Consensus Regarding the Diagnosis, Prognosis and Treatment of Canine and Feline Mammary Tumors 2019

The aim of this paper is to discuss and update criteria that can guide the diagnosis, prognosis and treatment of canine and feline mammary neoplasms. It was elaborated during the IV Mammary Pathology Meeting: Diagnosis, Prognosis and Treatment of the Canine and Feline Mammary Neoplasia, held on April 29th and 30th, 2019 in Belo Horizonte MG, Brazil, sponsored by the Laboratory of Comparative Pathology of the Federal University of Minas Gerais (UFMG), with the support of the Brazilian Association of Veterinary Pathology (ABPV) and Brazilian Association of Veterinary Oncology (ABROVET). Academics from several regions of Brazil were present and contributed to this work.(AU)

Consensus Regarding the Diagnosis, Prognosis and Treatment of Canine and Feline Mammary Tumors – 2019

The aim of this paper is to discuss and update criteria that can guide the diagnosis, prognosis and treatment of canine and feline mammary neoplasms. It was elaborated during the IV Mammary Pathology Meeting: Diagnosis, Prognosis and Treatment of the Canine and Feline Mammary Neoplasia, held on April 29th and 30th, 2019 in Belo Horizonte – MG, Brazil, sponsored by the Laboratory of Comparative Pathology of the Federal University of Minas Gerais (UFMG), with the support of the Brazilian Association of Veterinary Pathology (ABPV) and Brazilian Association of Veterinary Oncology (ABROVET). Academics from several regions of Brazil were present and contributed to this work.

Mammary gland malignant myoepithelioma in a domestic rabbit (Oryctolagus cuniculus)

Background: Malignant myoepithelioma is a rare neoplasm in humans and rats, poorly reported in dogs and not previously described in rabbits. This study aimed to report a case of malignant mammary myoepithelioma in a domestic rabbit(Oryctolagus cuniculus).Case: A domestic, hybrid, female, entire, nulliparous, 7-year-old rabbit was attended in the Veterinary Hospital Prof. Ricardo Alexandre Hippler at Universidade Vila Velha (UVV) with a history of apathy, lethargy and anorexia. In the clinicalexamination a 5 cm tumour was observed in the right abdominal mammary gland (M2), along with floating smaller lesionsin M1 and M3. There were no palpable abnormalities in the axillary and inguinal lymph nodes. Complete blood count andserum biochemistry were within the normal range. Fine needle aspiration was performed for cytopathological evaluationof the tumour in M2 and it was suggestive of a malignant glandular neoplasm, with probable epithelial origin. Completestaging included chest and abdominal radiographs, but they were unremarkable. The patient was submitted to a rightunilateral mastectomy, involving resection of the inguinal lymph node. The sample was sent to the Laboratory of AnimalPathology of UVV for routine histological evaluation. Histopathological evaluation in M2 was compatible with malignantmyoepithelioma based on the literature, while nodules in M1 and M3 were classified as mammary cysts. The inguinal lymphnode showed no significant abnormalities. An immunohistochemical panel was performed in the Comparative PathologyLaboratory of the Institute of Biological Sciences of the Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG), using immunomarkers (pan-cytokeratin, p63 and vimentin) to characterize the tumour and confirm its diagnosis. Immunohistochemistryrevealed expression of p63, and was negative for pan-cytokeratin and vimentin, which confirmed the myoepithelial origin,without involvement of the epithelial compartment...(AU)

A review of neoplastic and non-neoplastic canine skin tumours in Trinidad from 2010-2015

This retrospective study was performed on samples submitted to the Pathology Unit of the School of Veterinary Medicine, Faculty of Medical Sciences, St. Augustine, Trinidad, during the period 2010 to 2015. A total of 471 non-inflammatory cutaneous masses were analyzed, of which 225 (47.8%) were malignant, 202 (42.9%) were benign and 44 (9.3%) were non-neoplastic. The most common malignant tumors were haemangiosarcoma, 50 (22.2%); mast cell tumour, 49 (21.8%); soft tissue sarcoma 35 (15.6%), lymphoma, 20 (8.9%) and melanoma 20 (8.9%). The most common benign tumors were haemangioma, 39 (19.3%); lipoma, 27 (13.4%), trichoblastoma, 26 (12.9%), histiocytoma 25 (12.4%), plasma cell tumor, 23 (11.4%) and papilloma 9 (4.5%). Common non-neoplastic skin lesions included collagen naevi, 26 (59.1%) and follicular cysts, 11 (25.0%). Mixed breed dogs 241 (51.2%), was most frequently represented with neoplasms followed by Rottweilers 50 (10.6%) and Pit bulls 48 (10.1%).

Mammary gland malignant myoepithelioma in a domestic rabbit (Oryctolagus cuniculus)

Background: Malignant myoepithelioma is a rare neoplasm in humans and rats, poorly reported in dogs and not previously described in rabbits. This study aimed to report a case of malignant mammary myoepithelioma in a domestic rabbit(Oryctolagus cuniculus).Case: A domestic, hybrid, female, entire, nulliparous, 7-year-old rabbit was attended in the Veterinary Hospital Prof. Ricardo Alexandre Hippler at Universidade Vila Velha (UVV) with a history of apathy, lethargy and anorexia. In the clinicalexamination a 5 cm tumour was observed in the right abdominal mammary gland (M2), along with floating smaller lesionsin M1 and M3. There were no palpable abnormalities in the axillary and inguinal lymph nodes. Complete blood count andserum biochemistry were within the normal range. Fine needle aspiration was performed for cytopathological evaluationof the tumour in M2 and it was suggestive of a malignant glandular neoplasm, with probable epithelial origin. Completestaging included chest and abdominal radiographs, but they were unremarkable. The patient was submitted to a rightunilateral mastectomy, involving resection of the inguinal lymph node. The sample was sent to the Laboratory of AnimalPathology of UVV for routine histological evaluation. Histopathological evaluation in M2 was compatible with malignantmyoepithelioma based on the literature, while nodules in M1 and M3 were classified as mammary cysts. The inguinal lymphnode showed no significant abnormalities. An immunohistochemical panel was performed in the Comparative PathologyLaboratory of the Institute of Biological Sciences of the Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG), using immunomarkers (pan-cytokeratin, p63 and vimentin) to characterize the tumour and confirm its diagnosis. Immunohistochemistryrevealed expression of p63, and was negative for pan-cytokeratin and vimentin, which confirmed the myoepithelial origin,without involvement of the epithelial compartment...

