Modelagem farmacocinética/farmacodinâmica do florfenicol para o tratamento da adenite equina por meio da simulação de Monte Carlo / Pharmacokinetic/pharmacodynamic modeling of florfenicol for the treatment of equine adenitis using Monte Carlo simulation

O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficácia do florfenicol na dose usualmente empregada em equinos de 22 mg/kg pelas vias intravenosa, intramuscular e oral para o tratamento de adenite equina por Streptococcus equi. subsp. equi, usando a modelagem farmacocinética/farmacodinâmica (PK/PD Pharmacokinetic/Pharmacodynamic) e a simulação de Monte Carlo. Foi realizada uma simulação de Monte Carlo a partir dos parâmetros PK, logo depois, efetuou-se a modelagem PK/PD para determinar as taxas de eficácia do antimicrobiano para o tratamento dessa infecção bacteriana, de acordo com o valor da concentração inibitória mínima (CIM), em um intervalo de CIM de 0,125 4 μg/mL. Pela via intravenosa, a probabilidade de erradicação bacteriana foi de 100% para CIM até 0,5 μg/mL e efeito bacteriostático com probabilidades de 99% e 80% para CIMs de 2 e 4 μg/mL, respectivamente. Já pelas vias intramuscular e oral a probabilidade de se atingir o índice de erradicação bacteriológica foi de 100% para CIM de até 0,5 μg/mL, contudo, atinge valores de 80% e 81%, respectivamente, para CIM de 1 μg/mL considerando o efeito bactericida (p<0,01). Portanto, através desse estudo é evidenciado a eficácia do florfenicol até a CIM de 0,5 μg/mL para as três vias de administração citadas, entretanto, para CIMs superiores a esse valor, é imprescindível o ajuste da dose farmacológica, evitando falhas na terapêutica e possível resistência microbiana.(AU)

The objective of this study was to evaluate the efficacy of florfenicol at the dose usually used in horses of 22 mg/kg by intravenous, intramuscular and oral routes for the treatment of equine adenitis caused by Streptococcus equi. subsp. equi, using Pharmacokinetic/Pharmacodynamic (PK/PD) modeling and Monte Carlo simulation. A Monte Carlo simulation was performed from the PK parameters, then PK/PD modeling was performed to determine the antimicrobial efficacy rates for the treatment of this bacterial infection, according to the minimum inhibitory concentration (MIC) value, in a MIC range of 0.125 - 4 μg/mL. Intravenously, the probability of bacterial eradication was 100% for MICs up to 0.5 μg/mL, and the bacteriostatic effect was 99% and 80% for MICs of 2 and 4 μg/mL, respectively. However, for the intramuscular and oral routes, the probability of reaching the bacteriologic eradication index was 100% for MICs of up to 0.5 μg/mL, however, it reaches values of 80% and 81%, respectively, for MICs of 1 μg/mL considering the bactericidal effect (p<0.01). Therefore, through this study the efficacy of florfenicol is evidenced up to the MIC of 0.5 μg/mL for the three routes of administration cited, however, for MICs higher than this value, it is essential to adjust the pharmacological dose, avoiding failures in therapy and possible microbial resistance.(AU)

Modelagem farmacocinética/farmacodinâmica do florfenicol para o tratamento da adenite equina por meio da simulação de Monte Carlo / Pharmacokinetic/pharmacodynamic modeling of florfenicol for the treatment of equine adenitis using Monte Carlo simulation

O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficácia do florfenicol na dose usualmente empregada em equinos de 22 mg/kg pelas vias intravenosa, intramuscular e oral para o tratamento de adenite equina por Streptococcus equi. subsp. equi, usando a modelagem farmacocinética/farmacodinâmica (PK/PD – Pharmacokinetic/Pharmacodynamic) e a simulação de Monte Carlo. Foi realizada uma simulação de Monte Carlo a partir dos parâmetros PK, logo depois, efetuou-se a modelagem PK/PD para determinar as taxas de eficácia do antimicrobiano para o tratamento dessa infecção bacteriana, de acordo com o valor da concentração inibitória mínima (CIM), em um intervalo de CIM de 0,125 – 4 μg/mL. Pela via intravenosa, a probabilidade de erradicação bacteriana foi de 100% para CIM até 0,5 μg/mL e efeito bacteriostático com probabilidades de 99% e 80% para CIMs de 2 e 4 μg/mL, respectivamente. Já pelas vias intramuscular e oral a probabilidade de se atingir o índice de erradicação bacteriológica foi de 100% para CIM de até 0,5 μg/mL, contudo, atinge valores de 80% e 81%, respectivamente, para CIM de 1 μg/mL considerando o efeito bactericida (p<0,01). Portanto, através desse estudo é evidenciado a eficácia do florfenicol até a CIM de 0,5 μg/mL para as três vias de administração citadas, entretanto, para CIMs superiores a esse valor, é imprescindível o ajuste da dose farmacológica, evitando falhas na terapêutica e possível resistência microbiana.

The objective of this study was to evaluate the efficacy of florfenicol at the dose usually used in horses of 22 mg/kg by intravenous, intramuscular and oral routes for the treatment of equine adenitis caused by Streptococcus equi. subsp. equi, using Pharmacokinetic/Pharmacodynamic (PK/PD) modeling and Monte Carlo simulation. A Monte Carlo simulation was performed from the PK parameters, then PK/PD modeling was performed to determine the antimicrobial efficacy rates for the treatment of this bacterial infection, according to the minimum inhibitory concentration (MIC) value, in a MIC range of 0.125 - 4 μg/mL. Intravenously, the probability of bacterial eradication was 100% for MICs up to 0.5 μg/mL, and the bacteriostatic effect was 99% and 80% for MICs of 2 and 4 μg/mL, respectively. However, for the intramuscular and oral routes, the probability of reaching the bacteriologic eradication index was 100% for MICs of up to 0.5 μg/mL, however, it reaches values of 80% and 81%, respectively, for MICs of 1 μg/mL considering the bactericidal effect (p<0.01). Therefore, through this study the efficacy of florfenicol is evidenced up to the MIC of 0.5 μg/mL for the three routes of administration cited, however, for MICs higher than this value, it is essential to adjust the pharmacological dose, avoiding failures in therapy and possible microbial resistance.

Modelagem farmacocinética/farmacodinâmica do florfenicol para o tratamento da adenite equina por meio da simulação de Monte Carlo / Pharmacokinetic/pharmacodynamic modeling of florfenicol for the treatment of equine adenitis using Monte Carlo simulation

O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficácia do florfenicol na dose usualmente empregada em equinos de 22 mg/kg pelas vias intravenosa, intramuscular e oral para o tratamento de adenite equina por Streptococcus equi. subsp. equi, usando a modelagem farmacocinética/farmacodinâmica (PK/PD ­ Pharmacokinetic/Pharmacodynamic) e a simulação de Monte Carlo. Foi realizada uma simulação de Monte Carlo a partir dos parâmetros PK, logo depois, efetuou-se a modelagem PK/PD para determinar as taxas de eficácia do antimicrobiano para o tratamento dessa infecção bacteriana, de acordo com o valor da concentração inibitória mínima (CIM), em um intervalo de CIM de 0,125 ­ 4 µg/mL. Pela via intravenosa, a probabilidade de erradicação bacteriana foi de 100% para CIM até 0,5 µg/mL e efeito bacteriostático com probabilidades de 99% e 80% para CIMs de 2 e 4 µg/mL, respectivamente. Já pelas vias intramuscular e oral a probabilidade de se atingir o índice de erradicação bacteriológica foi de 100% para CIM de até 0,5 µg/mL, contudo, atinge valores de 80% e 81%, respectivamente, para CIM de 1 µg/mL considerando o efeito bactericida (p<0,01). Portanto, através desse estudo é evidenciado a eficácia do florfenicol até a CIM de 0,5 µg/mL para as três vias de administração citadas, entretanto, para CIMs superiores a esse valor, é imprescindível o ajuste da dose farmacológica, evitando falhas na terapêutica e possível resistência microbiana.

