Relationships between antral follicle counts and ovarian morphology of Bos indicus of different ages / Relações entre a contagem de folículos antrais e a morfologia ovariana de Bos indicus de diferentes idades

This study aimed to evaluate the relationship between the antral follicle count (AFC) and the ovarian morphology of Bos indicus in different age groups: 12-23 months (G1), 24-35 months (G2), 36-47 months (G3), 48-59 months (G4), and >60 months (G5). Ovaries were collected individually and sent to the laboratory, where we measured AFC, the diameter and weight of the ovaries, dominant follicle (DF, >8mm), corpus luteum (CL), and small follicles (SF, <8mm). AFC were classified as high, intermediate-high, intermediate-low, and low. A group of ovaries was subjected to follicular aspiration to evaluate the morphological quality of the recovered cumulus oocyte complexes (COCs). Mean AFC did not vary between ages. The morphological characteristic that was most closely correlated with AFC was the weight of the small follicles. There was no relationship between AFC and the weight and diameter of the DF and CL. Quality of the COCs was superior in ovaries in which the CL was present, but it did not vary between the AFC classes. We conclude that AFC can be performed on a single ovary, regardless of the presence, diameter, and weight of the CL and DF in zebu between 12 and 60 months old.

O presente estudo teve como objetivo avaliar a relação entre a contagem de folículos antrais (CFA) e a morfologia ovariana de Bos indicus em diferentes faixas etárias: 12-23 meses (G1), 24-35 meses (G2), 36-47 meses (G3), 48-59 meses (G4) e >60 meses (G5). Os ovários foram coletados individualmente e enviados ao laboratório, onde suas características morfológicas foram medidas: CFA, diâmetro e peso dos ovários, do folículo dominante (FD, ≥8 mm), do corpo lúteo (CL) e dos folículos pequenos (SF, <8 mm). A CFA foi classificada como alta, intermediária-alta, intermediária-baixa e baixa. Um grupo de ovários foi submetido à aspiração folicular para avaliar a qualidade morfológica dos complexos cumulus oócitos (COCs) recuperados. A CFA média não variou entre as idades. A característica morfológica que se correlacionou mais intimamente com a CFA foi o peso dos folículos pequenos. Não houve relação entre a CFA e o peso e o diâmetro do FD e do CL. A qualidade dos COCs foi superior em ovários em que o CL estava presente, mas não variou entre as classes de CFA. Concluiu-se que a CFA pode ser realizada em um único ovário, independentemente da presença, do diâmetro e do peso do CL e do FD em zebuínos entre 12 e 60 meses de vida.

A INFLUÊNCIA DO MOMENTO DA ONDA DE CRESCIMENTO FOLICULAR EM OVÁRIOS DE ABATEDOURO SOBRE A PRODUÇÃO IN VITRO DE EMBRIÕES BOVINOS

A produção in vitro de embriões (PIVE) muito tem contribuído para o desenvolvimento da pecuária. Para tornar esta biotécnica mais eficiente busca-se agora determinar o momento ideal do ciclo estral da fêmea bovina para a recuperação de oócitos com melhor qualidade. Visando o uso racional da aspiração folicular, seja por ovum pick up (OPU) ou em ovários de abatedouro, o presente estudo teve como objetivo investigar qual o impacto do momento da onda de crescimento folicular sobre a taxa de produção in vitro de embriões. Para isto, ovários de fêmeas Bos indicus (N = 196) foram coletados em abatedouro local e transportados ao laboratório em recipiente térmico contendo solução de NaCl 0,9% aquecida a temperatura de 36ºC. Em seguida, no laboratório, foi realizada a avaliação de cada par de ovários individualmente. As estruturas analisadas foram os folículos, quanto à ocorrência ou não da divergência folicular (sendo considerado folículo dominante FD - aquele 6mm), e o corpo lúteo (CL), quanto à sua presença/ausência e estágio de desenvolvimento. Posteriormente, os pares ovarianos foram alocados entre os seguintes grupos experimentais: G1 CL inicial e ausência de folículo dominante; G2 CL e ausência de folículo dominante; G3 CL inicial e presença de folículo dominante; G4- CL e presença de folículo dominante. O grupo controle não passou por avaliação e classificação, todos os ovários foram aspirados aleatoriamente (n= 13 pares). Os oócitos foram recuperados por aspiração folicular, em seguida foram maturados, fecundados e cultivados in vitro, cada grupo individualmente. As taxas de clivagem e blastocisto foram analizadas por teste de regressão logística binária (P 0,05). A taxa de clivagem obtida, em ordem decrescente entre os grupos, foi de 50,22% (229/456) para o grupo G4 (CL e presença de FD); 45,65% (252/552) grupo G3 (CL inicial e presença de FD); 44,06% (89/202) grupo G2 (CL e ausência de FD); 36,23% (50/138) grupo Controle e 35,19% (120/341) grupo G1 (CL inicial e ausência de FD; P < 0,0001). Por outro lado, a melhor taxa de blastocisto obtida em D7 foi de 37,62% (76/202) pertencente ao grupo G2; seguida por 29,62% (101/341) referente ao grupo G1 e 26,81% (37/138) do grupo Controle; sendo que as menores taxas de blastocisto foram dos grupos G4 e G3; 10,09% (46/456) e 9,24% (51/552), respectivamente (P < 0,0001). Como conclusão, podemos sugerir que a aspiração folicular pós abate de pares ovarianos com presença de corpo lúteo funcional associado à ausência de folículo dominante proporciona a recuperação de oócitos com maior qualidade e o incremento nos resultados da produção in vitro de embriões.

In vitro embryo production (PIVE) has contributed to the development of livestock. To make this biotech more efficient, it is now sought to determine the ideal moment of the estrous cycle of the bovine female for the recovery of oocytes with better quality. Aiming at the rational use of follicular aspiration, either by ovum pick up (OPU) or with slaughter ovaries, the present study had as objective to investigate the impact of the moment of the wave of follicular growth on the rate of in vitro production of embryos. For this, ovaries of Bos indicus females (N = 196) were collected in the local slaughterhouse and transported to the laboratory in a thermostatic container containing NaCl 0,9% solution heated to 36 ° C. Then, in the laboratory, the evaluation of each pair of ovaries individually was performed. The structures analyzed were the follicles, whether or not follicular divergence was established (dominant follicle - FD - that 6mm), and the corpus luteum (CL), in terms of their presence/absence and stage of development. Subsequently, ovarian pairs (N = 196) were allocated between the following experimental groups: G1 initial CL and absence of dominant follicle; G2 - CL and absence of dominant follicle; G3 - initial CL and presence of dominant follicle; G4-CL and presence of dominant follicle. The control group did not undergo evaluation and classification, all ovaries were randomly aspirated (n = 13 pairs). The oocytes were recovered by follicular aspiration, then matured, fertilized and cultured in vitro, each group individually. The cleavage and blastocyst rates were analyzed per binary logistic regression test (P 0,05). The cleavage rate obtained, in decreasing order among the groups, was 50.22% (229/456) for the G4 group (CL and presence of FD); 45.65% (252/552) G3 group (initial CL and presence of FD); 44.06% (89/202) G2 group (CL and absence of FD); 36.23% (50/138) Control group and 35.19% (120/341) G1 group (initial CL and absence of FD; P < 0,0001). On the other hand, the best blastocyst rate obtained in D7 was 37.62% (76/202) belonging to the G2 group; followed by 29.62% (101/341) for the G1 group and 26.81% (37/138) for the Control group; with the lowest rates of blastocyst being in groups G4 and G3; 10.09% (46/456) and 9.24% (51/552), respectively (P < 0,0001). As a conclusion, we can suggest that follicular aspiration after the slaughter of ovarian pairs with the presence of functional corpus luteum associated with the absence of dominant follicle provides the recovery of oocytes with higher quality and increase in the results of in vitro production of embryos.

