Prenatal origins of productivity and quality of beef

The productive traits of beef cattle are orchestrated by their genetics, postnatal environmental conditions, and also by the intrauterine background. Both under- or overnutrition, as specific dietary components, are able to promote persistent effects on the offspring. This occurs because dietary factors act not only affecting the availability of substrates for fetal anabolism and oxidative metabolism, but also as signals that regulate several events toward fetal development. Therefore, this study aimed to summarize the gestational nutrition effects on the offspring performance and meat quality in a long term. Overall, studies have shown that many of these alterations are under the control of epigenetic mechanisms, as DNA methylation, histones modification, and non-coding RNA. The current knowledge has indicated that the fetal programming responses are dependent on the window of fetal development in which the dietary treatment is applied, the intensity of maternal nutritional stimuli, and the treatment application length. Collectively, studies demonstrated that muscle cell hyperplasia is impaired when maternal requirements were not achieved in the second third of gestation, which limits the formation of a greater number of muscle fibers and the offspring growth potential in a long term. Changes in muscle fibers metabolism and in collagen content were also reported as consequence of a dietary perturbation during pregnancy. In contrast, a maternal overnutrition during the late pregnancy has been associated with beneficial responses on meat quality. In summary, ensuring an adequate maternal environment during the fetal development is crucial to enhance the productive responses in beef cattle operations.(AU)

Mfsd2a Promotes the Proliferation, Migration, Differentiation and Adipogenesis of Chicken Intramuscular Preadipocytes

Intramuscular fat (IMF) content is a crucial parameter for estimating meat quality. Growing evidence indicates that gene regulation plays an important role in IMF deposition. This study aimed to determine the function of Mfsd2a in chicken intramuscular preadipocytes. In the present study, high Mfsd2a mRNA levels were observed in the liver and adipose tissues of broilers. Subsequently, we synthesized small interfering RNAs to silence the expression of Mfsd2a in chicken intramuscular preadipocytes. The following results suggested that CDK2, PCNA, CCND1, CCND2 and MKI67 were inhibited, with CCK-8 and EdU assays revealing that cell proliferation was inhibited. Scratch test showed that cell migration ratios were declined. We also found that Mfsd2a silencing decreased the mRNA levels of PPARγ, RXRG and their target genes. The similar results were found in some key genes that contribute to lipid synthesis, including C/EBPα, C/EBPß, FABP4, FASN, ACACA and ACSL1. Finally, Oil red O staining showed that IMF accumulation was blocked after Mfsd2a silencing. In conclusion, our results implied that Mfsd2a promotes the proliferation and migration of chicken intramuscular preadipocytes, as well as the differentiation and adipogenesis through PPARγ signaling pathway, which may provide a potential target to improve chicken meat quality.(AU)

Potential for in vitro mesoderm differentiation of Wharton's jelly cells from ovine umbilical cord isolated in different culture media / Potencial de diferenciação in vitro de células provenientes da geleia de Wharton de cordões umbilicais ovinos isolados em diferentes meios de cultivo

The mammalian Wharton's jelly of umbilical cord (WJUC) is a promising source of multipotent cells, providing advantages due to ethical implications, ease of collection and the absence of teratomas in pre-clinical trials. Ovine multipotent cells have already been isolated from various tissues, however there are no reports using umbilical cords in this species. This study aimed to investigate the best medium to transport the umbilical cord, to isolate and maintain ovine WJUC cells and to compare in vitro growth and mesodermal differentiation potential. Eight ovine umbilical cords were obtained during parturition, sectioned and transported in six different media: MEM, low glucose DMEM, M199, RPMI 1640, PBS and saline. For each transportation medium, four culture media were used and the tissue was explanted in 24-well plates and cultured in MEM, low glucose DMEM, M199 and RPMI 1640, all with 10% FBS. Every experiment was conducted with low-passage (P2), investigating MTT viability during four days and adipogenic, chondrogenic and osteogenesis differentiation was induced in vitro. The most effective transport medium (p<0.1) was low glucose DMEM. There was no bacterial or fungal contamination from collection. Cells from Wharton's jelly of ovine umbilical cords collected at natural birth possess fibroblastic morphology and the capacity for in vitro differentiation into adipogenic, chondrogenic and osteogenic cell lines. MTT tests and in vitro differentiation experiments revealed that cell culture medium modulates the behavior of cells and is an important factor for proliferation and maintenance of multipotency. Low glucose DMEM was the most suitable medium for the isolation of cells from Wharton's jelly of ovine umbilical cord.(AU)

A geleia de Wharton do cordão umbilical (GWCU) de mamíferos é uma fonte promissora de células multipotentes, sendo vantajosa por aspectos éticos, facilidade de coleta e não causar teratomas em ensaios pré-clínicos. Em ovinos, células multipotentes já foram isoladas de vários tecidos, no entanto, não existem relatos do isolamento a partir do cordão umbilical nesta espécie. O objetivo do presente estudo foi investigar o melhor meio para o transporte do cordão umbilical, isolar e manter as células da GWCU ovino em diferentes meios e comparar a proliferação e o potencial de diferenciação mesodermal in vitro. Oito cordões umbilicais foram obtidos, por ocasião do parto natural, seccionados e transportados em seis diferentes meios que consistiram em MEM, DMEM baixa glicose, M199, RPMI 1640, PBS e soro fisiológico. Para cada meio de transporte foram utilizados quatro meios de cultivo, sendo o tecido explantado em placas de 24 poços e cultivados em MEM, DMEM baixa glicose, M199 e RPMI 1640, todos com 10% SFB. Todo o experimento foi realizado em baixa passagem (P2) investigando viabilidade pelo MTT por quatro dias além da indução à diferenciação adipogênica, condrogênica e osteogênica in vitro. O meio de transporte mais efetivo (P<0,10) foi o DMEM baixa glicose. Não houve contaminações bacterianas ou fúngicas decorrentes da coleta. Células oriundas da geleia de Wharton do cordão umbilical ovino colhido por ocasião do parto natural possuem morfologia fibroblastóide e capacidade de diferenciação in vitro nas linhagens adipogênica, condrogênica e osteogênica. Os ensaios de MTT e diferenciação in vitro, revelaram que o meio de cultura celular modula o comportamento destas células, sendo um fator importante tanto para a proliferação como para a manutenção da multipotência, destacando o DMEM baixa glicose como o meio mais adequado para o transporte e isolamento de células da geleia de Wharton do cordão umbilical ovino.(AU)

Potential for in vitro mesoderm differentiation of Wharton's jelly cells from ovine umbilical cord isolated in different culture media / Potencial de diferenciação in vitro de células provenientes da geleia de Wharton de cordões umbilicais ovinos isolados em diferentes meios de cultivo

The mammalian Wharton's jelly of umbilical cord (WJUC) is a promising source of multipotent cells, providing advantages due to ethical implications, ease of collection and the absence of teratomas in pre-clinical trials. Ovine multipotent cells have already been isolated from various tissues, however there are no reports using umbilical cords in this species. This study aimed to investigate the best medium to transport the umbilical cord, to isolate and maintain ovine WJUC cells and to compare in vitro growth and mesodermal differentiation potential. Eight ovine umbilical cords were obtained during parturition, sectioned and transported in six different media: MEM, low glucose DMEM, M199, RPMI 1640, PBS and saline. For each transportation medium, four culture media were used and the tissue was explanted in 24-well plates and cultured in MEM, low glucose DMEM, M199 and RPMI 1640, all with 10% FBS. Every experiment was conducted with low-passage (P2), investigating MTT viability during four days and adipogenic, chondrogenic and osteogenesis differentiation was induced in vitro. The most effective transport medium (p<0.1) was low glucose DMEM. There was no bacterial or fungal contamination from collection. Cells from Wharton's jelly of ovine umbilical cords collected at natural birth possess fibroblastic morphology and the capacity for in vitro differentiation into adipogenic, chondrogenic and osteogenic cell lines. MTT tests and in vitro differentiation experiments revealed that cell culture medium modulates the behavior of cells and is an important factor for proliferation and maintenance of multipotency. Low glucose DMEM was the most suitable medium for the isolation of cells from Wharton's jelly of ovine umbilical cord.(AU)

A geleia de Wharton do cordão umbilical (GWCU) de mamíferos é uma fonte promissora de células multipotentes, sendo vantajosa por aspectos éticos, facilidade de coleta e não causar teratomas em ensaios pré-clínicos. Em ovinos, células multipotentes já foram isoladas de vários tecidos, no entanto, não existem relatos do isolamento a partir do cordão umbilical nesta espécie. O objetivo do presente estudo foi investigar o melhor meio para o transporte do cordão umbilical, isolar e manter as células da GWCU ovino em diferentes meios e comparar a proliferação e o potencial de diferenciação mesodermal in vitro. Oito cordões umbilicais foram obtidos, por ocasião do parto natural, seccionados e transportados em seis diferentes meios que consistiram em MEM, DMEM baixa glicose, M199, RPMI 1640, PBS e soro fisiológico. Para cada meio de transporte foram utilizados quatro meios de cultivo, sendo o tecido explantado em placas de 24 poços e cultivados em MEM, DMEM baixa glicose, M199 e RPMI 1640, todos com 10% SFB. Todo o experimento foi realizado em baixa passagem (P2) investigando viabilidade pelo MTT por quatro dias além da indução à diferenciação adipogênica, condrogênica e osteogênica in vitro. O meio de transporte mais efetivo (P<0,10) foi o DMEM baixa glicose. Não houve contaminações bacterianas ou fúngicas decorrentes da coleta. Células oriundas da geleia de Wharton do cordão umbilical ovino colhido por ocasião do parto natural possuem morfologia fibroblastóide e capacidade de diferenciação in vitro nas linhagens adipogênica, condrogênica e osteogênica. Os ensaios de MTT e diferenciação in vitro, revelaram que o meio de cultura celular modula o comportamento destas células, sendo um fator importante tanto para a proliferação como para a manutenção da multipotência, destacando o DMEM baixa glicose como o meio mais adequado para o transporte e isolamento de células da geleia de Wharton do cordão umbilical ovino.(AU)

