Criptococose respiratória e cutânea em gato de vida livre da cidade de Sobral/CE / Respiratory and cutaneous Cryptococcosis in a free-range cat in the city of Sobral/CE

A criptococose é uma doença infecciosa sistêmica de origem fúngica, causada pelas espécies: Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii. É considerada uma micose oportunista capaz de infectar mamíferos domésticos, animais silvestres e seres humanos, sendo classificada como uma doença zoonótica. Esse patógeno é encontrado principalmente em ambientes contaminados por fezes de pombos (Columba livia), que atuam como importantes fontes de infecção do fungo. De acordo com sua disseminação para os tecidos do organismo, a doença pode causar diferentes síndromes tanto em seres humanos como em animais síndrome respiratória, síndrome neurológica, síndrome ocular e síndrome cutânea. O diagnóstico pode ser realizado através da pesquisa de antígeno polissacarídeo circulante no soro ou líquor, por meio da prova de látex. Testes imunoenzimáticos (ELISA) também podem ser realizados para detecção de antígenos dessa levedura. Exame citológico, histopatológico e cultura fúngica para a identificação do agente tornam o diagnóstico da criptococose mais fácil. O tratamento é baseado no uso de antifúngicos e sua escolha é realizada através da avaliação dos sinais clínicos observados. Diante do exposto, o objetivo deste trabalho é relatar um caso de criptococose respiratória e cutânea em felino doméstico de vida livre da cidade de Sobral/CE.

Cryptococcosis is a systemic infectious disease of fungal origin caused by the species: Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii. It is considered an opportunistic mycosis capable of infecting domestic mammals, wild animals, and humans, being classified as a zoonotic disease. This pathogen is mainly found mainly in environments contaminated by pigeon (Columba livia) feces, which act as important sources of fungal infection. According to its spread to the body's tissues, the disease can cause different syndromes in both humans and animals: respiratory syndrome, neurological syndrome, ocular syndrome, and cutaneous syndrome. The diagnosis can be made through the investigation of circulating polysaccharide antigen in serum or cerebrospinal fluid using the latex test. Immunoenzymatic tests (ELISA) can also be performed to detect yeast antigens. Cytological examination, histopathological examination, and fungal culture to identify the agent make the diagnosis of cryptococcosis easier. The treatment is based on the use of antifungals, and its choice is made through the evaluation of the observed clinical signs. In this context, this work aims to report a case of respiratory and cutaneous cryptococcosis in a free-range domestic cat in the city of Sobral/CE.

PERMEABILIDADE INTESTINAL, TRANSLOCAÇÃO BACTERIANA E OCORRÊNCIA DE OSTEOMIELITE VERTEBRAL EM FRANGOS SUBMETIDOS AO ESTRESSE ENTÉRICO