AVALIAÇÃO POR ULTRASSONOGRAFIA DOPPLER DO EFEITO DO EXTRATO DE PITUITÁRIA EQUINA EM OVÁRIOS DE ÉGUAS CÍCLICAS

Com o objetivo de avaliar o efeito do extrato bruto de pituitária equina (EPE), produzido no período de anestro estacional, sobre a superovulação e vascularização folicular e luteal, foram utilizadas seis éguas da raça Puro Sangue Árabe, em dois ciclos estrais (controle e tratamento). As éguas foram sincronizadas utilizando prostaglandina F2, e monitoradas diariamente, por ultrassonografia modo B, até que os folículos atingissem diâmetro de aproximadamente 23 mm (desvio). No ciclo tratamento, a partir do desvio, as éguas receberam 8 mg de EPE, uma vez ao dia, por via IM, até que dois ou mais folículos atingissem diâmetro entre 32 a 35 mm. A ovulação foi induzida com acetato de deslorelina (750 g, IM) quando os folículos atingiram no mínimo 35 mm. No momento do desvio folicular, da indução da ovulação e do último exame pré-ovulatório foi utilizada a ultrassonografia modo B para medir o diâmetro dos folículos e a área do corpo lúteo no oitavo dia pós-ovulação; também foi usado Doppler colorido para avaliar a perfusão sanguínea da parede folicular e do parênquima luteal, em todos os momentos. No ciclo controle foi realizado o mesmo procedimento exceto pelo uso do EPE. Não foi observado efeito do EPE sobre número de ovulações, diâmetro dos folículos, vascularização da parede folicular e concentração sérica de estrógeno. Os animais tratados ou não, apresentaram CLs funcionais conforme a concetração sérica de progesterona, não havendo diferença na área do parênquima ou vascularização luteal, nem na concentração de progesterona, no oitavo dia após a ovulação. Foi observado que o EPE proporcionou um maior número de folículos subordinados no momento da indução da ovulação do folículo dominante. Embora estes folículos não tenham chegado a ovular, concluiu-se que o EPE atuou no crescimento de folículos, que podem ser utilizados em outras biotécnicas como aspiração folicular, com maior aproveitamento da reserva folicular de ovários equinos.

Efeito da inibicao da enzima conversora de angiotensina no desenvolvimento folicular, dopplerfluxometria e expressao genica ovariana em bovinos.

O objetivo com este estudo foi avaliar o efeito da inibição da Enzima Conversora de Angiotensina (ECA), utilizando Maleato de Enalapril, na pressão arterial, crescimento folicular, taxa de ovulação, hemodinâmica útero-ovariana, concentrações de P4 e E2 e expressão gênica de células foliculares. Utilizou-se 31 fêmeas bovinas da raça Nelore (Bos indicus), que foram sincronizadas com protocolo à base de progesterona/ estradiol e, em seguida, tratadas com maleato de enalapril (0,5 mg/kg/dia) ou placebo (NaCl 0,9%) durante todo o protocolo (10 dias). Metade das fêmeas sincronizadas (n=17) foram submetidas a avaliações ultrassonográficas para acompanhamento da dinâmica folicular e dopplerfluxometria útero-ovariana. A outra metade (n=14) foi submetida à aspiração folicular guiada por ultrassom (Ovum pick up; OPU) para aferição da síntese hormonal e expressão gênica pelas células foliculares ovarianas. Não houve efeito do enalapril na pressão arterial média, na hemodinâmica útero-ovariana e no crescimento folicular e luteínico, porém a taxa de ovulação (%) foi significativamente maior no grupo Enalapril. As concentrações plasmáticas e intrafoliculares de Progesterona e Estradiol não diferiram significativamente entre tratamentos. O Enalapril alterou significativamente expressão gênica das enzimas P450aromatase, ECA2 e do receptor MAS nas células da granulosa dos folículos dominantes.

The aim of this study was to evaluate the effect of inhibition of the Angiotensin Converting Enzyme (ECA) with enalapril maleate, on blood pressure, follicular growth, ovulation rate, utero-ovarian hemodynamics, P4/E2 concentrations and gene expression of follicular cells. Were used 31 Nelore (Bos indicus) cows. The females were synchronized with progesterone/estradiol-based protocol and then treated with enalapril maleate (0.5 mg/kg/day) or placebo (NaCl 0.9%) throughout the protocol (10 days). A half of the synchronized cows (n=17) were ultrasonographically evaluated for monitoring the follicular dynamics and utero-ovarian dopplerflowmetry. A half of animals (n=14) were submitted to follicular aspiration guided by ultrasound Ovum pick up (OPU) for measurement of the follicular hormonal synthesis and gene expression. There was no effect of enalapril on arterial pressure, in utero-ovarian hemodynamics and follicular and luteal growth. The ovulation rate (%) was significantly higher in the enalapril treated cows. The plasma and intrafollicular concentrations of progesterone and estradiol not differed significantly between treatments. The enalapril altered significantly the gene expression of enzymes P450aromatase, ECA2 and MAS receptor in the granulosa cells of dominant follicles.

"Perfil hormonal e expressão de genes associados ao desvio folicular ovariano em bovinos"

O experimento 1 objetivou estabelecer um modelo de estudo do desvio folicular, permitindo identificar o momento exato do início do desvio. Vacas das raças Nelore (NEL; n=11) e Holandês (HPB; n=10) tiveram emergência da onda folicular ovariana sincronizada e avaliação ultrassonográfica ovariana realizada a cada 12 h. Quando o maior folículo (F1) atingiu tamanho médio de início do desvio para sua raça (NEL: 6,5; HPB: 8,5 mm), em crossover, foram aleatorizadas em dois grupos (CON: Controle; ASP: Aspiração), com aspiração do F1 ASP e nas vacas do grupo CON não houve aspiração. Avaliações ultrassonográficas foram mantidas até 48h pós-desvio. Os dados foram analisados pelo PROC MIXED (P<=0,05). No grupo CON,12h após F1 atingir tamanho de desvio, diferiu em diâmetro com os demais (F2/F3), caracterizando desvio. Não foi observada diferença entre F1 na aspiração e F2 12h após, no grupo ASP nas duas raças. Não houve diferença entre F1 CON com F2 ASP após aspiração do F1. Todavia, F2 ASP apresentou maior diâmetro em relação ao F2 CON a partir de 12h após o momento do desvio, em ambas as raças. Foi realizada colheita de sangue em 0, 3, 6, 12 e 24h após aspiração, para avaliação da concentração plasmática de FSH e aumentou em 12h após aspiração do F1 ASP. O experimento 2, objetivou verificar expressão de genes associados ao desvio, CYP19A1 (Aromatase), receptor de LH (LHr) e PAPP-A (Pappalysin 1) em vacas NEL utilizando o mesmo modelo do experimento 1, entretanto obtendo células da granulosa por meio de lavagem intrafolicular. As vacas (n=10) tiveram emergência da onda sincronizada. Foram estabelecidos três tratamentos: 0h, o maior folículo atingiu 6,5 mm, e os dois maiores folículos foram aspirados (FD0h; FS0h); 12h, os dois maiores folículos (FD12h; FS12h) foram aspirados 12h após o maior atingir 6,5 mm; e grupo desvio, o maior folículo (FD0h) foi aspirado quando atingiu 6,5 mm, e o segundo maior (FS->FD) 12h depois. A suspensão contendo células da granulosa, foi centrifugada, o sobrenadante dosado para estradiol-17 (E2) por ELISA. O pellet foi analisado para expressão de RNAm. Análise estatística foi realizada pelo PROC MIXED do SAS. Concentração de E2 (ng/mL) para FS->FD diferiu do FS0h e FS12h e não diferiu de FD0h e FD12h comprovando que FS->FD na ausência de um FD0h aumenta sua concentração de E2 semelhante aos folículos dominantes. Não houve diferença entre os grupos para a expressão relativa para PAPP-A e CYP19A1. Para LHr, houve tendência de aumento na expressão nos folículos FS->FD, quando comparados ao do grupo 0h. Não houve diferença entre FS->FD e o grupo 12h. FD12h diferiu do grupo 0h (FD0h e FS0h) e FS12h. Conclui-se que, o segundo maior folículo é capaz de se tornar dominante quando se aspira o maior folículo permitindo que se tenha estimativa mais segura do momento exato da dominância; também, ocorre um aumento no FSH plasmático 12h após a aspiração do maior folículo. O aumento na expressão de LHr foi o principal fator para o estabelecimento do desvio em vacas NEL.

