Efeitos tóxicos de pesticidas comerciais e botânicos sobre os parâmetros comportamentais de zebrafish (Danio rerio) / Toxic effects of commercial and botanical pesticides on the behavioral parameters of zebrafish (Danio rerio) / Efectos tóxicos de pesticidas comerciales y botánicos en los parámetros de comportamiento del pez cebra (Danio rerio)

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito tóxico dos pesticidas comerciais, óleos essência e suas misturas, que apresentaram atividade pesticida contra Plutella xylostella, nos parâmetros comportamentais atividade locomotora e comportamentos sociais do zebrafish (Danio rerio). Os animais adultos foram expostos a pesticidas comerciais deltametrina, azadiractina, clorantraniliprole, óleos essenciais Eugenia caryophyllus, Melaleuca alternifolia, Citrus aurantium var. dulcis, Citrus aurantiifolia, Eucalyptus globulus, Melaleuca leucadendra e suas misturas. Foram avaliados mortalidade e os parâmetros comportamentais em exposição crônica, pelo método de varredura instantânea, atividade locomotora e comportamento social, de acordo com seguintes parâmetros: distância percorrida, velocidade média e tempo inativo. Houve mortalidade de 100% nos animais expostos a deltametrina sendo este o pesticida mais tóxico. Foram observadas modificações comportamentais (p < 0,05) em forragear, descansar e ataque nos diferentes pesticidas. Não foram observadas alterações na atividade locomotora e comportamento social. Pode-se concluir que a exposição aos pesticidas comerciais, óleos essenciais e suas misturas foram tóxicos para zebrafish. A exposição as baixas concentrações destes pesticidas comprometeram a sobrevivência e o comportamento do zebrafish. Mesmo o biopesticida sendo considerado seguro, pode trazer riscos ao ambiente aquático e seus efeitos tóxicos devem ser estudados para determinar concentrações seguras de uso na atividade agrícola.

The objective of this work was to evaluate the toxic effect of commercial pesticides, essential oils, and their mixtures, which present pesticide activity against Plutella xylostella, on the behavioral parameters, locomotor activity, and social behavior of zebrafish (Danio rerio). Adult animals were exposed to commercial pesticides deltamethrin, azadirachtin, chlorantraniliprole, essential oils Eugenia caryophyllus, Melaleuca alternifolia, Citrus aurantium var. dulcis, Citrus aurantiifolia, Eucalyptus globulus, and Melaleuca leucadendra, and mixtures of the substances. Mortality and behavioral parameters during chronic exposure were evaluated using the instantaneous scan sampling method, and locomotor activity and social behavior were assessed, according to the following parameters: distance covered, average speed, and inactive time. 100% mortality in animals exposed to deltamethrin was observed. Behavioral changes (p <0.05) were found in foraging, resting, and attacking behaviors. Locomotor activity and social behavior were not affected by exposure. It can be concluded that exposure to commercial pesticides, essential oils, and their mixtures was toxic to zebrafish. Exposure to low concentrations of these pesticides affected the survival and behavior of zebrafish. Although biopesticides are considered safe, they can cause risks to the aquatic environment, and their toxic effects need to be studied to determine their safe use in agricultural activities.

El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto tóxico de plaguicidas comerciales, aceites esenciales y sus mezclas, que mostraron actividad plaguicida contra Plutella xylostella, sobre parámetros de comportamiento, actividad locomotora y conductas sociales del pez cebra (Danio rerio). Los animales adultos fueron expuestos a pesticidas comerciales deltametrina, azadiractina, clorantraniliprol, aceites esenciales Eugenia caryophyllus, Melaleuca alternifolia, Citrus aurantium var. dulcis, Citrus aurantiifolia, Eucalyptus globulus, Melaleuca leucadendra y mezclas de los mismos. Se evaluaron parámetros de mortalidad y comportamiento en exposición crónica por el método de escaneo instantáneo, actividad locomotora y comportamiento social, según los siguientes parámetros: distancia recorrida, velocidad promedio y tiempo de inactividad. Hubo 100% de mortalidad en animales expuestos a deltametrina, que es el pesticida más tóxico. Se observaron cambios de comportamiento (p < 0,05) en el forrajeo, reposo y ataque a los diferentes plaguicidas. No se observaron cambios en la actividad locomotora y el comportamiento social. Se puede concluir que la exposición a pesticidas comerciales, aceites esenciales y sus mezclas fue tóxica para el pez cebra. La exposición a bajas concentraciones de estos pesticidas comprometió la supervivencia y el comportamiento del pez cebra. Incluso el biopesticida se considera seguro, puede traer riesgos al medio acuático y sus efectos tóxicos deben ser estudiados para determinar concentraciones seguras para su uso en la actividad agrícola.

Down-regulation of complement genes in lipopolysaccharide-challenged zebrafish (Danio rerio) larvae exposed to Indonesian propolis

Abstract Although propolis has been reported for having anti-inflammatory activities, its effects on complement system has not been much studied. This research was conducted to find out the effects of Indonesian propolis on the expression levels of C3, C1r/s, Bf, MBL, and C6 in zebrafish larvae which were induced by lipopolysaccharide (LPS). Counting of macrophages migrating to yolk sac and liver histology were carried out. Larvae were divided into four groups: CON (cultured in E3 medium only), LPS (cultured in a medium containing 0.5 g/L LPS), LPSIBU (cultured in a medium containing LPS, and then treated with 100 g/L ibuprofen for 24 hours), and LPSPRO (cultured in a medium containing LPS, and then immersed in 14,000 g/L propolis for 24 hours) groups. The results showed that complement gene expression in larvae from the LPSIBU and LPSPRO groups were generally lower than in larvae from the LPS group. The number of macrophage migrations to the yolk in the LPSPRO group was also lower than in the LPS group. Histological structure of liver in all groups were considered normal. This study shows that Indonesian propolis has the potential to be used as an alternative to the substitution of NSAIDs.

Resumo Embora a própolis tenha sido relatada por ter atividade anti-inflamatória, seus efeitos no sistema complemento, uma parte do sistema imunológico inato, não foram muito estudados. Esta pesquisa foi conduzida para descobrir os efeitos da própolis da Indonésia nos níveis de expressão de C3, C1r/s, Bf, MBL e C6 em larvas de peixe-zebra induzidas por lipopolissacarídeo (LPS). Foram realizadas contagens de macrófagos que migram para o saco vitelino e histologia do fígado. As larvas foram divididas em quatro grupos: CON (cultivadas apenas em meio E3), LPS (cultivadas em meio contendo 0,5 g/L de LPS), LPSIBU (cultivadas em meio contendo LPS e, em seguida, tratadas com 100 g/L de ibuprofeno por 24 horas) e LPSPRO (cultivado em meio contendo LPS, e então imerso em própolis 14,000 g/L por 24 horas). Os resultados mostraram que a expressão do gene do complemento em larvas dos grupos LPSIBU e LPSPRO foi geralmente menor que em larvas do grupo LPS. O número de migrações de macrófagos para a gema no grupo LPSPRO também foi menor que no grupo LPS. A estrutura histológica do fígado em todos os grupos foi considerada normal. Este estudo mostra que a própolis indonésia tem potencial para ser utilizada como alternativa na substituição dos AINEs (anti-inflamatórios não esteroides).

