Neospora caninum in aborted bovine fetuses in Trakya Region, Turkey - histopathological, immunohistochemical and molecular detection

Background: Being the major cause of bovine abortion in the world, Neosporosis is considered to be a very important protozoal infection in dairy cattle. Vertical transplacental transmission is the major route of the infection causing either abortion or birth of calves with persistent infection. As the seropositivity in individual cows and in fetal serology only indicate exposure to the protozoa, the diagnosis of the infection has to be based on histopathology of aborted fetuses. Additional techniques such as immunohistochemistry (IHC) and PCR are required for the detection of the etiological agent. The purpose of the current study was to diagnose Neospora caninum infection in aborted bovine fetuses in Trakya Region of Turkey. For this purpose, serological, histopathological, IHC, and PCR methods were used. Materials, Methods & Results: The blood samples and the fetuses of 55 aborted dairy cattle from various farms located in 3 provinces of Trakya, Turkey constituted the material of the present study. The sera obtained from the blood samples were tested using a Neospora caninum Antibody Test Kit cELISA and anti-N. caninum antibodies were detected in the sera of the dams of the 8 aborted fetuses (8/55; 14.54%). Following the necropsy, samples from the brain, heart, liver, lung, kidney, spleen, and placenta of 55 fetuses were routinely processed for histopathological examination and evaluated under a light microscope. Nonsuppurative encephalitis (15/55; 27.27%), necrosis (5/55; 9%) and gliosis (1/55; 1.8%) in the brain, mild to severe nonsuppurative myocarditis and epicarditis (14/55; 25.45%), and portal to mid-zonal nonsuppurative hepatitis (13/55; 23.63%) were the relevant findings. PCR analysis was performed on fresh frozen fetal tissues. Nested PCR detected N. caninum DNA in the brain, heart, liver, lung, and kidney tissues of 6 fetuses (6/55; 10.9%). IHC was performed on the brain, heart, and liver tissues of all the fetuses using avidin-biotin-complex peroxidase method. Immunoreactivity was observed in the brain of 1 fetus (1/55; 1.8%). Discussion: In the present study, histopathological, immunohistochemical and PCR analyses were performed to detect N. caninum in 55 spontenously aborted bovine fetuses in Trakya Region, Turkey. Histopathologic hallmark of the study was nonsuppurative inflammation found mostly in the brain, heart and liver followed by kidneys and lungs. No protozoa was observed in the microscopic examination supporting the fact that definitive diagnosis of N. caninum infection requires ancillary techniques such as IHC and PCR. Nested PCR detected N. caninum DNA in the tissues of 6 fetuses (6/55; 10.9%). Brain was the most reliable organ for detection by PCR (6/6; 100%), compatible with the previous reports. IHC diagnosis revealed only 1.8% positivity in the present study which was remarkably lower than found in the previous studies. Even though histopathology in conjunction with IHC are accepted as the "gold standard" methods to detect N. caninum infection in aborted bovine fetuses, there are studies claiming that IHC is relatively insensitive in the diagnosis of neosporosis as parasite numbers can be low and thus, false negative results can be obtained. Other factors affecting the sensitivity of the technique are thoroughly discussed by many authors. Supportively, the findings of the current study showed that using both IHC and PCR as complementary techniques, increases the success of detection of N. caninum as recommended in previous studies. In conclusion, the present study demonstrated the first molecular diagnosis of Neospora caninum infection in bovine aborted fetuses in Trakya Region of Turkey which has a critical geographical location bordering Europe.

Fluorescent polarization assay, two versions of indirect and competitive enzyme- linked immunoassay for brucellosis diagnosis in vaccinated buffaloes (Bubalus bubalis) / Teste de polarização fluorescente, duas versões de imunoensaio enzimático indireto e imunoensaio competitivo para diagnóstico de brucelose em búfalos vacinados (Bubalus bubalis)

ABSTRACT: The fluorescence polarization assay (FPA), two variants (V) of the indirect enzyme-linked immunosorbent assay (I-ELISA) and the competitive enzyme-linked immunosorbent assay (C-ELISA) were evaluated in buffaloes to detect antibodies against Brucella spp. The V1 of I-ELISA identifies them through the monoclonal (M23) anti-bovine IgG (I-ELISAM23) and the V2 through the ProteinA / G (I-ELISA-A/G). Serum samples of 862 buffaloes (Bubalus bubalis) from the Northeast of Argentina (NEA) were analyzed using the complement fixation test (CFT) as the reference. Receiving Operator Characteristic (ROC) analysis defined for the area under the curve (AUC) determined the cutoff points, sensitivity (Se) and specificity (Sp) for each test. CFT identified 107 positive and 755 negative sera. The best AUC (0.986), Concordance with CFT (96.3%) and kappa value (0.843) was obtained by I-ELISA A/G test. This assay showed the highest Se (95.33%) and C-ELISA the highest Sp (97%). FPA failed to measure the antibodies in 23 (2.65%) serum samples due to unsuccessful reading. I-ELISA M23 proved to be ineffective to diagnose brucellosis in bubaline sera. The four serological tests showed cutoff points lower than those standardized for bovines. As conclusion, I-ELISA A/G, C-ELISA and FPA with its limitations would be effective techniques for the diagnosis of brucellosis in buffaloes in the NEA, requiring an appropriate cut-off point to guarantee their maximum performance in this species.

RESUMO: O ensaio de polarização de fluorescência (FPA), duas variantes (V) do ensaio imunoenzimático indireto (I-ELISA) e o ensaio imunoenzimático competitivo (C-ELISA), foram avaliados em búfalos para detectar anticorpos contra Brucella spp. O V1 do I-ELISA os identifica através do IgG monoclonal (M23) anti-bovino (I-ELISAM23) e o V2 ​​através da Proteína A / G (I-ELISA-A / G). Amostras de soro de 862 búfalos (Bubalus bubalis) do Nordeste da Argentina (NEA) foram analisadas usando o teste de fixação do complemento (CFT) como referência. A análise Receiving Operator Characteristic (ROC) definida pela área sob a curva (AUC) determinou os pontos de corte, sensibilidade (Se) e especificidade (Sp) de cada teste. A CFT identificou 107 soros positivos e 755 soros negativos. Os melhores valores de AUC (0.986), concordância com CFT (96.3%) e kappa (0.843) foram obtidos pelo teste I-ELISA A / G. Este ensaio mostrou a maior Se (95.33%) e C-ELISA a maior Sp (97%). O FPA falhou em medir os anticorpos em 23 (2,65%) amostras de soro devido à falha na leitura. O I-ELISA M23 provou ser ineficaz para o diagnóstico de brucelose em soros bubalinos. Os quatro testes sorológicos mostraram pontos de corte inferiores aos padronizados para bovinos. Em conclusão, I-ELISA A / G, C-ELISA e FPA com suas limitações seriam técnicas eficazes para o diagnóstico de brucelose em búfalos no NEA, exigindo um ponto de corte adequado para garantir seu desempenho máximo nesta espécie.

Fluorescent polarization assay, two versions of indirect and competitive enzyme- linked immunoassay for brucellosis diagnosis in vaccinated buffaloes (Bubalus bubalis) / Teste de polarização fluorescente, duas versões de imunoensaio enzimático indireto e imunoensaio competitivo para diagnóstico de brucelose em búfalos vacinados (Bubalus bubalis)

The fluorescence polarization assay (FPA), two variants (V) of the indirect enzyme-linked immunosorbent assay (I-ELISA) and the competitive enzyme-linked immunosorbent assay (C-ELISA) were evaluated in buffaloes to detect antibodies against Brucella spp. The V1 of I-ELISA identifies them through the monoclonal (M23) anti-bovine IgG (I-ELISAM23) and the V2 through the ProteinA / G (I-ELISA-A/G). Serum samples of 862 buffaloes (Bubalus bubalis) from the Northeast of Argentina (NEA) were analyzed using the complement fixation test (CFT) as the reference. Receiving Operator Characteristic (ROC) analysis defined for the area under the curve (AUC) determined the cutoff points, sensitivity (Se) and specificity (Sp) for each test. CFT identified 107 positive and 755 negative sera. The best AUC (0.986), Concordance with CFT (96.3%) and kappa value (0.843) was obtained by I-ELISA A/G test. This assay showed the highest Se (95.33%) and C-ELISA the highest Sp (97%). FPA failed to measure the antibodies in 23 (2.65%) serum samples due to unsuccessful reading. I-ELISA M23 proved to be ineffective to diagnose brucellosis in bubaline sera. The four serological tests showed cutoff points lower than those standardized for bovines. As conclusion, I-ELISA A/G, C-ELISA and FPA with its limitations would be effective techniques for the diagnosis of brucellosis in buffaloes in the NEA, requiring an appropriate cut-off point to guarantee their maximum performance in this species.

