Microrganismos psicrotróficos em leites submetidos à ultra alta temperatura adquiridos em Curitiba, Paraná / Psychrotrophic bacteria in ultra-high-temperature milk acquired in Curitiba, Paraná

O tratamento do leite em ultra alta temperatura (UAT) possibilita a eliminação de patógenos e aumento do tempo de prateleira, no entanto, bactérias psicrotróficas são associadas a efeitos negativos no produto, como lipólise, rancificação e a geleificação. Resultado da resistência de alguns esporos ao processamento, e à possível atividade residual de enzimas termorresistentes. Assim, o objetivo deste estudo foi enumerar bactérias psicrotróficas e realizar a prova de lactofermentação em leites UAT comercializados na região de Curitiba, Paraná. Foram adquiridas 60 amostras de duas marcas (30 da marca A e 30 da marca B) quinzenalmente em três diferentes momentos. Em cada momento 10 amostras de um mesmo lote eram separadas em dois grupos (D0 e D7), sendo D0: cinco amostras avaliadas no dia da compra, e D7: cinco amostras avaliadas após incubação a 37± 1ºC/7 dias e analisadas quanto à enumeração de bactérias psicrotróficas, coloração de Gram e prova da lactofermentação. Em D0, uma (3,4%) amostra (marca A) apresentou crescimento de psicrotróficos (2,50 x 105 UFC/mL), Gram negativos. As amostras da marca B não apresentaram crescimento microbiano. Vinte e cinco (83,3%) amostras não formaram coágulo, e cinco (16,7%) produziram coágulo esponjoso. Em D7, nenhuma amostra apresentou contagem bacteriana, 20 (66,7%) não produziram coágulo e 10 (33,3%) produziram coágulo esponjoso. O processo UAT utilizado pela marca A não garantiu efetividade na redução de bactérias psicrotróficas, e o resultado do teste de lactofermentação indica a possível contaminação por coliformes em ambas as marcas. Ainda, a ausência de coágulos em diversas amostras pode ser um indicativo do uso de conservantes, o que é considerado fraude.

The beneficial effects of ultra-pasteurization milk treatment include elimination of milk pathogens, besides increasing the product's shelf-life, however, psychrotrophic bacteria are associated with several negative effects in the final product such as lipolysis, rancidification and gelation. This results from heat-resistant spores and its possible residual extracellular heat-resistant enzymes activity. With that in mind, this paper aimed to quantify psychrotrophic bacteria and perform a milk clotting test in UHT milk sold in Curitiba, Paraná. 60 samples from two brands were acquired (30 from A brand and 30 from B brand) each 15 days in different moments. Each time, 10 samples from a same batch were separated in two groups (D0 and D7), being D0: five samples analyzed in the purchase day, and D7: five samples analyzed after incubation at 37± 1ºC/7 days and evaluated regarding enumeration of psychrotrophic bacteria, Gram staining and milk clotting test. The heat-treating process effectiveness was evaluated by analyzing 30 samples from each brand, A and B, totalizing 60, being 10 from each different production batches, through the surface inoculation method in PCA, milk clotting test and classification of the isolated colonies by the Gram method. In D0, one (3,4%) sample (from A brand) resulted in Gram negative psychrotrophic growing (2,50 x 105 UFC/mL) . Samples from B brand did not result in bacterial growth. 25 samples (83,3%) did not clot, and five (16,7%) produced sponge clots. In D7, none of the samples presented bacterial growth, 20 (66,7%) did not clot and 10 (33,3%) produced sponge clots. Mesophilic bacterial culture was not done. The A brand UHT process did not grant sterilization regarding psychrotrophic bacteria, and the milk clotting results indicate possible coliforms contamination in both brands. Furthermore, clot absence in several samples could indicate preservatives usage, which is considered fraud.

Microrganismos psicrotróficos em leites submetidos à ultra alta temperatura adquiridos em Curitiba, Paraná / Psychrotrophic bacteria in ultra-high-temperature milk acquired in Curitiba, Paraná

O tratamento do leite em ultra alta temperatura (UAT) possibilita a eliminação de patógenos e aumento do tempo de prateleira, no entanto, bactérias psicrotróficas são associadas a efeitos negativos no produto, como lipólise, rancificação e a geleificação. Resultado da resistência de alguns esporos ao processamento, e à possível atividade residual de enzimas termorresistentes. Assim, o objetivo deste estudo foi enumerar bactérias psicrotróficas e realizar a prova de lactofermentação em leites UAT comercializados na região de Curitiba, Paraná. Foram adquiridas 60 amostras de duas marcas (30 da marca A e 30 da marca B) quinzenalmente em três diferentes momentos. Em cada momento 10 amostras de um mesmo lote eram separadas em dois grupos (D0 e D7), sendo D0: cinco amostras avaliadas no dia da compra, e D7: cinco amostras avaliadas após incubação a 37± 1ºC/7 dias e analisadas quanto à enumeração de bactérias psicrotróficas, coloração de Gram e prova da lactofermentação. Em D0, uma (3,4%) amostra (marca A) apresentou crescimento de psicrotróficos (2,50 x 105 UFC/mL), Gram negativos. As amostras da marca B não apresentaram crescimento microbiano. Vinte e cinco (83,3%) amostras não formaram coágulo, e cinco (16,7%) produziram coágulo esponjoso. Em D7, nenhuma amostra apresentou contagem bacteriana, 20 (66,7%) não produziram coágulo e 10 (33,3%) produziram coágulo esponjoso. O processo UAT utilizado pela marca A não garantiu efetividade na redução de bactérias psicrotróficas, e o resultado do teste de lactofermentação indica a possível contaminação por coliformes em ambas as marcas. Ainda, a ausência de coágulos em diversas amostras pode ser um indicativo do uso de conservantes, o que é considerado fraude.(AU)

The beneficial effects of ultra-pasteurization milk treatment include elimination of milk pathogens, besides increasing the product's shelf-life, however, psychrotrophic bacteria are associated with several negative effects in the final product such as lipolysis, rancidification and gelation. This results from heat-resistant spores and its possible residual extracellular heat-resistant enzymes activity. With that in mind, this paper aimed to quantify psychrotrophic bacteria and perform a milk clotting test in UHT milk sold in Curitiba, Paraná. 60 samples from two brands were acquired (30 from A brand and 30 from B brand) each 15 days in different moments. Each time, 10 samples from a same batch were separated in two groups (D0 and D7), being D0: five samples analyzed in the purchase day, and D7: five samples analyzed after incubation at 37± 1ºC/7 days and evaluated regarding enumeration of psychrotrophic bacteria, Gram staining and milk clotting test. The heat-treating process effectiveness was evaluated by analyzing 30 samples from each brand, A and B, totalizing 60, being 10 from each different production batches, through the surface inoculation method in PCA, milk clotting test and classification of the isolated colonies by the Gram method. In D0, one (3,4%) sample (from A brand) resulted in Gram negative psychrotrophic growing (2,50 x 105 UFC/mL) . Samples from B brand did not result in bacterial growth. 25 samples (83,3%) did not clot, and five (16,7%) produced sponge clots. In D7, none of the samples presented bacterial growth, 20 (66,7%) did not clot and 10 (33,3%) produced sponge clots. Mesophilic bacterial culture was not done. The A brand UHT process did not grant sterilization regarding psychrotrophic bacteria, and the milk clotting results indicate possible coliforms contamination in both brands. Furthermore, clot absence in several samples could indicate preservatives usage, which is considered fraud.(AU)

Composition and microbiological quality of refrigerated raw milk in two seasons of the year in Santa Helena, Western Paraná / Composição e qualidade microbiológica do leite cru refrigerado em duas estações do ano em Santa Helena, oeste do Paraná / Composición y calidad microbiológica de la leche cruda refrigerada en dos estaciones del año en Santa Helena, oeste de Paraná