The objective of this study was to evaluate the efficacy of florfenicol at the dose usually used in horses of 22 mg/kg by intravenous, intramuscular and oral routes for the treatment of equine adenitis caused by Streptococcus equi. subsp. equi, using Pharmacokinetic/Pharmacodynamic (PK/PD) modeling and Monte Carlo simulation. A Monte Carlo simulation was performed from the PK parameters, then PK/PD modeling was performed to determine the antimicrobial efficacy rates for the treatment of this bacterial infection, according to the minimum inhibitory concentration (MIC) value, in a MIC range of 0.125 - 4 µg/mL. Intravenously, the probability of bacterial eradication was 100% for MICs up to 0.5 µg/mL, and the bacteriostatic effect was 99% and 80% for MICs of 2 and 4 µg/mL, respectively. However, for the intramuscular and oral routes, the probability of reaching the bacteriologic eradication index was 100% for MICs of up to 0.5 µg/mL, however, it reaches values of 80% and 81%, respectively, for MICs of 1 µg/mL considering the bactericidal effect (p<0.01). Therefore, through this study the efficacy of florfenicol is evidenced up to the MIC of 0.5 µg/mL for the three routes of administration cited, however, for MICs higher than this value, it is essential to adjust the pharmacological dose, avoiding failures in therapy and possible microbial resistance.

Multicentric T-cell lymphoma in a creole filly / Linfoma multicêntrico de células T em uma potra crioula

A 2-year-old creole filly was referred to us for evaluation because of the clinical suspicion of infection by Streptococcus equi. It presented with progressive weight loss and increased volume of the submandibular, retropharyngeal, and precrural lymph nodes. General clinical examinations and laboratory tests revealed dehydration, anemia, leukopenia, hyperfibrinogenemia, and thrombocytopenia. The initial treatment for equine adenitis did not achieve significant results, and new hematological and biochemical tests and lymph node cytology by puncture were performed. Cytology revealed cells compatible with neoplastic lymphocytes, resulting in the suspicion of lymphoma. The animal died from general weakness and was sent for autopsy. Macroscopically, generalized lymphadenomegaly and splenomegaly were observed, with multiple nodules and tumor lesions in the splenic parenchyma. There was an irregular nodule in the medullary layer of the right kidney. The liver and lungs were slightly enlarged, with petechiae and multifocal suffusions. Histopathological evaluation of different organ specimens revealed intense proliferation of the neoplastic lymphoid cells, invading the adjacent tissues, with moderate cellular pleomorphism. Immunohistochemistry of the lymph node sections with neoplastic infiltration revealed multicentric T-cell lymphoma. In horses, cases of lymphomas are rare and should be differentiated from other causes that induce lymphadenomegaly in this species.(AU)

Uma potra da raça crioula, com dois anos de idade foi encaminhada para avaliação clínica com suspeita de infecção por Streptococcus equi. A paciente apresentava emagrecimento progressivo e aumento dos linfonodos submandibulares, retrofaríngeos e pré-crurais. A potra foi submetida a exames clínicos gerais e de laboratório, apresentando desidratação, anemia, leucopenia, hiperfibrinogenemia e trombocitopenia. O tratamento inicial para adenite equina não obteve resultados significativos, e novos exames hematológicos, bioquímicos e citologia da punção de linfonodos foram realizados. O resultado da citologia revelou células compatíveis com linfócitos neoplásicos, o que levou a suspeita de linfoma. O animal morreu em consequência da debilidade de seu estado geral e foi encaminhado para necropsia. Macroscopicamente, observou-se linfadenomegalia generalizada, esplenomegalia com múltiplos nódulos no parênquima do baço, bem como lesões tumorais caracterizadas por rim direito apresentando nódulo irregular na camada medular, fígado levemente aumentado e pulmões com petéquias e sufusões multifocais. Amostras de variados órgãos foram submetidos a avaliação histopatológica, a qual revelou intensa proliferação de células linfoides neoplásicas com invasão de tecidos adjacentes com moderado pleomorfismo celular. Secções de linfonodos com infiltrado neoplásico foram submetidas à avaliação imuno-histoquímica (IHQ) a qual determinou tratar-se de linfoma de células T multicêntrico. Em equinos, esse tipo de neoplasma é pouco frequente e deve ser diferenciado de outras causas que induzem linfadenomegalia nessa espécie.(AU)

"Cell ELISA" como ferramenta auxiliar no controle da adenite equina / "Cell ELISA" as an auxiliary tool for the control of equine adenitis

Este trabalho relata o desenvolvimento e a avaliação de um ensaio imunoenzimático (ELISA) como ferramenta auxiliar no controle da adenite equina. Foi avaliada a presença de anticorpos anti-Streptococcus equi subsp. equi em equinos com doença clínica de garrotilho, portadores assintomáticos e potros vacinados. Equinos doentes demonstraram absorbâncias médias superiores (P<0,05) às médias observadas nas demais categorias examinadas. Equinos portadores assintomáticos apresentaram valores médios de absorbância superiores (P<0,05) aos animais com cultura negativa. Logo após a vacinação, potros apresentaram elevação nos níveis de anticorpos, seguida de um decréscimo nos níveis 90 dias após a segunda vacinação. O "Cell ELISA" foi eficiente para a detecção de anticorpos em equinos expostos a antígenos de S. equi, diferenciando-se de infecções por S. zooepidemicus. O "Cell ELISA" mostrou-se uma alternativa clínica para o diagnóstico indireto da adenite equina, diferenciando-se, entre equinos assintomáticos, os potenciais portadores da infecção. Os resultados observados em potros vacinados confirmam o potencial de utilização desse teste como ferramenta em programas de vacinação contra garrotilho pelo monitoramento de rebanhos pós-vacinação. Esses resultados sugerem que o "Cell ELISA" é uma promissora ferramenta auxiliar no controle da adenite equina.(AU)

This study reports the development and evaluation of the use of "Cell ELISA" as a tool for clinical interpretation for the control of strangles. The presence of anti-S. equi antibodies was evaluated in horses with strangles, in asymptomatic carriers and in vaccinated foals. Equine positive for strangle showed higher average of absorbance (P<0.05) when compared with the average for the other categories of horses studied. Asymptomatic S. equi equine carriers had higher average of absorbance (P<0.05) than equines with negative culture. After vaccination, foals presented an increase in antibody levels, followed by a decrease in antibody levels 90 days post the second vaccination. The "Cell ELISA" was efficient for the detection of antibodies in horses exposed to S. equi antigens, differentiating infections with S. zooepidemicus. Thus, the test might be a clinical tool for indirect diagnosis of the strangles, differentiating, between the asymptomatic horses, the potential carriers of infection. The results observed in vaccinated foals confirm the potential use of this test as an auxiliary instrument for strangles vaccination programs based in the serological monitoring of the herd after immunization. These results suggest that the "Cell ELISA" is a promising auxiliary tool in the control of equine adenitis.(AU)

"Cell ELISA" como ferramenta auxiliar no controle da adenite equina / "Cell ELISA" as an auxiliary tool for the control of equine adenitis