A osteomielite vertebral é uma doença emergente na avicultura mundial, caracterizada por imobilidade e mortalidade de frangos e matrizes de corte devido ao processo infeccioso na quarta vértebra torácica (T4). Assim, objetivou-se desenvolver um modelo experimental induzidopelo estresse entéricopara o melhor entendimento da patogênese de osteomielite vertebral, além de investigar o papel do estresse entérico na permeabilidade intestinal e translocação bacteriana para fígado, baço e coluna vertebral de frangos de corte. As cepas de Enterococcus cecorum(11 TXs e 11 TXb) que apresentavam os fatores de virulência: polissacarídeo capsular I e II, antígeno de polissacarídeo enterocócico M e P, proteína lipoato sintase e proteína de superfície LPTXG3 foram inoculadas após estresse entérico induzido pela utilização de dexametasona por sete dias na ração (DEX), grãos secos de destilaria com solúveis- DDGS (30%) na dieta e a restrição alimentar (RA) de 24 horas. Os achados macroscópicos de lesões responsáveis pela claudicação afetaram 19,37% (186/960) das aves submetidas ao estresse entérico e 9,06% (87/960) apresentaram osteomielite vertebral. O grupo que apresentou inflamação entérica induzida porDDGS na dieta apresentou aumento (p<0,05)na ocorrência de osteomielite vertebral e claudicação.A permeabilidade intestinal, avaliada pelos níveis séricos de FITC-d, aumentou(p<0,05) significativamentenos tratamentosDEX aos 16, 23 e 30 dias de idade e RA aos 30 dias de idade. Após inoculação de E. cecorum, houve aumento (p<0,05) da contagem de bactérias microaerófilas no fígado e baço no grupo DEX aos 20 dias. Da mesma forma, foi verificado um aumento dessas bactérias na T4 no grupo RA aos 27 dias de idade e no grupo DEX aos 34 dias.Por meio de isolamento bacteriano, identificou-se uma diversidade de bactérias como espécies de Enterococcus, Streptococcus, Staphylococcus, Lactobacillus, bem como Escherichia colina T4, sugerindo que outros agentes microbianos, além de E. cecorum, podem estar envolvidos nas lesões de osteomielite vertebral.Portanto, o modelo de reprodução experimental de osteomielite vertebral induzido pelo estresse entérico em frangos de corte possibilita o estudo de lesões da osteomielite vertebral, o que favorece sua utilização na pesquisa aplicada de estratégias preventivas e terapêuticas para essa doença. Além disso, conclui-se que o estresse entérico aumenta a permeabilidade intestinal e propicia a translocação de bactérias oportunistas para o fígado, baço e coluna vertebral de frangos de corte podendo levar o desenvolvimento de osteomielite vertebral em frangos de corte.

Vertebral osteomyelitis is an emerging disease in the world poultry industry, characterized by immobility and mortality of broilers andbreeders chicken due to the infectious process in the fourth thoracic vertebra (T4). The aim of this study was to develop an experimental model induced by enteric stress to better understand the pathogenesis of vertebral osteomyelitis, as well as to investigate the role of enteric stress in intestinal permeability and bacterial translocation to liver, spleen and vertebral column of broiler chickens. Enterococcus cecorum strains (11 TXs and 11 TXb) that presented the virulence genes virulence factors: capsular polysaccharide I and II, enterococcal polysaccharide antigen M and P, protein lipoate synthase and surface protein LPTXG3 were inoculated after enteric stress induced by the use of dexamethasone for seven days in the diet (DEX), dried distilled grain with solubles - DDGS (30%) in the diet and the 24-hour food restriction (RA). The macroscopic findings of lesions responsible for claudication affected 19.37% (186/960) of the birds submitted to enteric stress and 9.06% (87/960) had vertebral osteomyelitis.The group that presented enteric inflammation induced by DDGS in the diet had an increase (p<0.05) in the incidence of vertebral osteomyelitis and lameness. The intestinal permeability, as assessed by serum FITC-d levels, increased (p<0.05) inDEX at 16, 23 e 30 days of age and RA at30 days of age. After inoculation of E. cecorum, there was an increase (p<0.05) in microaerophilic bacteria in the liver and spleen in the DEX group at 20 days.Likewise, an increase of these bacteria was observed in T4 in the RA group at 27 days of age and in the DEX group at 34 days.Bacterial isolation identified a diversity of bacteria as species of Enterococcus, Streptococcus, Staphylococcus, Lactobacillus, as well as Escherichia coli in T4,suggesting that other microbial agents besides E. cecorum may be involved in vertebral osteomyelitis lesions. Therefore, the experimental reproduction model of vertebral osteomyelitis induced by enteric stress in broilers makes it possible to study vertebral osteomyelitis lesions, which favors its use in the applied research of preventive and therapeutic strategies for this disease. In addition, it is concluded that enteric stress increases intestinal permeability and promotes the translocation of opportunistic bacteria to the liver, spleen and spine of broiler chickens, which may lead to the development of vertebral osteomyelitis in broilers.