This study aimed at quantifying the occurrence of proteolytic psychotropic microorganisms and total coliforms in refrigerated raw milk, in addition to assessing the quality through its physical-chemical composition. The samples were collected in 10 dairy farms in the municipality of Santa Helena ­ Western Paraná. Two collections were made, one during the spring and the other during the summer. Samples of refrigerated raw milk were carried out directly from the cooling tank, aseptically, packed in sterile bottles and transported under isothermal conditions (± 4 ºC) to the laboratory where the physical-chemical composition and microbial populations were determined. The levels of fat had great amplitude between the seasons, being higher in the summer, while there was no variation for the contents of protein, lactose, minerals, and non-fat solids. The total coliform count did not differ between seasons. The values obtained for proteolytic psychotropic counts were higher in the summer. A significant positive correlation was found between the total coliform counts, the proteolytic psychotropic counts (r=0.73), the levels of protein (r=0.45), non-fat solids (r=0.45), and minerals (r=0.46). Also, the proteolytic psychotropic counts showed a positive correlation with the cryoscopic index. The milk components met the requirements of NI76. The quality of refrigerated raw milk in the municipality of Santa Helena, Western Paraná was not satisfactory for total coliforms, due to its high incidence, indicating the need for good practices in milking management. Proteolytic psychotropic bacteria presented low proliferation, thus not affecting milk quality.(AU)

O presente estudo teve como objetivo quantificar a ocorrência de microrganismos psicrotróficos proteolíticos e de coliformes totais em leite cru refrigerado além de avaliar a qualidade por meio da sua composição físico-química. As amostras foram coletadas em 10 propriedades leiteiras no município de Santa Helena ­ Oeste do Paraná. Foram realizadas duas coletas, uma durante a primavera e outra no verão. As amostragens do leite cru refrigerado foram realizadas diretamente no tanque de resfriamento, de forma asséptica, acondicionado em frascos esterilizados e transportado sob condições isotérmicas (± 4ºC) ao laboratório onde foram determinadas a composição físico-química e as populações microbianas. Os teores de gordura tiveram grande amplitude entre as estações do ano, sendo superior no verão, enquanto que não houve variação para os teores de proteína, lactose, minerais e sólidos desengordurados. A contagem de coliformes totais não diferiu entre as estações. Os valores obtidos para contagens de psicrotróficos proteolíticos foram superiores no verão. Foi constatada correlação significativa positiva entre as contagens de coliformes totais com as contagens de psicrotróficos proteolíticos (r=0,73) e os teores de proteína (r=0,45), sólidos desengordurados (r=0,45) e minerais (r=0,46). Além disto, as contagens de psicrotróficos proteolíticos apresentaram correlação positiva com o índice crioscópico. Os componentes do leite atenderam as exigências da IN76. A qualidade do leite cru refrigerado no município de Santa Helena, Oeste do Paraná não foi satisfatória em relação aos coliformes totais, devido sua alta incidência, indicando a necessidade de boas práticas no manejo de ordenha. As bactérias psicrotróficas proteolíticas tiveram baixa proliferação, não afetando a qualidade do leite.(AU)

El presente estudio tuvo como objetivo cuantificar la ocurrencia de microorganismos psicrotróficos proteolíticos y de coliformes totales en leche cruda refrigerada, además de evaluar la calidad a través de su composición fisicoquímica. Las muestras fueron recolectadas en 10 granjas lecheras del municipio de Santa Helena ­ Oeste de Paraná. Se realizaron dos colecciones, una en primavera y otra en verano. Las muestras de leche cruda enfriada se realizaron directamente en el tanque de enfriamiento, de forma aséptica, se empacaron en botellas estériles y se transportaron en condiciones isotérmicas (± 4ºC) al laboratorio donde se determinó la composición fisicoquímica y las poblaciones microbianas. Los niveles de grasa tuvieron gran amplitud entre las estaciones, siendo más altos en verano, mientras que no hubo variación para los contenidos de proteínas, lactosa, minerales y sólidos desgrasados. El recuento total de coliformes no difirió entre temporadas. Los valores obtenidos para los recuentos de psicotrópicos proteolíticos fueron mayores en verano. Se encontró una correlación positiva significativa entre los recuentos de coliformes totales y los recuentos de psicrótroficos proteolíticos (r=0.73) y los niveles de proteínas (r=0.45), sólidos desgrasados (r=0.45) y minerales (r=0.46). Además, los recuentos de psicrótroficos proteolíticos mostraron una correlación positiva con el índice crioscópico. Los componentes de la leche cumplieron con los requisitos de IN76. La calidad de la leche cruda refrigerada en el municipio de Santa Helena, Oeste de Paraná no fue satisfactoria en relación a los coliformes totales, debido a su alta incidencia, lo que indica la necesidad de buenas prácticas en el manejo del ordeño. Las bacterias psicrotróficas proteolíticas tuvieron baja proliferación, no afectando la calidad de la leche.(AU)

Composition and microbiological quality of refrigerated raw milk in two seasons of the year in Santa Helena, Western Paraná / Composição e qualidade microbiológica do leite cru refrigerado em duas estações do ano em Santa Helena, oeste do Paraná / Composición y calidad microbiológica de la leche cruda refrigerada en dos estaciones del año en Santa Helena, oeste de Paraná

This study aimed at quantifying the occurrence of proteolytic psychotropic microorganisms and total coliforms in refrigerated raw milk, in addition to assessing the quality through its physical-chemical composition. The samples were collected in 10 dairy farms in the municipality of Santa Helena ­ Western Paraná. Two collections were made, one during the spring and the other during the summer. Samples of refrigerated raw milk were carried out directly from the cooling tank, aseptically, packed in sterile bottles and transported under isothermal conditions (± 4 ºC) to the laboratory where the physical-chemical composition and microbial populations were determined. The levels of fat had great amplitude between the seasons, being higher in the summer, while there was no variation for the contents of protein, lactose, minerals, and non-fat solids. The total coliform count did not differ between seasons. The values obtained for proteolytic psychotropic counts were higher in the summer. A significant positive correlation was found between the total coliform counts, the proteolytic psychotropic counts (r=0.73), the levels of protein (r=0.45), non-fat solids (r=0.45), and minerals (r=0.46). Also, the proteolytic psychotropic counts showed a positive correlation with the cryoscopic index. The milk components met the requirements of NI76. The quality of refrigerated raw milk in the municipality of Santa Helena, Western Paraná was not satisfactory for total coliforms, due to its high incidence, indicating the need for good practices in milking management. Proteolytic psychotropic bacteria presented low proliferation, thus not affecting milk quality.(AU)

O presente estudo teve como objetivo quantificar a ocorrência de microrganismos psicrotróficos proteolíticos e de coliformes totais em leite cru refrigerado além de avaliar a qualidade por meio da sua composição físico-química. As amostras foram coletadas em 10 propriedades leiteiras no município de Santa Helena ­ Oeste do Paraná. Foram realizadas duas coletas, uma durante a primavera e outra no verão. As amostragens do leite cru refrigerado foram realizadas diretamente no tanque de resfriamento, de forma asséptica, acondicionado em frascos esterilizados e transportado sob condições isotérmicas (± 4ºC) ao laboratório onde foram determinadas a composição físico-química e as populações microbianas. Os teores de gordura tiveram grande amplitude entre as estações do ano, sendo superior no verão, enquanto que não houve variação para os teores de proteína, lactose, minerais e sólidos desengordurados. A contagem de coliformes totais não diferiu entre as estações. Os valores obtidos para contagens de psicrotróficos proteolíticos foram superiores no verão. Foi constatada correlação significativa positiva entre as contagens de coliformes totais com as contagens de psicrotróficos proteolíticos (r=0,73) e os teores de proteína (r=0,45), sólidos desengordurados (r=0,45) e minerais (r=0,46). Além disto, as contagens de psicrotróficos proteolíticos apresentaram correlação positiva com o índice crioscópico. Os componentes do leite atenderam as exigências da IN76. A qualidade do leite cru refrigerado no município de Santa Helena, Oeste do Paraná não foi satisfatória em relação aos coliformes totais, devido sua alta incidência, indicando a necessidade de boas práticas no manejo de ordenha. As bactérias psicrotróficas proteolíticas tiveram baixa proliferação, não afetando a qualidade do leite.(AU)