Este trabalho relata o desenvolvimento e a avaliação de um ensaio imunoenzimático (ELISA) como ferramenta auxiliar no controle da adenite equina. Foi avaliada a presença de anticorpos anti-Streptococcus equi subsp. equi em equinos com doença clínica de garrotilho, portadores assintomáticos e potros vacinados. Equinos doentes demonstraram absorbâncias médias superiores (P<0,05) às médias observadas nas demais categorias examinadas. Equinos portadores assintomáticos apresentaram valores médios de absorbância superiores (P<0,05) aos animais com cultura negativa. Logo após a vacinação, potros apresentaram elevação nos níveis de anticorpos, seguida de um decréscimo nos níveis 90 dias após a segunda vacinação. O "Cell ELISA" foi eficiente para a detecção de anticorpos em equinos expostos a antígenos de S. equi, diferenciando-se de infecções por S. zooepidemicus. O "Cell ELISA" mostrou-se uma alternativa clínica para o diagnóstico indireto da adenite equina, diferenciando-se, entre equinos assintomáticos, os potenciais portadores da infecção. Os resultados observados em potros vacinados confirmam o potencial de utilização desse teste como ferramenta em programas de vacinação contra garrotilho pelo monitoramento de rebanhos pós-vacinação. Esses resultados sugerem que o "Cell ELISA" é uma promissora ferramenta auxiliar no controle da adenite equina.(AU)

This study reports the development and evaluation of the use of "Cell ELISA" as a tool for clinical interpretation for the control of strangles. The presence of anti-S. equi antibodies was evaluated in horses with strangles, in asymptomatic carriers and in vaccinated foals. Equine positive for strangle showed higher average of absorbance (P<0.05) when compared with the average for the other categories of horses studied. Asymptomatic S. equi equine carriers had higher average of absorbance (P<0.05) than equines with negative culture. After vaccination, foals presented an increase in antibody levels, followed by a decrease in antibody levels 90 days post the second vaccination. The "Cell ELISA" was efficient for the detection of antibodies in horses exposed to S. equi antigens, differentiating infections with S. zooepidemicus. Thus, the test might be a clinical tool for indirect diagnosis of the strangles, differentiating, between the asymptomatic horses, the potential carriers of infection. The results observed in vaccinated foals confirm the potential use of this test as an auxiliary instrument for strangles vaccination programs based in the serological monitoring of the herd after immunization. These results suggest that the "Cell ELISA" is a promising auxiliary tool in the control of equine adenitis.(AU)

Prevalence and antibiotic resistance of (Streptococcus equi) from nasal cavity of healthy equines / Prevalência e resistência a antibióticos de (Streptococcus equi) da cavidade nasal de equinos hígidos no município de Fernandopólis, São Paulo, Brasil

Strangles is a disease of the respiratory tract of horses caused by Streptococcus equi. The disease has high morbidity and low lethality, and produces economic losses due to low performance and high cost treatment. This research focused on evaluate antibiotic resistance of Streptococcus equi from the nasal cavity of healthy horses from the region Fernandópolis São Paulo. Fifty (50) mongrel healthy horses, ageing from twelve to twenty four (12-24) months were used. Samples from the nasal cavity of each animal were obtained using sterile swabs and after were cultured on blood agar base plus 5% defibrinated sheep blood. Plates that showed mucous colonies and Beta- hemolytic were tested using Gram stain method, the catalase test, and identified by the system API Rapid ID thirty-two 32 Strep. All isolates were analyzed by plate difusion. Sixty seven of the obtained isolates were Streptococcus equi subspecies equi and zooepidemicus. There was higher prevalence of S. subsp equi zooepidemicus (p < 0.001). Most isolates of S. equi subsp equi were antibiotical multiresistant with significant differences between different antibiotics (p < 0.005), whereas higher susceptibility was observed in isolated S. subsp equi zooepidemicus (p < 0.05). The results showed that both subspecies of Streptococcus equi are part of the normal flora of the nasal cavity of horses, and that they differ in susceptibility to antibiotics.

A adenite equina, popularmente chamada de garrotilho, é uma enfermidade contagiosa, causada pela bactéria Streptococcus equi. A enfermidade é conhecida por ter alta morbidade e baixa letalidade e seus prejuízos econômicos devem-se à perda de performance e alto custo do tratamento. O objetivo deste trabalho foi avaliar a presença e o perfil de resistência a antibióticos de Streptococcus equi da cavidade nasal de equinos hígidos da região de Fernandópolis SP. Foram utilizados 50 equinos hígidos sem raça definida e com idade entre 12 a 24 meses. De cada animal foram colhidas amostras de exsudato da cavidade nasal por meio de swabs esterilizados e em seguida colocados em tubos contendo ágar base acrescido com 5% de sangue ovino desfibrinado. Os isolados que apresentaram colônias mucosas e Beta -hemolíticas foram analisados pela coloração de Gram, submetidos ao teste da catalase, e identificados pelo sistema API Rapid ID 32 Strep. Todos os isolados foram avaliados em difusão em placa. Foram isolados sessenta e sete amostras de Streptococcus equi, das subespécies equi e zooepidemicus. Verificou-se prevalência maior de S. equi subesp zooepidemicus (p < 0,001). A maioria dos isolados de S. equi subespécies equi foram mutirresistentes, havendo diferenças significativas entre os diferentes antibióticos (p < 0,005), enquanto que foi verificada maior susceptibilidade nos isolados S. eqequi subespécies zooepidemicus (p < 0,05). Os resultados obtidos mostraram que ambas as subespécies deStreptococcus equi fazem parte da microbiota normal da cavidade nasal de equinos, e que as mesmas diferemquanto a susceptibilidade aos antibióticos.

Prevalence and antibiotic resistance of (Streptococcus equi) from nasal cavity of healthy equines / Prevalência e resistência a antibióticos de (Streptococcus equi) da cavidade nasal de equinos hígidos no município de Fernandopólis, São Paulo, Brasil

Strangles is a disease of the respiratory tract of horses caused by Streptococcus equi. The disease has high morbidity and low lethality, and produces economic losses due to low performance and high cost treatment. This research focused on evaluate antibiotic resistance of Streptococcus equi from the nasal cavity of healthy horses from the region Fernandópolis São Paulo. Fifty (50) mongrel healthy horses, ageing from twelve to twenty four (12-24) months were used. Samples from the nasal cavity of each animal were obtained using sterile swabs and after were cultured on blood agar base plus 5% defibrinated sheep blood. Plates that showed mucous colonies and Beta- hemolytic were tested using Gram stain method, the catalase test, and identified by the system API Rapid ID thirty-two 32 Strep. All isolates were analyzed by plate difusion. Sixty seven of the obtained isolates were Streptococcus equi subspecies equi and zooepidemicus. There was higher prevalence of S. subsp equi zooepidemicus (p < 0.001). Most isolates of S. equi subsp equi were antibiotical multiresistant with significant differences between different antibiotics (p < 0.005), whereas higher susceptibility was observed in isolated S. subsp equi zooepidemicus (p < 0.05). The results showed that both subspecies of Streptococcus equi are part of the normal flora of the nasal cavity of horses, and that they differ in susceptibility to antibiotics.(AU)