Substâncias obesogênicas alteram a expressão de RNAs longos não-codificadores de maneira transgeracional

A epidemia da obesidade é considerada uma crise mundial de Saúde Pública, tendo como fatores contribuintes o aumento da ingestão calórica, estilos de vida sedentários e/ou predisposições genéticas. Ainda que o balanço energético positivo seja uma das causas mais significativas da obesidade, pesquisas recentes relacionam a epidemia da doença à exposição precoce a produtos químicos desreguladores endócrinos (DEs) (do inglês, Endocrine-Disrupting Chemicals - EDCs). A Sociedade Endócrina define DEs como substâncias químicas exógenas, ou misturas de substâncias químicas, que interferem em qualquer aspecto da ação hormonal. Substâncias obesogênicas compõem um subconjunto de DEs que estimulam inadequadamente a adipogênese e o armazenamento de gordura direta ou indiretamente, aumentando o número e/ou o tamanho das células adiposas, ou interferindo na regulação hormonal do metabolismo, apetite e saciedade. A exposição a essas substâncias químicas durante o período intrauterino e/ou de lactação pode influenciar fortemente a predisposição tardia à obesidade. Os RNAs longos não-codificadores (lncRNAs) são caracterizados por desempenhar relevantes papéis regulatórios em diversos processos biológicos. Considerando a importância da nutrição materna para a regulação dos padrões epigenéticos da prole, o presente estudo visa elucidar os efeitos da exposição ancestral a substâncias obesogênicas na expressão de lncRNAs no tecido adiposo gonadal de camundongos. Os dados de RNA-Seq de 8 amostras de tecido adiposo gonadal de camundongos F4 adultos expostos ancestralmente a dimetilsulfóxido (DMSO) (0,1%) como grupo controle, ou ao DE TBT (50 nM) durante o desenvolvimento uterino e lactação, foram obtidos de estudo previamente realizado (NCBI - GEO Datasets - GSE105051). Após alinhamento e contagem das reads, foi realizada análise de expressão diferencial, e identificamos 74 lncRNAs diferencialmente expressos (p<0.05), visto que 22 apresentaram expressão aumentada no grupo TBT e 52 estavam mais expressos no grupo DMSO em relação ao TBT. As análises dos termos de ontologia gênica (do inglês Gene Ontology - GO) revelaram o enriquecimento dos processos relacionados ao metabolismo da glicose e11 à atividade do receptor ativado por Wnt. Sendo assim, nossos resultados sugerem que a regulação dos lncRNAs e de seus genes parceiros podem contribuir para o controle do processo de adipogênese.

The obesity epidemic is considered a global public health crisis. Increased caloric intake, sedentary lifestyles and/or genetic predisposition are all factors contributing to the epidemic. Although the positive energy balance is one of the most significant causes of obesity, recent research has linked early exposure to Endocrine-Disrupting Chemicals (EDCs) to the disease. The Endocrine Society defines EDCs as "exogenous chemicals, or mixtures of chemicals, that interfere with any aspect of hormonal action". Obesogenic substances make up a subset of EDCs that inadequately stimulate adipogenesis and fat storage directly or indirectly, increasing the number and/or size of fat cells, or interfering with the hormonal regulation of metabolism, appetite and satiety. Exposure to these chemicals during intrauterine and/or lactation periods can strongly influence the late predisposition to obesity. Long noncoding RNAs (lncRNAs) are characterized by playing important regulatory roles in several biological processes. Considering the importance of maternal nutrition to the regulation of epigenetic patterns in the offspring, the present study aimed at investigating the effects of ancestral exposure to obesogenic substances on the expression of lncRNAs in the gonadal adipose tissue of mice. RNA-seq data from 8 gonadal adipose tissue samples from adult F4 mice ancestrally exposed to dimethyl sulfoxide (DMSO) (0.1%) as a control group, or to EDC TBT (50 nM) during uterine development and lactation, were obtained from a previously conducted study (NCBI - GEO Datasets - GSE105051). After reading alignment and counting, differential expression analysis was performed, and we identified 74 differentially expressed lncRNAs were identified (p <0.05), as 22 showed increased expression in the TBT group and 52 were more expressed in the TBT group. The analysis of the GO terms revealed an enrichment for glucose metabolism and the activity of the receptor activated by Wnt. Therefore, our results suggest that the regulation of lncRNAs and their partner genes may contribute to the control of the adipogenesis process.

Development of organs and fat deposition in indigenous goat kids under feed restriction / Desenvolvimento dos órgãos e deposição de gorduras em cabritos Canindé sob restrição alimentar

The study aimed to evaluate the effect of feed restriction on the development of organs and fat deposition in castrated Caninde goats. Twenty one goats were distributed in a completely randomized design, with initial body weight of 15.9 ± 1.03kg. The goats were allocated into three levels of feed restriction (seven animals per level): ad libitum; moderate restriction (restriction of 20% on the amount of feed consumed by the animals fed ad libitum) and severe restriction (40% restriction on the amount of feed consumed by the animals fed ad libitum). The diet consisted of 55% forage (Tifton) and 45% concentrate. At 110 days of experiment, the goats were slaughtered with abody weight of 23.5kg ± 2.5kg. The components included the internal organs (spleen, heart, liver, pancreas, lungs, kidneys, blood) the emptied and cleaned digestive tract and fat deposits (in heart, mesenteric, omental and pelvic-renal) were weighed. Feed restriction in Canindé goats affected the weight of organs and fat deposition in regions more involved with the energy storage function (mesenteric, omental and pelvic-renal) (P 0.05), however, feed restriction does not affect the percentage of the organs in relation to EBW (P > 0.05), indicating that even under feed restriction organ development is proportional to the development of the body.(AU)

Objetivou-se avaliar o efeito da restrição alimentar sobre o desenvolvimento dos órgãos e deposição de gordura em caprinos Canindé castrados. Foram utilizados 21 cabritos confinados, em um delineamento inteiramente casualizado, com peso inicial de 15,9 ± 1,03kg. Os cabritos foram alocados em três níveis de restrição alimentar (sete animais por nível): ad libitum (alimentados à vontade); restrição moderada (restrição de 20% em relação à quantidade de matéria natural consumida pelos animais alimentados ad libitum) e restrição severa (restrição de 40% em relação à quantidade de ração consumida pelos animais alimentados ad libitum). A ração experimental apresentou uma proporção de 55% de volumoso (Tifton) e 45% de concentrado. Aos 110 dias de experimento os cabritos foram abatidos com peso médio de 23,5 kg ± 2,5 kg. Esvaziou-se o trato gastrointestinal (TGI), a bexiga e a vesícula biliar e foram mensurados os seus pesos para determinação do peso de corpo vazio (PCV). Foram separados e registrados os pesos dos órgãos (baço, coração, fígado, pâncreas, pulmões, rins, sangue, TGI) e dos depósitos de gordura (cardíaca, mesentérica, omental e pélvico-renal). A restrição alimentar em caprinos Canindé afetou o peso absoluto dos órgãos e das gorduras (P 0.05) que estão mais envolvidas com a função de reserva energética (mesentérica, omental e pélvico-renal), no entanto, não afetou o pe(AU)

Análise da expressão de genes associados à adipogênese e composição da gordura intramuscular em bovinos Angus X Nelore de diferentes condições sexuais

A condição sexual dos bovinos influencia o seu crescimento, assim como a formação do tecido adiposo muscular, a composição de ácidos graxos em diferentes músculos e vias de adipogênese, sendo estas influenciadas por uma variedade de sinais hormonais, o que afeta diretamente as características da carcaça e a qualidade da carne. Desta forma, o presente estudo analisou a influência da condição sexual (CS) dos bovinos sobre a expressão dos genes associados à adipogênese, assim como avaliou o perfil de ácidos graxos dos músculos longissimus (LO) e triceps brachii (TB) de bovinos Angus x Nelore. Foram confinados 150 bovinos, divididos em três CS (50 fêmeas, 50 machos não castrados e 50 castrados). O delineamento experimental considerado foi inteiramente casualizado, com 50 repetições por grupo e cada animal foi considerado como uma unidade experimental. Os animais foram mantidos nas mesmas condições de manejo, recebendo alimentação ad libitum utilizando-se a mesma dieta, composta de 86% de concentrado e 14% de volumoso na matéria seca. Após 150 dias de confinamento, os animais foram abatidos aos 16 meses de idade. Durante o abate, imediatamente após a esfola foram coletadas amostras dos músculos LO e TB para extração de RNA e proteína. Durante a desossa foi avaliada a espessura de gordura subcutânea e o escore de marmorização no músculo longissimus, entre a 12ª e 13ª costelas e coletadas amostras dos dois músculos para análise de quantificação de lipídeos totais e composição de ácidos graxos. Os dados estatísticos referentes à qualidade de carcaça e carne foram analisados pelo proc MIXED do programa SAS (versão 9.3) e os referentes aos resultados de expressão gênica pelo programa JMP14Ò (SAS Institute). A CS afetou as características de carcaça avaliadas (P 0,05). A espessura de gordura subcutânea e o escore de marmorização foram maiores na carcaça das fêmeas em comparação às dos machos não castrados e castrados. Houve diferença no conteúdo de lipídeos totais somente entre as CS (P 0,05), com maior conteúdo na carne das fêmeas, seguida da carne dos machos castrados e não castrados. O total de ácidos graxos saturados (AGS) foi influenciado pela CS e pelo tipo de músculo (P 0,05), sendo que a carne dos bovinos não castrados apresentou maior concentração de AGS do que a carne das fêmeas. O total de AGS no músculo LO foi maior que o TB, independente da CS. Já os ácidos graxos (AG) 14:0 e 16:0 foram afetados apenas pelo tipo de músculo, e concentrações mais elevadas foram detectadas no músculo LO (P 0,05). O fator CS afetou o total de AG monoinsaturados (AGMI) (P 0,05), sendo a maior concentração observada na carne de fêmeas e castrados do que na carne de não castrados. Já a concentração do 18:1 n-9c (oleico) foi influenciada pelo tipo de músculo, com maior concentração no músculo LO em comparação ao TB (P 0,05). Houve efeito do tipo de músculo para o total de AG poli-insaturados (AGPI), total de n-3, total de n-6, proporção AGPI:AGS, os AG individuais 18:2 n-6c, 20:3 n-3, 22:4 n-6 e o índice de saúde. As concentrações foram maiores no TB em comparação ao LO (P 0,05). Por outro lado, os índices de aterogenicidade e trombogenicidade foram maiores no músculo LO (P 0,05). Com relação aos níveis de transcritos, houve efeito do tipo de músculo na expressão dos genes CEBPa e LPL (P 0,05), ambos com maior expressão no músculo TB. Já a CS influenciou o nível de transcritos do ACC (P 0,05) e o gene foi mais expresso nas fêmeas em relação aos machos castrados. Foi observada interação entre CS e tipo de músculo para os genes FABP3, TPM2 e TPM3 (P 0,05). Houve diferença na abundância da proteína tropomiosina (TPM) entre os músculos, mas somente dentro da condição sexual machos não castrados (P £ 0,05), com maior abundância no músculo TB em comparação ao LO. Adicionalmente, a CSafetou a abundância da TPM avaliada nos músculos LO e TB (P £ 0,05). O músculo LO dos machos castrados apresentou maior abundância da TPM do que os machos não castrados e fêmeas, enquanto o TB dos machos não castrados apresentou maior abundância do que as demais CS. A CS modulou os níveis de transcritos do ACC, conteúdo de lipídeos totais, total de AGS, total de AGMI e as características de carcaça, enquanto o tipo de músculo afetou os transcritos dos genes CEBPa e LPL, total de AGS, total de AGPI, total de n-3 e n-6, além de importantes AG, demonstrando efeito especifico da CS e o tipo de músculo. Adicionalmente, foi observada uma modulação da tropomiosina na formação e acúmulo de lipídeos, relacionada a maior espessura de gordura subcutânea e escore de marmorização nas fêmeas e machos castrados, e uma modulação desta mesma proteína no desenvolvimento muscular, apontada pela menor deposição de gordura na carcaça de machos não castrados. Além disso, há um perfil lipídico diferente dentro de cada músculo, onde o TB é mais favorável à saúde humana do que o LO, e a carne bovina de fêmeas se destaca das demais condições sexuais por apresentar melhores características de carcaça e composição de AG mais favorável à saúde humana.