El presente estudio tuvo como objetivo cuantificar la ocurrencia de microorganismos psicrotróficos proteolíticos y de coliformes totales en leche cruda refrigerada, además de evaluar la calidad a través de su composición fisicoquímica. Las muestras fueron recolectadas en 10 granjas lecheras del municipio de Santa Helena ­ Oeste de Paraná. Se realizaron dos colecciones, una en primavera y otra en verano. Las muestras de leche cruda enfriada se realizaron directamente en el tanque de enfriamiento, de forma aséptica, se empacaron en botellas estériles y se transportaron en condiciones isotérmicas (± 4ºC) al laboratorio donde se determinó la composición fisicoquímica y las poblaciones microbianas. Los niveles de grasa tuvieron gran amplitud entre las estaciones, siendo más altos en verano, mientras que no hubo variación para los contenidos de proteínas, lactosa, minerales y sólidos desgrasados. El recuento total de coliformes no difirió entre temporadas. Los valores obtenidos para los recuentos de psicotrópicos proteolíticos fueron mayores en verano. Se encontró una correlación positiva significativa entre los recuentos de coliformes totales y los recuentos de psicrótroficos proteolíticos (r=0.73) y los niveles de proteínas (r=0.45), sólidos desgrasados (r=0.45) y minerales (r=0.46). Además, los recuentos de psicrótroficos proteolíticos mostraron una correlación positiva con el índice crioscópico. Los componentes de la leche cumplieron con los requisitos de IN76. La calidad de la leche cruda refrigerada en el municipio de Santa Helena, Oeste de Paraná no fue satisfactoria en relación a los coliformes totales, debido a su alta incidencia, lo que indica la necesidad de buenas prácticas en el manejo del ordeño. Las bacterias psicrotróficas proteolíticas tuvieron baja proliferación, no afectando la calidad de la leche.(AU)

Composition and microbiological quality of refrigerated raw milk in two seasons of the year in Santa Helena, Western Paraná / Composição e qualidade microbiológica do leite cru refrigerado em duas estações do ano em Santa Helena, oeste do Paraná / Composición y calidad microbiológica de la leche cruda refrigerada en dos estaciones del año en Santa Helena, oeste de Paraná

This study aimed at quantifying the occurrence of proteolytic psychotropic microorganisms and total coliforms in refrigerated raw milk, in addition to assessing the quality through its physical-chemical composition. The samples were collected in 10 dairy farms in the municipality of Santa Helena ­ Western Paraná. Two collections were made, one during the spring and the other during the summer. Samples of refrigerated raw milk were carried out directly from the cooling tank, aseptically, packed in sterile bottles and transported under isothermal conditions (± 4 ºC) to the laboratory where the physical-chemical composition and microbial populations were determined. The levels of fat had great amplitude between the seasons, being higher in the summer, while there was no variation for the contents of protein, lactose, minerals, and non-fat solids. The total coliform count did not differ between seasons. The values obtained for proteolytic psychotropic counts were higher in the summer. A significant positive correlation was found between the total coliform counts, the proteolytic psychotropic counts (r=0.73), the levels of protein (r=0.45), non-fat solids (r=0.45), and minerals (r=0.46). Also, the proteolytic psychotropic counts showed a positive correlation with the cryoscopic index. The milk components met the requirements of NI76. The quality of refrigerated raw milk in the municipality of Santa Helena, Western Paraná was not satisfactory for total coliforms, due to its high incidence, indicating the need for good practices in milking management. Proteolytic psychotropic bacteria presented low proliferation, thus not affecting milk quality.(AU)

O presente estudo teve como objetivo quantificar a ocorrência de microrganismos psicrotróficos proteolíticos e de coliformes totais em leite cru refrigerado além de avaliar a qualidade por meio da sua composição físico-química. As amostras foram coletadas em 10 propriedades leiteiras no município de Santa Helena ­ Oeste do Paraná. Foram realizadas duas coletas, uma durante a primavera e outra no verão. As amostragens do leite cru refrigerado foram realizadas diretamente no tanque de resfriamento, de forma asséptica, acondicionado em frascos esterilizados e transportado sob condições isotérmicas (± 4ºC) ao laboratório onde foram determinadas a composição físico-química e as populações microbianas. Os teores de gordura tiveram grande amplitude entre as estações do ano, sendo superior no verão, enquanto que não houve variação para os teores de proteína, lactose, minerais e sólidos desengordurados. A contagem de coliformes totais não diferiu entre as estações. Os valores obtidos para contagens de psicrotróficos proteolíticos foram superiores no verão. Foi constatada correlação significativa positiva entre as contagens de coliformes totais com as contagens de psicrotróficos proteolíticos (r=0,73) e os teores de proteína (r=0,45), sólidos desengordurados (r=0,45) e minerais (r=0,46). Além disto, as contagens de psicrotróficos proteolíticos apresentaram correlação positiva com o índice crioscópico. Os componentes do leite atenderam as exigências da IN76. A qualidade do leite cru refrigerado no município de Santa Helena, Oeste do Paraná não foi satisfatória em relação aos coliformes totais, devido sua alta incidência, indicando a necessidade de boas práticas no manejo de ordenha. As bactérias psicrotróficas proteolíticas tiveram baixa proliferação, não afetando a qualidade do leite.(AU)

El presente estudio tuvo como objetivo cuantificar la ocurrencia de microorganismos psicrotróficos proteolíticos y de coliformes totales en leche cruda refrigerada, además de evaluar la calidad a través de su composición fisicoquímica. Las muestras fueron recolectadas en 10 granjas lecheras del municipio de Santa Helena ­ Oeste de Paraná. Se realizaron dos colecciones, una en primavera y otra en verano. Las muestras de leche cruda enfriada se realizaron directamente en el tanque de enfriamiento, de forma aséptica, se empacaron en botellas estériles y se transportaron en condiciones isotérmicas (± 4ºC) al laboratorio donde se determinó la composición fisicoquímica y las poblaciones microbianas. Los niveles de grasa tuvieron gran amplitud entre las estaciones, siendo más altos en verano, mientras que no hubo variación para los contenidos de proteínas, lactosa, minerales y sólidos desgrasados. El recuento total de coliformes no difirió entre temporadas. Los valores obtenidos para los recuentos de psicotrópicos proteolíticos fueron mayores en verano. Se encontró una correlación positiva significativa entre los recuentos de coliformes totales y los recuentos de psicrótroficos proteolíticos (r=0.73) y los niveles de proteínas (r=0.45), sólidos desgrasados (r=0.45) y minerales (r=0.46). Además, los recuentos de psicrótroficos proteolíticos mostraron una correlación positiva con el índice crioscópico. Los componentes de la leche cumplieron con los requisitos de IN76. La calidad de la leche cruda refrigerada en el municipio de Santa Helena, Oeste de Paraná no fue satisfactoria en relación a los coliformes totales, debido a su alta incidencia, lo que indica la necesidad de buenas prácticas en el manejo del ordeño. Las bacterias psicrotróficas proteolíticas tuvieron baja proliferación, no afectando la calidad de la leche.(AU)

Listeria monocytogenes en leche de vaca producida por granjas lecheras familiares / Listeria monocytogenes in cow's milk produced by family-owned dairy farms / Listeria monocytogenes em leite de vaca produzido por propriedades leiteiras familiares

Refrigeration is an important milk preservation method. However, milk quality may deteriorate if the product is refrigerated for long periods, mainly due to the growth of psychrotrophic bacteria. This group of microorganisms includes pathogenic genera, most notably Listeria monocytogenes. The detection of this bacterium in food is important, given its pathogenic effects on human and animal health and also its economic relevance. This study focused on detecting the presence of L. monocytogenes in milk samples collected at small family-owned dairy farms. Samples were cultivated on PALCAM and ALOA agars for microbiological analysis and a molecular analysis by polymerase chain reaction was performed for the detection of L. monocytogenes. Despite the negative results obtained in both these analyses, further studies are recommended to confirm or refute the negligible effect of L. monocytogenes on small dairy farms.