A adenite equina, popularmente chamada de garrotilho, é uma enfermidade contagiosa, causada pela bactéria Streptococcus equi. A enfermidade é conhecida por ter alta morbidade e baixa letalidade e seus prejuízos econômicos devem-se à perda de performance e alto custo do tratamento. O objetivo deste trabalho foi avaliar a presença e o perfil de resistência a antibióticos de Streptococcus equi da cavidade nasal de equinos hígidos da região de Fernandópolis SP. Foram utilizados 50 equinos hígidos sem raça definida e com idade entre 12 a 24 meses. De cada animal foram colhidas amostras de exsudato da cavidade nasal por meio de swabs esterilizados e em seguida colocados em tubos contendo ágar base acrescido com 5% de sangue ovino desfibrinado. Os isolados que apresentaram colônias mucosas e Beta -hemolíticas foram analisados pela coloração de Gram, submetidos ao teste da catalase, e identificados pelo sistema API Rapid ID 32 Strep. Todos os isolados foram avaliados em difusão em placa. Foram isolados sessenta e sete amostras de Streptococcus equi, das subespécies equi e zooepidemicus. Verificou-se prevalência maior de S. equi subesp zooepidemicus (p < 0,001). A maioria dos isolados de S. equi subespécies equi foram mutirresistentes, havendo diferenças significativas entre os diferentes antibióticos (p < 0,005), enquanto que foi verificada maior susceptibilidade nos isolados S. eqequi subespécies zooepidemicus (p < 0,05). Os resultados obtidos mostraram que ambas as subespécies deStreptococcus equi fazem parte da microbiota normal da cavidade nasal de equinos, e que as mesmas diferemquanto a susceptibilidade aos antibióticos.(AU)

ADENITE EQUINA NA MICRORREGIÃO DE ARAÇATUBA, SÃO PAULO

O Brasil tem o quarto maior rebanho equino do mundo e o estado de São Paulo encontra-se como o quinto principal estado criador de equinos no país, com aproximadamente 348 mil animais. Dentre os agentes oportunistas de grande morbidade encontrados no sistema respiratório equino estão os Streptococcus equi subesp. equi, agente etiológico da adenite equina. Os animais podem ser acometidos em qualquer idade, época e temperatura do ano, apresentar secreção nasal e linfoadenomegalia, principalmente em região submandibular, e sinais clínicos típicos de processo inflamatório generalizado. Com este estudo, objetivou-se avaliar a prevalência de Streptococcus spp. e relacionar a adenite equina, associar a incidência de Streptococcus spp. aos dois momentos em que as amostras foram coletadas, verão/outono e inverno, de forma que fosse possível comparar as estações e analisar a sensibilidade aos antimicrobianos dos agentes isolados nos animais da microrregião de Araçatuba, estado de São Paulo, Brasil. Foram coletadas um total de 363 amostras de swabs de secreção nasal de equinos, semeadas para isolamento nos meios de Ágar Sangue e MacConkey,submetidas a prova de catalase, coloração de Gram, fermentação de açúcares, bile- esculina, caldo BHI com NaCl e teste de sensibilidade antibacteriana. Isolou-se 22 amostras de Streptococcus das subespécies zooepidemicus e equisimilis, com prevalência de S. equisimilis. As bactérias foram resistentes aos seguintes antibióticos: estreptomicina, enrofloxacina e cotrimoxazol e os que apresentaram maior sensibilidade foram: ceftiofur, azitromicina e cotrimoxazol. Os resultados mostraram que não foram encontrados animais positivos para adenite equina, no inverno tivemos positivos de S. zooepidemicus e S. equisimilis, e que estes diferem quanto à susceptibilidade dos antibióticos.

Brazil has the fourth largest equine herd in the world and the state of São Paulo is the fifth main equine breeding state in the country, with approximately 348 thousand animals. Among the opportunistic agents of great morbidity found in the equine respiratory system are Streptococcus equi subsp. equi, etiologic agent of equine adenitis. Animals can be affected at any age, time and temperature of the year, have nasal discharge and lymphadenomegaly, especially in the submandibular region, and typical clinical signs of a generalized inflammatory process. This study aimed to assess the prevalence of Streptococcus spp. and relate equine adenitis, associate the incidence of Streptococcus spp. at the two moments in which the samples were collected, summer / autumn and winter, so that it was possible to compare the seasons and analyze the sensitivity to antimicrobials of the agents isolated in the animals of the micro region of Araçatuba, state of São Paulo, Brazil. A total of 363 swab samples were collected from equine nasal secretions, sown for isolation in the Blood Agar and MacConkey media, subjected to catalase testing, Gram staining, sugar fermentation, bile-esculin, BHI broth with NaCl and test antibacterial sensitivity. 22 samples of Streptococcus from the subspecies zooepidemicus and equisimilis were isolated, with a prevalence of S. equisimilis. The bacteria were resistant to the following antibiotics: streptomycin, enrofloxacin and cotrimoxazole and those with the highest sensitivity were: ceftiofur, azithromycin and cotrimoxazole. The results showed that no positive animals were found for equine adenitis, in the winter we had positive results for S. zooepidemicus and S. equisimilis, and that they differ in terms of susceptibility to antibiotics.

Cloning, expression and characterization of SeM protein of Streptococcus equi subsp. equi and evaluation of its use as antigen in an indirect ELISA / Clonagem, expressão e caracterização de proteína SeM de Streptococcus equi subsp. equi e avaliação de sua utilização como antígeno em um ELISA indireto

Strangles is an economically important horse disease caused by Streptococcus equi subsp. equi. The diagnosis can be confirmed either directly by bacterial isolation and PCR or by ELISA, which is an indirect method based on the detection of serum antibodies. The aim of this study was to clone, express and characterize the SeM protein of Streptococcus equi subsp. equi, evaluate its use as antigen in indirect ELISA and determine its performance to distinguish sera of negative, vaccinated and positive animals. This was initially performed by cloning the gene encoding the SeM protein and its expression in Escherichia coli. Subsequently, the protein produced was characterized and used as antigen in ELISA. Serum samples for evaluation were taken from 40 negative foals, 46 horses vaccinated with a commercial vaccine against strangles and 46 horses diagnosed with the disease. The test showed high specificity and sensitivity, allowing discrimination between negative and positive, positive and vaccinated animals, and vaccinated animals and negative sera. Thus, it was concluded that the protein produced rSeM, which can be used as antigen for disease diagnosis, and the described ELISA might be helpful to evaluate the immune status of the herd.(AU)

A adenite equina é uma enfermidade economicamente importante de equinos, causada por Streptococcus equi subsp. equi. Seu diagnóstico pode ser confirmado de forma direta, por meio de isolamento bacteriano e de PCR, ou de forma indireta, por meio de ELISA, método baseado na detecção de anticorpos séricos. O objetivo deste estudo foi clonar, expressar e caracterizar a proteína SeM de Streptococcus equi subsp. equi, avaliar sua utilização como antígeno em um ELISA indireto e determinar a capacidade do teste de distinguir soros de animais negativos, vacinados e positivos. Para tal, foi inicialmente realizada a clonagem do gene que codifica para a proteína SeM e sua expressão em Escherichia coli. Posteriormente, a proteína produzida foi caracterizada e utilizada como antígeno em um teste de ELISA indireto. Para avaliação do teste, foram utilizadas amostras de soro de 40 potros negativos, de 46 equinos vacinados com uma vacina comercial contra adenite equina e de 46 equinos com diagnóstico da doença. O teste demonstrou alta sensibilidade e especificidade, permitindo discriminar entre soros negativos e positivos, positivos e de animais vacinados, e negativos e de animais vacinados. Assim, conclui-se que a proteína rSeM produzida pode ser usada como antígeno para o diagnóstico da enfermidade e que o ELISA descrito pode ser útil para avaliar o estado imunológico do rebanho.(AU)

