In vitro antimicrobial activity of carvacrol against shrimp pathogens and its use as feed additive for the pacific white shrimp / Atividade antimocrobiana in vitro do carbacrol contra patógenos de camarões e seu uso como aditivo alimentar na dieta do camarão-branco-do-pacífico

This study aimed to evaluate the in vitro effect of the phenolic compound carvacrol on different microorganisms of importance in shrimp farming, and it's in vivo effect on zootechnical, immunological and microbiological performance, and resistance of Litopenaeus vannamei challenged with Vibrio parahaemolyticus. In particular, the antimicrobial activity of carvacrol was evaluated in vitro by analysis of the minimum inhibitory concentration (MIC) and by agar diffusion with Gram-negative and Gram-positive bacteria. The in vivo experiment was conducted using different concentrations of carvacrol (1, 3, 4 and 6 mg mL-¹) added to shrimp feed, together with a control diet without carvacrol. After four weeks, zootechnical, immunological and microbiological parameters and resistance of animals challenged with V. parahaemolyticus were evaluated. The MIC of carvacrol was 0.078 mg mL-¹ for Vibrio alginolyticus and Vibrio harveyi, while for the other bacteria, it was 0.156 mg mL-¹ of carvacrol. The greatest halos of inhibition were observed in V. parahaemolyticus and V. harveyi with significant differences demonstrated for the other microorganisms, except Escherichia coli. The in vivo results showed no significant differences among treatments. In conclusion, the antimicrobial activity of carvacrol was confirmed with Gram-negative and Gram-positive bacteria, and it is suggested that its antimicrobial potential is more effective against Vibrio spp. However, the concentrations of carvacrol used in vivo did not affect the parameters evaluated.

O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito in vitro do carvacrol contra diferentes microrganismos de importância na carcinicultura e o seu efeito in vivo no desempenho zootécnico, imunológico, microbiológico e na resistência de Litopenaeus vannamei desafiados com Vibrio parahaemolyticus. A atividade antimicrobiana do carvacrol foi realizada in vitro pela análise da concentração inibitória mínima (CIM) e por difusão em ágar, com bactérias Gram-negativas e Gram-positivas. Para o experimento in vivo foram adicionadas diferentes concentrações do carvacrol (1, 3, 4 e 6 mg mL-¹) na alimentação dos camarões e uma dieta controle. Após quatro semanas, foram avaliados parâmetros zootécnicos, imunológicos, microbiológicos e a resistência dos animais desafiados com V. parahaemolyticus. A CIM do carvacrol para Vibrio alginolyticuse Vibrio harveyi foi de 0,078 mg mL-¹, enquanto nas demais bactérias foi de 0,156 mg mL-¹ de carvacrol. Os maiores halos de inibição foram observados em V. parahaemolyticus e V. harveyie demonstraram diferenças significativas em relação aos demais microrganismos, exceto Escherichia coli. Os resultados in vivo não demonstraram diferenças significativas entre os tratamentos. Em conclusão, a atividade antimicrobiana do carvacrol foi confirmada com bactérias Gram-negativas e Gram-positivas e sugere-se que seu potencial antimicrobiano seja mais eficaz contra Vibrio spp. No entanto, as concentrações de carvacrol utilizadas in vivo não afetaram os parâmetros avaliados.

In vitro antimicrobial activity of carvacrol against shrimp pathogens and its use as feed additive for the pacific white shrimp / Atividade antimocrobiana in vitro do carbacrol contra patógenos de camarões e seu uso como aditivo alimentar na dieta do camarão-branco-do-pacífico

This study aimed to evaluate the in vitro effect of the phenolic compound carvacrol on different microorganisms of importance in shrimp farming, and it's in vivo effect on zootechnical, immunological and microbiological performance, and resistance of Litopenaeus vannamei challenged with Vibrio parahaemolyticus. In particular, the antimicrobial activity of carvacrol was evaluated in vitro by analysis of the minimum inhibitory concentration (MIC) and by agar diffusion with Gram-negative and Gram-positive bacteria. The in vivo experiment was conducted using different concentrations of carvacrol (1, 3, 4 and 6 mg mL-¹) added to shrimp feed, together with a control diet without carvacrol. After four weeks, zootechnical, immunological and microbiological parameters and resistance of animals challenged with V. parahaemolyticus were evaluated. The MIC of carvacrol was 0.078 mg mL-¹ for Vibrio alginolyticus and Vibrio harveyi, while for the other bacteria, it was 0.156 mg mL-¹ of carvacrol. The greatest halos of inhibition were observed in V. parahaemolyticus and V. harveyi with significant differences demonstrated for the other microorganisms, except Escherichia coli. The in vivo results showed no significant differences among treatments. In conclusion, the antimicrobial activity of carvacrol was confirmed with Gram-negative and Gram-positive bacteria, and it is suggested that its antimicrobial potential is more effective against Vibrio spp. However, the concentrations of carvacrol used in vivo did not affect the parameters evaluated.(AU)

O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito in vitro do carvacrol contra diferentes microrganismos de importância na carcinicultura e o seu efeito in vivo no desempenho zootécnico, imunológico, microbiológico e na resistência de Litopenaeus vannamei desafiados com Vibrio parahaemolyticus. A atividade antimicrobiana do carvacrol foi realizada in vitro pela análise da concentração inibitória mínima (CIM) e por difusão em ágar, com bactérias Gram-negativas e Gram-positivas. Para o experimento in vivo foram adicionadas diferentes concentrações do carvacrol (1, 3, 4 e 6 mg mL-¹) na alimentação dos camarões e uma dieta controle. Após quatro semanas, foram avaliados parâmetros zootécnicos, imunológicos, microbiológicos e a resistência dos animais desafiados com V. parahaemolyticus. A CIM do carvacrol para Vibrio alginolyticuse Vibrio harveyi foi de 0,078 mg mL-¹, enquanto nas demais bactérias foi de 0,156 mg mL-¹ de carvacrol. Os maiores halos de inibição foram observados em V. parahaemolyticus e V. harveyie demonstraram diferenças significativas em relação aos demais microrganismos, exceto Escherichia coli. Os resultados in vivo não demonstraram diferenças significativas entre os tratamentos. Em conclusão, a atividade antimicrobiana do carvacrol foi confirmada com bactérias Gram-negativas e Gram-positivas e sugere-se que seu potencial antimicrobiano seja mais eficaz contra Vibrio spp. No entanto, as concentrações de carvacrol utilizadas in vivo não afetaram os parâmetros avaliados.(AU)

Qualidade microbiológica de alimentos da culinária japonesa vendidos em restaurantes em Botucatu, SP / Microbiological quality of japanese cuisine foods sold in restaurants in Botucatu, SP

Verificamos a qualidade microbiológica de alimentos da culinária japonesa comercializados em restaurantes de Botucatu/SP. Foram analisadas 70 amostras coletadas em 14 restaurantes, em busca de Bacillus cereus, Staphylococcus aureus, Vibrio parahaemolyticus, Salmonella e coliformes termotolerantes (CT). Isolados de S. aureus foram investigados quanto à presença de genes que codificam a produção de biofilme (bap, icaA e icaD) e algumas enterotoxinas (sea-sei). A formação de biofilme in vitro foi testada. Das 70 amostras, 50 (71,4%) apresentaram CT e 27 (38,6%) eram impróprias para consumo. Salmonella, V. parahaemolyticus e B. cereus não foram detectados. S. aureus foi observado em 5 (7,1%) amostras. Os genes clássicos de enterotoxinas não foram detectados. O gene seh foi observado em 2 isolados, enquanto seg e sei estiveram presentes outros 2 isolados. Todas as cepas de S. aureus foram produtoras moderadas de biofilme. O gene icaD estava presente em todos os isolados e o icaA em 40%. Devido à presença de CT, indicador de contaminação fecal, e S. aureus, indicador de falta de higiene durante o manuseio, a comida japonesa comercializada em Botucatu-SP não pode ser considerada segura para consumo.(AU)

