Evaluation of maternal antibodies against rabies in puppies and kittens in Mazandaran Province, Iran / [Avaliação de anticorpos maternos contra a raiva em filhotes de cachorro e gatos na província de Mazandaran, Irã]

Rabies is a critical zoonotic high-risk disease, which has emerged as an important public-health problem. There are limited investigations that explore maternally derived antibody (MDA) in puppies and kittens from around the world. Furthermore, there is no such research in any province of Iran. This study measured the serum level of MDA in 10 puppies and their vaccinated bitches (n=20), 10 puppies and their unvaccinated bitches (n=20), 10 kittens with vaccinated queens and 10 kittens with unvaccinated queens. Antibodies against rabies were measured using quantitative, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Our results showed that 90% (9 out of 10) of puppies from vaccinated bitches were positive for anti-rabies antibodies, while test results for all puppies from non-vaccinated bitches were negative (P=0.001). Moreover, puppies' titers were significantly higher in the vaccinated group than the non-vaccinated group (P=0.003). There was a similar condition between vaccinated and non-vaccinated bitches (P=0.008). Although kittens' titers were significantly higher in the vaccinated group than the non-vaccinated group (P=0.03), only 20 percent of the kittens with vaccinated queens showed positive results, while all kittens from non-vaccinated queens were negative for anti-rabies antibodies (P=0.137).

A raiva é uma doença zoonótica crítica de alto risco, que surgiu como um importante problema de saúde pública. Há investigações limitadas que exploram anticorpos derivados da maternidade (MDA) em filhotes e gatos de todo o mundo. Além disso, não existe tal pesquisa em nenhuma província do Irã. Este estudo mediu o nível sérico do MDA em 10 filhotes e suas cadelas vacinadas (n=20), 10 filhotes e suas cadelas não vacinadas (n=20), 10 filhotes com rainhas vacinadas e 10 filhotes com rainhas não vacinadas. Os anticorpos contra a raiva foram medidos usando o ensaio quantitativo de imunoabsorção enzimática (ELISA). Nossos resultados mostraram que 90% (9 em cada 10) dos filhotes de cadelas vacinadas foram positivos para anticorpos anti-rábicos, enquanto os resultados dos testes para todos os filhotes de cadelas não vacinadas foram negativos (P=0,001). Além disso, os títulos dos filhotes foram significativamente mais altos no grupo vacinado do que no grupo não vacinado (P=0,003). Havia uma condição similar entre cadelas vacinadas e não vacinadas (P=0,008). Embora os títulos dos filhotes fossem significativamente mais altos no grupo vacinado do que no grupo não vacinado (P=0,03), apenas 20% dos filhotes com rainhas vacinadas apresentaram resultados positivos, enquanto todos os filhotes de rainhas não vacinadas foram negativos para anticorpos anti-rábicos (P=0,137).

Positive effect of organic zinc supplementation on the persistence of anti-rabies neutralizing antibodies in healthy sheep / Efeito positivo da suplementação de zinco orgânico na persistência de anticorpos neutralizantes anti-rábicos em ovinos saudáveis

The main prophylactic tool to control rabies in herbivores is the systematic vaccination of susceptible animals. This study aimed to evaluate the positive effect of organic zinc (Zn) supplementation on the persistence of anti-rabies neutralizing antibodies in healthy sheep. A total of 36 Texel ewes were selected and randomly divided into 2 groups of 18 animals each. The treated group (TG) received organic Zn supplementation for 90 days, and after this period, 2 doses of rabies vaccine with a 30-day interval. The control group (CG) received the vaccine doses only and was not supplemented with organic Zn. Blood samples were collected before the first vaccination and 30, 60, and 90 days after vaccination, to determine the anti-rabies neutralizing antibody titer using the Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test (RFFIT). The average values of anti-rabies serum-neutralizing antibodies 30 days after the first dose were 1.33 ± 0.62 IU mL-1 for the CG and 1.57 ± 0.80 IU mL-1 for the TG; 60 days after the second dose the average values were 7.60 ± 7.08 IU mL-1 and 12.97 ± 9.46 IU mL-1 for the CG and TG, respectively, with a significant difference between groups. The TG presented 100% vaccine coverage of the primary vaccination, whereas the CG presented 89.47% coverage. Oral supplementation with 75 mg organic Zn significantly increased the persistence of anti-rabies antibody titers in...

A principal ferramenta profilática para o controle da raiva em herbívoro é a vacinação sistemática de animais susceptíveis. A presente pesquisa teve como objetivo avaliar o efeito positivo da suplementação de zinco orgânico na persistência de anticorpos neutralizantes anti-rábicos em ovinos saudáveis. Foram selecionadas 36 ovelhas Texel, aleatoriamente divididos em dois grupos com 18 animais cada. O grupo tratado (GT) recebeu suplementação com zinco orgânico durante 90 dias, e, após este período, foram administradas 2 doses de vacina anti-rábica com intervalo entre elas de 30 dias. O grupo controle (GC) recebeu apenas as doses da vacina, e não foi suplementado com zinco. Amostras de sangue foram colhidas antes da primeira dose da vacina, e 30, 60 e 90 dias depois da vacinação, a fim de determinar o título de anticorpos neutralizantes anti-rábicos utilizando o teste rápido de inibição do foco fluorescente (RFFIT). As medias dos anticorpos anti-rábicos do soro, 30 dias após a primeira dose foi de 1,33 ± 0,62 IU mL-1 para o grupo controle, e 1,57 ± 0,80 IU mL-1 para o grupo tratado. 60 dias após a segunda dose, as medias foram de 7,60 ± 7,08 IU mL-1 e 12,97 ± 9,46 UI ml-1 no GC e GT, respectivamente, com significância entre os grupos. O GT apresentou 100% de cobertura vacinal na primeira dose, enquanto o GC apresentou 89,47%. A suplementação oral com 75 mg de zinco orgânico...

Positive effect of organic zinc supplementation on the persistence of anti-rabies neutralizing antibodies in healthy sheep / Efeito positivo da suplementação de zinco orgânico na persistência de anticorpos neutralizantes anti-rábicos em ovinos saudáveis

The main prophylactic tool to control rabies in herbivores is the systematic vaccination of susceptible animals. This study aimed to evaluate the positive effect of organic zinc (Zn) supplementation on the persistence of anti-rabies neutralizing antibodies in healthy sheep. A total of 36 Texel ewes were selected and randomly divided into 2 groups of 18 animals each. The treated group (TG) received organic Zn supplementation for 90 days, and after this period, 2 doses of rabies vaccine with a 30-day interval. The control group (CG) received the vaccine doses only and was not supplemented with organic Zn. Blood samples were collected before the first vaccination and 30, 60, and 90 days after vaccination, to determine the anti-rabies neutralizing antibody titer using the Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test (RFFIT). The average values of anti-rabies serum-neutralizing antibodies 30 days after the first dose were 1.33 ± 0.62 IU mL-1 for the CG and 1.57 ± 0.80 IU mL-1 for the TG; 60 days after the second dose the average values were 7.60 ± 7.08 IU mL-1 and 12.97 ± 9.46 IU mL-1 for the CG and TG, respectively, with a significant difference between groups. The TG presented 100% vaccine coverage of the primary vaccination, whereas the CG presented 89.47% coverage. Oral supplementation with 75 mg organic Zn significantly increased the persistence of anti-rabies antibody titers in...(AU)

