Campylobacter spp. em animais silvestres / Campylobacter spp. in wild animals

Campylobacter sp. são patógenos multi-hospedeiros zoonóticos disseminados, que frequentemente causam gastroenterite em humanos. As aves são reservatórios de Campylobacter sp., que também ocorre naturalmente em mamíferos e já foi isolado de águas superficiais e subterrâneas. As espécies de Campylobacter colonizam prontamente o trato gastrointestinal de animais domésticos, silvestres e selvagens e, embora raramente causem doença clínica em animais de produção, podem produzir gastroenterite aguda grave em humanos. Assim, o objetivo desta revisão de literatura narrativa foi fazer um levantamento bibliográfico sobre o isolamento desse micro-organismo em animais silvestres. C. jejuni tem sido isolado de primatas não humanos cativos e livres acometidos por diarreia e saudáveis; e também de elefantes, gaivotas, abutres e outras aves silvestres. Gansos selvagens e aves silvestres são uma fonte potencial de infecção por Campylobacter sp. para humanos e outros animais, e, como os gansos são animais migratórios, eles são capazes de transferir patógenos por grandes distâncias. Cepas potencialmente virulentas dessa bactéria são eliminadas pelas fezes dos corvos. Estes animais são particularmente relevantes para a disseminação potencial de patógenos por causa de seu movimento entre áreas urbanas e agrícolas habitadas por humanos. Animais silvestres sadios, de diferentes espécies, podem albergar Campylobacter sp., agindo como veiculadores do patógeno.

Campylobacter sp. is a widespread zoonotic multi-host pathogen that often causes gastroenteritis in humans. The birds are reservoirs of Campylobacter sp., which also occurs naturally in mammals and has already been isolated from surface and groundwater. Campylobacter sp. species readily colonize the gastrointestinal tract of domestic and wild animals, and although they rarely cause clinical disease in production animals, they can produce severe acute gastroenteritis in humans. This narrative literature review aimed to carry out a bibliographic survey on the isolation of this microorganism in wild animals. C. jejuni has been isolated from captive and diarrhea-free and healthy non-human primates, as well as from elephants, seagulls, vultures, and other wild birds. Wild geese and wild birds are a potential sources of Campylobacter sp. infection to in humans and other animals, and as geese are migratory animals, they can transfer pathogens over long distances. Potentially virulent strains of these bacteria are eliminated by the feces of crows. These animals are particularly relevant to the potential spread of pathogens because of their movement between urban and agricultural areas inhabited by humans. Healthy wild animals of different species may harbor Campylobacter, acting as agent carriers.

Inhibitory effect of different probiotic formulations on salmonella heidelberg, avian pathogenic escherichia coli and campylobacter jejuni / Inhibitory effect of different probiotic formulations on salmonella heidelberg, avian pathogenic escherichia coli and campylobacter jejuni

A wide variety of microorganism species have been used as probiotics to improve the intestinal microbial balance, control and prevent the colonization of pathogenic bacteria and promote growth in animal production. Based on the various beneficial factors of probiotic agents, this study aimed to evaluate the effectiveness of three different formulations of probiotics strains through the analysis of antagonistic capacity against common pathogens from chickens gastrointestinal tract. Three formulations composed by Bacillus, Lactobacillus, Saccharomyces, Enterococcus, Bifidobacterium and Pediococcus were tested in vitro by the method of probiotic culture spot in plates seeded with inocula of Escherichia coli, Salmonella heidelberg and Campylobacter jejuni. The inhibition halos were measured and classified according to the degree of pathogenic bacteria inhibition. The formulation containing an association among Bacillus, Lactobacillus and Saccharomyces presented better results when compared to the other formulations.

Uma enorme variedade de espécies de microrganismos tem sido usada como probiótico visando melhorar o equilíbrio microbiano intestinal, controlar e prevenir a colonização de bactérias patogênicas e promover o crescimento na produção animal. Baseado nos diversos fatores benéficos dos agentes de ação probiótica no organismo, objetivou-se avaliar a eficácia das linhagens de três formulações diferentes de probióticos pela análise de capacidade inibitória contra patógenos comuns do trato gastrointestinal de frangos. Três formulações compostas por microrganismos dos gêneros Bacillus, Lactobacillus, Saccharomyces, Enterococcus, Bifidobacterium e Pediococcus foram testadas in vitro pelo método de spot de cultura probiótica em placas para inibição de Escherichia coli, Salmonella Heidelberg e Campylobacter jejuni. Os halos de inibição foram medidos e classificados de acordo com o grau de inibição das bactérias patogenicas. A formulação contendo a associação entre Bacillus, Lactobacillus e Saccharomyces apresentou melhores resultados quando comparado as demais formulações.

Inhibitory effect of different probiotic formulations on Salmonella Heidelberg, avian pathogenic Escherichia coli and Campylobacter jejuni

A wide variety of microorganism species have been used as probiotics to improve the intestinal microbial balance, control and prevent the colonization of pathogenic bacteria and promote growth in animal production. Based on the various beneficial factors of probiotic agents, this study aimed to evaluate the effectiveness of three different formulations of probiotics strains through the analysis of antagonistic capacity against common pathogens from chickens gastrointestinal tract. Three formulations composed by Bacillus, Lactobacillus, Saccharomyces, Enterococcus, Bifidobacterium and Pediococcus were tested in vitro by the method of probiotic culture spot in plates seeded with inocula of Escherichia coli, Salmonella Heidelberg and Campylobacter jejuni. The inhibition halos were measured and classified according to the degree of pathogenic bacteria inhibition. The formulation containing an association among Bacillus, Lactobacillus and Saccharomyces presented better results when compared to the other formulations.