O ensaio de polarização de fluorescência (FPA), duas variantes (V) do ensaio imunoenzimático indireto (I-ELISA) e o ensaio imunoenzimático competitivo (C-ELISA), foram avaliados em búfalos para detectar anticorpos contra Brucella spp. O V1 do I-ELISA os identifica através do IgG monoclonal (M23) anti-bovino (I-ELISAM23) e o V2 ​​através da Proteína A / G (I-ELISA-A / G). Amostras de soro de 862 búfalos (Bubalus bubalis) do Nordeste da Argentina (NEA) foram analisadas usando o teste de fixação do complemento (CFT) como referência. A análise Receiving Operator Characteristic (ROC) definida pela área sob a curva (AUC) determinou os pontos de corte, sensibilidade (Se) e especificidade (Sp) de cada teste. A CFT identificou 107 soros positivos e 755 soros negativos. Os melhores valores de AUC (0.986), concordância com CFT (96.3%) e kappa (0.843) foram obtidos pelo teste I-ELISA A / G. Este ensaio mostrou a maior Se (95.33%) e C-ELISA a maior Sp (97%). O FPA falhou em medir os anticorpos em 23 (2,65%) amostras de soro devido à falha na leitura. O I-ELISA M23 provou ser ineficaz para o diagnóstico de brucelose em soros bubalinos. Os quatro testes sorológicos mostraram pontos de corte inferiores aos padronizados para bovinos. Em conclusão, I-ELISA A / G, C-ELISA e FPA com suas limitações seriam técnicas eficazes para o diagnóstico de brucelose em búfalos no NEA, exigindo um ponto de corte adequado para garantir seu desempenho máximo nesta espécie.

Fluorescent polarization assay, two versions of indirect and competitive enzyme- linked immunoassay for brucellosis diagnosis in vaccinated buffaloes (Bubalus bubalis) / Teste de polarização fluorescente, duas versões de imunoensaio enzimático indireto e imunoensaio competitivo para diagnóstico de brucelose em búfalos vacinados (Bubalus bubalis)

The fluorescence polarization assay (FPA), two variants (V) of the indirect enzyme-linked immunosorbent assay (I-ELISA) and the competitive enzyme-linked immunosorbent assay (C-ELISA) were evaluated in buffaloes to detect antibodies against Brucella spp. The V1 of I-ELISA identifies them through the monoclonal (M23) anti-bovine IgG (I-ELISAM23) and the V2 through the ProteinA / G (I-ELISA-A/G). Serum samples of 862 buffaloes (Bubalus bubalis) from the Northeast of Argentina (NEA) were analyzed using the complement fixation test (CFT) as the reference. Receiving Operator Characteristic (ROC) analysis defined for the area under the curve (AUC) determined the cutoff points, sensitivity (Se) and specificity (Sp) for each test. CFT identified 107 positive and 755 negative sera. The best AUC (0.986), Concordance with CFT (96.3%) and kappa value (0.843) was obtained by I-ELISA A/G test. This assay showed the highest Se (95.33%) and C-ELISA the highest Sp (97%). FPA failed to measure the antibodies in 23 (2.65%) serum samples due to unsuccessful reading. I-ELISA M23 proved to be ineffective to diagnose brucellosis in bubaline sera. The four serological tests showed cutoff points lower than those standardized for bovines. As conclusion, I-ELISA A/G, C-ELISA and FPA with its limitations would be effective techniques for the diagnosis of brucellosis in buffaloes in the NEA, requiring an appropriate cut-off point to guarantee their maximum performance in this species.(AU)

O ensaio de polarização de fluorescência (FPA), duas variantes (V) do ensaio imunoenzimático indireto (I-ELISA) e o ensaio imunoenzimático competitivo (C-ELISA), foram avaliados em búfalos para detectar anticorpos contra Brucella spp. O V1 do I-ELISA os identifica através do IgG monoclonal (M23) anti-bovino (I-ELISAM23) e o V2 ​​através da Proteína A / G (I-ELISA-A / G). Amostras de soro de 862 búfalos (Bubalus bubalis) do Nordeste da Argentina (NEA) foram analisadas usando o teste de fixação do complemento (CFT) como referência. A análise Receiving Operator Characteristic (ROC) definida pela área sob a curva (AUC) determinou os pontos de corte, sensibilidade (Se) e especificidade (Sp) de cada teste. A CFT identificou 107 soros positivos e 755 soros negativos. Os melhores valores de AUC (0.986), concordância com CFT (96.3%) e kappa (0.843) foram obtidos pelo teste I-ELISA A / G. Este ensaio mostrou a maior Se (95.33%) e C-ELISA a maior Sp (97%). O FPA falhou em medir os anticorpos em 23 (2,65%) amostras de soro devido à falha na leitura. O I-ELISA M23 provou ser ineficaz para o diagnóstico de brucelose em soros bubalinos. Os quatro testes sorológicos mostraram pontos de corte inferiores aos padronizados para bovinos. Em conclusão, I-ELISA A / G, C-ELISA e FPA com suas limitações seriam técnicas eficazes para o diagnóstico de brucelose em búfalos no NEA, exigindo um ponto de corte adequado para garantir seu desempenho máximo nesta espécie.(AU)

Serological survey of bluetongue virus in sheep from Minas Gerais / Inquérito sorológico do vírus da língua azul em ovinos de Minas Gerais

Bluetongue is an infectious, non-contagious disease that affects domestic and wild ruminants, caused by a virus from the Orbivirus genus, Reoviridae family, transmitted by arthropod vectors of the Culicoides genus. This paper aims to be the first serological survey of bluetongue in sheep from the Meso-regions of Campo das Vertentes and South and Southeast of Minas Gerais. Samples were collected from sheep from different properties. The serum samples were submitted to Agar Gel Immunodiffusion (AGID) and competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (cELISA). 303 serum samples were submitted to AGID and cELISA. In these samples, 164 (54.13%) were positive in the AGID technique, and 171 (56.44%) positive in the cELISA technique, with an almost perfect agreement between the techniques (kappa index = 0.887). In all visited properties, positive animals have been found in the herd. Animals acquired from properties of the studied mesoregions were more likely to be positive in IDGA and cELISA tests than animals acquired from properties in other regions of Brazil (p<0.001). These results suggest that bluetongue virus (BTV) is widespread in the mesoregions of Campo das Vertentes and South and Southeast of Minas Gerais.(AU)

A língua azul (LA) é uma doença infecciosa, não contagiosa, que acomete ruminantes domésticos e silvestres, causada por um vírus do gênero Orbivirus da família Reoviridae, transmitida por vetores artrópodes do gênero Culicoides. O presente estudo representa o primeiro trabalho a realizar um inquérito sorológico da língua azul em rebanhos ovinos nas Mesorregiões de Campo das Vertentes e Sul e Sudoeste de Minas Gerais. Foram coletadas amostras de soro de ovinos de diferentes propriedades. As amostras de soro foram submetidas aos testes de imunodifusão em gel de ágar (IDGA) e ensaio de imunoadsorção enzimática por competição (cELISA). Ao todo 303 amostras de soro foram submetidas ao IDGA e cELISA. Dessas amostras, 164 (54,13%) foram positivas na técnica de IDGA e 171 (56,44%) positivas na técnica de cELISA, havendo concordância quase perfeita entre as técnicas (índice kappa = 0,887). Em todas as propriedades visitadas, foram encontrados animais positivos no rebanho. Animais adquiridos de propriedades das Mesorregiões estudadas, tiveram mais chances de serem positivos nos testes de IDGA e cELISA do que animais adquiridos de propriedades de outras Regiões do Brasil (p<0,001). Esses resultados sugerem que o vírus da língua azul encontra-se disseminado em ovinos nas Mesorregiões de Campo das Vertentes e Sul e Sudoeste de Minas Gerais.(AU)