A principal ferramenta profilática para o controle da raiva em herbívoro é a vacinação sistemática de animais susceptíveis. A presente pesquisa teve como objetivo avaliar o efeito positivo da suplementação de zinco orgânico na persistência de anticorpos neutralizantes anti-rábicos em ovinos saudáveis. Foram selecionadas 36 ovelhas Texel, aleatoriamente divididos em dois grupos com 18 animais cada. O grupo tratado (GT) recebeu suplementação com zinco orgânico durante 90 dias, e, após este período, foram administradas 2 doses de vacina anti-rábica com intervalo entre elas de 30 dias. O grupo controle (GC) recebeu apenas as doses da vacina, e não foi suplementado com zinco. Amostras de sangue foram colhidas antes da primeira dose da vacina, e 30, 60 e 90 dias depois da vacinação, a fim de determinar o título de anticorpos neutralizantes anti-rábicos utilizando o teste rápido de inibição do foco fluorescente (RFFIT). As medias dos anticorpos anti-rábicos do soro, 30 dias após a primeira dose foi de 1,33 ± 0,62 IU mL-1 para o grupo controle, e 1,57 ± 0,80 IU mL-1 para o grupo tratado. 60 dias após a segunda dose, as medias foram de 7,60 ± 7,08 IU mL-1 e 12,97 ± 9,46 UI ml-1 no GC e GT, respectivamente, com significância entre os grupos. O GT apresentou 100% de cobertura vacinal na primeira dose, enquanto o GC apresentou 89,47%. A suplementação oral com 75 mg de zinco orgânico...(AU)

Low level of the immune response against rabies virus in dogs and cats, a cross-sectional study in sheltered animals, Santander, Colombia / Baixo nível de resposta imune contra o vírus da raiva em cães e gatos, um estudo transversal em animais abrigados, Santander, Colombia

Rabies is an incurable and fatal progressive viral encephalomyelitis that causes approximately 61,000 deaths a year globally mainly by dog bites, which show the importance of anti-rabies vaccination in dogs to achieve elimination of the disease. In Colombia, multiple cases of human rabies transmitted by dogs and cats have been reported since 1999, showing an increased significance of cats in the transmission of rabies, mainly in rabies of wild origin. Therefore, the aim of the present study was to evaluate the development of neutralizing antibodies in dogs and cats during the mass vaccination campaign of the second half of 2015 in the city of Bucaramanga. For this purpose, a descriptive cross-sectional study with convenience sampling was conducted in 382 dogs and cats (295 dogs, 87 cats), and an evaluation of the humoral immune response of the animals was performed by quantitative ELISA. The prevalence of optimal neutralizing antibodies (>0.5 IU/ml) was only 32.76% (95% CI=28.05-37.46%) in the entire population studied and most of the animals did not have an adequate response to the vaccination, or seroconversion was not detected on them (65.45-95% confidence interval, CI=60.68-70.21%). Significant difference was found between the neutralizing antibody titers in cats and dogs, with a higher neutralizing response in cats. In conclusion, although mass vaccination campaigns for dogs and cats are the most important measure to interrupt virus circulation among the animals, achievement of a good neutralizing immune response in the animals is useful to demonstrate that vaccination has been successful, allowing the maintenance of the required minimum levels of population immunity. These results will allow the implementation of corrective measures in Bucaramanga to achieve better seroconversion rates. Other cities are expected to implement similar seroconversion assessments to verify the quality of effective anti-rabies vaccination in animal populations.(AU)

A raiva é uma encefalomielite viral progressiva incurável e fatal que causa aproximadamente 61.000 mortes por ano no mundo, principalmente por mordidas de cães, que mostram a importância da vacinação anti-rábica em cães para conseguir a eliminação da doença. Na Colômbia, vários casos de raiva humana transmitida por cães e gatos foram relatados desde 1999, mostrando um aumento na importância de gatos na transmissão da raiva, principalmente em raiva de origem selvagem. Portanto, o objetivo do presente estudo foi avaliar o desenvolvimento de anticorpos neutralizantes em cães e gatos durante a campanha de vacinação em massa do segundo semestre de 2015 na cidade de Bucaramanga. Para este propósito, um estudo descritivo transversal com amostragem de conveniência foi realizado em 382 cães e gatos (295 cães, 87 gatos), e uma avaliação da resposta imune humoral dos animais foi realizada por ELISA quantitativo. A prevalência de anticorpos neutralizantes ótimos (>0,5 UI/ml) foi de apenas 32,76% (IC 95% = 28,05-37,46%) em toda a população estudada e a maioria dos animais não teve resposta adequada à vacinação, ou a soroconversão foi não detectado neles (65,45-95% intervalo de confiança IC = 60,68-70,21%). Diferença significativa foi encontrada entre os títulos de anticorpos neutralizantes em gatos e cães, com uma maior resposta neutralizante em gatos. Em conclusão, embora as campanhas de vacinação em massa para cães e gatos sejam a medida mais importante para interromper a circulação do vírus entre os animais, a obtenção de uma boa resposta imunológica neutralizante nos animais é útil para demonstrar que a vacinação foi bem sucedida, permitindo a manutenção necessária dos níveis mínimos de imunidade da população. Esses resultados permitirão que a implementação de medidas corretivas em Bucaramanga alcance melhores taxas de soroconversão. Outras cidades devem implementar avaliações similares de soroconversão para verificar a qualidade da vacinação anti-rábica efetiva em populações animais.(AU)

Low level of the immune response against rabies virus in dogs and cats, a cross-sectional study in sheltered animals, Santander, Colombia / Baixo nível de resposta imune contra o vírus da raiva em cães e gatos, um estudo transversal em animais abrigados, Santander, Colombia

Rabies is an incurable and fatal progressive viral encephalomyelitis that causes approximately 61,000 deaths a year globally mainly by dog bites, which show the importance of anti-rabies vaccination in dogs to achieve elimination of the disease. In Colombia, multiple cases of human rabies transmitted by dogs and cats have been reported since 1999, showing an increased significance of cats in the transmission of rabies, mainly in rabies of wild origin. Therefore, the aim of the present study was to evaluate the development of neutralizing antibodies in dogs and cats during the mass vaccination campaign of the second half of 2015 in the city of Bucaramanga. For this purpose, a descriptive cross-sectional study with convenience sampling was conducted in 382 dogs and cats (295 dogs, 87 cats), and an evaluation of the humoral immune response of the animals was performed by quantitative ELISA. The prevalence of optimal neutralizing antibodies (>0.5 IU/ml) was only 32.76% (95% CI=28.05-37.46%) in the entire population studied and most of the animals did not have an adequate response to the vaccination, or seroconversion was not detected on them (65.45-95% confidence interval, CI=60.68-70.21%). Significant difference was found between the neutralizing antibody titers in cats and dogs, with a higher neutralizing response in cats. In conclusion, although mass vaccination campaigns for dogs and cats are the most important measure to interrupt virus circulation among the animals, achievement of a good neutralizing immune response in the animals is useful to demonstrate that vaccination has been successful, allowing the maintenance of the required minimum levels of population immunity. These results will allow the implementation of corrective measures in Bucaramanga to achieve better seroconversion rates. Other cities are expected to implement similar seroconversion assessments to verify the quality of effective anti-rabies vaccination in animal populations.(AU)

A raiva é uma encefalomielite viral progressiva incurável e fatal que causa aproximadamente 61.000 mortes por ano no mundo, principalmente por mordidas de cães, que mostram a importância da vacinação anti-rábica em cães para conseguir a eliminação da doença. Na Colômbia, vários casos de raiva humana transmitida por cães e gatos foram relatados desde 1999, mostrando um aumento na importância de gatos na transmissão da raiva, principalmente em raiva de origem selvagem. Portanto, o objetivo do presente estudo foi avaliar o desenvolvimento de anticorpos neutralizantes em cães e gatos durante a campanha de vacinação em massa do segundo semestre de 2015 na cidade de Bucaramanga. Para este propósito, um estudo descritivo transversal com amostragem de conveniência foi realizado em 382 cães e gatos (295 cães, 87 gatos), e uma avaliação da resposta imune humoral dos animais foi realizada por ELISA quantitativo. A prevalência de anticorpos neutralizantes ótimos (>0,5 UI/ml) foi de apenas 32,76% (IC 95% = 28,05-37,46%) em toda a população estudada e a maioria dos animais não teve resposta adequada à vacinação, ou a soroconversão foi não detectado neles (65,45-95% intervalo de confiança IC = 60,68-70,21%). Diferença significativa foi encontrada entre os títulos de anticorpos neutralizantes em gatos e cães, com uma maior resposta neutralizante em gatos. Em conclusão, embora as campanhas de vacinação em massa para cães e gatos sejam a medida mais importante para interromper a circulação do vírus entre os animais, a obtenção de uma boa resposta imunológica neutralizante nos animais é útil para demonstrar que a vacinação foi bem sucedida, permitindo a manutenção necessária dos níveis mínimos de imunidade da população. Esses resultados permitirão que a implementação de medidas corretivas em Bucaramanga alcance melhores taxas de soroconversão...(AU)