Lactic Bacterium and Bacillus Sp. Biofilms Can Decrease the Viability of Salmonella Gallinarum, Salmonella Heidelberg, Campylobacter Jejuni and Methicillin Resistant Staphylococcus Aureus on Different Substrates

ABSTRACT This study aimed to evaluate the efficacy of biofilms formed by lactic acid bacteria and Bacillus sp. (BLA) in preventing and controlling the formation of wild biofilms and/or planktonic forms of Salmonella Gallinarum (SG), Salmonella Heidelberg (SH), and methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) on different surfaces. The SH and SG viability was evaluated in polystyrene plates, wood shavings, and soil samples. Two protocols were developed to examine the use of BLA in a preventive and control application. For analysis of Campylobacter jejuni (CJ) BLA was used only preventively in a polystyrene plate. Results showed that BLA was effective in preventing the growth of SG and SH in all matrices. The effectiveness of BLA for MRSA was lower than for SG and SH. The efficiency of BLA in preventing CJ growth seems to be related to the initial CJ contamination. BLA proves to be a potential alternative to control food-borne pathogens commonly encountered in animal production and food industry.

Antimicrobial Resistance in Campylobacter jejuni Isolated from Brazilian Poultry Slaughterhouses

Campylobacteriosis is one of the most common foodborne diseases in the world. It is considered the most frequently reported foodborne illness in the European Union (EU) and one of the most important in the United States (US) (EFSA & ECDC, 2018; CDC, 2019a; WHO, 2019). Poultry is known to be the major reservoir and an important source for pathogen transmission to humans (Kaakoush et al., 2015). Campylobacteriosis is most often associated with the consumption of raw and undercooked poultry or the cross-contamination of other foods by these items (CDC, 2019a). Although Brazil is a leading supplier of the worlds poultry meat (ABPA, 2018), Brazils official data does not report Campylobacter infections.(AU)

Antimicrobial Resistance in Campylobacter jejuni Isolated from Brazilian Poultry Slaughterhouses

Campylobacteriosis is one of the most common foodborne diseases in the world. It is considered the most frequently reported foodborne illness in the European Union (EU) and one of the most important in the United States (US) (EFSA & ECDC, 2018; CDC, 2019a; WHO, 2019). Poultry is known to be the major reservoir and an important source for pathogen transmission to humans (Kaakoush et al., 2015). Campylobacteriosis is most often associated with the consumption of raw and undercooked poultry or the cross-contamination of other foods by these items (CDC, 2019a). Although Brazil is a leading supplier of the world’s poultry meat (ABPA, 2018), Brazil’s official data does not report Campylobacter infections.

Phenotypic and molecular characterization of erythromycin resistance in Campylobacter jejuni and Campylobacter coli strains isolated from swine and broiler chickens / Caracterização fenotípica e molecular da resistência à eritromicina em cepas de Campylobacter jejuni e Campylobacter coli isoladas de suínos e frangos de corte

Campylobacter spp. is a bacterial agent that causes gastroenteritis in humans and may trigger Guillain-Barré Syndrome (GBS) and is also considered one of the main foodborne diseases in developed countries. Poultry and pigs are considered reservoirs of these microorganisms, as well as raw or undercooked by-products are often incriminated as a source of human infection. Treatment in human cases is with macrolide, such erythromycin, that inhibits the protein synthesis of the microorganism. This study aimed to isolate Campylobacter jejuni and Campylobacter coli from intestinal content samples of broiler chickens (n=20) and swine (n=30) to characterize the erythromycin resistance profile of the strains and to detect molecular mechanisms involved in this resistance. The minimum inhibitory concentration was determined by agar dilution. The Mismatch Amplification Mutation Assay-Polymerase Chain Reaction (MAMA-PCR) was performed to detect mutations at positions 2074 and 2075 of 23S rRNA region, in addition to PCR test to detect the erm(B) gene. From the intestinal content of broiler chickens, 18 strains of C. jejuni and two strains of C. coli were isolated, whereas, from swine samples, no C. jejuni strain and 14 strains of C. coli were isolated. All C. coli strains were resistant, and three C. jejuni strains from broilers chickens were characterized with intermediate resistance to erythromycin. The MIC of the strains ranged from ≤0.5mg/μL to ≥128mg/μL. All resistant strains had the A2075G mutation, and one strain with intermediate resistance had the A2075G mutation. However, the A2074C mutation and the erm(B) gene were not detected. High resistance levels were detected in C. coli strains isolated from swine. The MAMA-PCR is a practical tool for detecting the erythromycin resistance in Campylobacter strains.(AU)

Campylobacter spp. é um agente bacteriano causador de gastroenterite em humanos e associado à síndrome de Guillain-Barré, sendo a campilobacteriose considerada uma das principais enfermidades de origem alimentar. Aves e suínos são importantes reservatórios desses microrganismos e seus produtos derivados crus ou mal cozidos são muitas vezes incriminados como fonte de infecção humana. A primeira escolha para o tratamento em casos humanos são os antimicrobianos da classe dos macrolídeos como à eritromicina. Dentro desse contexto, o objetivo deste estudo foi isolar Campylobacter jejuni e C. coli a partir de 20 amostras de conteúdo intestinal de frangos de corte e de 30 de suínos ao abate e investigar a resistência à eritromicina das estirpes obtidas e os possíveis mecanismos moleculares envolvidos nesta resistência. A concentração inibitória mínima foi determinada pela diluição em ágar e a técnica MAMA-PCR foi utilizada para detecção de mutações nas posições 2074 e 2075 da região 23s rRNA, foi pesquisado também a presença do gene erm(B) pela PCR. A partir do conteúdo intestinal de frangos de corte foram isoladas 18 estirpes de C. jejuni e duas de C. coli, enquanto de suínos foram obtidas 14 estirpes de C. coli e nenhuma estirpe de C. jejuni. Todas as estirpes de C. coli de suínos foram identificadas como resistentes e três estirpes de C. jejuni de frangos foram caracterizadas com resistência intermediária. A CIM das estirpes variou de ≤0,5mg/μL a ≥128mg/μL. Todas as estirpes resistentes tinham a mutação A2075G e uma cepa com resistência intermediária também apresentou a mutação A2075G. Não foi detectada a mutação A2074C ou a presença do gene erm(B) em nenhuma das estirpes obtidas. Os resultados revelam um alto nível de resistência em estirpes de C. coli isoladas de suínos frente a eritromicina. A técnica MAMA PCR utilizada se constitui em uma ferramenta prática para detecção da resistência à eritromicina em estirpes de C. jejuni e C. coli.(AU)