This study was conducted in two experiments. Experiment 1 aimed to establish a manipulative model to study follicle deviation. Nelore (NEL n=11) and Holstein (HOL n=10) cows had the emergence of the wave synchronized. Ovarian ultrasonography was performed every 12h. When largest follicle (F1) reached the average size of deviation to its breed (NEL: 6.5; HOL: 8.5 mm), cows were randomized into two groups (CON: control; ASP: Aspiration) in a crossover design. F1ASP was aspirated, and for cows of CON group there was no aspiration. Ultrasound exams were maintained through 48h post-deviation. Data were analyzed using PROC MIXED (P<=0.05). In the CON group, 12h after F1 has reached deviation size, there was difference in diameter in relation to F2 and F3, characterizing deviation. There was no difference between diameters of F1 at the time of aspiration and F2 12h after in the ASP group for both breeds. There was no difference between the F1 from CON group with F2 ASP group after F1 aspiration. However, F2ASP had a bigger diameter compared to the CON group F2 12h after the time of deviation in both breeds. Blood samples were collected at 0, 3, 6, 12 and 24h after aspiration, to evaluate plasma concentrations of FSH. FSH increased at 12h after the F1 aspiration in ASP group. Experiment 2 was conducted to verify the expression of genes associated with follicle deviation, CYP19A1 (aromatase), LH receptor (LHR) and PAPP-A (Pappalysin 1) in NEL cows using same model of experiment 1, however by obtaining granulosa cells through intrafollicular flushing. Cows (n=10) had the wave emergence synchronized. Three treatments were established: 0h, when the biggest follicle reached 6.5 mm, the two biggest follicles were aspirated (DF0h; SF0h); 12h, the two biggest follicles (DF12h; SF12h) were aspirated 12h after the biggest follicle had reached 6.5 mm; and deviation group, biggest follicle (DF0h) was aspirated when reached 6.5 mm, and the second biggest follicle (SF->DF) was aspirated 12h later. The follicular fluid granulosa cells was centrifuged and supernatant was assayed for 17-estradiol (E2) concentration by ELISA. The pellet was analyzed for mRNA expression. Statistical analysis was performed using the SAS PROC MIXED. Concentration of E2 (ng/mL) for SF->DF differed from SF0h and SF12h and did not differ from DF0h and DF12h showing that SF->DF in the absence of a DF0h had an increased concentration of E2 similar to dominant follicles. There was no difference between groups for the relative expression of mRNA for PAPP-A and CYP19A1. For LHr expression, there was a tendency to increase in SF->DF follicles when compared to the group 0h. There was no difference between SF->DF and group 12h. DF12h differed from group 0h (DF0h/SF0h) and SF12h. In conclusion, second biggest follicle can become dominant when the biggest follicle is aspirated, allowing to have more reliable estimation of the exact moment of follicle deviation, associated with an increase in plasma FSH 12h after aspiration of the biggest follicle. Increased expression of LHr was the main characteristic of establishment of deviation in NEL cows.

Estudo em larga escala dos efeitos da idade sobre os parâmetros reprodutivos e viabilidade de oócitos equinos após injeção intracitoplasmática de espermatozóide (ICSI) usando sêmen sexado

O objetivo do presente estudo foi comparar o efeito da idade de doadores de oócitos sobre os parâmetros reprodutivos, a taxa de recuperação e qualidade de oócitos após ICSI utilizando sêmen sexado. Éguas Pôneis de Polo (n = 79) e Puro-Sangue (n = 23) doadoras de oócitos (400-600kg e 3-29 anos) foram utilizados durante as estações reprodutivas de 2009/2010 e 2011 no hemisfério Sul (San Luis, Argentina) e norte (Kentucky, EUA), respectivamente. As éguas foram divididas em três categorias experimentais: Jovens (YM: 3-10 anos), Meia Idade (MA: 11-17a) e Idosas (OM18a). Um total de 326 oócitos recuperados in vivo a partir de folículos pré-ovulatórios (n=279) e folículos imaturos em crescimento (n=47). Desses, 224 oócitos foram recuperados, classificado e dirigido a um programa comercial ICSI com Pôneis de Polo (primeira estação). Durante a segunda estação, 57 oócitos foram recuperados a partir de folículos pré-ovulatórios e 47 oócitos de folículos em crescimento e congelados em nitrogênio líquido para ser usado posteriormente em outro estudo. Os pontos experimentais avaliados foram: intervalos (dias) entre a aspiração ou a ovulação (AS/OV) ao PGF, PGF ao GnRH (Dia 0=GnRH), AS/OV ao Dia 0, e AS/OV ao Dia+1; edema uterino (UE); tonus cervical (CT); diâmetro máximo do folículo dominante (MdF1) em D0 e D+1, e a taxa de crescimento folicular. O número total de aspirações, o número de folículos aspirados e oócitos por aspiração e/ou folículo, o grau de expansão das células do cúmulos, a presença e qualidade do corpo polar (PB), o volume ooplasma, o intervalo de GnRH a aspiração, a GnRH a ICSI, e a taxa de clivagem (CR) depois da ICSI também foram avaliados. Foram observadas diferenças significativas entre as três categorias experimentais (YM, MA e OM) para: intervalos (dias) entre PGF-GnRH, AS/OV-GnRH, AS/OV-Day 1, edema uterino no Dia 0, CT em Dia 1, MdF1 no D0 e D+1 e volume de ooplasma. A taxa de recuperação in vivo (RR) não foi afetada pela idade (média de 102%, 85% e 73,4% de oócitos recuperados por ciclo, por F1 e por folículo, respectivamente, P> 0,05). O CR não diferiu entre as categorias experimentais. Em conclusão, um efeito de envelhecimento pode ser observado em vários parâmetros reprodutivos em éguas. Os ovócitos no presente estudo tiveram um menor volume de ooplasma para OM comparados com YM, mas isso não foi eficaz em predizer a viabilidade dos oócitos ou o potencial para o desenvolvimento para a avaliação da taxa de clivagem após ICSI utilizando sêmen sexado.