Down-regulation of complement genes in lipopolysaccharide-challenged zebrafish (Danio rerio) larvae exposed to Indonesian propolis / Regulação negativa dos genes do complemento em larvas de peixe-zebra (Danio rerio) desafiadas com lipopolissacarídeo expostas à própolis indonésia

Abstract Although propolis has been reported for having anti-inflammatory activities, its effects on complement system has not been much studied. This research was conducted to find out the effects of Indonesian propolis on the expression levels of C3, C1r/s, Bf, MBL, and C6 in zebrafish larvae which were induced by lipopolysaccharide (LPS). Counting of macrophages migrating to yolk sac and liver histology were carried out. Larvae were divided into four groups: CON (cultured in E3 medium only), LPS (cultured in a medium containing 0.5 μg/L LPS), LPSIBU (cultured in a medium containing LPS, and then treated with 100 μg/L ibuprofen for 24 hours), and LPSPRO (cultured in a medium containing LPS, and then immersed in 14,000 μg/L propolis for 24 hours) groups. The results showed that complement gene expression in larvae from the LPSIBU and LPSPRO groups were generally lower than in larvae from the LPS group. The number of macrophage migrations to the yolk in the LPSPRO group was also lower than in the LPS group. Histological structure of liver in all groups were considered normal. This study shows that Indonesian propolis has the potential to be used as an alternative to the substitution of NSAIDs.

Resumo Embora a própolis tenha sido relatada por ter atividade anti-inflamatória, seus efeitos no sistema complemento, uma parte do sistema imunológico inato, não foram muito estudados. Esta pesquisa foi conduzida para descobrir os efeitos da própolis da Indonésia nos níveis de expressão de C3, C1r/s, Bf, MBL e C6 em larvas de peixe-zebra induzidas por lipopolissacarídeo (LPS). Foram realizadas contagens de macrófagos que migram para o saco vitelino e histologia do fígado. As larvas foram divididas em quatro grupos: CON (cultivadas apenas em meio E3), LPS (cultivadas em meio contendo 0,5 μg/L de LPS), LPSIBU (cultivadas em meio contendo LPS e, em seguida, tratadas com 100 μg/L de ibuprofeno por 24 horas) e LPSPRO (cultivado em meio contendo LPS, e então imerso em própolis 14,000 μg/L por 24 horas). Os resultados mostraram que a expressão do gene do complemento em larvas dos grupos LPSIBU e LPSPRO foi geralmente menor que em larvas do grupo LPS. O número de migrações de macrófagos para a gema no grupo LPSPRO também foi menor que no grupo LPS. A estrutura histológica do fígado em todos os grupos foi considerada normal. Este estudo mostra que a própolis indonésia tem potencial para ser utilizada como alternativa na substituição dos AINEs (anti-inflamatórios não esteroides).

Down-regulation of complement genes in lipopolysaccharidechallenged zebrafish (Danio rerio) larvae exposed to Indonesian propolis / Regulação negativa dos genes do complemento em larvas de peixe-zebra (Danio rerio) desafiadas com lipopolissacarídeo expostas à própolis indonésia

Although propolis has been reported for having anti-inflammatory activities, its effects on complement system has not been much studied. This research was conducted to find out the effects of Indonesian propolis on the expression levels of C3, C1r/s, Bf, MBL, and C6 in zebrafish larvae which were induced by lipopolysaccharide (LPS). Counting of macrophages migrating to yolk sac and liver histology were carried out. Larvae were divided into four groups: CON (cultured in E3 medium only), LPS (cultured in a medium containing 0.5 μg/L LPS), LPSIBU (cultured in a medium containing LPS, and then treated with 100 μg/L ibuprofen for 24 hours), and LPSPRO (cultured in a medium containing LPS, and then immersed in 14,000 μg/L propolis for 24 hours) groups. The results showed that complement gene expression in larvae from the LPSIBU and LPSPRO groups were generally lower than in larvae from the LPS group. The number of macrophage migrations to the yolk in the LPSPRO group was also lower than in the LPS group. Histological structure of liver in all groups were considered normal. This study shows that Indonesian propolis has the potential to be used as an alternative to the substitution of NSAIDs.

Embora a própolis tenha sido relatada por ter atividade anti-inflamatória, seus efeitos no sistema complemento, uma parte do sistema imunológico inato, não foram muito estudados. Esta pesquisa foi conduzida para descobrir os efeitos da própolis da Indonésia nos níveis de expressão de C3, C1r/s, Bf, MBL e C6 em larvas de peixe-zebra induzidas por lipopolissacarídeo (LPS). Foram realizadas contagens de macrófagos que migram para o saco vitelino e histologia do fígado. As larvas foram divididas em quatro grupos: CON (cultivadas apenas em meio E3), LPS (cultivadas em meio contendo 0,5 μg/L de LPS), LPSIBU (cultivadas em meio contendo LPS e, em seguida, tratadas com 100 μg/L de ibuprofeno por 24 horas) e LPSPRO (cultivado em meio contendo LPS, e então imerso em própolis 14,000 μg/L por 24 horas). Os resultados mostraram que a expressão do gene do complemento em larvas dos grupos LPSIBU e LPSPRO foi geralmente menor que em larvas do grupo LPS. O número de migrações de macrófagos para a gema no grupo LPSPRO também foi menor que no grupo LPS. A estrutura histológica do fígado em todos os grupos foi considerada normal. Este estudo mostra que a própolis indonésia tem potencial para ser utilizada como alternativa na substituição dos AINEs (anti-inflamatórios não esteroides).

Down-regulation of complement genes in lipopolysaccharidechallenged zebrafish (Danio rerio) larvae exposed to Indonesian propolis / Regulação negativa dos genes do complemento em larvas de peixe-zebra (Danio rerio) desafiadas com lipopolissacarídeo expostas à própolis indonésia

Although propolis has been reported for having anti-inflammatory activities, its effects on complement system has not been much studied. This research was conducted to find out the effects of Indonesian propolis on the expression levels of C3, C1r/s, Bf, MBL, and C6 in zebrafish larvae which were induced by lipopolysaccharide (LPS). Counting of macrophages migrating to yolk sac and liver histology were carried out. Larvae were divided into four groups: CON (cultured in E3 medium only), LPS (cultured in a medium containing 0.5 μg/L LPS), LPSIBU (cultured in a medium containing LPS, and then treated with 100 μg/L ibuprofen for 24 hours), and LPSPRO (cultured in a medium containing LPS, and then immersed in 14,000 μg/L propolis for 24 hours) groups. The results showed that complement gene expression in larvae from the LPSIBU and LPSPRO groups were generally lower than in larvae from the LPS group. The number of macrophage migrations to the yolk in the LPSPRO group was also lower than in the LPS group. Histological structure of liver in all groups were considered normal. This study shows that Indonesian propolis has the potential to be used as an alternative to the substitution of NSAIDs.(AU)