Serological survey of bluetongue virus in sheep from Minas Gerais / Inquérito sorológico do vírus da língua azul em ovinos de Minas Gerais

Bluetongue is an infectious, non-contagious disease that affects domestic and wild ruminants, caused by a virus from the Orbivirus genus, Reoviridae family, transmitted by arthropod vectors of the Culicoides genus. This paper aims to be the first serological survey of bluetongue in sheep from the Meso-regions of Campo das Vertentes and South and Southeast of Minas Gerais. Samples were collected from sheep from different properties. The serum samples were submitted to Agar Gel Immunodiffusion (AGID) and competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (cELISA). 303 serum samples were submitted to AGID and cELISA. In these samples, 164 (54.13%) were positive in the AGID technique, and 171 (56.44%) positive in the cELISA technique, with an almost perfect agreement between the techniques (kappa index = 0.887). In all visited properties, positive animals have been found in the herd. Animals acquired from properties of the studied mesoregions were more likely to be positive in IDGA and cELISA tests than animals acquired from properties in other regions of Brazil (p<0.001). These results suggest that bluetongue virus (BTV) is widespread in the mesoregions of Campo das Vertentes and South and Southeast of Minas Gerais.(AU)

A língua azul (LA) é uma doença infecciosa, não contagiosa, que acomete ruminantes domésticos e silvestres, causada por um vírus do gênero Orbivirus da família Reoviridae, transmitida por vetores artrópodes do gênero Culicoides. O presente estudo representa o primeiro trabalho a realizar um inquérito sorológico da língua azul em rebanhos ovinos nas Mesorregiões de Campo das Vertentes e Sul e Sudoeste de Minas Gerais. Foram coletadas amostras de soro de ovinos de diferentes propriedades. As amostras de soro foram submetidas aos testes de imunodifusão em gel de ágar (IDGA) e ensaio de imunoadsorção enzimática por competição (cELISA). Ao todo 303 amostras de soro foram submetidas ao IDGA e cELISA. Dessas amostras, 164 (54,13%) foram positivas na técnica de IDGA e 171 (56,44%) positivas na técnica de cELISA, havendo concordância quase perfeita entre as técnicas (índice kappa = 0,887). Em todas as propriedades visitadas, foram encontrados animais positivos no rebanho. Animais adquiridos de propriedades das Mesorregiões estudadas, tiveram mais chances de serem positivos nos testes de IDGA e cELISA do que animais adquiridos de propriedades de outras Regiões do Brasil (p<0,001). Esses resultados sugerem que o vírus da língua azul encontra-se disseminado em ovinos nas Mesorregiões de Campo das Vertentes e Sul e Sudoeste de Minas Gerais.(AU)

Detection of bluetongue virus antibodies in sheep from Paraná, Brazil / Detecção de anticorpos para o vírus da língua azul em ovinos do estado do Paraná, Brasil

Bluetongue (BT) is an infectious and non-contagious disease caused by bluetongue virus (BTV) belonging to the genus Orbivirus. It is transmitted by a hematophagous vector, Culicoides sp., to ruminants, particularly to sheep, which are most susceptible to this disease. The main serological tests are agar gel immunodiffusion (AGID), which is recommended by the World Organization for Animal Health (OIE), and the competitive enzyme-linked immunosorbent assay (cELISA), which has the advantage of no cross-reaction with other orbiviruses. The aim was to compare the results of these two tests by conducting them on sera collected from sheep in the state of Paraná, Brazil. From March to October 2017, serum samples were collected from 270 sheep from 10 farms in six mesoregions of Paraná. The samples were subjected to AGID and cELISA to detect antibodies against BTV. Based on the test results, we classified the sheep as low, moderate, and high occurrence. The results demonstrated that 64.81% (175/270) of the sheep were seropositive through the cELISA test, showing a high occurrence, and 41.11% (111/270) were seropositive through the AGID test, indicating a moderate occurrence. The concordance between the tests was moderate (0.51) as determined by the Kappa coefficient. Among the studied farms, 90% (9/10) presented at least one seropositive sheep, and the number of animals tested positive by the cELISA test was higher than those by the AGID test. Favorable climate, which favors the presence and multiplication of the culicoid vector and the occurrence of infection, was the biggest predominant factor responsible for the obtained results. The low occurrence in farms with milder climate suggest that the presence of antibodies also occurs due to the low pathogenicity of circulating serotypes in the different mesoregions studied. It is concluded that BTV infection is present in the sheep herds in Paraná, and the occurrence...

A língua azul (LA) é uma enfermidade infecciosa e não contagiosa causada por um vírus (VLA) do gênero Orbivirus, transmitida por vetores hematófagos Culicoides sp., aos ruminantes sobretudo aos ovinos, espécie mais susceptível. Os principais testes sorológicos utilizados são a Imunodifusão em Gél de Ágar (IDGA), preconizada pela OIE, e o teste Imunoensaio Enzimático Competitivo (ELISAc), sendo que este tem como vantagem não ocorrer reação cruzada contra outros orbivírus. O objetivo do trabalho foi detectar a presença de anticorpos contra o VLA em ovinos no estado do Paraná através dos testes diagnósticos IDGA e ELISAc. Durante os meses de março a outubro de 2017, colheu-se sangue de 270 ovinos, em 10 propriedades localizadas em seis mesorregiões paranaenses. As amostras foram submetidas aos testes de IDGA e ELISAc para detecção de anticorpos contra o VLA. Baseado nos resultados classificaram-se os rebanhos como baixa, moderada ou elevada ocorrência. Os resultados demonstraram elevada ocorrência através do teste de ELISAc, que apresentou 64,81% (175/270) de ovinos positivos, e moderada ocorrência através do IDGA, com 41,11% (111/270) de ovinos soropositivos. A concordância obtida entre os testes foi moderada (0,51) através do coeficiente Kappa. O número de ovinos reagentes no exame de ELISAc foi maior que o teste de IDGA em todas as propriedades positivas, demonstrando ser superior. O clima propício foi um dos fatores favoráveis para as ocorrências observadas, pois favorece a presença e multiplicação do vetor Culicoide e a ocorrência da infecção. A baixa ocorrência nas propriedades com clima mais ameno sugere que a presença de anticorpos provavelmente ocorra também pela baixa patogenicidade dos sorotipos circulantes nas diferentes mesorregiões estudadas. Conclui-se que há infecção de VLA no rebanho ovino paranaense, e a detecção de anticorpos para o VLA foi moderada, através do teste de IDGA, e elevada, através do teste ELISAc.