Dinâmica do título de anticorpos IgG anti-vírus da raiva na resposta à profilaxia pré-exposição

A raiva é uma zoonose globalmente distribuída que apresenta alta letalidade, constituindo grande problema em saúde pública. A persistência do vírus da raiva nas populações é mantida devido sua capacidade de se replicar em diversas espécies de mamíferos, incluindo os humanos. O controle da raiva urbana tem se baseado na vacinação de cães e gatos, reservatórios importantes no ciclo urbano, bem como no atendimento de indivíduos após exposição ao vírus da raiva. Adicionalmente, a profilaxia pré-exposição (PrPE) tem sido aplicada em indivíduos que podem ser expostos à infecção, por atividade ocupacional. Objetivando proteger os estudantes ingressantes do Curso de Medicina Veterinária, grupo de risco em potencial para a raiva, a Faculdade de Medicina Veterinária (FMVA) da Unesp, Câmpus Araçatuba, promove anualmente a vacinação em esquema PrPE, seguida de avaliação sorológica, a fim de habituá-los a anualmente verificarem a resposta de anticorpos. Assim, a presente pesquisa teve como objetivo avaliar, por meio de levantamento de dados de PrPE dos arquivos do Serviço de Vigilância Epidemiológica da Secretaria de Saúde da Prefeitura Municipal de Araçatuba, SP, Brasil a adesão à PrPE, a proteção conferida e a dinâmica dos anticorpos (IgG) neutralizantes contra o vírus da raiva, nos estudantes da FMVA durante o período de 2000 a 2017. Foram avaliados 2.404 registros, 86,4% dos quais apresentaram título protetor contra o vírus da raiva (0,5UI/mL). A PrPE teve boa adesão pelos estudantes, mostrou-se eficaz para a geração de anticorpos contra a raiva, e o título de anticorpos neutralizantes diminuiu ao longo do tempo, reforçando a necessidade da realização da titulação, pelo menos a cada dois anos.

Rabies is a globally distributed zoonosis that shows high lethality and is also a major public health problem. Persistence of rabies virus in populations is maintained due to its ability to replicate in several mammals species, including humans. Rabies control has been based on dogs and cats vaccination, the most important reservoirs in the urban cycle, as well as on the treatment of individuals after exposure to the rabies virus. In addition, pre-exposure prophylaxis (PEPr) has been applied in individuals who might be exposed to infection due to their occupational activities. In order to protect the incoming students of the veterinary medicine course, a group of potential risk for rabies, the School of Veterinary Medicine (FMVA) of Unesp, Araçatuba, SP, Brazil, promotes annual vaccination in a PEPr scheme, followed by a serological evaluation, in order to habituate them to annually check their antibody response. Thus, by analyzing the PEPr data from the archives of the Epidemiological Surveillance Service of the Health Department of Araçatuba, SP, Brazil, during the period from 2000 to 2017, the present study aimed at evaluating the adhesion of the students to the rabies PEPr, the protection conferred by it and the dynamics of the neutralizing IgG antibodies against rabies virus. A total of 2,404 records were evaluated, 86.4% of which presented protective titers against rabies (0.5 IU/mL). PEPr had good adhesion by the students, has proved to be effective for generating antibodies anti-rabies virus and the neutralizing antibody titles decreased over time, reinforcing the need of performing the antibodies titration at least every two years.

AVALIAÇÃO SOROEPIDEMIOLÓGICA DE CÃES IMUNIZADOS CONTRA A RAIVA COM VACINA DE CULTIVO CELULAR EM CAMPANHA ANUAL DE VACINAÇÃO NO MUNICÍPIO DE BOTUCATU/SP

A raiva é uma zoonose transmitida pelo vírus do gênero Lyssavirus, e é considerada uma das enfermidades mais temidas no mundo devido à sua alta letalidade e inexistência de tratamento eficaz. Anualmente morrem mais de 50 mil pessoas por raiva em países subdesenvolvidos. O cão é o principal transmissor da raiva humana nos centros urbanos, responsável por 99% dos casos e 92% dos tratamentos pós-exposição. No Brasil, a raiva animal se apresenta de forma endêmica. A vacinação é o método mais eficiente de prevenção da raiva em cães e, por consequência, a proteção à população humana. No município de Botucatu, SP, há mais de 30 anos não são diagnosticados casos de raiva canina, devido às campanhas anuais de vacinação contra a raiva realizadas há 50 anos. Em 2010, o Ministério da Saúde preconizou o uso da vacina contra a raiva animal de cultivo celular nas campanhas de vacinação em massa. Este estudo teve como objetivo avaliar a resposta imunológica de cães que receberam apenas doses da vacina de cultivo celular contra o vírus da raiva. Para consolidação do tamanho amostral considerou-se uma porcentagem de 80% de adesão com consentimento livre e esclarecido, erro de estimação da ordem de 4% e nível de confiança de 95%. O título de anticorpos para a raiva foi detectado pelo Microteste Simplificado de Inibição de Fluorescência - SFIMT. Todas as discussões analíticas no plano estatístico foram realizadas no nível de significância de 5%. Observou-se que 59,12% (428/724) dos cães possuíam título protetor (0,5 UI/mL) e 40,88% (296/724) não tinham desenvolvido titulação protetora de anticorpos contra a raiva. Constatou-se, ainda, que a idade, esterilização, tratamento, vermifugação, quantidade de doses de vacina recebida e o tempo após a administração da vacina são características associadas ao título de anticorpos contra a raiva. Contudo, o sexo, escore corporal, presença de sinais clínicos, tipo de alimentação, local de permanência, interação com outras vacinas e o serviço utilizado para a administração das vacinas não estão associados ao título sérico protetor.

Rabies is a zoonosis transmitted by the virus of the genus Lyssavirus and is considered one of the most feared diseases in the world due to its high lethality and lack of effective treatment. Annually more than 50,000 people die from rabies in underdeveloped countries. The dog is the main transmitter of human rabies, accounting for 99% of cases and 92% of post-exposure treatments. In Brazil, animal rabies presents itself endemic. Vaccination is the most effective method of preventing rabies in dogs and, consequently, protecting the human population. In the municipality of Botucatu, SP, for more than 30 years no cases of canine rabies have been diagnosed due to the annual campaigns of rabies vaccination applied 50 years. In 2010, the Ministry of Health advocated the use of the antirabies animal cell culture vaccine in mass vaccination campaigns. This study aimed to evaluate the immunological response of dogs that received only doses of the cell culture vaccine against the rabies virus. To consolidate the sample size, a percentage of 80% adherence with free and informed consent, an error of the order of 4% and a 95% confidence level were considered. The antibody titers for rabies were detected by the Simplified Fluorescence Inhibition Microtest - SFIMT. All statistical analyses were performed at a significance level of 5%. It was observed that 59.12% (428/724) of the dogs had a protective titer (0.5 IU / mL) and 40.88% (296/724) had not developed a protective titer of anti-rabies antibodies. It was also found that age, sterilization, treatment, deworming, amount of vaccine doses received and the time after administration of the vaccine are characteristics associated with the titer of antibodies against rabies. However, sex, body score, presence of clinical signs, type of feeding, place of residence, interaction with other vaccines and the service used for administration of the vaccines are not associated with the protective serum titer.