A review of neoplastic and non-neoplastic canine skin tumours in Trinidad from 2010-2015

This retrospective study was performed on samples submitted to the Pathology Unit of the School of Veterinary Medicine, Faculty of Medical Sciences, St. Augustine, Trinidad, during the period 2010 to 2015. A total of 471 non-inflammatory cutaneous masses were analyzed, of which 225 (47.8%) were malignant, 202 (42.9%) were benign and 44 (9.3%) were non-neoplastic. The most common malignant tumors were haemangiosarcoma, 50 (22.2%); mast cell tumour, 49 (21.8%); soft tissue sarcoma 35 (15.6%), lymphoma, 20 (8.9%) and melanoma 20 (8.9%). The most common benign tumors were haemangioma, 39 (19.3%); lipoma, 27 (13.4%), trichoblastoma, 26 (12.9%), histiocytoma 25 (12.4%), plasma cell tumor, 23 (11.4%) and papilloma 9 (4.5%). Common non-neoplastic skin lesions included collagen naevi, 26 (59.1%) and follicular cysts, 11 (25.0%). Mixed breed dogs 241 (51.2%), was most frequently represented with neoplasms followed by Rottweilers 50 (10.6%) and Pit bulls 48 (10.1%).(AU)

Histology of the gastrointestinal tract from Bothrops jararaca and Crotalus durissus / Aspectos histológicos do trato gastrointestinal de Bothrops jararaca e Crotalus durissus

Recent studies have discussed the importance of snakes, going beyond the context of Public Health (snakebites). Promising research demonstrates the utility of snake venom in several fields, including oncology, diagnosis, anticoagulant therapy, and pain treatment. Nevertheless, there are still gaps in the basic knowledge on these animals, specifically regarding the histological characterization of the gastrointestinal tract, which ultimately hinder comparative histology and pathology studies. In this context the present study intends to contribute with the advance of current knowledge on snake histology by describing and analyzing histological samples of the gastrointestinal tracts of Bothrops jararaca and Crotalus durissus. Samples were collected from 12 individuals (six from each species), up to 6 months of age and equally distributed between males and females. Histological slides were prepared from the organs collected and were stained with hematoxylin and eosin, periodic acid-Schiff and alcian blue. The slides were photographed with a high-resolution camera to create a portfolio representative of the histology of the gastrointestinal systems of these animals.(AU)

Na atualidade, a importância das serpentes extravasa a conotação em saúde pública (acidentes ofídicos), e pesquisas promissoras têm demonstrado a utilidade dos venenos das serpentes em diversas áreas como oncologia, diagnóstico, terapia anticoagulante e tratamento da dor. Ainda assim, existem lacunas no conhecimento básico sobre esses animais, tais como a caracterização histológica do seu sistema gastrointestinal, que se tornam obstáculos para estudos nos campos da histologia e patologia comparadas. Nesse contexto, o presente trabalho pretende contribuir com o avanço do conhecimento sobre histologia de serpentes a partir da descrição e análise histológica de amostras do trato gastrointestinal de exemplares das espécies Bothrops jararaca e Crotalus durissus. Para tanto, foram coletadas amostras de 12 indivíduos com até seis meses de idade, seis por espécie (distribuídos igualmente entre machos e fêmeas). A partir dos órgãos colhidos, lâminas histológicas foram preparadas e coradas pela técnica de hematoxilina e eosina, bem como PAS com Alcian Blue. As lâminas foram fotografadas por câmera de alta resolução, resultando em um portfólio representativo da histologia do sistema gastrointestinal desses animais.(AU)

Histology of the gastrointestinal tract from Bothrops jararaca and Crotalus durissus / Aspectos histológicos do trato gastrointestinal de Bothrops jararaca e Crotalus durissus

Recent studies have discussed the importance of snakes, going beyond the context of Public Health (snakebites). Promising research demonstrates the utility of snake venom in several fields, including oncology, diagnosis, anticoagulant therapy, and pain treatment. Nevertheless, there are still gaps in the basic knowledge on these animals, specifically regarding the histological characterization of the gastrointestinal tract, which ultimately hinder comparative histology and pathology studies. In this context the present study intends to contribute with the advance of current knowledge on snake histology by describing and analyzing histological samples of the gastrointestinal tracts of Bothrops jararaca and Crotalus durissus. Samples were collected from 12 individuals (six from each species), up to 6 months of age and equally distributed between males and females. Histological slides were prepared from the organs collected and were stained with hematoxylin and eosin, periodic acid-Schiff and alcian blue. The slides were photographed with a high-resolution camera to create a portfolio representative of the histology of the gastrointestinal systems of these animals.(AU)

Na atualidade, a importância das serpentes extravasa a conotação em saúde pública (acidentes ofídicos), e pesquisas promissoras têm demonstrado a utilidade dos venenos das serpentes em diversas áreas como oncologia, diagnóstico, terapia anticoagulante e tratamento da dor. Ainda assim, existem lacunas no conhecimento básico sobre esses animais, tais como a caracterização histológica do seu sistema gastrointestinal, que se tornam obstáculos para estudos nos campos da histologia e patologia comparadas. Nesse contexto, o presente trabalho pretende contribuir com o avanço do conhecimento sobre histologia de serpentes a partir da descrição e análise histológica de amostras do trato gastrointestinal de exemplares das espécies Bothrops jararaca e Crotalus durissus. Para tanto, foram coletadas amostras de 12 indivíduos com até seis meses de idade, seis por espécie (distribuídos igualmente entre machos e fêmeas). A partir dos órgãos colhidos, lâminas histológicas foram preparadas e coradas pela técnica de hematoxilina e eosina, bem como PAS com Alcian Blue. As lâminas foram fotografadas por câmera de alta resolução, resultando em um portfólio representativo da histologia do sistema gastrointestinal desses animais.(AU)

Proceso carcinogenico de las próstatas caninas: via WNT canónica y su estudio comparado / Carcinogenic process of canine prostate: WNT canonical pathway and its comparative study / Processo carcinogênico das próstatas caninas: via WNT canônica e seu estudo comparado

La especie canina presenta semejanza con la especie humana con relación a las lesiones prostáticas. Es la única especie en presentar tumores espontáneos con frecuencia, de esta manera representa un importante modelo para estudio comparativo de afecciones de la glándula. El desarrollo de las neoplasia prostáticas es una enfermedad con causas multifactoriales, entre estas, alteraciones genéticas y epigenéticas están involucradas. Por lo tanto, el perro puede ser un modelo natural y espontaneo para el estudio de lesiones preneoplásicas e neoplásicas de próstata canina. En el futuro, podrá ser utilizado como modelo en pruebas pre-clínicas de medicamentos, como ya fue realizado para osteosarcoma, por ejemplo. Una de las vías importantes para el desarrollo de los carcinomas prostáticos es la WNT canónica dependiente de la proteína Beta-catenina. En esta revisión abordaremos el papel de esta vía y su participación en la carcinogénesis prostática, importante en humanos y perros, además de algunas proteínas involucradas en la regulación de la misma.(AU)