Detection of bluetongue virus antibodies in sheep from Paraná, Brazil / Detecção de anticorpos para o vírus da língua azul em ovinos do estado do Paraná, Brasil

Bluetongue (BT) is an infectious and non-contagious disease caused by bluetongue virus (BTV) belonging to the genus Orbivirus. It is transmitted by a hematophagous vector, Culicoides sp., to ruminants, particularly to sheep, which are most susceptible to this disease. The main serological tests are agar gel immunodiffusion (AGID), which is recommended by the World Organization for Animal Health (OIE), and the competitive enzyme-linked immunosorbent assay (cELISA), which has the advantage of no cross-reaction with other orbiviruses. The aim was to compare the results of these two tests by conducting them on sera collected from sheep in the state of Paraná, Brazil. From March to October 2017, serum samples were collected from 270 sheep from 10 farms in six mesoregions of Paraná. The samples were subjected to AGID and cELISA to detect antibodies against BTV. Based on the test results, we classified the sheep as low, moderate, and high occurrence. The results demonstrated that 64.81% (175/270) of the sheep were seropositive through the cELISA test, showing a high occurrence, and 41.11% (111/270) were seropositive through the AGID test, indicating a moderate occurrence. The concordance between the tests was moderate (0.51) as determined by the Kappa coefficient. Among the studied farms, 90% (9/10) presented at least one seropositive sheep, and the number of animals tested positive by the cELISA test was higher than those by the AGID test. Favorable climate, which favors the presence and multiplication of the culicoid vector and the occurrence of infection, was the biggest predominant factor responsible for the obtained results. The low occurrence in farms with milder climate suggest that the presence of antibodies also occurs due to the low pathogenicity of circulating serotypes in the different mesoregions studied. It is concluded that BTV infection is present in the sheep herds in Paraná, and the occurrence...(AU)

A língua azul (LA) é uma enfermidade infecciosa e não contagiosa causada por um vírus (VLA) do gênero Orbivirus, transmitida por vetores hematófagos Culicoides sp., aos ruminantes sobretudo aos ovinos, espécie mais susceptível. Os principais testes sorológicos utilizados são a Imunodifusão em Gél de Ágar (IDGA), preconizada pela OIE, e o teste Imunoensaio Enzimático Competitivo (ELISAc), sendo que este tem como vantagem não ocorrer reação cruzada contra outros orbivírus. O objetivo do trabalho foi detectar a presença de anticorpos contra o VLA em ovinos no estado do Paraná através dos testes diagnósticos IDGA e ELISAc. Durante os meses de março a outubro de 2017, colheu-se sangue de 270 ovinos, em 10 propriedades localizadas em seis mesorregiões paranaenses. As amostras foram submetidas aos testes de IDGA e ELISAc para detecção de anticorpos contra o VLA. Baseado nos resultados classificaram-se os rebanhos como baixa, moderada ou elevada ocorrência. Os resultados demonstraram elevada ocorrência através do teste de ELISAc, que apresentou 64,81% (175/270) de ovinos positivos, e moderada ocorrência através do IDGA, com 41,11% (111/270) de ovinos soropositivos. A concordância obtida entre os testes foi moderada (0,51) através do coeficiente Kappa. O número de ovinos reagentes no exame de ELISAc foi maior que o teste de IDGA em todas as propriedades positivas, demonstrando ser superior. O clima propício foi um dos fatores favoráveis para as ocorrências observadas, pois favorece a presença e multiplicação do vetor Culicoide e a ocorrência da infecção. A baixa ocorrência nas propriedades com clima mais ameno sugere que a presença de anticorpos provavelmente ocorra também pela baixa patogenicidade dos sorotipos circulantes nas diferentes mesorregiões estudadas. Conclui-se que há infecção de VLA no rebanho ovino paranaense, e a detecção de anticorpos para o VLA foi moderada, através do teste de IDGA, e elevada, através do teste ELISAc.(AU)

The antioxidant status and biochemical parameters in kid goats naturally infected with peste des petits ruminants virus

Background: Peste des petits ruminants (PPR) is an acute and highly contagious viral disease of small ruminants. The disease is high economical importance because of the high mortality rate. Oxidative stress is an active field of research in small ruminant medicine and has been implicated in numerous disease processes including sepsis, mastitis, acidosis, enteritis, pneumonia, respiratory, and joint diseases. Compared to human medicine, only a limited number of conditions have been investigated in regard to the effects of oxidative stress in small ruminants. The aim of this study was to determined and compared the oxidative status and some biochemical parameters in kid goats with PPR. Materials, Methods & Results: The study was performed on 15 healthy hair of kid goats (control group) and 15 kids naturally infected with Peste des Petits Ruminants (PPR). Competitive enzyme linked immunosorbent assay (C-ELISA) was used for serological detection of PPRV specific antibodies, and a reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) was performed for the detection of PPR virus. Concentrations of plasma biochemical parameters were analysed by a clinical chemistry analyser, and blood biochemical indices determined, including total protein, albumin, alkaline phosphatase (ALP), aspartate amino transferase (AST), γ- glutamyl transferase (GGT), lactate dehydrogenase (LDH), glucose, very low density lipoprotein (VLDL), low density lipoprotein (LDL), high density lipoprotein (HDL). The plasma CAT activity, plasma GSHPx activity and plasma lipid peroxidation level was measured according to the specific methods. Besides, vitamin C values were colorimetrically determined using a phosphotungustic method acid method and vitamin E values were determined spectrophotometrically method.[...]

The antioxidant status and biochemical parameters in kid goats naturally infected with peste des petits ruminants virus

Background: Peste des petits ruminants (PPR) is an acute and highly contagious viral disease of small ruminants. The disease is high economical importance because of the high mortality rate. Oxidative stress is an active field of research in small ruminant medicine and has been implicated in numerous disease processes including sepsis, mastitis, acidosis, enteritis, pneumonia, respiratory, and joint diseases. Compared to human medicine, only a limited number of conditions have been investigated in regard to the effects of oxidative stress in small ruminants. The aim of this study was to determined and compared the oxidative status and some biochemical parameters in kid goats with PPR. Materials, Methods & Results: The study was performed on 15 healthy hair of kid goats (control group) and 15 kids naturally infected with Peste des Petits Ruminants (PPR). Competitive enzyme linked immunosorbent assay (C-ELISA) was used for serological detection of PPRV specific antibodies, and a reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) was performed for the detection of PPR virus. Concentrations of plasma biochemical parameters were analysed by a clinical chemistry analyser, and blood biochemical indices determined, including total protein, albumin, alkaline phosphatase (ALP), aspartate amino transferase (AST), γ- glutamyl transferase (GGT), lactate dehydrogenase (LDH), glucose, very low density lipoprotein (VLDL), low density lipoprotein (LDL), high density lipoprotein (HDL). The plasma CAT activity, plasma GSHPx activity and plasma lipid peroxidation level was measured according to the specific methods. Besides, vitamin C values were colorimetrically determined using a phosphotungustic method acid method and vitamin E values were determined spectrophotometrically method.[...](AU)

Transmissibilidade de Lentivírus de Pequenos Ruminantes para cabritos e cabras adultas por meio de sêmen infectado experimentalmente

ABSTRACT: Caprine Arthritis Encephalitis is a multisystemic infectious disease, caused by a lentivirus. The objective of this study was to evaluate the transmissibility of caprine lentivirus to goats and their offspring, through experimentally infected semen. Therefore, eleven free-CAEV goats were artificially inseminated using semen from a free-CAEV buck experimentally infected with CAEV-Cork strain (experimental group one). Pregnancy was confirmed in only six goats and their offspring (n=6) constituted the experimental group two. Two free-CAEV females were artificially inseminated with semen from the same seronegative buck, without viral inoculum to constitute the control group. The diagnosis of caprine lentivirus infection was performed using AGID, cELISA and nested-PCR. All females were monitored for 210 days after artificial insemination. Kids were immediately separated from their mothers after birth, and monitored at zero time, 15 days old and monthly until 12 months old. Regarding goat samples, 56.96% (9/159) were positive in cELISA, 24.05% (38/158) were positive in IDGA and none was positive in nested-PCR. Regarding to the offspring samples, 11.28% (15/133) and 5.26% (7/133) were positive in nested-PCR and IDGA, respectively, while no sample was positive in cELISA. The control group showed no positives in the three techniques. The positivity observed to nested-PCR may show its importance to identify infected, but seronegative animals, in late seroconversion situations. According to results, the transmission of caprine lentivirus to offspring and their mothers through infected semen is possible.