Cattle growth, muscle adipose tissue and fatty acid composition in different muscles, are significantly affected by gender and influenced by a variety of hormonal factors, affecting the quality of the carcass and the beef. As the adipogenesis is a complex biological process to regulate fat cell metabolism, it can be regulated by hormones and influenced by factors such as different fat deposits, the gender status and diet of cattle. Therefore, it is important to understand the molecular mechanisms involved in adipogenesis in different muscles and gender, since the deposition of fat in these animals is different, to employ new tools to add greater value to meat production. However, the present study evaluated the association of fatty acid (FA) composition and adipogenesis-related genes in the longissimus (LO) and triceps brachii (TB) muscles of feedlot Angus x Nelore cattle. A total of 150 cattle was confined for 150 days and assigned to three genders, namely, heifers, bulls, and steers, and fed the same diet. Immediately after slaughter, samples of LO and TB muscles were collected for RNA and protein extraction. Twenty-four hours after slaughter, were measured the fat thickness and marbling score between the 12th and 13th ribs and collected samples of the muscles for analyses of total lipids determination and fatty acid composition. The experimental design was completely randomized, with 50 repetitions per treatment, and each animal was considered an experimental unit. The statistical analyses were performed by the proc MIXED SAS® (version 9.3) for the meat quality traits and JMP14 Software (SAS Institute) for the gene expression analyses. There was difference in the carcass traits related to fat deposition (P £ 0.05). The fat thickness and marbling score were higher in heifer carcasses than in carcasses of bulls and steers. Similarly, only gender status affected the content of total lipids (P £ 0.05), where meat from heifers presented increased values compared to steers and bulls. There was a difference in the total saturated FAs (SFAs) by gender and muscle type (P £ 0.05). The meat from bulls had higher levels of SFAs compared to heifers and had no differences in relation to meat from steers. Among muscle types, total SFAs increased in LO muscle compared with TB, independent of gender. The FAs 14:0 and 16:0 were affected by muscle type only, and higher levels were detected in the LO muscle (P £ 0.05). There were differences in gender for total monounsaturated FAs (MUFAs; P £ 0.05). Meat from bulls had lower levels of MUFAs compared with the other genders. The levels of the major FA of total MUFAs, 18:1 n-9c, were higher in the LO muscle than in the TB muscle, independent of gender (P £ 0.05). The total polyunsaturated FAs (PUFAs), total n-3, total n-6, PUFA:SFA ratio, health index and FAs 18:2 n-6c, 20:3 n-3, and 22:4 n-6 were higher in TB than in LO muscle (P < 0.05). Otherwise, the atherogenicity and thrombogenicity indexes were higher in the LO muscle (P £ 0.05). Regarding the transcript levels, there was an effect of muscle type on the expression of the CEBPa and LPL (P £ 0.05) genes, both of which had higher expression in TB muscle. Gender affected the transcript level of ACC (P £ 0.05). This gene was increased in bulls, intermediate in steers, and decreased in heifers. Additionally, gender and muscle type interactions were observed for the transcript levels of FABP3, TPM2, and TPM3 (P £ 0.05). There was difference for tropomyosin (TPM) protein abundance between muscles only in bulls (P £ 0.05), where the greater TPM abundance was in the TB. Additionally, cattle gender status affected the TPM abundance evaluated in LO and TB muscles (P 0.05). The LO muscle of steers showed higher TPM abundance than bulls and heifers, while the TB muscle of bulls showed higher TPMabundance than the other genders. The cattle gender status modulated the transcripts levels of ACC gene, content of total lipids, total SFAs, total MUFAs, and carcass traits, while the muscle type affected the transcripts of CEBPa and LPL genes, total SFAs, total PUFAs, total n-3 and n-6, besides important FAs, showing a gender and muscle specific effect. In addition, a modulation of TPM in formation and accumulation of lipids was observed, related to the greater subcutaneous fat thickness and marbling score in heifers and steers, and a modulation of this same protein in muscle development, indicated by the lower fat deposition in the carcass of bulls. Furthermore, there is a different lipid profile within each muscle, where the TB muscle is more favorable to human health than the LO, and beef from heifers stands out than the other genders for presenting better carcass traits and FA composition more favorable to human health.

Development of organs and fat deposition in indigenous goat kids under feed restriction / Desenvolvimento dos órgãos e deposição de gorduras em cabritos Canindé sob restrição alimentar

The study aimed to evaluate the effect of feed restriction on the development of organs and fat deposition in castrated Caninde goats. Twenty one goats were distributed in a completely randomized design, with initial body weight of 15.9 ± 1.03kg. The goats were allocated into three levels of feed restriction (seven animals per level): ad libitum; moderate restriction (restriction of 20% on the amount of feed consumed by the animals fed ad libitum) and severe restriction (40% restriction on the amount of feed consumed by the animals fed ad libitum). The diet consisted of 55% forage (Tifton) and 45% concentrate. At 110 days of experiment, the goats were slaughtered with abody weight of 23.5kg ± 2.5kg. The components included the internal organs (spleen, heart, liver, pancreas, lungs, kidneys, blood) the emptied and cleaned digestive tract and fat deposits (in heart, mesenteric, omental and pelvic-renal) were weighed. Feed restriction in Canindé goats affected the weight of organs and fat deposition in regions more involved with the energy storage function (mesenteric, omental and pelvic-renal) (P 0.05), however, feed restriction does not affect the percentage of the organs in relation to EBW (P > 0.05), indicating that even under feed restriction organ development is proportional to the development of the body.

Objetivou-se avaliar o efeito da restrição alimentar sobre o desenvolvimento dos órgãos e deposição de gordura em caprinos Canindé castrados. Foram utilizados 21 cabritos confinados, em um delineamento inteiramente casualizado, com peso inicial de 15,9 ± 1,03kg. Os cabritos foram alocados em três níveis de restrição alimentar (sete animais por nível): ad libitum (alimentados à vontade); restrição moderada (restrição de 20% em relação à quantidade de matéria natural consumida pelos animais alimentados ad libitum) e restrição severa (restrição de 40% em relação à quantidade de ração consumida pelos animais alimentados ad libitum). A ração experimental apresentou uma proporção de 55% de volumoso (Tifton) e 45% de concentrado. Aos 110 dias de experimento os cabritos foram abatidos com peso médio de 23,5 kg ± 2,5 kg. Esvaziou-se o trato gastrointestinal (TGI), a bexiga e a vesícula biliar e foram mensurados os seus pesos para determinação do peso de corpo vazio (PCV). Foram separados e registrados os pesos dos órgãos (baço, coração, fígado, pâncreas, pulmões, rins, sangue, TGI) e dos depósitos de gordura (cardíaca, mesentérica, omental e pélvico-renal). A restrição alimentar em caprinos Canindé afetou o peso absoluto dos órgãos e das gorduras (P 0.05) que estão mais envolvidas com a função de reserva energética (mesentérica, omental e pélvico-renal), no entanto, não afetou o pe

Desenvolvimento dos órgãos e deposição de gorduras em cabritos Canindé sob restrição alimentar

SUMMARY The study aimed to evaluate the effect of feed restriction on the development of organs and fat deposition in castrated Caninde goats. Twenty one goats were distributed in a completely randomized design, with initial body weight of 15.9 ± 1.03kg. The goats were allocated into three levels of feed restriction (seven animals per level): ad libitum; moderate restriction (restriction of 20% on the amount of feed consumed by the animals fed ad libitum) and severe restriction (40% restriction on the amount of feed consumed by the animals fed ad libitum). The diet consisted of 55% forage (Tifton) and 45% concentrate. At 110 days of experiment, the goats were slaughtered with abody weight of 23.5kg ± 2.5kg. The components included the internal organs (spleen, heart, liver, pancreas, lungs, kidneys, blood) the emptied and cleaned digestive tract and fat deposits (in heart, mesenteric, omental and pelvic-renal) were weighed. Feed restriction in Canindé goats affected the weight of organs and fat deposition in regions more involved with the energy storage function (mesenteric, omental and pelvic-renal) (P 0.05), however, feed restriction does not affect the percentage of the organs in relation to EBW (P > 0.05), indicating that even under feed restriction organ development is proportional to the development of the body.

