Biotecnologias na preservação de espermatozoides felinos / Biotechnologies in the preservation of feline sperm

O gato doméstico é a única espécie da família Felídea sem risco ou iminência de extinção, diferente da maior parte dos felinos selvagens. Desta forma, o desenvolvimento e aprimoramento de diferentes biotécnicas reprodutivas, são essenciais para a manutenção da qualidade reprodutiva, tendo em vista a preservação de espécies mais vulneráveis. Além disso, as biotécnicas do sêmen são para as tecnologias reprodutivas, como a inseminação artificial (IA) e a fertilização in vitro (FIV). Sendo assim, o objetivo deste compilado bibliográfico foi abordar as principais técnicas de colheita, análise e preservação de sêmen/espermatozoides felino, assim como o uso dessas células em IA e FIV. Para a colheita do sêmen felino, diferentes métodos têm sido aplicados: ejaculação farmacológica, eletroejaculação e vagina artificial. Em caso de óbito do reprodutor, os espermatozoides recuperados do epidídimo também apresentam viabilidade reprodutiva. Ademais, a cinética espermática avaliada pelo sistema CASA, a morfologia e a morfometria são as principais análises que demonstram a qualidade espermática e refletem na fertilidade do ejaculado. O sistema CASA também avalia a trajetória individual de cada espermatozoide, que ao se agrupar em clusters, demonstra a heterogeneidade do ejaculado nas subpopulações. Contudo, os diluentes para a conservação e refrigeração dos espermatozoides felinos e as curvas de congelação ainda não estão totalmente estabelecidos e influenciam diretamente a viabilidade dos espermatozoides criopreservados. Diante disso, os resultados da utilização do sêmen felino após criopreservação são inconsistentes, sendo necessários mais estudos para elucidar melhores curvas de congelação e meios de diluentes para viabilizar a preservação do material genético dos gatos.

The domestic cat is the only species of the Felidea family without risk or imminence of extinction, unlike most wild cats. Therefore, the development and improvement of different reproductive biotechnologies are essential for the maintenance of reproductive quality for the preservation of the most vulnerable species. Furthermore, semen biotechnologies are the basis for reproductive technologies such as artificial insemination (AI) and in vitro fertilization (IVF). Thus, the objective of this bibliographic compilation was to approach the main techniques of collection, analysis, and preservation of feline semen/sperm, as well as the use of these cells in AI and IVF. For feline semen collection, different methods have been applied: pharmacological ejaculation, electroejaculation, and artificial vagina. In case of death of the sire, sperm recovered from the epididymis also show reproductive viability. Moreover, the sperm kinetics evaluated by the CASA system, the morphology, and the morphometry are the main analyzes that demonstrate sperm quality and reflect on ejaculate fertility. The CASA system also evaluates the individual path of each sperm, which, when grouped into clusters, demonstrates the heterogeneity of the ejaculate in the subpopulations. However, diluents for the conservation and refrigeration of feline sperm and freezing curves are not yet fully established and directly influence the viability of cryopreserved sperm. Therefore, the results of using feline semen after cryopreservation are inconsistent, and further studies are needed to elucidate better freezing curves and diluents to enable the preservation of the genetic material of cats.

Effects of insulin on sperm cell quality in ram semen cooled at 5°C / Efeitos da insulina sobre a qualidade das células espermáticas no sêmen ovino refrigerado a 5oC

Insulin is present in the seminal plasma and is involved in sperm activities like motility and capacitation. However, the effects of insulin on the viability of cooled ram sperm are not fully understood. Therefore, the objective of the current study was to evaluate the effect of insulin addition on ram sperm maintained at 5ºC. Sperm samples were collected from six healthy, mature Santa Inês rams. The ejaculates were divided into two aliquots with (insulin group) or without (control group) insulin (3 IU mL-1) in the semen extender, and then cooled at 5°C for 48 hours. Subsequently, the sperm cells were evaluated for motility and kinetics using computer-assisted semen analysis. The samples were evaluated for acrosomal integrity by fluorescein using isothiocyanate combined with peanut agglutinin (FITC-PNA) and membrane functionality by the hypoosmotic swelling test. The semen analysis was performed after 24 or 48 hours of cooling. There was an increased percentage of progressive sperm motility (%), straightness (%), linearity (%) and beat caudal frequency (Hz) in the insulin group after 24 and 48 hours of cooling (p < 0.05). However, insulin did not affect total sperm motility, sperm velocities (VSL, VAP and VCL) (µm seg-1), acrosomal integrity and membrane functionality during cooling (p > 0.05). In conclusion, the addition of 3 IU mL-1 insulin to ram semen extender improved the quality of sperm motility after cooling.(AU)

A insulina está presente no plasma seminal e participa de atividades espermáticas, como a motilidade e capacitação. Entretanto, os efeitos da insulina sobre a viabilidade do espermatozoide ovino resfriado ainda não estão elucidadas. Desta forma, o objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos da adição de insulina sobre o espermatozoide ovino durante o tempo de armazenamento à 5º C. Amostras espermáticas de seis carneiros da raça Santa Inês foram utilizadas. Os ejaculados foram divididos em duas aliquotas, com (grupo insulina) ou sem (grupo controle) adição de insulina (3 UI mL-1) no diluidor seminal e, posteriormente, resfriados até 5oC e mantidos armazenados por 48 horas. Em seguida, os espermatozoides foram avaliados quanto a motilidade e cinética utilizando um Sistema Computadorizado de Análise de Sêmen (CASA). Adicionalmente, as amostras espermáticas foram analizadas quanto a integridade acrosomal por meio de sondas fluorescentes (FITC-PNA) e, funcionalidade de membrana pelo teste hiposmótico. As análises seminais foram realizadas após 24 ou 48 horas de resfriamento. Foram verificados aumentos de espermatozoides com motilidade progressiva (%), retilinearidade (%), linearidade (%) e frequência de batimento caudal (BCF) (Hz) no grupo insulina após 24 ou 48 horas de resfriamento (p < 0.05). Entretanto, não houve efeito da adição de insulina sobre a porcentagem de espermatozoides moveis (%) e das velocidades espermáticas (VSL, VAP e VCL) (µm seg-1), integridade acrossomal e funcionalidade de membrana durante o resfriamento (p > 0.05). Conclui-se que adição de insulina (3 UI mL-1) no diluidor seminal melhora a qualidade da motilidade espermática durante o resfriamento.(AU)

Glutathione and IGF-1 in bovine seminal cryopreservation: oxidative stress response and pregnancy rate / [Glutationa e IGF-1 na criopreservação seminal bovina: resposta do estresse oxidativo e taxa de gestação]

The objective of this study was to evaluate the rate of conception, metabolic, and structural conditions of cryopreserved bovine sperm cells, plus extender with IGF-1 and glutathione (GSH). 12 ejaculations of Nelore bulls were used, submitted to treatments: control, gSH (2mM/mL), IGF-1 (100ng/mL) and gSH (1mM/mL) + IGF-1 (50ng/mL). After cryopreservation and thawing the semen passed the fast thermo resistance test (TTR), plasma membrane and acrosomal integrity (PIAI), mitochondrial membrane potential (AP), oxidative stress, and conception rate. Tukey test was used for the statistical analysis of the parametric variables and the Friedman test for nonparametric. The gestation percentage was compared by the Chi-square test. There was no statistical difference (P<0.05) between treatments for the TTRr variable. Otherwise in the oxidative stress evaluated with the CellROX probe was noted that the IGF-1 showed the highest number of reactive cells (P<0.05). The PIAI, AP and gestation rate showed no difference among treatments (P>0.05), with an average of conceptions of 36.58%. It is concluded that IGF-1, gSH and their association did not cause changes in sperm motility, mitochondrial potential, plasma and acrosomal membrane integrity. IGF-1 increased oxidative stress, however, there was no difference in the gestation rate among the treatments.(AU)