We verified the microbiological quality of Japanese cuisine foods sold in restaurants in Botucatu/SP. Seventy samples collected from 14 restaurants were analyzed, searching for Bacillus cereus Staphylococcus aureus, Vibrio parahaemolyticus, Salmonella and thermotolerant coliforms (TC). S. aureus isolates were investigated for the presence of genes encoding the biofilm production (bap, icaA and icaD) and some enterotoxins (sea-sei). The biofilm formation in vitro was tested. Considering the 70 samples, 50 (71.4%) had TC, and 27 (38.6%) were unfit for consumption. Salmonella, V. parahaemolyticus and B. cereus were not detected. S. aureus was observed in 5 (7.1%) samples. The classical enterotoxin genes were not detected. The seh gene was observed in 2 isolates, while both seg and sei were present in more 2 isolates. All strains of S. aureus were moderate producers of biofilm. The icaD gene was present in all isolates and icaA in 40%. Due to the presence of TC, an indicator of fecal contamination and S. aureus, also an indicator of poor hygiene during handling, Japanese food sold in Botucatu-SP cannot be considered safe for consumption.(AU)

Antimicrobial activity of essential oils of Origanum vulgare and Ocimum basilicum against Vibrio parahaemolyticus and Vibrio vulnificus and addition of these oils on Mugil platanus fillets / Atividade antimicrobiana dos óleos essenciais de Origanum vulgare e Ocimum basilicum frente a Vibrio parahaemolyticus e Vibrio vulnificus sua aplicação em filés de Mugil platanus

Species of the Vibrio genus are commonly reported as agents of food poisoning outbreaks associated with fish consumption. The objective of this study was to assess the antimicrobial activity of the essential oils of Origanum vulgare and Ocimum basilicum against Vibrio parahaemolyticus and Vibrio vulnificus, as well as to assess their addition to fillets of Mugil platanus and sensorial acceptance among consumers. The antimicrobial activity was analyzed by the disc diffusion test and minimal bactericidal concentration (MBC). M. platanus fillets, experimentally contaminated, were marinated for 24 hours in a solution containing 1.0% and 1.5% of essential oil of O. vulgare. For the sensory analysis, samples marinated in 1.5% of O. vulgare oil were prepared and offered to 100 testers. The oil of O. basilicum shows no antimicrobial activity, so its application would be ineffective; for such reason the subsequent tests were not performed. However, the essential oil of O. vulgare produced inhibition halo diameters ranging from 24.6 to 34.1 mm, on average, and the MBC ranging from 3.9% to 15.6%. When added to the product, the essential oil of O. vulgare eliminated the microorganisms that were experimentally inoculated. In the sensorial analysis, samples marinated in 1.5% of O. vulgare essential oil obtained an average of 6.82 of acceptance note among consumers.

Espécies do gênero Vibrio são comumente reportadas como agentes causadores de surtos alimentares associados ao consumo de pescados. O objetivo desse trabalho foi verificar a atividade antimicrobiana dos óleos essenciais de Origanum vulgare e Ocimum basilicum frente a Vibrio parahaemolyticus e Vibrio vulnificus, assim como verificar sua aplicabilidade em filés de Mugil platanus e aceitação sensorial. O efeito antimicrobiano foi analisado pelo teste de disco-difusão e concentração bactericida mínima (CBM). Filés de M. platanus, experimentalmente contaminados, foram marinados por 24 horas em solução com 1,0% e 1,5% de óleo essencial de O. vulgare. Para análise sensorial foram preparadas amostras marinadas em solução de 1,5% de óleo de O. vulgaree oferecidas a 100 avaliadores. O óleo de O. basilicum não apresentou atividade antimicrobiana; logo, a aplicação seria ineficaz e, por esse motivo não foram realizados os testes seguintes. Em contraste, o óleo essencial de O. vulgare apresentou halos em que as médias variaram entre 24,6 e 34,1 mm e a CBM ficou entre 3,9 e 15,6 μL mL-1. Quando aplicado no produto, o óleo essencial de O. vulgare eliminou os microrganismos que foram inoculados experimentalmente. Na análise sensorial, amostras marinadas em 1.5% de óleo essencial de O. vulgare obtiveram nota média de 6,82 de aceitação entre os consumidores. Sendo considerado alternativa no controle de microrganismos.

Antimicrobial activity of essential oils of Origanum vulgare and Ocimum basilicum against Vibrio parahaemolyticus and Vibrio vulnificus and addition of these oils on Mugil platanus fillets / Atividade antimicrobiana dos óleos essenciais de Origanum vulgare e Ocimum basilicum frente a Vibrio parahaemolyticus e Vibrio vulnificus sua aplicação em filés de Mugil platanus

Species of the Vibrio genus are commonly reported as agents of food poisoning outbreaks associated with fish consumption. The objective of this study was to assess the antimicrobial activity of the essential oils of Origanum vulgare and Ocimum basilicum against Vibrio parahaemolyticus and Vibrio vulnificus, as well as to assess their addition to fillets of Mugil platanus and sensorial acceptance among consumers. The antimicrobial activity was analyzed by the disc diffusion test and minimal bactericidal concentration (MBC). M. platanus fillets, experimentally contaminated, were marinated for 24 hours in a solution containing 1.0% and 1.5% of essential oil of O. vulgare. For the sensory analysis, samples marinated in 1.5% of O. vulgare oil were prepared and offered to 100 testers. The oil of O. basilicum shows no antimicrobial activity, so its application would be ineffective; for such reason the subsequent tests were not performed. However, the essential oil of O. vulgare produced inhibition halo diameters ranging from 24.6 to 34.1 mm, on average, and the MBC ranging from 3.9% to 15.6%. When added to the product, the essential oil of O. vulgare eliminated the microorganisms that were experimentally inoculated. In the sensorial analysis, samples marinated in 1.5% of O. vulgare essential oil obtained an average of 6.82 of acceptance note among consumers.(AU)

Espécies do gênero Vibrio são comumente reportadas como agentes causadores de surtos alimentares associados ao consumo de pescados. O objetivo desse trabalho foi verificar a atividade antimicrobiana dos óleos essenciais de Origanum vulgare e Ocimum basilicum frente a Vibrio parahaemolyticus e Vibrio vulnificus, assim como verificar sua aplicabilidade em filés de Mugil platanus e aceitação sensorial. O efeito antimicrobiano foi analisado pelo teste de disco-difusão e concentração bactericida mínima (CBM). Filés de M. platanus, experimentalmente contaminados, foram marinados por 24 horas em solução com 1,0% e 1,5% de óleo essencial de O. vulgare. Para análise sensorial foram preparadas amostras marinadas em solução de 1,5% de óleo de O. vulgaree oferecidas a 100 avaliadores. O óleo de O. basilicum não apresentou atividade antimicrobiana; logo, a aplicação seria ineficaz e, por esse motivo não foram realizados os testes seguintes. Em contraste, o óleo essencial de O. vulgare apresentou halos em que as médias variaram entre 24,6 e 34,1 mm e a CBM ficou entre 3,9 e 15,6 μL mL-1. Quando aplicado no produto, o óleo essencial de O. vulgare eliminou os microrganismos que foram inoculados experimentalmente. Na análise sensorial, amostras marinadas em 1.5% de óleo essencial de O. vulgare obtiveram nota média de 6,82 de aceitação entre os consumidores. Sendo considerado alternativa no controle de microrganismos.(AU)