The aim of the present study was to compare the effect of oocyte donors` age on reproductive parameters, recovery rate and quality of oocytes after ICSI using sexed semen. Polo Ponies (n=79) and Thoroughbred (n=23) oocyte donor mares (400-600kg and 3-29 years) were used during the 2009/2010 and 2011 reproductive seasons in the Southern (San Luis, Argentina) and in the Northern hemispheres (Kentucky, USA), respectively. Mares were divided into three experimental categories: Young Mares (YM: 3-10y), Middle Age Mares (MA: 11-17y) and Old Mares (OM18y). A total of 326 oocytes were recovered in vivo from pre-ovulatory follicles (n=279) and immature-growing follicles (n=47). From those, 224 oocytes were recovered, sorted and directed to a commercial ICSI program with Polo Ponies (first season). During the study`s second season, 57 oocytes were recovered from pre-ovulatory follicles and 47 oocytes from growing follicles and frozen in liquid nitrogen to be used in another study. The evaluated experimental end-points were: Intervals (days) between aspiration or ovulation (AS/OV) to PGF, PGF to GnRH (Day 0=GnRH), AS/OV to Day 0, and AS/OV to Day + 1; uterine edema (UE); cervical tone (CT); maximum diameter of dominant follicle (MdF1) on D0 and D+1, and follicular growth rate. Total number of aspirations, number of follicles aspirated and oocytes recovered per aspiration and/or follicle, the degree of cumulus cell expansion, the presence and quality of polar body (PB), the ooplasm volume, the interval from GnRH to aspiration, GnRH to ICSI, and the cleavage rate (CR) after ICSI were also evaluated. Significant differences between the three experimental categories (YM, MA and OM) were observed for: intervals (days) between PGF-GnRH, AS/OV-GnRH, AS/OV-Day +1, uterine edema on Day 0, CT on Day +1, MdF1 on D0 and D+1 and ooplasm volume. The in vivo recovery rate (RR) was not affected by age (average of 102%, 85% and 73.4% of oocyte recovered per cycle, per F1 and per follicle, respectively; P>0.05). The CR did not differ among experimental categories. In conclusion, an effect of aging could be observed in several reproductive parameters in mares. The oocytes in the present study had a smaller ooplasm volume for OM compared to YM, but this was not effective in predicting oocyte viability or the potential to development through evaluation of the cleavage rate after ICSI using sexed semen.

Resposta superovulatória após ablação folicular usando um dispositivo simplificado em bovinos (Bos taurus taurus)

A influência do momento da ablação do folículo dominante antes do início do tratamento superovulatório, e seu efeito sobre a dinâmica folicular ovariana e a taxa de produção de embriões, ainda permanece indeterminada em bovinos. O presente estudo foi desenvolvido com objetivo de avaliar a resposta superovulatória de fêmeas da raça Limousin, determinando os efeitos da influência do dia de início da superovulação (SOV) de animais no diestro; da presença ou ausência de folículos palpáveis nos ovários no momento de início do tratamento (  status ovariano); e do tempo, em horas, entre a ablação folicular e o início da SOV. Foram realizadas 244 lavagens uterinas para coleta de embriões em novilhas (n=98) e vacas (n=146), divididas em cinco grupos de acordo com o status ovariano no momento de início da SOV, durante o intervalo de 8 a 12 dias após o estro: grupo sem folículo perceptível (n=106); grupo com folículo mantido intacto (n=62) e grupos com folículo puncionado 48 h (n=10), 24 h (n=35) e 0 h (n=31) antes do início da SOV. Nos grupos em que foi realizada a ablação, utilizou-se uma cânula de metal contendo uma agulha para transposição da parede vaginal e ovariana até a aspiração do conteúdo folicular sob controle tátil por via retal. Os resultados obtidos determinaram que a presença de folículos palpáveis no momento de início da SOV reduz significativamente a resposta superovulat

Efeito do intervalo entre recrutamentos foliculares na superovulação de vacas da raça Holandesa não-lactantes / Effect of interval between follicular recruitments on superovulatory response in non-lactanting Holstein cows

Vacas da raça Holandesa não-lactantes, distribuídas em dois grupos, foram sincronizadas com o protocolo Ovsynch modificado. No dia sete (dia 0 = dia do segundo GnRH), o grupo 7 (G-7; n=19) recebeu CIDR usado previamente por cinco dias e 100mcg de GnRH, e o grupo 14 (G-14; n=21), CIDR e 25mg de PGF2alfa. No dia 14 foi aspirado o folículo dominante (FD), trocado o CIDR usado por um novo e foram aplicados 25mg de PGF2alfa. Iniciou-se o tratamento com FSH 36h depois, removeu-se o CIDR com o sétimo FSH e aplicou-se GnRH 36h depois. As inseminações foram feitas 12 e 24h depois. Recuperaram-se os embriões sete dias depois da inseminação artificial. O diâmetro do FD no G-7 foi 13,1±0,57mm no dia sete e 11,2±0,57mm no dia 14. O diâmetro FD persistente no G-14 aumentou de 12,6±0,55mm no dia sete para 16,4±0,55mm no dia 14 (P<0,001). O número de folículos >8mm, 48h após o início do tratamento com FSH, foi maior (P<0,05) no G-7 (15,6±0,05) que no G-14 (12,5±0,05). Não foi detectado efeito de tratamento sobre o número de corpos lúteos e de embriões. O menor intervalo entre recrutamentos foliculares aumentou o número de folículos recrutados, porém não alterou a quantidade e a qualidade dos embriões produzidos(AU)

Dry Holstein cows were synchronized by a modified Ovsynch protocol. On day 7 (day 0 = day of the second GnRH), group 7 (G-7; n=19) received an used CIDR and GnRH (100'g). Group 14 (G-14; n=21) received an used CIDR and PGF2alpha (25mg). On day 14, the dominant follicle (DF) was removed, by aspiration; the used CIDR was changed for a new CIDR plus PGF2alpha. Thirty-six hours later, the FSH treatment was initiated. On the seventh injection of FSH, the CIDR was removed. Thirty-six hours after, the cows received GnRH. Donors were inseminated 12 and 24h after the GnRH injection. Embryos were recovered seven days after AI. The DF diameter in G-7 was 13.1mm on day 7 and 11.2mm on day 14. The persistent DF in the G-14 increased from 12.6mm on day 7 to 16.4mm on day 14 (P<0.001). The number of follicles >8mm, 48h after the beginning of the FSH treatment, was 15.6 in G-7 and 12.5 in G-14 (P<0.05). No treatment effects were detected on number of corpus luteum and embryos. The shorter interval between follicular recruitment the higher the number of recruited follicles, but it did not have effects on the number or quality of embryos produced(AU)

Obtenção de oócitos e produção in vitro de embriões em doadoras lactantes da raça Gir (Bos taurus indicus)