Objetivou-se avaliar a taxa de concepção, as condições metabólicas e estrutural das células espermáticas bovinas criopreservadas, acrescidas de diluidores com fator de crescimento semelhante à insulina do tipo 1(IGF-1) e glutationa (GSH). Foram utilizados 12 ejaculados de touros da raça Nelore, submetidos aos tratamentos: controle, gSH (2mM/mL), IGF-1 (100ng/mL) e gSH (1mM/mL) + IGF-1 (50ng/mL). Após a criopreservação e descongelação, o sêmen passou pelos testes de termorresistência rápida (TTRr), integridade de membrana plasmática e acrossomal (PIAI), alto potencial mitocondrial (AP), estresse oxidativo e taxa de concepção. Utilizou-se o teste de Tukey para as análises estatísticas das variáveis paramétricas e o teste de Friedman para as não paramétricas, com significância de 5%. A percentagem de gestação foi comparada pelo teste do qui-quadrado. Não hove diferença estatística (P<0,05) entre os tratamentos para a variável TTRr. Já no estresse oxidativo avaliado com a sonda CellROX, observou-se que o IGF-1 apresentou maior quantidade de células reativas (P<0,05), 36,38± 24,10. A PIAI, o AP e a taxa de gestação não apresentaram diferença entre tratamentos (P>0,05), com média de concepções de 36,58%. Conclui-se que o IGF-1, a gSH e a sua associação não causaram mudanças na motilidade espermática, no potencial mitocondrial, na integridade da membrana plasmática e acrossomal. O IGF-1 aumentou o estresse oxidativo, porém sem diferença na taxa de gestação entre os tratamentos.(AU)

Alterações clínicas, laboratoriais e seminais de cães naturalmente infectados por Leishmania sp / Clinical, laboratory and seminal changes of dogs naturally infected by Leishmania sp

A Leishmaniose Visceral (LV) é uma doença parasitária crônica, grave e endêmica em algumas regiões do Brasil, tendo os humanos e os cães como principais hospedeiros. Objetivou-se com este trabalho avaliar o perfil clínico, laboratorial e seminal de cães machos Sem Raça Definida (SRD) diagnosticados com LV, no município de Teresina, Piauí. Os animais foram provenientes da Gerência de Controle de Zoonoses do município e levados para o canil do Centro de Ciências Agrárias da Universidade Federal do Piauí, onde permaneceram de fevereiro a abril de 2014 sob avaliação e realização de exames. Foram coletadas amostras de sangue e sêmen de 12 cães, divididos em dois grupos, sendo 06 positivos (GI) e 06 negativos (GII) para a doença. Os resultados apontaram linfadenomegalia, emagrecimento e onicogrifose como principais sinais clínicos nos cães com LV e as alterações hematológicas foram, anemia normocítica normocrômica e trombocitopenia. A análise de bioquímica sérica revelou aumento nos índices de ureia nos animais parasitados no final do experimento, com diferença estatística entre os grupos, porém os níveis de creatinina mantiveram-se sem alteração. Quanto às análises seminais, foram encontradas diferenças significativas entre os grupos nos parâmetros de motilidade, vigor e concentração espermática, além da presença de patologias espermáticas que indicaram aumento de espermatozoides com alterações de cabeça e cauda. Conclui-se que cães com LV apresentam alterações clínicas, laboratoriais e seminais que podem prejudicar a condição geral e reprodutiva dessa espécie animal.

The Visceral Leishmaniasis (VL) is a chronic and severe parasitic disease, endemic in some regions of Brazil, and having dogs and humans as the main hosts. The objective of this work was to evaluate the clinical, laboratory and seminal profile of Mixed breed male dogs diagnosed with VL, in the city of Teresina, Piauí. The animals were obta ined from the Zoonoses Control Management of city and taken to the kennel of the Agrarian Sciences Center of the Federal University of Piauí, where they remained from February to April 2014 under evaluation and exams. Blood and semen samples were collected from 12 dogs, divided into two groups, being 06 positive (GI) and 06 negative (GII) for the disease. The results indicated lymphadenomegaly, weight loss and onychogryphosis as the main clinical signs in dogs with VL and the hematological changes were normochromic normocytic anemia and thrombocytopenia. The analysis of serum biochemistry revealed an increase in urea indexes in the parasitized animals at the end of the experiment, with statistical difference between the groups, however the levels of creatinine remained unchanged. Regarding the seminal analyzes, significant differences were found between the groups in the parameters of motility, vigor and sperm concentration, in addition to the presence of sperm pathologies that indicated an increase in sperm with changes of the head and tail. It is concluded that dogs with VL present clinical, laboratory and seminal alterations that can impair the general and reproductive condition of this animal species.

Alterações clínicas, laboratoriais e seminais de cães naturalmente infectados por Leishmania sp / Clinical, laboratory and seminal changes of dogs naturally infected by Leishmania sp

A Leishmaniose Visceral (LV) é uma doença parasitária crônica, grave e endêmica em algumas regiões do Brasil, tendo os humanos e os cães como principais hospedeiros. Objetivou-se com este trabalho avaliar o perfil clínico, laboratorial e seminal de cães machos Sem Raça Definida (SRD) diagnosticados com LV, no município de Teresina, Piauí. Os animais foram provenientes da Gerência de Controle de Zoonoses do município e levados para o canil do Centro de Ciências Agrárias da Universidade Federal do Piauí, onde permaneceram de fevereiro a abril de 2014 sob avaliação e realização de exames. Foram coletadas amostras de sangue e sêmen de 12 cães, divididos em dois grupos, sendo 06 positivos (GI) e 06 negativos (GII) para a doença. Os resultados apontaram linfadenomegalia, emagrecimento e onicogrifose como principais sinais clínicos nos cães com LV e as alterações hematológicas foram, anemia normocítica normocrômica e trombocitopenia. A análise de bioquímica sérica revelou aumento nos índices de ureia nos animais parasitados no final do experimento, com diferença estatística entre os grupos, porém os níveis de creatinina mantiveram-se sem alteração. Quanto às análises seminais, foram encontradas diferenças significativas entre os grupos nos parâmetros de motilidade, vigor e concentração espermática, além da presença de patologias espermáticas que indicaram aumento de espermatozoides com alterações de cabeça e cauda. Conclui-se que cães com LV apresentam alterações clínicas, laboratoriais e seminais que podem prejudicar a condição geral e reprodutiva dessa espécie animal.(AU)

The Visceral Leishmaniasis (VL) is a chronic and severe parasitic disease, endemic in some regions of Brazil, and having dogs and humans as the main hosts. The objective of this work was to evaluate the clinical, laboratory and seminal profile of Mixed breed male dogs diagnosed with VL, in the city of Teresina, Piauí. The animals were obta ined from the Zoonoses Control Management of city and taken to the kennel of the Agrarian Sciences Center of the Federal University of Piauí, where they remained from February to April 2014 under evaluation and exams. Blood and semen samples were collected from 12 dogs, divided into two groups, being 06 positive (GI) and 06 negative (GII) for the disease. The results indicated lymphadenomegaly, weight loss and onychogryphosis as the main clinical signs in dogs with VL and the hematological changes were normochromic normocytic anemia and thrombocytopenia. The analysis of serum biochemistry revealed an increase in urea indexes in the parasitized animals at the end of the experiment, with statistical difference between the groups, however the levels of creatinine remained unchanged. Regarding the seminal analyzes, significant differences were found between the groups in the parameters of motility, vigor and sperm concentration, in addition to the presence of sperm pathologies that indicated an increase in sperm with changes of the head and tail. It is concluded that dogs with VL present clinical, laboratory and seminal alterations that can impair the general and reproductive condition of this animal species.(AU)

Reproductive disorders affecting 21-month-old bulls assessed by andrological examination / Afecções reprodutivas que acometem tourinhos (21 meses) avaliados por meio de exame andrológico