Avaliação microbiológica de sushi e sashimi preparados em restaurantes especializados / Microbiological evaluation of sushi and sashimi prepared in specialized restaurants

O objetivo foi avaliar o padrão microbiológico de sushis e sashimis de salmão comercializados em restaurantes especializados situados na cidade de Pelotas, Rio Grande do Sul. Foram analisadas 20 amostras (10 de sushi e 10 de sashimi) submetidas à pesquisa de Salmonella, contagens de coliformes termotolerantes, Staphylococcus coagulase positiva e Vibrio parahaemolyticus. Observou-se que 70% das amostras estavam em desacordo com o padrão estabelecido pela legislação brasileira para estes produtos. Os resultados indicam a necessidade de maiores cuidados em relação à qualidade da matéria-prima e às medidas higiênicas e sanitárias durante o preparo e manipulação do produto, tendo em vista, ainda, o fato de que estes alimentos são consumidos sem cocção, o que aumenta o risco de contaminação.

This study aimed to evaluate the microbiological patterns of salmon sushi and sashimi sold in specialized restaurants located in the city of Pelotas, Rio Grande do Sul, Brazil. Twenty samples were analyzed (10 sushi and 10 sashimi) and submitted to Salmonella testing and counting of fecal coliforms, coagulase-positive Staphylococcus and Vibrio parahaemolyticus. One observed 70% of the samples were at odds with the standards established by the Brazilian law. The results indicate the need for more care about the quality of the raw material and for hygiene and sanitary measures when preparing and handling the product, also considering that these foods are consumed without cooking, which increases the risk of contamination.

Avaliação microbiológica de sushi e sashimi preparados em restaurantes especializados / Microbiological evaluation of sushi and sashimi prepared in specialized restaurants

O objetivo foi avaliar o padrão microbiológico de sushis e sashimis de salmão comercializados em restaurantes especializados situados na cidade de Pelotas, Rio Grande do Sul. Foram analisadas 20 amostras (10 de sushi e 10 de sashimi) submetidas à pesquisa de Salmonella, contagens de coliformes termotolerantes, Staphylococcus coagulase positiva e Vibrio parahaemolyticus. Observou-se que 70% das amostras estavam em desacordo com o padrão estabelecido pela legislação brasileira para estes produtos. Os resultados indicam a necessidade de maiores cuidados em relação à qualidade da matéria-prima e às medidas higiênicas e sanitárias durante o preparo e manipulação do produto, tendo em vista, ainda, o fato de que estes alimentos são consumidos sem cocção, o que aumenta o risco de contaminação.(AU)

This study aimed to evaluate the microbiological patterns of salmon sushi and sashimi sold in specialized restaurants located in the city of Pelotas, Rio Grande do Sul, Brazil. Twenty samples were analyzed (10 sushi and 10 sashimi) and submitted to Salmonella testing and counting of fecal coliforms, coagulase-positive Staphylococcus and Vibrio parahaemolyticus. One observed 70% of the samples were at odds with the standards established by the Brazilian law. The results indicate the need for more care about the quality of the raw material and for hygiene and sanitary measures when preparing and handling the product, also considering that these foods are consumed without cooking, which increases the risk of contamination.(AU)

Genes of virulence and antimicrobial resistance in Vibrio parahaemolyticus prevalent in areas of ostreiculture / Genes de virulencia e resistência antimicrobiana de Vibrio parahaemolyticus em áreas de ostreicultura

This study aimed to quantify Vibrio spp. and evaluate the profile of antimicrobial susceptibility and virulence factors in Vibrio parahaemolyticus strains in the samples of oysters collected from two estuaries of the Baixo Sul, Bahia. The samples were collected between June 2015 and January 2016 from natural banks (E1) (oyster) and from cultivation areas (E2) (water and oyster). For the quantification of Vibrio spp., the most probable number (MPN) was determined and the characterization of V. parahaemolyticus marker (species-specific) gene tl was performed. Pathogenicity was observed with the Kanagawa test, and the presence of the tdh, trh and ure genes were tested. The antimicrobial sensitivity test included disc diffusion method with 15 antimicrobial discs, β-lactamase enzyme production, and the presence of blaTEM, blaSHV, and blaCTX-M. The maximum density of Vibrio spp. in the samples from cultivation was 4.70 log MPN g-1 and extractivism was 6.10 log MPN g-1, with the temperature being the most influencing variable on the presence of microorganisms in the cultivation area (E2). The tl gene was detected in 71% of the isolates, without the presence of tdh, trh and ure genes. All strains of V. parahaemolyticus were Kanagawa negative. High antimicrobial resistance was observed in the β-lactam antibiotics (cephalothin - 72%, ampicillin - 60%) and aminoglycosides (amikacin - 64%), with multi-resistance in 88% of the strains of V. parahaemolyticus, of which 68% of the resistance was mediated by plasmids. Phenotypically, no production of β-lactamase enzymes was observed, but the presence of blaTEM genes was observed. The multiresistant character of plasmids reported in V. parahaemolyticus strains increases the concern about native bacteria in the marine environment since it can potentially compromise the control of this bacterium infection in bivalve mollusks.

Este estudo teve como objetivo quantificar Vibrio spp. e avaliar o perfil de suscetibilidade antimicrobiana e fatores de virulência em cepas de Vibrio parahaemolyticus em amostras de ostras em dois estuários do Baixo Sul da Bahia. As coletas foram realizadas no período de junho de 2015 a janeiro de 2016, com coletas de ostras provenientes de bancos naturais (E1) e coletas de água e ostras provenientes de cultivo (E2). Para a quantificação de Vibrio spp. usou-se o número mais provável (NMP) e para a caracterização de V. parahaemolyticus o marcador (espécie-específica) gene tl. A patogenicidade foi observada com o teste de Kanagawa e presença dos genes tdh, trh e ure. Para o perfil de suscetibilidade antimicrobiana foram usados 15 antimicrobianos (método disco difusão), produção de enzimas β-lactamases e presença dos genes blaTEM, blaSHV e blaCTX-M. A densidade máxima de Vibrio spp. em ostras de cultivo foi de log 4,70 NMP g-1 e de extrativismo log 6,10 NMP g-1, sendo a temperatura a variável que mais influenciou na presença dos microrganismos na área de cultivo (E2). O gene tl foi encontrado em 71% dos isolados, sem a presença dos genes tdh, trh e ure. Todas as cepas de V. parahaemolyticus foram Kanagawa negativo. Elevada resistência antimicrobiana foi observada aos antimicrobianos betalactâmicos (cefalotina - 72% e ampicilina - 60%) e aminoglicosídeos (amicacina - 64%), com multirresistência em 88% das cepas de V. parahaemolyticus, e dessas, em 68% a resistência era mediada por plasmídeos. Fenotipicamente não foi observada produção de enzimas β-lactamases, embora tenha sido observado a presença de genes blaTEM. O caráter de multirresistência sobretudo por plasmídeos em cepas de V. parahaemolyticus aumenta a preocupação de bactérias autóctones do meio marinho, pois compromete o controle de infecção por esta bactéria em moluscos bivalves.