Molecular epidemiology of animal rabies in the semiarid region of Paraíba, Northeastern Brazil

In the semiarid of the state of Paraíba, the anti-rabies vaccination is not common, most of the local inhabitants who deal with the animals do not know the incidence of the disease in the region. In this study, samples of foxes (Pseudalopex vetulus), insectivorous bats (Molossus molossus), raccoons (Procyon cancrivorous) and domestic animals brains were submitted to the diagnosis of rabies, by using the direct fluorescent antibody technique (d-FAT) and mouse inoculation test (MIT). Of the 581 examined materials, 50 (8.60 %) were positive for d-FAT and 47 (8.09 %) for MIT. From the positive samples for rabies, RNAs were extracted and transformed to cDNA, at the Laboratory of Rabies/Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia/USP, SP. The phylogenetic characterization of the N gene was performed at the Universidade de São Paulo, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal, Universidade Nihon, Faculdade de Ciências Bioresource, Fujisawa, Kanagawa, Japão. Based on the results of genotyping and phylogenetic analyzes, it is concluded that the epidemiology of rabies is complex in the semiarid of Paraíba, with different viral variants being maintained in domestic dogs, foxes, insectivorous bats and vampire bats. All the isolates examined belong to the genotype I of the genus Lyssavirus and it is possible to state that in the region, foxes are important sylvatic reservoirs of the rabies virus.

No semiárido do Estado da Paraíba, a vacinação antirrábica não é comum, a maioria dos habitantes locais que lidam com os animais não conhece a incidência da doença na região. Neste estudo, amostras do cérebro de raposas (Pseudalopex vetulus), de morcegos insetívoros (Molossus molossus), de guaxinins (Procyon cancrivorous) e de animais domésticos foram submetidas ao diagnóstico da raiva, pela técnica de imunofluorescência direta (IFD) e inoculação intracerebral em camundongos (ICC). Dos 581 materiais examinados, 50 (8,60%) foram positivos para IFD e 47 (8,09%) para o ICC. Das amostras positivas para raiva, os RNAs foram extraídos e transformados em DNA, no Laboratório de Raiva/Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia/USP, SP. A caracterização filogenética do gene N foi realizada no Centro de Investigação Veterinária, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal, Faculdade de Ciências Bioresource, Nihon University, Fujisawa, Kanagawa, Japão. Com base nos resultados das análises filogenéticas e genotipagem, conclui-se que a epidemiologia da raiva é complexa no semiárido da Paraíba, com diferentes variantes virais sendo mantidas em cães domésticos, raposas, morcegos insetívoros e morcegos hematófagos. Todos os isolados analisados pertencem ao genótipo I do gênero Lyssavirus, e é possível afirmar que, na região, as raposas são importantes reservatórios silvestres do vírus da raiva.

Molecular epidemiology of animal rabies in the semiarid region of Paraíba, Northeastern Brazil

In the semiarid of the state of Paraíba, the anti-rabies vaccination is not common, most of the local inhabitants who deal with the animals do not know the incidence of the disease in the region. In this study, samples of foxes (Pseudalopex vetulus), insectivorous bats (Molossus molossus), raccoons (Procyon cancrivorous) and domestic animals brains were submitted to the diagnosis of rabies, by using the direct fluorescent antibody technique (d-FAT) and mouse inoculation test (MIT). Of the 581 examined materials, 50 (8.60 %) were positive for d-FAT and 47 (8.09 %) for MIT. From the positive samples for rabies, RNAs were extracted and transformed to cDNA, at the Laboratory of Rabies/Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia/USP, SP. The phylogenetic characterization of the N gene was performed at the Universidade de São Paulo, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal, Universidade Nihon, Faculdade de Ciências Bioresource, Fujisawa, Kanagawa, Japão. Based on the results of genotyping and phylogenetic analyzes, it is concluded that the epidemiology of rabies is complex in the semiarid of Paraíba, with different viral variants being maintained in domestic dogs, foxes, insectivorous bats and vampire bats. All the isolates examined belong to the genotype I of the genus Lyssavirus and it is possible to state that in the region, foxes are important sylvatic reservoirs of the rabies virus.

No semiárido do Estado da Paraíba, a vacinação antirrábica não é comum, a maioria dos habitantes locais que lidam com os animais não conhece a incidência da doença na região. Neste estudo, amostras do cérebro de raposas (Pseudalopex vetulus), de morcegos insetívoros (Molossus molossus), de guaxinins (Procyon cancrivorous) e de animais domésticos foram submetidas ao diagnóstico da raiva, pela técnica de imunofluorescência direta (IFD) e inoculação intracerebral em camundongos (ICC). Dos 581 materiais examinados, 50 (8,60%) foram positivos para IFD e 47 (8,09%) para o ICC. Das amostras positivas para raiva, os RNAs foram extraídos e transformados em DNA, no Laboratório de Raiva/Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia/USP, SP. A caracterização filogenética do gene N foi realizada no Centro de Investigação Veterinária, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal, Faculdade de Ciências Bioresource, Nihon University, Fujisawa, Kanagawa, Japão. Com base nos resultados das análises filogenéticas e genotipagem, conclui-se que a epidemiologia da raiva é complexa no semiárido da Paraíba, com diferentes variantes virais sendo mantidas em cães domésticos, raposas, morcegos insetívoros e morcegos hematófagos. Todos os isolados analisados pertencem ao genótipo I do gênero Lyssavirus, e é possível afirmar que, na região, as raposas são importantes reservatórios silvestres do vírus da raiva.

Molecular epidemiology of animal rabies in the semiarid region of Paraíba, Northeastern Brazil / Epidemiologia molecular da raiva animal no semiárido da Paraíba, Nordeste do Brasil

In the semiarid of the state of Paraíba, the anti-rabies vaccination is not common, most of the local inhabitants who deal with the animals do not know the incidence of the disease in the region. In this study, samples of foxes (Pseudalopex vetulus), insectivorous bats (Molossus molossus), raccoons (Procyon cancrivorous) and domestic animals brains were submitted to the diagnosis of rabies, by using the direct fluorescent antibody technique (d-FAT) and mouse inoculation test (MIT). Of the 581 examined materials, 50 (8.60 %) were positive for d-FAT and 47 (8.09 %) for MIT. From the positive samples for rabies, RNAs were extracted and transformed to cDNA, at the Laboratory of Rabies/Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia/USP, SP. The phylogenetic characterization of the N gene was performed at the Universidade de São Paulo, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal, Universidade Nihon, Faculdade de Ciências Bioresource, Fujisawa, Kanagawa, Japão. Based on the results of genotyping and phylogenetic analyzes, it is concluded that the epidemiology of rabies is complex in the semiarid of Paraíba, with different viral variants being maintained in domestic dogs, foxes, insectivorous bats and vampire bats. All the isolates examined belong to the genotype I of the genus Lyssavirus and it is possible to state that in the region, foxes are important sylvatic reservoirs of the rabies virus. (AU)

No semiárido do Estado da Paraíba, a vacinação antirrábica não é comum, a maioria dos habitantes locais que lidam com os animais não conhece a incidência da doença na região. Neste estudo, amostras do cérebro de raposas (Pseudalopex vetulus), de morcegos insetívoros (Molossus molossus), de guaxinins (Procyon cancrivorous) e de animais domésticos foram submetidas ao diagnóstico da raiva, pela técnica de imunofluorescência direta (IFD) e inoculação intracerebral em camundongos (ICC). Dos 581 materiais examinados, 50 (8,60%) foram positivos para IFD e 47 (8,09%) para o ICC. Das amostras positivas para raiva, os RNAs foram extraídos e transformados em DNA, no Laboratório de Raiva/Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia/USP, SP. A caracterização filogenética do gene N foi realizada no Centro de Investigação Veterinária, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal, Faculdade de Ciências Bioresource, Nihon University, Fujisawa, Kanagawa, Japão. Com base nos resultados das análises filogenéticas e genotipagem, conclui-se que a epidemiologia da raiva é complexa no semiárido da Paraíba, com diferentes variantes virais sendo mantidas em cães domésticos, raposas, morcegos insetívoros e morcegos hematófagos. Todos os isolados analisados pertencem ao genótipo I do gênero Lyssavirus, e é possível afirmar que, na região, as raposas são importantes reservatórios silvestres do vírus da raiva.(AU)