The objective of this study was to identify the prevalence of the main pathologies that affect the genital organs of young bulls. We used a database that contained data for 6,408 young Nelore bulls. The data were collected from June to August 2004 and 2005. The bulls were evaluated by andrological examination and semen samples were collected with the aid of an electroejaculation device. The animals were classified in terms of their sexual maturity as animals suitable for reproduction, animals suitable for reproduction in terms of natural service, animals temporarily unfit for reproduction, and animals excluded from reproduction. The reproductive disorders recorded in the excluded animals were classified as penile, testicular, anterior or posterior limb, epididymal, spermatic cord, spermatic, anal sphincter, foreskin, systemic, and seminal vesicle alterations. We used descriptive statistics and analysis of variance to analyze the data. Of the 6,408 bulls evaluated, 309 animals were excluded from reproduction (4.82%). The majority of the excluded bulls (31.7%) suffered from testicular-related pathologies (testicular asymmetry, small scrotal circumference for their age, orchitis, and hydrocele (64.28%, 32.65%, 2.04%, and 1.02%, respectively), seminal vesicle alterations (31.39%), sperm defects (17.15%), and penile alterations (6.79%). Of the 309 animals excluded from reproduction, 21 (6.79%of the excluded and 0.32% of the total animals) suffered from some type of penile alteration, such as persistence of the frenulum (16/21) and total or partial penile adhesion (5/21). Confining the herd for two months and subjecting the animals to their first andrological examination at a younger than usual age, with the objective of selling them, could be why there were high incidences of seminal vesicle pathologies (owing to the homosexual behavior of the males) and of penises with high [...].

Objetivou-se identificar a prevalência das principais patologias que acometem os órgãos genitais de tourinhos jovens. Foi utilizado um banco de dados de 6408 touros jovens da raça Nelore, nos meses de junho a agosto de 2004 e 2005. Os tourinhos foram avaliados por meio de exame andrológico e o sêmen coletado com auxílio do eletroejaculador. A maturidade sexual dos animais foi classificada em: animais aptos à reprodução, animais aptos à reprodução em regime de monta natural, animais temporariamente inaptos à reprodução e animais descartados. As afecções reprodutivas registradas nos animais descartados foram distribuídas em: alterações de pênis, testículos, membros anteriores ou posteriores, epidídimo, cordão espermático, alterações espermáticas, alterações do esfíncter anal, prepúcio, sistêmicas e de vesícula seminal. Análises descritiva e de Variância foram realizadas para análise dos dados. Dos 6408 touros avaliados, 309 animais foram descartados da reprodução (4,82%).A maioria dos touros descartados (31,7%) apresentou patologias relacionadas ao testículo (assimetria testicular, baixo perímetro escrotal para a idade, orquite e hidrocele, com valores de 64,28, 32,65, 2,04 e 1,02%, respectivamente), e vesículas seminais (31,39%), seguidas pelos defeitos espermáticos (17,15% dos descartados) e alterações de pênis (6,79%). Dos 309 animais descartados da reprodução, 21 (6,79% dos descartados e 0,32% do total de animais) apresentaram algum tipo de alteração peniana como persistência do frênulo (16/21) e aderências penianas, total ou parcial (5/21). O confinamento do rebanho por dois meses e a redução da idade dos animais para realização do primeiro exame andrológico, com objetivo de venda de animais precoces, podem ser os responsáveis pela maior incidência de patologias relacionadas às vesículas seminais [...].

Reproductive disorders affecting 21-month-old bulls assessed by andrological examination / Afecções reprodutivas que acometem tourinhos (21 meses) avaliados por meio de exame andrológico

The objective of this study was to identify the prevalence of the main pathologies that affect the genital organs of young bulls. We used a database that contained data for 6,408 young Nelore bulls. The data were collected from June to August 2004 and 2005. The bulls were evaluated by andrological examination and semen samples were collected with the aid of an electroejaculation device. The animals were classified in terms of their sexual maturity as animals suitable for reproduction, animals suitable for reproduction in terms of natural service, animals temporarily unfit for reproduction, and animals excluded from reproduction. The reproductive disorders recorded in the excluded animals were classified as penile, testicular, anterior or posterior limb, epididymal, spermatic cord, spermatic, anal sphincter, foreskin, systemic, and seminal vesicle alterations. We used descriptive statistics and analysis of variance to analyze the data. Of the 6,408 bulls evaluated, 309 animals were excluded from reproduction (4.82%). The majority of the excluded bulls (31.7%) suffered from testicular-related pathologies (testicular asymmetry, small scrotal circumference for their age, orchitis, and hydrocele (64.28%, 32.65%, 2.04%, and 1.02%, respectively), seminal vesicle alterations (31.39%), sperm defects (17.15%), and penile alterations (6.79%). Of the 309 animals excluded from reproduction, 21 (6.79%of the excluded and 0.32% of the total animals) suffered from some type of penile alteration, such as persistence of the frenulum (16/21) and total or partial penile adhesion (5/21). Confining the herd for two months and subjecting the animals to their first andrological examination at a younger than usual age, with the objective of selling them, could be why there were high incidences of seminal vesicle pathologies (owing to the homosexual behavior of the males) and of penises with high [...].(AU)

Objetivou-se identificar a prevalência das principais patologias que acometem os órgãos genitais de tourinhos jovens. Foi utilizado um banco de dados de 6408 touros jovens da raça Nelore, nos meses de junho a agosto de 2004 e 2005. Os tourinhos foram avaliados por meio de exame andrológico e o sêmen coletado com auxílio do eletroejaculador. A maturidade sexual dos animais foi classificada em: animais aptos à reprodução, animais aptos à reprodução em regime de monta natural, animais temporariamente inaptos à reprodução e animais descartados. As afecções reprodutivas registradas nos animais descartados foram distribuídas em: alterações de pênis, testículos, membros anteriores ou posteriores, epidídimo, cordão espermático, alterações espermáticas, alterações do esfíncter anal, prepúcio, sistêmicas e de vesícula seminal. Análises descritiva e de Variância foram realizadas para análise dos dados. Dos 6408 touros avaliados, 309 animais foram descartados da reprodução (4,82%).A maioria dos touros descartados (31,7%) apresentou patologias relacionadas ao testículo (assimetria testicular, baixo perímetro escrotal para a idade, orquite e hidrocele, com valores de 64,28, 32,65, 2,04 e 1,02%, respectivamente), e vesículas seminais (31,39%), seguidas pelos defeitos espermáticos (17,15% dos descartados) e alterações de pênis (6,79%). Dos 309 animais descartados da reprodução, 21 (6,79% dos descartados e 0,32% do total de animais) apresentaram algum tipo de alteração peniana como persistência do frênulo (16/21) e aderências penianas, total ou parcial (5/21). O confinamento do rebanho por dois meses e a redução da idade dos animais para realização do primeiro exame andrológico, com objetivo de venda de animais precoces, podem ser os responsáveis pela maior incidência de patologias relacionadas às vesículas seminais [...].(AU)

Diferentes protocolos de congelação de sêmen canino para melhoria de sua cinética e viabilidade / Different canine semen freesing protocols to improve kinetics and viability / Diferentes protocolos de congelación de semen canino para mejoría de su cinética y viabilidad