ESTUDO EPIDEMIOLÓGICO-MOLECULAR DE Streptococcus spp. ISOLADOS DE EQUINOS ATLETAS NO ESTADO DE PERNAMBUCO, BRASIL

Streptococcus equi subespécie equi (S. equi) é responsável pela adenite equina, doença infecto-contagiosa que ocorre com elevadas prevalências em todo o mundo. Desde a primeira descrição desta enfermidade não tem sido possível realizar o controle da mesma, o que pode ser explicado pela variabilidade nos genes de virulência, sendo a prevalência de garrotilho variável entre 1,3% até 45,2% dependendo a região e o país. Os principais fatores de risco identificados são a idade, estação do ano, diagnóstico prévio da doença, participação dos equinos em eventos esportivos e o fato de ter histórico de doenças respiratórias na fazenda. Objetivou-se com esta pesquisa realizar um estudo epidemiológico de isolados de Streptococcus spp. procedentes de equinos no estado de Pernambuco, Brasil. Foram analisadas 358 swabs nasais coletados de 179 equinos com ou sem sinais clínicos de doença respiratória. Foram obtidos 84 isolados de Streptococcus spp., dos quais 20,24% (17/84) foram identificados pela técnica MALDI-TOF MS, sendo 41,18% S. equi subespécie zooepidemicus (7/17), 35,29% S. pluranimalium (6/17), 11,77% S. equi subespécie ruminatorum (2/17), 5,88% S. dysgalactiae (1/17) e 5,88% S. thoraltensis (1/17). Este é o primeiro relato do isolamento de S. equi subespécie ruminatorum e S. tholarensis de swabs nasais de equinos; não foi identificado S. equi subespécie equi. Neste estudo não foi possível realizar a identificação de todos os isolados de Streptococcus spp. utilizando a técnica de MALDI-TOF MS, por tanto, considera-se importante realizar novas pesquisas para adicionar espectros de massa na bases de dados e assim facilitar a identificação das diferentes espécies e subespécies de Streptococcus spp. que podem infectar equinos e humanos.

Streptococcus equi subspecies equi causes strangles, an infectious disease that occurs with a high prevalence worldwide. Since the first description of this disease, it has not been possible to control it, which can be explained by the variability of the virulence genes. The prevalence of Strangles ranged from 1.3% to 45.2% and the major risk factors associated with the disease are: age; season; previous diagnosis of the disease; participation of animals in sporting events; and history of respiratory diseases on the farm. The aim of this study was to conduct an epidemiological study of Streptococcus spp. isolated from equine in the state of Pernambuco, Brazil. 358 nasal swabs collected from 179 horses with or without clinical signs of respiratory disease were analyzed. Of the 358 samples, 84 were positive for Streptococcus spp., of which 20.24% (17/84) were classified by the MALDI-TOF MS technique, being 41.18% S. equi subspecies zooepidemicus (7/17), 35,29% S. pluranimalium (6/17), 11,77% S. equi subspecies ruminatorum (2/17), 5,88% S. dysgalactiae (1/17) e 5,88% S. thoraltensis (1/17). This is the first report of the isolation of S. equi subspecies ruminatorum and S. tholarensis from equine nasal swabs; S. equi subespecie equi was not isolated. MALDI-TOF MS is a very sensitive diagnostic technique, but it was not possible to identify all Streptococcus spp. isolated isolated from horses, suggesting the needed of future research to speed up the identification of these possible pathogens for equines and humans.

Caracterização fenotípica e genotípica de Streptococcus equi subespécie equi isolados de equinos doentes e portadores no Rio Grande do Sul

Streptococcus equi subespécie equi (S. equi) é o agente causador da adenite equina, uma das doenças infecciosas mais frequentemente diagnosticadas em todo o mundo. Após a doença aguda de curta duração, caracterizada pelo enfartamento dos linfonodos da cabeça e pescoço, parte dos equinos permanece portador da bactéria por longos períodos, sendo este o ponto chave para a manutenção do agente e ocorrência da doença de forma contínua. Em vista disso, se torna importante entender o que desencadeia o estado de portador, o motivo de nem todos os animais conseguirem eliminar a bactéria após a melhora clínica. Esta dissertação descreve a caracterização fenotípica e genotípica de cepas de S. equi isoladas de equinos doentes (n=42) e portadores (n=18) no estado do Rio Grande do Sul. Por meio da avaliação da coloração e aspecto das colônias, provas de fermentação de açúcares (ribose, lactose, trealose e sorbitol), visualização da cápsula, teste de suscetibilidade aos antimicrobianos, avaliação da capacidade de formação de biofilme e detecção de genes que codificam fatores de virulência (hasA, hasB, hasC, eqbE, eqbG, seeH e seeI) foi possível evidenciar diferenças consideráveis entre os dois grupos de isolados. S. equi isolados de equinos portadores apresentaram colônias opacas e branco-acinzentadas (100%), cápsula em pequena quantidade (38,9%) ou ausente (61,1%), com capacidade de fermentar pelo menos dois dos açúcares testados (100%) e resistência em média a 3,6 (1-7) classes de antimicrobianos. Por outro lado, cepas isoladas de equinos doentes apresentaram predominantemente colônias mucóides e cor de mel (95,2%), com muita cápsula (92,8%), incapazes de fermentar qualquer um dos açúcares (92,8%) e resistentes em média a 2,1 (0-7) classes de antimicrobianos. Foi obsevada uma maior proporção de cepas multirresistentes no grupo de isolados de animais portadores (13/18 = 72,2%) em comparação ao grupo de isolados de animais doentes (5/42 = 11,9%). Capacidade de formar biofilme foi detectada em 94,4% dos isolados de animais doentes e 78,6% de portadores, não havendo diferença entre os grupos. Todos os isolados de equinos portadores apresentaram deleção do gene eqbE e 66,7% dos mesmos também em hasA e hasB. A perda desses loci gênicos por isolados de equinos portadores já havia sido reportada em outro estudo. Desta forma, nossos resultados complementam os da literatura internacional ao associar as características genotípicas dos isolados de animais portadores com suas características fenotípicas, e evidenciar diferenças com aquelas de isolados de equinos com manifestação clínica. Estudos mais aprofundados são necessários para elucidar quais outros eventos estão envolvidos na persistência de S. equi no hospedeiro após a cura clínica.

Streptococcus equi subspecies equi (S. equi) is the causative agent of srangles, one of the most frequently diagnosed infectious disease worldwide. After the short duration acute disease, characterized by abscess formation in the head and neck lymph nodes, some horses remain as S. equi carriers for long periods. Equine carriers are the key point for the bacteria maintenance and occurrence of the disease continuously. Therefore, it becomes important to understand what triggers the carrier state, why not all animals can eliminate the bacteria after clinical improvement. This dissertation describes the phenotypic and genotypic characterization of S. equi strains isolated from diseased horses (n = 42) and carriers (n = 18) in the Rio Grande do Sul state. Evaluating colonies color and appearance, sugars fermentation tests (ribose, lac-tose, trehalose and sorbitol), capsule visualization, antimicrobial susceptibility test, biofilm formation capacity and detection of virulence factors encoding genes (hasA, hasB, hasC, eqbE, eqbG, seeH and seeI) it was possible to show considerable differences between the two groups of isolates. S. equi isolated from equine carriers presented dry, opaque and white-gray colonies (100%), capsule in small quantity (38.9%) or absent (61.1%), capable of fermenting at least two sugars tested (100%) and resistance on average to 3.6 (1-7) antimicrobials classes. On the other hand, strains isolated from diseased horses had predominantly mucoid and honey color colonies (95.2%), with a large capsule (92.8%), unable to ferment any of the sugars (92.8%) and resistant in mean to 2.1 (0-7) antimicrobials classes. A higher proportion of multiresistant strains was observed in the isolates from carrier animals group (13/18 = 72.2%) compared to the group of isolates from diseased animals (5/42 = 11.9%). Biofilm formation capacity was detected in 94.4% of the isolates from diseased animals and 78.6% from carriers, with no difference between the groups. All the equine carriers isolates showed deletion of the eqbE gene and 66.7% of them also in hasA and hasB genes. The loss of these gene loci by isolates from carrier horses had already been reported in another study. Thus, our results complement those of the international literature by associating the genotypic characteristics of the isolates of animal carriers with their phenotypic characteristics, and evidencing differ-ences with those isolated from horses with clinical manifestation. Further studies are needed to elucidate which other events are associated to the persistence of S.equi in the host after clinical cure.