Embora a própolis tenha sido relatada por ter atividade anti-inflamatória, seus efeitos no sistema complemento, uma parte do sistema imunológico inato, não foram muito estudados. Esta pesquisa foi conduzida para descobrir os efeitos da própolis da Indonésia nos níveis de expressão de C3, C1r/s, Bf, MBL e C6 em larvas de peixe-zebra induzidas por lipopolissacarídeo (LPS). Foram realizadas contagens de macrófagos que migram para o saco vitelino e histologia do fígado. As larvas foram divididas em quatro grupos: CON (cultivadas apenas em meio E3), LPS (cultivadas em meio contendo 0,5 μg/L de LPS), LPSIBU (cultivadas em meio contendo LPS e, em seguida, tratadas com 100 μg/L de ibuprofeno por 24 horas) e LPSPRO (cultivado em meio contendo LPS, e então imerso em própolis 14,000 μg/L por 24 horas). Os resultados mostraram que a expressão do gene do complemento em larvas dos grupos LPSIBU e LPSPRO foi geralmente menor que em larvas do grupo LPS. O número de migrações de macrófagos para a gema no grupo LPSPRO também foi menor que no grupo LPS. A estrutura histológica do fígado em todos os grupos foi considerada normal. Este estudo mostra que a própolis indonésia tem potencial para ser utilizada como alternativa na substituição dos AINEs (anti-inflamatórios não esteroides).(AU)

Good practices in the rearing and maintenance of zebrafish (Danio rerio) in Brazilian laboratories / Boas práticas na criação e manutenção de zebrafish (Danio rerio) em laboratório no Brasil

Good Laboratory Practice (GLP) is a management quality control system that encompasses the organizational process and conditions under which non-clinical health and environmental studies are carried out. According to the World Health Organization, GLP must contain five topics: resources, characterization, rules, results, and quality control. The aim of this work is to address a review according to WHO standard to the implementation of Good Laboratory Practices in zebrafish (Danio rerio) facility. Considering that the promotion of one health (animal, human, and environmental) associated with an education plan, protocols, and records are fundamental to guarantee the safety and integrity of employees, animals and the environment as well as reliability in the results generated. In a way, Brazil still needs improvements related to the wellfare of aquatic organisms (national laws, international agreements, corporate programs, and others); especially in relation to its use in research and technological development. In this way, the implementation of GLPs provide valuable guidance for improving animal welfare and worker safety, facilitating the standardization of research.

As Boas Práticas de Laboratório (BPL) são um sistema de controle de qualidade gerencial que abrange o processo organizacional e as condições sob as quais os estudos não clínicos de saúde e meio ambiente são desenvolvidos. Conforme a Organização Mundial da Saúde (OMS) as BPL devem conter cinco tópicos: recursos, caracterização, regras, resultados e controle de qualidade. O objetivo deste trabalho foi apresentar uma revisão conforme o padrão da OMS para a implementação das BPL em biotério de zebrafish. Considerando que a promoção da saúde única (animal, humana e ambiental) associada a um plano de educação, protocolos e registros são fundamentais para garantir a segurança e a integridade dos trabalhadores/pesquisadores, animais e meio ambiente assim como confiabilidade nos resultados gerados. De certa forma o Brasil ainda necessita de melhorias relacionadas ao bem-estar de organismos aquáticos (leis nacionais, acordos internacionais, programas corporativos e outros); especialmente em relação à utilização destes na pesquisa e desenvolvimento tecnológico. Desta forma, a implementação de BPL fornece uma orientação valiosa para a melhoria do bem-estar animal, e segurança do trabalhador vindo a facilitar a padronização da pesquisa.

Ensayos ecotoxicológicos empleados en el análisis de muestras acuáticas contaminadas con hidrocarburos / Métodos ecotoxicológicos utilizados na análise de amostras aquáticas contaminadas com hidrocarbonetos / Métodos ecotoxicológicos utilizados na análise de amostras aquáticas contaminadas com hidrocarbonetos

Los ensayos ecotoxicológicos brindan información sobre los posibles efectos nocivos que podrían tener ciertas sustancias sobre los seres vivos. El presente artículo de revisión es un análisis de los ensayos ecotoxicológicos desarrollados en los últimos años para determinar la toxicidad de hidrocarburos en muestras acuáticas, especialmente de combustibles o biocombustibles candidatos, empleando distintos organismos que pueden brindar información valiosa y necesaria sobre las consecuencias que dichos compuestos podrían tener en la cadena trófica. En el proceso de desarrollo de nuevos compuestos o productos derivados de hidrocarburos es importante conocer la relación causa-efecto que podría tener sobre el medioambiente, ahí radica la importancia de emplear dichos ensayos para seleccionar aquel producto que sea más adecuado y menos nocivo, así descartar la producción de aquellos que podrían tener efectos deletéreos y causar catástrofes medioambientales. Los organismos que usualmente se emplean para análisis de muestras acuosas o disueltas son: pez cebra (Danio rerio), microcrustácros (Daphnia sp.); microalgas (Scenedesmus sp., Chlorella sp. entre otros), y bacterias marinas (Aliivibrio fischeri), donde parte de los mismos, o los organismos como tal son objeto de estudio, y con ello se busca comprender el efecto que el compuesto podría tener sobre ellos, dando información importante en distintos niveles tróficos.

Os testes ecotoxicológicos fornecem informações sobre os possíveis efeitos nocivos que certas substâncias podem causar nos seres vivos. Assim, este artigo de revisão é uma análise dos testes ecotoxicológicos desenvolvidos nos últimos anos para determinar a toxicidade de hidrocarbonetos em amostras aquáticas, especialmente combustíveis candidatos ou biocombustíveis, que se utiliza de diferentes organismos que podem fornecer informações valiosas e necessárias sobre as consequências que esses compostos podem ter na cadeia trófica. No processo de desenvolvimento de novos compostos ou produtos derivados de hidrocarbonetos, é importante conhecer a relação causa-efeito que pode ter o desenvolvimento do produto sobre o meio ambiente, daí a importância de usar esses testes para selecionar o produto mais adequado e menos prejudicial, descartando assim a produção daqueles que poderiam ter efeitos deletérios e causar catástrofes ambientais. Os organismos normalmente utilizados para análise de amostras aquosas ou dissolvidas são: zebrafish (Danio rerio); microcrustáceos (Daphnia sp.); microalgas (Scenedesmus sp., Chlorella sp., entre outras); e bactérias marinhas (Aliivibrio fischeri); sendo parte deles, ou os organismos como tal, objeto de estudo. Com isso, busca-se entender o efeito que o composto pode ter sobre eles, dando informações importantes em diferentes níveis tróficos.

Use of ozone in the culture medium of zebrafish (Danio rerio) embryos / Uso do ozônio no meio de cultura para embriões de zebrafish (Danio rerio)

In this study, we sought to demonstrate the toxicity of different concentrations of ozonated water in zebrafish embryos up to 120 hours postfertilization (hpf ) and their antimicrobial activity advantages. For the test, we placed 40 embryos per treatment in Petri dishes containing 30 ml of solution to be tested. The ozone concentrations used were calculated from an initial concentration of 72 µg/ml using the O&L 1.5 RM ozone generator (Ozone & Life, Brazil). Five serial dilutions 1:1 was performed in egg water to produce the ozone treatments. We also analyzed a treatment with 30 ml of egg water without ozone, with only the addition of methylene blue, and a treatment with 30 ml of egg water without the addition of any antifungal agent. The plates were incubated at 28 ± 1°C, and the embryos were analyzed daily until 120 hpf. The survival rate, incubation period, and possible deformities were analyzed. In addition, egg water microbiological analyses were performed to detect total coliforms and fungi and yeasts. The data were tested for normality, and analysis of variance was performed within Minitab®version 1.8 software. The results showed that there was no significant difference in embryo survival or hatching rate between treatments with different ozone concentrations (p > 0.05), and no embryonic deformities were found under any of the ozone concentrations evaluated. It can be concluded that ozone within the concentrations analyzed is not toxic to zebrafish embryos and has antifungal and antimicrobial action.(AU)