Phenotypic and molecular characterization of erythromycin resistance in Campylobacter jejuni and Campylobacter coli strains isolated from swine and broiler chickens / Caracterização fenotípica e molecular da resistência à eritromicina em cepas de Campylobacter jejuni e Campylobacter coli isoladas de suínos e frangos de corte

Campylobacter spp. is a bacterial agent that causes gastroenteritis in humans and may trigger Guillain-Barré Syndrome (GBS) and is also considered one of the main foodborne diseases in developed countries. Poultry and pigs are considered reservoirs of these microorganisms, as well as raw or undercooked by-products are often incriminated as a source of human infection. Treatment in human cases is with macrolide, such erythromycin, that inhibits the protein synthesis of the microorganism. This study aimed to isolate Campylobacter jejuni and Campylobacter coli from intestinal content samples of broiler chickens (n=20) and swine (n=30) to characterize the erythromycin resistance profile of the strains and to detect molecular mechanisms involved in this resistance. The minimum inhibitory concentration was determined by agar dilution. The Mismatch Amplification Mutation Assay-Polymerase Chain Reaction (MAMA-PCR) was performed to detect mutations at positions 2074 and 2075 of 23S rRNA region, in addition to PCR test to detect the erm(B) gene. From the intestinal content of broiler chickens, 18 strains of C. jejuni and two strains of C. coli were isolated, whereas, from swine samples, no C. jejuni strain and 14 strains of C. coli were isolated. All C. coli strains were resistant, and three C. jejuni strains from broilers chickens were characterized with intermediate resistance to erythromycin. The MIC of the strains ranged from ≤0.5mg/μL to ≥128mg/μL. All resistant strains had the A2075G mutation, and one strain with intermediate resistance had the A2075G mutation. However, the A2074C mutation and the erm(B) gene were not detected. High resistance levels were detected in C. coli strains isolated from swine. The MAMA-PCR is a practical tool for detecting the erythromycin resistance in Campylobacter strains.(AU)

Campylobacter spp. é um agente bacteriano causador de gastroenterite em humanos e associado à síndrome de Guillain-Barré, sendo a campilobacteriose considerada uma das principais enfermidades de origem alimentar. Aves e suínos são importantes reservatórios desses microrganismos e seus produtos derivados crus ou mal cozidos são muitas vezes incriminados como fonte de infecção humana. A primeira escolha para o tratamento em casos humanos são os antimicrobianos da classe dos macrolídeos como à eritromicina. Dentro desse contexto, o objetivo deste estudo foi isolar Campylobacter jejuni e C. coli a partir de 20 amostras de conteúdo intestinal de frangos de corte e de 30 de suínos ao abate e investigar a resistência à eritromicina das estirpes obtidas e os possíveis mecanismos moleculares envolvidos nesta resistência. A concentração inibitória mínima foi determinada pela diluição em ágar e a técnica MAMA-PCR foi utilizada para detecção de mutações nas posições 2074 e 2075 da região 23s rRNA, foi pesquisado também a presença do gene erm(B) pela PCR. A partir do conteúdo intestinal de frangos de corte foram isoladas 18 estirpes de C. jejuni e duas de C. coli, enquanto de suínos foram obtidas 14 estirpes de C. coli e nenhuma estirpe de C. jejuni. Todas as estirpes de C. coli de suínos foram identificadas como resistentes e três estirpes de C. jejuni de frangos foram caracterizadas com resistência intermediária. A CIM das estirpes variou de ≤0,5mg/μL a ≥128mg/μL. Todas as estirpes resistentes tinham a mutação A2075G e uma cepa com resistência intermediária também apresentou a mutação A2075G. Não foi detectada a mutação A2074C ou a presença do gene erm(B) em nenhuma das estirpes obtidas. Os resultados revelam um alto nível de resistência em estirpes de C. coli isoladas de suínos frente a eritromicina. A técnica MAMA PCR utilizada se constitui em uma ferramenta prática para detecção da resistência à eritromicina em estirpes de C. jejuni e C. coli.(AU)

Maintenance of strains of Campylobacter jejuni in laboratories after use of cryoprotectors and pre-treatment of stress / Manutenção de cepas de Campylobacter jejuni em laboratório após uso de crioprotetores e pré-tratamento de estresse

This study evaluated the feasibility and the production of transcripts of sodB, p19, ciaB and dnaJ genes in strains of Campylobacter jejuni ATCC 33291, NCTC 11351, and 2383 IAL stored in whole UHT milk and or neopepton + 12% glycerol, submitted or not to pre-treatments at 4°C or 10°C for 30 minutes. The analyzes were performed immediately after freezing in liquid nitrogen (day 0) and after maintenance for 30, 60, and 90 days at -20ºC. The viability was evaluated by the traditional culture method and the production of transcripts by the RT-PCR technique. The quantification was only possible on the first day of analysis (day 0) and presented a mean of 3.0 x 107 CFU, and in the other periods of storage the strains presented confluent growth, not allowing their enumeration. The results indicated that whole UHT milk was more adequate for cryopreservation than the use of neopepton + 12% glycerol. The use of pre-treatments combined with the use of UHT milk as a cryoprotective medium stabilized the cells in order to transcribe the ciaB, dnaJ, sodBand p19 genes in the strains maintained under -20 ° for 30 to 60 days, indicating that they are more suitable methods for the maintenance of strains in the laboratory.