RESUMO: A Artrite Encefalite Caprina se caracteriza por ser multissistêmica e infecciosa, causada por um lentivírus. O estudo teve como objetivo avaliar a transmissibilidade do Lentivírus Caprino, para fêmeas e sua prole, por meio de sêmen infectado experimentalmente. Para tanto, onze fêmeas livres de CAEV foram inseminadas artificialmente com sêmen de bode livre de CAEV ao qual foi adicionado CAEV-Cork para obter título infectante com carga viral em 105 TCID50/ml. (grupo experimental 1). Destas, seis obtiverem prenhez confirmada, e a sua prole (n=6) constituiu o grupo experimental 2. Duas cabras livres de CAEV foram inseminadas artificialmente com sêmen do mesmo bode, sem o inócuo viral, constituindo-se o grupo controle. O diagnóstico da infecção pelo Lentivírus Caprino, foi realizado por IDGA, cELISA e nested-PCR. As fêmeas foram monitoradas durante 210 dias pós inseminação artificial. Já as proles foram imediatamente separadas das mães após o nascimento, e monitoradas nos momentos hora zero, aos quinze dias de idade e mensalmente, até doze meses de idade. Em relação às cabras, 56,96%(9/158) apresentaram positividade para cELISA, 24,05% (38/158) foram positivas a IDGA e nenhuma para nested-PCR. Em relação aos cabritos, 11,28% (15/133) amostras positivas para nested-PCR, 5,26% (7/133) amostras positivas para IDGA e nenhum para cELISA. As proles do grupo controle apresentaram resultados negativos para as três técnicas. A positividade encontrada em nested-PCR pode indicar grande importância para identificação de animais infectados, porém soronegativos, em situações de soroconversão tardia. De acordo com os resultados, concluiu-se que há a transmissão do Lentivírus caprino para a prole e para as mães pelo sêmen infectado.

Transmissibilidade de Lentivírus de Pequenos Ruminantes para cabritos e cabras adultas por meio de sêmen infectado experimentalmente / Transmissibility of Small Ruminants Lentivirus in kids by experimentally infected semen

A Artrite Encefalite Caprina se caracteriza por ser multissistêmica e infecciosa, causada por um lentivírus. O estudo teve como objetivo avaliar a transmissibilidade do Lentivírus Caprino, para fêmeas e sua prole, por meio de sêmen infectado experimentalmente. Para tanto, onze fêmeas livres de CAEV foram inseminadas artificialmente com sêmen de bode livre de CAEV ao qual foi adicionado CAEV-Cork para obter título infectante com carga viral em 105 TCID50/ml. (grupo experimental 1). Destas, seis obtiverem prenhez confirmada, e a sua prole (n=6) constituiu o grupo experimental 2. Duas cabras livres de CAEV foram inseminadas artificialmente com sêmen do mesmo bode, sem o inócuo viral, constituindo-se o grupo controle. O diagnóstico da infecção pelo Lentivírus Caprino, foi realizado por IDGA, cELISA e nested-PCR. As fêmeas foram monitoradas durante 210 dias pós inseminação artificial. Já as proles foram imediatamente separadas das mães após o nascimento, e monitoradas nos momentos hora zero, aos quinze dias de idade e mensalmente, até doze meses de idade. Em relação às cabras, 56,96%(9/158) apresentaram positividade para cELISA, 24,05% (38/158) foram positivas a IDGA e nenhuma para nested-PCR. Em relação aos cabritos, 11,28% (15/133) amostras positivas para nested-PCR, 5,26% (7/133) amostras positivas para IDGA e nenhum para cELISA. As proles do grupo controle apresentaram resultados negativos para as três técnicas. A positividade encontrada em nested-PCR pode indicar grande importância para identificação de animais infectados, porém soronegativos, em situações de soroconversão tardia. De acordo com os resultados, concluiu-se que há a transmissão do Lentivírus caprino para a prole e para as mães pelo sêmen infectado.(AU)

Caprine Arthritis Encephalitis is a multisystemic infectious disease, caused by a lentivirus. The objective of this study was to evaluate the transmissibility of caprine lentivirus to goats and their offspring, through experimentally infected semen. Therefore, eleven free-CAEV goats were artificially inseminated using semen from a free-CAEV buck experimentally infected with CAEV-Cork strain (experimental group one). Pregnancy was confirmed in only six goats and their offspring (n=6) constituted the experimental group two. Two free-CAEV females were artificially inseminated with semen from the same seronegative buck, without viral inoculum to constitute the control group. The diagnosis of caprine lentivirus infection was performed using AGID, cELISA and nested-PCR. All females were monitored for 210 days after artificial insemination. Kids were immediately separated from their mothers after birth, and monitored at zero time, 15 days old and monthly until 12 months old. Regarding goat samples, 56.96% (9/159) were positive in cELISA, 24.05% (38/158) were positive in IDGA and none was positive in nested-PCR. Regarding to the offspring samples, 11.28% (15/133) and 5.26% (7/133) were positive in nested-PCR and IDGA, respectively, while no sample was positive in cELISA. The control group showed no positives in the three techniques. The positivity observed to nested-PCR may show its importance to identify infected, but seronegative animals, in late seroconversion situations. According to results, the transmission of caprine lentivirus to offspring and their mothers through infected semen is possible.(AU)

Transmissibilidade de Lentivírus de Pequenos Ruminantes para cabritos e cabras adultas por meio de sêmen infectado experimentalmente / Transmissibility of Small Ruminants Lentivirus in kids by experimentally infected semen

A Artrite Encefalite Caprina se caracteriza por ser multissistêmica e infecciosa, causada por um lentivírus. O estudo teve como objetivo avaliar a transmissibilidade do Lentivírus Caprino, para fêmeas e sua prole, por meio de sêmen infectado experimentalmente. Para tanto, onze fêmeas livres de CAEV foram inseminadas artificialmente com sêmen de bode livre de CAEV ao qual foi adicionado CAEV-Cork para obter título infectante com carga viral em 105 TCID50/ml. (grupo experimental 1). Destas, seis obtiverem prenhez confirmada, e a sua prole (n=6) constituiu o grupo experimental 2. Duas cabras livres de CAEV foram inseminadas artificialmente com sêmen do mesmo bode, sem o inócuo viral, constituindo-se o grupo controle. O diagnóstico da infecção pelo Lentivírus Caprino, foi realizado por IDGA, cELISA e nested-PCR. As fêmeas foram monitoradas durante 210 dias pós inseminação artificial. Já as proles foram imediatamente separadas das mães após o nascimento, e monitoradas nos momentos hora zero, aos quinze dias de idade e mensalmente, até doze meses de idade. Em relação às cabras, 56,96%(9/158) apresentaram positividade para cELISA, 24,05% (38/158) foram positivas a IDGA e nenhuma para nested-PCR. Em relação aos cabritos, 11,28% (15/133) amostras positivas para nested-PCR, 5,26% (7/133) amostras positivas para IDGA e nenhum para cELISA. As proles do grupo controle apresentaram resultados negativos para as três técnicas. A positividade encontrada em nested-PCR pode indicar grande importância para identificação de animais infectados, porém soronegativos, em situações de soroconversão tardia. De acordo com os resultados, concluiu-se que há a transmissão do Lentivírus caprino para a prole e para as mães pelo sêmen infectado.(AU)

Caprine Arthritis Encephalitis is a multisystemic infectious disease, caused by a lentivirus. The objective of this study was to evaluate the transmissibility of caprine lentivirus to goats and their offspring, through experimentally infected semen. Therefore, eleven free-CAEV goats were artificially inseminated using semen from a free-CAEV buck experimentally infected with CAEV-Cork strain (experimental group one). Pregnancy was confirmed in only six goats and their offspring (n=6) constituted the experimental group two. Two free-CAEV females were artificially inseminated with semen from the same seronegative buck, without viral inoculum to constitute the control group. The diagnosis of caprine lentivirus infection was performed using AGID, cELISA and nested-PCR. All females were monitored for 210 days after artificial insemination. Kids were immediately separated from their mothers after birth, and monitored at zero time, 15 days old and monthly until 12 months old. Regarding goat samples, 56.96% (9/159) were positive in cELISA, 24.05% (38/158) were positive in IDGA and none was positive in nested-PCR. Regarding to the offspring samples, 11.28% (15/133) and 5.26% (7/133) were positive in nested-PCR and IDGA, respectively, while no sample was positive in cELISA. The control group showed no positives in the three techniques. The positivity observed to nested-PCR may show its importance to identify infected, but seronegative animals, in late seroconversion situations. According to results, the transmission of caprine lentivirus to offspring and their mothers through infected semen is possible.(AU)

