Pathology, microbiology, and molecular evaluation of tissues from equids serologically positive for Burkholderia mallei in Midwestern Brazil / Avaliação patológica, microbiológica e molecular em amostras de tecidos de equídeos sorologicamente positivos para Burkholderia mallei no Centro-Oeste do Brasil

Glanders is a disease caused by the bacterium Burkholderia mallei that primarily affects horses, mules and donkeys. The disease can cause lesions in the skin, lungs and several other organs. However, it often manifests as an asymptomatic disease. In Brazil, serological tests of high sensitivity and specificity are used to assist in the detection of antibodies against B. mallei and to contribute to the control of the disease. However, due to the mandatory euthanasia of seroreactive animals, equids with positive serology for B. mallei and asymptomatic generated great conflicts between breeders, veterinarians and diagnostic laboratories. This study clarifies the limitations of complementary diagnostic tests for detecting B. mallei. It describes the clinical, morphological and laboratory findings in 24 equines from different municipalities in the Mato Grosso State, Brazil, which reacted to the complement fixation test and were positive in the western blotting test for glanders. Data and tissue samples were collected from 24 horses for histological, microbiological and molecular analysis. In 23 horses, no clinical signs, morphological alterations, microbiological isolation, or molecular detection would characterize B. mallei infection. On the other hand, samples from an asymptomatic horse without lesional alterations showed sequence amplification compatible with B. mallei in the PCR. Considering that the infection by B. mallei is subject to the application of animal sanitary defense measures and that, by international requirement and national legislation, the serological results are tools that should support the sanitation procedures for the error of the bacteria in the Mato Grosso State, Brazil.

Mormo é uma enfermidade causada pela bactéria Burkholderia mallei que acomete primariamente cavalos, mulas e burros. A doença pode causar lesões na pele, pulmões e em diversos outros órgãos, entretanto frequentemente manifesta-se como uma enfermidade assintomática. No Brasil são utilizados testes sorológicos de elevada sensibilidade e especificidade para auxiliar na detecção de anticorpos contra B. mallei e contribuir para controle da doença. Porém, devido à obrigatoriedade da eutanásia de animais sororeagentes, os equídeos com sorologia positiva para B. mallei e assintomáticos geraram grandes embates entre criadores, médicos-veterinários e laboratórios de diagnóstico. Este trabalho esclarece as limitações dos testes diagnósticos complementares para detecção de B. mallei e descreve os achados clínicos, morfológicos e de exames laboratoriais em 24 equídeos, procedentes de diferentes municípios do estado de Mato Grosso, Brasil, que reagiram ao teste de fixação de complemento e foram positivos no teste de "western blotting" para mormo. Foram colhidos dados e amostras de tecidos de 24 equídeos para análise histológica, microbiológica e molecular. Em 23 equídeos não existiam sinais clínicos, alterações morfológicas, isolamento microbiológico ou detecção molecular que caracterizassem infecção por B. mallei. Por outro lado, amostras de um cavalo assintomático e sem alterações lesionais apresentaram amplificação de sequência compatível com B. mallei na PCR. Considerando que a infecção por B. mallei é passível da aplicação de medidas de defesa sanitária animal e que por exigência internacional e da legislação nacional, os resultados sorológicos são ferramentas que devem amparar os procedimentos de saneamento para erradicação da bactéria no estado de Mato Grosso, Brasil.

Historical highlights regarding glanders, from 2007 to 2017, in the state of Maranhão, Brazil / Destaques históricos do mormo, de 2007 a 2017, no estado do Maranhão, Brasil

Glanders is an infectious disease of equids caused by Burkholderia mallei, a facultative intracellular non-mobile Gram-negative bacterium that can be transmitted to other animals and humans. This study described glanders cases reported in the state of Maranhão, located within an Amazon-Cerrado transition region in northeastern Brazil, from 2007 to 2017. A database in an electronic spreadsheet (Microsoft Excel 2010) was developed containing information on the number of positive animals according to age, sex, purpose, year and month, municipality and mesoregion of origin of the animal. The descriptive analyzis was performed on data provided by the State Agency for Agricultural and Livestock Protection of the state of Maranhão (AGED), and by the official private laboratory. As the database did not have information data about negative animals, possible risk factors could not be evaluated. Among the total of 62,555 equids were evaluated by means of the complement fixation test (CFT), 59,036 were horses, 2,981 mules and 538 donkeys. Thirty-five samples (0.06%) reacted in the CFT. Five additional samples were by the western blot technique and three of them were positive. All the reactive horses (Equuscaballus) were from rural areas. Results presented here indicate that glanders may be endemic in the state of Maranhão and is a public health concern.