Este estudo avaliou a viabilidade e a produção de transcritos dos genes sodB, p19, ciaB e dnaJ em cepas de Campylobacter jejuni ATCC 33291, NCTC 11351 e 2383 IAL armazenadas em leite integral UHT e / ou neopeptona + 12% glicerol, submetidas ou não a pré-tratamentos a 4°C ou 10°C durante 30 minutos. As análises foram realizadas imediatamente após o congelamento em nitrogênio líquido (dia 0) e após a manutenção por 30, 60 e 90 dias à -20ºC. A viabilidade foi avaliada pelo método tradicional de cultura e a produção de transcritos, pela técnica de RT-PCR. A quantificação só foi possível no primeiro dia de análise (dia 0) e apresentou uma média de 3,0 x 107 UFC, e nos demais períodos de armazenamento as cepas apresentaram crescimento confluente, não permitindo sua enumeração. Os resultados indicaram que o leite integral UHT foi mais adequado para criopreservação em relação ao uso de neopeptona + 12% glicerol. A utilização de pré-tratamentos combinados com o uso de leite UHT como meio crioprotetor estabilizou as células para transcrever os genes ciaB, dnaJ, sodB e p19 nas cepas mantidas abaixo de -20° por 30 a 60 dias, indicando que são métodos mais adequados para a manutenção de cepas em laboratório.

Maintenance of strains of Campylobacter jejuni in laboratories after use of cryoprotectors and pre-treatment of stress / Manutenção de cepas de Campylobacter jejuni em laboratório após uso de crioprotetores e pré-tratamento de estresse

This study evaluated the feasibility and the production of transcripts of sodB, p19, ciaB and dnaJ genes in strains of Campylobacter jejuni ATCC 33291, NCTC 11351, and 2383 IAL stored in whole UHT milk and or neopepton + 12% glycerol, submitted or not to pre-treatments at 4°C or 10°C for 30 minutes. The analyzes were performed immediately after freezing in liquid nitrogen (day 0) and after maintenance for 30, 60, and 90 days at -20ºC. The viability was evaluated by the traditional culture method and the production of transcripts by the RT-PCR technique. The quantification was only possible on the first day of analysis (day 0) and presented a mean of 3.0 x 107 CFU, and in the other periods of storage the strains presented confluent growth, not allowing their enumeration. The results indicated that whole UHT milk was more adequate for cryopreservation than the use of neopepton + 12% glycerol. The use of pre-treatments combined with the use of UHT milk as a cryoprotective medium stabilized the cells in order to transcribe the ciaB, dnaJ, sodBand p19 genes in the strains maintained under -20 ° for 30 to 60 days, indicating that they are more suitable methods for the maintenance of strains in the laboratory.(AU)

Este estudo avaliou a viabilidade e a produção de transcritos dos genes sodB, p19, ciaB e dnaJ em cepas de Campylobacter jejuni ATCC 33291, NCTC 11351 e 2383 IAL armazenadas em leite integral UHT e / ou neopeptona + 12% glicerol, submetidas ou não a pré-tratamentos a 4°C ou 10°C durante 30 minutos. As análises foram realizadas imediatamente após o congelamento em nitrogênio líquido (dia 0) e após a manutenção por 30, 60 e 90 dias à -20ºC. A viabilidade foi avaliada pelo método tradicional de cultura e a produção de transcritos, pela técnica de RT-PCR. A quantificação só foi possível no primeiro dia de análise (dia 0) e apresentou uma média de 3,0 x 107 UFC, e nos demais períodos de armazenamento as cepas apresentaram crescimento confluente, não permitindo sua enumeração. Os resultados indicaram que o leite integral UHT foi mais adequado para criopreservação em relação ao uso de neopeptona + 12% glicerol. A utilização de pré-tratamentos combinados com o uso de leite UHT como meio crioprotetor estabilizou as células para transcrever os genes ciaB, dnaJ, sodB e p19 nas cepas mantidas abaixo de -20° por 30 a 60 dias, indicando que são métodos mais adequados para a manutenção de cepas em laboratório.(AU)

Detecção de Campylobacter jejuni em produtos de frango utilizando separação imunomagnética / Detection of Campylobacter jejuni in chicken products using immunomagnetic separation

Campylobacter jejuni é o principal causador de gastroenterite bacteriana aguda, e a carne de frango tem se mostrado uma importante fonte de transmissão. Este microrganismo é de difícil isolamento e os métodos convencionais muitas vezes não são eficientes, podendo levar a resultados errôneos. O objetivo deste trabalho foi desenvolver e testar a técnica de separação imunomagnética (IMS) na detecção de C. jejuni em produtos de frango. Micropartículas magnéticas ligadas a anticorpos policlonais anti-C. jejuni foram utilizadas para concentrar C. jejuni antes da semeadura em ágar. O protocolo foi comparado com o método convencional. C. jejuni foi recuperado do alimento experimentalmente contaminado por ambos os métodos, entretanto, quando foi usada a IMS, a presença de microrganismos contaminantes nos meios de cultura foi menor. C. jejuni foi isolado de 7% das amostras de alimento naturalmente contaminadas, usando IMS, e de 3% pelo método convencional. C. coli foi isolado de uma amostra pelo método convencional, mas não foi detectado pelo protocolo com IMS. A técnica de IMS pode ser usada para isolamento de C. jejuni de alimentos, oferecendo a vantagem de detectar em amostras o microrganismo cujo isolamento não é obtido por meio do método convencional.(AU)

Campylobacter jejuni is the main cause of acute bacterial gastroenteritis and chicken meat has shown to be an important source of infection. This microorganism is difficult to isolate and the conventional methods are often inefficient and may lead to erroneous results. This study aimed at developing and testing the technique of immunomagnetic separation (IMS) in the detection of C. jejuni in chicken products. Microparticles magnetically connected anti-C. jejuni polyclonal antibodies were used to concentrate C. jejuni before agar seeding. The protocol was compared with the conventional method. C. jejuni was recovered from experimentally contaminated food for both methods, however, when the IMS was used, the presence of contaminating microorganisms in the means of culture was smaller. C. jejuni was isolated from 7% of samples of food naturally contaminated, using IMS, and 3% by conventional method. C. coli was isolated from a sample by conventional method, but it was not detected by protocol with IMS. The IMS technique can be used for isolation of C. jejuni in food, offering the advantage of detecting the microorganism in samples from which the isolation is not obtained with the use of the conventional method.(AU)