Raças zebuínas (Bos taurus indicus) e seus cruzamentos têm papel fundamental na pecuária brasileira, e a raça Gir, em especial, acrescenta rusticidade e produtividade nas suas descendentes leiteiras. A produção in vitro de embriões bovinos é uma biotécnica de alto valor econômico, que, aliada à utilização de sêmen sexado para cromossoma X, possibilita a multiplicação com fêmeas de valor genético superior. Foram realizados dois experimentos com o objetivo de avaliar a produção in vitro (PIV) de embriões de doadoras da raça Gir na Fazenda Experimental da EPAMIG, em Uberaba, MG. O experimento 1 (EXP 1) visou verificar o efeito da ablação do folículo dominante sobre os resultados da PIV. No experimento 2 (EXP 2) os efeitos da estação do ano, idade da doadora, DNA mitocondrial materno e efeito do touro sobre a PIV foram estudados. No EXP 1, 42 multíparas e primíparas foram submetidas à aspiração de oócitos (OPU) a partir dos 15 dias pós-parto e a intervalos de 21 dias, sendo efetuada (65 sessões de OPU) ou não (115 sessões de OPU) a ablação do folículo dominante 3 dias antes da aspiração. Das 198 aspirações realizadas foram coletados 3.884 oócitos viáveis, que resultaram em 1.114 blastocistos. O número médio de oócitos viáveis aspirados e de blastocistos por sessão foi de 20,0 ± 10,6 e de 5,70 ± 4,9, respectivamente. Não foram identificados efeito da ordem de parto e aspiração, do dia após o parto para início da coleta e da condição corporal da doadora nos resultados da PIV. No entanto, a produção de blastocistos por sessão foi superior (5,65±1,02 vs. 3,78±0,97) nas vacas que sofreram ablação do folículo dominante (p<0,05). No EXP 2 foram avaliadas 363 aspirações de 85 doadoras fertilizadas com 23 touros diferentes que geraram 6.084 oócitos viáveis, 2.537 embriões, 1.105 gestações...

Zebu breeds (Bos taurus indicus) and its crosses have an essential role on the Brazilian cattle industry, and the Gyr breed, especially, incorporates hardiness and productivity onto its dairy descendants. The in vitro production of bovine embryos is a biotechnique of high economic value, which, combined to the use of sex-sorted semen bearing X chromosomes, allows for the multiplication of superior genetic value dams. Two experiments were conducted to evaluate the in vitro production (IVP) of embryos from Gyr donor cows at the EPAMIG Research Farm in Uberaba, MG, Brazil. Experiment 1 (EXP 1) aimed to verify the effect of ablation of the dominant follicle on IVP results. In experiment 2 (EXP 2), the effects of season, donor age, mitochondrial DNA and sire on IVP were studied. In EXP 1, 42 multiparous and primiparous cows underwent ovum pick up (OPU) after removal (65 OPU sessions- DFR) or non removal (115 OPU sessions- Control) of the dominant follicle 3 days before aspiration, starting from 15 days postpartum at approximately 21 day-intervals. Of the 180 OPU sessions performed, 3,884 viable oocytes were collected, which resulted in 1,114 blastocysts. The overall average numbers of oocytes aspirated and viable blastocysts per session were 20.0 ± 10.6 ± 4.9 and 5.70, respectively. OPU session, parity, calving to OPU interval and donor body condition did not influence IVP results. However, the production of blastocysts per session was higher (5.65 ± 1.02 vs. 3.78 ± 0.97) in DFR-cows (P <0.05). In EXP 2, a total of 363 OPU sessions from 85 donors was studied. Semen from 23 different bulls was used for in vitro fertilization, yielding 6,084 viable oocytes, 2,537 embryos and 1,105 pregnancies overall. Thirty and sixty-day day pregnancy rates after embryo transfer were 41.7% and 39.5%, respectively...

Resposta superovulatória após ablação folicular usando um dispositivo simplificado em bovinos (Bos taurus taurus)

A influência do momento da ablação do folículo dominante antes do início do tratamento superovulatório, e seu efeito sobre a dinâmica folicular ovariana e a taxa de produção de embriões, ainda permanece indeterminada em bovinos. O presente estudo foi desenvolvido com objetivo de avaliar a resposta superovulatória de fêmeas da raça Limousin, determinando os efeitos da influência do dia de início da superovulação (SOV) de animais no diestro; da presença ou ausência de folículos palpáveis nos ovários no momento de início do tratamento (  status ovariano); e do tempo, em horas, entre a ablação folicular e o início da SOV. Foram realizadas 244 lavagens uterinas para coleta de embriões em novilhas (n=98) e vacas (n=146), divididas em cinco grupos de acordo com o status ovariano no momento de início da SOV, durante o intervalo de 8 a 12 dias após o estro: grupo sem folículo perceptível (n=106); grupo com folículo mantido intacto (n=62) e grupos com folículo puncionado 48 h (n=10), 24 h (n=35) e 0 h (n=31) antes do início da SOV. Nos grupos em que foi realizada a ablação, utilizou-se uma cânula de metal contendo uma agulha para transposição da parede vaginal e ovariana até a aspiração do conteúdo folicular sob controle tátil por via retal. Os resultados obtidos determinaram que a presença de folículos palpáveis no momento de início da SOV reduz significativamente a resposta superovulat

Resposta superovulatória após ablação folicular usando um dispositivo simplificado em bovinos (Bos taurus taurus)

A influência do momento da ablação do folículo dominante antes do início do tratamento superovulatório, e seu efeito sobre a dinâmica folicular ovariana e a taxa de produção de embriões, ainda permanece indeterminada em bovinos. O presente estudo foi desenvolvido com objetivo de avaliar a resposta superovulatória de fêmeas da raça Limousin, determinando os efeitos da influência do dia de início da superovulação (SOV) de animais no diestro; da presença ou ausência de folículos palpáveis nos ovários no momento de início do tratamento (  status ovariano); e do tempo, em horas, entre a ablação folicular e o início da SOV. Foram realizadas 244 lavagens uterinas para coleta de embriões em novilhas (n=98) e vacas (n=146), divididas em cinco grupos de acordo com o status ovariano no momento de início da SOV, durante o intervalo de 8 a 12 dias após o estro: grupo sem folículo perceptível (n=106); grupo com folículo mantido intacto (n=62) e grupos com folículo puncionado 48 h (n=10), 24 h (n=35) e 0 h (n=31) antes do início da SOV. Nos grupos em que foi realizada a ablação, utilizou-se uma cânula de metal contendo uma agulha para transposição da parede vaginal e ovariana até a aspiração do conteúdo folicular sob controle tátil por via retal. Os resultados obtidos determinaram que a presença de folículos palpáveis no momento de início da SOV reduz significativamente a resposta superovulat

Resposta superovulatória após ablação folicular usando um dispositivo simplificado em bovinos (Bos taurus taurus)

A influência do momento da ablação do folículo dominante antes do início do tratamento superovulatório, e seu efeito sobre a dinâmica folicular ovariana e a taxa de produção de embriões, ainda permanece indeterminada em bovinos. O presente estudo foi desenvolvido com objetivo de avaliar a resposta superovulatória de fêmeas da raça Limousin, determinando os efeitos da influência do dia de início da superovulação (SOV) de animais no diestro; da presença ou ausência de folículos palpáveis nos ovários no momento de início do tratamento (  status ovariano); e do tempo, em horas, entre a ablação folicular e o início da SOV. Foram realizadas 244 lavagens uterinas para coleta de embriões em novilhas (n=98) e vacas (n=146), divididas em cinco grupos de acordo com o status ovariano no momento de início da SOV, durante o intervalo de 8 a 12 dias após o estro: grupo sem folículo perceptível (n=106); grupo com folículo mantido intacto (n=62) e grupos com folículo puncionado 48 h (n=10), 24 h (n=35) e 0 h (n=31) antes do início da SOV. Nos grupos em que foi realizada a ablação, utilizou-se uma cânula de metal contendo uma agulha para transposição da parede vaginal e ovariana até a aspiração do conteúdo folicular sob controle tátil por via retal. Os resultados obtidos determinaram que a presença de folículos palpáveis no momento de início da SOV reduz significativamente a resposta superovulat