RESUMO Objetivou-se avaliar o efeito da restrição alimentar sobre o desenvolvimento dos órgãos e deposição de gordura em caprinos Canindé castrados. Foram utilizados 21 cabritos confinados, em um delineamento inteiramente casualizado, com peso inicial de 15,9 ± 1,03kg. Os cabritos foram alocados em três níveis de restrição alimentar (sete animais por nível): ad libitum (alimentados à vontade); restrição moderada (restrição de 20% em relação à quantidade de matéria natural consumida pelos animais alimentados ad libitum) e restrição severa (restrição de 40% em relação à quantidade de ração consumida pelos animais alimentados ad libitum). A ração experimental apresentou uma proporção de 55% de volumoso (Tifton) e 45% de concentrado. Aos 110 dias de experimento os cabritos foram abatidos com peso médio de 23,5 kg ± 2,5 kg. Esvaziou-se o trato gastrointestinal (TGI), a bexiga e a vesícula biliar e foram mensurados os seus pesos para determinação do peso de corpo vazio (PCV). Foram separados e registrados os pesos dos órgãos (baço, coração, fígado, pâncreas, pulmões, rins, sangue, TGI) e dos depósitos de gordura (cardíaca, mesentérica, omental e pélvico-renal). A restrição alimentar em caprinos Canindé afetou o peso absoluto dos órgãos e das gorduras (P 0.05) que estão mais envolvidas com a função de reserva energética (mesentérica, omental e pélvico-renal), no entanto, não afetou o percentual dos órgãos em relação ao PCV (P > 0.05), indicando que mesmo sob restrição o desenvolvimento dos órgãos é proporcional ao desenvolvimento do corpo.

Desenvolvimento dos órgãos e deposição de gorduras em cabritos Canindé sob restrição alimentar

SUMMARY The study aimed to evaluate the effect of feed restriction on the development of organs and fat deposition in castrated Caninde goats. Twenty one goats were distributed in a completely randomized design, with initial body weight of 15.9 ± 1.03kg. The goats were allocated into three levels of feed restriction (seven animals per level): ad libitum; moderate restriction (restriction of 20% on the amount of feed consumed by the animals fed ad libitum) and severe restriction (40% restriction on the amount of feed consumed by the animals fed ad libitum). The diet consisted of 55% forage (Tifton) and 45% concentrate. At 110 days of experiment, the goats were slaughtered with abody weight of 23.5kg ± 2.5kg. The components included the internal organs (spleen, heart, liver, pancreas, lungs, kidneys, blood) the emptied and cleaned digestive tract and fat deposits (in heart, mesenteric, omental and pelvic-renal) were weighed. Feed restriction in Canindé goats affected the weight of organs and fat deposition in regions more involved with the energy storage function (mesenteric, omental and pelvic-renal) (P 0.05), however, feed restriction does not affect the percentage of the organs in relation to EBW (P > 0.05), indicating that even under feed restriction organ development is proportional to the development of the body.

RESUMO Objetivou-se avaliar o efeito da restrição alimentar sobre o desenvolvimento dos órgãos e deposição de gordura em caprinos Canindé castrados. Foram utilizados 21 cabritos confinados, em um delineamento inteiramente casualizado, com peso inicial de 15,9 ± 1,03kg. Os cabritos foram alocados em três níveis de restrição alimentar (sete animais por nível): ad libitum (alimentados à vontade); restrição moderada (restrição de 20% em relação à quantidade de matéria natural consumida pelos animais alimentados ad libitum) e restrição severa (restrição de 40% em relação à quantidade de ração consumida pelos animais alimentados ad libitum). A ração experimental apresentou uma proporção de 55% de volumoso (Tifton) e 45% de concentrado. Aos 110 dias de experimento os cabritos foram abatidos com peso médio de 23,5 kg ± 2,5 kg. Esvaziou-se o trato gastrointestinal (TGI), a bexiga e a vesícula biliar e foram mensurados os seus pesos para determinação do peso de corpo vazio (PCV). Foram separados e registrados os pesos dos órgãos (baço, coração, fígado, pâncreas, pulmões, rins, sangue, TGI) e dos depósitos de gordura (cardíaca, mesentérica, omental e pélvico-renal). A restrição alimentar em caprinos Canindé afetou o peso absoluto dos órgãos e das gorduras (P 0.05) que estão mais envolvidas com a função de reserva energética (mesentérica, omental e pélvico-renal), no entanto, não afetou o percentual dos órgãos em relação ao PCV (P > 0.05), indicando que mesmo sob restrição o desenvolvimento dos órgãos é proporcional ao desenvolvimento do corpo.

Isolation, expansion, differentiation and growth kinetics essay in mesenchymal stem cells culture from the bone marrow of collared peccaries (Tayassu tajacu)

Background: There are few studies on stem cell isolation in wild animals that provide isolation and culture protocols of these cells in vitro. Among the wild species studied, we present the collared peccary (Tayassu tajacu) as a model with potential to obtain and use MSC in preclinical studies. These animals are phylogenetically close to the domestic pig, popularly known as peccaries and found naturally in South America, Central America and the South of the United States. The aim of the present study was to establish a protocol for the isolation, in vitro cell expansion, differentiation and assessment of the stromal MSC growth curve before and after thawing. Materials, Methods & Results: Mesenchymal stem cells (MSC) from collared peccary bone marrow (Tayassu tajacu) were isolated and expanded by centrifuge in Ficoll® solution and cultured in DMEM® High Glucose medium. The culture was assessed by assays of colony forming units CFU-F and growth curve by saturation (GCS). Cultures in the third passage, with 70% confluence, were replicated at 105 cells/mL concentration in the culture media to induce osteogenic cell differentiation and adipogenic cell differentiation, respectively. The MSC were frozen in nitrogen for 40 days, thawed and re-assessed for cell viability and GCS. Discussion: The bone marrow collected presented high mononuclear cellularity, with a mean variability of 94.5% and 60.83 ± 4.27 UFC were identified in the samples and cells with fibroblast-like-cell morphology were observed. When they were expanded, the mean cell viability was 95%, the mean cell concentration obtained was 233.31 ± 20.04 cells per 25cm2 bottle and the culture reached the growth plateau in GCS between the 13th and 16th day. The osteoblastic cell differentiation assay showed after 18 days, morphology similar to osteoblasts, with irregular cytoplasm limits, cell prolongation formation and flattened appearance. [...](AU)

Isolation, expansion, differentiation and growth kinetics essay in mesenchymal stem cells culture from the bone marrow of collared peccaries (Tayassu tajacu)

Background: There are few studies on stem cell isolation in wild animals that provide isolation and culture protocols of these cells in vitro. Among the wild species studied, we present the collared peccary (Tayassu tajacu) as a model with potential to obtain and use MSC in preclinical studies. These animals are phylogenetically close to the domestic pig, popularly known as peccaries and found naturally in South America, Central America and the South of the United States. The aim of the present study was to establish a protocol for the isolation, in vitro cell expansion, differentiation and assessment of the stromal MSC growth curve before and after thawing. Materials, Methods & Results: Mesenchymal stem cells (MSC) from collared peccary bone marrow (Tayassu tajacu) were isolated and expanded by centrifuge in Ficoll® solution and cultured in DMEM® High Glucose medium. The culture was assessed by assays of colony forming units CFU-F and growth curve by saturation (GCS). Cultures in the third passage, with 70% confluence, were replicated at 105 cells/mL concentration in the culture media to induce osteogenic cell differentiation and adipogenic cell differentiation, respectively. The MSC were frozen in nitrogen for 40 days, thawed and re-assessed for cell viability and GCS. Discussion: The bone marrow collected presented high mononuclear cellularity, with a mean variability of 94.5% and 60.83 ± 4.27 UFC were identified in the samples and cells with fibroblast-like-cell morphology were observed. When they were expanded, the mean cell viability was 95%, the mean cell concentration obtained was 233.31 ± 20.04 cells per 25cm2 bottle and the culture reached the growth plateau in GCS between the 13th and 16th day. The osteoblastic cell differentiation assay showed after 18 days, morphology similar to osteoblasts, with irregular cytoplasm limits, cell prolongation formation and flattened appearance. [...]