A maioria dos protocolos utilizados para a criopreservação de sêmen canino, se baseiam em metodologias descritas para outras espécies. Assim, este estudo tem como objetivo avaliar diferentes protocolos de congelação para sêmen desta espécie doméstica. Para tanto, foram utilizados 3 machos, adultos, da raça Buldogue Campeiro, com idades entre 2 a 5 anos e fertilidade comprovada. Foram realizadas 5 colheitas de sêmen de cada animal, pelo método de manipulação digital do bulbo peniano, priorizando a segunda fração do ejaculado. As amostras colhidas foram divididas em 2 grupos, com concentração de 100 x 106 espermatozoides por mL. No grupo 1, as amostras foram diluídas diretamente em meio de congelação comercial Botudog® (Botupharma Biotecnologia Animal). No grupo 2, as amostras foram centrifugadas a 600 g por 10 minutos e em seguida, o pellet foi ressuspendido em meio de congelação comercial Botudog®. As amostras foram envasadas em palhetas de 0,5 mL com concentração de 50 x 106 espermatozoides viáveis. Em seguida, as amostras permaneceram por 1 hora em estabilização a 5ºC. Logo após, transferidas para o vapor de nitrogênio durante 10 minutos, e por fim, mergulhadas em nitrogênio e armazenadas em botijão criogênico. As palhetas foram descongeladas a 46ºC por 15 segundos. Foram avaliados os parâmetros de cinética espermática e integridade de membrana plasmática e acrossomal (IMPA, %). Verificou-se que os parâmetros de motilidade total (%), velocidade linear progressiva (VSL; µm/s), velocidade curvilínea (VCL; µm/s), linearidade (%), percentagem de espermatozoides rápidos (%) e integridade de membrana plasmática e acrossomal avaliados por citometria de fluxo foram superiores no grupo 1, em que as amostras não foram centrifugadas. Estes dados demonstram que, o protocolo para congelação de sêmen canino, utilizando o diluente Botudog®, não preconiza a centrifugação do ejaculado, previamente a congelação.(AU)

Most protocols used for canine semen cryopreservation are based on methodologies described for other species. Thus, this study aims at evaluating different freezing protocols for semen of this domestic species. To this end, 3 adult Bulldog Campeiro males aged 2 to 5 years and proven fertility were used. Five semen samples were collected from each animal using the digital manipulation of the penile bulb method, prioritizing the second fraction of the ejaculate. The collected samples were divided into 2 groups, with a concentration of 100 x 106 sperm per mL. In group 1, the samples were diluted directly into Botudog® commercial freezing medium (Botupharma Animal Biotechnology). In group 2, the samples were centrifuged at 600 g for 10 minutes and then the pellet was resuspended in commercial Botudog® freezing medium. The samples were packed in 0.5 mL straws with a concentration of 50 x 106 viable sperm. Then, the samples remained for 1 hour in stabilization at 5ºC. Afterwards, they were transferred to nitrogen vapor for 10 minutes, and finally, dipped in nitrogen and stored in cryogenic cylinder. The straws were thawed at 46ºC for 15 seconds. Parameters for spermatic kinetics, and plasma and acrosomal membrane integrity (IMPA, %) were evaluated. Total motility (%), progressive linear velocity (VSL; µm/s), curvilinear velocity (VCL; µm/s), linearity (%), percentage of rapid sperm (%) and membrane integrity were found. Plasma and acrosomal samples evaluated by flow cytometry were higher in group 1, where samples were not centrifuged. These data demonstrate that the protocol for canine semen freezing using Botudog® diluent does not recommend centrifugation of the ejaculate prior to freezing.(AU)

La mayoría de los protocolos utilizados para la criopreservación de semen canino se basan en metodologías descritas para otras especies. Por lo tanto, esta investigación tiene como objetivo evaluar diferentes protocolos de congelación para el semen de esta especie doméstica. Con este fin, se utilizaron 3 machos, adultos, de la raza Bulldog Campero, con edades entre 2 a 5 años y fertilidad comprobada. Se realizaron cinco recolecciones de semen de cada animal mediante el método de manipulación digital del bulbo del pene, priorizando la segunda fracción de la eyaculación. Las muestras recolectadas se dividieron en 2 grupos, con una concentración de 100 x 106 espermatozoides por mL. En el grupo 1, las muestras se diluyeron directamente en medio de congelación comercial Botudog® (Botupharma Animal Biotechnology). En el grupo 2, las muestras fueron centrifugadas a 600 g durante 10 minutos y luego el pellet fue resuspendido en medio de congelación comercial Botudog®. Las muestras se envasaron en paletas de 0,5 mL con una concentración de 50 x 106 espermatozoides viables. Luego, las muestras permanecieron durante 1 hora en estabilización a 5ºC. Posteriormente, se transfirieron al vapor de nitrógeno durante 10 minutos y, finalmente, se sumergieron en nitrógeno y se almacenaron en un cilindro criogénico. Las paletas se descongelaron a 46ºC durante 15 segundos. Se han evaluado los parámetros de la cinética espermática y la integridad de la membrana plasmática acrosomal (IMPA, %). Se verificó que los parámetros de motilidad total (%), velocidad lineal progresiva (VSL; µm/s), velocidad curvilínea (VCL; µm/s), linealidad (%), porcentaje de espermatozoides rápidos (%) e integridad de la membrana plasmática y acrosomal evaluadas por citometría de flujo, fueron mayores en el grupo 1, donde las muestras no fueron centrifugadas. Estos datos demuestran que, el protocolo para la congelación de semen canino, usando el diluyente Botudog®, no preconiza la centrifugación del eyaculado, previamente a la congelación.(AU)

Diferentes protocolos de congelação de sêmen canino para melhoria de sua cinética e viabilidade / Different canine semen freesing protocols to improve kinetics and viability / Diferentes protocolos de congelación de semen canino para mejoría de su cinética y viabilidad

A maioria dos protocolos utilizados para a criopreservação de sêmen canino, se baseiam em metodologias descritas para outras espécies. Assim, este estudo tem como objetivo avaliar diferentes protocolos de congelação para sêmen desta espécie doméstica. Para tanto, foram utilizados 3 machos, adultos, da raça Buldogue Campeiro, com idades entre 2 a 5 anos e fertilidade comprovada. Foram realizadas 5 colheitas de sêmen de cada animal, pelo método de manipulação digital do bulbo peniano, priorizando a segunda fração do ejaculado. As amostras colhidas foram divididas em 2 grupos, com concentração de 100 x 106 espermatozoides por mL. No grupo 1, as amostras foram diluídas diretamente em meio de congelação comercial Botudog® (Botupharma Biotecnologia Animal). No grupo 2, as amostras foram centrifugadas a 600 g por 10 minutos e em seguida, o pellet foi ressuspendido em meio de congelação comercial Botudog®. As amostras foram envasadas em palhetas de 0,5 mL com concentração de 50 x 106 espermatozoides viáveis. Em seguida, as amostras permaneceram por 1 hora em estabilização a 5ºC. Logo após, transferidas para o vapor de nitrogênio durante 10 minutos, e por fim, mergulhadas em nitrogênio e armazenadas em botijão criogênico. As palhetas foram descongeladas a 46ºC por 15 segundos. Foram avaliados os parâmetros de cinética espermática e integridade de membrana plasmática e acrossomal (IMPA, %). Verificou-se que os parâmetros de motilidade total (%), velocidade linear progressiva (VSL; µm/s), velocidade curvilínea (VCL; µm/s), linearidade (%), percentagem de espermatozoides rápidos (%) e integridade de membrana plasmática e acrossomal avaliados por citometria de fluxo foram superiores no grupo 1, em que as amostras não foram centrifugadas. Estes dados demonstram que, o protocolo para congelação de sêmen canino, utilizando o diluente Botudog®, não preconiza a centrifugação do ejaculado, previamente a congelação.(AU)

Most protocols used for canine semen cryopreservation are based on methodologies described for other species. Thus, this study aims at evaluating different freezing protocols for semen of this domestic species. To this end, 3 adult Bulldog Campeiro males aged 2 to 5 years and proven fertility were used. Five semen samples were collected from each animal using the digital manipulation of the penile bulb method, prioritizing the second fraction of the ejaculate. The collected samples were divided into 2 groups, with a concentration of 100 x 106 sperm per mL. In group 1, the samples were diluted directly into Botudog® commercial freezing medium (Botupharma Animal Biotechnology). In group 2, the samples were centrifuged at 600 g for 10 minutes and then the pellet was resuspended in commercial Botudog® freezing medium. The samples were packed in 0.5 mL straws with a concentration of 50 x 106 viable sperm. Then, the samples remained for 1 hour in stabilization at 5ºC. Afterwards, they were transferred to nitrogen vapor for 10 minutes, and finally, dipped in nitrogen and stored in cryogenic cylinder. The straws were thawed at 46ºC for 15 seconds. Parameters for spermatic kinetics, and plasma and acrosomal membrane integrity (IMPA, %) were evaluated. Total motility (%), progressive linear velocity (VSL; µm/s), curvilinear velocity (VCL; µm/s), linearity (%), percentage of rapid sperm (%) and membrane integrity were found. Plasma and acrosomal samples evaluated by flow cytometry were higher in group 1, where samples were not centrifuged. These data demonstrate that the protocol for canine semen freezing using Botudog® diluent does not recommend centrifugation of the ejaculate prior to freezing.(AU)