Genes of virulence and antimicrobial resistance in Vibrio parahaemolyticus prevalent in areas of ostreiculture / Genes de virulencia e resistência antimicrobiana de Vibrio parahaemolyticus em áreas de ostreicultura

This study aimed to quantify Vibrio spp. and evaluate the profile of antimicrobial susceptibility and virulence factors in Vibrio parahaemolyticus strains in the samples of oysters collected from two estuaries of the Baixo Sul, Bahia. The samples were collected between June 2015 and January 2016 from natural banks (E1) (oyster) and from cultivation areas (E2) (water and oyster). For the quantification of Vibrio spp., the most probable number (MPN) was determined and the characterization of V. parahaemolyticus marker (species-specific) gene tl was performed. Pathogenicity was observed with the Kanagawa test, and the presence of the tdh, trh and ure genes were tested. The antimicrobial sensitivity test included disc diffusion method with 15 antimicrobial discs, β-lactamase enzyme production, and the presence of blaTEM, blaSHV, and blaCTX-M. The maximum density of Vibrio spp. in the samples from cultivation was 4.70 log MPN g-1 and extractivism was 6.10 log MPN g-1, with the temperature being the most influencing variable on the presence of microorganisms in the cultivation area (E2). The tl gene was detected in 71% of the isolates, without the presence of tdh, trh and ure genes. All strains of V. parahaemolyticus were Kanagawa negative. High antimicrobial resistance was observed in the β-lactam antibiotics (cephalothin - 72%, ampicillin - 60%) and aminoglycosides (amikacin - 64%), with multi-resistance in 88% of the strains of V. parahaemolyticus, of which 68% of the resistance was mediated by plasmids. Phenotypically, no production of β-lactamase enzymes was observed, but the presence of blaTEM genes was observed. The multiresistant character of plasmids reported in V. parahaemolyticus strains increases the concern about native bacteria in the marine environment since it can potentially compromise the control of this bacterium infection in bivalve mollusks.(AU)

Este estudo teve como objetivo quantificar Vibrio spp. e avaliar o perfil de suscetibilidade antimicrobiana e fatores de virulência em cepas de Vibrio parahaemolyticus em amostras de ostras em dois estuários do Baixo Sul da Bahia. As coletas foram realizadas no período de junho de 2015 a janeiro de 2016, com coletas de ostras provenientes de bancos naturais (E1) e coletas de água e ostras provenientes de cultivo (E2). Para a quantificação de Vibrio spp. usou-se o número mais provável (NMP) e para a caracterização de V. parahaemolyticus o marcador (espécie-específica) gene tl. A patogenicidade foi observada com o teste de Kanagawa e presença dos genes tdh, trh e ure. Para o perfil de suscetibilidade antimicrobiana foram usados 15 antimicrobianos (método disco difusão), produção de enzimas β-lactamases e presença dos genes blaTEM, blaSHV e blaCTX-M. A densidade máxima de Vibrio spp. em ostras de cultivo foi de log 4,70 NMP g-1 e de extrativismo log 6,10 NMP g-1, sendo a temperatura a variável que mais influenciou na presença dos microrganismos na área de cultivo (E2). O gene tl foi encontrado em 71% dos isolados, sem a presença dos genes tdh, trh e ure. Todas as cepas de V. parahaemolyticus foram Kanagawa negativo. Elevada resistência antimicrobiana foi observada aos antimicrobianos betalactâmicos (cefalotina - 72% e ampicilina - 60%) e aminoglicosídeos (amicacina - 64%), com multirresistência em 88% das cepas de V. parahaemolyticus, e dessas, em 68% a resistência era mediada por plasmídeos. Fenotipicamente não foi observada produção de enzimas β-lactamases, embora tenha sido observado a presença de genes blaTEM. O caráter de multirresistência sobretudo por plasmídeos em cepas de V. parahaemolyticus aumenta a preocupação de bactérias autóctones do meio marinho, pois compromete o controle de infecção por esta bactéria em moluscos bivalves.(AU)

MALDI-TOF MS as a tool for the identification of Vibrio alginolyticus from Perna perna mussels (Linnaeus, 1758) / MALDI-TOF MS como ferramenta na identificação de Vibrio alginolyticus isolados de mexilhões Perna perna (Linnaeus, 1758)

Vibrio species are ubiquitous in aquatic environments, including coastal and marine habitats. Vibrio alginolyticus is an opportunistic pathogen for fish, crustaceans and mussels and their identification by biochemical tests may be impaired due their nutritional requirements. The study used Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS) to identify 49 Vibrio spp. isolates associated with mussels (Perna perna) from different locations along the Rio de Janeiro coast. The rpoA gene was used as a genus-specific marker of Vibrio spp. and was positive in all 209 isolates. MALDI-TOF MS confirmed 87.8% of V. alginolyticus when compared to the results of the biochemical tests. Four isolates were identified as Shewanella putrefaciens (8.16%) and one was identified as V. parahaemolyticus (2.0%). Just one isolate was not identified by this technique (2.0%). The pyrH sequencing confirmed 75% of the proteomic technique results. MALDI-TOF MS is an excellent option for characterization of bacterial species, as it is efficient, fast and easy to apply. In addition, our study confirms its high specificity and sensitivity in these marine bacteria identification.(AU)

Espécies de Vibrio são ubiquitárias em ambientes aquáticos, incluindo habitats costeiros e marinhos. A espécie Vibrio alginolyticus é oportunista para peixes, crustáceos e moluscos e a sua identificação através de testes bioquímicos pode ter a qualidade prejudicada devido às suas exigências nutricionais. O presente estudo utilizou Espectrometria de Massa por Tempo de Vôo de Ionização/Desorção por Laser Assistida por Matriz (MALDI-TOF MS) para identificar diferentes espécies de Vibrio provenientes de mexilhões (Perna perna) coletados em diferentes locais ao longo da costa do Rio de Janeiro. O gene rpoA foi utilizado como um marcador gênero-específico de Vibrio spp. sendo positivo em todos os 209 isolados. MALDI-TOF MS confirmou 87,75% de V. alginolyticus quando comparados com os resultados dos testes bioquímicos. Quatro isolados foram identificados como Shewanella putrefaciens (8,16%), um como V. parahaemolyticus (2,0%) e apenas um (2,0%) não foi identificado pela técnica proteômica. E o sequenciamento do pyrH confirmou 75% dos resultados da técnica proteomica. MALDI-TOF MS tem sido considerada uma excelente opção para a caracterização bacteriana, por ser eficiente, rápida, de fácil aplicação e este estudo confirmou a sua elevada especificidade e sensibilidade na identificação de bactérias marinhas.(AU)

MALDI-TOF MS as a tool for the identification of Vibrio alginolyticus from Perna perna mussels (Linnaeus, 1758) / MALDI-TOF MS como ferramenta na identificação de Vibrio alginolyticus isolados de mexilhões Perna perna (Linnaeus, 1758)