O mormo é uma doença infecciosa de equídeos causada por Burkholderia mallei, uma bactéria Gram-negativa intracelular, não móvel e facultativa que pode ser transmitida a outros animais e humanos. O objetivo deste estudo foi descrever os casos de mormo relatados no estado do Maranhão, em uma região de transição Amazônia-Cerrado do Nordeste do Brasil, no período de 2007 a 2017. Um banco de dados em uma planilha eletrônica (Microsoft Excel 2010) foi desenvolvido contendo informações sobre o número de animais positivos de acordo com a idade, sexo, finalidade, ano, mês, municípios e mesorregiões de origem do animal. A análise descritiva foi realizada sobre os dados fornecidos pela Agência Estadual de Defesa Agropecuária do Estado do Maranhão (AGED), e pelo laboratório privado oficial. Como o banco de dados não possui informações sobre animais negativos, possíveis fatores de risco não puderam ser avaliados. Entre o total de 62.555 equídeos foram avaliados com o teste de fixação do complemento (CFT), 59.036 eram cavalos, 2.981 mulas e 538 jumentos. Trinta e cinco (0,06%) amostras reagiram ao CFT. Cinco amostras adicionais foram testadas pela técnica de western blot e três foram positivas. Todos os animais positivos foram cavalos (Equus caballus) da área rural. Os resultados indicam que o mormo pode ser endêmico no estado do Maranhão e uma preocupação de saúde pública.

Survey of bovine brucellosis on the island of Fernando de Noronha, Pernambuco, Brazil / Investigação sobre brucelose bovina na Ilha de Fernando de Noronha, Pernambuco, Brasil

Considering the lack of information about livestock diseases on Brazilian oceanic islands, the occurrence of bovine brucellosis was investigated on the island of Fernando de Noronha, state of Pernambuco, Brazil. Serum samples were collected in October 2009, from all the 105 cows raised on the island at that time. These were examined concurrently using the Rose Bengal test and the Complement Fixation Test. All the samples were negative in both tests, indicating that the cows on the island were likely free from infection by smooth forms of Brucella. These results can partly be explained by the prohibition of introduction and importation of both small and large-sized animals that had been implemented through District Decree 19 of February 28, 2004.(AU)

Tendo em vista a inexistência de informações sobre a ocorrência da brucelose bovina em ilhas oceânicas brasileiras, investigou-se a presença da infecção na ilha de Fernando de Noronha, Estado de Pernambuco, Brasil. Soros de todas as 105 fêmeas bovinas existentes, colhidos em outubro de 2009, foram examinados concomitantemente pelo teste do Antígeno Acidificado Tamponado e pela Reação de Fixação de Complemento. Todas as amostras foram negativas em ambos os testes, indicando que provavelmente os animais presentes na ilha encontravam-se livres da infecção por Brucella. Estes resultados podem ser explicados, em partes, pela proibição da introdução e importação de grandes e pequenos animais, implementada pelo Decreto Distrital 19, de 28 de fevereiro de 2004.(AU)

Seroprevalence of antibodies against smooth Brucella in small ruminants in the states of Sergipe, Bahia, Ceará and Paraíba / Soroprevalência de anticorpos contra Brucella lisa em pequenos ruminantes dos estados de Sergipe, Bahia, Ceará e Paraíba

Brucellosis is a zoonotic disease widespread almost all over the world, representing a significant economic and public health problem. Brucella melitensis, B. suis and B. abortus are considered the most pathogenic species for humans. The most virulent species, B. melitensis is endemic in many parts of the world, particularly the biovar 3 in the Mediterranean and Eastern Europe. Some Latin American countries are seriously affected by biovar 1, especially Mexico, Peru and northern Argentina. Furthermore, while Brazil is considered free of this etiologic agent, one recurrent question is whether this infection really does not occur in Brazil or there is a lack of research/data on the subject. To answer this question, this study aims to investigate the occurrence of antibodies against smooth Brucella in goats and sheep in the states of Sergipe, Paraíba, Ceará and Paraíba. All samples were screened by the Rose Bengal test (RBT). The complement fixation (CFT) and the fluorescence polarization (FPT) tests were used as confirmatory tests. There were no positive samples in the confirmatory tests (both CFT and FPT). We, therefore, conclude that this result reinforces the previous knowledge regarding the exotic status of B. melitensis infection in Brazil.

