetivo da presente revisão foi discorrer sobre alguns aspectos da cartilagem articular (generalidades, histogênese), patogênese da osteoartrite, bem como algumas possibilidades de tratamentos intra-articulares para a osteoatrite. A cartilagem articular, juntamente com o líquido sinovial, tem papel mecânico importante nas articulações diartrodiais. Os condrócitos estão entre os principais componentes da cartilagem articular e são apontados como células altamente diferenciadas com capacidade limitada de proliferação e migração. O outro componente é a matriz extracelular constituída de colágeno tipo II, proteoglicanos, proteínas não colagenosas, glicoproteínas, água e eletrólitos. A osteoartrite é classificada como doença articular não inflamatória, com múltiplas interações bioquímicas e biomecânicas. Todos os componentes da articulação podem ser comprometidos, porém a cartilagem é considerada o tecido alvo. A afecção pode ser classificada como primária, que ocorre predominantemente em animais idosos, e secundária, decorrente de doenças que afetam a articulação e as estruturas de suporte. Entre os tratamentos intra-articulares para a osteoartrite estão a viscossuplementação com ácido hialurônico, o uso de corticosteroides, e a combinação de ácido hialurônico e corticosteroides. Contudo, há ainda várias controvérsias quanto à eficácia.(AU)

Osteoarthritis is characterized by pain and lameness, being considered a non-specific process, but rather a common sequel to various forms of joint lesion, with involvement of biological and mechanical factors. Therefore, the purpose of the present review is to discuss some aspects of articular cartilage (generalities and histogenesis), pathogenesis of osteoarthritis, as well as some possibilities of intra-articular treatments for osteoarthritis. The articular cartilage, along with the synovial fluid, have an important mechanical role in diarthrodial joints. Chondrocytes are one of principal components of articular cartilage and are designated as highly differentiated cells with limited proliferation and migration capacity. The other component is the extracellular matrix composed of collagen type II, proteoglycans, non-collagenous proteins, glycoproteins, water and electrolytes. Osteoarthritis is classified as a non-inflammatory joint disease with multiple biochemical and biomechanical interactions. All components of the joint can be compromised, but cartilage is considered the target tissue. The osteoarthritis can be classified as primary, which occurs predominantly in elderly animals, and secondary, due to diseases that affect the joint and supporting structures. Among the intra-articular treatments for osteoarthritis are viscosupplementation with hyaluronic acid, the use of corticosteroids, and the combination of hyaluronic acid and corticosteroids. However, there are still several controversies regarding efficacy.(AU)

La osteoartritis se caracteriza por dolor e claudicación, considerándose como un proceso no especifico, y si, una secuela común a varias formas de lesión articular, involucrando factores biológicos e mecánicos. De esta forma, el objetivo de la presente revisión es mencionar algunos aspectos del cartílago articular (generalidades, histogénesis), patogénesis de la osteoartritis, así como algunas posibilidades de tratamientos intra-articulares para la osteoartritis. El cartílago articular, junto con el líquido sinovial, tienen un papel mecánico importante en las articulaciones diartrodiales. Los condrocitos están entre los principales componentes del cartílago articular y son fijados como células altamente diferenciadas con capacidad limitada de proliferación y migración. El otro componente es la matriz extracelular constituida de colágeno tipo II, proteoglicanos, proteínas no colagenosas, glicoproteínas, agua y electrólitos. La osteoartritis es clasificada como una enfermedad articular no inflamatoria, con múltiples interacciones bioquímicas y biomecánicas. Todos los componentes de la articulación pueden ser comprometidos, sin embargo, el cartílago articular es considerado el tejido de interés. La afección puede ser clasificada como primaria, que ocurre predominantemente en animales de edad avanzada, y secundaria, debido a enfermedades que afectan la articulación y las estructuras de soporte. Entre los tratamientos intra-articulares para la osteoartritis esta la viscosuplementación con ácido hialurônico, el uso de corticosteroides, e la combinación de ácido hialurônico e corticosteroides. Sin embargo, hay aun varias controversias en cuanto la eficacia.(AU)

Comparison of the effects of triamcinolone acetonide or platelet-rich plasma on expression of extracellular matrix-related genes in equine healthy chondrocytes in vitro / Comparação dos efeitos do acetonido de triancinolona ou plasma rico em plaquetas na expressão de genes relacionados à matriz extracelular de condrócitos in vitro de equinos adultos

In healthy cartilage, chondrocytes maintain an expression of collagens and proteoglycans and are sensitive to growth factors and cytokines that either enhance or reduce type II collagen synthesis. In osteoarthritis, pro-inflammatory cytokines, such as IL-6, induce overexpression of metalloproteinases (MMP) and decreasing synthesis of aggrecan. Use of chondroprotectors agents, such as Platelet-Rich Plasma (PRP) and triamcinolone (TA) are alternatives to reduce the progression of joint damage. In this study, we used chondrocytes extracted from metacarpophalangeal joints of healthy horses as the experimental model. Cells were treated in vitro with PRP or TA. No differences were observed between these treatments in comparison to the control group when the expressions of MMP9, MMP13, IL-6 and ACAN genes were evaluated (P<0.05). With these results, we can suggest that the treatments were not deleterious to equine cultured chondrocyte, once they did not stimulate MMPs and IL-6 synthesis or caused changes in ACAN.(AU)

Na cartilagem saudável, os condrócitos mantêm a expressão de colágenos e proteoglicanos, sendo sensíveis a fatores de crescimento e citocinas que aumentam ou reduzem a síntese de colágeno tipo II. Na osteoartrite, citocinas pró-inflamatórias, como a IL-6, estimulam a expressão de metaloproteinases (MMP) e reduzem a síntese de agrecano. O uso de condroprotetores, como o Plasma Rico em Plaquetas (PRP) e triancinolona (TA) é uma alternativa para se reduzir a progressão do dano articular. Neste estudo foram usados condrócitos extraídos das articulações metacarpofalangeanas de equinos saudáveis. As células foram tratadas in vitro com TA ou PRP. Não foram observadas diferenças entre os tratamentos comparando-se com o grupo controle quanto à expressão genética de MMP-9, MMP-13, IL-6 e ACAN (p<0,05). Assim, pode-se sugerir que os tratamentos não foram deletérios ao cultivo de condrócitos, uma vez que não estimularam a síntese de MMP e IL-6 e nem causaram alterações no ACAN.(AU)