Molecular epidemiology of animal rabies in the semiarid region of Paraíba, Northeastern Brazil / Epidemiologia molecular da raiva animal no semiárido da Paraíba, Nordeste do Brasil

In the semiarid of the state of Paraíba, the anti-rabies vaccination is not common, most of the local inhabitants who deal with the animals do not know the incidence of the disease in the region. In this study, samples of foxes (Pseudalopex vetulus), insectivorous bats (Molossus molossus), raccoons (Procyon cancrivorous) and domestic animals brains were submitted to the diagnosis of rabies, by using the direct fluorescent antibody technique (d-FAT) and mouse inoculation test (MIT). Of the 581 examined materials, 50 (8.60 %) were positive for d-FAT and 47 (8.09 %) for MIT. From the positive samples for rabies, RNAs were extracted and transformed to cDNA, at the Laboratory of Rabies/Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia/USP, SP. The phylogenetic characterization of the N gene was performed at the Universidade de São Paulo, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal, Universidade Nihon, Faculdade de Ciências Bioresource, Fujisawa, Kanagawa, Japão. Based on the results of genotyping and phylogenetic analyzes, it is concluded that the epidemiology of rabies is complex in the semiarid of Paraíba, with different viral variants being maintained in domestic dogs, foxes, insectivorous bats and vampire bats. All the isolates examined belong to the genotype I of the genus Lyssavirus and it is possible to state that in the region, foxes are important sylvatic reservoirs of the rabies virus.

No semiárido do Estado da Paraíba, a vacinação antirrábica não é comum, a maioria dos habitantes locais que lidam com os animais não conhece a incidência da doença na região. Neste estudo, amostras do cérebro de raposas (Pseudalopex vetulus), de morcegos insetívoros (Molossus molossus), de guaxinins (Procyon cancrivorous) e de animais domésticos foram submetidas ao diagnóstico da raiva, pela técnica de imunofluorescência direta (IFD) e inoculação intracerebral em camundongos (ICC). Dos 581 materiais examinados, 50 (8,60%) foram positivos para IFD e 47 (8,09%) para o ICC. Das amostras positivas para raiva, os RNAs foram extraídos e transformados em DNA, no Laboratório de Raiva/Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia/USP, SP. A caracterização filogenética do gene N foi realizada no Centro de Investigação Veterinária, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal, Faculdade de Ciências Bioresource, Nihon University, Fujisawa, Kanagawa, Japão. Com base nos resultados das análises filogenéticas e genotipagem, conclui-se que a epidemiologia da raiva é complexa no semiárido da Paraíba, com diferentes variantes virais sendo mantidas em cães domésticos, raposas, morcegos insetívoros e morcegos hematófagos. Todos os isolados analisados pertencem ao genótipo I do gênero Lyssavirus, e é possível afirmar que, na região, as raposas são importantes reservatórios silvestres do vírus da raiva.

Anticorpos contra o herpesvírus canino tipo 1 em cães domiciliados e de abrigos no Rio Grande do Sul

O herpesvírus canino tipo 1 (CHV-1) está associado a desordens reprodutivas e mortalidade neonatal em cães. O CHV-1 tem distribuição mundial e é considerado enzoótico na população canina, no entanto, a frequência da infecção no país ainda é desconhecida, e assim, se desconhece a real necessidade de medidas adicionais de prevenção, como a vacinação. Com isso, o objetivo deste trabalho foi investigar a presença de anticorpos contra o CHV-1 em amostras de soro de cães domiciliados e de abrigos em diferentes cidades do Rio Grande do Sul. Para isso, foram testadas 914 amostras de soro de cães domiciliados de Santa Maria (332 amostras obtidas do Hospital Veterinário Universitário - HVU/UFSM e 381 obtidas durante a campanha de vacinação antirrábica de 2015), de um laboratório clínico veterinário de Porto Alegre (n=43) e 158 de cães de abrigos dos municípios de Passo Fundo (n=98) e Cachoeira do Sul (n=60). Estas amostras de soro foram testadas pela técnica de soroneutralização (SN) para anticorpos contra o CHV-1. Anticorpos neutralizantes contra o CHV-1, em títulos iguais ou superiores a 4, foram detectados em 66,9% (612/914) das amostras. Entre os cães domiciliados de Santa Maria, 79,5% (264/332) provenientes do HVU/UFSM e 57,2% (218/381) das obtidas durante a campanha de vacinação antirrábica de Santa Maria foram positivas. Das amostras coletadas no laboratório clínico em Porto Alegre, 41,8% (18/43) foram positivas para anticorpos para CHV-1. Entre os cães de abrigo, 72,4% (71/98) das amostras coletadas em Passo Fundo e 68,3% (41/60) das amostras do abrigo de Cachoeira do Sul foram sorologicamente positivas para CHV-1. Os títulos de anticorpos entre os grupos foram variáveis, mas a maioria dos animais positivos possuía títulos acima de 128. Como não existem vacinas comerciais contra o CHV-1 no Brasil, a presença de anticorpos neutralizantes indica a circulação do CHV-1 na população canina das cidades estudadas. Com base nesses achados, medidas de controle, prevenção, imunização e a necessidade de um correto diagnóstico devem ser consideradas contra o CHV-1 em cães no sul do Brasil.

Canine herpesvirus type 1 (CHV-1) is associated with reproductive disorders and neonatal mortality. CHV-1 is widely distributed and is considered enzootic in the dog population. Occurrence of infection in the country is unknown, and thus the real need for additional prevention measures, such as vaccination, is unknown. Therefore, the aim of this study was to investigate the presence of antibodies against CHV-1 in serum samples of domestic and sheltered dogs of different regions from Rio Grande do Sul state. For this, 914 serum samples from domestic dogs from Santa Maria (332 dogs obtained from Hospital Veterinário Universitário - HVU / UFSM and 381 from in the anti-rabies vaccination campaign), a veterinary clinical laboratory in Porto Alegre (n=43) and 158 from shelters dogs of Passo Fundo (n=98) and Cachoeira do Sul (n=60). Serum samples were tested by virusneutralization test (VN) for CHV-1 antibodies. Neutralizing antibodies against CHV-1 in titers equal or higher than 4 were detected in 66,9% (612/914) of the samples. Among household dogs, 79,5% (264/332) from HVU/UFSM and 57.2% (218/381) from the vaccination campaign. Among the samples collected in the clinical laboratory in Porto Alegre, 41.8% (18/43) had antibodies to CHV-1. Among the sheltered dogs, 72.4% (71/98) of samples from Passo Fundo and 68.3% (41/60) from Cachoeira do Sul had antibody to CHV-1. The antibody titers ranged among the groups, but many samples had titers higher than 128. Since there are no commercial vaccines against CHV-1 in Brazil, the presence of neutralizing antibodies indicates the circulation of CHV-1 in the investigated population. Based on these findings, control measures, prevention, immunization and the need for a correct diagnosis should be considered.