Neste estudo, procuramos demonstrar a toxicidade de diferentes concentrações de água ozonizada em embriões de zebrafish até 120 horas pós-fertilização (hpf ) e suas vantagens na atividade antimicrobiana. Para o teste, colocamos 40 embri-ões por tratamento em placas de Petri contendo 30 ml da solução a ser testada. As concentrações de ozônio utilizadas foram calculadas a partir de uma concentração inicial de 72 µg/ml usando o gerador de ozônio O&L 1,5 RM (Ozone & Life, Brasil). Foram realizadas cinco diluições seriadas 1:1 em Egg Water. Também analisamos um tratamento com 30 ml de Egg Water sem ozônio, apenas com adição de azul de metileno, e um tratamento com 30 ml de Egg Water sem adição de nenhum agente antifúngico. As placas foram incubadas a 28 ± 1°C e os embriões foram analisados diariamente até 120 hpf. A taxa de sobrevi-vência, período de incubação e possíveis deformidades foram analisados. Além disso, foram realizadas análises microbiológicas da Egg Water para detectar coliformes totais, fungos e leveduras. Os dados foram testados quanto à normalidade e a análise de variância foi realizada no software Minitab® versão 1.8. Os resultados mostraram que não houve diferença significativa na sobrevivência de embriões ou taxa de eclosão entre os tratamentos com diferentes concentrações de ozônio (p > 0,05), e não foram encontradas deformidades embrionárias sob nenhuma das concentrações de ozônio avaliadas. Pode-se concluir que o ozônio dentro das concentrações analisadas não é tóxico para embriões de zebrafish e possui ação antifúngica e antimicrobiana.(AU)

The effect of Lacticaseibacillus casei on inflammatory cytokine (IL-8) gene expression induced by exposure to Shigella sonnei in Zebrafish (Danio rerio) / [O efeito do Lacticaseibacillus casei na citoquina inflamatória (IL-8) expressão genética induzida pela exposição a Shigella sonnei em Zebrafish (Danio rerio)]

This study aimed to evaluate the protective function of probiotics against Shigella sonnei pathogenicity. For this purpose, 400 zebrafish were divided into four groups with two replications: (T1): receiving Lacticaseibacillus casei for 27 days, (T2): receiving L. casei for 27 days followed by 72 hr exposure to S. sonnei, (T3): receiving basal diet for 27 days followed by 72 hr exposure to S. sonnei, and control group (C): receiving basal diet without exposure to the pathogen. According to the results, feeding with L. casei for 27 days reduced the interleukin-8 (IL-8) expression significantly (P<0.05). The results showed a decrease in IL-8 expression in the group exposed to the pathogen and fed with the probiotic compared to the group only fed with the basal diet (P<0.05). Considering the role of IL-8 as a pro-inflammatory cytokine, our results indicated that feeding with L. casei could modulate inflammatory responses.

Este estudo teve como objetivo avaliar a função protetora dos probióticos contra a patogenicidade Shigella sonnei. Para este fim, 400 zebrafish foram divididos em quatro grupos com duas réplicas: (T1): recebendo Lacticaseibacillus casei por 27 dias, (T2): recebendo L. casei por 27 dias seguido por 72 horas de exposição a S. sonnei, (T3): recebendo dieta basal por 27 dias seguido por 72 horas de exposição a S. sonnei, e grupo controle (C): recebendo dieta basal sem exposição ao patógeno. De acordo com os resultados, a alimentação com L. casei por 27 dias reduziu significativamente a expressão da interleucina-8 (IL-8) (P<0,05). Os resultados mostraram uma diminuição na expressão de IL-8 no grupo exposto ao patógeno e alimentado com o probiótico em comparação com o grupo alimentado apenas com a dieta basal (P<0,05). Considerando o papel da IL-8 como uma citocina pró-inflamatória, nossos resultados indicaram que a alimentação com L. casei poderia modular as respostas inflamatórias.

Use of melatonin as an inhibitor of apoptotic process for cryopreservation of zebrafish (Danio rerio) embryos / Uso da melatonina como inibidor do processo apoptotico para a criopreservação de embriões de zebrafish (Danio rerio)

This study investigated the use of melatonin to arrest the effects of apoptosis in vitrified zebrafish (D. rerio) embryos. Dechorionated embryos at 22-24 somite-stage were divided (n = 60/treatment) into a non-vitrified (Control Group, 0 M melatonin) and vitrified treatments with 0 M (T1), 1 µM (T2) and 1 mM of melatonin (T3). For vitrified treatments, a solution methanol/propylene glycol based was used and the embryos stored in -196 °C for a week. After thaw, survival rate, scanning electron microscopy, expression of anti (bcl-2) and pro-apoptotic (bax/caspase-3) genes, reactive oxygen species (ROS) formation and DNA fragmentation analyses were performed. No live embryos were obtained from vitrified treatments, observing a rapid degeneration immediately after thawing, with the vitelline layer rupture and leakage of its content, followed by breakdown of epithelial cells and melanisation of the tissue. Regarding the apoptotic process, T3 had the highest relative gene expression, for the three genes (P 0.05). The inclusion of 1 µM of melatonin in the vitrifying solution, countered the effects of apoptotic process in post-thaw embryos, suggesting its utility in cryopreserving fish embryos.

Este estudo investigou o uso da melatonina para conter os efeitos da apoptose em embriões vitrificados de zebrafish (D. rerio). Embriões descorionados no estágio de 22-24 somitos foram divididos (n = 60 / tratamento) em tratamento não vitrificado (Grupo Controle, melatonina 0 M) e tratamentos vitrificados com 0 M (T1), 1 µM (T2) e 1 mM de melatonina (T3). Para os tratamentos vitrificados, utilizou-se uma solução à base de metanol/propilenoglicol e os embriões foram armazenados em -196 °C por uma semana. Após o descongelamento, foram realizadas análises de taxa de sobrevivência, microscopia eletrônica de varredura, expressão dos genes anti (bcl-2) e pró-apoptóticos (bax/caspase-3), formação de espécies reativas de oxigênio (EROS) e análises de fragmentação de DNA. Não foram obtidos embriões vivos a partir dos tratamentos vitrificados, observando uma rápida degeneração imediatamente após o descongelamento, com ruptura da camada vitelina e vazamento de seu conteúdo, seguida de quebra das células epiteliais e melanização do tecido. Em relação ao processo apoptótico. T3 apresentou expressão gênica relativa alta para os três genes (P 0,05). A inclusão de 1 µM de melatonina na solução de vitrificação, contrariou os efeitos do processo apoptótico em embriões pós-descongelamento, sugerindo sua utilidade na criopreservação de embriões de peixes.