Prostate of dogs have similar lesions to that observed in human and is the only species other than man which frequently displays spontaneous prostatic tumors. In this way, the dog represent an important model of studying different prostatic affections. The prostate cancer development is multifactorial and among them, genetic and epigenetic alterations are involved. The dog can be a natural and spontaneous model to study preneoplastic and neoplastic lesions, with potential future studies as models for pre-clinical tests. One of important pathway to prostate carcinogenesis is beta catenin dependent canonical WNT pathway. In this paper, we review the role of this pathway in prostate carcinogenesis, important in humans and dogs, besides some regulatory proteins involved in this pathway.(AU)

A espécie canina apresenta semelhanças com a espécie humana com relação às lesões prostáticas, sendo a única espécie a apresentar tumores espontâneos e com frequência, desse modo representa um importante modelo para estudo comparativo de afecções desta glândula. O desenvolvimento das neoplasias prostáticas é multifatorial e dentre eles, alterações genéticas e epigenéticas estão envolvidas, portanto o cão pode ser um modelo natural e espontâneo para o estudo das lesões pré neoplásicas e neoplásicas da próstata, com futuro alto potencial de ser utilizado como modelo em testes pré-clínicos de medicamentos. Uma das vias importantes para o desenvolvimento dos carcinomas prostáticos é a WNT canônica, dependente da proteína Beta-catenina. Nesta revisão, abordaremos o papel desta via e sua participação na carcinogênese prostática, importante em humanos e cães, além de algumas proteínas envolvidas na regulação da mesma.(AU)

Exploring Epigenetic Mechanisms to Target Mammary Cancer Cells: A Comparative Approach

XAVIER, P.L.P. Explorando Mecanismos Epigenéticos Contra Células de Câncer de Mama: Uma Abordagem Comparada. 185F. Tese (Doutorado). Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos. Universidade de São Paulo. O câncer é uma das principais causas de morte em cães no mundo e as neoplasias mamárias representam mais de 50% dos tumores diagnosticados em fêmeas. Além disso, as neoplasias mamárias apresentam uma série de similaridades clínicas e moleculares com o câncer de mama em mulheres, destacando-as como excelentes modelos para o estudo da oncologia comparada. Os mecanismos epigenéticos são responsáveis por regular a expressão gênica nas células e desregulações nesses mecanismos estão associadas ao desenvolvimento de diversos tipos de câncer tanto em humanos como em cães. Assim, a utilização do modelo canino pode ser importante para o desenvolvimento de potenciais terapias epigenéticas para o câncer, em específico para o câncer de mama. Assim, essa tese teve como principais objetivos: 1) revisar os mecanismos epigenéticos que estão por trás do desenvolvimento de diferentes tipos de câncer em cães, comparandoos com as anormalidades já bem descritas no câncer humano; 2) determinar possíveis alvos moleculares associados aos processos de tumorigenicidade e invasão de células de câncer de mama canino (Células CMC); 3) determinar potenciais alvos epigenéticos associados ao potencial de tumorigenicidade e auto-renovação de células de câncer de mama canino; 4) observar os efeitos de um novo inibidor duplo de proteínas epigenéticas BET e deacetilases de histonas (HDACs) em células de câncer de mama humano utilizando modelos in vitro 2D e 3D. No primeiro capítulo, reunimos uma série de informações demonstrando que algumas modificações epigenéticas são similares no câncer em humanos e caninos, sugerindo uma potencial abordagem utilizando o modelo canino para determinar novos mecanismos epigenéticos reguladores do câncer e para o desenvolvimento de novas terapias. No capítulo 2, utilizando modelos in vitro, demonstramos que os fatores de transcrição associados ao processo de transição epitéliomesenquimal (EMT), ZEB1 e ZEB2, estão associados ao potencial de tumorigenicidade e invasão de células CMC e são mais expressos em células CMC com fenótipo mesenquimal do que células CMC com fenótipo epitelial. Além disso, observamos que vias moleculares associadas aos processos de EMT, invasão e tumorigenicidade, como organização e degradação de matriz extracelular, adesão focal, sinalização de TGF/BMP, PI3K-AKT e WNT são enriquecidas em genes superexpressos nas células CMC com fenótipo mesenquimal. Além disso, esse trabalho foi importante para a determinação das linhagens com maior potencial tumorigênico no nosso banco de células para a utilização no capítulo 3. Já no capítulo 3, nós demonstramos que a inibição de uma família de proteínas readers epigenéticas, conhecidas como proteínas BET, pelo inibidor (+)- JQ1, é uma estratégia promissora para inibir os fenótipos de tumorigenicidade e autorenovação de células CMC, em modelos in vitro. A inibição das proteínas BET resultou em diminuição da formação de tumoresferas em placas de baixa aderência e de colônias no ensaio de ágar-mole, dois modelos in vitro utilizados para se estudar auto-renovação e tumorigenicidade. Além disso, inibição de proteínas BET resultou em diminuição da expressão de importantes genes associados a vias moleculares de auto-renovação como WNT, NOTCH, Hedgehog e PI3K/AKT/mTOR, e supressou a expressão de ZEB2, o qual demonstramos ser importante para o fenótipo de tumorigenicidade em células CMC no capítulo 2. Finalmente, no capítulo 4 determinamos que o inibidor duplo de proteínas BET/HDACs, TW09, reduziu a viabilidade celular e aumentou a morte celular em células de câncer de mama humano em comparação com as inibições individuais de proteínas BET e HDACs. Além disso, TW09 diminuiu a formação de tumoresferas primárias e secundárias demonstrando efeito sobre os potenciais de tumorigenicidade e autorenovação das células de câncer de mama. Sendo assim, TW09 demonstrou bons efeitos nessas células. Ainda pretendemos aprofundar ainda mais os estudos dos efeitos da inibição dupla de proteínas BET/HDACs por TW09 no câncer de mama, em células humanas e caninas, podendo confirmar essa estratégia como uma potencial terapia para o câncer de mama em ambas espécies. Por fim, os resultados demonstrados ao longo dos capítulos dessa tese colaboram para a confirmação e descoberta de mecanismos importantes para o desenvolvimento do câncer de mama em cães e seus fenótipos, além de ressaltarem o modelo canino como um bom modelo para o estudo da oncologia comparada e busca de novos alvos e terapias contra o câncer, já que vários dos mecanismos e efeitos observados nesse modelo, corroboram com aqueles vistos em células de câncer humano.