Perfil fenotípico e susceptibilidade antimicrobiana de Streptococcus equi isolados de equinos da região Sul do Brasil / Phenotypic profile and antimicrobial susceptibility of Streptococcus equi isolated from horses in southern Brazil

As características fenotípicas [morfológicas, bioquímicas, susceptibilidade aos antimicrobianos, índice de resistência múltipla aos antimicrobianos (IRMA), concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida mínima (CBM) da benzilpenicilina] de 38 isolados de Streptococcus equi oriundos de amostras clínicas de animais com adenite equina foram alvo deste estudo. A fenotipia demonstrou três padrões de colônias, três biotipos de fermentação de carboidratos e variação de 0 a 0,4 no IRMA. Todos os isolados de S. equi demonstraram sensibilidade à penicilina, tanto pelo método de disco difusão quanto pelo método de microdiluição. A CIM e CBM média de benzilpenicilina foi de 0,0095μg/mL e 0,0267μg/mL para S. equi subesp. equi e de 0,0128μg/mL e 0,0380μg/mL para S. equi subesp. zooepidemicus. Os valores de CIM e CBM diferiram entre as subespécies (p<0,05). O diâmetro do halo de inibição de penicilina demonstrou relação com a CIM (ì=0,03638 - 0,00072x) para S. equi subesp. equi. Também foi demonstrada relação entre o diâmetro do halo de inibição de penicilina com a CBM para S. equi subesp. equi (ì=0,10931- 0,00223x). Entretanto para as amostras de S. equi subesp. zooepidemicus esta relação somente foi verificada para a CBM (ì=0,1322 - 0,00271x). A CIM de benzilpenicilina frente às amostras isoladas da região Central, Planalto e Sul do estado do Rio Grande do Sul foram estatisticamente semelhantes, mas diferiram do isolado do estado do Paraná, sugerindo o caráter atípico desta cepa. Todos os isolados de S. equi são sensíveis à penicilina e sulfazotrim, confirmando a eleição destes antimicrobianos para o tratamento das infecções por este agente na clínica veterinária. Os resultados obtidos não dispensam a utilização prudente dos antimicrobianos.(AU)

Phenotypic characteristics [morphology, biochemical fermentation, antimicrobial susceptibility, index of multiple resistances to antimicrobials (IMRA), minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) of benzilpenicillin] of 38 Streptococcus equi isolates from clinical samples of horses with strangles were the aim of this study. The phenotypic analyses demonstrated three colony patterns, three carbohydrate fermentation biotypes and IMRA variation from 0 to 0.4. All the isolates of S. equi demonstrated sensitivity to penicillin, both by the disc diffusion method and microdilution method. The average MIC and MBC for benzilpenincillin were of 0.0095μg/mL and 0.0267μg/mL for S. equi subsp. equi and of 0.0128μg/mL and 0.0380μg/mL for S. equi subsp. zooepidemicus. The values of MIC and MBC differed between the subspecies (p<0.05). The diameter of penicillin inhibition halo demonstrated a relation with the MIC (ì=0.03638 - 0.00072x) for Streptococcus equi subsp. equi. A relation between the diameter of the inhibition halo of penincillin was also observed with the MBC for S. equi subsp. equi (ì=0.10931 - 0.00223x). However for the samples of S. equi subsp. zooepidemicus this relation was only verified with the MBC (ì=0.1322 - 0.00271x). The MIC of benzilpenicillin of the samples isolated from the Central, Planalto and South regions of Rio Grande do Sul were statistically similar, although different from the Paraná state sample, suggesting the atypical character of this strain. All the S. equi isolates are sensitive to penicillin and sulfazotrim, confirming these as antibiotics of choice for the treatment of infections caused by this agent in the clinical veterinary practice. The results obtained do not discard the prudent use of antimicrobials.(AU)

EQUINOS PORTADORES de Streptococcus equi subespécie equi: PREVALÊNCIA, FATORES DE RISCO E CARACTERIZAÇÃO DE ALELOS seM.

A adenite equina é uma doença infecto-contagiosa que acomete o trato respiratório superior, sendo uma das principais doenças respiratórias de equinos. O agente etiológico dessa enfermidade é o Streptococcus equi subespécie equi (S. equi), responsável por aproximadamente 30% das notificações em todo o mundo. Os principais sinais clínicos da adenite são febre, secreção nasal e enfartamento de linfonodos, que ocorre pela dificuldade de fagocitose do S. equi por células de defesa devido a presença da cápsula de ácido hialurônico e proteína M. O entendimento sobre a epidemiologia, a análise de fatores de risco para adenite equina e o controle dessa enfermidade ainda são limitados. Estudos moleculares demonstram diferenças na extremidade 5 da sequência do gene (seM) codificador da proteína M de S. equi. Esta região do gene já foi utilizada na diferenciação de isolados por meio da caracterização de diferentes alelos. Por tudo isso, essa tese objetivou obter resultados de prevalência, e também análise de fatores de risco para adenite equina através de um desenho experimental para coleta de suabes nasais. Foram obtidos 1.010 suabes nasais de equinos sadios em 341 fazendas, de onde foram identificados 24 equinos positivos para S. equi em isolamento, que posteriormente foram confirmados por PCR e sequenciamento de DNA. A prevalência estimada por equino foi de 2.37%, e 20 fazendas foram consideradas positivas (5.86%). Na análise de fatores de risco, foi comprovado e quantificado estatisticamente que: número de eventos de aglomeração que os equinos participam (RR:1.06), o ato de compartilhar recipiente de alimento (RR:3.74) e ter tido diagnóstico positivo para adenite (RR:3.20) são fatores de risco relevantes para adenite equina. Estes resultados oferecem contribuições epidemiológicas importantes para a indústria de equinos e pode apoiar o controle da doença. Em paralelo, a região 5 terminal do gene seM das 24 amostras positivas foi amplificada por PCR e sequenciada para caracterização de alelos, sendo identificado o mesmo alelo (seM-61) em todas as amostras. Esses resultados evidenciam a hipótese de seleção natural de alelos aparentemente mais adaptados a sobreviver, persistir e se perpetuar na população estudada.