Use of melatonin as an inhibitor of apoptotic process for cryopreservation of zebrafish (Danio rerio) embryos / Uso da melatonina como inibidor do processo apoptotico para a criopreservação de embriões de zebrafish (Danio rerio)

This study investigated the use of melatonin to arrest the effects of apoptosis in vitrified zebrafish (D. rerio) embryos. Dechorionated embryos at 22-24 somite-stage were divided (n = 60/treatment) into a non-vitrified (Control Group, 0 M melatonin) and vitrified treatments with 0 M (T1), 1 µM (T2) and 1 mM of melatonin (T3). For vitrified treatments, a solution methanol/propylene glycol based was used and the embryos stored in -196 °C for a week. After thaw, survival rate, scanning electron microscopy, expression of anti (bcl-2) and pro-apoptotic (bax/caspase-3) genes, reactive oxygen species (ROS) formation and DNA fragmentation analyses were performed. No live embryos were obtained from vitrified treatments, observing a rapid degeneration immediately after thawing, with the vitelline layer rupture and leakage of its content, followed by breakdown of epithelial cells and melanisation of the tissue. Regarding the apoptotic process, T3 had the highest relative gene expression, for the three genes (P < 0.05) furthermore, T2 had similar expression of pro-apoptotic genes to CG (P < 0.05). ROS formation revealed that CG presented lower percentage of embryo surface area affected (3.80 ± 0.40%) (P < 0.05), in contrast, no differences were found among the other groups. T1 was most significantly (P < 0.05) damaged by DNA fragmentation. The vitrified groups with melatonin had similar damage levels of CG (P > 0.05). The inclusion of 1 µM of melatonin in the vitrifying solution, countered the effects of apoptotic process in post-thaw embryos, suggesting its utility in cryopreserving fish embryos.(AU)

Este estudo investigou o uso da melatonina para conter os efeitos da apoptose em embriões vitrificados de zebrafish (D. rerio). Embriões descorionados no estágio de 22-24 somitos foram divididos (n = 60 / tratamento) em tratamento não vitrificado (Grupo Controle, melatonina 0 M) e tratamentos vitrificados com 0 M (T1), 1 µM (T2) e 1 mM de melatonina (T3). Para os tratamentos vitrificados, utilizou-se uma solução à base de metanol/propilenoglicol e os embriões foram armazenados em -196 °C por uma semana. Após o descongelamento, foram realizadas análises de taxa de sobrevivência, microscopia eletrônica de varredura, expressão dos genes anti (bcl-2) e pró-apoptóticos (bax/caspase-3), formação de espécies reativas de oxigênio (EROS) e análises de fragmentação de DNA. Não foram obtidos embriões vivos a partir dos tratamentos vitrificados, observando uma rápida degeneração imediatamente após o descongelamento, com ruptura da camada vitelina e vazamento de seu conteúdo, seguida de quebra das células epiteliais e melanização do tecido. Em relação ao processo apoptótico. T3 apresentou expressão gênica relativa alta para os três genes (P <0,05), além disso, T2 apresentou expressão semelhante as dos genes pró-apoptóticos de GC (P <0,05). A formação de EROS revelou que GC apresentou menor percentual de área de superfície embrionária afetada (3,80 ± 0,40%) (P <0,05), ao contrário, não foram encontradas diferenças entre os outros grupos. T1 foi mais significativamente (P <0,05) danificado pela fragmentação do DNA. Os grupos vitrificados com melatonina apresentaram níveis de dano semelhantes ao do GC (P> 0,05). A inclusão de 1 µM de melatonina na solução de vitrificação, contrariou os efeitos do processo apoptótico em embriões pós-descongelamento, sugerindo sua utilidade na criopreservação de embriões de peixes.(AU)

Use of melatonin as an inhibitor of apoptotic process for cryopreservation of zebrafish (Danio rerio) embryos

Abstract This study investigated the use of melatonin to arrest the effects of apoptosis in vitrified zebrafish (D. rerio) embryos. Dechorionated embryos at 22-24 somite-stage were divided (n = 60/treatment) into a non-vitrified (Control Group, 0 M melatonin) and vitrified treatments with 0 M (T1), 1 µM (T2) and 1 mM of melatonin (T3). For vitrified treatments, a solution methanol/propylene glycol based was used and the embryos stored in -196 °C for a week. After thaw, survival rate, scanning electron microscopy, expression of anti (bcl-2) and pro-apoptotic (bax/caspase-3) genes, reactive oxygen species (ROS) formation and DNA fragmentation analyses were performed. No live embryos were obtained from vitrified treatments, observing a rapid degeneration immediately after thawing, with the vitelline layer rupture and leakage of its content, followed by breakdown of epithelial cells and melanisation of the tissue. Regarding the apoptotic process, T3 had the highest relative gene expression, for the three genes (P 0.05) furthermore, T2 had similar expression of pro-apoptotic genes to CG (P 0.05). ROS formation revealed that CG presented lower percentage of embryo surface area affected (3.80 ± 0.40%) (P 0.05), in contrast, no differences were found among the other groups. T1 was most significantly (P 0.05) damaged by DNA fragmentation. The vitrified groups with melatonin had similar damage levels of CG (P > 0.05). The inclusion of 1 µM of melatonin in the vitrifying solution, countered the effects of apoptotic process in post-thaw embryos, suggesting its utility in cryopreserving fish embryos.

Resumo Este estudo investigou o uso da melatonina para conter os efeitos da apoptose em embriões vitrificados de zebrafish (D. rerio). Embriões descorionados no estágio de 22-24 somitos foram divididos (n = 60 / tratamento) em tratamento não vitrificado (Grupo Controle, melatonina 0 M) e tratamentos vitrificados com 0 M (T1), 1 µM (T2) e 1 mM de melatonina (T3). Para os tratamentos vitrificados, utilizou-se uma solução à base de metanol/propilenoglicol e os embriões foram armazenados em -196 °C por uma semana. Após o descongelamento, foram realizadas análises de taxa de sobrevivência, microscopia eletrônica de varredura, expressão dos genes anti (bcl-2) e pró-apoptóticos (bax/caspase-3), formação de espécies reativas de oxigênio (EROS) e análises de fragmentação de DNA. Não foram obtidos embriões vivos a partir dos tratamentos vitrificados, observando uma rápida degeneração imediatamente após o descongelamento, com ruptura da camada vitelina e vazamento de seu conteúdo, seguida de quebra das células epiteliais e melanização do tecido. Em relação ao processo apoptótico. T3 apresentou expressão gênica relativa alta para os três genes (P 0,05), além disso, T2 apresentou expressão semelhante as dos genes pró-apoptóticos de GC (P 0,05). A formação de EROS revelou que GC apresentou menor percentual de área de superfície embrionária afetada (3,80 ± 0,40%) (P 0,05), ao contrário, não foram encontradas diferenças entre os outros grupos. T1 foi mais significativamente (P 0,05) danificado pela fragmentação do DNA. Os grupos vitrificados com melatonina apresentaram níveis de dano semelhantes ao do GC (P> 0,05). A inclusão de 1 µM de melatonina na solução de vitrificação, contrariou os efeitos do processo apoptótico em embriões pós-descongelamento, sugerindo sua utilidade na criopreservação de embriões de peixes.