La mayoría de los protocolos utilizados para la criopreservación de semen canino se basan en metodologías descritas para otras especies. Por lo tanto, esta investigación tiene como objetivo evaluar diferentes protocolos de congelación para el semen de esta especie doméstica. Con este fin, se utilizaron 3 machos, adultos, de la raza Bulldog Campero, con edades entre 2 a 5 años y fertilidad comprobada. Se realizaron cinco recolecciones de semen de cada animal mediante el método de manipulación digital del bulbo del pene, priorizando la segunda fracción de la eyaculación. Las muestras recolectadas se dividieron en 2 grupos, con una concentración de 100 x 106 espermatozoides por mL. En el grupo 1, las muestras se diluyeron directamente en medio de congelación comercial Botudog® (Botupharma Animal Biotechnology). En el grupo 2, las muestras fueron centrifugadas a 600 g durante 10 minutos y luego el pellet fue resuspendido en medio de congelación comercial Botudog®. Las muestras se envasaron en paletas de 0,5 mL con una concentración de 50 x 106 espermatozoides viables. Luego, las muestras permanecieron durante 1 hora en estabilización a 5ºC. Posteriormente, se transfirieron al vapor de nitrógeno durante 10 minutos y, finalmente, se sumergieron en nitrógeno y se almacenaron en un cilindro criogénico. Las paletas se descongelaron a 46ºC durante 15 segundos. Se han evaluado los parámetros de la cinética espermática y la integridad de la membrana plasmática acrosomal (IMPA, %). Se verificó que los parámetros de motilidad total (%), velocidad lineal progresiva (VSL; µm/s), velocidad curvilínea (VCL; µm/s), linealidad (%), porcentaje de espermatozoides rápidos (%) e integridad de la membrana plasmática y acrosomal evaluadas por citometría de flujo, fueron mayores en el grupo 1, donde las muestras no fueron centrifugadas. Estos datos demuestran que, el protocolo para la congelación de semen canino, usando el diluyente Botudog®, no preconiza la centrifugación del eyaculado, previamente a la congelación.(AU)

Quality of fresh and cryopreserved semen and their influence on the rates of fertilization, hatching and quality of the larvae of Piaractus mesopotamicus / Qualidade do semen fresco e criopreservado e sua influência nas taxas de fertilização, eclosão e qualidade das larvas de Piaractus mesopotamicus

In this work, the seminal parameters of P. mesopotamicus were evaluated fresh and after cryopreservation, focusing on the sperm variables that affect the rates of fertilization, hatching and post-hatching parameters such as larval survival and morphology. The semen and oocytes from the animals were collected after extrusion, and seminal quality and oocyte fertilization were analyzed. Subsequently, a portion of each semen sample was cryopreserved and, after two days, the oocytes from three new females were fertilized with cryopreserved semen from the males. The analyzes showed that progressive motility, spermatic vigor, motility duration, number of normal sperm and secondary abnormalities were higher in fresh semen than in semen after thawing (P 0.0001). Similarly, fertilization and hatching rates and the percentage of normal and abnormal larvae in fertilized oocytes were higher when fresh semen was used (P 0.0001). The cryopreservation process affected the qualitative parameters of the semen of Piaractus mesopotamicus. The primary abnormality of spermatozoa was the main variable that influenced both fertilization and hatching rates, both in fresh and thawed semen. The second most important variable that influenced, particularly, thawed semen, was the spermatic vigor.(AU)

Neste trabalho, os parâmetros seminais de P. mesopotamicus foram avaliados fresco e após criopreservação, com foco nas variáveis espermáticas que afetam as taxas de fertilização, eclosão e os parâmetros pós-eclosão como a sobrevivência e a morfologia das larvas. Os espermatozoides e os ovócitos dos animais foram coletados após a extrusão, e a qualidade seminal e a fertilização dos ovócitos foram analisados. Posteriormente, uma porção de cada amostra de semen foi criopreservada e, após dois dias, os ovócitos de três novas fêmeas foram fertilizados com semen criopreservado dos machos. As análises mostraram que a motilidade progressiva, o vigor espermático, a duração da motilidade, o número de espermatozoides normais e anormalidades secundárias foram maiores no semen fresco do que no semen após descongelamento (P 0,0001). Da mesma forma, as taxas de fertilização e eclosão e a porcentagem de larvas normais e anormais em ovócitos fertilizados foram maiores quando o semen fresco foi utilizado (P 0,0001). O processo de criopreservação afetou os parâmetros qualitativos do sêmen de Piaractus mesopotamicus . A anormalidade primária dos espermatozoides foi a principal variável que influenciou tanto a taxa de fertilização como a de eclosão, tanto no semen fresco como no semen descongelado. A segunda variável mais importante que influenciou, particularmente, o semen descongelado, foi o vigor espermático.(AU)

Quality of fresh and cryopreserved semen and their influence on the rates of fertilization, hatching and quality of the larvae of Piaractus mesopotamicus

Abstract In this work, the seminal parameters of P. mesopotamicus were evaluated fresh and after cryopreservation, focusing on the sperm variables that affect the rates of fertilization, hatching and post-hatching parameters such as larval survival and morphology. The semen and oocytes from the animals were collected after extrusion, and seminal quality and oocyte fertilization were analyzed. Subsequently, a portion of each semen sample was cryopreserved and, after two days, the oocytes from three new females were fertilized with cryopreserved semen from the males. The analyzes showed that progressive motility, spermatic vigor, motility duration, number of normal sperm and secondary abnormalities were higher in fresh semen than in semen after thawing (P 0.0001). Similarly, fertilization and hatching rates and the percentage of normal and abnormal larvae in fertilized oocytes were higher when fresh semen was used (P 0.0001). The cryopreservation process affected the qualitative parameters of the semen of Piaractus mesopotamicus. The primary abnormality of spermatozoa was the main variable that influenced both fertilization and hatching rates, both in fresh and thawed semen. The second most important variable that influenced, particularly, thawed semen, was the spermatic vigor.

Resumo Neste trabalho, os parâmetros seminais de P. mesopotamicus foram avaliados fresco e após criopreservação, com foco nas variáveis espermáticas que afetam as taxas de fertilização, eclosão e os parâmetros pós-eclosão como a sobrevivência e a morfologia das larvas. Os espermatozoides e os ovócitos dos animais foram coletados após a extrusão, e a qualidade seminal e a fertilização dos ovócitos foram analisados. Posteriormente, uma porção de cada amostra de semen foi criopreservada e, após dois dias, os ovócitos de três novas fêmeas foram fertilizados com semen criopreservado dos machos. As análises mostraram que a motilidade progressiva, o vigor espermático, a duração da motilidade, o número de espermatozoides normais e anormalidades secundárias foram maiores no semen fresco do que no semen após descongelamento (P 0,0001). Da mesma forma, as taxas de fertilização e eclosão e a porcentagem de larvas normais e anormais em ovócitos fertilizados foram maiores quando o semen fresco foi utilizado (P 0,0001). O processo de criopreservação afetou os parâmetros qualitativos do sêmen de Piaractus mesopotamicus . A anormalidade primária dos espermatozoides foi a principal variável que influenciou tanto a taxa de fertilização como a de eclosão, tanto no semen fresco como no semen descongelado. A segunda variável mais importante que influenciou, particularmente, o semen descongelado, foi o vigor espermático.