A brucelose é uma das doenças de caráter zoonótico mais difundidas no mundo, representando um grande problema econômico e de saúde pública. A Brucella melitensis, a B. suis e a B. abortus são consideradas as mais patogênicas espécies para humanos. A espécie apontada como a mais virulenta é a B. melitensis, endêmica em várias partes do mundo, particularmente o biovar 3 na região do Mediterrâneo e na Europa Oriental. Alguns países da América Latina são seriamente afetados pelo biovar 1, especialmente México, Peru e norte da Argentina. O Brasil é considerado livre desse agente etiológico, porém sempre há o questionamento se a infecção não ocorre ou se falta pesquisa. Diante dessa questão, o objetivo deste trabalho foi investigar a ocorrência de anticorpos contra amostras lisas de Brucella em caprinos e ovinos dos estados de Sergipe, Bahia, Ceará e Paraíba. Todas as amostras foram submetidas triagem pelo teste do antígeno acidificado tamponado (AAT). Como testes confirmatórios, utilizou-se a reação de fixação de complemento (RFC) e também o teste de polarização fluorescente (TPF). Nenhuma amostra foi positiva nos testes confirmatórios (RFC e TPF). Esse resultado comprova que a infecção por B. melitensis é exótica no Brasil.

Fluorescent polarization assay, two versions of indirect and competitive enzyme- linked immunoassay for brucellosis diagnosis in vaccinated buffaloes (Bubalus bubalis) / Teste de polarização fluorescente, duas versões de imunoensaio enzimático indireto e imunoensaio competitivo para diagnóstico de brucelose em búfalos vacinados (Bubalus bubalis)

ABSTRACT: The fluorescence polarization assay (FPA), two variants (V) of the indirect enzyme-linked immunosorbent assay (I-ELISA) and the competitive enzyme-linked immunosorbent assay (C-ELISA) were evaluated in buffaloes to detect antibodies against Brucella spp. The V1 of I-ELISA identifies them through the monoclonal (M23) anti-bovine IgG (I-ELISAM23) and the V2 through the ProteinA / G (I-ELISA-A/G). Serum samples of 862 buffaloes (Bubalus bubalis) from the Northeast of Argentina (NEA) were analyzed using the complement fixation test (CFT) as the reference. Receiving Operator Characteristic (ROC) analysis defined for the area under the curve (AUC) determined the cutoff points, sensitivity (Se) and specificity (Sp) for each test. CFT identified 107 positive and 755 negative sera. The best AUC (0.986), Concordance with CFT (96.3%) and kappa value (0.843) was obtained by I-ELISA A/G test. This assay showed the highest Se (95.33%) and C-ELISA the highest Sp (97%). FPA failed to measure the antibodies in 23 (2.65%) serum samples due to unsuccessful reading. I-ELISA M23 proved to be ineffective to diagnose brucellosis in bubaline sera. The four serological tests showed cutoff points lower than those standardized for bovines. As conclusion, I-ELISA A/G, C-ELISA and FPA with its limitations would be effective techniques for the diagnosis of brucellosis in buffaloes in the NEA, requiring an appropriate cut-off point to guarantee their maximum performance in this species.

RESUMO: O ensaio de polarização de fluorescência (FPA), duas variantes (V) do ensaio imunoenzimático indireto (I-ELISA) e o ensaio imunoenzimático competitivo (C-ELISA), foram avaliados em búfalos para detectar anticorpos contra Brucella spp. O V1 do I-ELISA os identifica através do IgG monoclonal (M23) anti-bovino (I-ELISAM23) e o V2 ​​através da Proteína A / G (I-ELISA-A / G). Amostras de soro de 862 búfalos (Bubalus bubalis) do Nordeste da Argentina (NEA) foram analisadas usando o teste de fixação do complemento (CFT) como referência. A análise Receiving Operator Characteristic (ROC) definida pela área sob a curva (AUC) determinou os pontos de corte, sensibilidade (Se) e especificidade (Sp) de cada teste. A CFT identificou 107 soros positivos e 755 soros negativos. Os melhores valores de AUC (0.986), concordância com CFT (96.3%) e kappa (0.843) foram obtidos pelo teste I-ELISA A / G. Este ensaio mostrou a maior Se (95.33%) e C-ELISA a maior Sp (97%). O FPA falhou em medir os anticorpos em 23 (2,65%) amostras de soro devido à falha na leitura. O I-ELISA M23 provou ser ineficaz para o diagnóstico de brucelose em soros bubalinos. Os quatro testes sorológicos mostraram pontos de corte inferiores aos padronizados para bovinos. Em conclusão, I-ELISA A / G, C-ELISA e FPA com suas limitações seriam técnicas eficazes para o diagnóstico de brucelose em búfalos no NEA, exigindo um ponto de corte adequado para garantir seu desempenho máximo nesta espécie.

