Reposta imune humoral e celular em camundongos e cinética de anticorpos e proteínas de fase aguda em caprinos imunizados com uma vacina atenuada liofilizada contra Linfadenite Caseosa

A Linfadenite Caseosa é uma doença infecto-contagiosa crônica que acomete os caprinos e ovinos, caracterizada pela presença de granulomas nos linfonodos superficiais e internos causada pela bactéria Corynebacterium pseudotuberculosis. O objetivo do trabalho foi avaliar a resposta imune humoral e celular e a resposta inata de uma vacina liofilizada produzida a partir da cepa 1002, utilizando os modelos murino e caprino. Para tanto, 50 camundongos BALB/c foram divididos em cinco grupos (n=10/grupo) que receberam as seguintes doses de antígeno vacinal: G - controle solução salina, G1- 106UFC/mL, G2- 106 UFC/mL revacinado com 21 dias; G3-107UFC/mL; G4-107UFC/mL revacinados com 21 dias. A resposta humoral foi obtida pela determinação das concentrações de IgG total através dos ELISAS com antígenos BHI, BMD e Q5 e resposta celular através das dosagens de óxido nítrico e citocinas dos perfis Th1 (IFN-, IL2 e TNF) e Th2 (IL-4, IL-5). No modelo caprino, 100 cabras foram divididas em cinco grupos (n=20/grupo) que receberam as seguintes doses de antígeno vacinal: G - controle solução salina, G1 - 107UFC/mL, G2 -107 UFC/mL revacinado com 21 dias; G3 - 106UFC/mL; G4 - 106UFC/mL revacinados com 21 dias. A resposta humoral foi avaliada pela determinação das concentrações de IgG total através do ELISA indireto com antígeno BMD e a resposta inata pela determinação das concentrações de proteínas de fase aguda (ceruplasmina, haptoglobina, glicoproteína ácida e albumina). No modelo murino observou-se resposta humoral com produção de IgG total em todos os grupos não havendo diferenças significativas entre eles. Na resposta celular, os grupos 1, 2 e 3 mostraram melhor produção de óxido nítrico quando comparados com os grupos controle e 4 (p<0,05), os três antígenos não mostraram diferenças estatisticamente significativas na estimulação da produção de óxido nítrico. Na produção de citocinas não foi verificada diferenças significantes entre os grupos nem entre os perfis de regulação Th1/Th2. No modelo caprino verificou-se produção de IgG total ao longo de doze meses, entretanto não houve diferenças significativas entre os grupos testados. Houve aumento nas concentrações séricas de proteínas aguda (ceruplasmina, haptoglobina) demonstrando possivelmente, estimulação da resposta inata. O estudo evidenciou que a vacina produzida a partir da cepa 1002, liofilizada teve a capacidade de estimular a resposta imune humoral e celular no modelo murino e a resposta humoral no modelo caprino constituindo-se como uma alternativa para o controle da linfadenite caseosa.

Caseous Lymphadenitis is a chronic infectious disease that affects goats and sheep, characterized by the presence of granulomas in the superficial and internal lymph nodes caused by the bacterium Corynebacterium pseudotuberculosis. The objective of this work was to evaluate the humoral and cellular immune response and the inate response of a vaccine produced from lyophilized strain 1002, using the murine and goat models. For this, 50 balb / c mice were divided in five groups (n = 10 / group) that received the following doses of vaccine antigen: G-control saline solution; G1- 106UFC/mL, G2-106 UFC/mL revaccinated with 21 days; G3-107UFC/mL; G4-107UFC/mL revaccinated with 21 days. The humoral response was determined through ELISAs with BHI, BMD and Q5 antigens and cellular response through nitric oxide and Th1 (IFN-, IL2 and TNF) and Th2 (IL-4, IL-5) cytokine dosages. In the goat model, 100 goats were divided in five groups (n = 20 / group) that received the following doses of vaccine antigen: G - control saline solution G1- 107UFC/mL, G2-107 UFC/mL revaccinated with 21 days; G3- 106UFC/mL; G4- 106UFC/mL revaccinated with 21 days. The humoral response was evaluated through the indirect ELISA with BMD antigen and the inate response through the serum dosage of acute phase proteins (ceruplasmin, haptoglobin, acid glycoprotein, and albumin). In the murine model, humoral response with total IgG production was observed in all groups, with no significant differences between them. In the cellular response, groups 1, 2 and 3 showed better nitric oxide production when compared to the control and 4 (p <0.05) groups, the three antigens showed no statistically significant differences in the stimulation of nitric oxide production. Cytokine production didnt show significant differences between the groups nor between Th1 /Th2 regulation profiles. In the goat model there was total IgG production over twelve months, however there were no significant differences between the tested groups. There was an increase in serum concentrations of acute proteins (ceruplasmin, haptoglobin) possibly demonstrating stimulation of the innate response. The study demonstrated that the vaccine produced from strain 1002, lyophilized has the ability to stimulate the humoral and cellular immune response in the model and the humoral response in the goat model constituting as an alternative for the control of caseous lymphadenitis.