Strangles is considered the main respiratory disease in horses. The etiologic agent is the bacterium Streptococcus equi subsp. equi (S. equi), responsible for approximately 30% of horse diseases worldwide notifications. The clinical signs of strangles are fever, nasal secretion and lymph node enlargement. The last one occurs due the incomplete phagocytosis of S. equi by defense cells because bacterial hyaluronic acid capsule and M protein (SeM). The epidemiology, the risk factors and the strangles control are poorly understood. The 5' end of the seM gene sequence has been used for isolate differentiation by characterization of the alleles. Therefore, this thesis aimed to study the prevalence of Streptococcus equi subsp. equi (S. equi) in healthy horses, the alleles frequency and the risk factors involved on equine adenitis. One thousand and ten nasal swabs were obtained from healthy horses from 341 farms. Twenty four horses were positive for S. equi, confirmed by PCR and DNA sequencing. The prevalence of S. equi per equine was 2.37%, and 20 farms were positive (5.86%). Risk factor analysis showed by confirming and quantifying statistically that: the number of agglomeration events that horses participate (RR: 1.6), the situation with food container shared (RR: 3.74) and the positive diagnosis for adenitis (RR: 3.20) are significant risk factors for Strangles. These results provide important epidemiological contribution to the equine industry and can give support for the disease control. In addition, the 5 'end of the gene seM was amplified by PCR and sequenced and allele characterized. It was found the same allele (SEM-61) in all the samples. These results support the hypothesis of natural selection of alleles apparently more suited to survive, persist and perpetuate in the population studied.

Púrpura Hemorrágica em equino: relato de caso / Hemorrhagic purple in equine: case report / Purpura hemorrágica en equino: relato de caso

Foi atendido no Hospital Veterinário da UENF, um equino da raça Quarto de Milha de 4 anos que apresentava relutância ao caminhar, edema nos membros,ventre, prepúcio, região peitoral e face além, de hemorragias puntiformes na mucosadas narinas e no focinho. Os linfonodos submandibulares estavam infartados. O proprietário relatou sinais clínicos de adenite equina há 10 dias. O histórico associado aos achados clínicos levou a suspeita de púrpura hemorrágica, sendo ela posteriormente confirmada através de exames complementares como hemograma e biópsia de pele. O equino foi tratado com doses medicamentosas inferiores as citadas na literatura e obteve uma recuperação satisfatória.

Reluctance to walk, swelling in the limbs, abdomen, prepuce, pectoralregion and face, pinpoint hemorrhages in the mucosa of the nose and muzzle andinfarted submandibular Iymph nodes were observed in a four years old quarter horseatlended in the Veterinary Hospital of the UENF. The owner reported clinical signs ofequine adenites 10 days ago which was trated with penicillin. The historic associatedto clinical findings led to suspicion of hemorrhagic purpura. It was confirmed by additional tests such as bloodcount and skin biopsy. The horse was treated with medication doses lower than those reported in the literature and had a satisfactory recovery.

Fue atendido en el hospital veterinario de Ia UENF, un equino de Ia raza cuarto de mil Ia de 4 anos quepresentaba renuencia a caminar, edema de los miembros, vientre, prepucio, región pectoral, cara y hemorragiaspuntiformes en Ia mucosa de Ias narinas y Ia boca. Los linfonodos submandibulares estaban infartados. En Iahistoria fue relatada adenitis equina desde hace 10 días tratada con penicilina. Esta historia unida aios hallazgos clínicos Ilevaron a sospechar purpura hemorrágica, siendo posteriormente confirmada por exámenes complementarios como hemograma y biopsia de pieI. EI equino fue tratado con dosis medicinales inferiores a Ias citadas en Ia literatura, y fue eficiente para Ia recuperación.

Púrpura Hemorrágica em equino: relato de caso / Hemorrhagic purple in equine: case report / Purpura hemorrágica en equino: relato de caso

Foi atendido no Hospital Veterinário da UENF, um equino da raça Quarto de Milha de 4 anos que apresentava relutância ao caminhar, edema nos membros,ventre, prepúcio, região peitoral e face além, de hemorragias puntiformes na mucosadas narinas e no focinho. Os linfonodos submandibulares estavam infartados. O proprietário relatou sinais clínicos de adenite equina há 10 dias. O histórico associado aos achados clínicos levou a suspeita de púrpura hemorrágica, sendo ela posteriormente confirmada através de exames complementares como hemograma e biópsia de pele. O equino foi tratado com doses medicamentosas inferiores as citadas na literatura e obteve uma recuperação satisfatória.(AU)

Reluctance to walk, swelling in the limbs, abdomen, prepuce, pectoralregion and face, pinpoint hemorrhages in the mucosa of the nose and muzzle andinfarted submandibular Iymph nodes were observed in a four years old quarter horseatlended in the Veterinary Hospital of the UENF. The owner reported clinical signs ofequine adenites 10 days ago which was trated with penicillin. The historic associatedto clinical findings led to suspicion of hemorrhagic purpura. It was confirmed by additional tests such as bloodcount and skin biopsy. The horse was treated with medication doses lower than those reported in the literature and had a satisfactory recovery.(AU)

Fue atendido en el hospital veterinario de Ia UENF, un equino de Ia raza cuarto de mil Ia de 4 anos quepresentaba renuencia a caminar, edema de los miembros, vientre, prepucio, región pectoral, cara y hemorragiaspuntiformes en Ia mucosa de Ias narinas y Ia boca. Los linfonodos submandibulares estaban infartados. En Iahistoria fue relatada adenitis equina desde hace 10 días tratada con penicilina. Esta historia unida aios hallazgos clínicos Ilevaron a sospechar purpura hemorrágica, siendo posteriormente confirmada por exámenes complementarios como hemograma y biopsia de pieI. EI equino fue tratado con dosis medicinales inferiores a Ias citadas en Ia literatura, y fue eficiente para Ia recuperación.(AU)

Immunogenicity and cross reactivity indices of Streptococcus equi subsp. equi strains isolated from cases of Strangles and commercial vaccines

Horse Strangles appears frequently in animals vaccinated with commercial bacterins in Rio Grande do Sul, Brazil. Aiming to know the antigenic relationships of strains recovered from sick animals among them and with two vaccines profusely used in the state, bilateral cross reactivity indices (CRI) were estimated. In addition, the immunogenicity of vaccines prepared with field isolates and commercial vaccines was tested in mice. Antibody titers were measured by ELISA and expressed as seroconversions. Thirteen strains of Streptococcus equi subsp. equi, nine classified biochemically as typical and other four as atypical strains, were recovered from 35 sick horses belonging to 10 herds of Rio Grande do Sul, Brazil. The strains recovered from sick horses showed very close CRI, suggesting antigenic homogeneity among them, but not with the vaccinal strains. A vaccine produced with an atypical strain induced the highest seroconversion, 9.4, while two produced with typical strains were poorly-immunogenic. The commercial vaccines were less immunogenic than five and four vaccines produced with field strains, inducing seroconversions of 2.6 and 3.8, respectively.

A Adenite Eqüina é freqüente em animais vacinados com bacterinas comerciais no Rio Grande do Sul. Com o objetivo de determinar as relações antigênicas entre cepas isoladas de casos clínicos e duas vacinas amplamente utilizadas no Estado, foram determinados os índices de reatividade cruzada bilateral (IRC) entre elas. Também foi determinada a imunogenicidade em camundongos de vacinas preparadas com cepas de campo e de vacinas comerciais. Os títulos de anticorpos foram determinados por ELISA e expressos como soroconversão. Foram isoladas 13 cepas de Streptococcus equi subsp. equi de 35 casos clínicos de Adenite Eqüina em 10 diferentes rebanhos do Rio Grande do Sul, Brasil, das quais nove foram classificadas bioquimicamente como típicas e outras quatro como atípicas. As cepas de campo apresentaram elevada reatividade cruzada, sugerindo homogeneidade antigênica entre elas, mas não com as cepas vacinais. Uma vacina produzida com cepa atípica induziu soroconversão de 9.4, enquanto duas vacinas produzidas com cepas típicas foram pouco imunogênicas. As vacinas comerciais induziram soroconversões de 2.6 e 3.8, menores que quatro e cinco vacinas produzidas com cepas de campo, respectivamente.