Fluorescent polarization assay, two versions of indirect and competitive enzyme- linked immunoassay for brucellosis diagnosis in vaccinated buffaloes (Bubalus bubalis) / Teste de polarização fluorescente, duas versões de imunoensaio enzimático indireto e imunoensaio competitivo para diagnóstico de brucelose em búfalos vacinados (Bubalus bubalis)

The fluorescence polarization assay (FPA), two variants (V) of the indirect enzyme-linked immunosorbent assay (I-ELISA) and the competitive enzyme-linked immunosorbent assay (C-ELISA) were evaluated in buffaloes to detect antibodies against Brucella spp. The V1 of I-ELISA identifies them through the monoclonal (M23) anti-bovine IgG (I-ELISAM23) and the V2 through the ProteinA / G (I-ELISA-A/G). Serum samples of 862 buffaloes (Bubalus bubalis) from the Northeast of Argentina (NEA) were analyzed using the complement fixation test (CFT) as the reference. Receiving Operator Characteristic (ROC) analysis defined for the area under the curve (AUC) determined the cutoff points, sensitivity (Se) and specificity (Sp) for each test. CFT identified 107 positive and 755 negative sera. The best AUC (0.986), Concordance with CFT (96.3%) and kappa value (0.843) was obtained by I-ELISA A/G test. This assay showed the highest Se (95.33%) and C-ELISA the highest Sp (97%). FPA failed to measure the antibodies in 23 (2.65%) serum samples due to unsuccessful reading. I-ELISA M23 proved to be ineffective to diagnose brucellosis in bubaline sera. The four serological tests showed cutoff points lower than those standardized for bovines. As conclusion, I-ELISA A/G, C-ELISA and FPA with its limitations would be effective techniques for the diagnosis of brucellosis in buffaloes in the NEA, requiring an appropriate cut-off point to guarantee their maximum performance in this species.

O ensaio de polarização de fluorescência (FPA), duas variantes (V) do ensaio imunoenzimático indireto (I-ELISA) e o ensaio imunoenzimático competitivo (C-ELISA), foram avaliados em búfalos para detectar anticorpos contra Brucella spp. O V1 do I-ELISA os identifica através do IgG monoclonal (M23) anti-bovino (I-ELISAM23) e o V2 ​​através da Proteína A / G (I-ELISA-A / G). Amostras de soro de 862 búfalos (Bubalus bubalis) do Nordeste da Argentina (NEA) foram analisadas usando o teste de fixação do complemento (CFT) como referência. A análise Receiving Operator Characteristic (ROC) definida pela área sob a curva (AUC) determinou os pontos de corte, sensibilidade (Se) e especificidade (Sp) de cada teste. A CFT identificou 107 soros positivos e 755 soros negativos. Os melhores valores de AUC (0.986), concordância com CFT (96.3%) e kappa (0.843) foram obtidos pelo teste I-ELISA A / G. Este ensaio mostrou a maior Se (95.33%) e C-ELISA a maior Sp (97%). O FPA falhou em medir os anticorpos em 23 (2,65%) amostras de soro devido à falha na leitura. O I-ELISA M23 provou ser ineficaz para o diagnóstico de brucelose em soros bubalinos. Os quatro testes sorológicos mostraram pontos de corte inferiores aos padronizados para bovinos. Em conclusão, I-ELISA A / G, C-ELISA e FPA com suas limitações seriam técnicas eficazes para o diagnóstico de brucelose em búfalos no NEA, exigindo um ponto de corte adequado para garantir seu desempenho máximo nesta espécie.

Fluorescent polarization assay, two versions of indirect and competitive enzyme- linked immunoassay for brucellosis diagnosis in vaccinated buffaloes (Bubalus bubalis) / Teste de polarização fluorescente, duas versões de imunoensaio enzimático indireto e imunoensaio competitivo para diagnóstico de brucelose em búfalos vacinados (Bubalus bubalis)