Vibrio species are ubiquitous in aquatic environments, including coastal and marine habitats. Vibrio alginolyticus is an opportunistic pathogen for fish, crustaceans and mussels and their identification by biochemical tests may be impaired due their nutritional requirements. The study used Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS) to identify 49 Vibrio spp. isolates associated with mussels (Perna perna) from different locations along the Rio de Janeiro coast. The rpoA gene was used as a genus-specific marker of Vibrio spp. and was positive in all 209 isolates. MALDI-TOF MS confirmed 87.8% of V. alginolyticus when compared to the results of the biochemical tests. Four isolates were identified as Shewanella putrefaciens (8.16%) and one was identified as V. parahaemolyticus (2.0%). Just one isolate was not identified by this technique (2.0%). The pyrH sequencing confirmed 75% of the proteomic technique results. MALDI-TOF MS is an excellent option for characterization of bacterial species, as it is efficient, fast and easy to apply. In addition, our study confirms its high specificity and sensitivity in these marine bacteria identification.(AU)

Espécies de Vibrio são ubiquitárias em ambientes aquáticos, incluindo habitats costeiros e marinhos. A espécie Vibrio alginolyticus é oportunista para peixes, crustáceos e moluscos e a sua identificação através de testes bioquímicos pode ter a qualidade prejudicada devido às suas exigências nutricionais. O presente estudo utilizou Espectrometria de Massa por Tempo de Vôo de Ionização/Desorção por Laser Assistida por Matriz (MALDI-TOF MS) para identificar diferentes espécies de Vibrio provenientes de mexilhões (Perna perna) coletados em diferentes locais ao longo da costa do Rio de Janeiro. O gene rpoA foi utilizado como um marcador gênero-específico de Vibrio spp. sendo positivo em todos os 209 isolados. MALDI-TOF MS confirmou 87,75% de V. alginolyticus quando comparados com os resultados dos testes bioquímicos. Quatro isolados foram identificados como Shewanella putrefaciens (8,16%), um como V. parahaemolyticus (2,0%) e apenas um (2,0%) não foi identificado pela técnica proteômica. E o sequenciamento do pyrH confirmou 75% dos resultados da técnica proteomica. MALDI-TOF MS tem sido considerada uma excelente opção para a caracterização bacteriana, por ser eficiente, rápida, de fácil aplicação e este estudo confirmou a sua elevada especificidade e sensibilidade na identificação de bactérias marinhas.(AU)

Biofilm formation by Vibrio parahaemolyticus on different surfaces and its resistance to sodium hypochlorite / Formação de biofilme por Vibrio parahaemolyticus em diferentes superficies e resistência ao hipoclorito de sódio

Vibrio parahaemolyticus is an important pathogen for both fish industry and consumers. It forms biofilm which makes it difficult to eliminate this microorganism using sanitizers. This study aimed to assess biofilm formation on different surfaces and effect of biofilm on resistance to sanitizers. Eight isolates of biofilm-forming V. parahaemolyticus were tested for the ability to form biofilms on a number of surfaces including high density polyethylene, stainless steel, glass, exoskeleton of Farfantepenaeus paulensis (Pink Shrimp), and operculum of Micropogonias furnieri (Whitemouth Croaker). Efficiency of sanitizer sodium hypochlorite against the bacteria was evaluated in the biofilms formed on the surface of the materials used; out the eight strains analyzed four formed biofilm on different surfaces. The present study shows that there are variations between surfaces in terms of biofilm formation, with more than one bacterial strain being able to form biofilm on the surface of the operculum of M. furnieri and on high density polyethylene as well. One isolate formed biofilm on glass, and one isolate formed biofilm on stainless steel. Sanitizers reduced biofilm formation on all surfaces. Based on our findings, we concluded that V. parahaemolyticus isolates have different ability to form biofilm on different surfaces. No isolates formed biofilm on shrimp shells. Results of this study also showed that sodium hypochlorite eat a concentration of 20 parts per million (20ppm) of Cl2, albeit not able to eliminate bacteria reported in biofilms, is still capable of reducing bacterial populations.(AU)

Vibrio parahaemolyticus é uma bactéria patogênica importante tanto para a indústria como para os consumidores de pescados, uma vez que pode formar biofilme, dificultando a sua eliminação por sanitizantes. Este estudo teve como objetivo verificar a formação de biofilme em diferentes superfícies e o efeito do biofilme sobre a resistência a sanitizante. Oito isolados de V. parahaemolyticus formadores de biofilme foram testados quanto à capacidade de formar biofilme em superfícies de polietileno de alta densidade, aço inoxidável, vidro, exoesqueleto de Farfantepenaeus paulensis (Camarão-rosa) e opérculo de Micropogonias furnieri (Corvina). A eficiência do sanitizante hipoclorito de sódio foi avaliada frente às bactérias nos biofilmes formados sobre a superfície dos materiais utilizados. Das oito cepas analisadas, quatro foram consideradas formadoras de biofilme em diferentes superfícies. Os resultados mostraram variação entre as superfícies, sendo que mais de uma cepa formou biofilme na superfície do opérculo de M. furnieri e do polietileno de alta densidade. Um isolado formou biofilme em vidro e um em aço inoxidável. Nenhum isolado formou biofilme na carapaça de camarão. O sanitizante reduziu a formação do biofilme em todas as superfícies. Conclui-se que os isolados de V. parahaemolyticus apresentam distinta capacidade de formar biofilme em diferentes superfícies e que o hipoclorito de sódio na concentração de 20 partes por milhão (20ppm) de Cl2, embora não elimine as bactérias que se encontram em biofilme, reduz a sua população.(AU)

Microencapsulation of essential thyme oil by spray drying and its antimicrobial evaluation against Vibrio alginolyticus and Vibrio parahaemolyticus / Microencapsulação do óleo essencial de tomilho e avaliação de sua atividade antibacteriana sobre V. alginolyticus e V. parhaemolyticus

The aims of this research were first, to evaluate the antibacterial potential of commercial thyme essential oil against V. alginolyticus and V. parahaemolyticys and second, using the spray drying technique to produce microcapsules. chemical compounds of thyme oil and microcapsules were identified and quantified being thymol the chemical component present at the highest concentration. Oil-in-water (O/W) emulsions were prepared and the microcapsules were obtained with a spray dryer using maltodextrin as wall material (ratio 1:4). Thyme oil and the microcapsules exhibited antimicrobial activity against V. parahaemolyticus and V. alginolyticus. The spray drying process did not affect the antimicrobial activity of thyme essentialoil.(AU)

Os objetivos desta pesquisa foram avaliar o potencial antibacteriano do óleoessencial de tomilho sobre V. alginolyticus e V. parahaemolyticys e produzir microcápsulas através do processo de secagem por aspersão (spray dryer). Os compostos químicos do óleo essencial de tomilho e das microcápsulas foram identificados e quantificadaos. Foi preparada uma emulsão de óleo em água (O/A) e em seguida foram produzidas microcápsulas em um spray dryer utilizando-se óleo essencial de tomilho e maltodextrina como material de parede na proporção de 1:4 respectivamente. Entre os vários compostos identificados, o timol apresentou maior concentração. O óleo essencial de tomilho e as microcápsulas exibiram atividade antibacteriana sobre V. parahaemolyticus e V. alginolyticus. O processo de secagem por aspersão não afetou a atividade antibacteriana do óleo essencial de tomilho.(AU)