Use of melatonin as an inhibitor of apoptotic process for cryopreservation of zebrafish (Danio rerio) embryos / Uso da melatonina como inibidor do processo apoptotico para a criopreservação de embriões de zebrafish (Danio rerio)

This study investigated the use of melatonin to arrest the effects of apoptosis in vitrified zebrafish (D. rerio) embryos. Dechorionated embryos at 22-24 somite-stage were divided (n = 60/treatment) into a non-vitrified (Control Group, 0 M melatonin) and vitrified treatments with 0 M (T1), 1 µM (T2) and 1 mM of melatonin (T3). For vitrified treatments, a solution methanol/propylene glycol based was used and the embryos stored in -196 °C for a week. After thaw, survival rate, scanning electron microscopy, expression of anti (bcl-2) and pro-apoptotic (bax/caspase-3) genes, reactive oxygen species (ROS) formation and DNA fragmentation analyses were performed. No live embryos were obtained from vitrified treatments, observing a rapid degeneration immediately after thawing, with the vitelline layer rupture and leakage of its content, followed by breakdown of epithelial cells and melanisation of the tissue. Regarding the apoptotic process, T3 had the highest relative gene expression, for the three genes (P < 0.05) furthermore, T2 had similar expression of pro-apoptotic genes to CG (P < 0.05). ROS formation revealed that CG presented lower percentage of embryo surface area affected (3.80 ± 0.40%) (P < 0.05), in contrast, no differences were found among the other groups. T1 was most significantly (P < 0.05) damaged by DNA fragmentation. The vitrified groups with melatonin had similar damage levels of CG (P > 0.05). The inclusion of 1 µM of melatonin in the vitrifying solution, countered the effects of apoptotic process in post-thaw embryos, suggesting its utility in cryopreserving fish embryos.

Este estudo investigou o uso da melatonina para conter os efeitos da apoptose em embriões vitrificados de zebrafish (D. rerio). Embriões descorionados no estágio de 22-24 somitos foram divididos (n = 60 / tratamento) em tratamento não vitrificado (Grupo Controle, melatonina 0 M) e tratamentos vitrificados com 0 M (T1), 1 µM (T2) e 1 mM de melatonina (T3). Para os tratamentos vitrificados, utilizou-se uma solução à base de metanol/propilenoglicol e os embriões foram armazenados em -196 °C por uma semana. Após o descongelamento, foram realizadas análises de taxa de sobrevivência, microscopia eletrônica de varredura, expressão dos genes anti (bcl-2) e pró-apoptóticos (bax/caspase-3), formação de espécies reativas de oxigênio (EROS) e análises de fragmentação de DNA. Não foram obtidos embriões vivos a partir dos tratamentos vitrificados, observando uma rápida degeneração imediatamente após o descongelamento, com ruptura da camada vitelina e vazamento de seu conteúdo, seguida de quebra das células epiteliais e melanização do tecido. Em relação ao processo apoptótico. T3 apresentou expressão gênica relativa alta para os três genes (P <0,05), além disso, T2 apresentou expressão semelhante as dos genes pró-apoptóticos de GC (P <0,05). A formação de EROS revelou que GC apresentou menor percentual de área de superfície embrionária afetada (3,80 ± 0,40%) (P <0,05), ao contrário, não foram encontradas diferenças entre os outros grupos. T1 foi mais significativamente (P <0,05) danificado pela fragmentação do DNA. Os grupos vitrificados com melatonina apresentaram níveis de dano semelhantes ao do GC (P> 0,05). A inclusão de 1 µM de melatonina na solução de vitrificação, contrariou os efeitos do processo apoptótico em embriões pós-descongelamento, sugerindo sua utilidade na criopreservação de embriões de peixes.

Zebrafish (Danio rerio) meets bioethics: the 10Rs ethical principles in research / O peixe-zebra (Danio rerio) encontra a bioética: os princípios éticos dos 10Rs na pesquisa

Zebrafish (Danio rerio) is a tropical fish species widely used in research, worldwide. The development of genetically modified animals and the increasing number of zebrafish breeding facilities due to their emerging use in several research fields, opened room for new ethical challenges for research carried out with this species. It is necessary to raise the scientific community's awareness of the ethical standards and laws in force, on animal research. Thus, the aim of the current study is to describe 10 Rs ethical principles by using zebrafish as model system in research. The classical 3 Rs concerning animal welfare, namely replacement, reduction and refinement; and the added 7 Rs related to scientific (registration, reporting, robustness, reproducibility and relevance) and conduct principles (responsibility, and respect) in zebrafish research are herein presented and critically discussed. The use of these 10 Rs by researchers, institutions and the Animal Ethics Committee is recommended to support regulations, decision-making about and the promotion of zebrafish health and welfare in research.

O peixe-zebra (Danio rerio) é um peixe tropical amplamente usado em pesquisas em todo o mundo. Devido ao seu uso emergente em várias áreas de pesquisa, o desenvolvimento de animais geneticamente modificados e o aumento das instalações de peixe-zebra, novos desafos éticos surgem na pesquisa com o peixe-zebra. Além disso, é necessária a conscientização da comunidade científica sobre as normas éticas e leis vigentes na pesquisa com animais. Assim, o presente estudo teve como objetivo descrever os princípios éticos de 10 Rs usando o peixe-zebra como sistema modelo em pesquisa. Os 3 Rs clássicos relativos ao bem-estar animal (substituição, redução e refinamento) e 7 Rs adicionais relacionados aos princípios científicos (registro, relatório, robustez, reprodutibilidade e relevância) e de conduta (responsabilidade e respeito) na pesquisa do peixe-zebra são apresentados e discutido criticamente. Recomendamos o uso desses 10 Rs pelos pesquisadores, instituições e Comitê de Ética Animal na regulamentação, decisão e promoção da saúde e bem-estar do peixe-zebra em pesquisas.

Anesthesia or seizure-like behavior? The effects of two Amazonian plants, Acmella oleracea and Piper alatabaccum in zebrafish (Danio rerio) / Anestesia ou epilepsia? Os efeitos de duas plantas amazônicas, Acmella oleracea e Piper alatabaccum em peixe-zebra (Danio rerio)

Currently, available fish anesthetics can produce important side effects, including respiratory arrest and distress. Easy-to-implement alternatives with low toxicity are needed to ensure fish health as well as to help artisanal fisheries and fish sellers in handling and transporting fishes, and native plants seems to be the best alternative. We aimed to implement an anesthetic protocol using crude ethanolic extracts from flowers and leaves of two Amazonian plants, the Acmella oleracea and Piper alatabaccum. We first tested the extracts for anesthesia, using the zebrafish as model. Even though in some treatments the animals apparently entered deep anesthesia, many of them presented aberrant behaviors and even died. Thus, we performed new experiments testing the extracts effects on seizure-like behaviors of the fish. Only the leaf extract of A. oleracea has potential effects for fish anesthesia. Both the flower extract from this plant and the leaf extract from P. alatabaccum induced seizure-like behavior in the animals. In conclusion, besides bringing a possible new anesthetic protocol for fish, our work draws attention for the neurotoxic effects the anesthetic solutions may cause, since several studies defend other Piper species as anesthetic for fish and A. oleracea flowers' extract was already pointed as fish anesthetic.