The fluorescence polarization assay (FPA), two variants (V) of the indirect enzyme-linked immunosorbent assay (I-ELISA) and the competitive enzyme-linked immunosorbent assay (C-ELISA) were evaluated in buffaloes to detect antibodies against Brucella spp. The V1 of I-ELISA identifies them through the monoclonal (M23) anti-bovine IgG (I-ELISAM23) and the V2 through the ProteinA / G (I-ELISA-A/G). Serum samples of 862 buffaloes (Bubalus bubalis) from the Northeast of Argentina (NEA) were analyzed using the complement fixation test (CFT) as the reference. Receiving Operator Characteristic (ROC) analysis defined for the area under the curve (AUC) determined the cutoff points, sensitivity (Se) and specificity (Sp) for each test. CFT identified 107 positive and 755 negative sera. The best AUC (0.986), Concordance with CFT (96.3%) and kappa value (0.843) was obtained by I-ELISA A/G test. This assay showed the highest Se (95.33%) and C-ELISA the highest Sp (97%). FPA failed to measure the antibodies in 23 (2.65%) serum samples due to unsuccessful reading. I-ELISA M23 proved to be ineffective to diagnose brucellosis in bubaline sera. The four serological tests showed cutoff points lower than those standardized for bovines. As conclusion, I-ELISA A/G, C-ELISA and FPA with its limitations would be effective techniques for the diagnosis of brucellosis in buffaloes in the NEA, requiring an appropriate cut-off point to guarantee their maximum performance in this species.(AU)

O ensaio de polarização de fluorescência (FPA), duas variantes (V) do ensaio imunoenzimático indireto (I-ELISA) e o ensaio imunoenzimático competitivo (C-ELISA), foram avaliados em búfalos para detectar anticorpos contra Brucella spp. O V1 do I-ELISA os identifica através do IgG monoclonal (M23) anti-bovino (I-ELISAM23) e o V2 ​​através da Proteína A / G (I-ELISA-A / G). Amostras de soro de 862 búfalos (Bubalus bubalis) do Nordeste da Argentina (NEA) foram analisadas usando o teste de fixação do complemento (CFT) como referência. A análise Receiving Operator Characteristic (ROC) definida pela área sob a curva (AUC) determinou os pontos de corte, sensibilidade (Se) e especificidade (Sp) de cada teste. A CFT identificou 107 soros positivos e 755 soros negativos. Os melhores valores de AUC (0.986), concordância com CFT (96.3%) e kappa (0.843) foram obtidos pelo teste I-ELISA A / G. Este ensaio mostrou a maior Se (95.33%) e C-ELISA a maior Sp (97%). O FPA falhou em medir os anticorpos em 23 (2,65%) amostras de soro devido à falha na leitura. O I-ELISA M23 provou ser ineficaz para o diagnóstico de brucelose em soros bubalinos. Os quatro testes sorológicos mostraram pontos de corte inferiores aos padronizados para bovinos. Em conclusão, I-ELISA A / G, C-ELISA e FPA com suas limitações seriam técnicas eficazes para o diagnóstico de brucelose em búfalos no NEA, exigindo um ponto de corte adequado para garantir seu desempenho máximo nesta espécie.(AU)

Vesicular stomatitis due to Indiana III (Alagoas/VSIV-3) is endemic in Brazilian state of Ceará / Estomatite vesicular causada pelo subtipo Indiana III (Alagoas/VVI-3) é endêmica no estado do Ceará, Brasil

Although Northeast Brazil is considered free of foot and mouth disease (FMD) with vaccination, several economic and health damages are still recorded due to the occurrence of vesicular syndromes that can be evaluated, such as Vesicular Stomatitis (VS). Therefore, this study aimed to confirm the occurrence of this disease and to determine the predominant viral serotype in suspected cases notified to the Official Veterinary Service of Ceará in 2013 performing official diagnostic protocols recommended by the World Organization for Animal Health. After clinical and epidemiological investigation in 46 farms, 32 probable cases of VS were considered with 78 sampled animals, 65 bovines and 13 equines. Serum (54) and epithelium (24) samples were collected. Six (14.6%) of 41 bovines and 8 (61.5%) of 13 equines described seroconversion to Indiana Vesiculovirus (IVV) by viral neutralization. The IVV was detected in 15 (62.5%) of 24 bovines epithelia using the indirect sandwich ELISA. Finally, positive epithelium underwent complement fixation test viral subtyping that identified the occurrence of Indiana III serotype (Alagoas/IVV-3) in 11 (73.3%) of 15 previous positives cattle. These were the first confirmed cases of VS in Ceará with an official diagnosis of IVV-3, confirming the endemic character attributed to the state through previous unofficial serological surveys. The presence of VS is a continuing diagnostic challenge, given the risk of possible incursions of FMD. Vesicular stomatitis is recurrent and is a worrying in this area free of foot and mouth disease with vaccination that bring damage to producers and a maximum alert to the Sanitary Defense Organs in the face of a probable case of vesicular syndrome.(AU)