Avaliação do teste platelia EIA® Aspergillus para diagnóstico da aspergilose em pinguins e interferência da contaminação ambiental

A aspergilose é uma doença infecciosa não contagiosa causada por fungos do gênero Aspergillus, especialmente aqueles pertencentes à secção Fumigati e já foi descrita em diversas espécies, dentre elas os pinguins. As altas taxas de mortalidade atribuídas a esta doença, são decorrentes especialmente da dificuldade de realização de um diagnóstico precoce. Técnicas diagnósticas diretas para detecção do antígeno fúngico galactomanana (GM) em amostras clínicas têm sido utilizadas de modo crescente para o diagnóstico de aspergilose invasiva (AI) em humanos. A GM constitui-se de um polissacarídeo presente na parede celular de fungos do gênero Aspergillus. Embora sua aplicabilidade já esteja estabelecida para o diagnóstico precoce da AI em humanos, uma única testagem sérica por ELISA sanduíche a partir do kit comercial Platelia® Aspergillus EIA, deve ser interpretada com cautela, pois a técnica apresenta algumas limitações. Em animais sua aplicabilidade ainda não é bem elucidada. Com isso, o estudo objetivou avaliar a eficácia do teste Platelia EIA® Aspergillus para diagnóstico da aspergilose em pinguins e a influência da contaminação ambiental nos resultados do mesmo. Foram incluídas no estudo diagnóstico, amostras séricas de 29 pinguins de Magalhães que vieram a óbito por aspergilose (grupo caso) e 23 hígidos (grupo controle), as quais foram testadas a partir do kit para ensaio imunoenzimático tipo sanduíche em microplaca (Platelia Aspergillus EIA®, Bio-Rad) conforme as instruções do fabricante. Para o experimento de interferência ambiental foram utilizados 12 isolados de A. fumigatus da micoteca do Laboratório de Micologia da Faculdade de Medicina da FURG/FAMED incluindo cepas padrão, isolados clínicos de pinguins, humanos e isolados ambientais. Foram utilizadas para padronização do inoculo etapa de filtração, sedimentação, Pour-plate e espectrofotometria de acordo com CLSI, 2008. A detecção de GM foi realizada em três diluições sucessivas dos inoculos seguindo instruções do fabricante. Ao final foi calculado o índice de GM dividindo o valor da média da DO da duplicata da amostra (clínica ou da cepa testada) pelo valor da média da DO da duplicata da amostra de cut-off fornecida pelo kit. O índice de GM sérica não diferiu entre os animais do grupo caso e controle (pKW=0,097). A partir dos valores determinados pelas coordenadas da curva ROC, quatro diferentes pontos de corte (0,5, 1,0, 1,5 e 2,0) foram analisados, resultando em taxas de sensibilidade variando de 86,2% a 34,5%, e de especificidade entre 87% e 26,1%. Já na avaliação da interferência ambiental, a menor concentração de propágulos fúngicos de Aspergillus fumigatus capaz de gerar um resultado positivo foi de 480 conidios, sendo a concentração mediana de 4,8x103. Conclui-se que a detecção sérica de GM pelo teste Platelia Aspergillus EIA® não parece ser útil para o diagnóstico da aspergilose em pinguins naturalmente infectados, resultando em muitos falso-positivos. E, em relação a quantidade de conídios de A. fumigatus necessária para determinar resultado falso-positivo no teste de detecção de GM, evidenciou-se que há necessidade de uma maciça contaminação ambiental, por no mínimo 500 conídios, para que haja interferência no Platelia Aspergillus EIA®.