Immunogenicity and cross reactivity indices of Streptococcus equi subsp. equi strains isolated from cases of Strangles and commercial vaccines

Horse Strangles appears frequently in animals vaccinated with commercial bacterins in Rio Grande do Sul, Brazil. Aiming to know the antigenic relationships of strains recovered from sick animals among them and with two vaccines profusely used in the state, bilateral cross reactivity indices (CRI) were estimated. In addition, the immunogenicity of vaccines prepared with field isolates and commercial vaccines was tested in mice. Antibody titers were measured by ELISA and expressed as seroconversions. Thirteen strains of Streptococcus equi subsp. equi, nine classified biochemically as typical and other four as atypical strains, were recovered from 35 sick horses belonging to 10 herds of Rio Grande do Sul, Brazil. The strains recovered from sick horses showed very close CRI, suggesting antigenic homogeneity among them, but not with the vaccinal strains. A vaccine produced with an atypical strain induced the highest seroconversion, 9.4, while two produced with typical strains were poorly-immunogenic. The commercial vaccines were less immunogenic than five and four vaccines produced with field strains, inducing seroconversions of 2.6 and 3.8, respectively.

A Adenite Eqüina é freqüente em animais vacinados com bacterinas comerciais no Rio Grande do Sul. Com o objetivo de determinar as relações antigênicas entre cepas isoladas de casos clínicos e duas vacinas amplamente utilizadas no Estado, foram determinados os índices de reatividade cruzada bilateral (IRC) entre elas. Também foi determinada a imunogenicidade em camundongos de vacinas preparadas com cepas de campo e de vacinas comerciais. Os títulos de anticorpos foram determinados por ELISA e expressos como soroconversão. Foram isoladas 13 cepas de Streptococcus equi subsp. equi de 35 casos clínicos de Adenite Eqüina em 10 diferentes rebanhos do Rio Grande do Sul, Brasil, das quais nove foram classificadas bioquimicamente como típicas e outras quatro como atípicas. As cepas de campo apresentaram elevada reatividade cruzada, sugerindo homogeneidade antigênica entre elas, mas não com as cepas vacinais. Uma vacina produzida com cepa atípica induziu soroconversão de 9.4, enquanto duas vacinas produzidas com cepas típicas foram pouco imunogênicas. As vacinas comerciais induziram soroconversões de 2.6 e 3.8, menores que quatro e cinco vacinas produzidas com cepas de campo, respectivamente.

Immunogenicity and cross reactivity indices of Streptococcus equi subsp. equi strains isolated from cases of Strangles and commercial vaccines

Horse Strangles appears frequently in animals vaccinated with commercial bacterins in Rio Grande do Sul, Brazil. Aiming to know the antigenic relationships of strains recovered from sick animals among them and with two vaccines profusely used in the state, bilateral cross reactivity indices (CRI) were estimated. In addition, the immunogenicity of vaccines prepared with field isolates and commercial vaccines was tested in mice. Antibody titers were measured by ELISA and expressed as seroconversions. Thirteen strains of Streptococcus equi subsp. equi, nine classified biochemically as typical and other four as atypical strains, were recovered from 35 sick horses belonging to 10 herds of Rio Grande do Sul, Brazil. The strains recovered from sick horses showed very close CRI, suggesting antigenic homogeneity among them, but not with the vaccinal strains. A vaccine produced with an atypical strain induced the highest seroconversion, 9.4, while two produced with typical strains were poorly-immunogenic. The commercial vaccines were less immunogenic than five and four vaccines produced with field strains, inducing seroconversions of 2.6 and 3.8, respectively.

A Adenite Eqüina é freqüente em animais vacinados com bacterinas comerciais no Rio Grande do Sul. Com o objetivo de determinar as relações antigênicas entre cepas isoladas de casos clínicos e duas vacinas amplamente utilizadas no Estado, foram determinados os índices de reatividade cruzada bilateral (IRC) entre elas. Também foi determinada a imunogenicidade em camundongos de vacinas preparadas com cepas de campo e de vacinas comerciais. Os títulos de anticorpos foram determinados por ELISA e expressos como soroconversão. Foram isoladas 13 cepas de Streptococcus equi subsp. equi de 35 casos clínicos de Adenite Eqüina em 10 diferentes rebanhos do Rio Grande do Sul, Brasil, das quais nove foram classificadas bioquimicamente como típicas e outras quatro como atípicas. As cepas de campo apresentaram elevada reatividade cruzada, sugerindo homogeneidade antigênica entre elas, mas não com as cepas vacinais. Uma vacina produzida com cepa atípica induziu soroconversão de 9.4, enquanto duas vacinas produzidas com cepas típicas foram pouco imunogênicas. As vacinas comerciais induziram soroconversões de 2.6 e 3.8, menores que quatro e cinco vacinas produzidas com cepas de campo, respectivamente.

Adenite equina: sua etiologia, diagnóstico e controle

Strangles is a contagious disease of the respiratory tract of horses produced by Streptococcus equi subsp. equi, a Lancefield's group C haemolytic bacterium. It produces a mucopurulent secretion of the anterior airways, as well as lymphadenitis and abscesses. The bacteria synthesizes several pathogenicity factors such a hyaluronic acid capsule, hyaluronidase, streptolisin O, streptokinase, IgG Fc receptors, peptidoglican and protein M. Among these factors, protein M deserves special importance due to its antifagocitic and adherence properties. The disease has high morbidity and low lethality, and produces economic losses due to low performance and treatment. Clinical diagnosis and treatment are done easily, but prophylaxis is hampered by the low potency of vaccines, that protect around 50 % of vaccinated animals. Strangles may occur during all the year, but cold and humid weather favors the survival of streptococci, making animals that live in regions with those characteristics more prone to infection. New vaccines using purified or subunit antigens have been developed aiming to increase their potency and to avoid undesirable side effects. The demonstration that bacteria strains show differences in their antigenicity, called attention on the selection of appropriate strains to use as antigens.

A adenite equina, também conhecida como garrotilho, é uma enfermidade bacteriana contagiosa, causada por Streptococcus equi, subsp. equi, bactéria hemolítica do grupo C de Lancefield, que afeta o trato respiratório anterior de equinos de todas as idades, com maior prevalência entre um e cinco anos de idade. Caracteriza-se por produzir secreção mucopurulenta das vias aéreas anteriores e linfadenite dos gânglios retrofaríngeos e submandibulares com formação de abscessos. Fatores de virulência de S. equi, subsp. equi, incluem cápsula de ácido hialurônico, hialuronidase, estreptolisina O, estreptoquinase, receptores para Fc de IgG, peptidoglicano e proteína M. Dentre esses fatores, a proteína M tem especial importância por ser de membrana com propriedades antifagocitárias e de aderência. A doença tem baixa letalidade e alta morbidade e seus prejuízos econômicos devem-se à perda de performance e custo do tratamento. O diagnóstico clínico e o tratamento não apresentam dificuldades, mas a profilaxia é prejudicada pela baixa eficiência das vacinas disponíveis, com índices de proteção de 50%. O garrotilho pode ocorrer em todas as épocas do ano, mas o frio e a umidade facilitam a sobrevivência do agente e sua disseminação, portanto animais que vivem nos estados mais frios e úmidos do país são mais vulneráveis à infecção. Novas vacinas utilizando antígenos purificados ou de subunidades estão sendo desenvolvidas com a finalidade de incrementar sua potência e evitar efeitos indesejáveis. A comprovação de diferenças de antigenicidade, entre estirpes, alerta sobre a importância da seleção apropriada das cepas vacinais.