Concentrações séricas de proteínas de fase aguda e IgG na infecção experimental por Ehrlichia canis

A erliquiose canina é uma doença de alta incidência na região nordeste do Estado de São Paulo, sendo responsável pela morte de muitos cães. O diagnóstico precoce favorece a pronta instituição do tratamento e melhora o prognóstico do animal. Estudos têm apontado que a determinação da concentração de proteínas de fase aguda (PFA) pode contribuir para detecção precoce de doenças e auxiliar na predição do prognóstico. O presente estudo objetivou avaliar o perfil de proteínas de fase aguda (PFA) em cães experimentalmente infectados com Ehrlichia canis, amostra Jaboticabal, no início da infecção e após o tratamento. Para tanto, foram utilizados 10 cães sem contato prévio com hemoparasitas. Deste, cinco foram infectados e cinco serviram de controle da infecção. Hemogramas, nested PCR, detecção de anticorpos anti-E. canis e eletroforetograma de proteínas séricas foram realizados em períodos pré-determinados. Os resultados mostraram que a proteína-C reativa, ceruplasmina e a ?1-glicoproteína ácida tiveram suas concentrações aumentadas antes do aparecimento dos sinais clínicos e das alterações de hemograma nos cães infectados. Os sinais clínicos da doença tornaram-se evidentes por volta do 17º dia de infecção. Trombocitopenia foi registrada a partir do 3º dia de infecção. Mórulas intracitoplasmáticas foram detectadas a partir do 15º dia. Títulos sorológicos anti-E. canis, variando de 1:2560 a 1:5120, e nPCR positiva foram evidenciados no 18º dia. Nas avaliações após o tratamento os cães infectados estavam assintomáticos, com nPCR negativo e acentuada redução dos títulos de anticorpos específicos em quatro dos cinco cães. Todas as PFA estudadas reduziram suas concentrações a títulos próximos aos iniciais. Este estudo mostrou que as mensurações das PFA contribuem para o diagnóstico precoce e predição de cura...

Canine ehrlichiosis is an endemic disease, with high incidence in the Northwest area of Sao Paulo State ? Brazil and it is responsible for the death of numerous dogs. The rapid and accurate diagnosis helps the prompt establishment of treatment and improves the prognosis of the animal. Evidence has shown that the measurement of acute phase proteins (APP) can contribute for the early detection of the disease and help to predict its prognosis. This study evaluated the profile of APP in dogs experimentally infected with Ehrlichia canis, Jaboticabal ? SP ? Brazil sample, at the onset of the infection and after its treatment. Ten dogs, with no previous hemoparasitosis, were randomly assigned in either the infected group (5 animals), which received the bacteria, or the control group (5 animals). In pre-determined intervals, their blood was colected and hemogram, nested PCR, anti-E. canis antibodies detection and tritation and eletrophoresis of serum proteins were performed. We showed that, in infected dogs, the concentration of C-reactive protein, ceruplasmin and ?-1 acid glycoprotein were increased previous to the clinical signs forthcoming and hemogram alterations. The clinical signs were evident around the 17th day of infection. Thrombocytopenia was found on the 3th day of infection. Intra-cytosolic morules were detected on the 15th day of infection. Sorologic tritation of anti-E. canis, ranging from 1:2560 to 1:5120, and positive nPCR were found on the 18th day of infection. In the post-treatment evaluation, the infected dogs were asymptomatic with negative nPCR and decreased tritation of specific antibodies in four out of five dogs. All APP analyzed were similar to basal levels. This study showed that the measurement of APP can, indeed, contribute for the early diagnosis and prediction of cure, after treatment, of the experimental acute phase of canine Ehrlichiosis

Histopatologia e imunoistoquímica do bulbo do olho de equinos (Equus caballus, Linnaeus, 1758) soropositivos ou soronegativos para leptospirose