Silenciamento gênico pós-transicional por interferência por RNA (RNAi) com terapia antiviral para a raiva

A raiva é uma zoonose que afeta todos os mamíferos e causa cerca de 55.000 mortes humanas por ano, causada pelo vírus da raiva. O vírus da raiva pertence à Ordem Mononegavirales, Família Rhabdoviridae e o Gênero Lyssavirus. Ultimamente, o Protocolo de Milwaukee é a base do tratamento humano, com indução do paciente ao coma e uso de massiva terapia antiviral. O protocolo, embora tenha sido utilizado duas vezes com sucesso, inclusive em um caso brasileiro, ainda requer aperfeiçoamentos. Neste sentido, a interferência por RNA (RNAi) é uma nova abordagem para terapia de doenças virais. O objetivo deste trabalho foi avaliar a inibição da replicação do vírus da raiva in vitro e in vivo utilizando RNAi. Para este fim, foram utilizados três siRNAs (siRNA 360, siRNA 652, siRNA 649) com a fita antisenso complementar ao mRNA da fosfoproteína (P) e três siRNAs (Le 1, Le 2, Le 3) contra o RNA líder do vírus da raiva. Para o ensaio in vitro foram utilizadas as amostras PV e 4005 (AgV3) do vírus da raiva e as células de BHK-21 (Baby hamster kidney). As monocamadas celulares foram infectadas com as amostras PV ou 4005 e depois de 2 horas de incubação transfectadas com cada um dos siRNAs em combinação com Lipofectamine 2000. Depois de 24 e 48 horas as placas teste e controle foram submetidas à imunofluorescência direta (IFD) com conjugado globulina de coelho anti-ribonucleocapsídeo do vírus da raiva/isotiocianato de fluoresceína (Instituto Pasteur de São Paulo). Os resultados revelaram que os siRNAs contra o RNA líder do vírus não foram capazes de inibir a replicação do vírus. A utilização dos siRNAs contra mRNA P resultaram em títulos de 3,625logTCID50/ml, 3,875logTCID50/ml e 4,125logTCID50/ml para os siRNAs 360, 649 e 652, respectivamente, enquanto que, para a placa controle, o título foi 4,0logTCID50/ml nas placas infectadas com PV e período de incubação de 24h. Nas placas infectadas com a amostra 4005 e tratadas com siRNAs, a maior queda de título viral foi na placa tratada com siRNA 360, de 1,0 log, comparando-se com a placa controle de incubação de 24 para a amostra 4005. Nas placas tratadas com siRNA 649 e siRNA 652, também houve a diminuição de título viral, mas em uma escala menor (0,25log e 0,125log, respectivamente) comparando-se com o controle. Nas placas infectadas com PV e incubadas durante 48h, os títulos apresentados foram de 5,625logTCID50/ml, 4,625logTCID50/ml e 4,75logTCID50%/ml para os siRNAs 360, 649 e 652, respectivamente, enquanto que na placa controle o título foi 6,0logTCID50C%/ml. A placa com período de incubação de 48h com a amostra 4005 e tratada com siRNA 360 apresentou a maior queda de título viral entre os três siRNAs, o que resultou em 1,125log de diferença. Nas monocamadas onde foram administrados siRNA 649 e siRNA 652, observou-se também uma pequena queda de título viral igual a 0,875log e 0,295log, respectivamente, comparando-se com a placa não tratada. Para o ensaio in vivo, foram usados camundongos albino suíços de 21 dias com peso entre 11 e 14g, infectados com a cepa PV e AgV3 em 10DL50% via intracerebral. Duas horas depois da infecção, foi inoculada por via intracerebral uma solução do siRNA 360 com Lipofectamine 2000. Os animais com paralisia foram eutanasiados e aqueles sobreviventes foram observados até completar 30 dias de observação quando foram, então, eutanasiados. O sistema nervoso central de todos os animas foi recolhido e submetido a IFD. A utilização do siRNA 360 em camundongos resultou em 30% de animais sobreviventes frente amostra 4005, enquanto que a mortalidade nos animais não tratados foi de 90%. Nos animais inoculados com a amostra PV e tratados com este siRNA, a sobrevivência foi de 40%, enquanto que no grupo controle a mortalidade foi de 100%. O resultado do ensaio in vitro demonstra que os siRNAs utilizados são capazes de inibir a replicação do vírus da raiva, com eficiência mais pronunciada para o siRNA 360. In vivo, este siRNA foi capaz de induzir a proteção parcial dos animais inoculados com as duas variantes virais. Estes resultados, ainda que indiquem a necessidade de mais estudos, permitem concluir que a RNAi é uma tecnologia promissora como antiviral contra a raiva.

Rabies is a zoonotic disease that affects all mammals and causes more than 55.000 human deaths every year, caused by rabies virus (RABV) a virus of the Mononegavirales order, Family Rhabdoviridae and the Lyssavirus genus. After the onset of the symptoms, the illness has a fast progression and the patients feel intense physical suffering. Currently, human rabies treatment has been based on the Milwaukee Protocol which consists on the induction of coma and massive antiviral therapy. Despite this protocol has been successful in two cases, including a Brazilian one, more studies on antivirals for human rabies treatment are required. RNA interference is a new antiviral approach, which gives hope to the possibility of rabies antiviral treatment. The aim of this study was to assess the decrease in titres of rabies virus in vitro and in vivo using short-interfering RNAs. To this end, three siRNAs (siRNA 360, siRNA 652, and siRNA 649) were used with antisense strands complementary to rabies virus phosphoprotein (P) mRNA and three other (Le 1, Le 2, Le 3) to the leader RNA. Pasteur virus strain (PV) and strain 4005 (AgV3) of rabies virus and BHK-21 cells were used, and the monolayers were transfected with each of the RNAs with Lipofectamine-2000. After 22 hours, the siRNA-treated and the control plates were tested by direct fluorescent antibody test (DFAT) with anti-rabies virus nucleocapsid antibody conjugate with fluorescein isothiocianate (Pasteur Insitutte, Brazil). The plates transfected with siRNA against phosphoprotein mRNA were also incubated for 48 hours and subjected to IFD assay. Virus titres were calculated by the Spearman-Karber method. The results showed that siRNAs against virus leader RNA were not able to inhibit the replication of the virus. The use of siRNAs against P mRNA resulting titres of 3.625logTCID50/ml 3.875logTCID50/ml and 4.125logTCID50/ml for siRNAs 360, 649 and 652, respectively, while, for the control plate, the titre was 4.0logTCID50/ml in plates with PV and 24h incubation period. In plates with strain 4005 and treated with siRNAs, the highest viral titre decrease was obtained with siRNA 360, with a 1.0 log difference compared to the control plate of strain 4005 incubated for 24h. The plates treated with siRNA 649 and siRNA 652 have was also shown a decrease in viral titres, but on a smaller scale (0.25log and 0.125log, respectively) compared to the control. The plates infected with PV and incubated for 48 hours showed titre of 5.625logTCID50/ml, 4.625logTCID50/ml and 4.75logTCID50%/ml for siRNAs 360, 649 and 652, respectively, while for the control plate the titre was 6.0logTCID50C%/ml. The plate with strain 4005 and then treated with siRNA360 and incubated for a total of 48h had the highest viral titre decrease among the three siRNAs, which resulted in a 1.125log difference compared to the control plate. In monolayers treated with siRNA649 and siRNA652 there was also a discrete drop in viral titres (0.875log and 0.295log, respectively) compared to the control plate. For the in vivo assay, 21-day old Swiss albino mice weighing between 11 and 14g were intracerebrally inoculated with PV or 4005 strains (10DL50%). Two hours after inoculation, a solution of siRNA360 with Lipofectamine 2000 was also intracerebrally injected. Mice presenting paralysis and those that survived the 30 days of observation were euthanized. The central nervous system of all animals was collected and submitted to IFD. The use of siRNA360 in mice resulted in survival of 30% of animals in the group inoculated with strain 4005, whereas 90% mortality was observed in the control group. In animals inoculated with the PV strain, and treated with siRNA360, the survival rate was 40% and in the control group the mortality was 100%. The results of the in vitro assay demonstrate that the siRNAs used are effective in inhibiting the replication of rabies virus with a more intense inhibition regarding siRNA 360. In vivo, this siRNA was able to induce partial protection of animals infected with both viral variants. These results also indicate that, despite the need for further studies, RNAi is a promising technology as antiviral against rabies.