XAVIER, P.L.P. Exploring Epigenetic Mechanisms to Target Mammary Cancer Cells: A Comparative Approach. 185p. PhD Thesis. Faculty of Animal Science and Food Engineering. University of São Paulo. 2020. Cancer is one of the main causes of deaths in dogs worldwide, and mammary cancer in female dogs corresponding to more than 50% of all types of tumors. In addition, mammary tumors in dogs share many clinical and molecular similarities in comparison to breast cancer in women. Therefore, dogs are great models for comparative studies in oncology. Epigenetic mechanisms are key regulators of gene expression and dysregulation of these mechanisms are associated to the development of several types of cancer both in humans and dogs. Thus, canine model may be important for the development of innovative and potential therapies for cancer, especially for breast cancer. Thus, the main purposes of this thesis were: 1) to review the epigenetic mechanisms behind the development of different types of cancer in dogs, in comparison with abnormalities well described in human cancer; 2) to determine possible molecular targets associated with tumorigenicity and invasiveness in canine mammary cancer cells (CMC cells); 3) to determine potential epigenetic targets associated with self-renewal and tumorigenicity in CMC cells; 4) to observe the effects of a new dual BET/HDAC inhibitor in human breast cancer cells using 2D and 3D in vitro models. In the first chapter, we gathered findings demonstrating that some epigenetic abnormalities are similar in both human and canine cancer, suggesting a potential approach to use the canine model to determine new epigenetic mechanisms regulating cancer and to develop new therapies. In chapter 2, using in vitro models, we demonstrate that epithelial-mesenchymal (EMT)- associated transcription factors, ZEB1 and ZEB2, are associated with tumorigenicity and invasiveness of CMC cells, exhibiting higher expression in mesenchymal-like cells in comparison with epithelial-like cells. In addition, we observed that molecular pathways associated with EMT, invasiveness, and tumorigenicity, such as ECM organization and degradation, focal adhesion, TGF- / BMP signaling, PI3K-AKT signaling, and WNT signaling are enriched to upregulated genes overexpressed in mesenchymal-like cells. Furthermore, this work was important to determine cell lines presenting higher tumorigenic potential in our cell bank. In chapter 3, we demonstrated that inhibition of a family of epigenetic reader proteins, known as BET proteins, by (+)-JQ1, is a promising strategy to suppress in vitro tumorigenicity and self-renewal of CMC cells. BET inhibition resulted in a decrease of tumorspheres formation in low-adherence plates and colony formation in soft-agar assay, classical models used to assess in vitro self-renewal and tumorigenicity. Furthermore, inhibition of BET proteins decreased expression of important genes associated with self-renewal pathways including WNT, NOTCH, Hedgehog and PI3K/AKT/mTOR. Besides that, BET inhibition decreased ZEB2 expression, a transcription factor important for the maintenance of self-renewal in CMC cells. Finally, in chapter 4, we observed that the dual BET/HDAC inhibitor, TW09, reduced cell viability and increased cell death in human breast cancer cells in comparison with individual inhibition of BET and HDAC proteins by (+)-JQ1 and CI994, respectively. In addition, TW09 reduced number of primary and secondary BC tumorspheres, suggesting effects regarding tumorigenicity and self-renewal potential of breast cancer cells. Thus, TW09 demonstrated good effects in these cells. We still intend to deeply study the effects of dual BET/HDAC inhibition by TW09 on breast cancer both in human and canine cells in order to confirm this strategy as a potential and innovative therapy for mammary cancer in both species. Finally, the results demonstrated in this thesis collaborate to the validation and discovery of important mechanisms behind mammary cancer and its phenotypes in dogs, besides highlight the canine model as a great model to perform comparative studies in oncology and search for new targets and therapies for cancer, since several of the mechanisms and effects observed in this model, corroborate those observed in human cancer cells.

Comparative study of histopathology and immunohistochemistry of indefinite round cell cutaneous tumors and characterization of canine lymphoma / Estudo comparativo de histopatologia e imuno-histoquímica de tumores indefinidos de células redondas e caracterização de linfoma canino

With the purpose of shedding light on some doubts in veterinary oncology, the present article intends to compare the results of histopathological and immunohistochemical examinations of unspecific round cell neoplasia, to realize immunophenotyping of canine lymphoma cases, to establish the T or B origin of neoplastic cells, and to determine the degree of proliferation and apoptosis of lymphomas by immunohistochemistry. Of 11 animals presenting immunohistochemical diagnosis of lymphoma, five had been diagnosed as Lymphoma by HE staining of histopathological slides and six had been classified as unspecific round cell neoplasia. All cases submitted to immunohistochemical examination were T-cell lymphomas. There was a positive correlation between cell proliferation and apoptosis. The comparison among histopathological and immunohistochemical results obtained in the cases examined in the present study suggested that immunohistochemistry is essential for the differentiation of round cell neoplasia.(AU)

Com o objetivo de sanar algumas dúvidas na área da oncologia veterinária, o presente artigo pretende comparar os resultados dos exames histopatológicos e imuno-histoquímicos de neoplasias de células redondas inespecíficas, realizar imunofenotipagem dos casos de linfoma canino e determinar o grau de proliferação e apoptose de linfomas. Dos 11 animais que apresentaram diagnóstico imuno-histoquímico de linfoma, cinco foram diagnosticados como linfoma por coloração HE das lâminas histopatológicas e seis foram classificados como neoplasia de células redondas inespecíficas. Todos os casos submetidos ao exame imuno-histoquímico foram de linfomas de células-T. Houve uma correlação positiva entre a proliferação celular e apoptose. A comparação entre os resultados histopatológicos e imuno-histoquímicos obtidos nos casos analisados sugeriu que a imuno-histoquímica é essencial para a diferenciação das neoplasias de células redondas.(AU)

Mutational evaluation of TP53 gene in the canine hepatocellular carcinoma: a comparative approach

Os carcinomas hepatocelulares (CHC) representam uma parte importante das doenças hepáticas em cães, correspondendo a mais de 50% das neoplasias primárias do fígado nesta espécie. O CHC afeta, principalmente, cães machos com mais de 10 anos de idade, apresentando prognóstico ruim em pacientes não elegíveis para cirurgia. Nos últimos anos, os estudos em oncologia comparada têm adquirido grande importância, uma vez que cães e humanos compartilham diversas características celulares e moleculares. Em humanos, o CHC é associado às lesões hepáticas crônicas, causadas por infecções virais (hepatites C e B), doença hepática gordurosa (alcoólica e não alcoólica), intoxicações crônicas (medicamentos, micotoxinas, etc.), dentre outras. O consumo da aflatoxina B1 (AFB1) está associado a uma mutação especifica no códon 249 do gene TP53, ocasionando o CHC em uma parcela dos pacientes expostos à esta micotoxina. Como os cães não apresentam hepatites virais crônicas ou doenças gordurosas hepáticas, fatores ambientais e alimentares, como a possível presença de aflatoxina B1 nas rações, podem estar diretamente relacionados à etiologia do CHC nesta espécie. Assim, inicialmente este estudo realizou uma revisão de literatura comparada sobre os aspectos epidemiológicos, clinicopatológicos e anatomopatológicos do CHC em cães e humanos. Posteriormente, avaliou-se a presença de mutações no gene TP53 em amostras de CHC canino (n=24), com o objetivo de determinar uma possível associação da AFB1 na hepatocarcinogênese. Os dados clínico-epidemiológicos observados nos CHCs caninos apresentaram-se dentro do relatado na literatura. No entanto, não foram observadas mutações no gene TP53 ou imunoexpressão de p53. Assim, devido à ausência de mutações no gene TP53 nas amostras analisadas, a participação da AFB1 como fator etiológico no CHC permanece em aberto.