Diferença esperada na progênie (DEP) para precocidade de tourinhos Nelore e sua relação entre adipogênese, fibrogênese, lipogênese e metabolismo lipídico

Objetivou-se avaliar a expressão de genes relacionados ao metabolismo lipídico, bem como identificar por meio da ferramenta de proteômica diferencial, as principais diferenças no perfil proteico do músculo longissimus thoracis (LT) e da espessura de gordura subcutânea (EGS) de progênies Nelore, filhos de touros com DEP contrastante para precocidade sexual e crescimento. Para isso, o presente estudo foi dividido em 3 manuscritos. Em síntese, foram utilizados 105 bovinos, machos não castrados, com idade média de 20 ± 2 meses e 400 ± 24 kg, provenientes de um mesmo rebanho, com informações genéticas para precocidade e crescimento. Os animais foram confinados por 100 dias e realizada a ultrassonografia de carcaça a cada 28 dias. Foram coletadas amostras de sangue para determinar as concentrações metabólicas e hormonais na última pesagem. Os animais foram abatidos após 100 dias e durante o abate foram colhidas amostras do músculo LT e da EGS entre a 12a e 13a costelas além de amostras da gordura visceral (GV). Todas essas amostras foram imediatamente congeladas em nitrogênio líquido e mantidas em freezer 80ºC até a realização das análises de expressão gênica por PCR em tempo real (RT-qPCR) e análise e SDS-PAGE, seguida de identificação proteica pela análise de espectrometria de massas acoplada a cromatografia liquida (LC-MS/MS). Durante a desossa foi avaliada a gordura intramuscular (MAR) no músculo LT. Também foram coletados bifes para lipídeos totais, perfil de ácidos graxos e solubilidade do colágeno. Os animais foram selecionados de acordo com a DEP de seus pais (touros). Do total de 105 animais, foram selecionados 6 pais com DEPs simultaneamente contrastantes para precocidade e crescimento, de forma que cada grupo experimental tivessem 3 pais. A partir dos pais, foram formados 2 grupos contrastantes denominados de alta DEP (H_EPD; N=16) e baixa DEP (L_EPD; N=16). Os animais do grupo H_EPD tiveram maior EGS (P=0,006); menor LDL (P=0,014); maior IGF-1 (P=0,064); maior solubilidade do colágeno (P=0,098); menor expressão do gene LPL, no LT (P=0,045). Também este grupo apresentou maior expressão dos genes envolvidos na lipogênese avaliados na EGS: ACACA (P=0,060), LPL (P=0,085), ACOX1 (P= 0,100), LEP (P=0,030), SDC (P= 0,009), e GAPDH (P=0,081), do que os animais do grupo L_DEP. Uma banda eletroforética foi detectada como diferentemente abundante no músculo LT (banda 16) e três bandas eletroforéticas foram detectadas como diferentemente abundantes na EGS (bandas 24, 30, 32). As vias KEGG do metabolismo de piruvato, glicólise/gluconeogênese, metabolismo de carbono, biossíntese de aminoácidos, dentre outras, foram enriquecidas para as proteínas diferencialmente abundantes identificadas no LT e na EGS. A seleção genética para precocidade e crescimento afeta o proteoma muscular e consequentemente o metabolismo lipídico e proteico de bovinos não castrados. O hormônio IGF-1, o gene LPL e as proteínas PKLR, PKM, ALDOA, DLD, GPI, VIM, ACTC1, OXCT1, GAPDH, LDHA, LDHB, MDH1, MDH2, IDH1, PGK1, SUCLG2 and ACY1 podem ser considerados futuros biomarcadores candidatos para EGS. Palavras-chave: Bovinos de corte. Espessura de gordura subcutânea. Vias metabólicas. Metabolismo proteico e lipídico. Proteômica.

This study aimed to evaluate the expression of genes related to lipid metabolism, as well as to identify, through the proteomics tool, differences in the protein profile of Longissimus thoracis (LT) and backfat thickness (BFT) proteins of Nelore progenies, offspring of bulls with contrasting factors of expected progeny difference (EPD) for precocity and growth. For this, the present study was divided into 3 manuscripts. In summary, 105 male bulls were used, with a mean age of 20 ± 2 months and 400 ± 24 kg, from the same herd, with the genetic information of precocity and growth. The animals remained confined for 100 days, and the carcass ultrasound was performed every 28 days. Blood samples were collected to determine the metabolic and hormonal profile. The animals were slaughtered after 100 days and during slaughter, muscle LT and BFT were collected between the 12th and 13th ribs, in addition to visceral fat (GV). All of these were immediately frozen in liquid nitrogen and kept in a freezer - 80ºC until the analysis of gene expression by real-time PCR (RT-qPCR) and analysis and SDSPAGE, followed by the identification of proteins by coupled mass spectrometry liquid chromatography (LC-MS / MS). During boning, the intramuscular fat (MAR) in the LT muscle was evaluated. Steaks for total lipids, fatty acid profile, and collagen solubility were also collected. The animals were selected according to a EPD from their parent bulls. Were selected 6 parents with EPD contrasting simultaneously for precocity and growth, so that each experimental group had 3 parents bulls. Then, were formed, 2 contrasting groups called high EPD (H_EPD; N = 16) and low EPD (L_EPD; N = 16), using 32 progenies. The animals in the H_EPD group had higher BFT (P = 0.006); lower LDL (P = 0.014); higher IGF-1 (P = 0.064); greater collagen solubility (P = 0.098); lower expression of the LPL gene, in LT (P = 0.045). This group also showed greater expression of the genes involved in lipogenesis evaluated in BFT: ACACA (P = 0.060), LPL (P = 0.085), ACOX1 (P = 0.100), LEP (P = 0.030), SDC (P = 0.009), and GAPDH (P = 0.081), than the animals in the L_EPD group. One electrophoretic band was detected as differently abundant in the LT muscle (band 16) and three electrophoretic bands were detected as differently abundant in the BFT (bands 24, 30, 32). The KEGG pathways of pyruvate metabolism, glycolysis/gluconeogenesis, carbon metabolism, amino acid biosynthesis, among others, were enriched for the differentially abundant proteins identified in the LT and BFT. The genetic selection for precocity and growth affects the muscle proteome and consequently the lipid and protein metabolism of noncastrated cattle. The IGF-1 hormone, the LPL gene, and the PKLR, PKM, ALDOA, DLD, GPI, VIM, ACTC1, OXCT1, GAPDH, LDHA, LDHB, MDH1, MDH2, IDH1, PGK1, SUCLG2, and ACY1 proteins can be considered future biomarkers candidates for BFT. Keywords: Beef Cattle. Backfat thickness. Metabolic pathways. Protein and lipid metabolism. Proteomics.

Isolation, expansion and differentiation of cellular progenitors obtained from dental pulp of agouti (Dasyprocta prymnolopha Wagler, 1831) / Isolamento, expansão e diferenciação de progenitors celulares obtidos da polpa dentária de cutia (Dasyprocta prymnolopha Wagler, 1831)

The study aimed to isolate, expand, differentiate and characterize progenitor cells existent in the dental pulp of agouti. The material was washed with PBS solution and dissociated mechanically with the aid of a scalpel blade on plates containing culture medium D-MEM/F-12, and incubated at 5% CO2-37⁰C. The growth curve, CFU assay, osteogenic/adipogenic differentiation and characterization were obtained from the isolation. The cells began to be released from the explant tissue around the 7th day of culture. By day 22 of culture, cells reached 80% confluence. At the UFC test, 81 colonies were counted with 12 days of cultivation. The growth curves before and after freezing showed a regular growth with intense proliferation and clonogenic potential. The cell differentiation showed formation of osteoblasts and fat in culture, starting at 15 days of culture in a specific medium. Flow cytometry (FACs) was as follows: CD34 (positive), CD14 (negative), CD45 (negative), CD73 (positive), CD79 (negative), CD90 (positive), CD105 (positive), demonstrating high specificity and commitment of isolated cells with mesenchymal stem cells strains. These results suggest the existence of a cell population of stem cells with mesenchymal features from the isolated tissue in the explants of agouti dental pulp, a potential model for study of stem cell strains obtained from the pulp tissue.(AU)

Isolation, expansion and differentiation of cellular progenitors obtained from dental pulp of agouti (Dasyprocta prymnolopha Wagler, 1831). Este estudo teve como objetivo isolar, expandir, diferenciar e caracterizar células progenitoras existentes na polpa dentária de cutia. O material foi lavado em solução de PBS e dissociado mecanicamente, com o auxílio de uma lâmina de bisturi, em placas contendo meio de cultura D-MEM/F-12, e incubadas em 5% de CO2-37⁰C. A curva de crescimento, o ensaio de CFU, a diferenciação osteogênica/adipogênica e a caracterização foram obtidas a partir do isolamento. As células começaram a ser liberadas, a partir do explante, em torno do sétimo dia de cultura. A partir do 22o dia, as células atingiram 80% de confluência. No teste para UFC, 81 colônias foram contadas aos 12 dias de cultivo. As curvas de crescimento pré- e pós-congelamento apresentaram crescimento regular, com intensa proliferação e potencial clonogênico. A diferenciação das células mostrou a formação de osteoblastos e de células de gordura, a partir de 15 dias de cultura em meio específico. A citometria de fluxo (FACS) apresentou-se como segue: CD34 (positivo), CD14 (negativo), CD45 (negativo), CD73 (positivo), CD79 (negativo), CD90 (positivo), CD105 (positivo), demonstrando a grande especificidade e comprometimento das células isoladas com linhagens de células-tronco mesenquimais. Estes resultados sugerem a existência de uma população de células-tronco mesenquimais isolada a partir de explantes da polpa dentária cutia, um modelo potencial para o estudo de linhagens de células-tronco obtidas a partir do tecido pulpar.(AU)

EFEITO DO MÉRITO GENÉTICO PARA ACABAMENTO DE CARCAÇA E DA RAÇA PATERNA SOBRE O DESEMPENHO, EXPRESSÃO GÊNICA E QUALIDADE DA CARNE DE NOVILHOS DE CORTE