Aspergillosis is a non-contagious infectious disease caused by fungi of the genus Aspergillus, especially those belonging to the Fumigati section and has been describe in several species, among them penguins. The high mortality rates attributed to this disease are due in particular to the difficulty of performing an early diagnosis. Direct diagnostic techniques for the detection of galactomannan (GM) fungal antigen in clinical samples have been increase used for the diagnosis of invasive aspergillosis (AI) in humans. GM is a polysaccharide present in the cell wall of fungi of the genus Aspergillus. Although its applicability from the demonstration of circulating GM kinetics is already establish for the early diagnosis of AI in humans, a single serum test by Platelia® Aspergillus EIA should be interpreted with caution, since the technique has some limitations. In animals, its applicability is still not well understood. The objective of this study was to evaluate the effectiveness of the Platelia EIA® Aspergillus test for the diagnosis of aspergillosis in penguins and the influence of environmental contamination on the results. Serological samples of 29 Magellanic penguins that died of aspergillosis (case group) and 23 healthy (control group) were included in the diagnostic study, which were tested from the micro plate sandwich immunoenzymatic assay kit (Platelia Aspergillus EIA ®, Bio-Rad) according to the manufacturer's instructions. For the environmental interference experiment, 12 isolates of A. fumigatus from the mycology laboratory of the FURG / FAMED School of Medicine including standard strains, clinical isolates of penguins, humans and environmental isolates were use. The filtration, sedimentation, Pour-plate and spectrophotometry steps was use to standardize the inoculum according to CLSI, 2008. GM detection was performing on three successive dilutions of the inoculums following the manufacturer's instructions. At the end, the GM index was calculated by dividing the mean OD value of the sample duplicate (clinical or strain tested) by the mean OD value of the duplicate cut-off sample provided by the kit. The serum GM index did not differ between the animals in the control and the case group (pKW = 0.097). From the values determined by the coordinates of the ROC curve, four different cutoff points (0.5, 1.0, 1.5 and 2.0) were analyzed, resulting in sensitivity rates ranging from 86.2% to 34, 5%, and specificity between 87% and 26.1%. In the evaluation of environmental interference, the lowest concentration of fungal propagates of Aspergillus fumigatus capable of generating a positive result was 480 conidia, with a median concentration of 4.8x103. It is conclude that the serum detection of GM by the Platelia Aspergillus EIA® test does not seem to be useful for the diagnosis of aspergillosis in naturally infected penguins, resulting in many false positives. And, in relation to the amount of A. fumigatus conidia required to determine false-positive results in the GM detection test for AI diagnosis, it was shown that the degree of environmental contamination capable of causing interference in the Platelia Aspergillus EIA® test Be robust, of about 500 conidia.

Xantana como adjuvante em vacina contra herpes suíno tipo 1 / Xantana as an adjuvant in swine herpes vaccine type 1

Vacinação tem sido uma prática comum para prevenir ou minimizar os sintomas de doenças causadas por agentes infecciosos. Vacinas têm sido desenvolvidas utilizando-se microrganismos atenuados ou inativados. Recentemente peptídeos sintéticos e proteínas recombinantes constituem a base da nova geração de vacinas. Entretanto, ainda há necessidade de associação destes antíg¬enos a adjuvantes para potencializar seu efeito imunológico. Embora várias substâncias tenham sido avaliadas para sua utilização em vacinas de uso veterinário, a produção de vacinas continua atrelada à utilização dos sais de alumínio ou de emulsões oleosas. O polissacarídeo produzido pela bactéria Xanthomonas sp. é uma nova alternativa para utilização como adjuvante vacinal. O objetivo deste estudo foi avaliar a ação adjuvante da Xantana na resposta humoral de camundongos a uma vacina de herpes suíno tipo 1 (SuHV-1). Os animais foram divididos em cinco grupos, utilizando adjuvantes diferentes para cada grupo. Os títulos de anticorpos foram determinados por ELISA, utilizando como antígeno a respectiva cepa vacinal. O adjuvante à base de Xantana apresentou a maior soroconversão dentre os adjuvantes todos adjuvantes testados. Este efeito foi mais pro¬nunciado quando a via subcutânea foi utilizada. Baseado nos resultados obtidos, conclui-se que o polissacarídeo produzido pela bactéria Xanthomonas sp. possui ação adjuvante superior ou igual aos adjuvantes utilizados em vacinas comerciais

Vaccination has been a common practice to prevent or minimize the symptoms of diseases caused by infectious agents. Vaccines have been developed using an attenuated or inactivated microorganisms. Recently, synthetic peptides and recombinant proteins form the basis of the new generation of vaccines. However, there is need the association of these antigens wich adjuvants to increase its immunological effect. Although several substances have been evaluated for use in vaccines for veterinary use the production of vaccine remains tied to the use of aluminum salts or oily emulsions. The polysaccharide produced by the bacterium Xanthomonas sp. is a new alternative for use as an adjuvant vaccine. This study aimed to evaluate the effect of adjuvant xanthan in humoral response of mice to a vaccine for pig herpes type 1 (SuHV-1). The animals were divided into five groups, using different adjuvants for each group. The titles of antibodies were determined by ELISA, using as antigen the vaccine strain. The adjuvant-based xanthan had the highest seroconversion among all tested adjuvants. This effect was more pronounced when subcutaneous via was used. Based on the results, we conclude that the adjuvant action of the polysaccharide produced by the bacterium Xanthomonas sp. has greater than or equal to the adjuvant used in commercial vaccines