Hepatocellular carcinomas (HCC) represent an important part of hepatic diseases in dogs, correspond to more than 50% of primary neoplasms of the liver in this species. HCC affects, mainly, male dogs over 10-years-old, presenting poor prognosis in patients not suitable for surgery. Latest years, studies about comparative oncology have acquired great importance, since dogs and humans share diverse cellular and molecular features. In humans, HCC is associated with chronic liver injuries, caused by viral infections (hepatitis C and B), fatty liver disease (alcoholic and non-alcoholic), chronic intoxication (drugs, mycotoxins, etc.), among others. The consumption of aflatoxin B1 (AFB1) is associated with a specific mutation in codon 249 of the TP53 gene, causing HCC in part of the patients exposed to this mycotoxin. In case that dogs do not present chronic viral hepatitis or fatty liver diseases, environmental and feeding factors, such as the possible presence of aflatoxin B1 in pet food, may be directly related to the etiology of HCC in this species. Firstly, this study performed a comparative literature review of epidemiological, clinicopathological and anatomo-pathological aspects of HCC in dogs and humans. Subsequently, the presence of mutations in the TP53 gene were evaluated in canine HCC samples (n = 24), in order to determine a possible association of AFB1 in hepatocarcinogenesis. Clinical-epidemiological data observed in canine HCC are in agree with the literature reviewed. However, mutations in the TP53 gene or p53 immunoexpression were not observed. Thus, due to the absence of mutations in the TP53 gene in the analyzed samples, the participation of AFB1 as an etiological factor in HCC remains open.

Clinical-pathological study of mammary tumors in bitches at the Governador Laudo Natel Veterinary Hospital UNESP Jaboticabal

This study describes the pathological and epidemiological data related to clinical evaluation of bitches with mammary lesions treated at the Veterinary Hospital of the Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho, in Jaboticabal, São Paulo, Brazil. The study was based on clinical and pathological guidelines proposed at the First Meeting of Mammary Pathology: Diagnosis, Prognosis and Treatment of Canine Mammary Neoplasia, held on 6 and 7 November 2010, in Belo Horizonte, Minas Gerais, Brazil, sponsored by the Laboratory of Comparative Pathology - UFMG, with the support of the Brazilian Association of Veterinary Pathology (ABPV) and the Brazilian Association of Veterinary Oncology (ABROVET).[...]

Clinical-pathological study of mammary tumors in bitches at the Governador Laudo Natel Veterinary Hospital UNESP Jaboticabal

This study describes the pathological and epidemiological data related to clinical evaluation of bitches with mammary lesions treated at the Veterinary Hospital of the Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho, in Jaboticabal, São Paulo, Brazil. The study was based on clinical and pathological guidelines proposed at the First Meeting of Mammary Pathology: Diagnosis, Prognosis and Treatment of Canine Mammary Neoplasia, held on 6 and 7 November 2010, in Belo Horizonte, Minas Gerais, Brazil, sponsored by the Laboratory of Comparative Pathology - UFMG, with the support of the Brazilian Association of Veterinary Pathology (ABPV) and the Brazilian Association of Veterinary Oncology (ABROVET).[...](AU)

AVALIAÇÃO DA EXPRESSÃO GÊNICA E PROTÉICA DA VIA mTOR/4EBP1/eIF4E NOS CARCINOMAS PROSTÁTICOS CANINOS

O câncer é uma doença complexa que precisa de um microambiente favorável para seu crescimento e progressão. Esse microambiente tumoral esta constituido por células neoplásicas, vasos sanguíneos, células imunes, fibroblastos e a matriz extracellular (MEC). Geralmente, as células neoplásicas apresentam modificações nas suas vias de sinalização. No homem, a via mTOR/4E-BP1/eIF4E foi descrita como alterada em diferentes tumores, incluindo o câncer de próstata (CP).Além do homem, o cão é espécie doméstica que desenvolve com mais frequência o CP, sendo considerada um potencial modelo para estudos na área de Oncologia Comparada. Devido à limitada informação sobre a via mTOR/4E-BP1/eIF4E e os componentes da MEC nos CP caninos, o objetivo deste estudo foi avaliar a expressão gênica e protéica de mTOR, 4E-BP-1 e eIF4E neste tipo de tumor. Outrossim, avaliar a expressão dos colágenos (C-I e C-III) pela técnica Picrosirius (PSR) e imuno-histoquímica no tecido prostático normal e neoplásico. Foram utilizadas 35 amostras de tecido prostático caninos. Identificou-se alta expressão protéica de p-mTOR e eIF4E nos CP caninos com alto GS ( 8), assim como, correlação positiva entre essas proteínas. Nos colágenos não foi observada diferença de expressão quando comparadas amostras de próstata normal e CP canino. De forma similar com o CP humano, estes resultados sugerem que p-mTOR e eIF4E podem ser bons marcadores para o processo carcinogênico prostático canino e estão correlacionados com alto GS. Além disso, a distribuição de colágenos foi similar no tecido prostático normal e neoplásico.

Cancer is a complex disease that needs a favorable microenvironment for its growth and progression. This tumor microenvironment consists of neoplastic cells, blood vessels, immune cells, fibroblasts and extracellular matrix (ECM). Generally, neoplastic cells show modification in their signaling pathways. In men, the mTOR/4E-BP1/eIF4E pathway has been described as altered in different tumors, including prostate cancer (PC). Apart from men,the dog is the only species that develops with high frequencythePC, being considered a potential model for comparative oncology initiatives. Due to limited information on this pathway and ECM components in canine tumors, this study aimed to investigate mTOR, 4E-BP1 and eIF4E gene and protein expression in canine PC. Additionally, to evaluate the expression of collagens (C-I and C-III) by Picrosirius Red and Immunohistochemistry in normal samples and canine PC. Were used a total of 35 formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) samples from canine prostatic tissue. We identified higher p-mTOR and eIF4E protein levels in the canine PC with higher GS ( 8), as well as, significant positive correlation between these proteins. No difference statistical was observed in the collagen expression between normal samples and canine PC. Similar to human PC; our data suggested that p-mTOR and eIF4E good markers for canine prostatic carcinogenic process and are correlated with higher GS. Also, the distribution and collagen levels are similar in normal and neoplastic canine prostate.