A refrigeração é um método importante de preservação do leite. No entanto, a qualidade do leite pode piorar se o produto for mantido sob refrigeração por longos períodos, principalmente devido ao crescimento de bactérias psicrotróficas. Este grupo de microorganismos inclui gêneros patogênicos, mais notavelmente Listeria monocytogenes. A detecção dessa bactéria em alimentos é importante, tendo em vista seus efeitos patogênicos na saúde humana e animal e também sua relevância econômica. Este estudo teve como objetivo detectar a presença de L. monocytogenes em amostras de leite coletadas em pequenas fazendas leiteiras de propriedade familiar. As amostras foram cultivadas em ágar PALCAM e ALOA para análise microbiológica e análise molecular por reação em cadeia da polimerase para detecção de L. monocytogenes. Apesar dos resultados negativos obtidos em ambas as análises, estudos adicionais são recomendados para confirmar ou refutar o efeito insignificante de L. monocytogenes em pequenas fazendas leiteiras.

La refrigeración es un método importante de conservación de la leche. Sin embargo, la calidad de la leche puede deteriorarse si el producto se refrigera durante períodos prolongados, principalmente debido al crecimiento de bacterias psicrotróficas. Este grupo de microorganismos incluye géneros patógenos, más notablemente Listeria monocytogenes. La detección de esta bacteria en los alimentos es importante, dados sus efectos patógenos sobre la salud humana y animal y también su relevancia económica. Este estudio se centró en detectar la presencia de L. monocytogenes en muestras de leche recolectadas en pequeñas granjas lecheras familiares. Las muestras se cultivaron en agares PALCAM y ALOA para análisis microbiológico y se realizó un análisis molecular por reacción en cadena de la polimerasa para la detección de L. monocytogenes. A pesar de los resultados negativos obtenidos en ambos análisis, se recomiendan más estudios para confirmar o refutar el efecto insignificante de L. monocytogenesen pequeñas granjas lecheras.

Listeria monocytogenes en leche de vaca producida por granjas lecheras familiares / Listeria monocytogenes in cow's milk produced by family-owned dairy farms / Listeria monocytogenes em leite de vaca produzido por propriedades leiteiras familiares

Refrigeration is an important milk preservation method. However, milk quality may deteriorate if the product is refrigerated for long periods, mainly due to the growth of psychrotrophic bacteria. This group of microorganisms includes pathogenic genera, most notably Listeria monocytogenes. The detection of this bacterium in food is important, given its pathogenic effects on human and animal health and also its economic relevance. This study focused on detecting the presence of L. monocytogenes in milk samples collected at small family-owned dairy farms. Samples were cultivated on PALCAM and ALOA agars for microbiological analysis and a molecular analysis by polymerase chain reaction was performed for the detection of L. monocytogenes. Despite the negative results obtained in both these analyses, further studies are recommended to confirm or refute the negligible effect of L. monocytogenes on small dairy farms.(AU)

A refrigeração é um método importante de preservação do leite. No entanto, a qualidade do leite pode piorar se o produto for mantido sob refrigeração por longos períodos, principalmente devido ao crescimento de bactérias psicrotróficas. Este grupo de microorganismos inclui gêneros patogênicos, mais notavelmente Listeria monocytogenes. A detecção dessa bactéria em alimentos é importante, tendo em vista seus efeitos patogênicos na saúde humana e animal e também sua relevância econômica. Este estudo teve como objetivo detectar a presença de L. monocytogenes em amostras de leite coletadas em pequenas fazendas leiteiras de propriedade familiar. As amostras foram cultivadas em ágar PALCAM e ALOA para análise microbiológica e análise molecular por reação em cadeia da polimerase para detecção de L. monocytogenes. Apesar dos resultados negativos obtidos em ambas as análises, estudos adicionais são recomendados para confirmar ou refutar o efeito insignificante de L. monocytogenes em pequenas fazendas leiteiras.(AU)

La refrigeración es un método importante de conservación de la leche. Sin embargo, la calidad de la leche puede deteriorarse si el producto se refrigera durante períodos prolongados, principalmente debido al crecimiento de bacterias psicrotróficas. Este grupo de microorganismos incluye géneros patógenos, más notablemente Listeria monocytogenes. La detección de esta bacteria en los alimentos es importante, dados sus efectos patógenos sobre la salud humana y animal y también su relevancia económica. Este estudio se centró en detectar la presencia de L. monocytogenes en muestras de leche recolectadas en pequeñas granjas lecheras familiares. Las muestras se cultivaron en agares PALCAM y ALOA para análisis microbiológico y se realizó un análisis molecular por reacción en cadena de la polimerasa para la detección de L. monocytogenes. A pesar de los resultados negativos obtenidos en ambos análisis, se recomiendan más estudios para confirmar o refutar el efecto insignificante de L. monocytogenesen pequeñas granjas lecheras.(AU)

Behavior of spoilage bacteria and Salmonella enterica subspecies enterica O: 4, 5 in vacuum-packaged beef during refrigeration / Comportamento de bactérias deteriorantes e Salmonella enterica subespécie entérica O: 4, 5 em carne bovina embalada a vácuo durante refrigeração

In this study, the kinetic parameters of mesophilic, psychrotrophic and lactic acid bacteria in vacuum-packed beef at 1 °C and 4 °C were estimated from experimental growth curves produced by samples stored during 21 and 60 days, respectively. In a separate experiment, the survival of multidrug resistant (MDR) Salmonella enterica O:4,5 at 1°C was also characterized. The shelf-life of vacuum-packed beef stored at 4 °C was estimated at 16.1 days (95% CI: 14.8 - 17.3 days), whereas at 1 °C it was longer than 21 days because the mesophiles count estimated towards the end of the experiment was 12.5 ln CFU.g-1 (95% CI: 11.8 - 13.3 ln CFU.g-1) which is lower than the shelf-life reference value. At 1 °C, inoculated Salmonella was reduced in 6.61 ln CFU.g-1 (2.87 log CFU.g-1). These results demonstrated the importance of establishing in legislation, especially in Brazil, standard values of deteriorating microorganisms in beef for maintaining product quality.(AU)

Neste estudo, os parâmetros cinéticos de bactérias mesófilas, psicrotróficas e ácido lácticas foram estimados em carne bovina embalada a vácuo a 1 °C e 4 °C, a partir de curvas experimentais produzidas em amostras estocadas durante 21 e 60 dias, respectivamente. Em um experimento separado, a sobrevivência de Salmonella enterica O:4,5 multirresistente (MDR) a 1°C também foi caracterizada. A vida de prateleira da carne bovina embalada a vácuo, estocada a 4°C, foi estimada em 16.1 dias (95% CI: 14.8 - 17.3 dias), enquanto que a 1 °C o período foi maior que 21 dias, porque a contagem estimada de mesófilos ao final do experimento foi de 12.5 ln UFC.g-1 (95% CI: 11.8 - 13.3 ln UFC.g-1), o qual é mais baixo que o valor referência de shelf-life. A 1 °C, Salmonella inoculada reduziu em 6.61 ln UFC.g-1 (2.87 log UFC.g-1). Estes resultados demonstram a importância de estabelecimento em legislação, especialmente no Brasil, de valores padrões para contagem de microrganismos deteriorantes em carnes visando manter a qualidade do produto.(AU)

Pseudomonas spp. and other psychrotrophic microorganisms in inspected and non-inspected Brazilian Minas Frescal cheese: proteolytic, lipolytic and AprX production potential / Pseudomonas spp. e outros micro-organismos psicrotróficos em queijos Minas Frescal inspecionados e não inspecionados: potencial proteolítico, lipolítico e produção de AprX