A deposição de gordura subcutânea em novilhos de corte é de grande relevância e o valor genético dos reprodutores pode contribuir para o entendimento e controle eficiente desta característica nos sistemas produtivos de carne bovina. Objetivou-se avaliar os efeitos do mérito genético para acabamento de carcaça (MGA) sobre o desempenho animal, produção e qualidade da carne de novilhos Nelore ou cruzados (½ Aberdeen Angus + ½ Nelore). Os animais foram obtidos pelo acasalamento entre matrizes Nelore com touros Nelore (N) ou Aberdeen Angus (AN). Ambos os grupos genéticos paternos foram selecionados para possuírem diferenças esperadas na progênie (DEP) positivas (+, alto MGA) ou negativas (-, baixo MGA) para acabamento de carcaça (DEPacb). Utilizou-se delineamento em blocos casualizados, em arranjo fatorial 2 (alto x baixo MGA) x 2 (N x AN). Três estudos foram conduzidos. No primeiro foram utilizados 76 animais (14 N+, 20 N-, 20 AN+ e 22 AN-) em sistema de recria a pasto e terminação de novilhos não castrados em confinamento. Neste estudo avaliou-se o desempenho, comportamento alimentar em confinamento, expressão gênica no tecido adiposo subcutâneo (TAS) e características de carcaça. Os animais foram abatidos e imediatamente foram coletadas amostras de tecido adiposo subcutâneo (TAS) para estudo da expressão relativa dos genes ACC, ADIPOQ, FASN, PLIN, PPAR e SREBP1. As carcaças foram avaliadas quali-quantitativamente. Para o segundo estudo, foram utilizados 172 animais (34 N+, 33 N-, 46 AN+ e 59 AN-) em sistemas de recria e terminação a pasto. Neste estudo, foram avaliados ao final da recria o desempenho e características de carcaça por ultrassonografia e ao abate. No terceiro experimento utilizou-se 214 novilhos (48 N+, 53 N-, 51 AN+ e 62 AN-) e avaliou-se características físico-químicas da carne e suas correlações lineares com a espessura de gordura subcutânea (EGS). Foram analisados o pH, cor, perdas por exsudação e cocção (PCo) e força de cisalhamento (FC) em amostras de carne não maturadas e maturada por 14 dias. Foram determinadas as concentrações de umidade e gordura (GO) da carne. O MGA não influenciou (P > 0,05) o desempenho, o comportamento alimentar em confinamento e a expressão relativa dos genes estudados. Animais de alto MGA apresentaram maiores (P < 0,05) EGS, escores de acabamento, de conformação e de distribuição de gordura na carcaça em relação aos animais de baixo MGA. A EGS e expressão relativa dos genes ACC, PLIN, PPAR foram maiores (P < 0,05) no TAS dos animais AN em relação aos N. O MGA não influenciou (P > 0,05) as características físico-químicas da carne. As associações entre EGS e pH, a*, PCo e FC foram significativas (P < 0,05), no entanto, de baixa magnitude. O MGA permite a obtenção de carcaças com maior grau de acabamento sem influenciar o desempenho, comportamento alimentar em confinamento, atributos físico-químicos da carne e expressão relativa dos genes estudados.

Subcutaneous fat deposition in beef cattle is great relevance and the genetic value of breeding breeds can contribute to the understanding and efficient control of this trait in beef production systems. The objective was to evaluate the effects of genetic merit for finishing (GMF) on animal performance, production and meat quality of Nellore or crossbred (½ Aberdeen Angus + ½ Nellore) steers. Animals were obtained by mating Nellore sires with Nellore (N) or Aberdeen Angus (AN) bulls. Both sire genetic groups were selected to have positive (+, high MGA) or negative (-, low GMF) expected progeny differences for backfat thickness (EPDbf). A randomized block design with a factorial arrangement of treatments 2 (high x low GMF) x 2 (N x AN) was employed. Three studies were conducted. In the first, 76 animals (14 N +, 20 N- , 20 AN + and 22 AN-) were used in a pasture growing system and finishing of non-castrated steers in feedlot. In this study, performance, feeding behavior in feedlot, gene expression in subcutaneous adipose tissue (SAT) and carcass characteristics were evaluated. The animals were slaughtered, and SAT samples were collected to study the relative expression of ACC, ADIPOQ, FASN, PLIN, PPAR and SREBP1 genes. Carcasses were evaluated qualitatively and quantitatively. The second study, 172 animals (34 N +, 33 N-, 46 AN + and 59 AN-) were used in growing and finishing pasture-based systems. In this study, performance and carcass characteristics were evaluated at the end of growing phase (by ultrasound) and at slaughter. The third experiment, 214 steers (48 N +, 53 N, 51 AN + and 62 AN-) were used and the physicochemical characteristics of meat and its linear correlations with the subcutaneous fat thickness (SFT) were evaluated. In meat samples prior maturation and matured for 14 days the pH, color (L*, a*, b*) losses by exudation and cooking (CL) and shear force (SF) were analyzed. Meat moisture and intramuscular fat (IMF) concentrations were determined. GMF did not influence (P < 0.05) performance, feedlot behavior and the relative expression of the studied genes. High GMF animals showed greater (P < 0.05) SFT, finishing scores, conformation scores and fat distribution scores in carcass compared to low MGA steers. The SFT and relative expression of ACC, PLIN, PPAR genes were higher (P < 0.05) in SAT of AN steers in relation to N. MGA did not influence (P > 0.05) the physicochemical and meat composition traits. Associations between SFT and attributes of pH, a *, CL and SF were significant (P < 0.05), however, with low magnitude. The GMF makes possible to obtain steers with finishing degree without influencing performance, feeding behavior and physicochemical meat attributes. The difference in fat deposition on carcass obtained by MGA is not related to the relative expression of studied genes.

CONSUMO ALIMENTAR RESIDUAL, NUTRIÇÃO PRÉ E PÓSNATAL E CRESCIMENTO DE BEZERROS NELORE

Objetivou-se com este estudo avaliar o efeito entre o consumo alimentar residual (CAR) de matrizes Nelore e o potencial de crescimento e expressão dos genes de suas progênies, com ambientes nutricionais distintos durante gestações subsequentes, em características de crescimento dos bezerros do nascimento ao desmame. Foram utilizadas 52 matrizes contemporâneas, classificadas como CAR negativo e positivo, submetidas à protocolos de inseminação artificial em tempo fixo aos dois e três anos de idade, com sêmen de mesmo touro da raça Nelore, de CAR negativo. Durante o primeiro experimento as matrizes permaneceram em piquete de Brachiaria brizantha, cultivar Marandu e durante o segundo experimento as matrizes permaneceram em confinamento, com dieta composta por silagem de milho e farelo de soja. As matrizes foram pesadas nos três meses do segundo trimestre gestacional e as progênies foram pesadas ao nascimento e periodicamente cada 28 dias, para o cálculo do peso aos 120 e 210 dias, momento do desmame. Medidas de ultrassonografia de carcaça, nas regiões da garupa, como medida longitudinal para determinação da espessura de gordura subcutânea na garupa (EGG), e medida transversal entre a 12ª e a 13ª costelas para determinação da espessura de gordura subcutânea (EGS) e a área de olho de lombo (AOL), foram tomadas nas matrizes (final do segundo trimestre gestacional) e nos bezerros (momento do desmame), também foi realizada expressão gênica dos bezerros no nascimento e no desmame. O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado e as análises de variância foram realizadas pelo procedimento MIXED do programa SAS. No primeiro experimento, a EGS das matrizes foi significativo (6,32 vs 4,97 mm, P = 0,058 CAR negativo e CAR positivo, respectivamente), para os bezerros as variáveis significativas foram peso ao nascimento (35,8 vs 32,6 kg, P = 0,035 CAR negativo e CAR positivo, respectivamente), peso aos 120 dias (163 vs 149 kg, P = 0,031 CAR negativo e CAR positivo, respectivamente), peso aos 210 dias (262 vs 239 kg, P = 0,033 CAR negativo e CAR positivo, respectivamente), ganho médio diário (1,08 vs 0,99 kg/dia, P = 0,058 CAR negativo e CAR positivo, respectivamente), EGS (2,57 vs 1,91 mm, P = 0,066 CAR negativo e CAR positivo, respectivamente), EGG (6,27 vs 5,04 mm, P = 0,012 CAR negativo e CAR positivo, respectivamente) e produção de bezerros desmamados (272 vs 244 kg/vaca, P = 0,046 CAR negativo e CAR positivo, respectivamente), e a expressão dos genes no nascimento foi significativo PPARG (P = 0,006, bezerros de matrizes CAR positivo), LPL (P = 0,087, bezerros de matrizes CAR positivo) e FABP4 (P = 0,095, bezerros de matrizes CAR positivo), no desmame apenas o gene PPARG foi significativo (P = 0,064, bezerros de matrizes CAR negativo). No segundo experimento as variáveis significativas das matrizes foram peso no 3º mês do segundo trimestre gestacional (639 vs 502 kg, P = 0,089 CAR negativo e CAR positivo, respectivamente) e ganho médio diário (0,84 vs 0,08 mm, P = 0,095 CAR negativo e CAR positivo, respectivamente), a variável significativa nos bezerros foi EGS (2,11 vs 2,83 mm, P = 0,003 CAR negativo e CAR positivo, respectivamente), e a expressão dos genes no nascimento foi significativo SCD1 (P = 0,076, bezerros de matrizes CAR positivo) e ACOX1 (P = 0,094, bezerros de matrizes CAR negativo), no desmame apenas o gene FASN foi significativo (P = 0,097, bezerros de matrizes CAR positivo). A situação nutricional (pré e pós-natal) exerce influência na deposição dos tecidos corporais no início da vida de bovinos da raça Nelore. As matrizes Nelore classificadas como CAR negativo são benéficas para os sistemas de produção brasileiros, pois consomem menos alimentos e produzem bezerros com desempenhos melhores ou semelhantes ao das matrizes classificadas como CAR positivo.