Osteogênese Imperfeita em cão jovem da raça pinscher / Osteogenesis Imperfect in an young pinscher dog

Background: Osteogenesis imperfecta is a severe genetic disease rarely described in veterinary medicine. This multisystemic condition is caused by a defect in the production and metabolization of collagen, which implicates in bone fragility. This disease has been described in cattle, sheep, domestic felines, mouse and dogs of different breeds, including collie, golden retriever, beagle, dachshund and chow chow. Animals affected by this condition present multiple fractures without previous occurrence of trauma. Therefore, this report aimed to describe a case of osteogenesis imperfecta type III in a miniature pinscher dog.Case: A 1-year-old male miniature pinscher dog, was admitted for clinical evaluation in Fortaleza, Brazil, with a history of spontaneous fractures without known causes. This animal was maintained indoors, fed on dry feed and presented recurrent events of claudication and pain. In the physical examination, the individual walked solely with the forelimbs, avoiding the use of the hind limbs and presented pain behavior. Bulging of the skull was observed laterally, which promoted a triangular appearance of head and face. Fontanelles were soft, and the eyes presented blueish sclera and corneal opacity. Teeth were small, translucid, fragile and deformed. Radiography images revealed bulging of the calvaria and persistent fontanelles with open cranial sutures. In addition, cranial convolutions were less clear, which was compatible with hydrocephalus. Dental roots were narrow, short and presented partial pulp obliteration. The radiographic contrast of the dentin was low with a reduction of periapical radiolucency. Bone radiopacity was low in the bones of the abdomen and pelvis, in addition to femur. Metaphysis of the right tibia was enlarged and angular. Multiple fractures were identified in the pelvis with the formation of opaque bony calluses and bone marrow sclerosis. Physiological parameters and blood test results were unaltered.[...]

Osteogênese Imperfeita em cão jovem da raça pinscher / Osteogenesis Imperfect in an young pinscher dog

Background: Osteogenesis imperfecta is a severe genetic disease rarely described in veterinary medicine. This multisystemic condition is caused by a defect in the production and metabolization of collagen, which implicates in bone fragility. This disease has been described in cattle, sheep, domestic felines, mouse and dogs of different breeds, including collie, golden retriever, beagle, dachshund and chow chow. Animals affected by this condition present multiple fractures without previous occurrence of trauma. Therefore, this report aimed to describe a case of osteogenesis imperfecta type III in a miniature pinscher dog.Case: A 1-year-old male miniature pinscher dog, was admitted for clinical evaluation in Fortaleza, Brazil, with a history of spontaneous fractures without known causes. This animal was maintained indoors, fed on dry feed and presented recurrent events of claudication and pain. In the physical examination, the individual walked solely with the forelimbs, avoiding the use of the hind limbs and presented pain behavior. Bulging of the skull was observed laterally, which promoted a triangular appearance of head and face. Fontanelles were soft, and the eyes presented blueish sclera and corneal opacity. Teeth were small, translucid, fragile and deformed. Radiography images revealed bulging of the calvaria and persistent fontanelles with open cranial sutures. In addition, cranial convolutions were less clear, which was compatible with hydrocephalus. Dental roots were narrow, short and presented partial pulp obliteration. The radiographic contrast of the dentin was low with a reduction of periapical radiolucency. Bone radiopacity was low in the bones of the abdomen and pelvis, in addition to femur. Metaphysis of the right tibia was enlarged and angular. Multiple fractures were identified in the pelvis with the formation of opaque bony calluses and bone marrow sclerosis. Physiological parameters and blood test results were unaltered.[...](AU)

Xenogeneic mesenchymal stem cells in the formation of hyaline cartilage in osteochondral goat failure

Background: Osteochondral knee failures are among the most common causes of disability among the elderly human population and animal athletes. The xenogeneic transplantation of mesenchymal stem cells is a questionable therapeutic alternative that, despite the low expression of Major Histocompatibility Complex type II by these cells, still has relevant uncertainties about the safety and clinical efficacy. The main objective of the present study was to investigate whether the xenogeneic transplantation of mesenchymal stem cells induces hyaline cartilage formation, without histopathological evidence of rejection, in osteochondral failures of goats.Materials, Methods & Results: Five female goats were used, submitted to three surgical osteocondral failures in the right knee, treated with xenogenic mesenchymal stem cells of dental pulp, xenogenic platelet-rich plasma and hemostatic sponge of hydrolyzed collagen, respectively. The lesions were evaluated after 60 days of treatment, aiming to identify the presence of hyaline cartilage or fibrocartilage and the subchondral bone pattern (regenerated or disorganized). Transplantation of xenogenic mesenchymal stem cells induced predominant formation of hyaline cartilage (P < 0.05), with no histopathological evidence of inflammation when compared to the other treatments. Therapies with xenogeneic platelet-rich plasma and hemostatic sponge of hydrolyzed collagen induced greater formation of fibrocartilaginous cartilage, with no significant difference between them (P > 0.05). Macroscopically, the lesions of the stem cell treated group showed formation of firm repair tissue, opaque staining, integrated with adjacent cartilage and with the failure filling almost completely. The groups treated with PRP and hemostatic sponge of hydrolyzed collagen presented, on average, partial filling of the lesion, with irregular shape and darkened coloration.[...](AU)

Xenogeneic mesenchymal stem cells in the formation of hyaline cartilage in osteochondral goat failure

Background: Osteochondral knee failures are among the most common causes of disability among the elderly human population and animal athletes. The xenogeneic transplantation of mesenchymal stem cells is a questionable therapeutic alternative that, despite the low expression of Major Histocompatibility Complex type II by these cells, still has relevant uncertainties about the safety and clinical efficacy. The main objective of the present study was to investigate whether the xenogeneic transplantation of mesenchymal stem cells induces hyaline cartilage formation, without histopathological evidence of rejection, in osteochondral failures of goats.Materials, Methods & Results: Five female goats were used, submitted to three surgical osteocondral failures in the right knee, treated with xenogenic mesenchymal stem cells of dental pulp, xenogenic platelet-rich plasma and hemostatic sponge of hydrolyzed collagen, respectively. The lesions were evaluated after 60 days of treatment, aiming to identify the presence of hyaline cartilage or fibrocartilage and the subchondral bone pattern (regenerated or disorganized). Transplantation of xenogenic mesenchymal stem cells induced predominant formation of hyaline cartilage (P 0.05). Macroscopically, the lesions of the stem cell treated group showed formation of firm repair tissue, opaque staining, integrated with adjacent cartilage and with the failure filling almost completely. The groups treated with PRP and hemostatic sponge of hydrolyzed collagen presented, on average, partial filling of the lesion, with irregular shape and darkened coloration.[...]