Embora o Nordeste do Brasil seja considerado livre de Febre Aftosa (FA) com a vacinacao, ainda sao registrados varios prejuízos econômicos e sanitários devido a ocorrencia de sindromes vesiculares que precisam ser adequadamente avaliadas, como Estomatite Vesicular (EV). Portanto, este estudo teve como objetivo confirmar a ocorrencia desta doenca e determinar o sorotipo viral predominante em casos suspeitos notificados ao Servico Veterinario Oficial do Ceara no ano de 2013 realizando protocolos oficiais de diagnóstico recomendados pela Organizacao Mundial de Saude Animal. Após investigação clínica e epidemiológica em 46 propriedades rurais, foram considerados 32 casos prováveis de propriedade foco de EV com 78 animais amostrados, sendo 65 bovinos e 13 equídeos. Amostras de soro (54) e epitelio (24) foram coletadas. Analises sorologicas de 6 (14,6%) de 41 bovinos e 8 (61,5%) de 13 equídeos apresentaram soroconversao ao Vesiculovirus Indiana (VVI) por neutralizacao viral. O VVI foi detectado em 15 (62,5%) de 24 epitélios bovinos usando ELISA indireto sanduiche. Por fim, amostras de epitélio positivas foram submetidas a subtipagem viral por fixacao do complemento que identificou a ocorrência do sorotipo Indiana III (Alagoas/VVI-3) em 11 (73,3%) de bovinos. Estes foram os primeiros casos confirmados de EV no estado do Ceara com diagnostico oficial de VVI-3 confirmando o carater endemico atribuido ao Estado por meio de levantamentos sorologicos nao oficiais anteriores. A presença de EV é um desafio diagnóstico contínuo, dado o risco de possíveis incursões de FA. A Estomatite Vesicular é recorrente e preocupante nesta área livre de FA com vacinação pois, além de prejuízos aos produtores, traz um alerta máximo aos Órgãos de Defesa Sanitária diante de um caso provável de síndrome vesicular.(AU)

Development and standardization of a western blotting test for detection of antibodies against B. abortus / Desenvolvimento e padronização do teste Western blotting para detecção de anticorpos contra B. abortus

Brucellosis is an infectious disease caused by bacteria of the genus Brucella spp. with diagnosis based on use of serological techniques. The present study aimed to develop and standardize a western blotting (WB) test for detection of antibodies against B. abortus. Samples from two groups of cattle were analyzed: group I: 60 serum samples from true positive and true negative vaccinated animals (30 positive samples from infected animals according to rose bengal test (RBT), 2-mercaptoethanol, serum agglutination test (SAT) and complement fixation test (CFT) and 30 RBT negatives samples); group II: 383 field samples (90 positive and 293 CFT negative sera). The most reactive band in the western blotting, which properly identified and separated infected from non - infected had a molecular weight of ≤ 20kDa. The sensitivity, specificity and accuracy of the WB compared to RBT was 93%, 99%, 98%, respectively and k= 0.938. When compared to CFT, the sensitivity, specificity and accuracy of the WB was 97%, 98% and 97%, respectively and k= 0.929. The WB developed and standardized in the present study is a serological test with potential use as a confirmatory test for the diagnosis of bovine brucellosis.(AU)

A brucelose é uma doença infectocontagiosa, causada por bactérias do gênero Brucella spp., com diagnóstico baseado no emprego de técnicas sorológicas. Objetivou-se neste estudo desenvolver e padronizar um teste Western blotting (WB) para detecção de anticorpos contra B. abortus. Foram analisados dois grupos de amostras bovinas: grupo I, com 60 amostras de animais verdadeiros positivos e verdadeiros negativos vacinados (30 amostras positivas de animais infectados e positivos nos testes de antígeno acidificado tamponado (AAT), 2 - mercaptoetanol (2 - ME), soroaglutinação lenta em tubos (SAT) e fixação do complemento e de 30 amostras negativas no AAT); grupo II, com 383 amostras de campo, sendo 90 soropositivas e 293 soronegativas no TFC. O resultado da análise do WB revelou peso molecular ≤20kDa como sendo a área mais reativa e característica para identificação e separação dos animais infectados dos não infectados. A sensibilidade, a especificidade e a acurácia do WB, quando este foi comparado com o AAT, foram, respectivamente, 93%, 99% e 98%, e k= 0,938. Quando comparadas com a TFC, a sensibilidade, a especificidade e a acurácia foram 97%, 98% e 97%, respectivamente, e k= 0,929. O WB padronizado neste estudo mostrou-se um teste sorológico com potencial uso como teste confirmatório no diagnóstico da brucelose bovina.(AU)