Padronização da quantificação do fator de crescimento semelhante à insulina I (IGF-I) em plasma bovino por ELISA / Standardization of ELISA for the measurement of Insulin-Like Growth Factor I (IGF-I) in bovine plasm

Esse estudo teve como objetivo a padronização de um ensaio imunoenzimático competitivo (cELISA) in house para a determinação das concentrações plasmáticas do fator de crescimento semelhante a insulina I (IGF-I) total para a espécie bovina, utilizando o sistema de amplificação biotina-estreptavidina peroxidase. O IGF-I foi extraído das proteínas ligadoras do fator de crescimento semelhante a insulina I (IGFBP), utilizando o tampão glicina acidificado seguido de neutralização do pH com hidróxido de sódio. As microplacas foram sensibilizadas com anti IgG de coelho, e as dosagens realizadas utilizando duas abordagens, um método com incubação prévia das amostras com o anticorpo anti-h-IGF-I e outro sem incubação prévia (adição simultânea de IGF-I biotilinado e amostra). Os melhores resultados foram obtidos utilizando o método sem incubação prévia, com a sensibilização da placa com 0,25µg/poço de anti-IgG de coelho, o anticorpo específico na diluição 1:250.000 e 0,06ng/poço de IGF-I biotinilado. O ensaio in house apresentou um limite inferior de detecção de 50ng/mL, uma correlação de 0,945 entre doses quando comparado a uma metodologia comercial. Os coeficientes de variação inter-ensaio de 12,94% (345,8ng/mL) para os controles alto e 20,71% (131,6ng/mL) para o baixo. Dessa forma, conclui-se que a metodologia imunoenzimática para quantificação de IGF-I total utilizando o sistema de amplificação biotina-estreptavidina peroxidase em um ensaio competitivo está estabelecida e apresenta-se como uma ferramenta útil para estudos que visem o monitoramento das concentrações de IGF-I.(AU)

This study aimed to standardize an in house competitive enzyme-linked immunosorbent assay (cELISA) to determine plasma concentrations of total insulin-like growth factor I (IGF-I) for the bovine specie using the amplification biotin-streptavidin peroxidase system. The IGF-I was extracted from insulin-like growth factor binding proteins (IGFBPs) using the acidified glycine buffer followed by the pH neutralization with sodium hydroxide. The microplates were coated with anti-rabbit IgG, thereafter the measurements were carried out using two approaches, one with a prior incubation of samples with the anti-h-IGF-I antibody and another without previous incubation (simultaneous addition of IGF-I and biotinylated sample). The best results were obtained using the method without the prior incubation, using the following combination of reagents: microplates were coated with 0.25µg/well of anti-rabbit IgG, the specific antibody at a dilution of 1:250,000 and 0.06ng/well of biotinylated IGF-I. The in house methodology showed sensitivity of 50ng/ml, a correlation between doses of 0.945 when compared to a commercial method. In addition, after 33 assays (quantification of 1114 samples) the proposed methodology presented a good precision, with inter-assay variation coefficients of 12.94% and 20.71% for the high and low controls, respectively. Finally, we concluded that ELISA method for the quantification of total IGF-I using the system biotin-streptavidin-peroxidase amplification in a competitive assay is established and is presented as a useful tool for studies aimed at monitoring the IGF-I concentrations.(AU)

Padronização da quantificação do fator de crescimento semelhante à insulina I (IGF-I) em plasma bovino por ELISA / Standardization of ELISA for the measurement of Insulin-Like Growth Factor I (IGF-I) in bovine plasm

Esse estudo teve como objetivo a padronização de um ensaio imunoenzimático competitivo (cELISA) in house para a determinação das concentrações plasmáticas do fator de crescimento semelhante a insulina I (IGF-I) total para a espécie bovina, utilizando o sistema de amplificação biotina-estreptavidina peroxidase. O IGF-I foi extraído das proteínas ligadoras do fator de crescimento semelhante a insulina I (IGFBP), utilizando o tampão glicina acidificado seguido de neutralização do pH com hidróxido de sódio. As microplacas foram sensibilizadas com anti IgG de coelho, e as dosagens realizadas utilizando duas abordagens, um método com incubação prévia das amostras com o anticorpo anti-h-IGF-I e outro sem incubação prévia (adição simultânea de IGF-I biotilinado e amostra). Os melhores resultados foram obtidos utilizando o método sem incubação prévia, com a sensibilização da placa com 0,25µg/poço de anti-IgG de coelho, o anticorpo específico na diluição 1:250.000 e 0,06ng/poço de IGF-I biotinilado. O ensaio in house apresentou um limite inferior de detecção de 50ng/mL, uma correlação de 0,945 entre doses quando comparado a uma metodologia comercial. Os coeficientes de variação inter-ensaio de 12,94% (345,8ng/mL) para os controles alto e 20,71% (131,6ng/mL) para o baixo. Dessa forma, conclui-se que a metodologia imunoenzimática para quantificação de IGF-I total utilizando o sistema de amplificação biotina-estreptavidina peroxidase em um ensaio competitivo está estabelecida e apresenta-se como uma ferramenta útil para estudos que visem o monitoramento das concentrações de IGF-I.(AU)

This study aimed to standardize an in house competitive enzyme-linked immunosorbent assay (cELISA) to determine plasma concentrations of total insulin-like growth factor I (IGF-I) for the bovine specie using the amplification biotin-streptavidin peroxidase system. The IGF-I was extracted from insulin-like growth factor binding proteins (IGFBPs) using the acidified glycine buffer followed by the pH neutralization with sodium hydroxide. The microplates were coated with anti-rabbit IgG, thereafter the measurements were carried out using two approaches, one with a prior incubation of samples with the anti-h-IGF-I antibody and another without previous incubation (simultaneous addition of IGF-I and biotinylated sample). The best results were obtained using the method without the prior incubation, using the following combination of reagents: microplates were coated with 0.25µg/well of anti-rabbit IgG, the specific antibody at a dilution of 1:250,000 and 0.06ng/well of biotinylated IGF-I. The in house methodology showed sensitivity of 50ng/ml, a correlation between doses of 0.945 when compared to a commercial method. In addition, after 33 assays (quantification of 1114 samples) the proposed methodology presented a good precision, with inter-assay variation coefficients of 12.94% and 20.71% for the high and low controls, respectively. Finally, we concluded that ELISA method for the quantification of total IGF-I using the system biotin-streptavidin-peroxidase amplification in a competitive assay is established and is presented as a useful tool for studies aimed at monitoring the IGF-I concentrations.(AU)

Comparative study of two serological tests for detection of anti-Theileria equi antibodies in horses / Estudo comparativo de dois testes sorológicos para detecção de anticorpos anti-Theileria equi em equinos

Theileria equi is the causative agent of worldwide piroplasmosis, an important tick-borne disease of equids associated to a lifetime carrier state of infected horses. Since rapid, accessible and reliable tests have been posted as a challenge for clinicians, the aim of the present study was to verify the agreement between an in-house immunofluorescence antibody assay (IFA) and a commercial competitive inhibition enzyme-linked immunosorbent assay (cELISA) in a population of 198 carthorses from Southern Brazil. The horse seroreactivity for T. equi revealed 152/198 (76.8%) positive samples by IFA and 155/198 (78.3%) by cELISA. Using cELISA as gold standard, IFA has shown a sensitivity of 91.6% (95% CI = 86.18-95.03%) and specificity of 76.7% (95% CI = 62.26-86.85%), with a substantial degree of agreement (k = 0.8445). In conclusion, the in-house IFA may be used as a screening test for diagnosis of equine piroplasmosis.(AU)