Resposta superovulatória após ablação folicular usando um dispositivo simplificado em bovinos (Bos taurus taurus)

A influência do momento da ablação do folículo dominante antes do início do tratamento superovulatório, e seu efeito sobre a dinâmica folicular ovariana e a taxa de produção de embriões, ainda permanece indeterminada em bovinos. O presente estudo foi desenvolvido com objetivo de avaliar a resposta superovulatória de fêmeas da raça Limousin, determinando os efeitos da influência do dia de início da superovulação (SOV) de animais no diestro; da presença ou ausência de folículos palpáveis nos ovários no momento de início do tratamento (  status ovariano); e do tempo, em horas, entre a ablação folicular e o início da SOV. Foram realizadas 244 lavagens uterinas para coleta de embriões em novilhas (n=98) e vacas (n=146), divididas em cinco grupos de acordo com o status ovariano no momento de início da SOV, durante o intervalo de 8 a 12 dias após o estro: grupo sem folículo perceptível (n=106); grupo com folículo mantido intacto (n=62) e grupos com folículo puncionado 48 h (n=10), 24 h (n=35) e 0 h (n=31) antes do início da SOV. Nos grupos em que foi realizada a ablação, utilizou-se uma cânula de metal contendo uma agulha para transposição da parede vaginal e ovariana até a aspiração do conteúdo folicular sob controle tátil por via retal. Os resultados obtidos determinaram que a presença de folículos palpáveis no momento de início da SOV reduz significativamente a resposta superovulat

Resposta superovulatória após ablação folicular usando um dispositivo simplificado em bovinos (Bos taurus taurus)

A influência do momento da ablação do folículo dominante antes do início do tratamento superovulatório, e seu efeito sobre a dinâmica folicular ovariana e a taxa de produção de embriões, ainda permanece indeterminada em bovinos. O presente estudo foi desenvolvido com objetivo de avaliar a resposta superovulatória de fêmeas da raça Limousin, determinando os efeitos da influência do dia de início da superovulação (SOV) de animais no diestro; da presença ou ausência de folículos palpáveis nos ovários no momento de início do tratamento (  status ovariano); e do tempo, em horas, entre a ablação folicular e o início da SOV. Foram realizadas 244 lavagens uterinas para coleta de embriões em novilhas (n=98) e vacas (n=146), divididas em cinco grupos de acordo com o status ovariano no momento de início da SOV, durante o intervalo de 8 a 12 dias após o estro: grupo sem folículo perceptível (n=106); grupo com folículo mantido intacto (n=62) e grupos com folículo puncionado 48 h (n=10), 24 h (n=35) e 0 h (n=31) antes do início da SOV. Nos grupos em que foi realizada a ablação, utilizou-se uma cânula de metal contendo uma agulha para transposição da parede vaginal e ovariana até a aspiração do conteúdo folicular sob controle tátil por via retal. Os resultados obtidos determinaram que a presença de folículos palpáveis no momento de início da SOV reduz significativamente a resposta superovulat

Dominant follicle removal by ultrasound guided transvaginal aspiration and superovulatory response in Nellore cows

The present study analyzed the physiological significance of the dominant follicle (DF) and its removal on the superovulatory response of 42 Nellore cows and tested the hypothesis that the number of subordinate small follicles (3-8mm) could be used as a single criterion for the evaluation of the presence or absence of a DF in the ovaries. Ultrasonographic examinations were performed two days before the beginning of superovulatory treatment (D0) and the cows divided into three groups: group without DF (NDF), group with a DF (DF) and group with an aspirated DF (ADF). The superovulatory response of the donors did not differ between groups, but the rate of embryonic viability was higher in NDF (69.40%) and ADF (68.99%) groups compared to DF (48.54%). The number of unfertilized structures did not differ between NDF and DF or between NDF and ADF groups, but was higher in DF compared to ADF. It is concluded that, in Nellore cows, the number of subordinate follicles is a safe criterion for the evaluation of the presence of a DF in the ovaries, but errors could be avoided if only 4-8mm follicles were considered, and that the presence of a DF at the beginning of superovulation reduced the embryonic viability rate and its removal by transvaginal aspiration guided by ultrasound induced embryonic viability rates similar to that observed in the absence of a DF.

O presente estudo analisou o significado fisiológico do folículo dominante (FD) e sua remoção na resposta superovulatória de 42 vacas Nelore e testou a hipótese de que o número de folículos subordinados pequenos (3-8mm) poderia ser usado como critério único para a avaliação da presença ou ausência de um FD nos ovários. Exames ultra-sonográficos foram realizados dois dias antes do início do tratamento superovulatório (D0) e as vacas foram divididas em três grupos: grupo sem FD (SFD), grupo com FD (FD) e grupo com um FD aspirado (FDA). A resposta superovulatória das doadoras não diferiu entre os grupos, mas a taxa de viabilidade embrionária foi maior nos grupos SFD (69,40%) e FDA (68,99%) grupos, comparados ao FD (48,54%). O número de estruturas não fertilizadas não diferiu entre os grupos SFD e FD nem entre SFD e FDA, mas foi maior no grupo FD comparados ao FDA. Pode-se concluir que, em vacas Nelore, a determinação do número de folículos subordinados é um critério seguro para a avaliação da presença ou ausência de um FD nos ovários, mas erros poderiam ser evitados se apenas folículos de 4-8mm fossem considerados, e que a presença de um FD no início da superovulação reduz a taxa de viabilidade embrionária e sua remoção por aspiração transvaginal guiada por ultra-som induziu taxas de viablidade embrionárias semelhantes àquelas observadas na ausência de um FD.

Efeito do tratamento com extrato de pituitaria equina (EPE) e hCG no índice de recuperação de oócitos e maturação folicular em equinos

Em éguas, o aprimoramento e a aplicação de técnicas como a ICSI, TO e transferência nuclear é restrita devido à dificuldade de obtenção de oócitos in vivo, atribuída a particularidades dos folículos ovarianos da espécie. Em folículos pré-ovulatórios, a expansão do cumulus que ocorre com a progressão da maturação folicular e deposição de ácido hialurônico aumenta os índices de recuperação de oócitos por folículo, enquanto o tratamento superovulatório, embora não seja eficiente em aumentar os índices de recuperação por folículo, melhora os índices de recuperação por égua. Este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito da administração de hCG na expansão das células da granulosa e do cumulus e no índice de recuperação de oócitos a partir de folículos imaturos de éguas superovuladas. Para isso 10 éguas foram submetidas à OPU após três diferentes tratamentos hormonais (G1: EPE, G2: EPE/hCG e G3:controle). Cada égua foi submetida aos três tratamentos, tendo sido alternados um ciclo onde era permitido que houvesse ovulação, sem interferência, e um ciclo com OPU. No ciclo onde devia ocorrer aspiração, as éguas recebiam aplicações de prostaglandina no sétimo e oitavo dia após a ovulação. Para os grupos 1 e 2, iniciava-se o tratamento com EPE no D7. Quando a maioria dos folículos atingia entre 22 e 27 mm, somente o grupo 1 recebia hCG, a EPE era suspensa e efetuava-se OPU 24 horas depois para ambos os grupos. Para o grupo controle, após a aplicação de prostaglandina a OPU era efetuada 24 horas após o folículo dominante atingir 27-30 mm. Em todos os grupos foram aspirados folículos entre 10 e 35 mm. Não houve diferença entre os 3 grupos quanto aos índices de recuperação de oócitos por folículo, com médias de 15% a 16,7%. Entretanto, a hCG foi capaz de induzir uma expansão e luteinização precoce das células foliculares