Efeito da adição de antioxidantes sobre a viabilidade do sêmen bovino / Addition of antioxidants on the feasibility of bovine semen / Efecto de la adición de antioxidantes bajo la viabilidad del semen bovino

Os antioxidantes atuam no combate aos efeitos nocivos provocados pelos radicais livres, proporcionando melhor qualidade do sêmen fresco e criopreservado. As mudanças de temperatura provocadas durante os processos de congelação e descongelação são responsáveis pelos danos aos espermatozoides, alterando sua viabilidade e fertilidade. O estudo dos antioxidantes, os quais constituem a primeira linha de combate às espécies reativas de oxigênio (EROs), para a melhora da qualidade do sêmen criopreservado, torna-se de fundamental importância, para desenvolvimento de protocolos padrões e aplicáveis, uma vez que existem muitas controvérsias em relação ao tipo de molécula antioxidante e às doses, o momento adequado para ser acrescentado e possíveis alterações destes aos meios de criopreservação. Assim, este trabalho tem como objetivo estudar o efeito dos antioxidantes: catalase, α-tocoferol e piruvato de sódio adicionados em meio diluidor comercial para melhorar a viabilidade do sêmen bovino criopreservado. Inicialmente foram utilizados três touros, da raça Brahman, selecionados de acordo com o escore de condição corporal e exame andrológico. Oito ejaculados foram colhidos por eletroejaculação e imediatamente avaliados a motilidade e o vigor espermático.(AU)

Antioxidants act in fighting the harmful effects caused by free radicals, providing better quality of both fresh and cryopreserved semen. Changes in temperature caused during the freezing and thawing processes are responsible for damages to the sperm, changing their viability and fertility. The study of antioxidants, which constitute the first line of combat against reactive oxygen species (ROS) to improve the quality of cryopreserved semen, is of utmost importance for the development of standard and applicable protocols, since there are many controversies regarding the type and the doses of antioxidant molecules, the timing for its addition and likely changes to the cryopreservation media. This paper aims at studying the effects of catalase, α-tocopherol, and sodium pyruvate when added to commercial diluent medium to improve the viability of cryopreserved bovine semen. Initially, three Brahman bulls were selected according to the body condition score and andrological examination. Eight ejaculates were collected by electroejaculation, with motility and spermatic vigor being immediately assessed.(AU)

Los antioxidantes actúan en el combate a los efectos nocivos provocados por los radicales libres, proporcionando mejor calidad del semen fresco y criopreservado. Los cambios de temperatura provocados durante los procesos de congelación y descongelación son responsables por los daños a los espermatozoides, alterando su viabilidad y fertilidad. El estudio de los antioxidantes, que constituyen la primera línea de combate a las especies reactivas de oxígeno (ERO), para la mejora de la calidad del semen criopreservado, se hace de fundamental importancia para el desarrollo de protocolos estándares y aplicables, ya que existen muchas controversias en relación al tipo de molécula antioxidante y a las dosis, el momento adecuado para ser añadido y posibles alteraciones de éstos a los medios de criopreservación. Así, este estudio ha tenido como objetivo estudiar el efecto de los antioxidantes: catalasa, α-tocoferol y piruvato de sodio añadidos en medio diluidor comercial para mejorar la viabilidad del semen bovino criopreservado. Inicialmente se utilizaron tres toros, de la raza Brahman, seleccionados de acuerdo con la puntuación de condición corporal y examen andrológico. Ocho eyaculados fueron recogidos por electroejaculación e inmediatamente evaluados la motilidad y el vigor espermático.(AU)

Avaliação laboratorial e seminal de um cão pós-tratamento quimioterápico para tumor venéreo transmissível: relato de caso

Este trabalho relata um caso de um cão vadio, sem raça definida (SRD), capturado pela Gerência de Controle de Zoonoses de Teresina, PI e levado para o canil da Universidade Federal do Piauí. Após avaliação clínica e citológica, o animal foi diagnosticado com tumor venéreo transmissível (TVT) no pênis e tratado com sulfato de vincristina em sessões semanais com remissão dos nódulos. Após a última sessão de quimioterapia foram realizados hemograma e avaliação seminal com resultados dentro dos parâmetros de normalidade para a espécie canina. Foi possível observar algumas patologias espermáticas, porém sem comprometimento reprodutivo do animal. Portanto, conclui-se que cães tratados para TVT podem ser imediatamente reintroduzidos à reprodução.(AU)

This paper reports a case of a stray dog, breed undefined, captured by the Department Control of Zoonoses of Teresina, PI and taken to the Federal University of Piauí kennel. After clinical and cytological evaluation, the animal was diagnosed with transmissible venereal tumor (TVT) in the penis and treated with vincristine sulfate in weekly sessions with remission of the nodules. Hemogram and semen evaluation with results within the parameters of normality for the canine specie were performed after the last chemotherapy session. It was possible to observe some spermatic pathologies, but without reproductive impairment of the animal. Therefore, it is concluded that dogs treated for TVT can be immediately reintroduced for reproduction.(AU)

Avaliação laboratorial e seminal de um cão pós-tratamento quimioterápico para tumor venéreo transmissível: relato de caso

Este trabalho relata um caso de um cão vadio, sem raça definida (SRD), capturado pela Gerência de Controle de Zoonoses de Teresina, PI e levado para o canil da Universidade Federal do Piauí. Após avaliação clínica e citológica, o animal foi diagnosticado com tumor venéreo transmissível (TVT) no pênis e tratado com sulfato de vincristina em sessões semanais com remissão dos nódulos. Após a última sessão de quimioterapia foram realizados hemograma e avaliação seminal com resultados dentro dos parâmetros de normalidade para a espécie canina. Foi possível observar algumas patologias espermáticas, porém sem comprometimento reprodutivo do animal. Portanto, conclui-se que cães tratados para TVT podem ser imediatamente reintroduzidos à reprodução.

This paper reports a case of a stray dog, breed undefined, captured by the Department Control of Zoonoses of Teresina, PI and taken to the Federal University of Piauí kennel. After clinical and cytological evaluation, the animal was diagnosed with transmissible venereal tumor (TVT) in the penis and treated with vincristine sulfate in weekly sessions with remission of the nodules. Hemogram and semen evaluation with results within the parameters of normality for the canine specie were performed after the last chemotherapy session. It was possible to observe some spermatic pathologies, but without reproductive impairment of the animal. Therefore, it is concluded that dogs treated for TVT can be immediately reintroduced for reproduction.

Efeito da adição de antioxidantes sobre a viabilidade do sêmen bovino / Addition of antioxidants on the feasibility of bovine semen / Efecto de la adición de antioxidantes bajo la viabilidad del semen bovino

Os antioxidantes atuam no combate aos efeitos nocivos provocados pelos radicais livres, proporcionando melhor qualidade do sêmen fresco e criopreservado. As mudanças de temperatura provocadas durante os processos de congelação e descongelação são responsáveis pelos danos aos espermatozoides, alterando sua viabilidade e fertilidade. O estudo dos antioxidantes, os quais constituem a primeira linha de combate às espécies reativas de oxigênio (EROs), para a melhora da qualidade do sêmen criopreservado, torna-se de fundamental importância, para desenvolvimento de protocolos padrões e aplicáveis, uma vez que existem muitas controvérsias em relação ao tipo de molécula antioxidante e às doses, o momento adequado para ser acrescentado e possíveis alterações destes aos meios de criopreservação. Assim, este trabalho tem como objetivo estudar o efeito dos antioxidantes: catalase, α-tocoferol e piruvato de sódio adicionados em meio diluidor comercial para melhorar a viabilidade do sêmen bovino criopreservado. Inicialmente foram utilizados três touros, da raça Brahman, selecionados de acordo com o escore de condição corporal e exame andrológico. Oito ejaculados foram colhidos por eletroejaculação e imediatamente avaliados a motilidade e o vigor espermático. Em seguida, foram diluídos conforme os grupos experimentais em meio Botubov® (Botupharma Biotecnologia Animal) com adição do antioxidante piruvato de sódio nas concentrações de 1,5 µM, 3 µM e 5 µM e em seguida, as amostras foram congeladas. Numa segunda etapa, serão utilizados outros antioxidantes e concentrações, conforme descrito: 1) Diluidor BotuBov®; 2) Diluidor BotuBov® contendo 7% de crioprotetor e catalase nas concentrações de 20, 80 e 200 UI; 3) Diluidor BotuBov® contendo 7% de crioprotetor e α-tocoferol nas concentrações de 50 µM, 100 µM e 150 µM; 4) Diluidor BotuBov® contendo 7% de crioprotetor e piruvato de sódio nas concentrações de 1,5 µM; 3,5 µM e 5 µM. Após a descongelação do sêmen com a utilização do piruvato, as amostras foram analisadas quanto à motilidade total e progressiva e vigor espermático. Verificou-se que a adição de piruvato de sódio na concentração de 1,5 µM proporcionou uma melhora nos parâmetros de motilidade total e vigor espermático, demonstrando os benefícios de seu uso.(AU)