A doença endógena inflamatória uveal em equinos constitui resposta imunopatogênica complexa, onde se admite a participação de uma variedade de antígenos. A uveíte recorrente dos equinos (URE), também denominada ophthalmia periódica ou moon blindness, é uma panuveíte e constitui-se na causa mais comum de diminuição da percepção visual, cuja patogênese permanece, ainda, sob investigação. Inúmeras pesquisas apontam para a hipótese de hipersensibilidade a antígenos bacterianos. A maioria dos estudos mostra evidências de infecção por Leptospira sp.. Examinaram-se, ao acaso, os olhos de 29 animais e coletaram-se o soro, o humor aquoso e o corpo vítreo para proteinograma e aglutinação microscópica para Leptospira sp.. Outrossim, fragmentos de córnea, íris, retina e coróide para histopatologia e imunoistoquímica. A prova de aglutinação microscópica identificou 14 animais positivos, seis animais com titulação igual a 40 e nove indivíduos negativos para as amostras de soro. Houve um animal positivo na amostra de humor aquoso e na de corpo vítreo e outro negativo na de soro (titulação 40), mas positivo na de corpo vítreo. Foram encontrados os sorovares icterohaemorrhagiae, autumalis, patoc, sentot, habdomadis. Foram identificadas, à eletroforese do soro, as proteínas: imunoglobulina A; ceruloplasmina; trasnferrina; hemopexina; albumina; anti-tripsina; imunoglobulina G de cadeia pesada; haptoglobina; glicoproteína ácida; imunoglobulina G de cadeia leve e proteína de 25kda. A única proteína que mostrou resultado estatístico significativo foi a ceruplasmina (p=0,05) com animais soropositivos para leptospirose. À histopatologia a espessura da córnea foi significativamente maior nos animais soropositivos (p=0,0347). O exame imunistoquímico para pesquisa da bactéria Leptospira sp. mostrou maior...

Endogenous uveal inflammatory disease in the horse represent a complex immunopathological response to a range of presumed antigens. Equine recurrent uveitis (ERU) is a panuveitis and the most commmon cause of blindness in horses. Many researchers favour the hypothesis that ERU is delayed type hypersensitivity response to bacterial antigens. New findings show evidence of leptospiral infection in ERU eyes. Fifity eight eyeballs from twenty nine horses randomly selected were studied using histopathology and immunohistochemistry. The serum from 29 animals, aqueous humor an vitreous body from 58 eyes were collected for proteinogram and microscopic agglutination test (MAT) for Leptospira sp.. The microscopic agluttination test was identified 14 positive animals, six with titer 40 and nine negative in serum samples. One seropositive animal was positive in aquaeous humor and vitreous body and another seronegative horse was positive in vitreous body. Were found five serovars from 26 studied from Leptospira interrogans: icterohaemorrhagiae, autumalis, patoc, sentot, habdomadis. Were identified by serum electrophoresis, the following proteins: immunoglobulin A; ceruloplasmin; trasnferrina; hemopexina; albumin, anti-trypsin, the heavy chain of immunoglobulin G; haptoglobin; glycoprotein, immunoglobulin G and the light chain protein, 25kda. The only protein that showed significant results with seropositive horses was ceruplasmin (p = 0.05). The pathomorphologic changes on HE-stained sections showed that seropositive animals for leptospirosis had corneal thickness significantly higher than the seronegative (p = 0.0347). The immunohistochemistry test for Leptospira sp. showed higher positivity in samples of cornea, and some animals were seronegative but positive for this test. At immunohistochemistry was observed that the anti-metalloproteinase...

Determinação sérica de haptoglobina, ceruloplasmina e alfa-glicoproteína ácida em cães com gastrenterite hemorrágica

Acute phase proteins (APP) are serum proteins whose stimulus for the synthesis happens in a quick and intense manner in response to tissue injury. Those proteins allow the diagnosis of inflammatory process in animals with bone marrow depression and, also, they are useful in the follow up of tissue resolution of traumas or inflammation, as well as in the evaluation of the organic response of the treatment. As leukopenia is observed in the initial stage of the canine parvovirus infection, the dosage of APP can allow the evaluation of the inflammatory process under these conditions. According to these hypothesis, serum APP levels (haptoglobin, ceruloplasm and a-acid-glycoprotein) in 11 healthy dogs and 11 leukopenic dogs with haemorrhagic gastroenteritis, clinically suspected of canine parvovirus infection, were measured. There was a significant difference, with confidence interval of 99% (P 0.01) for the haptoglobin (p 0.0064) and the acid alpha-glycoprotein (p 0.0042) and 95% (P 0.05) of confidence for the ceruloplasmin (p 0.0478) when compared to the control group. In conclusion, dogs with haemorrhagic gastroenteritis during the leukopenic phase showed high serum levels of haptoglobin, ceruloplasmin and alpha-acid-glycoprotein.