A Bayesian approach to estimate the accuracy of "in-house" ELISA assay to measure rabies antibodies from compulsory vaccinated dogs and cattle

Rabies is a vaccine-preventable disease that causes acute encephalitis in mammals, and it is still a significant public health problem in numerous countries. Infected dogs represent the main vectors involved in human rabies. Additionally, cattle rearing close to geographic areas where vampire bats are found presents an important connection with rural epidemiology. We applied two "in-house" enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) methodologies, considered alternatives to measure antibodies from vaccinated dogs and cattle, without employing the gold standard approach. The ELISA assays were performed on individual serum samples taken from domestic adult dogs and cows compulsory vaccinated against rabies (147 urban dogs and 64 cows; n = 211). The sandwich and liquid-phase competitive ELISA (scELISA and lpcELISA), considered "in-house" assays, were performed according to previous works. The only statistical methodology that allows this study is the Bayesian approach, developed to replace the conventional Hui-Walter paradigm. For conditional independent Bayesian model (one population, two tests and no gold standard) the prior information for sensitivity and specificity of each test, mode, prevalence and transformed (á, â) were submitted to Bayesian inference. The "in-house" lpcELISA revealed 16 - out of 261 serum samples - negative results, whereas in scELISA all results were positive. The Bayesian approach showed that prior information was specified for all parameters; posterior medians were Se scELISA 89%, Sp scELISA 88%, Sp lpcELISA 95% Se lpcELISA 98%, and prevalence (pi) of 99%, without the use of gold standard analysis to measure specific anti-rabies antibodies.

Aspectos clínicos e patológicos em bovinos afetados por raiva com especial referência ao mapeamento do antígeno rábico por imuno-histoquímica / Clinical and pathological aspects in cattle affected by rabies with special reference to the rabies antigen mapping by immunohistochemistry

Este estudo retrospectivo incluiu achados clínicos e patológicos de 15 bovinos afetados por raiva. Em treze dos quinze casos, raiva foi confirmada por imunofluorescência direta. Bovinos entre 4 meses e 8 anos foram afetados. O curso clínico variou de três a sete dias. A forma paralítica foi a mais frequente e incluiu incoordenação, paresia e paralisia dos membros pélvicos, decúbito, movimentos de pedalagem e morte. Os principais achados histopatológicos foram meningoencefalite linfoplasmocitária associada com corpúsculos de Negri em 86,6 por cento dos casos. Todos os casos foram positivos na imuno-histoquímica para raiva, cujas reações foram mais evidentes no tronco encefálico, incluindo bulbo, ponte e mesencéfalo, além de gânglio trigêmeo. A imuno-histoquímica demonstrou o vírus da raiva em axônios, dendritos e pericário de neurônios, como agregados de grânulos ou em formações arredondadas associadas com números variáveis de corpúsculos de inclusão virais nos neurônios. Houve também marcação nos neurônios de Purkinje e de seus processos na camada molecular, nos núcleos do tronco encefálico e camada profunda do córtex telencefálico. A imuno-histoquímica pode ser importante ferramenta diagnóstica no diagnóstico da raiva, especialmente em situações nas quais não é possível manter refrigeração adequada das amostras e em casos com meningoencefalite não-supurativa e ausência de corpúsculos de inclusão.(AU)

This retrospective study included clinical and pathological findings from 15 cattle affected by rabies. Thirteen of the 15 cases were confirmed by direct immunofluorescence. Cattle between 4 months and 8 years of age were affected. Clinical course ranged from 3 to 7 days. Paralytical form was the most common clinical picture and included incoordination, paresis, and paralysis of the pelvic members, besides recumbence, paddling, and death. The main histopathological findings were lymphoplasmacytic meningoencephalitis associated with characteristic Negri bodies in 86.6 percent of the cases. All cases showed anti-rabies immunostaining, which were most prominent in the brainstem including medulla oblongata, pons, and midbrain, besides trigeminal ganglion. Positive labeling was present within axons, dendrites, and perikarya of neurons as aggregates of granules or round formations associated with varying numbers of inclusion bodies. Immunostaining was also observed in the Purkinje neurons and their processes in the molecular layer, in the neurons of of the brainstem, and deep layer of the telencephalic cortex. Immunohistochemistry may be an important auxiliary tool for the diagnosis of rabies, especially in circumstances in which refrigeration cannot be adequately maintained, and in cases characterized by nonsuppurative meningoencephalitis with absence of inclusion bodies.(AU)

Ocorrência de anticorpos anti-Neospora caninum em cães da microrregião da Serra de Botucatu, Estado de São Paulo, Brasil

Neosporosis is a parasitic disease caused by a protozoon Neospora caninum, which is recognized as an important cause of bovine abortion and canine neuropathy. Considering the isolation of N. caninum and the frequent serology in bovines of our region, the objectives of the present trial were to evaluate the occurrence of antibodies anti -N. caninum in dogs of the Botucatu range micro region, in the State of São Paulo, and its association with gender, age and origin (urban area - exclusively from the city; rural area - only farms and cottages; and periurban area - access to the urban and rural areas) of the dogs studied. A total of 963 dogs of defined breeds or non-defined breeds, of both genders and different ages, showing no clinical symptoms, were analyzed. Animals were randomly selected during the anti-rabies vaccination campaign in the region, from May to September 1998. Serum samples obtained from the animals were evaluated by means of the Indirect Fluorescent Antibody Test (IFAT) using as antigen N. caninum, standard strain NC-1. A total of 245 animals were reagent (25.4% positive results), with 161 (27.5%) males and 84 (22.3%) females. According to the origin - urban, rural and periurban areas - 223 (25.8%), 11(16.9%) and 11(33.3%) dogs were, respectively, reagent to the IFAT. All of the 11 cities in this region presented seropositive dogs with occurrence rates ranging from 53.5 to 8.9%. The lower positive percentage was observed in dogs below 1 year old (16.2%) when compared with animals from 1 to 4 years old and more than 4 years old (28.4 % and 28.0% respectively), which did not present any differences between them. Results obtained characterized the seropositivity for N. caninum in dogs from all Municipalities in the Botucatu micro region showing the wide distribution of the agent in the region.

Neosporose é uma enfermidade parasitária causada pelo protozoário Neospora caninum reconhecido como importante causa de abortamento bovino e neuropatia canina. Considerando o isolamento de N. caninum e a sorologia freqüente em bovinos em nossa região, os objetivos do presente trabalho foram avaliar a ocorrência de anticorpos anti-N. caninum em cães da Microrregião da Serra de Botucatu, Estado de SãoPaulo, e sua associação ao sexo, idade e procedência quanto à zona urbana (exclusivamente cidade), rural (somente chácaras e sítios) e peri-urbana (acesso à zona urbana e rural) dos cães estudados. Foram analisados 963 cães, com ou sem raça definida, de ambos os sexos e diferentes idades, sem apresentação de qualquer sintomatologia clínica. Os animais foram selecionados aleatoriamente durante a campanha de vacinação anti-rábica da microrregião da Serra de Botucatu, no período de maio a setembro de 1998. O soro obtido dos animais foi avaliado por meio da Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) utilizando como antígeno a cepa padrão NC-1 deN. caninum. Observaram-se 245 animais reagentes (25,4% de positividade), sendo 161 (27,5%) machos e, 84 (22,3%) fêmeas. Dos animais de zona urbana, rural e mista 223 (25,8%),11(16,9%) e 11(33,3%), respectivamente, foram reagentes à prova de RIFI. Todos os 11 municípios apresentaram cães soropositivos com valores de ocorrência que variaram de 8,9% a 53,5%. Observou-se percentual de positividade menor em cães até um ano (16,2%) quando comparados àqueles entre 1 a 4 anos e superior a 4 anos (28,4 % e 28,0%, respectivamente) que não apresentaram diferença entre si. Os resultados obtidos caracterizaram soropositividade para N. caninum em cães pertencentes a todos os municípios da Microrregião da Serra de Botucatu evidenciando a ampla distribuição do agente na região.