CARACTERIZAÇÃO DA FUNÇÃO DO IGF2BP-1 NO COMPORTAMENTO DO OSTEOSSARCOMA CANINO

A medicina comparativa torna-se cada vez mais importante para obtenção de estudos aprofundados em diversas áreas incluindo a oncologia, possibilitando melhor conhecimento da genética do câncer e desenvolvimentos de novas terapias. A expressão do IGF2BP-1 tem sido correlacionada com lesões pré-neoplásicas e neoplasias de maior agressividade, além de estar correlacionada com mau prognóstico em pacientes oncológicos com melanomas, sarcomas e carcinomas. A proposta geral desta pesquisa é identificar a expressão do IGF2BP-1 em linhagens celulares de osteossarcoma (OSA) canino e murino, bem como correlacionar sua expressão com o comportamento celular e avaliar a intensidade de marcação desta proteína através de imuno-histoquímica em amostras de OSA canino. Os resultados deste ensaio demonstraram que o IGF2BP-1 reduziu o potencial de formação de colônias, aumentou o potencial de invasão e migração celular e gerou aumento da expressão dos genes ABCG2, AXIN2, BTrCP, VEGF, CD133 e C-MYC em células de OSA murinho. A expressão deste gene em células de cão aumentou a formação de colônias, reduziu o potencial de invasão e migração celular e o silenciamento parcial do IGF2BP-1 gerou redução da expressão dos genes CCND1, CD133, CMYC e FZD6 em células de OSA canino. O silenciamento parcial do IGF2BP-1 gerou aumento dos genes AXIN-2 e VEGF em células de OSA canino. A imuno-histoquímica é um método eficaz para detecção do IGF2BP-1 em amostras de OSA canino evidenciando marcação citoplasmática forte na maioria das amostras, por meio de análise qualitativa. Com este estudo, podemos entender melhor a complexidade genética do câncer, concluindo que o IGF2BP-1 induz a modificações epigenéticas celulares levando a alterações indutoras ou supressoras tumorais através da ativação de diversas vias que contribuem para regulação do metabolismo celular, proliferação, angiogênese, quimiorresistência entre outras características que podem contribuir para o processo de tumorigênese.

Comparative medicine is becoming increasingly important to obtain studies in several areas including oncology, enabling better knowledge of cancer genetics and developments of new therapies. The expression of IGF2BP-1 has been correlated with pre-neoplastic lesions and neoplasms with more aggressiveness, in addition to being correlated with poor prognosis in cancer patients with melanomas, sarcomas and carcinomas. The general proposal of this research is to identify the expression of IGF2BP-1 in canine and murine osteosarcoma (OSA) cell lines, as well as to correlate its expression with cellular behavior to evaluate the staning intensity of this protein through immunohistochemistry in samples of canine OSA. The results of this assay demonstrated that IGF2BP-1 reduced the potential for colony formation, increased cell invasion and migration potential, and increased expression of genes ABCG2, AXIN2, BTrCP, VEGF, CD133 and C-MYC in murine OSA cells lines. Expression of this gene in canine OSA cells increased colony formation, reduced potential of cell invasion and migration, and partial silencing of IGF2BP-1 generated reduced expression of the CCND1, CD133, CMYC and FZD6 genes in canine OSA cells. Partial silencing of IGF2BP-1 generated increased AXIN-2 and VEGF genes in canine OSA cells. Immunohistochemistry is an effective method for detecting IGF2BP-1 in canine OSA samples showing strong cytoplasmic staining in most of samples through qualitative analysis. In this study, we can better understand the genetic complexity of cancer, concluding that IGF2BP-1 induces cellular epigenetic changes leading to tumor-inducing or suppressive changes through the activation of several pathways that contribute to the regulation of cellular metabolism, proliferation, angiogenesis, chemoresistance among other features that may contribute to the process of tumorigenesis.

VALOR CLÍNICO DO CEA E DA AFP NA DETECÇÃO DE CARCINOMA DE MAMA EM CADELAS

Tumores mamários são altamente prevalentes em cadelas e apresentam comportamento biológico semelhante ao das mulheres, fazendo da cadela um modelo para o estudo comparativo. Em mulheres, a utilização dos marcadores sorológicos está bem consolidada, sendo um método útil parao acompanhamento da paciente desde o diagnóstico. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o comportamento do antígeno carcionoembrionário (CEA) e da Alfafetoproteína (AFP) em cadelas com carcinomas mamários metastáticos e não metastáticos, para futuramente utilizá-los no monitoramento e prognóstico das pacientes. Para tanto, foram utilizados soros de 35 cadelas, separados em três grupos; G1 (n=10): grupo controle (cadelas livres de neoplasias); G2 (n=20):cadelas com carcinoma de mama sem metástase em linfonodo e G3 (n=5): cadelas com carcinoma de mama com metástase em linfonodo. OCEA e a AFP foram dosados por ELISA e os resultados foram avaliados pelo teste de Tukey com nível de significância de 5%, quanto à presença de cada marcador no soro da paciente, sua relação com o comportamento biológico da neoplasia e as alterações clínico-patológicas encontradas. Os resultados mostraram que os valores de CEA (p<0,0001) e AFP (p=0,0004) foram significantemente maiores nas cadelas com carcinoma de mama, em comparação as saudáveis. Além disso, os valores de CEA estavam significantemente aumentados nas cadelas com metástase (p<0,0001) e naquelas com tumores maiores do que 3cm de diâmetro (p=0.0091). Houve aumento significante da AFP em animais castrados (p=0,0307).Não houve relação entre as variáveis grau histológico, necrose, ulceração e inflamação para ambos os marcadores. Os resultados evidenciaram que o CEA se mostrou eficiente em detectar carcinoma de mama em cadelas e pode ser um marcador promissor para o acompanhamento de cadelas com neoplasia mamária. Estudos futuros, que incluam o follow up das pacientes serão necessários para que esse marcador seja efetivamente incluído na rotina clínica da oncologia veterinária como marcador de prognóstico