Antioxidants act in fighting the harmful effects caused by free radicals, providing better quality of both fresh and cryopreserved semen. Changes in temperature caused during the freezing and thawing processes are responsible for damages to the sperm, changing their viability and fertility. The study of antioxidants, which constitute the first line of combat against reactive oxygen species (ROS) to improve the quality of cryopreserved semen, is of utmost importance for the development of standard and applicable protocols, since there are many controversies regarding the type and the doses of antioxidant molecules, the timing for its addition and likely changes to the cryopreservation media. This paper aims at studying the effects of catalase, α-tocopherol, and sodium pyruvate when added to commercial diluent medium to improve the viability of cryopreserved bovine semen. Initially, three Brahman bulls were selected according to the body condition score and andrological examination. Eight ejaculates were collected by electroejaculation, with motility and spermatic vigor being immediately assessed. Subsequently, the samples were diluted according to the experimental groups in Botubov® (Botupharma Animal Biotechnology) medium with the addition of sodium pyruvate at concentrations of 1.5 µM, 3 µM and 5 µM and were subsequently frozen. In a second step, other antioxidants and concentrations will be used, as follows: 1) BotuBov® Diluent; 2) BotuBov® diluent containing 7% cryoprotectant and catalase at concentrations of 20, 80 and 200 IU; 3) BotuBov® diluent containing 7% cryoprotectant and α-tocopherol at concentrations of 50 µM, 100 µM and 150 µM; 4) BotuBov® diluent containing 7% cryoprotectant and sodium pyruvate at concentrations of 1.5 µM; 3.5 µM and 5 µM. After thawing the semen with pyruvate, the samples were analyzed for total and progressive motility and spermatic vigor. It was found that the addition of 1.5 µM sodium pyruvate provided an improvement in total motility and sperm vigor parameters, demonstrating the benefits of its use.(AU)

Los antioxidantes actúan en el combate a los efectos nocivos provocados por los radicales libres, proporcionando mejor calidad del semen fresco y criopreservado. Los cambios de temperatura provocados durante los procesos de congelación y descongelación son responsables por los daños a los espermatozoides, alterando su viabilidad y fertilidad. El estudio de los antioxidantes, que constituyen la primera línea de combate a las especies reactivas de oxígeno (ERO), para la mejora de la calidad del semen criopreservado, se hace de fundamental importancia para el desarrollo de protocolos estándares y aplicables, ya que existen muchas controversias en relación al tipo de molécula antioxidante y a las dosis, el momento adecuado para ser añadido y posibles alteraciones de éstos a los medios de criopreservación. Así, este estudio ha tenido como objetivo estudiar el efecto de los antioxidantes: catalasa, α-tocoferol y piruvato de sodio añadidos en medio diluidor comercial para mejorar la viabilidad del semen bovino criopreservado. Inicialmente se utilizaron tres toros, de la raza Brahman, seleccionados de acuerdo con la puntuación de condición corporal y examen andrológico. Ocho eyaculados fueron recogidos por electroejaculación e inmediatamente evaluados la motilidad y el vigor espermático. A continuación, se diluyeron de acuerdo con los grupos experimentales en medio Botubov (Botupharma Biotecnología Animal) con adición de antioxidante piruvato de sodio a concentraciones de 1,5 µM, 3 µM y 5 µM, y luego las muestras se congelaron. En una segunda etapa, se utilizarán otros antioxidantes y concentraciones, según se describe: 1) Diluidor BotuBov®; 2) Diluidor BotuBov® conteniendo 7% de crioprotector y catalasa en las concentraciones de 20, 80 y 200 UI; 3) Diluidor BotuBov® que contiene 7% de crioprotector y α-tocoferol en las concentraciones de 50 µM, 100 µM y 150 µM; 4) Diluidor BotuBov® conteniendo 7% de crioprotector y piruvato de sodio en las concentraciones de 1,5 µM; 3,5 µM y 5 µM. Después de la descongelación del semen con la utilización del piruvato, las muestras fueron analizadas en cuanto a la motilidad total y progresiva y vigor espermático. Se comprobó que la adición de piruvato de sodio en la concentración de 1,5 µM proporcionó una mejora en los parámetros de motilidad total y vigor espermático, demostrando los beneficios de su uso.(AU)

Evaluation of sperm quality of Erythrolamprus poecilogyrus sublineatus (Cope, 1860) (Serpentes, Dipsadidae)

Abstract Erythrolamprus poecilogyrus sublineatus (Cope, 1860), is a species widely distributed in the Pampa Domain, occurring in Rio Grande do Sul, Argentina and Uruguay, mainlyin the pampa region. In the coastal region of southern Brazil this is serpent is considered one of the most abundant. The purpose of the present study is to describe the techniques of sperm evaluation in vitro for E. poecilogyrus sublineatus in the coastal plain of Rio Grande do Sul, Brazil. After laparatomy the efferent vases were collected and the semen was diluted in 1ml Beltsville Thawing Solution. The characteristics of motility, membrane integrity, mitochondria, acrosome, DNA, cell viability and cellular functionality were evaluated. Fluorescent probes were used for the evaluation of sperm structure in epifluorescence microscope. With the techniques described, it was possible to identify intact and injured cells, enabling the determination of cell characteristics for the spring season (October and November). It was observed in the analyses that 80% of sperm cells were mobile and that 84.1 ± 8.0% of sperm membranes were intact. The standards found were of 48 ± 13.8% of intact acrosome, 73.6 ± 6.0 of perfect DNA and of 91.8 ± 4.0 of functional mitochondria. Thus, these values from the sperm analysis can be used as standards for the species Erythrolamprus poecilogyrus sublineatus.

Resumo Erythrolamprus poecilogyrus sublineatus (Cope, 1860), é uma espécie amplamente distribuída no Domínio Pampa, ocorrendo no Rio Grande do Sul, Argentina e Uruguai, principalmente na região dos pampas. Na região costeira do extremo sul do Brasil essa é uma das serpentes consideradas mais abundantes. O objetivo deste estudo é descrever as técnicas de avaliação espermática in vitro para E. poecilogyrus sublineatus da planície costeira do Rio Grande do Sul, Brasil. Após laparatomia os vasos eferentes foram coletados e o sêmen diluído em 1ml Beltsville Thawing Solution. Foram avaliadas as características de motilidade, integridade de membrana, mitocôndria, acrossoma, DNA, viabilidade celular e funcionalidade celular. Foram utilizadas sondas fluorescentes para avaliação das estruturas espermática em microscópio de epifluoescência. Com as técnicas descritas foram possível identificar células integras e lesadas, podendo determinar as características celulares para o período de primavera (outubro e novembro). Nas análises foi observado que 80% das células espermáticas estavam móveis e que 84,1 ± 8,0% das membranas espermáticas estavam íntegras. Os padrões encontrados para foram de 48 ± 13,8% de acrossoma íntegro, 73,6 ± 6,0 de DNA íntegro e de 91,8 ± 4,0 de mitocôndria funcional. Desta forma, esses valores das análises espermáticas podem ser utilizados como padrão para a espécie Erythrolamprus poecilogyrus sublineatus.