The most consumed cheese in Brazil, Minas Frescal cheese (MFC) is highly susceptible to microbial contamination and clandestine production and commercialization can pose a risk to consumer health. The storage of this fresh product under refrigeration, although more appropriate, may favor the growth of spoilage psychrotrophic bacteria. The objective of this study was to quantify and compare Pseudomonas spp. and other psychrotrophic bacteria in inspected and non-inspected MFC samples, evaluate their lipolytic and proteolytic activities and their metalloprotease production potentials. Twenty MFC samples were evaluated: 10 inspected and 10 non-inspected. Counts of psychrotrophic bacteria and Pseudomonas spp., evaluation of the proteolytic and lipolytic potential of the isolates, and identification of potential producers of alkaline metalloprotease (AprX) were assessed. The mean total psychrotrophic counts were 1.07 (±2.18) × 109CFU/g in the inspected samples and 4.5 (±5.86) × 108CFU/g in the non-inspected, with no significant difference (p=0.37). The average score of Pseudomonas spp. was 6.86 (±18.6) × 105 and 2.08 (±3.65) × 106 CFU/g for the inspected and non-inspected MFC samples, respectively, with no significant difference (p=0.1). Pseudomonas spp. represented 0.06% and 0.004% of psychrotrophic bacteria found in inspected and non-inspected MFC samples, respectively. Collectively, 694 psychrotrophic strains and 47Pseudomonas spp. were isolated, of which 59.9% and 68.1% were simultaneously proteolytic and lipolytic, respectively. Of the 470 psychrotrophs isolated from inspected and 224 from non-inspected cheese samples, 5.74% and 2.23% contained aprX, respectively, while 100 and 86.96% of the Pseudomonas spp. isolates in inspected and non-inspected cheese samples contained the gene. The production potential of AprX did not, however, determine the proteolytic activity on plates of these isolates under the conditions evaluated in this study...(AU)

O mais consumido no Brasil, o queijo Minas Frescal (QMF) é altamente suscetível à contaminação microbiana e a produção e comercialização clandestina podem representar um risco para a saúde do consumidor. O armazenamento deste produto fresco sob refrigeração, embora mais apropriado, pode favorecer a multiplicação de bactérias psicrotróficas deteriorantes. O objetivo deste estudo foi quantificar e comparar Pseudomonas spp. e outras bactérias psicrotróficas em amostras de QMF inspecionadas e não inspecionadas, avaliar o potencial lipolítico, proteolítico e de produção de metaloprotease alcalina. Vinte amostras de QMF foram avaliadas: 10 inspecionadas e 10 não inspecionadas. Foram avaliadas as contagens de bactérias psicrotróficas e Pseudomonas spp., o potencial proteolítico e lipolítico dos isolados e a identificação de potenciais produtores de metaloprotease alcalina (AprX). A média total das contagens de bactérias psicrotróficas foi de 1,07 (±2,18) × 109UFC/g nas amostras inspecionadas e 4,5 (±5,86) × 108UFC/g nas não inspecionadas, sem diferença significativa (p=0,37). A média de Pseudomonasspp. foi de 6,86 (±18,6) × 105 e 2,08 (±3,65) × 106UFC/g para as amostras QMF inspecionadas e não-inspecionadas, respectivamente, sem diferença significativa (p=0,1). Pseudomonas spp. representaram 0,06% e 0,004% de bactérias psicrotróficas encontradas em amostras QMF inspecionadas e não-inspecionadas, respectivamente. Das amostras inspecionadas e não inspecionadas, foram isoladas 694 colônias psicrotróficas e 47 Pseudomonasspp., dos quais 59,9% e 68,1% foram simultaneamente proteolíticos e lipolíticos, respectivamente. Dos 470 isolados de psicrotróficos das amostras de queijo inspecionados e dos 224 isolados das não inspecionadas, 5,74% e 2,23% continham o gene aprX, respectivamente, enquanto 100 e 86,96% das Pseudomonasspp. isoladas em amostras de queijo inspecionadas e não inspecionadas continham o potencial de expressão de AprX...(AU)

Contagens de bactérias aeróbias mesófilas e psicrotróficas em filés de tilápias comercializados em dois supermercados de Uberlândia-MG / Counting of aerobic mesophilic and psychrotrophic bacteria in tilapia fillets marketed in two supermarkets of Uberlândia-MG

O objetivo do trabalho foi avaliar as contagens de bactérias aeróbias mesófilas e psicrotróficas em filés de tilápias de dois supermercados de Uberlândia-MG. 30 filés frescos oriundos do estabelecimento A e 29 do B foram amostrados por esfregaço superficial (50 cm2) para contagens de bactérias Aeróbias Mesófilas (AM) (Pour Plate -37°C/ 48h) e Psicrotróficas (PSI) (Plaqueamento em superfície 7°C/ 7dias) em Plate Count Agar. Comparou-se as médias de contagens por Mann-Whitney (P<0,05). Os filés do estabelecimento A apresentaram média de contaminação superior à encontrada no estabelecimento B para AM (5,54 e 3,74 UFC/ cm2 respectivamente) e PSI (7,41 e 5,78 UFC/ cm2, respectivamente). Os altos níveis de contagens indicam a necessidade de melhorias nas boas práticas de fabricação para reduzir a contaminação dos filés comercializados.(AU)

Contagens de bactérias aeróbias mesófilas e psicrotróficas em filés de tilápias comercializados em dois supermercados de Uberlândia-MG / Counting of aerobic mesophilic and psychrotrophic bacteria in tilapia fillets marketed in two supermarkets of Uberlândia-MG

O objetivo do trabalho foi avaliar as contagens de bactérias aeróbias mesófilas e psicrotróficas em filés de tilápias de dois supermercados de Uberlândia-MG. 30 filés frescos oriundos do estabelecimento A e 29 do B foram amostrados por esfregaço superficial (50 cm2) para contagens de bactérias Aeróbias Mesófilas (AM) (Pour Plate -37°C/ 48h) e Psicrotróficas (PSI) (Plaqueamento em superfície – 7°C/ 7dias) em Plate Count Agar. Comparou-se as médias de contagens por Mann-Whitney (P<0,05). Os filés do estabelecimento A apresentaram média de contaminação superior à encontrada no estabelecimento B para AM (5,54 e 3,74 UFC/ cm2 respectivamente) e PSI (7,41 e 5,78 UFC/ cm2, respectivamente). Os altos níveis de contagens indicam a necessidade de melhorias nas boas práticas de fabricação para reduzir a contaminação dos filés comercializados.

Pseudomonas spp. and other psychrotrophic microorganisms in inspected and non-inspected Brazilian Minas Frescal cheese: proteolytic, lipolytic and AprX production potential

ABSTRACT: The most consumed cheese in Brazil, Minas Frescal cheese (MFC) is highly susceptible to microbial contamination and clandestine production and commercialization can pose a risk to consumer health. The storage of this fresh product under refrigeration, although more appropriate, may favor the growth of spoilage psychrotrophic bacteria. The objective of this study was to quantify and compare Pseudomonas spp. and other psychrotrophic bacteria in inspected and non-inspected MFC samples, evaluate their lipolytic and proteolytic activities and their metalloprotease production potentials. Twenty MFC samples were evaluated: 10 inspected and 10 non-inspected. Counts of psychrotrophic bacteria and Pseudomonas spp., evaluation of the proteolytic and lipolytic potential of the isolates, and identification of potential producers of alkaline metalloprotease (AprX) were assessed. The mean total psychrotrophic counts were 1.07 (±2.18) × 109CFU/g in the inspected samples and 4.5 (±5.86) × 108CFU/g in the non-inspected, with no significant difference (p=0.37). The average score of Pseudomonas spp. was 6.86 (±18.6) × 105 and 2.08 (±3.65) × 106 CFU/g for the inspected and non-inspected MFC samples, respectively, with no significant difference (p=0.1). Pseudomonas spp. represented 0.06% and 0.004% of psychrotrophic bacteria found in inspected and non-inspected MFC samples, respectively. Collectively, 694 psychrotrophic strains and 47Pseudomonas spp. were isolated, of which 59.9% and 68.1% were simultaneously proteolytic and lipolytic, respectively. Of the 470 psychrotrophs isolated from inspected and 224 from non-inspected cheese samples, 5.74% and 2.23% contained aprX, respectively, while 100 and 86.96% of the Pseudomonas spp. isolates in inspected and non-inspected cheese samples contained the gene. The production potential of AprX did not, however, determine the proteolytic activity on plates of these isolates under the conditions evaluated in this study. Of total, 65.63% of the psychrotrophs that contained aprX gene were confirmed as Pseudomonas spp., using genus-specific PCR. Phylogenetic analysis of the 16S rRNA gene of the other psychrotrophs that were potential producers of AprX identified them as Serratia spp. (n=7), Raoultella ornithinolytica (n=1), and Acinetobacter schindleri (n=1) in the inspected samples and Psychrobacter sanguinis (n=1) and Leuconostoc mesenteroides (n=1) in the non-inspected samples. The production conditions of Brazilian MFC of these samples, while meeting the legal determinations, are not sufficient to control Pseudomonas and other spoilage-related psychrotrophs. Thus, stricter hygienic measures are required during the formal production of this type of cheese.