Xantana como adjuvante em vacina contra herpes suíno tipo 1 / Xantana as an adjuvant in swine herpes vaccine type 1

Vacinação tem sido uma prática comum para prevenir ou minimizar os sintomas de doenças causadas por agentes infecciosos. Vacinas têm sido desenvolvidas utilizando-se microrganismos atenuados ou inativados. Recentemente peptídeos sintéticos e proteínas recombinantes constituem a base da nova geração de vacinas. Entretanto, ainda há necessidade de associação destes antíg¬enos a adjuvantes para potencializar seu efeito imunológico. Embora várias substâncias tenham sido avaliadas para sua utilização em vacinas de uso veterinário, a produção de vacinas continua atrelada à utilização dos sais de alumínio ou de emulsões oleosas. O polissacarídeo produzido pela bactéria Xanthomonas sp. é uma nova alternativa para utilização como adjuvante vacinal. O objetivo deste estudo foi avaliar a ação adjuvante da Xantana na resposta humoral de camundongos a uma vacina de herpes suíno tipo 1 (SuHV-1). Os animais foram divididos em cinco grupos, utilizando adjuvantes diferentes para cada grupo. Os títulos de anticorpos foram determinados por ELISA, utilizando como antígeno a respectiva cepa vacinal. O adjuvante à base de Xantana apresentou a maior soroconversão dentre os adjuvantes todos adjuvantes testados. Este efeito foi mais pro¬nunciado quando a via subcutânea foi utilizada. Baseado nos resultados obtidos, conclui-se que o polissacarídeo produzido pela bactéria Xanthomonas sp. possui ação adjuvante superior ou igual aos adjuvantes utilizados em vacinas comerciais(AU)

Vaccination has been a common practice to prevent or minimize the symptoms of diseases caused by infectious agents. Vaccines have been developed using an attenuated or inactivated microorganisms. Recently, synthetic peptides and recombinant proteins form the basis of the new generation of vaccines. However, there is need the association of these antigens wich adjuvants to increase its immunological effect. Although several substances have been evaluated for use in vaccines for veterinary use the production of vaccine remains tied to the use of aluminum salts or oily emulsions. The polysaccharide produced by the bacterium Xanthomonas sp. is a new alternative for use as an adjuvant vaccine. This study aimed to evaluate the effect of adjuvant xanthan in humoral response of mice to a vaccine for pig herpes type 1 (SuHV-1). The animals were divided into five groups, using different adjuvants for each group. The titles of antibodies were determined by ELISA, using as antigen the vaccine strain. The adjuvant-based xanthan had the highest seroconversion among all tested adjuvants. This effect was more pronounced when subcutaneous via was used. Based on the results, we conclude that the adjuvant action of the polysaccharide produced by the bacterium Xanthomonas sp. has greater than or equal to the adjuvant used in commercial vaccines(AU)

Neisseria meningitidis serogroup C polysaccharide production by varying the bacteria inoculum and the initial glucose concentration / Produção de polissacarídeo de Neisseria meningitidis sorogrupo C variando o inóculo e a concentração inicial de glicose

Polysaccharide for producing a specific vaccine against N. meningitidis (serogroup C) is the principal product obtained from this microorganism cultures. In order to assess the polysaccharide production varying the bacteria inoculum bulk ,and the initial glucose concentrations, four assays were carried out in duplicate based on factorial 22 planning design. Samples were collected from the cultures every two hours for determining cell concentration (expressed as dry biomass), pH, glucose and polysaccharide concentration. The comparative criteria were based on the final polysaccharide concentrations, and the cell/polysaccharide (YP/X) yield coefficient. The bacteria culture employing the highest inoculum bulk (optical density 0.1 at 540nm) presented the best result of final polysaccharide concentration (0.105 g/ L), and YP/X (0.078). The polysaccharide further purified on gel chromatography column following the molecular mass criterion, was the suitable antigen for vaccine production.