Formação de biofilme após estresse subletal por Vibrio parahaemolyticus isolados de camarão-rosa (Farfantepenaeus paulensis) / Formation of biofilm after subletal stress by Vibrio parahaemolyticus isolates from pink shrimp (Farfantepenaeus paulensis)

O consumo de frutos do mar, como o camarão-rosa, contaminados com V. parahaemolyticus pode causar gastrenterite aguda. O objetivo deste trabalho foi verificar a capacidade de V. parahaemolyticus isolados de camarões provenientes do estuário da Lagoa dos Patos formarem biofilme após exposição a diferentes tipos de estresse subletal. Para obtenção das amostras, foram realizadas 12 coletas de Farfantepenaeus paulensis, durante o período de safra de 2016. As amostras foram analisadas quanto à presença de V. parahaemolyticus. As cepas foram avaliadas quanto à capacidade de produção de biofilme em placas de microtitulação, tanto antes como após serem submetidas a diferentes tipos de estresse subletal. V. parahaemolyticus foi isolado de 16,66% (2/12) das amostras. Uma das duas cepas isoladas foi capaz de formar biofilme, sendo classificada como fraca formadora de biofilme, a outra foi classificada como não formadora de biofilme. Nenhuma das cepas alterou sua capacidade de formar biofilme quando submetida aos estresses de 4ºC e 20ºC; contudo, com relação aos estresses de 42ºC e pH ácido, cada cepa respondeu de uma maneira diferente.

Consumption of seafood, such as pink shrimp, contaminated by V. parahaemolyticus can cause acute gastroenteritis. The objective this study was to verify the ability of V. parahaemolyticus isolated from shrimp from Lagoa dos Patos estuary to form biofilm after exposure to different types of sublethal stress. To obtain the samples, 12 collections of Farfantepenaeus paulensis were carried out during the 2016 harvest period. The samples were analyzed for the presence of V. parahaemolyticus. The strains were evaluated for biofilm production capacity on microtiter plates, both before and after being submitted to different types of sublethal stress. V. parahaemolyticus was isolated from 16.66% (2/12) of the samples. One of the two isolated strains was able to form biofilm, being classified as weak biofilm-forming; the other one was classified as non-biofilm-forming. None of the strains altered their ability to form biofilm when subjected to the stresses of 4°C and 20°C; however, regarding the stresses of 42°C and pH acid, each strain responded differently.

Formação de biofilme após estresse subletal por Vibrio parahaemolyticus isolados de camarão-rosa (Farfantepenaeus paulensis) / Formation of biofilm after subletal stress by Vibrio parahaemolyticus isolates from pink shrimp (Farfantepenaeus paulensis)

O consumo de frutos do mar, como o camarão-rosa, contaminados com V. parahaemolyticus pode causar gastrenterite aguda. O objetivo deste trabalho foi verificar a capacidade de V. parahaemolyticus isolados de camarões provenientes do estuário da Lagoa dos Patos formarem biofilme após exposição a diferentes tipos de estresse subletal. Para obtenção das amostras, foram realizadas 12 coletas de Farfantepenaeus paulensis, durante o período de safra de 2016. As amostras foram analisadas quanto à presença de V. parahaemolyticus. As cepas foram avaliadas quanto à capacidade de produção de biofilme em placas de microtitulação, tanto antes como após serem submetidas a diferentes tipos de estresse subletal. V. parahaemolyticus foi isolado de 16,66% (2/12) das amostras. Uma das duas cepas isoladas foi capaz de formar biofilme, sendo classificada como fraca formadora de biofilme, a outra foi classificada como não formadora de biofilme. Nenhuma das cepas alterou sua capacidade de formar biofilme quando submetida aos estresses de 4ºC e 20ºC; contudo, com relação aos estresses de 42ºC e pH ácido, cada cepa respondeu de uma maneira diferente.(AU)

Consumption of seafood, such as pink shrimp, contaminated by V. parahaemolyticus can cause acute gastroenteritis. The objective this study was to verify the ability of V. parahaemolyticus isolated from shrimp from Lagoa dos Patos estuary to form biofilm after exposure to different types of sublethal stress. To obtain the samples, 12 collections of Farfantepenaeus paulensis were carried out during the 2016 harvest period. The samples were analyzed for the presence of V. parahaemolyticus. The strains were evaluated for biofilm production capacity on microtiter plates, both before and after being submitted to different types of sublethal stress. V. parahaemolyticus was isolated from 16.66% (2/12) of the samples. One of the two isolated strains was able to form biofilm, being classified as weak biofilm-forming; the other one was classified as non-biofilm-forming. None of the strains altered their ability to form biofilm when subjected to the stresses of 4°C and 20°C; however, regarding the stresses of 42°C and pH acid, each strain responded differently.(AU)

Formação de biofilme por Vibrio parahaemolyticus isolados de pescados

ABSTRACT: Fish is a highly perishable food, has a neutral pH, high water activity and high content nutrient, which makes it favorable to the microorganisms multiplication. Vibrio parahaemolyticus may be found in environments with a salinity of 3% and 8% and has optimal pH for multiplication between 7.8 and 8.6. This pathogen can cause acute gastroenteritis by consumption of contaminated raw or undercooked seafood. There is difficulty in reducing Vibrio contamination during fish processing, being supposed that this bacterial genus can form biofilm on different surfaces. The aim of this study was to verify the ability of V. parahaemlyticus isolated from fish from biofilm after sublethal stress. In the course of one year, 12 monthly samples of fish caught in the Lagoa dos Patos Estuary were analyzed for the presence of V. parahaemolyticus. Concurrently, water samples from estuary were collected aseptically for salinity analysis and pH. Vibrio isolates were analyzed by polymerase chain reaction (PCR) to identification of the species by presence of the toxR gene. In addition to the isolates obtained in this study were also studied 15 other strains of V. parahaemolyticus previously isolated in other works. The strains were evaluated for biofilm production capacity in microtiter plates. The biofilm production capacity after the strains had being subjected to different types of sublethal stress (42oC, 20°C, 4°C and acid pH) was also tested. Among the 120 analyzed fish, V. parahaemolyticus were isolated from four (3.33%) fishes, and Mugil platanus was the only species in which the microorganism was found. Among the 19 strains analyzed, 89.5% were able to form biofilm, which seems to indicate that this ability has an important role in the microorganism survival in the fish. Among these strains, 25% increased the ability to form biofilm after sublethal exposure. Based on the results, we concluded that fish of the species M. platanus of the Lagoa dos Patos Estuary are hosts of V. parahaemolyticus and that almost all of these strains are forming biofilm. Exposure to sublethal stress conditions has distinct effect on different strains, inducing an increase in the ability to form biofilm in some. This was the first study about the effects of stress on the V. parahaemolyticus biofilms formation.