Development and standardization of a western blotting test for detection of antibodies against B. abortus / Desenvolvimento e padronização do teste Western blotting para detecção de anticorpos contra B. abortus

Brucellosis is an infectious disease caused by bacteria of the genus Brucella spp. with diagnosis based on use of serological techniques. The present study aimed to develop and standardize a western blotting (WB) test for detection of antibodies against B. abortus. Samples from two groups of cattle were analyzed: group I: 60 serum samples from true positive and true negative vaccinated animals (30 positive samples from infected animals according to rose bengal test (RBT), 2-mercaptoethanol, serum agglutination test (SAT) and complement fixation test (CFT) and 30 RBT negatives samples); group II: 383 field samples (90 positive and 293 CFT negative sera). The most reactive band in the western blotting, which properly identified and separated infected from non - infected had a molecular weight of ≤ 20kDa. The sensitivity, specificity and accuracy of the WB compared to RBT was 93%, 99%, 98%, respectively and k= 0.938. When compared to CFT, the sensitivity, specificity and accuracy of the WB was 97%, 98% and 97%, respectively and k= 0.929. The WB developed and standardized in the present study is a serological test with potential use as a confirmatory test for the diagnosis of bovine brucellosis.(AU)

A brucelose é uma doença infectocontagiosa, causada por bactérias do gênero Brucella spp., com diagnóstico baseado no emprego de técnicas sorológicas. Objetivou-se neste estudo desenvolver e padronizar um teste Western blotting (WB) para detecção de anticorpos contra B. abortus. Foram analisados dois grupos de amostras bovinas: grupo I, com 60 amostras de animais verdadeiros positivos e verdadeiros negativos vacinados (30 amostras positivas de animais infectados e positivos nos testes de antígeno acidificado tamponado (AAT), 2 - mercaptoetanol (2 - ME), soroaglutinação lenta em tubos (SAT) e fixação do complemento e de 30 amostras negativas no AAT); grupo II, com 383 amostras de campo, sendo 90 soropositivas e 293 soronegativas no TFC. O resultado da análise do WB revelou peso molecular ≤20kDa como sendo a área mais reativa e característica para identificação e separação dos animais infectados dos não infectados. A sensibilidade, a especificidade e a acurácia do WB, quando este foi comparado com o AAT, foram, respectivamente, 93%, 99% e 98%, e k= 0,938. Quando comparadas com a TFC, a sensibilidade, a especificidade e a acurácia foram 97%, 98% e 97%, respectivamente, e k= 0,929. O WB padronizado neste estudo mostrou-se um teste sorológico com potencial uso como teste confirmatório no diagnóstico da brucelose bovina.(AU)

Evaluation of dot-blot test for serological diagnosis of bovine brucellosis

The objective of this study was to standardize and validate the dot-blot test for the serological diagnosis of bovine brucellosis, compare the results with those found in the 2-mercaptoethanol (2-ME) and complement fixation test (CF), and estimate the relative sensitivity and specificity of the dot-blot compared to these tests. Fifty bovine blood serum samples were used for the test standardization, and 1315 samples were used for evaluation and comparison between the tests; the results were compared using the Kappa indicator. At the end of standardization, it was established as optimal for the antigen obtained from Brucella abortus B19 after passing through a microorganism rupture process, the blood serum samples diluted at 1:100, and the conjugate at 1:30,000. The comparison of the dot-blot results with 2-ME showed Kappa index of 0.9939, sensitivity of 99.48%, and specificity 99.91%, with CF, Kappa index of 0.8226, sensitivity 100% and specificity 95.32%. Using the combination of the test results 2-ME and CF to establish the true condition of the animal, the dot-blot showed relative sensitivity of 100%, and relative specificity of 99.91%. The evaluated test proved to be effective and reliable, besides being easy to handle and interpret the results.(AU)

Soroprevalência e fatores de risco da infecção por Chlamydophila abortus em caprinos do estado do Rio Grande do Norte, Brasil / Seroprevalence and risk factors of Chlamydophila abortus infection in goats of the state of Rio Grande do Norte, Brazil