Theileria equi é o agente causador da piroplasmose no mundo, é uma importante doença transmitida por carrapatos nos equídeos em todo o mundo, e está associada ao estado de portador nos equinos infectados. Uma vez que testes rápidos, acessíveis e confiáveis são considerados um desafio para os clínicos, o objetivo do presente estudo foi avaliar a concordância entre os testes de imunofluorescência indireta (RIFI) e um ensaio imunoenzimático por competição comercial (cELISA) em uma população de 198 equinos de tração na região Sul do Brasil. A sororreatividade dos cavalos para T. equi mostrou 152/198 (76.8%) amostras positivas para RIFI e 155/198 (78.3%) amostras positivas para cELISA. Utilizando o cELISA como padrão ouro, a RIFI demonstrou sensibilidade de 91.6% (95% CI = 86.18-95.03%) e especificidade de 76.7% (95% CI = 62.26-86.85%), com uma concordância de grau substancial (k = 0.8445). Em conclusão, a RIFI pode ser utilizada como um teste de triagem para o diagnóstico de piroplasmose equina.(AU)

Comparative study of two serological tests for detection of anti-Theileria equi antibodies in horses / Estudo comparativo de dois testes sorológicos para detecção de anticorpos anti-Theileria equi em equinos

Theileria equi is the causative agent of worldwide piroplasmosis, an important tick-borne disease of equids associated to a lifetime carrier state of infected horses. Since rapid, accessible and reliable tests have been posted as a challenge for clinicians, the aim of the present study was to verify the agreement between an in-house immunofluorescence antibody assay (IFA) and a commercial competitive inhibition enzyme-linked immunosorbent assay (cELISA) in a population of 198 carthorses from Southern Brazil. The horse seroreactivity for T. equi revealed 152/198 (76.8%) positive samples by IFA and 155/198 (78.3%) by cELISA. Using cELISA as gold standard, IFA has shown a sensitivity of 91.6% (95% CI = 86.18-95.03%) and specificity of 76.7% (95% CI = 62.26-86.85%), with a substantial degree of agreement (k = 0.8445). In conclusion, the in-house IFA may be used as a screening test for diagnosis of equine piroplasmosis.

Theileria equi é o agente causador da piroplasmose no mundo, é uma importante doença transmitida por carrapatos nos equídeos em todo o mundo, e está associada ao estado de portador nos equinos infectados. Uma vez que testes rápidos, acessíveis e confiáveis são considerados um desafio para os clínicos, o objetivo do presente estudo foi avaliar a concordância entre os testes de imunofluorescência indireta (RIFI) e um ensaio imunoenzimático por competição comercial (cELISA) em uma população de 198 equinos de tração na região Sul do Brasil. A sororreatividade dos cavalos para T. equi mostrou 152/198 (76.8%) amostras positivas para RIFI e 155/198 (78.3%) amostras positivas para cELISA. Utilizando o cELISA como padrão ouro, a RIFI demonstrou sensibilidade de 91.6% (95% CI = 86.18-95.03%) e especificidade de 76.7% (95% CI = 62.26-86.85%), com uma concordância de grau substancial (k = 0.8445). Em conclusão, a RIFI pode ser utilizada como um teste de triagem para o diagnóstico de piroplasmose equina.

Avaliação comparativa de métodos de ensaio imunoenzimático para theileria equi de amostras de soro equino do estado de São Paulo / Comparative evaluation of methods of immunoenzymatic assay for theileria equi of samples of equine serum of the state of São Paulo

A presente pesquisa teve como objetivo comparar a sensibilidade e especificidade de dois testes diagnósticos, um ELISA indireto e um ELISA competitivo,para Theileria equi,com a finalidade de disponibilizar um teste alternativo para o diagnóstico da babesiose em rebanhos equinos em território nacional. Foram avaliadas 168 amostras de soro equino (suspeitos ou não para babesiose), com idade mínima de um ano, independente de sexo, raça e manejo. Os testes foram realizados segundo especificações de cada fabricante. Os resultados obtidos foram analisados estatisticamente pelo Teste do Qui-quadrado. A concordância entre os testes foi de 97,2% entre os animais soropositivos (105 soropositivos no c-ELISA e 108 soropositivos no ELISA indireto) e 95,2% dos animais soronegativos (63 soronegativos no c-ELISA e 60 soronegativos no ELISA indireto). Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas entre os dois testes. Concluiu-se que o teste ELISA indireto apresentou alta sensibilidade e especificidade (98,1% e 92,1%, respectivamente) para o diagnóstico de Babesiose por Theileria equi.

The present research had as objective to compare thesensitivity and specicvityof the tests of indirectELISA e competitive ELISA for Theileria equi, with purpose to evaluate an alternative test for control of babesiose in equinos flocks in domestic territory. 168 samples of equine serum had been evaluated (suspected or babesiosis does not stop), with minimum age of one year, independent of sex, race and handling. The tests had been carried through according to specifications of each manufacturer, following orientations of each one. The gotten results had been analyzed statistical by the Test of the Qui-quadrado. As result, agreement was observed enters the tests of 97,2% of soropositives animals (105 soropositives in c-ELISA and 108 soropositives in the indirect ELISA) and 95.2% of the soronegatives animals (63 soronegatives in c-ELISA and 60 soronegatives in the indirect ELISA). Statistical significant differences between Indirect and competitive test ELISA for Theileria equi had not been observed. It is concluded that indirect test ELISA showed high sensitivity and specificity (98,1% e 92,1%, respectively) for the diagnosis of Babesiosis by Theileria equi.

Avaliação comparativa de métodos de ensaio imunoenzimático para theileria equi de amostras de soro equino do estado de São Paulo / Comparative evaluation of methods of immunoenzymatic assay for theileria equi of samples of equine serum of the state of São Paulo

A presente pesquisa teve como objetivo comparar a sensibilidade e especificidade de dois testes diagnósticos, um ELISA indireto e um ELISA competitivo,para Theileria equi,com a finalidade de disponibilizar um teste alternativo para o diagnóstico da babesiose em rebanhos equinos em território nacional. Foram avaliadas 168 amostras de soro equino (suspeitos ou não para babesiose), com idade mínima de um ano, independente de sexo, raça e manejo. Os testes foram realizados segundo especificações de cada fabricante. Os resultados obtidos foram analisados estatisticamente pelo Teste do Qui-quadrado. A concordância entre os testes foi de 97,2% entre os animais soropositivos (105 soropositivos no c-ELISA e 108 soropositivos no ELISA indireto) e 95,2% dos animais soronegativos (63 soronegativos no c-ELISA e 60 soronegativos no ELISA indireto). Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas entre os dois testes. Concluiu-se que o teste ELISA indireto apresentou alta sensibilidade e especificidade (98,1% e 92,1%, respectivamente) para o diagnóstico de Babesiose por Theileria equi.(AU)

The present research had as objective to compare thesensitivity and specicvityof the tests of indirectELISA e competitive ELISA for Theileria equi, with purpose to evaluate an alternative test for control of babesiose in equinos flocks in domestic territory. 168 samples of equine serum had been evaluated (suspected or babesiosis does not stop), with minimum age of one year, independent of sex, race and handling. The tests had been carried through according to specifications of each manufacturer, following orientations of each one. The gotten results had been analyzed statistical by the Test of the Qui-quadrado. As result, agreement was observed enters the tests of 97,2% of soropositives animals (105 soropositives in c-ELISA and 108 soropositives in the indirect ELISA) and 95.2% of the soronegatives animals (63 soronegatives in c-ELISA and 60 soronegatives in the indirect ELISA). Statistical significant differences between Indirect and competitive test ELISA for Theileria equi had not been observed. It is concluded that indirect test ELISA showed high sensitivity and specificity (98,1% e 92,1%, respectively) for the diagnosis of Babesiosis by Theileria equi.(AU)

Brucella spp. em mamíferos aquáticos no Brasil: investigação sorológica, molecular, histopatológica e imunohistoquímica