Atualmente, os anestésicos disponíveis para peixes podem produzir efeitos colaterais importantes, incluindo parada respiratória e sofrimento. Alternativas de fácil implementação e baixa toxicidade são necessárias para garantir a saúde dos peixes, bem como para auxiliar a pesca artesanal e os vendedores de pescado no manuseio e transporte do pescado, e as plantas nativas parecem ser a melhor alternativa. Nosso objetivo foi implementar um protocolo anestésico utilizando extratos etanólicos brutos de flores e folhas de duas plantas amazônicas, Acmella oleracea e Piper alatabaccum. Primeiro testamos os extratos para anestesia, usando o peixe-zebra como modelo. Embora em alguns tratamentos os animais aparentemente tenham entrado em anestesia profunda, muitos deles apresentaram comportamentos aberrantes e até morreram. Assim, realizamos novos experimentos testando os efeitos dos extratos em epilepsia dos peixes. Apenas o extrato de folhas de A. oleracea tem efeitos potenciais para anestesia de peixes. Tanto o extrato de flores desta planta quanto o extrato de folhas de P. alatabaccum induziram um comportamento semelhante a convulsões nos animais. Em conclusão, além de trazer um possível novo protocolo anestésico para peixes, nosso trabalho chama a atenção para os efeitos neurotóxicos que as soluções anestésicas podem causar, uma vez que vários estudos defendem outras espécies de Piper como anestésico para peixes e o extrato de flores de A. oleracea já foi apontado como anestésico para peixe.

Billings reservoir (brazil): chemical studies on water and chemical and morphological studies on zebrafish gills / Represa billings (brasil): estudos químicos na água e estudos químicos e morfológicos nas brânquias de zebrafish

Previous study of this research group revealed that water from the Billings reservoir (Brazil) intended for human use (water supply and seafood) has microbiological contamination and causes lethality and brain and behavioral impairments in zebrafish. The objective of this study was to understand what have induced these impairments in the animal model. Chemical analyses on water samples from Rio Pequeno (RP), Rio Grande (RG), and Bororé (BO) rivers, as well as chemical and morphological analyses on zebrafish gills exposed to those waters were performed. Waters samples from RP, RG, and BO presented high levels of phosphorus. BO water and fish gills exposed to this water presented high levels of nitrogen. RG water caused potassium contamination in gills. Phosphorus, nitrogen, and potassium are indicators of anthropogenic pollution. RG water and fish gills exposed to this water presented low levels of calcium, which might be an indication of chemical imbalance that could lead to health problems in aquatic animals. RG and BO waters resulted in zirconium contamination in gills. BO water induced respiratory lamellae thickening in the gills, which may be the underlying mechanism for the observed hypoxia. In conclusion, behavioral, brain, and respiratory defects observed previously were induced by chemical and morphological disturbances due to anthropogenic pollution in the Billings reservoir.

Estudos prévios deste grupo de pesquisa revelaram que a água da represa Billings (Brasil) utilizada para consumo humano apresenta contaminação microbiológica e induz danos comportamentais, encefálicos e letalidade em zebrafish. O objetivo deste estudo foi entender o que induziu esses danos no modelo animal. Foram realizadas análises químicas em amostras de água do Rio Pequeno (RP), do Rio Grande (RG) e de Bororé (BO), além de análises químicas e morfológicas nas brânquias de zebrafish expostos a estas águas. Amostras de água do RP, do RG e de BO apresentaram altos níveis de fósforo. Águas de BO e as brânquias dos zebrafish expostos a estas águas apresentaram altos níveis de nitrogênio. Águas do RG resultaram em contaminação por potássio nas brânquias. Fósforo, nitrogênio e potássio são indicadores de poluição antropogênica. Águas do RG e as brânquias dos zebrafish expostos a estas águas apresentaram baixos níveis de cálcio, um indicativo de problemas na saúde animal. Águas do RG e de BO resultaram em contaminação por zircônio nas brânquias. Águas de BO induziram espessamento das lamelas respiratórias das brânquias, que deve ser o mecanismo subjacente para a hipóxia observada. Conclui-se que os danos comportamentais, encefálicos e respiratórios observados anteriormente foram induzidos por distúrbios químicos e morfológicos em decorrência de poluição antropogênica na represa Billings.

Billings reservoir (brazil): chemical studies on water and chemical and morphological studies on zebrafish gills / Represa billings (brasil): estudos químicos na água e estudos químicos e morfológicos nas brânquias de zebrafish

Previous study of this research group revealed that water from the Billings reservoir (Brazil) intended for human use (water supply and seafood) has microbiological contamination and causes lethality and brain and behavioral impairments in zebrafish. The objective of this study was to understand what have induced these impairments in the animal model. Chemical analyses on water samples from Rio Pequeno (RP), Rio Grande (RG), and Bororé (BO) rivers, as well as chemical and morphological analyses on zebrafish gills exposed to those waters were performed. Waters samples from RP, RG, and BO presented high levels of phosphorus. BO water and fish gills exposed to this water presented high levels of nitrogen. RG water caused potassium contamination in gills. Phosphorus, nitrogen, and potassium are indicators of anthropogenic pollution. RG water and fish gills exposed to this water presented low levels of calcium, which might be an indication of chemical imbalance that could lead to health problems in aquatic animals. RG and BO waters resulted in zirconium contamination in gills. BO water induced respiratory lamellae thickening in the gills, which may be the underlying mechanism for the observed hypoxia. In conclusion, behavioral, brain, and respiratory defects observed previously were induced by chemical and morphological disturbances due to anthropogenic pollution in the Billings reservoir.(AU)

Estudos prévios deste grupo de pesquisa revelaram que a água da represa Billings (Brasil) utilizada para consumo humano apresenta contaminação microbiológica e induz danos comportamentais, encefálicos e letalidade em zebrafish. O objetivo deste estudo foi entender o que induziu esses danos no modelo animal. Foram realizadas análises químicas em amostras de água do Rio Pequeno (RP), do Rio Grande (RG) e de Bororé (BO), além de análises químicas e morfológicas nas brânquias de zebrafish expostos a estas águas. Amostras de água do RP, do RG e de BO apresentaram altos níveis de fósforo. Águas de BO e as brânquias dos zebrafish expostos a estas águas apresentaram altos níveis de nitrogênio. Águas do RG resultaram em contaminação por potássio nas brânquias. Fósforo, nitrogênio e potássio são indicadores de poluição antropogênica. Águas do RG e as brânquias dos zebrafish expostos a estas águas apresentaram baixos níveis de cálcio, um indicativo de problemas na saúde animal. Águas do RG e de BO resultaram em contaminação por zircônio nas brânquias. Águas de BO induziram espessamento das lamelas respiratórias das brânquias, que deve ser o mecanismo subjacente para a hipóxia observada. Conclui-se que os danos comportamentais, encefálicos e respiratórios observados anteriormente foram induzidos por distúrbios químicos e morfológicos em decorrência de poluição antropogênica na represa Billings.(AU)

Flaxseed oil and clove leaf essential oil in Zebrafish diet (Danio rerio)

Flaxseed oil is recognized as the plant source richest in α-linolenic acid, whereas clove leaf essential oil has a strong antioxidant capacity.The objective of this study was to determine the in vitro antioxidant capacity of diets containing a combination of flaxseed oil (FO) and clove leaf essential oil (CLEO), as well as to use zebrafish (Danio rerio) to assess theireffect on the animalsgrowth. Fifty days after hatching, a total of 420 male specimens (0.29 ± 0.04 g)weredivided into seven groups for each diet and fed for 55 daysto be used, with the diets being: control, absent FO and CLEO; 3% FO + 0.5% CLEO; 3% FO + 1% CLEO; 6% FO + 0.5% CLEO; 6% FO + 1% CLEO; 9% FO + 0.5% CLEO and 9% FO + 1% CLEO. Antioxidant activity was determined through DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) tests, showing interaction effect between factors (FO x CLEO, p <0.05); the diets containing 1% combined with 3, 6 or 9%of FOpresented meanshigher than those of the0.5%diets. No mortality was observed during the experiment. For final weight and weight gain, there was no interaction effect (p> 0.05), only isolated effect for FO, with the fish fed 6 and 9% diets having the best results. Final total length and specific growth rates showed interaction effect (p <0.05). As for specific growth rates, the best response was that of the diet with 6% FO and 0.5% CLEO. Final length showed increase with FO levels, even when there was association with0.5 or 1% of CLEO. Therefore, combined use of9% of FL with 0.5% of CLEO is recommended for zebrafish.(AU)