Mammary tumors are highly prevalent in bitches and present biological behavior for women, making the bitch a model for the comparative study. In women, the use of serological markers for prognostic determination is well established, being a useful method for monitoring patientssince his diagnosis. Thus, the objective of this study was to evaluate the behavior of carcinogenic antigen (CEA) and alpha-fetoprotein (AFP) in bitches with mammary tumors, with the aim of using those as diagnostic and prognostic markers in these animals. For that, sera from 35 bitches were used and separated into three groups; G1 (n = 10) control group; G2 (n = 15) animals with mammary carcinomas with no lymph node metastasis and G3 (n = 5) animals with mammary carcinomas with lymph node metastasis. Markers were measured by ELISA method. Results regarding the presence of markers in sera of each patient, its relation with tumor behavior and clinical-pathological variables were analyzed with Tukey test with a significance level of 5%. Results showed that values of CEA (p <0.0001) and AFP (p = 0.0004) were significantly higher in bitches with mammary tumors. In addition, CEA values significantly increasesin bitches with metastasis (p <0.0001) and larger than 3.0 cm tumors (p = 0.0091). There was a significant increase in AFP in intact bitches (p = 0.0307). There was no significance among histological grade, necrosis, ulceration and inflammation for both markers. CEA was efficient in detecting the presence of mammary carcinomas and may be a promising marker for the follow-up of female dogs with mammary tumors. Future studies, including follow-up of patients with serial measures should be performed to include these markers in the clinical routine of veterinary oncology

Investigação do dicloroacetato de sódio (DCA) para tratamento de mastocitomas caninos: estudos in vitro

O efeito Warburg ou glicólise aeróbica é o fenômeno em que células tumorais convertem a glicose a ácido lático mesmo na presença de oxigênio, diferentemente das células normais do organismo que realizam o ciclo de Krebs e a fosforilação oxidativa. O dicloroacetato de sódio (DCA) ativa a piruvato desidrogenase (PDH), resultando no aumento de piruvato dentro da mitocôndria e no restabelecimento do metabolismo normal da respiração celular. Estudos apontam que a associação de DCA com metformina ou omeprazol potencializam esse efeito. Os mastocitomas caninos são neoplasias originárias de mastócitos, sendo bastante prevalente entre os cães, por isso a importância de averiguar novas terapias para esta doença. O objetivo geral deste projeto foi investigar o efeito do DCA em mastocitomas caninos, por meio da realização de ensaios in vitro. Também foram investigados os efeitos do tratamento com DCA associado ao omeprazol ou merformina em linhagens de mastocitoma canino. As linhagens de mastocitoma canino utilizadas, grau 2 e 3, foram estabelecidas no Laboratório de Oncologia Experimental e Comparadas da FMVZ/USP e foram cultivadas em meio AIM-V. As células foram tratadas com diversas concentrações de DCA (de 0,31 a 100mM). O DCA 0.1, 0.5, 1.0, 5, 10 e 20mM foi também testado em associação com metformina (0.02, 0.2 e 2mM) ou com omeprazol (0.02, 0.1 e 0.2mM). Após os tratamentos, foi realizado ensaio para analisar a viabilidade celular utilizando o método do cristal violeta, com leituras em 3 e 5 dias. Ao contrário do que era esperado, o tratamento com dicloroacetato isolado ou com associações aumentou a população de células neoplásicas principalmente nas concentrações de 10 e 20mM. Num experimento realizado com três linhagens diferentes de mastocitomas caninos foram utilizadas concentrações de 10 a 100mM de DCA, e mostrou que a partir de 60mM há diminuição da viabilidade celular, sendo que o efeito se intensifica com o aumento das concentrações de DCA. Concluímos que o tratamento com DCA isoladamente, em concentrações de até 60mM, ou as associações com metformina e omeprazol não foram eficazes em diminuir a população de células de mastocitomas canino de graus 2 e 3 in vitro. Consideramos que a realização deste estudo foi importante para obter informações sobre os efeitos do DCA e associações em mastocitomas caninos. Os resultados deverão ser divulgados e evitarão o uso indiscriminado deste fármaco, cujas consequências poderiam ser adversas para os cães portadores de mastocitomas.

The Warburg effect or aerobic glycolysis is a phenomenon in which tumor cells convert glucose to lactic acid in the presence of oxygen, unlike normal cells in the body that perform the Krebs cycle and oxidative phosphorylation. Sodium dichloroacetate (DCA) activates pyruvate dehydrogenase (PDH), resulting in increased pyruvate within the mitochondria and in the reestablishment of normal metabolism of cellular respiration. Studies indicate that the association of DCA with metformin or omeprazole potentiate this effect. Canine mastocytomas are neoplasms originating from mast cells, being quite prevalent among dogs, so the importance of investigating new therapies for this disease. The general objective of this project was to investigate the effect of DCA on canine mast cell tumors, by performing in vitro tests. The treatment with dca DCA was then associated with omeprazole or merformin in canine mastocytoma cell lines. The canine mast cell tumor lines used, grade 2 and 3, were established in the Laboratory of Experimental and Comparative Oncology of FMVZ / USP and were cultured in AIM-V medium.. Treatment with DCA alone was performed with varying concentrations (0.31 mM to 100 mM). The associations were performed with 0.1, 0.5, 1.0, 5, 10 and 20 mM of DCA with 0.02, 0.2 and 2 mM of metformin or with 0.02, 0.1 and 0.2 mM of omeprazole. After the treatments, an assay was performed to analyze cell viability using the crystal violet method, with readings at 3 and 5 days. Contrary to our expectations, treatment with dichloroacetate alone or with combinations increased the population of neoplastic cells mainly in the concentrations of 10 and 20mM. In an experiment with three different canine mastocytomas cell lines treated with DCA (10 to 100mM of DCA.), it was found that from 60mM the cell viability was decreased. This effect was intensified with increasing DCA concentrations. We conclude that treatment with DCA alone, at concentrations up to 60mM, or associated with metformin and omeprazole were not effective to decrease the population of canine mast cell tumors of grades 2 and 3 in vitro. The results should be disclosed and will avoid the indiscriminate use of this drug, the consequences of which could be adverse for dogs with mastocytomas.