RESUMO: O pescado é um alimento altamente perecível, possui pH próximo a neutralidade, elevada atividade de água e alto teor de nutrientes facilmente utilizáveis por micro-organismos. Vibrio parahaemolyticus pode ser encontrado em ambientes com salinidade entre 3% e 8% e tem pH ideal para multiplicação entre 7,8 e 8,6. É um patógeno que pode causar gastrenterite aguda pelo consumo de frutos do mar contaminados, crus ou mal cozidos. Mesmo os processos de tratamento de água como cloração, adição de antibióticos e filtros apresentam dificuldade em reduzir a contaminação por Vibrio, sendo suposto que este gênero bacteriano pode formar biofilmes em diferentes superfícies. O objetivo do trabalho foi verificar a capacidade de V. parahaemolyticus isolados de pescados formarem biofilme após estresse subletal. No decorrer de um ano, foram realizadas 12 coletas mensais de amostras de peixes capturados no estuário da Lagoa dos Patos, as quais foram analisadas quanto à presença de V. parahaemolyticus. Concomitantemente, foram coletadas assepticamente amostras de água do estuário para análise de sanilidade e pH. Os isolados de Vibrio foram analisados pela reação em cadeia da polimerase (PCR) para identificação da espécie pela presença dos genes toxR. Além dos isolados obtidos no presente trabalho, também foram estudadas 15 outras cepas de V. parahaemolyticus previamente isoladas em outros trabalhos. As cepas foram avaliadas quanto à capacidade de produção de biofilme em placas de microtitulação. A capacidade de produção de biofilme após as cepas serem submetidas a diferentes tipos de estresse subletal (42ºC, 20ºC, 4ºC e pH ácido) também foi testada. Dentre os 120 peixes analisados, foram isolados V. parahaemolyticus de quatro (3,33%) pescados, sendo Mugil platanus a única espécie de peixe na qual o micro-organismo foi encontrado. Das 19 cepas analisadas, 89,5% foram capazes de formar biofilme, o que parece indicar que essa capacidade tem um papel importante na sobrevivência do micro-organismo nos pescados. Dessas, 25% das cepas aumentaram a capacidade de formar biofilme. Com base nos resultados, conclui-se que peixes da espécie M. platanus do estuário da Lagoa dos Patos são hospedeiros de V. parahaemolyticus e que a quase totalidade das cepas são formadoras de biofilme. A exposição a condições subletais de estresse tem efeito distinto sobre as diferentes cepas, induzindo aumento na capacidade de formar biofilme em algumas. Este foi o primeiro estudo realizado com V. parahaemolyticus, para avaliar o efeito de fatores de estresse sobre a formação de biofilme.

Formação de biofilme por Vibrio parahaemolyticus isolados de pescados / Biofilm formation by Vibrio parahaemolyticus isolated from fish

O pescado é um alimento altamente perecível, possui pH próximo a neutralidade, elevada atividade de água e alto teor de nutrientes facilmente utilizáveis por micro-organismos. Vibrio parahaemolyticus pode ser encontrado em ambientes com salinidade entre 3% e 8% e tem pH ideal para multiplicação entre 7,8 e 8,6. É um patógeno que pode causar gastrenterite aguda pelo consumo de frutos do mar contaminados, crus ou mal cozidos. Mesmo os processos de tratamento de água como cloração, adição de antibióticos e filtros apresentam dificuldade em reduzir a contaminação por Vibrio, sendo suposto que este gênero bacteriano pode formar biofilmes em diferentes superfícies. O objetivo do trabalho foi verificar a capacidade de V. parahaemolyticus isolados de pescados formarem biofilme após estresse subletal. No decorrer de um ano, foram realizadas 12 coletas mensais de amostras de peixes capturados no estuário da Lagoa dos Patos, as quais foram analisadas quanto à presença de V. parahaemolyticus. Concomitantemente, foram coletadas assepticamente amostras de água do estuário para análise de sanilidade e pH. Os isolados de Vibrio foram analisados pela reação em cadeia da polimerase (PCR) para identificação da espécie pela presença dos genes toxR. Além dos isolados obtidos no presente trabalho, também foram estudadas 15 outras cepas de V. parahaemolyticus previamente isoladas em outros trabalhos. As cepas foram avaliadas quanto à capacidade de produção de biofilme em placas de microtitulação. A capacidade de produção de biofilme após as cepas serem submetidas a diferentes tipos de estresse subletal (42ºC, 20ºC, 4ºC e pH ácido) também foi testada. Dentre os 120 peixes analisados, foram isolados V. parahaemolyticus de quatro (3,33%) pescados, sendo Mugil platanus a única espécie de peixe na qual o micro-organismo foi encontrado. Das 19 cepas analisadas, 89,5% foram capazes de formar biofilme, o que parece indicar que essa capacidade tem um papel importante na sobrevivência do micro-organismo nos pescados. Dessas, 25% das cepas aumentaram a capacidade de formar biofilme. Com base nos resultados, conclui-se que peixes da espécie M. platanus do estuário da Lagoa dos Patos são hospedeiros de V. parahaemolyticus e que a quase totalidade das cepas são formadoras de biofilme. A exposição a condições subletais de estresse tem efeito distinto sobre as diferentes cepas, induzindo aumento na capacidade de formar biofilme em algumas. Este foi o primeiro estudo realizado com V. parahaemolyticus, para avaliar o efeito de fatores de estresse sobre a formação de biofilme.(AU)

Fish is a highly perishable food, has a neutral pH, high water activity and high content nutrient, which makes it favorable to the microorganisms multiplication. Vibrio parahaemolyticus may be found in environments with a salinity of 3% and 8% and has optimal pH for multiplication between 7.8 and 8.6. This pathogen can cause acute gastroenteritis by consumption of contaminated raw or undercooked seafood. There is difficulty in reducing Vibrio contamination during fish processing, being supposed that this bacterial genus can form biofilm on different surfaces. The aim of this study was to verify the ability of V. parahaemlyticus isolated from fish from biofilm after sublethal stress. In the course of one year, 12 monthly samples of fish caught in the Lagoa dos Patos Estuary were analyzed for the presence of V. parahaemolyticus. Concurrently, water samples from estuary were collected aseptically for salinity analysis and pH. Vibrio isolates were analyzed by polymerase chain reaction (PCR) to identification of the species by presence of the toxR gene. In addition to the isolates obtained in this study were also studied 15 other strains of V. parahaemolyticus previously isolated in other works. The strains were evaluated for biofilm production capacity in microtiter plates. The biofilm production capacity after the strains had being subjected to different types of sublethal stress (42oC, 20°C, 4°C and acid pH) was also tested. Among the 120 analyzed fish, V. parahaemolyticus were isolated from four (3.33%) fishes, and Mugil platanus was the only species in which the microorganism was found. Among the 19 strains analyzed, 89.5% were able to form biofilm, which seems to indicate that this ability has an important role in the microorganism survival in the fish. Among these strains, 25% increased the ability to form biofilm after sublethal exposure. Based on the results, we concluded that fish of the species M. platanus of the Lagoa dos Patos Estuary are hosts of V. parahaemolyticus and that almost all of these strains are forming biofilm. Exposure to sublethal stress conditions has distinct effect on different strains, inducing an increase in the ability to form biofilm in some. This was the first study about the effects of stress on the V. parahaemolyticus biofilms formation.(AU)

Formação de biofilme por Vibrio parahaemolyticus isolados de pescados / Biofilm formation by Vibrio parahaemolyticus isolated from fish