The aplication of cyanoacrilate surgical glue on skin suture in rats

Purpose: To compare the use of a new cyanoacrylate-based surgical glue and suture with sepa-rate points in skin wounds closure. Methods: Thirty-six rats were subjected to a 4cm dorsal longitudinal incision. Twelve were sub-jected to simple suture with polyamide 6-0, 12 rats underwent wall synthesis using Dermabond(r) and 12 was performed cutaneous synthesis with N-2-Butyl-Cyanoacrylate. Twelve of each group was euthanized on the seventh postoperative day, their blood was taken to biochemical tests and a layer of skin and subcutaneous tissue surrounding the surgical scar was randomly divided in two segments, to the submission of tension tests and to histological study. Results: There were no significant difference between groups (p>0.05). In the soft dermis there was more type I collagen production in group I (p 0.05), group II and III was similar re-sults (p>0.05). In the compact dermis, all 3 groups showed similar results (p>0.05). The biomechanical study was similarity between the glue groups (p>0.05) but the group III proved to be different from the others having a higher resistance (p>0.05) . Conclusion: This glue does not cause any inflammation or kidney and hepatic toxicity. Polyamide sutures are more resistant and the glue should be used alone only in less tension are-as.(AU)

Equine multinodular pulmonary fibrosis in southern Brazil: pathology and differential diagnosis / Fibrose pulmonar multinodular em equinos no Sul do Rio Grande do Sul: patologia e diagnóstico diferencial

Equine multinodular pulmonary fibrosis (EMPF) diagnosed at the Laboratório Regional de Diagnóstico of Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade Federal de Pelotas (LRD/UFPel), is described. Differential aspects of other pulmonary diseases in horses with pneumonia and interstitial fibrosis were discussed. The disease occurred in a 15-year-old equine that presented with clinical signs of respiratory distress, intermittent fever, anorexia, and dyspnea. Macroscopically, there was enlargement of the lungs with whitish, pale, firm and well-delimited nodules, approximately 7-10 cm in diameter, distributed throughout the parenchyma. Histologically, the lung nodules had alveolar spaces with walls covered by cuboidal epithelium containing macrophages, neutrophils, lymphocytes, hyperplasia of type II pneumocytes and, eventually, multinucleated giant cells. The interstitium was markedly thickened by mature fibrous connective tissue and collagen. There were intranuclear inclusion bodies in the macrophages. The PCR technique for detecting the EHV-5 DNA was positive. In a retrospective study of pneumonia cases in horses with interstitial fibrosis diagnosed in the LRD/UFPel, two animals had macroscopic and histological lesions similar to those with EMPF, but they were negative for EHV-5 in PCR. Four cases diagnosed with pneumonia and interstitial tissue fibrosis had a histological pattern that was different from that observed in the EMPF animal, thus eliminating the possibility of EMPF. It is concluded that EMPF is a sporadic disease that should be considered in cases of respiratory disease in horses. Reports of such cases are important to alert technicians about the occurrence of rare diseases in Brazil. It is also necessary to establish the true role of EHV-5 in the pathogenesis of EMPF. Cases of pulmonary fibrosis such as EMPF, in which the virus is not present, should be studied to establish whether it could be an idiopathic form of the disease.(AU)

Descreve-se a fibrose multinodular pulmonar equina (EMPF) diagnosticado no Laboratório Regional de Diagnóstico da Faculdade de Veterinária da Universidade Federal de Pelotas. Foram discutidos a patologia da doença e os aspectos diferenciais de outras enfermidades pulmonares de equinos que cursam com pneumonia e fibrose intersticial. A doença ocorreu em um equino sem raça definida de 15 anos de idade que apresentou sinais clínicos de dificuldade respiratória febre intermitente, anorexia e dispneia, com evolução de aproximadamente 10 dias. Macroscopicamente havia aumento de volume dos pulmões e nódulos esbranquiçados, pálidos, firmes e bem delimitados, de aproximadamente 7-10 cm de diâmetro, distribuídos pelo parênquima. Histologicamente, o tecido pulmonar apresentava nódulos caracterizados pela presença de espaços alveolares, com paredes revestidas por epitélio cuboidal achatado, contendo macrófagos e neutrófilos e havia, também, linfócitos e hiperplasia de pneumócitos tipo II e eventualmente células gigantes multinuacleadas. O interstício estava acentuadamente espessado por tecido conjuntivo fibroso maduro e por colágeno. Havia corpúsculos de inclusão intranucleares em macrófagos. A técnica de PCR para detecção do DNA de herpes vírus equino-5 (EHV-5) resultou positiva. Em um estudo retrospectivo de casos de pneumonia com fibrose intersticial diagnosticados no LRD entre 2000 e 2015, dois equinos apresentaram lesões macroscópicas e histológicas similares às de EMPF, porém resultaram negativos na PCR para detecção de EHV-5. Quatro casos de pneumonia com fibrose do tecido intersticial apresentaram padrão histológico diverso da EMPF descartando-se a possibilidade de tratar-se da doença. Conclui-se que EMPF é uma enfermidade esporádica, no entanto deve ser levada em consideração em casos de doença respiratória em equinos. A descrição dos casos diagnosticados é importante para alertar técnicos sobre a ocorrência da mesma no Brasil. É necessário estabelecer o real papel do EHV-5 na patogenia da doença. Casos de fibrose pulmonar semelhantes à EMPF em que não esteja presente o vírus, devem ser estudados a fim de ficar estabelecido se poderia ser uma forma idiopática da mesma doença.(AU)

Equine multinodular pulmonary fibrosis in southern Brazil: pathology and differential diagnosis / Fibrose pulmonar multinodular em equinos no Sul do Rio Grande do Sul: patologia e diagnóstico diferencial