Os mamíferos aquáticos são sentinelas de patógenos zoonoticos, os quais podem representar uma ameaça a sua conservação, aos humanos e aos animais domésticos. O género Brucella é responsável pela brucelose, uma das zoonoses mais comuns. Nos mamíferos aquáticos Brucella spp. foi descrita pela primeira vez em 1994 e atualmente duas espécies são reconhecidas nesse grupo: B. ceti e B. pinnipedialis. Nos cetáceos, Brucella spp. tem sido associada a infecção assintomática, doença aguda ou crônica e diversos processos patológicos que podem levar ao encalhe e/ou morte. Nos pinípedes, a patogenicidade de Brucella spp. ainda não é clara. Dados sobre Brucella spp. em mamíferos aquáticos no Oceano Atlântico Sul, particularmente no Brasil, são limitados com uma significativa lacuna de conhecimento mesmo com a rica diversidade. Nesta pesquisa, investigouse exposição a e/ou infecção por Brucella spp. com métodos sorológicos, moleculares, histopatológicos, imunohistoquimicos e microbiológicos em amostras de mamíferos aquáticos do Brasil armazenadas no banco de tecidos de mamíferos marinhos, Departamento de Patologia, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo. Soro de 63 cetáceos [famílias Iniidae (n=37), Delphinidae e Kogiidae (n=26)], 35 pinipedes (Elefante-marinho-do-sul, Mirounga leonina) e 21 peixe-bois marinhos (Trichechus manatus) foi testado pelo Rosa de Bengala, um kit comercial de ensaio imunossorvente ligado a enzima de competição (c-ELISA) e a prova de soroaglutinação lenta em tubo (SAT; c-ELISA positivos selecionados) para detecção de anticorpos anti-Brucella spp. Em adição, DNA de amostras selecionadas de 124 cetáceos, 4 pinípedes e 1 peixe-boi marinho foram analisadas pelo PCR convencional e/ou em tempo real (qPCR) tendo como alvo o gênero Brucella spp. Realizou-se cultivo, histopatologia e imunohistoquimica (IHQ) nas amostras dos indivíduos expostos ou infectados (positivos na sorologia e/ou PCR convencional/qPCR; n=13). Anticorpos anti-Brucella spp. foram detectados em 3/35 (8.6%) dos M. leonina testados enquanto cetáceos das famílias Iniidae e Kogiidae e os peixe-bois foram negativos. DNA de Brucella spp. foi detectado em 4/124 (3.2%) dos cetáceos analisados por PCR convencional/qPCR: um golfinhoclimene (Stenella clymene) com brucelose aguda, positivo pela sorologia e IHQ; e três indivíduos adicionais sem soro disponível: uma Franciscana (Pontoporia blainvillei), assintomática, positiva pela qPCR e IHQ; um caso de brucelose crônica em um golfinho-rotador (Stenella longirostris), apresentando osteoartrite fibrinosupurativa atlantoccipital com formação de abcesso, positivo pela qPCR e IHQ; um boto-cinza (Sotalia guianensis), positivo pela PCR convencional/qPCR e IHQ e previamente diagnosticado com morbillivirus dos cetáceos. Apesar da PCR negativa, lesões compatíveis com brucelose foram encontradas em um S. clymene e uma orca-pigmeia (Feresa attenuata), ambos positivos pela sorologia e IHQ. Exposição e/ou infecção por Brucella spp. foi confirmada pela sorologia e/ou IHQ positiva em três baleia-piloto-de-aleta-curta (Globicephala macrorhynchus), dois golfinhos cabeça de melão (Peponocephala electra), um golfinho nariz de garrafa (Tursiops truncatus) e um S. clymene. A maior parte dos cetáceos expostos a/ou infectados por Brucella spp. foram provenientes do estado de Ceará, nordeste do Brasil. A cultura não foi bem-sucedida, prejudicando a classificação das cepas envolvidas. Todos os pinípedes e peixe-bois testados foram negativos na PCR. Triagem oportunistico para avaliar exposição a Leptospira spp. por meio do teste de aglutinação microscópica nos soros testados para Brucella spp. foi negativo. Em conclusão, confirmou-se exposição a Brucella spp., infecção assintomática, brucelose aguda e crônica e coinfecção por Brucella spp. e outros agentes patogênicos. Dentro de nosso conhecimento, esta pesquisa constitui o primeiro trabalho de longo prazo sobre Brucella spp. em mamíferos aquáticos na América do Sul, ampliando a sua faixa de hospedeiros e localização geográfica e contribuindo na compreensão dos aspectos patológicos e epidemiológicos de sua infecção. Pesquisas adicionais são necessárias para caracterizar as cepas envolvidas, avaliar a sua relevância na saúde publica, bem como sua possível ocorrência e impactos em outras espécies de mamíferos aquáticos no Brasil

Aquatic mammals are sentinels of zoonotic pathogens that may be a threat to species conservation, to humans and domestic animals. Brucella genus is responsible for brucellosis, one of the main widespread zoonosis. In aquatic mammals, Brucella spp. was firstly described in 1994 and currently there are two recognized species infecting that group: B. ceti and B. pinnipedialis. In cetaceans, Brucella spp. has been linked to asymptomatic infection, acute or chronic disease and several pathological processes which may lead to stranding and/or death. In pinnipeds, pathogenicity of Brucella spp. is still unclear. Data about Brucella spp. in aquatic mammals in South Atlantic Ocean particularly in Brazil is limited, with a significant knowledge gap despite the rich diversity of this group. In this research, we investigated exposure to and/or infection by Brucella spp. by serological, molecular, histopathological, immunohistochemical and microbiological methods in samples of aquatic mammals of Brazil kept at the Marine Mammal Tissue Bank, Department of Pathology, School of Veterinary Medicine and Animal Sciences, University of São Paulo, Brazil. Sera from 63 cetaceans [families Iniidae (n=37), Delphinidae and Kogiidae (n=26)], 35 pinnipeds (Southern elephant Seals, Mirounga leonina), and 21 West Indian manatees (Trichechus manatus) were tested via the Rose Bengal Test, a commercial competitive enzyme-linked immunosorbent assay (c-ELISA) and the serum agglutination test (SAT; selected c-ELISA positives) to detect Brucella spp. antibodies. In addition, DNA from selected samples of 124 cetaceans, 4 pinnipeds and 1 manatee were analyzed by conventional PCR and/or real-time PCR (qPCR) targeting the genus Brucella spp. Culture, histopathology and immunohistochemistry (IHC) were performed in samples from exposed or infected individuals (serology and/or conventional PCR/qPCR positives; n=13). Antibodies against Brucella spp. were detected in 3/35 (8.6%) of the M. leonina tested while Iniidae and Kogiidae cetaceans and manatees were negative. Brucella spp. DNA was detected in 4/124 (3.2%) of the cetaceans tested by conventional PCR/qPCR: one Clymene dolphin (Stenella clymene) with acute brucellosis, positive by serology and IHC; and three other individuals without available sera: one asymptomatic Franciscana (Pontoporia blainvillei), positive by qPCR and IHC; one case of chronic brucellosis in a Spinner dolphin (Stenella longirostris) presenting fibrinosuppurative atlanto-occipital osteoarthritis with abscess formation, positive by qPCR and by IHC; one Guiana dolphin (Sotalia guianensis), positive by conventional PCR/qPCR and by IHC and previously diagnosed with cetacean morbillivirus. Despite negative PCR amplification, Brucella-type lesions were found in one S. clymene and one pigmy killer whale (Feresa attenuata), both positive by serology and by IHC. Positive serology and/or IHC suggested exposure and/or Brucella-infection in three shortfinned pilot whale (Globicephala macrorhynchus), two melon-headed whale (Peponocephala electra), a bottlenose dolphin (Tursiops truncatus) and a S. clymene. Main part of the Brucella spp. exposed or infected cetaceans came from State of Ceará, Northeastern Brazil. Culture was not successful, hampering strains classification. All the pinnipeds and the manatees tested by PCR were negative. Opportunistic screening of Leptospira spp. exposure via the microscopic agglutination test on all sera samples used for the Brucella spp. screening gave negative results. In conclusion, we found Brucella spp. exposure, asymptomatic infection, as well as cases of acute and chronic brucellosis and coinfection by Brucella spp. and other pathogens. To our knowledge, this research is the first longterm survey of Brucella spp. in aquatic mammals in South America, widening the hosts and the geographic range of this agent and contributing to the understanding of pathological and epidemiological aspects of its infection. Further research is needed to fully characterize the strains involved, evaluate their public health relevance and the possible occurrence and impacts in other species of aquatic mammals in Brazil.