RESUMO: O mais consumido no Brasil, o queijo Minas Frescal (QMF) é altamente suscetível à contaminação microbiana e a produção e comercialização clandestina podem representar um risco para a saúde do consumidor. O armazenamento deste produto fresco sob refrigeração, embora mais apropriado, pode favorecer a multiplicação de bactérias psicrotróficas deteriorantes. O objetivo deste estudo foi quantificar e comparar Pseudomonas spp. e outras bactérias psicrotróficas em amostras de QMF inspecionadas e não inspecionadas, avaliar o potencial lipolítico, proteolítico e de produção de metaloprotease alcalina. Vinte amostras de QMF foram avaliadas: 10 inspecionadas e 10 não inspecionadas. Foram avaliadas as contagens de bactérias psicrotróficas e Pseudomonas spp., o potencial proteolítico e lipolítico dos isolados e a identificação de potenciais produtores de metaloprotease alcalina (AprX). A média total das contagens de bactérias psicrotróficas foi de 1,07 (±2,18) × 109UFC/g nas amostras inspecionadas e 4,5 (±5,86) × 108UFC/g nas não inspecionadas, sem diferença significativa (p=0,37). A média de Pseudomonasspp. foi de 6,86 (±18,6) × 105 e 2,08 (±3,65) × 106UFC/g para as amostras QMF inspecionadas e não-inspecionadas, respectivamente, sem diferença significativa (p=0,1). Pseudomonas spp. representaram 0,06% e 0,004% de bactérias psicrotróficas encontradas em amostras QMF inspecionadas e não-inspecionadas, respectivamente. Das amostras inspecionadas e não inspecionadas, foram isoladas 694 colônias psicrotróficas e 47 Pseudomonasspp., dos quais 59,9% e 68,1% foram simultaneamente proteolíticos e lipolíticos, respectivamente. Dos 470 isolados de psicrotróficos das amostras de queijo inspecionados e dos 224 isolados das não inspecionadas, 5,74% e 2,23% continham o gene aprX, respectivamente, enquanto 100 e 86,96% das Pseudomonasspp. isoladas em amostras de queijo inspecionadas e não inspecionadas continham o potencial de expressão de AprX. Esse potencial, no entanto, não determinou a atividade proteolítica em placas desses isolados nas condições avaliadas neste estudo. Do total, 65,63% dos psicrotróficos que continham o gene aprX foram confirmados como Pseudomonasspp., utilizando PCR gênero-específico. A análise filogenética do gene 16S rRNA dos outros psicrotróficos que foram produtores potenciais de AprX os identificou como Serratia spp. (n=7), Raoultella ornithinolytica (n=1) e Acinetobacter schindleri (n=1) nas amostras inspecionadas e Psychrobacter sanguinis (n=1) e Leuconostoc mesenteroides (n=1) nas amostras não inspecionadas. As condições de produção do QMF dessas amostras, atendendo às determinações legais, não são suficientes para controlar a Pseudomonas e outros psicrotróficos relacionados à deterioração. Assim, medidas higiênicas mais rígidas são necessárias durante a produção formal deste tipo de queijo.

Isolamento e classificação de micro-organismos psicrotróficos proteolíticos presentes em queijo Minas Frescal / Isolation and classification of psychrotrophic and proteolytic microorganisms in “Minas Frescal” cheese

Algumas condições da qualidade de leite e derivados estão conexas à microbiota contaminante deterioradora que é, sobretudo, representada por bactérias psicrotróficas proteolíticas. Portanto, o objetivo desse trabalho foi isolar micro-organismos psicrotróficos proteolíticos de queijo Minas Frescal comercializados em Salinas -MG. Para tanto foi realizado o isolamento de micro-organismos psicrotróficos proteolíticos presentes em queijos Minas Frescal. Logo após, foi realizada a caracterização dos isolados quanto à coloração de Gram, forma e atividade de oxidase. Os resultados obtidos evidenciaram a predominância de micro-organismos psicrotróficos Gram-positivos na microbiota dos queijos comercializados em Salinas-MG.(AU)

Isolamento e classificação de micro-organismos psicrotróficos proteolíticos presentes em queijo Minas Frescal / Isolation and classification of psychrotrophic and proteolytic microorganisms in “Minas Frescal” cheese

Algumas condições da qualidade de leite e derivados estão conexas à microbiota contaminante deterioradora que é, sobretudo, representada por bactérias psicrotróficas proteolíticas. Portanto, o objetivo desse trabalho foi isolar micro-organismos psicrotróficos proteolíticos de queijo Minas Frescal comercializados em Salinas -MG. Para tanto foi realizado o isolamento de micro-organismos psicrotróficos proteolíticos presentes em queijos Minas Frescal. Logo após, foi realizada a caracterização dos isolados quanto à coloração de Gram, forma e atividade de oxidase. Os resultados obtidos evidenciaram a predominância de micro-organismos psicrotróficos Gram-positivos na microbiota dos queijos comercializados em Salinas-MG.

Pseudomonas spp. and other psychrotrophic microorganisms in inspected and non-inspected Brazilian Minas Frescal cheese: proteolytic, lipolytic and AprX production potential / Pseudomonas spp. e outros micro-organismos psicrotróficos em queijos Minas Frescal inspecionados e não inspecionados: potencial proteolítico, lipolítico e produção de AprX

The most consumed cheese in Brazil, Minas Frescal cheese (MFC) is highly susceptible to microbial contamination and clandestine production and commercialization can pose a risk to consumer health. The storage of this fresh product under refrigeration, although more appropriate, may favor the growth of spoilage psychrotrophic bacteria. The objective of this study was to quantify and compare Pseudomonas spp. and other psychrotrophic bacteria in inspected and non-inspected MFC samples, evaluate their lipolytic and proteolytic activities and their metalloprotease production potentials. Twenty MFC samples were evaluated: 10 inspected and 10 non-inspected. Counts of psychrotrophic bacteria and Pseudomonas spp., evaluation of the proteolytic and lipolytic potential of the isolates, and identification of potential producers of alkaline metalloprotease (AprX) were assessed. The mean total psychrotrophic counts were 1.07 (±2.18) × 109CFU/g in the inspected samples and 4.5 (±5.86) × 108CFU/g in the non-inspected, with no significant difference (p=0.37). The average score of Pseudomonas spp. was 6.86 (±18.6) × 105 and 2.08 (±3.65) × 106 CFU/g for the inspected and non-inspected MFC samples, respectively, with no significant difference (p=0.1). Pseudomonas spp. represented 0.06% and 0.004% of psychrotrophic bacteria found in inspected and non-inspected MFC samples, respectively. Collectively, 694 psychrotrophic strains and 47Pseudomonas spp. were isolated, of which 59.9% and 68.1% were simultaneously proteolytic and lipolytic, respectively. Of the 470 psychrotrophs isolated from inspected and 224 from non-inspected cheese samples, 5.74% and 2.23% contained aprX, respectively, while 100 and 86.96% of the Pseudomonas spp. isolates in inspected and non-inspected cheese samples contained the gene. The production potential of AprX did not, however, determine the proteolytic activity on plates of these isolates under the conditions evaluated in this study. Of total, 65.63% of the psychrotrophs that contained aprX gene were confirmed as Pseudomonas spp., using genus-specific PCR. Phylogenetic analysis of the 16S rRNA gene of the other psychrotrophs that were potential producers of AprX identified them as Serratia spp. (n=7), Raoultella ornithinolytica (n=1), and Acinetobacter schindleri (n=1) in the inspected samples and Psychrobacter sanguinis (n=1) and Leuconostoc mesenteroides (n=1) in the non-inspected samples. The production conditions of Brazilian MFC of these samples, while meeting the legal determinations, are not sufficient to control Pseudomonas and other spoilage-related psychrotrophs. Thus, stricter hygienic measures are required during the formal production of this type of cheese.(AU)