Detecção de Campylobacter jejuni em produtos de frango utilizando separação imunomagnética / Detection of Campylobacter jejuni in chicken products using immunomagnetic separation

Campylobacter jejuni é o principal causador de gastroenterite bacteriana aguda, e a carne de frango tem se mostrado uma importante fonte de transmissão. Este microrganismo é de difícil isolamento e os métodos convencionais muitas vezes não são eficientes, podendo levar a resultados errôneos. O objetivo deste trabalho foi desenvolver e testar a técnica de separação imunomagnética (IMS) na detecção de C. jejuni em produtos de frango. Micropartículas magnéticas ligadas a anticorpos policlonais anti-C. jejuni foram utilizadas para concentrar C. jejuni antes da semeadura em ágar. O protocolo foi comparado com o método convencional. C. jejuni foi recuperado do alimento experimentalmente contaminado por ambos os métodos, entretanto, quando foi usada a IMS, a presença de microrganismos contaminantes nos meios de cultura foi menor. C. jejuni foi isolado de 7% das amostras de alimento naturalmente contaminadas, usando IMS, e de 3% pelo método convencional. C. coli foi isolado de uma amostra pelo método convencional, mas não foi detectado pelo protocolo com IMS. A técnica de IMS pode ser usada para isolamento de C. jejuni de alimentos, oferecendo a vantagem de detectar em amostras o microrganismo cujo isolamento não é obtido por meio do método convencional.(AU)

Campylobacter jejuni is the main cause of acute bacterial gastroenteritis and chicken meat has shown to be an important source of infection. This microorganism is difficult to isolate and the conventional methods are often inefficient and may lead to erroneous results. This study aimed at developing and testing the technique of immunomagnetic separation (IMS) in the detection of C. jejuni in chicken products. Microparticles magnetically connected anti-C. jejuni polyclonal antibodies were used to concentrate C. jejuni before agar seeding. The protocol was compared with the conventional method. C. jejuni was recovered from experimentally contaminated food for both methods, however, when the IMS was used, the presence of contaminating microorganisms in the means of culture was smaller. C. jejuni was isolated from 7% of samples of food naturally contaminated, using IMS, and 3% by conventional method. C. coli was isolated from a sample by conventional method, but it was not detected by protocol with IMS. The IMS technique can be used for isolation of C. jejuni in food, offering the advantage of detecting the microorganism in samples from which the isolation is not obtained with the use of the conventional method.(AU)

Isolation and antimicrobial resistance of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli found in chilled chicken carcasses in the Federal District Region and surrounding areas / Isolamento e resistência antimicrobiana de Campylobacter jejuni e Campylobacter coli encontradas em carcaças de frango resfriadas na região do Distrito Federal e entorno

This study aimed to isolate Campylobacter jejuni and Campylobacter coli from chilled chicken carcasses marketed in the Federal District Region and surrounding areas, as well as to detect the occurrence of antimicrobial resistance and genes responsible for the same. A total of 105 chilled chicken carcasses were collected, of which 7 (6.67%) were positive for C. jejuni and 4 (3.81%) were positive for C. coli. These results were obtained using both the conventional microbiological isolation method and polymerase chain reaction assays. All of the positive strains were subjected to antimicrobial susceptibility testing for seven antimicrobials. The resistance incidences found in the C. jejuni strains were as follows: 71.43% for tetracycline and nalidixic acid, 42.86% for streptomycin and gentamicin, 57.14% for ciprofloxacin and erythromycin, and 28.57% for chloramphenicol. Among the C. coli strains, 100% were resistant to tetracycline and streptomycin, 75% were resistant to erythromycin, 50% were resistant to ciprofloxacin, gentamicin, and nalidixic acid, and no strains were resistant to chloramphenicol. While analyzing the presence of antimicrobial resistance genes in the isolated C. jejuni strains, the aph3-1 (resistance to aminoglycosides), aadE (resistance to streptomycin), and tet(O) (resistance to tetracycline) genes were identified, with occurrence rates of 57.14%, 28.57%, and 42.86%, respectively, whereas in the C. coli strains, there was a 25% occurrence rate for both the aph3-1 and tet(O) genes. The aadE gene was not found in the C. coli isolates. The results of this study demonstrated the presence of C. jejuni and C. coli in chilled chicken carcasses marketed in the Federal District Region and surrounding areas, as well as the antimicrobial resistance and the presence of resistance genes in these bacteria, which may pose threats to public health.

O objetivo deste trabalho foi isolar Campylobacter jejuni e Campylobacter coli de carcaças de frango resfriadas comercializadas no Distrito Federal e entorno, bem como detectar a ocorrência de resistência antimicrobiana e genes responsáveis pela resistência antimicrobiana. Foram coletadas um total de 105 carcaças de frango resfriadas, das quais 7 (6,67%) foram positivas para C. jejuni e 4 (3,81%) para C. coli. Estes resultados foram obtidos usando tanto o método convencional de isolamento microbiológico quanto os ensaios de reação em cadeia da polymerase (PCR). Todas as cepas positivas foram submetidas ao teste de susceptibilidade antimicrobiana para sete antimicrobianos. As incidências de resistência encontradas nas cepas de C. jejuni foram as seguintes: 71,43% para tetraciclina e ácido nalidíxico, 42,86% para estreptomicina e gentamicina, 57,14% para ciprofloxacina e eritromicina e 28,57% para cloranfenicol. Entre as cepas de C. coli, 100% foram resistentes à tetraciclina e à estreptomicina, 75% eram resistentes à eritromicina, 50% eram resistentes à ciprofloxacina, gentamicina e ácido nalidíxico, e nenhuma cepa eram resistentes ao cloranfenicol. Ao analisar a presença de genes de resistência antimicrobiana nas cepas isoladas de C. jejuni, foram identificados os genes aph3-1 (resistência a aminoglicosídeos), aadE (resistência à estreptomicina) e tet (O) (resistência à tetraciclina) genes foram identificados, com taxas de ocorrência de 57,14%, 28,57% e 42,86%, respectivamente, enquanto que nas cepas de C. coli, houve uma taxa de ocorrência de 25% para os genes aph3-1 e tet (O). O gene aadE não foi encontrado nos isolados de C. coli. Os resultados deste estudo demonstraram a presença de C. jejuni e C. coli em carcaças de frango resfriadas comercializadas na Região do Distrito Federal e entorno, além da resistência antimicrobiana e a presença de genes de resistência nestas cepas, que podem se tornar uma possível ameaça a saúde pública.