The objective of this study was to evaluate the effect between the residual food consumption (CAR) of Nellore breeds and the growth potential and expression of the genes of their progenies, with different nutritional environments during subsequent pregnancies, on growth characteristics of calves from birth to weaning. Fifty two contemporary breeders, classified as negative and positive RFI, were submitted to fixedtime artificial insemination protocols at two and three years of age, with the same negative Nelore bull semen. During the first experiment the dams remained in Brachiaria brizantha picket, cultivar Marandu and during the second experiment the dams remained in confinement with a diet composed of corn silage and soybean meal. The dams were weighed in the three months of the second gestational trimester and the progenies were weighed at birth and periodically every 28 days to calculate the weight at 120 and 210 days, weaning time. Carcass ultrasound measurements in the croup regions as a longitudinal measure for determination of subcutaneous fat thickness in the croup (FTC) and cross-sectional measurement between the 12th and 13th ribs for determination of subcutaneous fat thickness (SFT) and area loin eye (AOL), were taken in the calves (end of the second trimester of pregnancy) and calves (weaning time), was also performed gene expression of calves at birth and weaning. The experimental design was completely randomized and the analysis of variance was performed by the MIXED procedure of the SAS program. In the first experiment, the SFT of the dams was significant (6.32 vs 4.97 mm, P = 0.058 RFI negative and RFI positive, respectively), for calves the significant variables were birth weight (35.8 vs 32.6 kg, P = 0.035 RFI negative and RFI positive, respectively), weight at 120 days (163 vs 149 kg, P = 0.031 RFI negative and RFI positive, respectively), weight at 210 days (262 vs 239 kg, P = 0.033 RFI negative and positive RFI, respectively), average daily gain (1.08 vs 0.99 kg / day, P = 0.058 negative RFI and positive RFI, respectively), SFT (2.57 vs 1.91 mm, P = 0.066 RFI negative and RFI positive, respectively), FTC (6.27 vs 5.04 mm, P = 0.012 RFI negative and RFI positive, respectively) and production of weaned calves (272 vs 244 kg / cow, P = 0.046 RFI negative and RFI positive, respectively), and gene expression at birth was significant PPARG (P = 0.006, RFI positive calves), LPL (P = 0.087, RFI positive calves) and FABP4 (P = 0.095, RFI positive calf), at weaning only the PPARG gene was significant (P = 0.064, RFI negative calf). In the second experiment the significant variables of the dams were weight in the 3rd month of the second gestational trimester (639 vs 502 kg, P = 0.089 RFI negative and RFI positive, respectively) and average daily gain (0.84 vs 0.08 mm, P = 0.095 RFI negative and RFI positive, respectively), the significant variable in calves was SFT (2.11 vs 2.83 mm, P = 0.003 RFI negative and RFI positive, respectively), and gene expression at birth was significant SCD1 ( P = 0.076, RFI positive calf) and ACOX1 (P = 0.094, RFI negative calf), at weaning only the FASN gene was significant (P = 0.097, RFI positive calf). The nutritional situation (pre and postnatal) influences the deposition of body tissues in the early life of Nellore cattle. Nellore breeders classified as negative CAR are beneficial for Brazilian production systems, as they consume less food and produce calves with better or similar performances to the breeders classified as positive CAR.

Adipose-derived stem cells (ADSC) in the viability of a random pattern dorsal skin flap in rats

To evaluate the viability of random pattern dorsal skin flaps in rats after injection of adipose-derived stem cells (ADSC). Thirty five adult male Wistar EPM rats (weight 250-300 g) were distributed, at random, in two groups. I- Control (flap elevation with injection of saline solution) with fifteen animals and II- Experimental (flap elevation with injection of ADSC ) with fifteen animal. The ADSC were isolated from others five adult male rats. A dorsal skin flap measuring 10x4 cm was raised and a plastic barrier was placed between the flap and its bed in both groups and the injection (cells or saline solution) were perfomed immediately after the surgery. The percentage of flap necrosis was measured on the seventh postoperative day. The ADSC were able to replicate in our culture conditions. We also induced their adipogenic, osteogenic and chondrogenic differentiation to verify their mesenchymal stem cells potentiality in vitro. The results were statistically significant showing that the ADSC decreased the area of necrosis (p<0.05). CONCLUSIONS: The cells demonstrated adipogenic, osteogenic and chondrogenic differentiation potential in vitro. The administration of adipose-derived stem cells was effective to increase the viability of the random random pattern dorsal skin flaps in rats.(AU)

ANÁLISE MULTIVARIADA COM DADOS GENÔMICOS E TRANSCRIPTÔMICOS PARA PERFIL DE ÁCIDOS GRAXOS DA CARNE EM BOVINOS NELORE TERMINADOS EM CONFINAMENTO

A compreensão de processos regulatórios e organização molecular dos organismos vivos progrediram consideravelmente na última década. As metodologias também evoluíram com o sequenciamento de DNA e RNA e de ferramentas genômicas permitindo a análise de centenas ou milhares de genes, proteínas ou metabólitos. O uso simultâneo dessas informações auxilia na obteção de informações relevantes sobre as variáveis que envolvem as variações fenotípicas de características de interesse. O objetivo do presente estudo foi integrar dados fenotípicos, genotípicos e transcriptômicos em busca de aprimoramento sobre os mecanismos genéticos e metabólicos que determinam o perfil de ácidos graxos na carne de bovinos Nelore, a fim de contribuir para o melhoramento da composição de ácidos graxos da carne. Foram utilizados machos da raça Nelore terminados em confinamento, abatidos com média de idade 24 meses. Amostras do músculo L. thoracis, entre a 12ª a 13ª costela foram coletadas para as análises de perfil de ácidos graxos, extração de RNA e de DNA. Os resultados foram apresentados nos capítulos 2 e 3. No capítulo 2, o objetivo foi identificar genes diferencialmente expressos pelo método RNA-seq e perfil de ácidos graxos no músculo L. thoracis com uso de componentes principais (principal components: PC). Foram selecionados dois grupos de 10 animais, os quais possuíam valores de PC1 e PC2 extremos (Alto x Baixo) para os grupos somatórios de ácidos graxos (AG): ácidos graxos saturados (AGS), ácidos graxos monoinsaturados (AGMI), ácidos graxos poli-insaturados (AGPI), ômega 3 (n-3) e ômega 6 (n-6) para análise de genes diferencialmente expressos - GDE (p<0,10). Para o grupo AGS foram encontrados 33 GDE para PC1 e nenhum GDE para PC2; para AGMI foram 56 GDE em PC1 e 10 GDE para PC2; AGPI apresentou apenas dois GDE para PC1 e nenhum para PC2; para ômega 3 nenhum GDE foi encontrado para PC1 e nenhum para PC2; para ômega 6 foram sete GDE para PC1 e três GDE para PC2. A análise de enriquecimento funcional foi realizada por meio do programa DAVID v. 6.8. Dentre os GDE, foram identificados genes relacionados a metabolismo energético (UCP3), adipogênese (MBNL1), metabolismo ou catabolismo de gordura (MVD, PCYT2, LIPE e EPHX2), que desempenham um papel na biologia lipídica celular em bovinos da raça Nelore. Esses resultados contribuem para o conhecimento dos mecanismos biológicos envolvidos na expressão perfil de ácidos graxos na carne de animais Nelore. No capítulo 3, o objetivo foi utilizar dados fenotípicos, genotípicos e transcriptômicos para investigar redes causais para perfil de ácidos graxos na carne de animais da raça Nelore, para buscar genes diferencialmente expressos (GDE) relacionados com as características em estudos. Quatro regiões genômicas (eQTLs) mostraram associações significativas (p<0,05) com sete fenótipos, C16:0, C16:1, C18:0, C18:1c9, C18:2c, CLA, C22:6, e também com a expressão de 30 genes, incluindo SREBF1, MDE9, ACSF2, relacionados a metabolismo e catabolismo de lipídeos; e ABCC3, ADCY1, OGDH, metabolismo energético. O estudo apresentou relação causal entre a expressão do perfil de ácidos graxos e os processos metabólicos que envolvem a regulação de tal expressão, demonstrararam efeitos causais entre os GDE encotrados. Os resultados encontrados no presente estudo contribuíram para o conhecimento dos mecanismos biológicos envolvidos no perfil de ácidos graxos na carne de animais Nelore. Pode ser aplicado no futuro para utilizar GDE encontrados como marcadores genéticos em bovinos Nelore para selecionar a composição lipídica que contribua para melhor nutrição e a saúde do consumidor.

The understanding of regulatory processes and molecular organization of organisms has progressed considerably in the last 10 years.The methodologies also evolved with the sequencing of DNA, RNA and genomic tools allowing the analysis a lot of genes, proteins or metabolites. The simultaneous use of this information should help to obtain relevant information about the variables that result the phenotypic variations of traits of interest. The objective of the present study was to integrate phenotypic, genotypic and transcriptomic studies in order to clarify the genetic and metabolic mechanisms that determine the fatty acid profile in Nelore beef, in order to contribute to the improvement of the fatty acid composition of the meat. Nelore males were used in feedlot, coming from farms that integrate three breeding programs and slaughtered with an average of 24 months. Samples of the L. thoracis muscle between the 12th to 13th rib were collected for analysis of fatty acid profile, RNA and DNA extraction. The results were presented in chapters 2 and 3. In chapter 2, the objective was to identify genes differentially expressed by RNA-seq method and fatty acid profile in the L. thoracis muscle with the use of Principal Components (PC). Two groups of 10 animals were selected, which had PC1 and PC2 extreme values (High x Low) for the fatty acids (FA) groups: saturated fatty acids (SFA), monounsaturated fatty acids (MUFA), polyunsaturated fatty acids (PUFA), omega 3 (n-3) and omega 6 (n-6)) for analysis of differentially expressed genes - GDE (p <0.10).The SFA group, 33 DEG for PC1 and no DEG for PC2 were found; for MUFA were found 56 DEG for PC1 and 10 DEG for PC2; PUFA presented only two DEG for PC1 and none for PC2; for omega-3 no DEG found for PC1 and none for PC2; already for Omega 6, seven DEG for PC1 and three DEG for PC2 were found. Functional enrichment analysis was perfomed by DAVID v. 6.8. Among the DEG, genes about the energy metabolism (UCP3), adipogenesis (MBNL1), fat metabolism or catabolism (MVD, PCYT2, LIPE and EPHX2) have been identified that play a role in cellular lipid Nelore breed. In chapter 3, the objective was to use phenotypic, genotypic and transcriptomic data to investigate causal networks for the profile of fatty acids in the meat of Nelore animals. Four genomic regions showed significant associations (p <0.05) with seven phenotypes (C16: 0, C16: 1, C18: 0, C18: 1c9, C18: 2, CLA, C22: 6) and also with expression of 30 genes, including SREBF1, MDE9, ACSF2, related to lipid metabolism and catabolism; and ABCC3, ADCY1, OGDH, energy metabolism. The present study showed a causal relationship between the fatty acid profile expression and the metabolic processes that involve the regulation of such expression, demonstrated causal effects among the found DEG. The results should contributed to the knowledge of the biological mechanisms involved in the fatty acid profile in beef cattle. In the future, it may be to use DEG found as genetic markers in Nelore cattle to select the lipid composition that contributes to better nutrition and consumer health.