Equine multinodular pulmonary fibrosis (EMPF) diagnosed at the Laboratório Regional de Diagnóstico of Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade Federal de Pelotas (LRD/UFPel), is described. Differential aspects of other pulmonary diseases in horses with pneumonia and interstitial fibrosis were discussed. The disease occurred in a 15-year-old equine that presented with clinical signs of respiratory distress, intermittent fever, anorexia, and dyspnea. Macroscopically, there was enlargement of the lungs with whitish, pale, firm and well-delimited nodules, approximately 7-10 cm in diameter, distributed throughout the parenchyma. Histologically, the lung nodules had alveolar spaces with walls covered by cuboidal epithelium containing macrophages, neutrophils, lymphocytes, hyperplasia of type II pneumocytes and, eventually, multinucleated giant cells. The interstitium was markedly thickened by mature fibrous connective tissue and collagen. There were intranuclear inclusion bodies in the macrophages. The PCR technique for detecting the EHV-5 DNA was positive. In a retrospective study of pneumonia cases in horses with interstitial fibrosis diagnosed in the LRD/UFPel, two animals had macroscopic and histological lesions similar to those with EMPF, but they were negative for EHV-5 in PCR. Four cases diagnosed with pneumonia and interstitial tissue fibrosis had a histological pattern that was different from that observed in the EMPF animal, thus eliminating the possibility of EMPF. It is concluded that EMPF is a sporadic disease that should be considered in cases of respiratory disease in horses. Reports of such cases are important to alert technicians about the occurrence of rare diseases in Brazil. It is also necessary to establish the true role of EHV-5 in the pathogenesis of EMPF. Cases of pulmonary fibrosis such as EMPF, in which the virus is not present, should be studied to establish whether it could be an idiopathic form of the disease.(AU)

Descreve-se a fibrose multinodular pulmonar equina (EMPF) diagnosticado no Laboratório Regional de Diagnóstico da Faculdade de Veterinária da Universidade Federal de Pelotas. Foram discutidos a patologia da doença e os aspectos diferenciais de outras enfermidades pulmonares de equinos que cursam com pneumonia e fibrose intersticial. A doença ocorreu em um equino sem raça definida de 15 anos de idade que apresentou sinais clínicos de dificuldade respiratória febre intermitente, anorexia e dispneia, com evolução de aproximadamente 10 dias. Macroscopicamente havia aumento de volume dos pulmões e nódulos esbranquiçados, pálidos, firmes e bem delimitados, de aproximadamente 7-10 cm de diâmetro, distribuídos pelo parênquima. Histologicamente, o tecido pulmonar apresentava nódulos caracterizados pela presença de espaços alveolares, com paredes revestidas por epitélio cuboidal achatado, contendo macrófagos e neutrófilos e havia, também, linfócitos e hiperplasia de pneumócitos tipo II e eventualmente células gigantes multinuacleadas. O interstício estava acentuadamente espessado por tecido conjuntivo fibroso maduro e por colágeno. Havia corpúsculos de inclusão intranucleares em macrófagos. A técnica de PCR para detecção do DNA de herpes vírus equino-5 (EHV-5) resultou positiva. Em um estudo retrospectivo de casos de pneumonia com fibrose intersticial diagnosticados no LRD entre 2000 e 2015, dois equinos apresentaram lesões macroscópicas e histológicas similares às de EMPF, porém resultaram negativos na PCR para detecção de EHV-5. Quatro casos de pneumonia com fibrose do tecido intersticial apresentaram padrão histológico diverso da EMPF descartando-se a possibilidade de tratar-se da doença. Conclui-se que EMPF é uma enfermidade esporádica, no entanto deve ser levada em consideração em casos de doença respiratória em equinos. A descrição dos casos diagnosticados é importante para alertar técnicos sobre a ocorrência da mesma no Brasil. É necessário estabelecer o real papel do EHV-5 na patogenia da doença. Casos de fibrose pulmonar semelhantes à EMPF em que não esteja presente o vírus, devem ser estudados a fim de ficar estabelecido se poderia ser uma forma idiopática da mesma doença.(AU)

AVALIAÇÃO DA MEMBRANA DE COLÁGENO TIPO II NA CICATRIZAÇÃO DE FERIDAS CUTÂNEAS EXCISIONAIS EM RATOS WISTAR

Novos estudos apontam a produção de curativos, sintéticos ou com biomateriais, que possam influenciar de maneira benéfica na maioria dos tipos de feridas, seja por liberação de substâncias para a cicatrização ou por entrega de drogas nas células. A utilização de colágeno para esse fim está sendo amplamente estudada, a principal vantagem desse composto é sua alta degradabilidade e biocompatibilidade. O objetivo desse estudo foi verificar se o processo cicatricial da pele submetida à lesão cutânea induzida em ratos Wistar, responde positivamente usando membrana de colágeno tipo II não hidrolisado como curativo. Utilizaram-se 52 ratos da linhagem Wistar. Em cada animal foi realizada uma ferida com um trépano de 10mm na altura da cernelha. Os animais foram distribuídos em 3 grupos, grupo Controle, grupo Controle Positivo e grupo Tratamento. Foram avaliadas as respostas da cicatrização de maneira macro e microscópicas ao 5, 10 e 15 dias. As analises macroscópicas levaram em conta a área da ferida pós tratamento, já as análises microscópicas avaliaram a porcentagem de colágeno e características de reepitelização, infiltrado linfoplasmocitário e presença de crosta. Pode-se perceber que o tratamento com colágeno tipo II foi benéfico em relação a produção de colágeno na ferida aos 15 dias, além disso ao 10º dia pode-se observar uma taxa maior de reepitelização, diminuição do infiltrado linfoplasmocitário e ausência de crosta em relação aos outros grupos. O uso de UCII em feridas excisionais em ratos mostrou se eficaz em relação a melhora na produção final de colágeno e iniciando a fase proliferativa mais rapidamente.