A produção de polissacarídeo para a produção de vacina específica contra N. meningitidis sorogrupo C é o principal produto obtido dos cultivos deste microorganismo. Para uma análise comparativa da produção de polissacarídeo variando as quantidades de inóculo e as concentrações iniciais de glicose, realizaram-se quatro ensaios, empregando planejamento fatorial 22, em duplicata. As amostras foram retiradas a cada duas horas para a determinação da concentração celular, pH, glicose e concentração de polissacarídeo. O critério analítico foi baseado na concentração final de polissacarídeo e no fator de conversão célula/polissacarídeo (YP/X). Os melhores resultados de concentração final de polissacarídeo (0,105 g/L) e YP/X (0,078) ocorreram na condição de cultivo com maior inóculo (densidade óptica de cerca de 0,1 a 540 nm). O polissacarídeo obtido ao final desse cultivo foi eluído em gel-cromatografia para determinação de peso molecular, sendo um antígeno adequado para a produção da vacina.

Nitrogen consumption during batch cultivation of Neisseria meningitidis (serogroup C) in Frantz medium

Capsular polysaccharide, extracted from microorganism cultivations, is the principal antigen for elaboration of vaccine against the disease caused by Neisseria meningitidis serogroup C. The final protein content allowed in this vaccine is 1%. In order to find a relationship between nitrogen consumption and cell growth, including polysaccharide production, and cell nitrogen content, cultivations were carried out in an 80 liters bioreactor (total capacity), under the following conditions: Frantz medium; temperature of 35ºC; air flow of 5 L/min (0.125 vvm); agitation frequency of 120 rpm and vessel pressure of 6 psi (kLa = 0.07 min-1). Concentrations of biomass, total polysaccharide, cellular nitrogen, residual organic and inorganic nitrogen in the medium were measured during cultivation. From five cultivations carried out under the same conditions, a mean cell nitrogen percentage of 12.6% (w/w) in respect to the dry biomass was found. The inorganic nitrogen in the medium did not change significantly along the cultivation time, whereas the organic nitrogen consumption was linearly related to cell growth, with constant yield factors (average of 8.44). Polysaccharide production kinetics followed the cell growth kinetics until the beginning of the stationary growth phase. A supplemental polysaccharide production was observed until the end of cultivation, but without cell nitrogen absorption. Thus, the results indicate that polysaccharide is produced in two phases, being the first one biomass formation followed by non-associated to growth.

Polissacarídeo capsular, extraído de cultivos microbianos, é o principal antígeno para o preparo da vacina contra a doença causada por Neisseria meningitidis sorogrupo C. O conteúdo final de proteína permitido nessa vacina é de 1%. De modo a encontrar uma relação entre o consumo de nitrogênio, o crescimento microbiano (incluindo a produção de polissacarídeo) e o conteúdo de nitrogênio celular, cultivos foram realizados em um fermentador de 80 L (capacidade total), sob as seguintes condições: meio de Frantz; temperatura de 35ºC; vazão de ar de 5 L/min (0,125 vvm); freqüência de agitação de 120 rpm e pressão da dorna de 6 psi (kLa = 0.07 min-1). Durante os cultivos, foram determinadas as concentrações de biomassa, polissacarídeo, nitrogênio celular, nitrogênio residual orgânico e inorgânico no meio. De cinco fermentações realizadas sob as mesmas condições, encontrou-se uma porcentagem média de nitrogênio celular de 12,6% (p/p) em relação à biomassa seca. O nitrogênio inorgânico do meio não apresentou variação significativa ao longo do tempo de cultivo, enquanto que o consumo de nitrogênio orgânico foi linearmente relacionado com o crescimento da população celular, com fatores de conversão constantes (média de 8,44). A cinética de produção de polissacarídeo acompanhou a de crescimento da cultura celular até o começo da fase estacionária de crescimento e, a partir desse momento até o fim do cultivo, foi observada uma produção suplementar de polissacarídeo, mas sem absorção de nitrogênio pelas células. Assim, os resultados indicaram uma estratégia de produção de polissacarídeo em duas etapas, sendo a primeira crescimento celular seguida da produção de polissacarídeo não-associado ao crescimento microbiano.