Quality of fresh and cryopreserved semen and their influence on the rates of fertilization, hatching and quality of the larvae of Piaractus mesopotamicus

Abstract In this work, the seminal parameters of P. mesopotamicus were evaluated fresh and after cryopreservation, focusing on the sperm variables that affect the rates of fertilization, hatching and post-hatching parameters such as larval survival and morphology. The semen and oocytes from the animals were collected after extrusion, and seminal quality and oocyte fertilization were analyzed. Subsequently, a portion of each semen sample was cryopreserved and, after two days, the oocytes from three new females were fertilized with cryopreserved semen from the males. The analyzes showed that progressive motility, spermatic vigor, motility duration, number of normal sperm and secondary abnormalities were higher in fresh semen than in semen after thawing (P 0.0001). Similarly, fertilization and hatching rates and the percentage of normal and abnormal larvae in fertilized oocytes were higher when fresh semen was used (P 0.0001). The cryopreservation process affected the qualitative parameters of the semen of Piaractus mesopotamicus. The primary abnormality of spermatozoa was the main variable that influenced both fertilization and hatching rates, both in fresh and thawed semen. The second most important variable that influenced, particularly, thawed semen, was the spermatic vigor.

Resumo Neste trabalho, os parâmetros seminais de P. mesopotamicus foram avaliados fresco e após criopreservação, com foco nas variáveis espermáticas que afetam as taxas de fertilização, eclosão e os parâmetros pós-eclosão como a sobrevivência e a morfologia das larvas. Os espermatozoides e os ovócitos dos animais foram coletados após a extrusão, e a qualidade seminal e a fertilização dos ovócitos foram analisados. Posteriormente, uma porção de cada amostra de semen foi criopreservada e, após dois dias, os ovócitos de três novas fêmeas foram fertilizados com semen criopreservado dos machos. As análises mostraram que a motilidade progressiva, o vigor espermático, a duração da motilidade, o número de espermatozoides normais e anormalidades secundárias foram maiores no semen fresco do que no semen após descongelamento (P 0,0001). Da mesma forma, as taxas de fertilização e eclosão e a porcentagem de larvas normais e anormais em ovócitos fertilizados foram maiores quando o semen fresco foi utilizado (P 0,0001). O processo de criopreservação afetou os parâmetros qualitativos do sêmen de Piaractus mesopotamicus . A anormalidade primária dos espermatozoides foi a principal variável que influenciou tanto a taxa de fertilização como a de eclosão, tanto no semen fresco como no semen descongelado. A segunda variável mais importante que influenciou, particularmente, o semen descongelado, foi o vigor espermático.

Avaliação da qualidade do sêmen de cachaços: o que é possível ser feito? / Evaluation of the boar semen quality: what can be done?

A utilização de técnicas avançadas para a analise de sêmen de cachaços apesar de ainda ser restrita adeterminados setores do sistema de produção de suínos, tem se tornado aplicável e de extrema importânciadentro, tanto de centrais comerciais de sêmen como nos centros de pesquisas ao redor do mundo. Dentre taistecnologias, pode-se citar as análises computadorizadas da motilidade associada a avaliação da morfometriaespermática, além das avaliações por sondas fluorescentes averiguando-se as integridades dos mais diferentescompartimentos celulares, podendo tais técnicas serem realizadas não apenas por microscopia deepifluorescência, mas também por citometria de fluxo. Entretanto, deve-se destacar a não individualização dastécnicas abordadas, devido a inter-relação das estruturas espermáticas perante o processo de fertilização. Assim,as diversas avaliações devem ocorrer simultaneamente, tendo em vista a necessidade da perfeita integridadedeste conjunto de estruturas para a perfeita fisiologia da célula espermática.(AU)

The use of advanced boar semen analysis although it is restricting to certain sectors of the swineproduction system, it is becoming relevant and extremely important in both commercial AI and research centersaround the world. Of all technologies available, one may mention the computerized motility analysis (CASA)combined with sperm morphology (ASMA), and the use of fluorescent probes to verify the integrity of thedifferent cellular compartments by means of epifluorescence microscopy or flow cytometry. However, it shouldbe emphasized the non-individualization of the techniques discussed, due to the necessity of the perfect integrityof this set of structures for the perfect sperm cell physiology.(AU)

Avaliação da qualidade do sêmen de cachaços: o que é possível ser feito? / Evaluation of the boar semen quality: what can be done?

A utilização de técnicas avançadas para a analise de sêmen de cachaços apesar de ainda ser restrita adeterminados setores do sistema de produção de suínos, tem se tornado aplicável e de extrema importânciadentro, tanto de centrais comerciais de sêmen como nos centros de pesquisas ao redor do mundo. Dentre taistecnologias, pode-se citar as análises computadorizadas da motilidade associada a avaliação da morfometriaespermática, além das avaliações por sondas fluorescentes averiguando-se as integridades dos mais diferentescompartimentos celulares, podendo tais técnicas serem realizadas não apenas por microscopia deepifluorescência, mas também por citometria de fluxo. Entretanto, deve-se destacar a não individualização dastécnicas abordadas, devido a inter-relação das estruturas espermáticas perante o processo de fertilização. Assim,as diversas avaliações devem ocorrer simultaneamente, tendo em vista a necessidade da perfeita integridadedeste conjunto de estruturas para a perfeita fisiologia da célula espermática.

The use of advanced boar semen analysis although it is restricting to certain sectors of the swineproduction system, it is becoming relevant and extremely important in both commercial AI and research centersaround the world. Of all technologies available, one may mention the computerized motility analysis (CASA)combined with sperm morphology (ASMA), and the use of fluorescent probes to verify the integrity of thedifferent cellular compartments by means of epifluorescence microscopy or flow cytometry. However, it shouldbe emphasized the non-individualization of the techniques discussed, due to the necessity of the perfect integrityof this set of structures for the perfect sperm cell physiology.

Efeito do Kaempferol em células espermáticas de ovinos

O kaempferol é um flavanoide com inumeras propriedades terapeuticas, dentre elas antitumoral, anti-inflamatório, antifúngico e antioxidante em diversos tipos celulares. Date disso, o objetivo do estudo foi avaliar, o efeito do kaempferol no sêmen refrigerado de ovinos, em concentraçoes de 20 µg/ml a 0,0001 µg/ml em tempos de exposição diferentes 2h, 24h e 48h adicionados ao diluente base. Foram feitas analises de cinetica atraves do sistema computer assisted sperm analysis (CASA) e funcionalidade célular por citometria de fluxo. Os resultados encontrados foram positivos referentes a ação antioxidante do Kaempferol, pois nas 24 horas de exposição, foi observado a redução significativa, das espécies reativas de oxigênio e peroxidação lipídica, os quais são marcadores de estresse oxidativo. No presente estudo concluímos que a adição de kaempferol auxiliou na redução do estresse oxidativo, peroxidação lipídica e a fluidez de membrana, não apresentado nenhuma ação negativa sobre a cinética, parâmetros de qualidade de organelas e bioquímica espermática.

Kaempferol is a flavanoid with numerous therapeutic properties, including antitumor, anti-inflammatory, antifungal and antioxidant in several cell types. Furthermore, the aim of the study was to evaluate the effect of kaempferol on refrigerated semen of sheep, at concentrations from 20 µg/ml to 0.0001 µg/ml at different exposure times 2h, 24h and 48h added to the base diluent. Kinetic analyzes were performed using the computer assisted sperm analysis (CASA) system and cell functionality by flow cytometry. The results found were positive regarding the antioxidant action of Kaempferol, because within 24 hours of exposure, a significant reduction was observed in reactive oxygen species and lipid peroxidation, which are markers of oxidative stress. In the present study, we concluded that the addition of kaempferol helped to reduce oxidative stress, lipid peroxidation and membrane fluidity, not showing any negative action on kinetics, organelle quality parameters and sperm biochemistry.