Effect of maternal feed restriction at different times of gestation on skeletal muscle development and energy metabolism of newborn goats

O desenvolvimento do tecido muscular esquelético inicia-se no período pré-natal e sua formação pode ser influenciada por diversos fatores, dentre estes, os efeitos da nutrição materna vem sendo amplamente estudado. Matrizes ruminantes, frequentemente, passam por um período de restrição alimentar durante a gestação, devido à baixa disponibilidade de alimentos em determinada época do ano. Como consequência disso, o desenvolvimento fetal pode ser afetado em diversos aspectos, dentre os principais efeitos, encontram-se alterações no comprometimento de células mesenquimais indiferenciadas, que dependendo do estímulo sofrido, irão se diferenciar em linhagens celulares especificas, definindo a composição corporal do concepto, e consequentemente seu desempenho futuro. Além disso, a restrição alimentar materna influencia o metabolismo energético do concepto, visto que, há indícios que um menor aporte de nutrientes recebido pela matriz ocasiona meios adaptativos no metabolismo fetal que favorecem a captação de glicose pelos tecidos periféricos. Apesar do conhecimento atual sobre o efeito da nutrição materna no desenvolvimento do músculo esquelético da progênie, algumas divergências ainda são encontradas na literatura, possivelmente devido aos diferentes tipos e duração dos insultos testados. Contudo, cabe elucidar em que momentos da mesma a restrição nutricional da matriz pode afetar de forma negativa a formação do tecido muscular esquelético e o metabolismo energético da progênie. Assim, o primeiro capítulo deste trabalho, corresponde a uma revisão de literatura que aborda aspectos e conceitos relacionados com o desenvolvimento do tecido muscular esquelético e as vias e mecanismos que atuam sobre o mesmo, tais como, via de sinalização da insulina e mecanismos epigenéticos. No segundo capítulo, objetivou- se avaliar os efeitos da restrição nutricional da matriz durante diferentes estágios (primeira ou segunda metade) da gestação sobre o desenvolvimento e metabolismo energético do tecido muscular esquelético da progênie. A partir dos resultados obtidos, concluímos que restrição alimentar materna na segunda metade da gestação não afeta a expressão de mRNA dos marcadores de miogênese, adipogênese e fibrogênese e também não altera a população de células mesenquimais no tecido muscular esquelético de cabritos recém-nascidos. No entanto, pode prejudicar o metabolismo energético pela redução da expressão de Hexoquinase II (HKII) no musculo esquelético do recém-nascido. Coletivamente, nossos dados sugerem que a restrição alimentar materna na primeira metade da gestação seguida de realimentação pode ter sustentado um crescimento compensatório no músculo esquelético do recém-nascido.

The skeletal muscle development begins in the prenatal period and its formation can be influenced by several factors, among them, the effect of maternal nutrition has been widely studied. Ruminant dams, frequently, experience feed restriction in certain period of gestation, due to a season of low availability of food. As a consequence, fetal development can be affected in several aspects. The main effects, include alterations in the commitment of mesenchymal stem cells, which depending on the stimuli, will differentiate into specific cell lineage, determine the body composition of the offspring, and consequently define their future performance. In addition, maternal feed restriction impairs the energy metabolism of the offspring, since there are evidences that low intake of nutrients by the dam, cause adaptative response in the fetal metabolism that favor the uptake of glucose by peripheral tissues. Despite the current knowledge about the effect of maternal nutrition on skeletal muscle development of the offspring, some divergences are still found, possibly due to the different types and duration of the insults tested. Thus, the first chapter of this study corresponds to a literature review, which addresses aspects and concepts related with the skeletal muscle development, its pathways and mechanisms, such as, insulin signaling pathway and epigenetic mechanisms. In the second chapter we aimed to investigate the effect of maternal feed restriction at different stages of gestation (first or second half) on skeletal muscle development and energy metabolism in the progeny. With the results obtained, we conclude that maternal feed restriction at early or late gestation does not affect mRNA expression of myogenesis, adipogenesis and fibrogenesis markers neither change the mesenchymal stem cell population in skeletal muscle of newborn goats in a different manner. However, energy metabolism may be impaired by reducing Hexokinase II (HKII) expression in skeletal muscle of newborns. Collectively, our data suggest that maternal feed restriction in first half of gestation followed by realimentation may have sustained a compensatory growth in newborns skeletal muscle.

ESTUDO DE BIOMARCADORES DE MERCÚRIO EM PEIXES DA AMAZÔNIA POR MEIO DA METALÔMICA E ANÁLISE DO ESTRESSE OXIDATIVO

O mercúrio é um metal tóxico, de distribuição ubíqua, com capacidade para bioacumulação e biomagnificação, que provoca alterações em biomoléculas importantes no metabolismo e contribui para o estabelecimento do estresse oxidativo em organismos aquáticos. Logo, o presente estudo teve por objetivo identificar e avaliar possíveis biomarcadores proteicos e/ou enzimáticos da toxicidade do mercúrio em peixes da região amazônica, por meio do estudo metaloproteômico e avaliação do estresse oxidativo. Foram utilizadas metodologias de fracionamento e identificação de proteínas por eletroforese bidimensional (2D PAGE) associada à espectrometria de massas (MS), mapeamento do mercúrio, em spots proteicos, por espectrometria de absorção atômica em forno de grafite (GFAAS) e avaliação de marcadores de estresse oxidativo. As espécies utilizadas foram o Plagioscion squamosissimus (corvina) e Colossoma macropomum (tambaqui), coletados na área da Usina Hidrelétrica de Jirau (rio Madeira-RO), que foram selecionadas em função da abundância populacional, interesse para a pesca e posição diferente na cadeia trófica (carnívoro e onívoro, respectivamente). Os tecidos amostrados foram o hepático, renal e muscular. Os resultados obtidos demonstraram maior concentração de mercúrio total no P. squamosissimus, espécie carnívora, e padrão de distribuição deste elemento igual para ambas as espécies(fígado>rim>músculo). Há tendência para maior atividade enzimática nos tecidos hepático e renal da espécie com maior concentração de mercúrio. Somente a atividade da glutationa peroxidase no rim e da glutationa-S-transferase no fígado do P.squamosissimus foi inferior, fato que pode ser explicado pela interação do mercúrio com essas enzimas, interferindo em sua conformação e função. Os dados obtidos por MS possibilitaram a identificação dos spots proteicos associados ao mercúrio, revelando proteínas envolvidas no metabolismo energético (gliceraldeído-3-fosfato, malato e Llactato desidrogenase, enolase, creatina quinase e fosfoglicerato mutase), transporte (hemoglobinas e , proteínas de ligação a ácidos graxos e GTPases), síntese e 3 degradação de proteínas (ubiquitina e ribossomal S27a e ribosomal 40S S24)diferenciação celular (nucleosídeo difosfato quinase), regulação gênica (pterina-4--carbinolamina desidratase e histona H4), defesa imunitária (fator de aprimoramento de células natural killer), metabolismo do cálcio (parvalbumina ), adipogênese (UPF0366), metabolismo de xenobióticos e esteroidogênese (citocromo P450scc) e sistema antioxidante (glutationa peroxidase, glutationa-S-transferase, superóxido dismutase, catalase e aldeído desidrogenase). Contribuindo assim para a compreensão dos mecanismos moleculares subjacentes à toxicidade ao mercúrio e fornecendo novas perspectivas sobre possíveis candidatos a biomarcadores de monitoramento ambiental.

Mercury is a toxic metal, of ubiquitous distribution, with capacity for bioaccumulation and biomagnification, that causes changes in important biomolecules in the metabolismo and contributes to the establishment of oxidative stress in aquatic organisms. Therefore, the present study aimed to identify and evaluate possible proteic and/or enzymatic biomarkers of the mercury toxicity in fish from the Amazon region, through a metalloproteomic study and evaluation of oxidative stress. Were used protein fractionation and identification me-thodologies by two-dimensional electrophoresis (2D PAGE) associated with mass spectrome-try (MS), mapping of mercury in protein spots by atomic absorption spectrometry in graphite furnace (GFAAS) and evaluation of oxidative stress markers. The species used were Plagios-cion squamosissimus (corvina) and Colossoma macropomum (tambaqui), collected in the area of the Jirau Hydroelectric Power Plant (Madeira-RO), which were selected due to the population abundance, interest for fishing and different position in the food chain (carnivo-rous and omnivorous, respectively). The tissues sampled were hepatic, renal and muscular. The results showed higher concentration of total mercury in P. squamosissimus, carnivorous species, and distribution pattern of this element equal to both species (liver> kid-ney>muscle). There is a tendency for greater enzymatic activity in the hepatic and renal tis-sues of the specie with the highest concentration of mercury. Only the activity of glutathione peroxidase in the kidney and glutathione-S-transferase in the liver of P.squamosissimus was lower, a fact that can be explained by the interaction of Mercury with these enzymes, inter-fering in their conformation and function. The data obtained by MS allowed the identification of the protein spots associated with mercury, revealing proteins involved in energy metabo-lism (glyceraldehyde-3-phosphate, malate and Llactate dehydrogenase, enolase, creatine kinase and phosphoglycerate mutase), transport ( and hemoglobins, fatty acid binding proteins and GTPases), synthesis and degradation of proteins (ubiquitin and ribosomal S27a and ribosomal 40S S24), cell differentiation (nucleoside diphosphate kinase), gene regulation (pterin-4--5 carbinolamine dehydratase and histone H4), immune defense (natural killer cell enhancement factor), calcium metabolism (-parvalbumin), adipogenesis (UPF0366), xeno-biotic metabolism and steroidogenesis (cytochrome P450scc) and antioxidante system (Glu-tathione peroxidase, glutathione-S-transferase, superoxide dismutase, catalase and al-dehyde dehydrogenase). Thus contributing to the understanding of the molecular mecha-nisms underlying mercury toxicity and providing new perspectives on potential candidates for environmental monitoring biomarkers.