O mais consumido no Brasil, o queijo Minas Frescal (QMF) é altamente suscetível à contaminação microbiana e a produção e comercialização clandestina podem representar um risco para a saúde do consumidor. O armazenamento deste produto fresco sob refrigeração, embora mais apropriado, pode favorecer a multiplicação de bactérias psicrotróficas deteriorantes. O objetivo deste estudo foi quantificar e comparar Pseudomonas spp. e outras bactérias psicrotróficas em amostras de QMF inspecionadas e não inspecionadas, avaliar o potencial lipolítico, proteolítico e de produção de metaloprotease alcalina. Vinte amostras de QMF foram avaliadas: 10 inspecionadas e 10 não inspecionadas. Foram avaliadas as contagens de bactérias psicrotróficas e Pseudomonas spp., o potencial proteolítico e lipolítico dos isolados e a identificação de potenciais produtores de metaloprotease alcalina (AprX). A média total das contagens de bactérias psicrotróficas foi de 1,07 (±2,18) × 109UFC/g nas amostras inspecionadas e 4,5 (±5,86) × 108UFC/g nas não inspecionadas, sem diferença significativa (p=0,37). A média de Pseudomonasspp. foi de 6,86 (±18,6) × 105 e 2,08 (±3,65) × 106UFC/g para as amostras QMF inspecionadas e não-inspecionadas, respectivamente, sem diferença significativa (p=0,1). Pseudomonas spp. representaram 0,06% e 0,004% de bactérias psicrotróficas encontradas em amostras QMF inspecionadas e não-inspecionadas, respectivamente. Das amostras inspecionadas e não inspecionadas, foram isoladas 694 colônias psicrotróficas e 47 Pseudomonasspp., dos quais 59,9% e 68,1% foram simultaneamente proteolíticos e lipolíticos, respectivamente. Dos 470 isolados de psicrotróficos das amostras de queijo inspecionados e dos 224 isolados das não inspecionadas, 5,74% e 2,23% continham o gene aprX, respectivamente, enquanto 100 e 86,96% das Pseudomonasspp. isoladas em amostras de queijo inspecionadas e não inspecionadas continham o potencial de expressão de AprX. Esse potencial, no entanto, não determinou a atividade proteolítica em placas desses isolados nas condições avaliadas neste estudo. Do total, 65,63% dos psicrotróficos que continham o gene aprX foram confirmados como Pseudomonasspp., utilizando PCR gênero-específico. A análise filogenética do gene 16S rRNA dos outros psicrotróficos que foram produtores potenciais de AprX os identificou como Serratia spp. (n=7), Raoultella ornithinolytica (n=1) e Acinetobacter schindleri (n=1) nas amostras inspecionadas e Psychrobacter sanguinis (n=1) e Leuconostoc mesenteroides (n=1) nas amostras não inspecionadas. As condições de produção do QMF dessas amostras, atendendo às determinações legais, não são suficientes para controlar a Pseudomonas e outros psicrotróficos relacionados à deterioração. Assim, medidas higiênicas mais rígidas são necessárias durante a produção formal deste tipo de queijo.(AU)

Avaliação microbiológica de leite UHT integral comercializados em Pombal-PB / Microbiological evaluation of integral UHT milk commercialized in Pombal-PB

O leite UHT é o leite homogeneizado submetido a um processo térmico de fluxo continuo durante 2 a 4 segundos a uma temperatura de 130ºC, onde o mesmo é imediatamente resfriado a uma temperatura inferior a 32ºC e envasado sob condições assépticas em embalagens estéreis e hermeticamente fechadas. Este trabalho teve como objetivo avaliar a qualidade microbiológica de leite s UHT comercializado na cidade de Pombal-PB. Foram realizadas análises de coliformes totais e termotolerantes, Salmonella spp./25g , bactérias aeróbias mesófilas, bactérias aeróbias psicrotróficas e fungos filamentosos e leveduras. E m 3 amostras de leite a contagem de coliformes totais encontrou-se fora dos padrões. Para coliformes termotolerantes e microrganismos psicrotróficos, as amostras de leite UHT examinadas apresentaram de acordo com a legislação vigente. Todas as amostras de leite obtiveram ausência de Salmonella spp./25g . Apenas a amostra L3 apresentou contaminação de fungos filamentosos e leveduras.(AU)

Avaliação microbiológica de leite UHT integral comercializados em Pombal-PB / Microbiological evaluation of integral UHT milk commercialized in Pombal-PB

O leite UHT é o leite homogeneizado submetido a um processo térmico de fluxo continuo durante 2 a 4 segundos a uma temperatura de 130ºC, onde o mesmo é imediatamente resfriado a uma temperatura inferior a 32ºC e envasado sob condições assépticas em embalagens estéreis e hermeticamente fechadas. Este trabalho teve como objetivo avaliar a qualidade microbiológica de leite s UHT comercializado na cidade de Pombal-PB. Foram realizadas análises de coliformes totais e termotolerantes, Salmonella spp./25g , bactérias aeróbias mesófilas, bactérias aeróbias psicrotróficas e fungos filamentosos e leveduras. E m 3 amostras de leite a contagem de coliformes totais encontrou-se fora dos padrões. Para coliformes termotolerantes e microrganismos psicrotróficos, as amostras de leite UHT examinadas apresentaram de acordo com a legislação vigente. Todas as amostras de leite obtiveram ausência de Salmonella spp./25g . Apenas a amostra L3 apresentou contaminação de fungos filamentosos e leveduras.

Quantification of psychrotrophic bacteria and molecular identification of Pseudomonas fluorescens in refrigerated raw milk / Quantificação de bactérias psicrotróficas e identificação molecular de Pseudomonas fluorescens em leite cru refrigerado

In this study, we investigated the contamination of refrigerated raw milk produced in the western region of Paraná, southern Brazil, with psychrotrophic microorganisms, aiming to assay the proteolytic activity of the isolates and to identify Pseudomonas fluorescens, the main proteolytic species associated with the spoilage of milk products. Raw milk samples from 50 dairy farms were submitted to the counting of psychrotrophic microorganisms, being the microbiota characterized by its mesophilic behavior and proteolytic capacity, besides molecular identification of P. fluorescens. Of the samples evaluated, 94% had psychrotrophic counts ranging from 3 to 7.1 log CFU mL-1, and 48.5% of these showed mesophilic behavior. Of the isolates, 48.0% had proteolytic activity in at least one evaluated temperature (21 and 30°C), and 39.3% had proteolytic activity in both temperatures. Among the 61 isolates submitted to molecular identification by polymerase chain reaction (PCR), 86.8% contained the expression of the 16S gene characteristic for P. fluorescens. In this study, we demonstrated that P. fluorescens is the most prevalent psychrotrophic bacteria species in raw refrigerated milk and their proteolytic ability poses high risks to the dairy industry.(AU)