As proteínas de fase aguda (PFA) são proteínas plasmáticas, cujo estímulo à síntese ocorre de forma rápida e marcante em resposta à injúria tecidual. Estas proteínas permitem o diagnóstico de processos inflamatórios em animais com supressão ou depressão medular. Além disso, são úteis na monitorização da resolução tecidual de traumas ou inflamação e também na avaliação da resposta orgânica ao tratamento. Uma vez que a leucopenia é observada nos estádios iniciais da parvovirose canina, a dosagem das PFA pode permitir a avaliação do processo inflamatório sob estas condições. Considerando-se estas hipóteses, foram determinados os níveis séricos das PFA (haptoglobina, ceruloplasmina e alfa-glicoproteína ácida) em 11 cães saudáveis e 11 cães leucopênicos com gastrenterite hemorrágica, com suspeita clínica de parvovirose canina. A avaliação estatística mostrou diferença significativa, com intervalo de confiabilidade de 99% (P 0,01) para a haptoglobina (p 0,0064) e para a glicoproteína ácida (p 0,0042) e 95% de confiança (P 0,05) para a ceruloplasmina (p 0,0478) quando comparada com o grupo controle. Em conclusão, cães com gastrenterite hemorrágica durante a fase leucopênica apresentaram níveis elevados de haptoglobina, ceruloplasmina e alfa-glicoproteína ácida.

Determinação sérica de haptoglobina, ceruloplasmina e alfa-glicoproteína ácida em cães com gastrenterite hemorrágica

Acute phase proteins (APP) are serum proteins whose stimulus for the synthesis happens in a quick and intense manner in response to tissue injury. Those proteins allow the diagnosis of inflammatory process in animals with bone marrow depression and, also, they are useful in the follow up of tissue resolution of traumas or inflammation, as well as in the evaluation of the organic response of the treatment. As leukopenia is observed in the initial stage of the canine parvovirus infection, the dosage of APP can allow the evaluation of the inflammatory process under these conditions. According to these hypothesis, serum APP levels (haptoglobin, ceruloplasm and a-acid-glycoprotein) in 11 healthy dogs and 11 leukopenic dogs with haemorrhagic gastroenteritis, clinically suspected of canine parvovirus infection, were measured. There was a significant difference, with confidence interval of 99% (P 0.01) for the haptoglobin (p 0.0064) and the acid alpha-glycoprotein (p 0.0042) and 95% (P 0.05) of confidence for the ceruloplasmin (p 0.0478) when compared to the control group. In conclusion, dogs with haemorrhagic gastroenteritis during the leukopenic phase showed high serum levels of haptoglobin, ceruloplasmin and alpha-acid-glycoprotein.

As proteínas de fase aguda (PFA) são proteínas plasmáticas, cujo estímulo à síntese ocorre de forma rápida e marcante em resposta à injúria tecidual. Estas proteínas permitem o diagnóstico de processos inflamatórios em animais com supressão ou depressão medular. Além disso, são úteis na monitorização da resolução tecidual de traumas ou inflamação e também na avaliação da resposta orgânica ao tratamento. Uma vez que a leucopenia é observada nos estádios iniciais da parvovirose canina, a dosagem das PFA pode permitir a avaliação do processo inflamatório sob estas condições. Considerando-se estas hipóteses, foram determinados os níveis séricos das PFA (haptoglobina, ceruloplasmina e alfa-glicoproteína ácida) em 11 cães saudáveis e 11 cães leucopênicos com gastrenterite hemorrágica, com suspeita clínica de parvovirose canina. A avaliação estatística mostrou diferença significativa, com intervalo de confiabilidade de 99% (P 0,01) para a haptoglobina (p 0,0064) e para a glicoproteína ácida (p 0,0042) e 95% de confiança (P 0,05) para a ceruloplasmina (p 0,0478) quando comparada com o grupo controle. Em conclusão, cães com gastrenterite hemorrágica durante a fase leucopênica apresentaram níveis elevados de haptoglobina, ceruloplasmina e alfa-glicoproteína ácida.