New studies point to the production of dressings, synthetic or with biomaterials, which can beneficially influence most types of wounds, either by releasing substances for healing or by delivering drugs into cells. The use of collagen for this purpose is being widely studied, the main advantage of this compound is its high degradability and biocompatibility. The aim of the study was to verify whether the healing process of the skin submitted to cutaneous injury induced in Wistar rats responds positively using non-hydrolyzed type II collagen membrane as a dressing. 52 Wistar rats were used. Each animal was wounded with a 10mm burr at the height of the withers. The animals were divided into 3 groups, Control group, Positive Control group and Treatment group. Macro and microscopic healing responses were evaluated at 5, 10 and 15 days. The macroscopic analyzes took into account the area of the wound after treatment, while the microscopic analyzes assess the percentage of collagen and characteristics of reepithelialization, lymphoplasmacytic infiltrate and the presence of crust. It can be seen that the treatment with collagen type II was beneficial in relation to the production of collagen in the wound at 15 days, in addition to the 10th day, a higher rate of re-epithelialization, decreased lymphoplasmacytic infiltrate and absence of crust can be observed in relation to to other groups. The use of UCII in excisional wounds in rats shows effectively in relation to the improvement in the final production of collagen and initiating a more rapidly proliferative phase.

ESTUDO COMPARATIVO DA CAPACIDADE DE DIFERENCIAÇÃO TENOGÊNICA DE CÉLULAS-TRONCO MESENQUIMAIS DE DIFERENTES FONTES TECIDUAIS EM CULTIVO 3D

As lesões tendíneas são causas importantes de claudicação e afastamento do esporte em equinos e no homem. A incidência de lesões é variada de acordo com a modalidade e intensidade atlética, compreendendo cerca de 30% das lesões musculoesqueléticas de ambas as espécies. Os tratamentos convencionais são pouco eficazes em reparar com qualidade a matriz extracelular (MEC), o que determina o elevado índice de recidivas. As células-tronco mesenquimais (CTM) ganharam destaque no tratamento das tendinopatias e demonstram resultados favoráveis nas características histológicas e mecânicas teciduais, bem como redução do tempo de reparação tendínea. Estas caracteristicas terapeuticas das CTM são atribuidas à sua habilidade de imunomodulação, característica anti-inflamatória, promotora da reorganização tecidual e capacidade de diferenciação em linhagens mesodermais. Já é conhecida a possibilidade de diferenciação osteogênica, adipogênica e condrogênica in vitro das CTM, no entanto a diferenciação tenogênica ainda não possui uma metodologia padronizada e eficaz. A modalidade de cultivo tridimensional (3D) de CTM em materiais sintéticos ou biológicos é capaz de estimular a diferenciação celular de acordo com a composição do arcabouço, além de oferecer proteção e potencializar o desempenho terapêutico. Objetivo: Determinar qual melhor fonte de CTM equinas dentre: tecido adiposo (CTMad); medula óssea (CTMmo); e tendão obtidos por isolamento (CTMtd ISO) ou explante (CTMtd EXPL), que possui a melhor capacidade de proliferação in vitro, diferenciação tenogênia em cultura 3D em hidrogel de MEC tendinea equina (HgMECTdEq) e cultivo 2D em membrana Transwell® revestida de colágeno I e III (1:1). Objetivamos também avaliar a eficácia de uma nova metodologia de diferenciação tenogênica. Métodos: As quatro diferentes fontes de CTM foram obtidas de um mesmo equino com 10 meses de idade. As amostras foram processadas e as CTM, isoladas e cultivadas. As células foram caracterizadas através de sua morfologia fibroblastóide, aderência ao plástico, expansão clonal, expressão de receptores de superficie CD13-, CD34-, CD44+, CD45-, CD90+, CD105+, CD106-, MHC-II- e diferenciação osteogênica, adipogênica e condrogênica. A capacidade de proliferação in vitro de cada origem foi avaliada pelos testes de Taxa de Proliferação Celular (TPC) e Tempo de Cuplicação da População Celular (TDPC), cultavas por 72 horas em três diferentes concentrações iniciais (1x104, 3x104 e 1x105). Foi avaliada a habilidade de diferenciação tenogênica de cada origem celular através da produção de colágeno pela coloração de Picrosirius Red quando cultivadas em membrana Transwell® revestida com COL1:COL3 e meio de diferenciação tenogênica (50 ng/ml de Proteína Óssea Morfogenética-12 (BMP-12), 50 g/ml de Ácido Ascórbico e 5 g/ml de ITS). O HgMECTdEq foi produzido de acordo com protocolo desenvolvido pelo Laboratório de Terapias Regenerativas da FMVZ Unesp, Botucatu-SP. Posteriormente 2x105 CTM de cada origem foram adicionadas em cultivo 3D imersas em 0,5 mL de hidrogel e cultivadas por 7 dias em meio de cultivo padrão e de diferenciação tenogênica. Foi determinada a concentração de metaloproteinases de matriz 2 e 9 (MMP-2 e MMP-9) pelo ensaio de zimografia e em análise quantitativa por PCR a expressão gênica dos marcadores de tenogênese Scleraxis, Mohawk, Biglicana, Decorin, Tenascina C, Colágeno I e Colágeno III, além do fator osteogênico RunX2 do cultivo 3D em HgMECTdEq e em cultivo 2D em membrana COL1:COL3, com meio padrão e de diferenciação tenogênica. Resultados: Todas as células apresentaram características similares quanto à morfologia fibroblastoide, aderência ao plástico e expansão clonal. Houve baixa expressão dos receptores de superfície CD105 para CTMtd ISO e CD44 para as CTMad e positiva expressão de MHC-II para as CTMtd EXPL. Superior habilidade de proliferação in vitro foi identificada para a CTMad e inferior capacidade de diferenciação adipogênica e condrogênica foi observada para as CTMtd EXPL. A nova metodologia de diferenciação tenogênica foi capaz de produzir a diferenciação tenogênica das quatro origens de CTM, com inferior produção de colágeno para as CTMmo. O meio de diferenciação tenogênico foi capaz de aumentar a concentração de MMP-2 e MMP-9 e também aumentar a expressão dos marcadores tenogênicos Sclerax, Mohawk, Biglicana, Decorin, COL1, COL3, Tenascina C e o fator esteogênico Runx2. Conclusão: A nova metodologia de diferenciação tenogênica proposta pelo estudo foi eficaz em induzir a tenogênese de todas as fontes de CTM avaliadas. De acordo com nossos resultados a melhor fonte em capacidade de proliferação, diferenciação tenogênica in vitro e seguridade para aplicações clínicas são as CTMad. As CTMtd ISO e EXPL, apesar de sua evidente capacidade de tenogênese, apresentam população heterogênia em cultivo e resultados de caracterização que desencorajam sua aplicação clínica, especialmente de forma alogênica.