Isolation and antimicrobial resistance of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli found in chilled chicken carcasses in the Federal District Region and surrounding areas / Isolamento e resistência antimicrobiana de Campylobacter jejuni e Campylobacter coli encontradas em carcaças de frango resfriadas na região do Distrito Federal e entorno

This study aimed to isolate Campylobacter jejuni and Campylobacter coli from chilled chicken carcasses marketed in the Federal District Region and surrounding areas, as well as to detect the occurrence of antimicrobial resistance and genes responsible for the same. A total of 105 chilled chicken carcasses were collected, of which 7 (6.67%) were positive for C. jejuni and 4 (3.81%) were positive for C. coli. These results were obtained using both the conventional microbiological isolation method and polymerase chain reaction assays. All of the positive strains were subjected to antimicrobial susceptibility testing for seven antimicrobials. The resistance incidences found in the C. jejuni strains were as follows: 71.43% for tetracycline and nalidixic acid, 42.86% for streptomycin and gentamicin, 57.14% for ciprofloxacin and erythromycin, and 28.57% for chloramphenicol. Among the C. coli strains, 100% were resistant to tetracycline and streptomycin, 75% were resistant to erythromycin, 50% were resistant to ciprofloxacin, gentamicin, and nalidixic acid, and no strains were resistant to chloramphenicol. While analyzing the presence of antimicrobial resistance genes in the isolated C. jejuni strains, the aph3-1 (resistance to aminoglycosides), aadE (resistance to streptomycin), and tet(O) (resistance to tetracycline) genes were identified, with occurrence rates of 57.14%, 28.57%, and 42.86%, respectively, whereas in the C. coli strains, there was a 25% occurrence rate for both the aph3-1 and tet(O) genes. The aadE gene was not found in the C. coli isolates. The results of this study demonstrated the presence of C. jejuni and C. coli in chilled chicken carcasses marketed in the Federal District Region and surrounding areas, as well as the antimicrobial resistance and the presence of resistance genes in these bacteria, which may pose threats to public health.(AU)

O objetivo deste trabalho foi isolar Campylobacter jejuni e Campylobacter coli de carcaças de frango resfriadas comercializadas no Distrito Federal e entorno, bem como detectar a ocorrência de resistência antimicrobiana e genes responsáveis pela resistência antimicrobiana. Foram coletadas um total de 105 carcaças de frango resfriadas, das quais 7 (6,67%) foram positivas para C. jejuni e 4 (3,81%) para C. coli. Estes resultados foram obtidos usando tanto o método convencional de isolamento microbiológico quanto os ensaios de reação em cadeia da polymerase (PCR). Todas as cepas positivas foram submetidas ao teste de susceptibilidade antimicrobiana para sete antimicrobianos. As incidências de resistência encontradas nas cepas de C. jejuni foram as seguintes: 71,43% para tetraciclina e ácido nalidíxico, 42,86% para estreptomicina e gentamicina, 57,14% para ciprofloxacina e eritromicina e 28,57% para cloranfenicol. Entre as cepas de C. coli, 100% foram resistentes à tetraciclina e à estreptomicina, 75% eram resistentes à eritromicina, 50% eram resistentes à ciprofloxacina, gentamicina e ácido nalidíxico, e nenhuma cepa eram resistentes ao cloranfenicol. Ao analisar a presença de genes de resistência antimicrobiana nas cepas isoladas de C. jejuni, foram identificados os genes aph3-1 (resistência a aminoglicosídeos), aadE (resistência à estreptomicina) e tet (O) (resistência à tetraciclina) genes foram identificados, com taxas de ocorrência de 57,14%, 28,57% e 42,86%, respectivamente, enquanto que nas cepas de C. coli, houve uma taxa de ocorrência de 25% para os genes aph3-1 e tet (O). O gene aadE não foi encontrado nos isolados de C. coli. Os resultados deste estudo demonstraram a presença de C. jejuni e C. coli em carcaças de frango resfriadas comercializadas na Região do Distrito Federal e entorno, além da resistência antimicrobiana e a presença de genes de resistência nestas cepas, que podem se tornar uma possível ameaça a saúde pública.(AU)

Prevalência e virulência de Campylobacter spp. em diferentes matrizes cárneas / Prevalence and virulence of Campylobacter spp. in different types of meats

Objetivou-se determinar a prevalência de Campylobacter em fígado de frango e bovino, pernil suíno e carne moída e suas características de virulência. Nos isolados, determinou-se a espécie e a presença de genes de virulência por PCR. Foram analisadas 660 amostras representativas das comercializadas no Brasil, compostas por: pernil suíno resfriado (138), fígado de frango (138), patinho bovino moído (138) e fígado bovino (246), provenientes de 53 marcas e sob diferentes serviços de inspeção durante o período de março de 2014 a maio de 2016. A identificação da espécie e a presença dos genes flaA, pldA, ciaB, cadF e cdtABC, luxS, danJ e sodB foram realizadas por PCR. Das amostras, 35/660 (5,3%) foram positivas para o gênero Campylobacter, sendo 9/35 (25,71%) identificadas como C. jejuni e 6/35 (17,14%) como C. coli. Os resultados indicam a necessidade de monitoramento das diferentes matrizes cárneas quanto a presença de Campylobacter.(AU)

Prevalência e virulência de Campylobacter spp. em diferentes matrizes cárneas / Prevalence and virulence of Campylobacter spp. in different types of meats