O pescado é um alimento altamente perecível, possui pH próximo a neutralidade, elevada atividade de água e alto teor de nutrientes facilmente utilizáveis por micro-organismos. Vibrio parahaemolyticus pode ser encontrado em ambientes com salinidade entre 3% e 8% e tem pH ideal para multiplicação entre 7,8 e 8,6. É um patógeno que pode causar gastrenterite aguda pelo consumo de frutos do mar contaminados, crus ou mal cozidos. Mesmo os processos de tratamento de água como cloração, adição de antibióticos e filtros apresentam dificuldade em reduzir a contaminação por Vibrio, sendo suposto que este gênero bacteriano pode formar biofilmes em diferentes superfícies. O objetivo do trabalho foi verificar a capacidade de V. parahaemolyticus isolados de pescados formarem biofilme após estresse subletal. No decorrer de um ano, foram realizadas 12 coletas mensais de amostras de peixes capturados no estuário da Lagoa dos Patos, as quais foram analisadas quanto à presença de V. parahaemolyticus. Concomitantemente, foram coletadas assepticamente amostras de água do estuário para análise de sanilidade e pH. Os isolados de Vibrio foram analisados pela reação em cadeia da polimerase (PCR) para identificação da espécie pela presença dos genes toxR. Além dos isolados obtidos no presente trabalho, também foram estudadas 15 outras cepas de V. parahaemolyticus previamente isoladas em outros trabalhos. As cepas foram avaliadas quanto à capacidade de produção de biofilme em placas de microtitulação. A capacidade de produção de biofilme após as cepas serem submetidas a diferentes tipos de estresse subletal (42ºC, 20ºC, 4ºC e pH ácido) também foi testada. Dentre os 120 peixes analisados, foram isolados V. parahaemolyticus de quatro (3,33%) pescados, sendo Mugil platanus a única espécie de peixe na qual o micro-organismo foi encontrado. Das 19 cepas analisadas, 89,5% foram capazes de formar biofilme, o que parece indicar que essa capacidade tem um papel importante na sobrevivência do micro-organismo nos pescados. Dessas, 25% das cepas aumentaram a capacidade de formar biofilme. Com base nos resultados, conclui-se que peixes da espécie M. platanus do estuário da Lagoa dos Patos são hospedeiros de V. parahaemolyticus e que a quase totalidade das cepas são formadoras de biofilme. A exposição a condições subletais de estresse tem efeito distinto sobre as diferentes cepas, induzindo aumento na capacidade de formar biofilme em algumas. Este foi o primeiro estudo realizado com V. parahaemolyticus, para avaliar o efeito de fatores de estresse sobre a formação de biofilme.(AU)

Fish is a highly perishable food, has a neutral pH, high water activity and high content nutrient, which makes it favorable to the microorganisms multiplication. Vibrio parahaemolyticus may be found in environments with a salinity of 3% and 8% and has optimal pH for multiplication between 7.8 and 8.6. This pathogen can cause acute gastroenteritis by consumption of contaminated raw or undercooked seafood. There is difficulty in reducing Vibrio contamination during fish processing, being supposed that this bacterial genus can form biofilm on different surfaces. The aim of this study was to verify the ability of V. parahaemlyticus isolated from fish from biofilm after sublethal stress. In the course of one year, 12 monthly samples of fish caught in the Lagoa dos Patos Estuary were analyzed for the presence of V. parahaemolyticus. Concurrently, water samples from estuary were collected aseptically for salinity analysis and pH. Vibrio isolates were analyzed by polymerase chain reaction (PCR) to identification of the species by presence of the toxR gene. In addition to the isolates obtained in this study were also studied 15 other strains of V. parahaemolyticus previously isolated in other works. The strains were evaluated for biofilm production capacity in microtiter plates. The biofilm production capacity after the strains had being subjected to different types of sublethal stress (42oC, 20°C, 4°C and acid pH) was also tested. Among the 120 analyzed fish, V. parahaemolyticus were isolated from four (3.33%) fishes, and Mugil platanus was the only species in which the microorganism was found. Among the 19 strains analyzed, 89.5% were able to form biofilm, which seems to indicate that this ability has an important role in the microorganism survival in the fish. Among these strains, 25% increased the ability to form biofilm after sublethal exposure. Based on the results, we concluded that fish of the species M. platanus of the Lagoa dos Patos Estuary are hosts of V. parahaemolyticus and that almost all of these strains are forming biofilm. Exposure to sublethal stress conditions has distinct effect on different strains, inducing an increase in the ability to form biofilm in some. This was the first study about the effects of stress on the V. parahaemolyticus biofilms formation.(AU)

Microencapsulation of essential thyme oil by spray drying and its antimicrobial evaluation against Vibrio alginolyticus and Vibrio parahaemolyticus

Abstract The aims of this research were first, to evaluate the antibacterial potential of commercial thyme essential oil against V. alginolyticus and V. parahaemolyticys and second, using the spray drying technique to produce microcapsules. chemical compounds of thyme oil and microcapsules were identified and quantified being thymol the chemical component present at the highest concentration. Oil-in-water (O/W) emulsions were prepared and the microcapsules were obtained with a spray dryer using maltodextrin as wall material (ratio 1:4). Thyme oil and the microcapsules exhibited antimicrobial activity against V. parahaemolyticus and V. alginolyticus. The spray drying process did not affect the antimicrobial activity of thyme essentialoil.

Resumo Os objetivos desta pesquisa foram avaliar o potencial antibacteriano do óleoessencial de tomilho sobre V. alginolyticus e V. parahaemolyticys e produzir microcápsulas através do processo de secagem por aspersão (spray dryer). Os compostos químicos do óleo essencial de tomilho e das microcápsulas foram identificados e quantificadaos. Foi preparada uma emulsão de óleo em água (O/A) e em seguida foram produzidas microcápsulas em um spray dryer utilizando-se óleo essencial de tomilho e maltodextrina como material de parede na proporção de 1:4 respectivamente. Entre os vários compostos identificados, o timol apresentou maior concentração. O óleo essencial de tomilho e as microcápsulas exibiram atividade antibacteriana sobre V. parahaemolyticus e V. alginolyticus. O processo de secagem por aspersão não afetou a atividade antibacteriana do óleo essencial de tomilho.

Microencapsulation of essential thyme oil by spray drying and its antimicrobial evaluation against Vibrio alginolyticus and Vibrio parahaemolyticus

Abstract The aims of this research were first, to evaluate the antibacterial potential of commercial thyme essential oil against V. alginolyticus and V. parahaemolyticys and second, using the spray drying technique to produce microcapsules. chemical compounds of thyme oil and microcapsules were identified and quantified being thymol the chemical component present at the highest concentration. Oil-in-water (O/W) emulsions were prepared and the microcapsules were obtained with a spray dryer using maltodextrin as wall material (ratio 1:4). Thyme oil and the microcapsules exhibited antimicrobial activity against V. parahaemolyticus and V. alginolyticus. The spray drying process did not affect the antimicrobial activity of thyme essentialoil.

Resumo Os objetivos desta pesquisa foram avaliar o potencial antibacteriano do óleoessencial de tomilho sobre V. alginolyticus e V. parahaemolyticys e produzir microcápsulas através do processo de secagem por aspersão (spray dryer). Os compostos químicos do óleo essencial de tomilho e das microcápsulas foram identificados e quantificadaos. Foi preparada uma emulsão de óleo em água (O/A) e em seguida foram produzidas microcápsulas em um spray dryer utilizando-se óleo essencial de tomilho e maltodextrina como material de parede na proporção de 1:4 respectivamente. Entre os vários compostos identificados, o timol apresentou maior concentração. O óleo essencial de tomilho e as microcápsulas exibiram atividade antibacteriana sobre V. parahaemolyticus e V. alginolyticus. O processo de secagem por aspersão não afetou a atividade antibacteriana do óleo essencial de tomilho.