In mares, the use of artificial reproductive techniques (ART) such as intracitoplasmatic sperm injection (ICSI), oocyte transfer (OT), and cloning is limited by the low availability of oocytes obtained either in vitro or in vivo. The low recovery rate of oocytes from immature follicles seems to be linked with anatomical particularities of the follicular wall. In pre-ovulatory follicles (>35mm in diameter), final oocyte maturation is accompanied by the expansion of the cumulus, which releases the oocyte from the follicular wall resulting in increased recovery rates after follicular aspiration. The number of oocytes recovered in each OPU (Ovum Pick Up) section should be higher with superovulation. However, although the total number of oocytes recovered by each individual mare is increased, the recovery rate per follicle is still low. Treatment with hCG modifies the intra-follicular environment by inducing precocious expansion of the granulosa cells, leading to a higher recovery rate during OPU of pre-ovulatory follicles. Therefore, this study aimed to evaluate the effect of hCG treatment on the recovery rate of oocytes obtained from immature follicles in mares superovulated with Equine Pituitary Extract (EPE). Ten mares were rotated in three different treatments: G1 ? superovulated with EPE; G2 ? Superovulated with EPE and treated with hCG, and G3 ? Control. For all treatments, when the biggest follicle reached 27 ? 30 mm, all follicles bigger than 10 mm were aspirated. Each OPU cycle was alternated with a rest cycle when a spontaneous ovulation occurred. Although treatment with hCG increased the number of follicles presenting expanded granulosa and high intra-follicular progesterone concentration, no statistically significant differences were observed between groups regarding oocyte recovery

Produção in vitro de embriões derivados de oócitos obtidos em diferentes fases da onda folicular de vacas Nelore(Bos taurus indicus)

O objetivo foi avaliar, em vacas Nelore, a influência da fase da onda folicular na qualidade e quantidade dos oócitos recuperados, através da OPU (ovum pick-up), assim como a produção de blastocistos. Todos os animais (n=10) receberam em dia aleatório do ciclo estral um implante auricular de progestágeno (Crestar?) e uma aplicação de 2 mg de Benzoato de Estradiol (Estrogin?) com o objetivo de sincronizar a onda folicular. Após sete dias o implante foi retirado e foi aplicada uma dose de 2ml de um análogo da PGF2? (Preloban®). Após de 24 hs as doadoras foram submetidas à aspiração do folículo dominante (AFD) sendo então este momento considerado dia 0. Após a AFD, as doadoras foram submetidos a OPU nos dias 3, 5, 7, e 9 (Grupo D3, D5, D7 e D9) da nova onda folicular. Foram realizadas quatro fases (Fase 1, 2, 3 e 4) onde os animais foram trocados de grupo a cada fase, de forma que cada animal foi submetido aos quatro tratamentos. A cada fase o protocolo era iniciado com dois dias de intervalo entre um grupo e outro, iniciando pelo grupo D9 e na seqüência os grupos D7, D5, D3, desta forma todas as doadoras foram aspiradas no mesmo dia, porém com a onda folicular em dias diferentes. O objetivo deste delineamento foi para que as aspirações fossem efetuadas no mesmo dia, de forma que os oócitos recuperados fossem maturados, fertilizados e cultivados in vitro numa mesma sessão de PIV. Duas hipóteses foram testadas: 1- O número de oócitos viáveis recuperados seria maior na fase inicial da onda folicular (dia 3) ou logo após a divergência folicular (dia 5) do que obtidos em períodos mais tardios da fase de dominância (dias 7 e 9). 2- Os oócitos aspirados no início da onda folicular (dia 3 ou 5) teriam melhor competência e produziriam maior número de blastocistos do que oócitos obtidos no final da onda (dias 7 e 9), pois estes estariam num grau de atresia avançado. Não houve diferença no número

The objective of this experiment was to evaluate in Nelore cows the influence of the moment of the follicular wave in the quality and amount of the recovered oocytes, through the OPU, (ovum pick-up), as well as the production of blastocysts. All the animals (n=10) received in random day of the estrous cycle an auricular progestogen implant (Crestar?) and was administered of 2mg of estradiol benzoate (Estrogin?) with the objective of synchronizing the follicular wave. After seven days the implant was removed and a dose of 2ml of an analogous of PGF2 was administrated (Preloban®). After 24 hours the donors were submitted later of the dominant follicle aspiration (DFA) being then this moment considered day 0. After DFA the donors were submitted to OPU after on the 3, 5, 7, and 9 days (Groups D3, D5, D7 and D9) of the new follicular wave. Four sessions were accomplished (sessions 1, 2, 3 and 4) where the animals were changed from group to each phase, so that each animal it was submitted to the four treatments. To each phase the protocol was begun with two days of interval among a group and other, beginning for the group D9 and in the sequence the groups D7, D5, D3, this way all of the donors were aspirated in the same day, however with the follicular wave in different days. The objective of this outline was so that the aspirations were made in the same day, so that the recovered oocytes they went maturated, fertilized and development in vitro in a same session of IVP. Two hypotheses were tested: 1 - the number of recovered viable oocytes would be larger numerical in the initial phase of the wave follicular (day 3) or soon after the follicular divergence (day 5) of those obtained in later periods of the dominancy phase (days 7 and 9). 2 - The oocytes aspirated in the beginning of the follicular wave (day 3 or 5) they would be better competent and they would produce larger number of blastocysts than oocytes obtained in the end of the wave

A remoção do folículo dominante como estratégia anti-luteolítica em bovinos / The removal of the dominant follicle as antiluteolytic strategy in cattle