No presente estudo, investigamos a contaminação do leite cru refrigerado produzido na região oeste do Paraná, sul do Brasil, com micro-organismos psicrotróficos, visando testar a atividade proteolítica dos isolados e identificar Pseudomonas fluorescens, a principal espécie proteolítica associada à deterioração de produtos lácteos. Amostras de leite cru de 50 fazendas leiteiras foram submetidas à contagem de micro-organismos psicrotróficos, caracterizando-se a microbiota por seu comportamento mesofílico e sua capacidade proteolítica, além de identificação molecular de P. fluorescens. Entre as amostras avaliadas, 94% apresentaram contagem psicrotrófica variando de 3 a 7,1 log UFC mL-1 e 48,5% destas apresentaram comportamento mesofílico. Entre os isolados, 48,0% apresentaram atividade proteolítica em pelo menos uma das temperaturas testadas (21 e 30°C) e 39,3% apresentaram atividade proteolítica em ambas as temperaturas. Entre os 61 isolados sub-metidos à identificação molecular por reação em cadeia da polimerase (PCR), 86,8% continham expressão do gene 16S característico de P. fluorescens. Neste estudo, demonstramos que P. fluorescens é a espécie de bactérias psicrotróficas mais prevalente em leite refrigerado cru e sua capacidade proteolítica promove elevados riscos de deterioração para a indústria de laticínios.(AU)

Quantification of psychrotrophic bacteria and molecular identification of Pseudomonas fluorescens in refrigerated raw milk / Quantificação de bactérias psicrotróficas e identificação molecular de Pseudomonas fluorescens em leite cru refrigerado

In this study, we investigated the contamination of refrigerated raw milk produced in the western region of Paraná, southern Brazil, with psychrotrophic microorganisms, aiming to assay the proteolytic activity of the isolates and to identify Pseudomonas fluorescens, the main proteolytic species associated with the spoilage of milk products. Raw milk samples from 50 dairy farms were submitted to the counting of psychrotrophic microorganisms, being the microbiota characterized by its mesophilic behavior and proteolytic capacity, besides molecular identification of P. fluorescens. Of the samples evaluated, 94% had psychrotrophic counts ranging from 3 to 7.1 log CFU mL-1, and 48.5% of these showed mesophilic behavior. Of the isolates, 48.0% had proteolytic activity in at least one evaluated temperature (21 and 30°C), and 39.3% had proteolytic activity in both temperatures. Among the 61 isolates submitted to molecular identification by polymerase chain reaction (PCR), 86.8% contained the expression of the 16S gene characteristic for P. fluorescens. In this study, we demonstrated that P. fluorescens is the most prevalent psychrotrophic bacteria species in raw refrigerated milk and their proteolytic ability poses high risks to the dairy industry.(AU)

No presente estudo, investigamos a contaminação do leite cru refrigerado produzido na região oeste do Paraná, sul do Brasil, com micro-organismos psicrotróficos, visando testar a atividade proteolítica dos isolados e identificar Pseudomonas fluorescens, a principal espécie proteolítica associada à deterioração de produtos lácteos. Amostras de leite cru de 50 fazendas leiteiras foram submetidas à contagem de micro-organismos psicrotróficos, caracterizando-se a microbiota por seu comportamento mesofílico e sua capacidade proteolítica, além de identificação molecular de P. fluorescens. Entre as amostras avaliadas, 94% apresentaram contagem psicrotrófica variando de 3 a 7,1 log UFC mL-1 e 48,5% destas apresentaram comportamento mesofílico. Entre os isolados, 48,0% apresentaram atividade proteolítica em pelo menos uma das temperaturas testadas (21 e 30°C) e 39,3% apresentaram atividade proteolítica em ambas as temperaturas. Entre os 61 isolados sub-metidos à identificação molecular por reação em cadeia da polimerase (PCR), 86,8% continham expressão do gene 16S característico de P. fluorescens. Neste estudo, demonstramos que P. fluorescens é a espécie de bactérias psicrotróficas mais prevalente em leite refrigerado cru e sua capacidade proteolítica promove elevados riscos de deterioração para a indústria de laticínios.(AU)

Spoilage potential of spore-forming bacteria from refrigerated raw milk / Potencial deteriorante de bactérias formadoras de esporos do leite cru refrigerado

Aerobic bacterial spores are an important group of microorganisms in raw milk. These microbes are thermoduric, whereas the vegetative forms are thermophilic, thermoduric and psychrotrophic and reduce the shelf life of pasteurized milk. In Brazil, there are a lack of studies on the load of aerobic spores in raw milk; thus, little is known about the spoilage activity of these organisms. The aim the present study was to quantify the aerobic spores in Brazilian refrigerated raw milk of dairy region of Castro, Paraná state, assess the potential proteolytic and/or lipolytic isolates and identify the microorganisms derived from the germination. Twenty milk samples were evaluated, and the aerobic spore count was performed after plating the samples following heat treatment at 80ºC for 12 min. The activity proteolytic and lipolytic isolates were evaluated through subculture on milk agar and tributyrin agar, respectively, and these microorganisms were identified using partial 16S rRNA gene sequences that were compared through GenBank. The aerobic spore counts ranged from 1 to 3.7 log CFU.mL-¹, with a mean of 1.75 (± 0.59) log CFU.mL-¹. After spore germination, 137 aerobic bacterial isolates were obtained, 40 of which (29.2%) showed milk spoilage activity. Among these, 31 isolates (77.5%) were proteolytic and lipolytic, seven isolates (17.5%) were exclusively lipolytic and two isolates (5%) were only proteolytic. Based on the 16S rRNA gene analysis, Bacillus licheniformis (55%), Bacillus spp. (27.5%), Paenibacillus spp. (7.5%), Bacillus pumilus (5%), Bacillus circulans (2.5%) and Brevibacillus spp. (2.5%) were identified. Studies of Brazilian raw milk microbiota have not yet described B. circulans which are frequently detected in milk from other countries. Among the 22 B. licheniformis isolates, 21 microbes (95.5%) showed proteolytic and lipolytic activity, and one isolate (4.5%) exhibited only proteolytic activity. The two B. pumilus isolates were proteolytic...(AU)

Esporos de bactérias aeróbias são um importante grupo de micro-organismos no leite cru. Esses micro-organismos são termodúricos, e suas formas vegetativas são termofílicas, termodúricas e psicrotróficas e reduzem a vida útil do leite pasteurizado. No Brasil, não há estudos sobre os esporos aeróbios no leite cru, assim, pouco se sabe sobre o potencial deteriorante dessa microbiota no leite cru brasileiro. O objetivo do presente trabalho foi quantificar esporos aeróbios no leite cru refrigerado brasileiro, avaliar o seu potencial proteolítico e/ou lipolítico e identificar esses micro-organismos originários da germinação dos esporos. Foram avaliadas 20 amostras de leite cru refrigerado, nas quais foi realizada a contagem de esporos aeróbios após o tratamento térmico de 80ºC por 12 min. A atividade proteolítica e/ou lipolítica dos isolados foi avaliada após o repique das colônias em ágar leite e tributirina, respectivamente, e a identificação desses micro-organismos deteriorantes foi realizada pelo sequenciamento parcial do gene 16S rRNA e comparação com as sequencias depositadas no GenBank. As contagens de esporos aeróbios variaram de 1 a 3.7 log CFU.mL-¹, com média de 1.75 (± 0.59) log UFC.mL-¹. Após a germinação dos esporos, foram obtidas 137 colônias, das quais 40 (29.2%) apresentaram algum tipo de atividade deteriorante: 31 (77.5%) isolados foram proteolíticos e lipolíticos, sete (17.5%) foram exclusivamente lipolíticos e dois (5%) foram apenas proteolíticos. Baseado nas sequencias do gene 16S rRNA, foram identificados Bacillus licheniformis (55%), Bacillus spp. (27.5%), Paenibacillus spp. (7.5%), Bacillus pumilus (5%), Bacillus circulans (2.5%) e Brevibacillus spp. (2.5%) entre os esporulados deteriorantes. Estudos preliminaries sobre a microbiota do leite brasileiro ainda não haviam descrito B. circulans e Paenibacillus, gêneros frequentemente descritos no leite de outros países. Entre os 22 B. licheniformis...(AU)