Avaliação do teste de imunodifusão mediante emprego do polissacarídeo "O" no diagnóstico da brucelose bovina

Agar gel immunodiffusion test (AGID) using the O-polysaccharide was compared with serologic tests used in brucellosis diagnosis in non-infected, infected and early vaccinated cattle with strain B-19, in order to differentiate vaccinal antibodies from those resulting of natural infection by Brucella abortus. None of the techniques can differentiate with absolute reliability the vaccinal antibodies from antibodies associated with natural infection to Brucella abortus. Moreover, the use of AGID with this objective would cause maintenance of infected animals in the herd.

Comparou-se o teste de imunodifusão dupla em ágar gel (IDGA) pelo emprego do polissacarídeo "O" como antígeno com os testes de soroaglutinação rápida, soroaglutinação lenta, 2-mercaptoetanol, reação de fixação de complemento e antígeno tamponado acidificado no diagnóstico da brucelose, em bovinos infectados, não infectados e recém-vacinados com a amostra B-19, visando à diferenciação de anticorpos vacinais daqueles associados à infecção natural pela Brucella abortus. Nenhum dos testes realizados permitiu diferenciar precisamente anticorpos vacinais daqueles induzidos pela infecção brucélica e, nas condições do presente trabalho, a utilização do IDGA com este objetivo poderia levar à retenção de animais infectados no rebanho.

Polysaccharide production in batch process of Neisseria meningitidis serogroup C comparing Frantz, modified Frantz and Cartlin 6 cultivation media

Polysaccharide of N. meningitidis serogroup C constitutes the antigen for the vaccine against meningitis. The goal of this work was to compare three cultivation media for production of this polysaccharide: Frantz, modified Frantz medium (with replacement of glucose by glycerol), and Catlin 6 (a synthetic medium with glucose). The comparative criteria were based on the final polysaccharide concentrations and the yield coefficient cell/polysaccharide (Y P/X). The kinetic parameters: pH, substrate consumption and cell growth were also determined. For this purpose, 9 cultivation runs were carried out in a 80 L New Brunswick bioreactor, under the following conditions: 42 L of culture medium, temperature 35ºC, air flow 5 L/min, agitation frequency 120 rpm and vessel pressure 6 psi, without dissolved oxygen or pH controls. The cultivation runs were divided in three groups, with 3 repetitions each. The cultivation using the Frantz medium presented the best results: average of final polysaccharide concentration = 0.134 g/L and Y P/X=0.121, followed by Catlin 6 medium, with results of 0.095 g/L and 0.067 respectively. Considering the principal advantages in the use of the synthetic medium, i.e. facilitation of a cultivation and purification steps of the polysaccharide production process, there is a possibility that in the near future, Catlin 6 will replace the traditional Frantz medium.

O polissacarídeo de N. meningitidis sorogrupo C constitui o antígeno para a elaboração da vacina contra a meningite C. O objetivo deste trabalho foi comparar três meios de cultivo para produção desse polissacarídeo: Frantz, Frantz modificado (com a substituição de glicose por glicerol) e Catlin 6 (meio sintético com glicose). Os critérios comparativos foram baseados nas concentrações finais de polissacarídeo e o fator de conversão célula/polissacarídeo (Y P/X). Também foram determinados os parâmetros cinéticos de pH, consumo de substrato e crescimento celular. Para essa finalidade, foram efetuados nove cultivos em um biorreator New Brunswick de 80 L, sob as seguintes condições: 42 L de meio de cultura, temperatura de 35ºC, vazão de ar de 5 L/min, freqüência de agitação de 120 rpm e pressão da dorna de 6 psi, sem controles de oxigênio dissolvido ou pH. Os cultivos foram divididos em 3 grupos, com 3 repetições cada um. O cultivo usando o meio de Frantz apresentou os melhores resultados: medias de concentração final de polissacarídeo de 0,134 g/L e Y P/X=0,121, seguidos pelo meio de Catlin 6, com resultados de 0,095 g/L e 0,067 respectivamente. Considerando as principais vantagens do uso do meio sintético, como por exemplo, facilitação do cultivo e etapas de purificação do processo de produção do polissacarídeo, há a possibilidade do meio de Catlin 6 substituir o tradicional meio de Frantz em futuro próximo.