Tendon injuries are important causes of lameness and withdrawal from sport in horses and men. The incidence of injuries varies according to the sport and athletic intensity, comprising about 30% of musculoskeletal injuries of both species. Conventional treatments are ineffective in repairing the extracellular matrix (ECM) with quality, which contributes to the high rate of recurrence. Mesenchymal stem cells (MSC) gained prominence in the treatment of tendinopathies and showed favorable results in the histological and mechanical tissue characteristics, as well as a reduction in the tendon repair time. These therapeutic characteristics of MSCs are attributed to their ability to immunomodulate, anti-inflammatory, promote tissue reorganization and differentiate into mesodermal lineages. The possibility of osteogenic, adipogenic and chondrogenic differentiation in vitro of MSCs is already known, however tenogenic differentiation still does not have a standardized and effective methodology. The modality of three-dimensional (3D) culture of MSC in synthetic or biological materials is capable of stimulating cell differentiation according to the composition of the framework, in addition to offering protection and enhancing therapeutic performance. Objective: To determine the best source of equine MSCs among adipose tissue (MSCad), bone marrow (MSCmo) and tendon obtained by isolation (MSCtd ISO) or tendon explant (MSCtd EXPL), for in vitro proliferation and tenogenic differentiation under two different conditions: 3D hydrogel cultivation of equine tendon ECM (HgMECTdEq); and 2D cultivation on a type I and III collagen-coated membrane. We also aim to evaluate the effectiveness of a new formulation of a means inducing tenogenic differentiation. Methods: The four different sources of MSC were obtained from the same 10-month-old horse. Samples were processed and MSCs isolated and cultivated. The cells were characterized by their fibroblastoid morphology, plastic adherence, clonal expansion, expression of CD13-, CD34-, CD44+, CD45-, CD90+, CD105+, CD106-, MHC-II- surface receptors and osteogenic, adipogenic and differentiation. chondrogenic. The in vitro proliferation capacity of each source was evaluated by the Cell Proliferation Rate (CPT) and Population Doubling Time (PDT) tests, grown for 72 hours at three different initial concentrations (1x104, 3x104 and 1x105). The tenogenic differentiation ability of each cell origin was evaluated through the production of collagen by Picrosirius Red staining when cultivated on a Transwell® membrane coated with COL1:COL3 and tenogenic differentiation medium (50 ng/ml of Morphogenetic Bone Protein-12 (BMP) -12), 50 g/ml Ascorbic Acid and 5 g/ml ITS). The HgMECTdEq was produced according to a protocol developed by the Laboratory of Regenerative Therapies at FMVZ Unesp, Botucatu-SP. Afterwards, 2x105 CTM of each origin were added in 3D culture immersed in 0.5 mL of hydrogel and cultivated for 7 days in standard culture medium and tenogenic differentiation. The concentration of matrix metalloproteinases 2 and 9 (MMP-2 and MMP-9) was determined by zymography assay and in quantitative analysis by PCR the gene expression of tenogenesis markers Scleraxis, Mohawk, Biglican, Decorin, Tenascin C, Collagen I and Collagen III, in addition to the osteogenic factor RunX2 from 3D culture in HgMECTdEq and in 2D culture in COL1:COL3 membrane, with standard culture medium and tenogenic differentiation. Results: All cells showed similar characteristics regarding fibroblastoid morphology, plastic adherence and clonal expansion. There was low expression of surface receptors CD105 for CTMtd ISO and CD44 for CTMad and positive expression of MHC-II for CTMtd EXPL. Superior in vitro proliferation ability was identified for MSCad and inferior capacity for adipogenic and chondrogenic differentiation was observed for MSCtd EXPL. The new tenogenic differentiation methodology demonstrated efficacy in the four MSC origins, with lower collagen production for MSCmo. The tenogenic differentiation medium was able to increase the concentration of MMP-2 and MMP-9 and also increase the expression of tenogenic markers Sclerax, Mohawk, Biglican, Decorin, COL1, COL3, Tenascin C and the osteogenic factor Runx2. Conclusion: According to our results, we determined that the best source of proliferation capacity and tenogenic differentiation in vitro are MSCad. MSCtd ISO showed an evident in vitro tenogenesis capacity, being a promising source of CTM. The new tenogenic differentiation methodology proposed by the study was effective in inducing tenogenesis of all MSC sources evaluated.

Efeito da taxa de crescimento nos períodos de pré-desmame, pós-desmame e engorda sobre os atributos da carcaça e carne em sistemas de recria e engorda de bovinos Nelore