Objetivou-se determinar a prevalência de Campylobacter em fígado de frango e bovino, pernil suíno e carne moída e suas características de virulência. Nos isolados, determinou-se a espécie e a presença de genes de virulência por PCR. Foram analisadas 660 amostras representativas das comercializadas no Brasil, compostas por: pernil suíno resfriado (138), fígado de frango (138), patinho bovino moído (138) e fígado bovino (246), provenientes de 53 marcas e sob diferentes serviços de inspeção durante o período de março de 2014 a maio de 2016. A identificação da espécie e a presença dos genes flaA, pldA, ciaB, cadF e cdtABC, luxS, danJ e sodB foram realizadas por PCR. Das amostras, 35/660 (5,3%) foram positivas para o gênero Campylobacter, sendo 9/35 (25,71%) identificadas como C. jejuni e 6/35 (17,14%) como C. coli. Os resultados indicam a necessidade de monitoramento das diferentes matrizes cárneas quanto a presença de Campylobacter.

Eficiência de diferentes protocolos para isolamento de Campylobacter jejuni de carne de frango / Efficiency of different protocols for Campylobacter jejuni isolation from poultry meat

Campylobacter jejuni é o principal causador de gastroenterite bacteriana aguda e a carne de frango é um importante veículo do agente. Entretanto, as metodologias convencionais de isolamento de Campylobacter muitas vezes não são eficientes, podendo levar a resultados errôneos. Sendo assim, este trabalho teve como objetivo avaliar diferentes métodos utilizados na detecção de C. jejuni em produtos de frango. Carne moída experimentalmente contaminada com três diferentes diluições do microrganismo foi analisada com diferentes protocolos para isolamento de C. jejuni. Foram feitas semeaduras diretamente nos ágares mCCDA, Columbia e ágar sangue, e após pré-enriquecimento nos caldos Bolton ou Brucella. As colônias características de Campylobacter foram identificadas e os resultados comparados a fim de avaliar qual o método foi mais eficaz. Os únicos protocolos em que foi possível recuperar o microrganismo de todos os testes foram aqueles em que foi utilizado o ágar mCCDA associado com o Caldo Bolton ou com o Caldo Brucella. Estes foram também os únicos protocolos que permitiram a recuperação de C. jejuni 24 horas após a contaminação experimental com inóculo igual a 100 UFC/25 g. Entretanto, o ágar mCCDA sem o uso de pré-enriquecimento apresentou desempenho insatisfatório, inferior ao dos demais protocolos. Conclui-se que ágar mCCDA com pré-enriquecimento em caldo Brucella ou em caldo Bolton foram mais eficientes para o isolamento de C. jejuni que os demais protocolos.

Campylobacter jejuni is the main cause of acute bacterial gastroenteritis, and poultry meat is an important agent vehicle. However, the conventional methods for Campylobacter isolation are often not effective and may lead to erroneous results. Thus, this study aimed to evaluate different methods to C. jejuni detection in poultry products. Ground chicken experimentally contaminated with three different dilutions of the microorganism was analyzed with different protocols to C. jejuni isolation: Seeding directly in agars mCCDA, Columbia and blood agar, and after pre-enrichment in Bolton or Brucella broth. The Campylobacter characteristic colonies were identified and compared in order to assess which method was the most effective. The only protocols in which it was possible to recover the microorganism from all the tests were those using the mCCDA agar associated with the Bolton broth or the Brucella broth. These were also the only protocols that allowed the recovery of C. jejuni 24 hours after the experimental contamination with inoculum equal to 100 CFU/25 g. However, the mCCDA agar without the use of pre-enrichment presented an unsatisfactory performance, lower than the other protocols. It is concluded that mCCDA agar with Brucella broth or with Bolton broth pre-enrichment was more efficient for the C. jejuni isolation than the other protocols.

Eficiência de diferentes protocolos para isolamento de Campylobacter jejuni de carne de frango / Efficiency of different protocols for Campylobacter jejuni isolation from poultry meat

Campylobacter jejuni é o principal causador de gastroenterite bacteriana aguda e a carne de frango é um importante veículo do agente. Entretanto, as metodologias convencionais de isolamento de Campylobacter muitas vezes não são eficientes, podendo levar a resultados errôneos. Sendo assim, este trabalho teve como objetivo avaliar diferentes métodos utilizados na detecção de C. jejuni em produtos de frango. Carne moída experimentalmente contaminada com três diferentes diluições do microrganismo foi analisada com diferentes protocolos para isolamento de C. jejuni. Foram feitas semeaduras diretamente nos ágares mCCDA, Columbia e ágar sangue, e após pré-enriquecimento nos caldos Bolton ou Brucella. As colônias características de Campylobacter foram identificadas e os resultados comparados a fim de avaliar qual o método foi mais eficaz. Os únicos protocolos em que foi possível recuperar o microrganismo de todos os testes foram aqueles em que foi utilizado o ágar mCCDA associado com o Caldo Bolton ou com o Caldo Brucella. Estes foram também os únicos protocolos que permitiram a recuperação de C. jejuni 24 horas após a contaminação experimental com inóculo igual a 100 UFC/25 g. Entretanto, o ágar mCCDA sem o uso de pré-enriquecimento apresentou desempenho insatisfatório, inferior ao dos demais protocolos. Conclui-se que ágar mCCDA com pré-enriquecimento em caldo Brucella ou em caldo Bolton foram mais eficientes para o isolamento de C. jejuni que os demais protocolos.(AU)