Consensus for the Diagnosis, Prognosis and Treatment of Canine Mammary Tumors

The purpose of this paper is to establish criteria that could guide the diagnosis, prognosis and treatment of canine mammary neoplasias. It was elaborated during the Mammary Pathology Meeting: Diagnosis, Prognosis and Treatment of the Canine Mammary Neoplasm, held on November 6th and 7th, 2010 in Belo Horizonte ­ MG, Brazil, sponsored by the Laboratory of Comparative Pathology ­ UFMG, with the support of the Brazilian Association of Veterinary Pathology (ABPV) and Brazilian Association of Veterinary Oncology (ABROVET). Academics from several regions of Brazil were present and contributed to this work.(AU)

CARACTERIZAÇÃO DE MODELO IN VITRO DE CÉLULAS INICIADORAS TUMORAIS ORIUNDAS DE NEOPLASIAS MAMÁRIAS CANINAS

As neoplasias mamárias apresentam um grande desafio tanto para a medicina humana, quanto para a medicina veterinária. Esses tumores apresentam ampla heterogeneidade intertumoral e intratumoral, dificultando assim a busca por tratamentos eficazes. Recentemente, pesquisadores tem voltado sua atenção para uma população de células que apresentam características muito semelhantes as células-tronco. São as chamadas células iniciadoras de tumores (CITs). Estas são descritas como as principais responsáveis por falhas nas quimioterapias e no surgimento de recidivas tumorais, devido ao seu potencial tumorigênico, de auto-renovação e de resistência a drogas antineoplásicas. Entretanto, o estudo dessas células é limitado pelas dificuldades no isolamento e na caracterização pós-enriquecimento dessas células, devido à perda do fenótipo em modelos in vitro. Sendo assim, vários estudos estão buscando maneiras alternativas de enriquecer essa população. Uma das maneiras mais utilizadas, baseia-se na indução do processo de transição epitélio-mesenquimal, através da superexpressão de fatores de transcrição como SNAI1, SLUG, ZEB1 e ZEB2. Sendo assim, nós objetivamos expressar de maneira exógena os fatores de transcrição SLUG e ZEB1 em células oriundas de carcinomas mamários caninos, caracterizar seus efeitos nessas células e observar se esses fatores de transcrição seriam capazes de induzir o fenótipo de CIT. Primeiramente, quatro amostras de carcinomas mamários caninos foram analisados quanto sua morfologia e os níveis de expressão gênica de quatro fatores de transcrição associados a transição epitélio-mesenquimal: SLUG, STAT3, ZEB1 e ZEB2. Após, nós selecionamos duas dessas amostras (CC-20E e CL-28E), que apresentavam morfologia típica de células epiteliais e baixa expressão dos fatores de transcrição citados acima e expressamos de maneira exógena e de forma estável os fatores de transcrição SLUG e ZEB1, através do processo de transdução lentiviral. Entretanto, apenas a transdução com os plasmídeos contendo a região codificante de SLUG foi eficiente. Sendo assim, nós avaliamos os efeitos da expressão exógena de SLUG nas células CC-20E e CL-28E, quanto a alteração de morfologia e expressão de filamentos intermediários como citoqueratina, vimentina e actina. Além disso, nós avaliamos se a expressão exógena de SLUG poderia regular a expressão de outros genes associados a EMT, além de genes supressores de tumores, alvos de SLUG. Por fim, nós avaliamos se a expressão exógena de SLUG poderia induzir ao fenótipo de CITs, verificando se havia alteração na sensibilidade das células aos quimioterápicos doxorrubicina e paclitaxel, além de avaliar o potencial tumorigênico e de auto-renovação dessas células em cultivos de baixa aderência. A expressão exógena de SLUG nas células CC-20E e CL-28E, não induziu a alterações na morfologia epitelial das células. Entretanto, as células alteraram sua disposição em monocamada no cultivo, formando tipos de túbulos semidiferenciados, característicos do processo de EMT híbrido ou parcial. Além, disso, houve um equilíbrio entre a expressão dos filamentos intermediários de citoqueratina e vimentina nas células, além do aumento na expressão dos genes CDH1 (E-caderina) e CDH2 (N-caderina), resultado que sustentou a indução de EMT parcial. O processo de EMT parcial induziu maior resistência ao quimioterápico paclitaxel, além de potencializar a tumorigenecidade e a capacidade de auto-renovação das células em cultivos de baixa aderência. Sendo assim, no presente estudo, nós obtivemos um cultivo com características que mimetizam as CITs, demonstrando que os processos que induzem esse fenótipo são semelhantes tanto na espécie canina, quanto em humanos, sustentando a hipótese de que neoplasias mamárias caninas podem servir como modelo para o estudo das CITs e, consequentemente, do desenvolvimento neoplásico de tumores sólidos.

Mammary neoplasms present a major challenge for both human and veterinary medicine, due to intertumoral and intratumoral heterogeneity, hindering the search for effective treatments. Recently, researchers has highlighted a population of cells with features very similar to stem cells. Known as Tumor-Initiating Cells (TICs), they are described as the main responsible for chemotherapy failures and tumor recurrence, due to their tumorigenic potential, self-renewal ability and drug resistance. The study of TICs is limited mainly by their difficult isolation owing to specific markers absence, and furthermore, cells lose their phenotype when placed in vitro. Therefore, several studies are seeking for alternatives to enrich this population in regular cultures. One way is based on the epithelial-mesenchymal transition induction through of transcription factors overexpression, such as SNAI1, SLUG, ZEB1 e ZEB2. So, the aim of this study was to overexpresse the SLUG and ZEB1 transcription factors in a cell culture derived from canine mammary carcinomas, evaluate its effects and observe whether these transcription factors would be capable of inducing the TIC phenotype. First, four canine mammary carcinomas cell cultures were analyzed for their morphology and gene expression levels of four transcription factors associated with epithelial-mesenchymal transition: SLUG, STAT3, and ZEB1 ZEB2. After, we selected two samples (CC-20E and CL-28E) with typical morphology of epithelial cells and low expression of the transcription factors mentioned above. We then overexpress, stably, the transcription factors SLUG and ZEB1 by lentiviral transduction, However, only SLUG transduction was efficient. Then, we evaluated the effects of SLUG overexpression in CC-20E and CL-28E cells as the change of morphology, expression of intermediate filaments as cytokeratin, vimentin and actin. In addition, we evaluated whether SLUG overexpression could regulate the expression of other EMT-associated genes as well as tumor suppressor genes, and assessed evaluated the tumorigenic potential and self-renewal of these cells in low adherence cultures. Finally, we assessed whether SLUG overexpression could induce drug resistance through doxorubicin and paclitaxel sensivity assay. The SLUG overexpression did not induce modification in epithelial cell morphology, however, cells changed their arrangement in monolayer culture, inducing the semidifferentiated tubules, typical of hybrid or partial EMT process. In, addition, there was a balanced expression between cytokeratin and vimentin, possibly explained by an increase in CDH1 expression (E-cadherin) and CDH2 (N-cadherin) typical of partial EMT. Furthermore, the partial EMT generated cells presenting paclitaxel resistance, and enhanced the tumorigenic potential and self-renewal capacity of the cells on low adherent plates. Thus, in this study, we obtained a cell culture exhibiting features that mimics the TICs, demonstrating the mechanisms which regulate this phenotype are similar in dogs and humans, supporting the hypothesis that canine mammary carcinomas are a great model for the study of TICs and solid tumors development.