Objetivou-se avaliar as características de carcaça e carne de bovinos Nelore terminados em confinamento, submetidos a distintos ganhos de peso alto (H) e baixo (L) no período pré-desmame (PREW) e pós-desmame (PROW). Os animais foram separados em quatro tratamentos: PREW_H, PREW_L, PROW_H e PROW_L. Foram utilizados 283 bovinos machos, não castrados, inseridos no Programa da Associação Nacional de Criadores e Pesquisadores (ANCP). As comparações das taxas de ganhos foram realizadas com base em grupos de animais agrupados por ano de nascimento e época (seca ou chuvas) do ano, os quais foram manejados de forma similar dentro de um determinado rebanho, formando 20 grupos de contemporâneos do desmame ao sobreano, e em seguida criados na fase da cria e recria em sistema a pasto, suplementados com sal mineral e terminados em confinamento por 90 dias. Durante o confinamento, a relação volumoso:concentrado variou de 50:50 a 30:70, dependendo da fazenda. A dieta dos animais consistiu de silagem de milho integral ou de planta de sorgo, além de milho em grãos e / ou sorgo moído como concentrado energético e soja como concentrado proteico. O grupo de contemporâneos ao desmame foi composto por animais pertencentes à mesma fazenda, ano de nascimento, grupo de manejo ao pré-desmame e sexo, e o grupo de contemporâneo pós-desmame por animais pertencentes à mesma fazenda, ano de nascimento, grupo de manejo ao sobreano e sexo. Os animais foram classificados em: PREW_L e PREW_H, obtida pela diferença entre o peso ajustado aos 120 e 240 dias de idade e PROW_L e PROW_H, calculada pela diferença entre o peso ajustado aos 240 e 450 dias de idade. Para a análise da qualidade da carcaça e da carne, utilizou-se um total de 46 animais (PREW_L = 26, PREW_H = 20, PROW_L = 30 e PROW_H = 16) e peso vivo final de abate 580 ± 65,17 kg. Os animais foram selecionados considerando os valores extremos de desempenho dentro dos grupos a serem terminados em confinamento e posteriormente abatidos aos 24 meses de idade. No abate, foram avaliados o peso da carcaça quente (HCW), rendimento de carcaça quente (DP), e para a identificação do tipo de fibra muscular (MyHC) por SDS-PAGE foram coletadas amostras do músculo Longissimus thoracis (LT) e Semitendinosus (ST). Durante a desossa analisou-se o valor do pH 24 horas, área de olho de lombo (REA), espessura de gordura subcutânea (FT) e marmorização (MARM). Amostras do músculo LT entre as 12ª e 13ª costelas foram coletadas para análises da força de cisalhamento (WBSF), maturadas por sete dias a 0-2ºC, perdas por cocção (CL), cor da carne, perfil de ácidos graxos (FA), lipídeos totais (LT), colesterol (Cho), comprimento de sarcômero (SL), colágeno total (TCol), colágeno solúvel (SCol) e colágeno insolúvel (ICol). Após as análises, constatou-se que a taxa de ganho de peso influenciou o HCW, FT e SL (p < 0.05). No entanto, não foram observadas diferenças para pH, REA, MARM, WBSF, cor da carne e LT (p > 0.05). A carne de animais PROW_H apresentou melhor porcentagem de alguns ácidos graxos considerados desejáveis à saúde humana (p <0.05). Observamos poucos resultados para a interação da taxa de ganho de peso entre as fases PREW x PROW para o ácido vacênico (18:1 trans-11), EPA- Eicosapentaenoico, (22:5 n3), ácido graxo linolênico conjugado CLA e isomêro CLA trans 10 cis 12. A taxa de ganho de peso não influenciou o Cho, tipo de fibras MyHC (I e II) e componentes do tecido conjuntivo (TCol,ICol e SCol) (p > 0.05). No entanto, para o TCol foi encontrada correlação negativa com HCQ, CL, MyHC-I, e correlação positiva para MyHC-II. Os resultados desse estudo mostram que a utilização de critérios de seleção, como taxa de ganho de peso nas fases pré e pós-desmame, em bovinos Nelore, poderia ser uma alternativa na obtenção de bons índices de qualidade de carne e características de carcaça. Sendo assim, a taxa de ganho de peso para as características de carcaça melhoradas, como HCW, SL e alguns perfis de FA, sugerem que os animais PROW_H apresentaram carne favorável à saúde humana, com condições de atender a demanda do consumidor por produtos de alta qualidade e da indústria de carne bovina.

The objective of this study was to evaluate the carcass, and meat traits of Nellore cattle finished in a feedlot, submitted to different high (H) and low (L) weight gains in the pre-weaning (PREW) and post-weaning (PROW) periods. The animals were separated into four treatments: PREW_H, PREW_L, PROW_H, and PROW_L. Data of 283 non-castrated males from the National Association of Breeders and Researchers Association (ANCP, Ribeirão Preto, Brazil) were used. Comparisons of weight gain rates were made based on groups of animals grouped by year of birth and season of the year, which were handled similarly within a given herd, forming 20 contemporary groups from weaning to yearling, and then reared at the stage of rearing and rearing in a pasture system, supplemented with mineral salt and finished in confinement for 90 days. During the feedlot period, the forage: concentrate ratio ranged from 50:50 to 30:70, depending on the farm. The animals' diet consisted of whole corn silage or sorghum plant, in addition to corn grain and/or ground sorghum as an energy concentrate and soy as a protein concentrate. The contemporary groups at weaning were composed of animals belonging to the same farm, year of birth, weaning management group, and sex. The postweaning contemporary group was formed by animals belonging to the same farm, year of birth, group of yearling management, and sex. The animals were classified into PREW_L and PREW_H by the difference between the adjusted weight at 120 and 240 days of age and PROW_L and PROW_H, calculated by the difference between the adjusted weight at 240 and 450 days of age. For the analysis of carcass and meat quality, a total of 46 animals (PREW_L = 26, PREW_H = 20, PROW_L = 30, and PROW_H = 16) and final live weight 580 ± 65.17 kg were used. The animals were selected considering the extreme performance values within the groups to be finished in feedlot and subsequently slaughtered at 24 months of age. At the slaughterhouse, we measured the hot carcass weight (HCW), hot carcass yield (DP), and collected samples of the Longissimus thoracis (LT) and Semitendinosus (ST) muscle samples to identify the type of muscle fiber (MyHC) by SDS-PAGE. During deboning, the pH value was analyzed 24 hours, the rib eye area (REA), subcutaneous fat thickness (FT), and marbling (MARM). Samples of the LT muscle between the 12th and 13th ribs were collected for shear force analysis (WBSF), matured for seven days at 0-2º C, cooking losses (CL), meat color, fatty acid profile (FA), total lipids (LT), cholesterol (Cho), sarcomere length (SL), total collagen (TCol), soluble collagen (SCol) and insoluble collagen (ICol). After the analysis, it was found that the weight gain rate influenced HCW, FT, and SL (p< 0.05). However, no differences were observed for pH, OER, MARM, WBSF, meat color, and LT (p> 0.05). The meat of PROW_H animals showed a better percentage of some fatty acids considered desirable to human health, (p <0.05). The statistical analyzes showed that there was an interaction of the weight gain rate between the PREW x PROW phases with the vaccenic acid (18: 1 trans-11), EPAEicosapentaenoic acid, (22: 5 n3), acid conjugated linolenic fat CLA and isomer CLA trans 10 cis 12. The rate of weight gain did not influence Cho, type of MyHC fibers (I and II), and connective tissue components (TCol, ICol, and SCol) (p> 0.05). However, for TCol a negative correlation was found with HCW, CL, MyHC-I, and a positive correlation for MyHC-II. The results of this study show that the use of selection criteria such as the rate of weight gain in the pre-and post-weaning phases in Nellore cattle could be an alternative to improve carcass andmeat quality traits. Thus, the rate of weight gain for improved carcass traits, such as HCW, SL and FA, suggests that PROW_H animals presented meat favorable to human health, able to meet consumer demand for high-quality products and the meat industry beef.