Campylobacter jejuni is the main cause of acute bacterial gastroenteritis, and poultry meat is an important agent vehicle. However, the conventional methods for Campylobacter isolation are often not effective and may lead to erroneous results. Thus, this study aimed to evaluate different methods to C. jejuni detection in poultry products. Ground chicken experimentally contaminated with three different dilutions of the microorganism was analyzed with different protocols to C. jejuni isolation: Seeding directly in agars mCCDA, Columbia and blood agar, and after pre-enrichment in Bolton or Brucella broth. The Campylobacter characteristic colonies were identified and compared in order to assess which method was the most effective. The only protocols in which it was possible to recover the microorganism from all the tests were those using the mCCDA agar associated with the Bolton broth or the Brucella broth. These were also the only protocols that allowed the recovery of C. jejuni 24 hours after the experimental contamination with inoculum equal to 100 CFU/25 g. However, the mCCDA agar without the use of pre-enrichment presented an unsatisfactory performance, lower than the other protocols. It is concluded that mCCDA agar with Brucella broth or with Bolton broth pre-enrichment was more efficient for the C. jejuni isolation than the other protocols.(AU)

Campylobacter jejuni and Campylobacter coli originated from chicken carcasses modulate their transcriptome to translate virulence genes in human cells / Campylobacter jejuni e Campylobacter coli originadas de carcaças de frango modulam seu transcriptoma para traduzir genes de virulência em células humanas

The aim was to determine the spread of genetically similar profiles of Campylobacter in chicken carcasses and evaluate their ability to produce transcripts for ciaB, dnaJ, p19 and sodB genes, before and after cultivation in Caco-2 cells. The strains used were isolated from 420 samples of chicken carcasses chilled and frozen ready for marketing. The species were identified by PCR-multiplex, the phylogeny was determined by RAPD-PCR and the presence of transcripts was performed by RT-PCR. We identified 74 (17.6%) of Campylobacter strains, being 55 (74.3%) C. jejuni and 19 (25.7%) C. coli. The phylogenetic relationship demonstrated heterogeneity between isolates of the same species, with absence of clones, indicating the high level of diversity of circulating genotypes. The gene transcription showed conflicting results before and after the culture in Caco-2 cell, so that before cultivation isolates showed greater capacity to transcribe genes related to survival and after the interaction with human cells, the strains showed higher potential to transcribe genes associated with virulence. The result of this study contributes to the understanding of how these seemingly fragile microorganisms are the most prevalent bacterial agents in human gastroenteritis.(AU)

O objetivo foi determinar a disseminação de perfis geneticamente semelhantes de Campylobacter em carcaças de frango e avaliar sua capacidade de produzir transcritos para os genes ciaB, dnaJ, p19 e sodB, antes e após o cultivo em células Caco-2. As cepas utilizadas foram isoladas de 420 amostras de carcaças de frango resfriadas e congeladas prontas para comercialização. As espécies foram identificadas por PCR-multiplex, a filogenia foi determinada por RAPD-PCR e a presença de transcritos foi realizada por RT-PCR. Identificamos 74 (17,6%) das cepas de Campylobacter, sendo 55 (74,3%) C. jejuni e 19 (25,7%) C. coli. A relação filogenética demonstrou heterogeneidade entre isolados da mesma espécie, com ausência de clones, indicando o alto nível de diversidade dos genótipos circulantes. A transcrição gênica mostrou resultados conflitantes antes e após a cultura em células Caco-2, de modo que, antes do cultivo, os isolados apresentaram maior capacidade de transcrever genes relacionados à sobrevivência e após a interação com células humanas, as linhagens apresentaram maior potencial para transcrever genes associados à virulência. O resultado deste estudo contribui para a compreensão de como esses microrganismos aparentemente frágeis são os agentes bacterianos mais prevalentes na gastroenterite humana.(AU)

Campylobacter jejuni and Campylobacter coli originated from chicken carcasses modulate their transcriptome to translate virulence genes in human cells / Campylobacter jejuni e Campylobacter coli originadas de carcaças de frango modulam seu transcriptoma para traduzir genes de virulência em células humanas

The aim was to determine the spread of genetically similar profiles of Campylobacter in chicken carcasses and evaluate their ability to produce transcripts for ciaB, dnaJ, p19 and sodB genes, before and after cultivation in Caco-2 cells. The strains used were isolated from 420 samples of chicken carcasses chilled and frozen ready for marketing. The species were identified by PCR-multiplex, the phylogeny was determined by RAPD-PCR and the presence of transcripts was performed by RT-PCR. We identified 74 (17.6%) of Campylobacter strains, being 55 (74.3%) C. jejuni and 19 (25.7%) C. coli. The phylogenetic relationship demonstrated heterogeneity between isolates of the same species, with absence of clones, indicating the high level of diversity of circulating genotypes. The gene transcription showed conflicting results before and after the culture in Caco-2 cell, so that before cultivation isolates showed greater capacity to transcribe genes related to survival and after the interaction with human cells, the strains showed higher potential to transcribe genes associated with virulence. The result of this study contributes to the understanding of how these seemingly fragile microorganisms are the most prevalent bacterial agents in human gastroenteritis.(AU)

O objetivo foi determinar a disseminação de perfis geneticamente semelhantes de Campylobacter em carcaças de frango e avaliar sua capacidade de produzir transcritos para os genes ciaB, dnaJ, p19 e sodB, antes e após o cultivo em células Caco-2. As cepas utilizadas foram isoladas de 420 amostras de carcaças de frango resfriadas e congeladas prontas para comercialização. As espécies foram identificadas por PCR-multiplex, a filogenia foi determinada por RAPD-PCR e a presença de transcritos foi realizada por RT-PCR. Identificamos 74 (17,6%) das cepas de Campylobacter, sendo 55 (74,3%) C. jejuni e 19 (25,7%) C. coli. A relação filogenética demonstrou heterogeneidade entre isolados da mesma espécie, com ausência de clones, indicando o alto nível de diversidade dos genótipos circulantes. A transcrição gênica mostrou resultados conflitantes antes e após a cultura em células Caco-2, de modo que, antes do cultivo, os isolados apresentaram maior capacidade de transcrever genes relacionados à sobrevivência e após a interação com células humanas, as linhagens apresentaram maior potencial para transcrever genes associados à virulência. O resultado deste estudo contribui para a compreensão de como esses microrganismos aparentemente frágeis são os agentes bacterianos mais prevalentes na gastroenterite humana.(AU)