Flaxseed oil and clove leaf essential oil in Zebrafish diet (Danio rerio)

Flaxseed oil is recognized as the plant source richest in α-linolenic acid, whereas clove leaf essential oil has a strong antioxidant capacity.The objective of this study was to determine the in vitro antioxidant capacity of diets containing a combination of flaxseed oil (FO) and clove leaf essential oil (CLEO), as well as to use zebrafish (Danio rerio) to assess theireffect on the animals’growth. Fifty days after hatching, a total of 420 male specimens (0.29 ± 0.04 g)weredivided into seven groups for each diet and fed for 55 daysto be used, with the diets being: control, absent FO and CLEO; 3% FO + 0.5% CLEO; 3% FO + 1% CLEO; 6% FO + 0.5% CLEO; 6% FO + 1% CLEO; 9% FO + 0.5% CLEO and 9% FO + 1% CLEO. Antioxidant activity was determined through DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) tests, showing interaction effect between factors (FO x CLEO, p 0.05), only isolated effect for FO, with the fish fed 6 and 9% diets having the best results. Final total length and specific growth rates showed interaction effect (p <0.05). As for specific growth rates, the best response was that of the diet with 6% FO and 0.5% CLEO. Final length showed increase with FO levels, even when there was association with0.5 or 1% of CLEO. Therefore, combined use of9% of FL with 0.5% of CLEO is recommended for zebrafish.

BPA toxicity during development of zebrafish embryo / Toxicidade do BPA durante o desenvolvimento de embriões de Zebrafish

Bisphenol A (BPA) is a monomer used in the production of polycarbonate, a polymer commonly found in plastics, epoxy resins and thermal papers. The presence of BPA in food, water, air and dust has been of great concern in recent years not only due to environmental and ecological issues but also because of its supposed risk to public health related to its mutagenic and carcinogenic potential. In this study we evaluated the toxicity of bisphenol A in zebrafish embryos (Danio rerio) and determined the 50% lethal concentration (LC50) of this chemical. BPA was used at concentrations ranging from 1 µM to 100 µM in E3 medium/0.5% dimethylsulfoxide (DMSO) from previously prepared stock solutions in 100% DMSO. Controls included embryos exposed only to E3 medium or supplemented with 0.5% DMSO. Camptothecin (CPT), a known inhibitor of cell proliferation was used as positive control at a concentration of 0.001 µM in E3 medium/0.5% DMSO. Adults zebrafish were placed for breeding a day before the experimental set up, then, viable embryos were collected and selected for use. Experiments were carried out in triplicates, according to specifications from Organization for Economic Cooperation and Development (OECD). One embryo/well (25 embryos per concentration) was distributed in 96 well microplates in presence or absence of the chemicals. The plates were kept in BOD incubators with a controlled temperature of 28.5 ºC and with photoperiod of 14 h light:10 h dark. After 24h, 48h, 72h and 96h exposure, the exposed embryos were evaluated according to the following parameters: mortality, coagulation, rate of heartbeat, hatching and presence of morphological abnormalities. Photography was obtained by photomicroscopy. Apoptosis was evaluated by DNA ladder assay. DNA was extracted by phenol:chloroform method and analyzed by 2% agarose gel electrophoresis. DNA fragments were visualized after ethidium bromide staining in ultraviolet transilluminator. The LC50 determined for BPA was 70 µM after 24 hours, 72 µM after 48 hours, 47 µM after 72 hours and 31 µM after 96 hours exposure. BPA induced morphological and physiological alterations such as yolk sac and pericardial edema, hatching delay or inhibition, spine deformation, decreasing in heartbeat rate and mortality. In conclusion, this study demonstrated that BPA induced marked malformations in zebrafish embryos at concentrations above 25 µM corroborating the current concerns related to the widespread presence of BPA in the air, food and water used by humans as well as in the bodily fluids and tissues.

Bisfenol A (BPA) é um monômero utilizado na produção de policarbonato, um polímero comumente encontrado em plásticos, resinas epóxi e papéis térmicos. A presença de BPA em alimentos, água, ar e poeira tem sido motivo de grande preocupação nos últimos anos, não só devido a questões ambientais e ecológicas, mas também ao suposto risco para a saúde pública relacionado ao seu potencial mutagênico e carcinogênico. Neste estudo avaliamos a toxicidade do bisfenol A em embriões de peixe-zebra (Danio rerio) e determinamos a concentração letal 50% (LC50) deste composto químico. O BPA foi usado na faixa de concentração entre 1 µM e 100µM em meio E3/0,5% de dimetilsulfóxido (DMSO), preparado a partir de soluções estoques em 100% DMSO. Os controles negativos incluíram embriões expostos apenas ao meio E3 ou suplementado com 0,5% DMSO. Camptotecina (CPT), um conhecido inibidor da proliferação celular, foi usado como controle positivo a uma concentração de 0,001 µM em meio E3/0,5% DMSO. Peixes-zebra adultos foram colocados para reprodução um dia antes da montagem experimental, em seguida, embriões viáveis foram coletados e selecionados para uso. Os experimentos foram realizados em triplicata, de acordo com as especificações da Organização para Cooperação e Desenvolvimento Econômico (OCDE). Um embrião/ poço (25 embriões por concentração) foi distribuído em microplacas de 96 poços na presença ou ausência dos compostos químicos. As placas foram mantidas em incubadoras BOD com temperatura controlada de 28,5 ºC e com fotoperíodo de 14h claro:10h escuro. Após 24h, 48h, 72h e 96h, os embriões expostos foram avaliados de acordo com os seguintes parâmetros: mortalidade, presença de coagulação, taxa do batimento cardíaco, eclosão e presença de anormalidades morfológicas. Fotografias foram obtidas por fotomicroscopia. A apoptose foi avaliada pelo ensaio de DNA ladder. O DNA foi extraído pelo método fenol:clorofórmio e analisado por eletroforese em gel de agarose a 2%. Fragmentos de DNA foram visualizadas após coloração com brometo de etídio em um transiluminador ultravioleta. A LC50 determinada para o BPA foi 70 µM após 24 horas, 72 µM após 48 horas, 47 µM após 72 horas e 31 µM após exposição por 96 horas. O BPA induziu alterações morfológicas e fisiológicas como edema de saco vitelino e edema pericárdico, atraso no tempo ou inibição da eclosão, deformação da coluna vertebral, diminuição da taxa de batimentos cardíacos e mortalidade. Em conclusão, este estudo demonstrou que o BPA induziu grande número de malformações em embriões de peixe-zebra em concentrações acima de 25 µM, corroborando as preocupações atuais relacionadas a presença generalizada do BPA no ar, alimento e água usados pelos seres humanos bem como nos fluidos e tecidos corporais.