PARÂMETROS MORFOFUNCIONAIS DO TECIDO OVARIANO SUBMETIDO AO TRANSPLANTE HETEROTÓPICO

O transplante de tecido ovariano é a principal alternativa para a retomada da função endócrina e reprodutiva em pacientes jovens candidatos ao tratamento quimioterápico. Resultados promissores e nascimentos até o momento foram alcançados. No entanto, um protocolo eficiente para transportar e enxertar o tecido ovariano ainda não está estabelecido. Portanto, o objetivo da presente tese foi investigar os principais fatores envolvidos nos procedimentos de conservação e enxerto, divididos em duas fases. A fase I teve como objetivo investigar o efeito dos sítios heterotópicos superficiais subcutâneo (SC) e intramuscular (IM) sobre a viabilidade tecidual, impacto sobre os folículos ovarianos e ao estroma, e favorecimento da revascularização após 7 ou 15 dias de transplante utilizando o modelo caprino. Uma porcentagem aumentada de folículos em desenvolvimento foi observada nos grupos enxertados (P< 0,05). Foi observada uma forte redução na densidade folicular e de células estromais, principalmente após 15 dias de transplante (P < 0,05). Proporções semelhantes de fibras colágenas tipo I foram observadas após 7 dias e de tipo III após 15 dias, independentemente do sítio. Além disso, a fragmentação do DNA tecidual foi semelhante após 15 dias de enxerto. Observaram-se associações positivas entre a densidade de células estromais e a deposição de fibras colágenas tipo I com a porcentagem de folículos normais nos grupos enxertados. Não foram encontradas diferenças entre a dinâmica vascular durante o período de enxertia. Concluiu-se que ambos os locais promovem taxa de desenvolvimento folicular semelhante, sugerindo que danos e alterações na composição do estroma são potenciais biomarcadores da viabilidade do enxerto. A fase II teve como objetivo avaliar o efeito da suplementação de VEGF ao meio de transporte de tecido ovariano bovino a 4º durante 24h. Para isso, tecidos ovarianos bovinos foram coletados e subdividos nos grupos (i) a fresco: controle fresco, transplante a fresco; (ii) resfriados: controle resfriado, resfriado e transplantado, e resfriado e cultivado; (iii) resfriados na presença de 50 ng/ml de VEGF: controle resfriado+, resfriado+ e transplantado, e resfriado+ e cultivado. Observou-se que o resfriamento com VEGF proporcionou maior porcentagem (P <0,05) de folículos morfológicos normais e o desenvolvimento de folículos após 7 dias de cultivo ou transplante em relação ao resfriamento sem suplementação. Além disso, tecidos ovarianos pré-incubados com VEGF após o transplante apresentaram maior sobrevivência folicular, desenvolvimento e densidade folicular e de células estromais quando comparados ao transplante fresco (P<0,05). Observou-se aumento da deposição de fibras de colágeno tipo I e redução de fibras de colágeno tipo III no tratamento resfriado com VEGF seguido de transplante em relação a todos os outros tratamentos (P< 0,05), exceto no transplante fresco. Além disso, uma imunoquantificação semelhante de PCNA foi encontrada entre tecidos ovarianos pré-incubados com VEGF após enxerto ou cultivo (P> 0,05) e menor que os outros tratamentos (P < 0,05). Concluiu-se que a presença de VEGF antes do transplante ou do cultivo in vitro pode favorecer a viabilidade das estruturas foliculares.

Ovarian tissue transplantation is the main alternative for the resumption of endocrine and reproductive function in young patients who are candidates for chemotherapy treatment. Promising results and births to date were achieved, however, an efficient protocol to transport and engraft the ovarian tissue still not stablished. Therefore, the aim of the present thesis was to investigate the main factors involved in conservation and engraftment procedures, divided in 2 phases. Phase I aimed to investigate the effect of subcutaneous (SC) and intramuscular (IM) superficial heterotopic sites on tissue viability, impact on ovarian follicles and stroma, and favoring revascularization after 7 or 15 days of transplantation using the model Goat model. An increased percentage of developing follicles was observed in grafted groups. A strong reduction in follicular and stromal cell density was observed, especially after 15 days of transplantation (P< 0.05). Similar proportions of collagen fibers type I was observed after 7 days and type III after 15 days, regardless of site. Also, DNA fragmentation was similar after 15 days of grafting. Positive associations were observed among stromal cell density and deposition of type I collagen fibers with the percentage of normal follicles in grafted groups. No differences were found among vascular dynamics during grafting period. It was concluded that both sites promote similar follicular development rate, suggesting that damage and changes in stromal composition are potential biomarkers of graft viability. Phase II aimed to evaluate the effect of supplementing VEGF to the transport medium of bovine ovarian tissue at 4º for 24h. For this, bovine ovarian tissues were collected and subdivided into groups (i) fresh: fresh control, fresh transplant; (ii) colds: control cold, cooled and transplanted, and cooled and cultivated; (iii) presence of 50 ng / ml of VEGF: control cooled +, cooled + and transplanted, and cooled + and cultured. It was observed that cooling with VEGF provided a higher percentage (P <0.05) of morphological normal follicles and the developmental rate after 7 days of in vitro culture or transplantation in relation to cooling without supplementation. In addition, ovarian tissues pre-incubated with VEGF after transplantation showed greater follicular survival, follicular and stromal cell development and density when compared to fresh transplantation (P <0.05). There was an increase in the deposition of type I collagen fibers and a reduction in type III collagen fibers in the cooled treatment+ VEGF followed by transplantation in relation to all other treatments (P <0.05), except for fresh transplantation. In addition, a similar immunoquantification of PCNA was found among ovarian tissues pre-incubated with VEGF after grafting or in vitro culture (P> 0.05) and lower than the other treatments (P <0.05). It was concluded that the presence of VEGF prior to transplantation or in vitro culture may favor the viability of follicular structures.