O estradiol secretado pelo folículo dominante (DOM) desempenha importante papel na luteólise da vaca. Em adição, o reconhecimento materno da prenhez (MRP) requer um ambiente uterino otimizado, o qual por sua vez depende da função luteínica e de adequadas concentrações de progesterona circulante. Os objetivos do presente estudo foi testar diferentes estratégias para otimizar a função luteínica e prevenir a influência de um DOM durante o período crítico (CP) para o MRP (de D13 a D20 após o estro o estro). Diferentes abordagens foram testadas. No exp.1, 23 vacas Nelore foram tratadas com o protocolo ovsynch para induzir um cio sincronizado (D0). As vacas receberam: Gc (n=7) - nada mais; ThCG (n=5) - 3000 IU de hCG no D5; TE2 (n=6) - 5mg de 17b-estradiol (E2) no D12; ThCG/E2 (n=5) - hCG/D5 + E2/D12. Ultra-sonografias e dosagens de progesterona plasmática durante o ciclo estral permitiram determinar que o E2 reprogramou o ciclo ovariano ao prevenir a presença (P⁢0,05) de um DOM durante quase todo CP (0,6±0,7 dias entre D15 e D20), porém o E2 induziu a luteólise. As vacas que receberam a hCG desenvolveram corpo lúteo acessório e tiveram [P4] mais alta até o D13 (P⁢0,05). Portanto, a fase luteínica não foi prolongada No exp.2, os mesmos tratamentos foram impostos a 220 vacas Nelore (55 por grupo) após uma inseminação artificial em tempo fixo (TAI). As taxas de prenhez (PR) à TAI ou às inseminais de repasse durante uma estação com 64 dias de duração foram diminuídas (P⁢0,05) quando o E2 foi usado e a hCG não foi capaz de aumentar aquelas PR. No exp.3, vacas Red Angus no pós-parto tiveram seu estro sincronizado (D0) e receberam: nada mais (GCT, n=5) ou 200mg de gonadorrelina no D5 mais 3000 IU hCG no D13 (GRF, n=5); ou ablação de todos folículos ³7mm através de aspiração folicular em D14, D17 e D20 (GRM, n=5). GRF teve luteólise retardada (18,2±1,0b dias, 23,6±1,0a dias e 18,7±1,2b dias para GCT, GRF e GRM, respectivamente) e maior [P4] que os outros grupos. Folículos maiores que 7mm foram observados quando das aspirações. Foi possível concluir que: a) E2 permitiu consistentemente reprogramar o desenvolvimento folicular, porém causou luteólise e o seu uso trouxe efeitos negativos sobre as PR; b) a hCG melhorou a função luteínica mas não aumentou as PR; c) a ablação dos folículos ³7mm não preveniu a presença do DOM no CP para o MRP e d) a associação GnRH/hCG otimizou a função luteínica, retardou a luteólise e prolongou a fase luteínica de modo que todo o CP esteve sob influência da progesterona

Estradiol secreted from the dominant follicle (DOM) plays a key role in triggering luteolysis in the cow. In addition, maternal recognition of pregnancy (MRP) requires an optimum uterine environment, which directly depends on luteal function and adequate levels of circulating progesterone. The aim of this study was to test different strategies to optimize luteal function and prevent the influence of a DOM throughout the critical period (CP) for MRP (from D13 to D20 after estrus). Different approaches were tested. In exp.1, 23 Nelore cows were treated with the ovsync protocol to induce a synchronized estrus (D0). Cows received: Gc (n=7) - nothing else; ThCG (n=5) - 3000 IU of hCG five days (D5) after estrus; TE2 (n=6) - 5mg of 17b-estradiol (E2) on D12; ThCG/E2 (n=5) - hCG/D5 + E2/D12. Ultrasound evaluation and plasmatic progesterone concentration ([P4]) throughout estrous cycle allowed to conclude: E2 reprogrammed ovarian cycle by preventing the presence (P⁢.05) of a DOM during almost all CP (0.6±.7 days within the D15 to D20 interval) but induced luteolysis; cows receiving hCG developed accessory corpus luteum and had higher [P4] up to D13 (P⁢.05). Therefore, luteolysis was not delayed and luteal phase was not prolonged. In exp.2, same treatments were imposed to 220 Nelore cows (55 per group) after a timed artificial insemination (TAI). Pregnancy rates (PR) at TAI or at AIs thereafter over a 64-day period were reduced (P⁢0.05) by using E2 and hCG was not capable to improve those PR. In exp.3, postpartum Red Angus cows were estrus synchronized (D0) and received: nothing else (GCT, n=5) or 200mg of gonadorrelin on D5 plus 3000 IU hCG on D13 (GRF, n=5); or ablation of all follicles ³7mm through follicular aspiration on D14, D17 and D20 (GRM, n=5). GRF had delayed luteolysis (18.2±1.0b days, 23.6±1.0a days, 18.7±1.2b days for GCT, GRF, GRM, respectively) and higher [P4] than other groups. Follicles larger than 7mm were observed in all occasions of aspiration. In could be concluded that: a) E2 allowed to consistently reschedule follicular development but caused luteolysis and its use was detrimental to PR; b) hCG improved luteal function but did not increase PR; c) ablation of 7mm follicles did not prevent a DOM throughout CP for MRP and d) GnRH/hCG association optimized luteal function, delayed luteolysis and prolonged luteal phase in such a way that all CP was under progesterone influence

Efeito do FSH e LH na qualidade e competência de ovócitos de novilhas da raça Guzerá, obtidos através da aspiração folicular in vivo, e na produção in vitro de embriões

O presente experimento teve como objetivos avaliar o efeito do GnRH na sincronização da onda folicular em novilhas da raça Guzerá e avaliar diferentes tratamentos hormonais com intervalos reduzidos para sincronização da onda folicular, visando a melhor resposta superovulatória e produção de embriões. Foram utilizadas onze novilhas da raça Guzerá, com idade variando entre 24 e 36 meses, mantidas em regime de semi-confinamento. Todos os animais receberam a aplicação do análogo de GnRH (Acetado de Buserelina), considerado como dia zero (D0). A dinâmica folicular foi acompanhada diariamente utilizando-se o ultra-som (Scanner 200 Vet-Pie Medical) acoplado a um transdutor transretal linear de 5,0 MHz. Os animais foram divididos em três tratamentos: T1- 01 CIDR (CIDR, "Controlled Internal Drug", 1,9 g de progesterona), T2 - 02 CIDRs, e T3- Benzoato de Estradiol (BE). A inserção do CIDR e aplicação de 1mg de BE (Estrogin, Farmavet) foram realizadas no D4 para sincronização da onda folicular e o tratamento com FSH (Folltropin-V, Vetrepharm, Inc., Canadá) foi iniciado no D8 com 8 doses decrescentes, em intervalos de 12 horas, com dose total de 200 mg NIH-FSH-S1 para todos os tratamentos. No D10 foi feita aplicação da PGF2? (500 mcg de Cloprostenol-Ciosin, Coopers) e 12 horas após, foi retirado o CIDR, sendo feitas duas Inseminações Artificiais (I.A.) com 60 e 72 horas após aplicação da PGF2? e a coleta dos embriões foi realizada 7 dias após a primeira I.A. Foram realizadas 3 coletas por tratamento com intervalos de 23 dias entre coletas. Foi analisado o efeito de cada tratamento e dia no diâmetro folicular, no número de folículos de 4-6 mm e nas concentrações de progesterona (P4) em cada coleta. Nos animais em que foram administrados GnRH não houve diferença (P>0,05) no diâmetro folicular, no número de folículos de 4-6 mm e nas concentrações de P4 para dia dentro de cada coleta, mas observou-se uma diminuição do tamanho folicular e aumento da população de pequenos folículos no decorrer dos dias. De um modo geral, os resultados demonstraram que, quando o tratamento superestimulatório foi iniciado, não havia folículos grandes (?10 mm) nos ovários, mas sim um grande número de folículos de 4-6 mm de diâmetro em todos os tratamentos utilizados para sincronização da onda folicular. Essa condição ovariana é um indicativo da ausência de um folículo dominante no início do tratamento, o que é desejável para obtenção de uma melhor resposta superovulatória. Em todas as coletas, não foram observadas diferenças no número de corpos lúteos, total de estruturas, embriões viáveis e embriões não-viáveis. Entretanto, uma maior quantidade no total de estruturas e de embriões viáveis ocorreu no T2 principalmente, na coleta 1, indicando que este tratamento se mostrou promissor para ser utilizado na superovulação de bovinos. Contudo, maiores estudos são necessários para confirmar a sua eficiência e ser incorporado aos protocolos utilizados na transferência de embriões