Imunodifusão em gel de ágar com polissacarídeos de membrana de Brucella abortus 1119-3 no diagnóstico da brucelose bovina

An agar gel immunodiffusion (AGID) test using the polysaccharide (POLIO O) extract obtained from Brucella abortus strain 1119-3, was compared to plate agglutination, tube agglutination, rose bengal plate and mercaptoethanol tests in the diagnosis of bovine brucellosis. The AGID assay with B. aborturs polysaccharide antigens, presented a greater specificity but lower sensitivity for detecting brucellosis infected animals as compared to the conventional methods of antibody detection.

Comparou-se a prova de imunodifusão em gel de ágar (IDGA), utilizando extrato polissacarídico (POLI O), obtido da amostra de B. abortus 1119-3, com os testes de soroaglutinação rápida em placa, de soroaglutinação lenta em tubos, de antígeno acidificado e de 2-mercaptoetanol para o diagnóstico da brucelose bovina. O IDGA mostrou alta especificidade, porém sensibilidade inferior aos métodos convencionais.

Diagnostic efficiency of Brucella soluble antigens in immunodiffusion tests and ability to differentiate Brucella abortus strain 19 vaccinated cattle / Eficiência diagnóstica de antígenos solúveis de Brucella em testes de imunodifusão e capacidade para diferenciar bovinos vacinados com Brucella abortus CEPA 19

Three soluble antigens were compared by radial immunodiffusion (RID) and agar gel immunodiffusion (AGID) tests: a native haptene (NH) from Brucella melitensis 16M, and a polysaccharide (PS) from B. abortus 1119-3, both obtained by non-hydrolytic methods, and the (O-Chain) polysaccharide extracted also from B. abortus 1119-3 but using an hydrolytic method. Three groups of bovine sera were tested: a) Naturally infected (n = 76); b) Non-infected (n = 130) and c) S-19 vaccinated (n = 61); the sensitivity (Se), the specificity (Sp) and the ability to differentiate vaccinated (ADV) were determined in each group a, b and c respectively. The highest Se in the RID test (84.3%) was achieved by NH; while the three antigens gave 100% Sp. The O-Chain showed 100% ADV in this test. In the AGID test PS antigen showed the best Se (86.6%), and all antigens showed 100% of Sp and ADV. Finally, for its production qualities and efficiency the antigens PS and NH represent a promising alternative for complementary diagnosis of brucellosis.(AU)

Foram comparados três antígenos solúveis: um hapteno nativo (NH) de B. melitensis 16M, um polissacarídeo (PS) obtido de B. abortus 1119-3 e outro polissacarídeo de cadeia O (O-Chain) originado também da última Brucella. Os testes de imunodifusão radial (RID) e imunodifusão em gel de ágar (AGID) foram confrontados com as três classes de soros bovinos: a) infectados naturalmente (n = 76), b) não infectados (n = 130) e c) vacinados com B19 (n = 61) reagindo a testes sorológicos clássicos. Foram determinadas a sensibilidade (Se), a especificidade (Sp) e a capacidade para discriminar vacinados (ADV). A Se mais alta (84,3%) no teste RID foi demonstrada pelo antígeno NH, enquanto os três antígenos tiveram 100% de Sp. O antígeno O-Chain teve 100% de ADV nesse teste. O teste AGID com estes antígenos demonstrou 100% Sp e ADV, enquanto o antígeno PS mostrou uma melhor Se (86,6%). Finalmente, por sua qualidade de produção e eficiência, os antígenos PS e NH representam uma alternativa segura e econômica para o diagnóstico suplementar da brucelose. (AU)