Avaliação da vacinação antirrábica e da suplementação com Matricaria Chamomila CH12 na resposta imune humoral em bovinos da raça nelore / Evaluation of the rabies vaccination and supplementation with Matricaria chamomila CH12 in humoral immune response in Nelore cattle

O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito da suplementação com Matricaria Chamomila CH12 sobre a resposta imune humoral em bovinos vacinados com uma única dose de vacina antirrábica. Vinte e oito bovinos, fêmeas, Puro de Origem (PO), com idade de 12 meses foram divididos aleatoriamente em 2 grupos (14 bovinos/grupo): o grupo controle (GC) recebeu o sal mineral sem suplemento e vacina antirrábica e o grupo Teste (GT) recebeu 4 gramas de suplemento com Matricaria Chamomila CH12 adicionado ao sal mineral e por ingestão voluntária. Os títulos individuais de anticorpos neutralizantes foram determinados por meio da técnica de soroneutralização baseado no Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test (RFFIT). Os títulos sorológicos médios observados para os dois grupos estudados aos 48 e aos 90 dias foram comparados pelo teste t não-pareado com correção de Welch, e os títulos sorológicos dentro de cada grupo, aos 48 e 90 dias pós-vacinação, pelo teste t-pareado. Dentro de cada grupo, a proporção de animais imunizados contra raiva foram comparados pelo teste de Qui-quadrado de MacNemar. Não houve diferença estatística nos títulos de anticorpos neutralizantes entre os grupos estudados. Conclui-se que o uso da Matricaria chamomila CH12 adicionado ao sal mineral não alterou a resposta imune humoral, e que uma única dose não foi suficiente para manter os títulos de anticorpos antirrábicos protetores pós 90 dias de vacinação

The objective of this study was to evaluate the effect of supplementation with Matricaria chamomila CH12 through humoral immune response in vaccinated cattle with a single dose of antirabies vaccine. Twenty-eight female bovines, Pure Breed (PO), aged shape12 months old randomly divided into 2 groups (14 animals / group): control group (CG) received the mineral salt and rabies vaccine and group Testing (GT) received 4 grams of supplement with Matricaria chamomila CH12 added to mineral salt for voluntary intake. The individual titers of neutralizing antibodies were determined by the technique of neutralization based on the Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test (RFFIT). The average of serological titers observed for both groups at 48 and at 90 days were compared by using unpaired t-test with Welch correction, and serological titers within each group, at 48 and at 90 days post-vaccination, by paired t test. Within each group, the proportion of animals immunized against rabies were compared by chi-square MacNemar. There was no statistical difference in antibody titers between groups. It was concluded that the use of Matricaria chamomila CH12 core added to the mineral salt does not alter the humoral immune response, and that a single dose was not sufficient to maintain the antirrábicos protective antibody titers 90 days post vaccination

Influência da suplementação com crômio na resposta imune humoral anti-rábica em bovinos

ABSTRACT The effect of chromium yeast on antirabies humoral immune response was evaluated in Nelore heifers. Sixty heifers (Bos indicus) aged about 2 to 5 years were fed on Brachiaria decumbens pasture and allowed ad libitum access to mineral salt and water. They were randomly distributed into one of 4 groups (15 animals each): control animals (Gc) received chromium-free mineral salt; the other groups received 8.5, 17 and 34 mg chromium/salt kg, thus constituting groups G8.5, G17 and G34, respectively. In the first day of the experiment (day 0), all the heifers were vaccinated with commercial rabies vaccines and blood was sampled on days 0, 30, 60 and 90. Antirabies antibody titers were determined by virus neutralization test in mice. Results showed that heifers of G17 increased significantly the antirabies antibody; however, only in G34 was the titer of protective antibodies higher on the 90th day after vaccination. These results demonstrate that chromium increases neutralizing antirabies antibody titers, and that the best concentration is 34 mg Cr/kg mineral salt.

RESUMO O objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito do crômio em diferentes concentrações na forma de levedura de crômio na resposta imune humoral anti-rábica em bovinos. Utilizaram-se 60 novilhas da raça Nelore (Bos indicus) com idade média de 2 e 5 anos, alimentadas em pastagem de Brachiaria decumbens, com fornecimento da água de bebida e sal mineral ad libidum, divididas aleatoriamente em 4 grupos de 15: grupo controle (Gc) que receberam o sal mineral sem crômio, os demais grupos receberam sal mineral contendo 8,5, 17 e 34 mg de crômio/kg de sal, grupos G8,5, G17 e G34, respectivamente. Todos os bovinos receberam no dia 0 uma dose de vacina comercial anti-rábica inativada. Colheram-se amostras de sangue nos dias 0, 30, 60 e 90 e os títulos de anticorpos anti-rábicos foram determinados por meio do teste de soroneutralização em camundongos. Os resultados obtidos mostram que as novilhas do grupo G17 apresentaram diferenças significativas no título de anticorpos anti-rábicos, no entanto, somente o G 34 mostrou persistência dos títulos de anticorpos protetores, 90 dias após a vacinação. Os resultados obtidos permitem concluir que o crômio aumentou o título de anticorpos neutralizante anti-rábico e que a melhor concentração estudada foi 34 mg de Cr/kg de sal mineral.

Serological profile of anti-Toxoplasma gondii antibodies in apparently healthy dogs of the city of Botucatu, São Paulo State, Brazil

Toxoplasmosis is a zoonosis caused by Toxoplasma gondii, a coccidian protozoan of worldwide distribution. The seroprevalence in canine population can be an alternative for measuring T. gondii urban spreading. A total of 780 blood samples from dogs were collected, during the yearly anti-rabies campaign, carried out by the Department of Veterinary Hygiene and Public Health, School of Veterinary Medicine and Animal Husbandry (FMVZ), São Paulo State University, UNESP, together with the county health authorities, in August 1999. Using Indirect Fluorescent Antibody Test (IFAT) for detecting antibodies anti-T. gondii in the sera samples, we observed that 258 dogs (33.1%) were positive. The associations between the serological results and the epidemiological variables were studied. Statistically significant differences were not found regarding sex (32.2% male and 34.3% female reactors). Dogs without a defined breed showed seropositivity statistically higher than the pedigreed group. The occurrence of infection was considered higher with age.

Antibody and cytokine serum levels in patients subjected to anti-rabies prophylaxis with serum-vaccination

Rabies is considered a fatal disease once clinical symptoms have developed. The aim of this study was to evaluate epidemiological aspects and immune response in patients attacked by domestic and wild animals and subjected to post-exposure rabies treatment with equine serum and associated vaccine. Thirty-three patients were evaluated; they were between 13 and 65 years old, 75.8% were male and 24.2% female, and from the Botucatu neighborhood. Twenty healthy control individuals with the same age range were also studied. Specific antibodies to equine immunoglobulins and IFN-gamma, IL-2, IL-4, and IL-10 production were evaluated by ELISA. IgM, IgE, IgG and subclasses, and rabies virus antibodies serum levels were determined by nephelometry and seroneutralization methods, respectively. No anaphylactic or serum sickness allergic reactions were observed in patients after treatment. Anti-equine IgG levels were significantly higher than those of IgM after 14 and 28 days of treatment. Protective antibodies to rabies virus > 0.5 UI/ml were detected in 84.6% and 75% of patients at days 14 and 28, respectively. IFN-gamma, IL-2 and IL-10 levels in patients before and 48h after treatment were significantly higher than in controls suggesting that both Th1 and Th2 cells were activated in the patients. Serum IgM levels were higher at day 14, and IgG2 and IgE levels were higher at day 28 of treatment. These results suggest that post-exposure rabies treatment in humans induces significant alterations in patient immune response characterized by increased levels of cytokines, serum levels of specific rabies virus antibodies, and the equine serum components employed in the treatment.