Background: Chlamydophilosis is a disease caused by the bacterium Chlamydophila abortus, responsible for reproductive damage in small ruminants, and economic losses to animal production. In addition, it is classified as a zoonosis once it presents symptoms similar to numerous bacterial and viral infections of the reproductive system, making clinical diagnosis difficult. The objective of this work was to estimate the seroprevalence of anti-C. abortus antibodies in goats and to identify the risk factors for the disease in two mesoregions of Rio Grande do Norte, Brazil.Material, Methods & Results: This research was carried out in two mesoregions of the State of Rio Grande do Norte (Central Potiguar - CP and West Potiguar - WP) located in the Northeast of Brazil. These mesoregions together represent 83% of the regional herd. A total of 54 properties were studied. Those are distributed in seven municipalities: Afonso Bezerra, Angicos, Lages and Pedro Avelino, in the CP mesoregion; and Apodi, Caraúbas, and Mossoró, in the OP mesoregion. We used 540 animals from herds characterized as non-defined breed (NDB) and native breed, regardless of their productive functions, being frequent the consortium of caprine and ovine species. Blood samples were collected through jugular venipuncture by vacuum system with 5 mL tubes without anticoagulant. After collection, the tubes were centrifuged at 1500 g for 15 min. Detection of anti-Chlamydophila sp. antibodies was performed by the Complement Fixation Test. In parallel with the collection, a questionnaire was applied addressing general property and producer characteristics. Seroprevalence of chlamydophilosis in the CP mesoregion was 3.04% (7/230) for the animals and 26.1% (6/23) for the properties, whereas, in the WP mesoregion, the values were 4.2% (13/310) and 35.5% (11/31), respectively.[...]

Soroprevalência e fatores de risco da infecção por Chlamydophila abortus em caprinos do estado do Rio Grande do Norte, Brasil / Seroprevalence and risk factors of Chlamydophila abortus infection in goats of the state of Rio Grande do Norte, Brazil

Background: Chlamydophilosis is a disease caused by the bacterium Chlamydophila abortus, responsible for reproductive damage in small ruminants, and economic losses to animal production. In addition, it is classified as a zoonosis once it presents symptoms similar to numerous bacterial and viral infections of the reproductive system, making clinical diagnosis difficult. The objective of this work was to estimate the seroprevalence of anti-C. abortus antibodies in goats and to identify the risk factors for the disease in two mesoregions of Rio Grande do Norte, Brazil.Material, Methods & Results: This research was carried out in two mesoregions of the State of Rio Grande do Norte (Central Potiguar - CP and West Potiguar - WP) located in the Northeast of Brazil. These mesoregions together represent 83% of the regional herd. A total of 54 properties were studied. Those are distributed in seven municipalities: Afonso Bezerra, Angicos, Lages and Pedro Avelino, in the CP mesoregion; and Apodi, Caraúbas, and Mossoró, in the OP mesoregion. We used 540 animals from herds characterized as non-defined breed (NDB) and native breed, regardless of their productive functions, being frequent the consortium of caprine and ovine species. Blood samples were collected through jugular venipuncture by vacuum system with 5 mL tubes without anticoagulant. After collection, the tubes were centrifuged at 1500 g for 15 min. Detection of anti-Chlamydophila sp. antibodies was performed by the Complement Fixation Test. In parallel with the collection, a questionnaire was applied addressing general property and producer characteristics. Seroprevalence of chlamydophilosis in the CP mesoregion was 3.04% (7/230) for the animals and 26.1% (6/23) for the properties, whereas, in the WP mesoregion, the values were 4.2% (13/310) and 35.5% (11/31), respectively.[...](AU)

Brucelose bovina: aspectos gerais e contexto nos programas oficiais de controle

A brucelose é uma zoonose de distribuição mundial causada por bactérias do gênero Brucella. No Brasil, a brucelose bovina é enzoótica, e o seu controle/erradicação requer ações efetivas em todos os níveis do serviço público e ainda, engajamento da iniciativa privada. O Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose Animal –PNCEBT, instituído pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento -MAPA, possui como estratégia de atuação a adoção de medidas compulsórias (vacinação de bezerras e controle de trânsito), complementada por medidas de adesão voluntária (certificação de propriedades em livres). O diagnóstico oficial utiliza as provas do Antígeno Acidificado Tamponado (AAT), 2-Mercaptoetanol (2-ME), Fixação de Complemento (FC) e Teste de Polarização Flourescente (FPA). O presente artigo objetivou abordar os principais aspectos da brucelose bovina, e ainda, o contexto da mesma quanto aos programas oficiais de controle.(AU)

Brucellosis is a zoonosis of worldwide distribution caused by bacteria of the genus Brucella. In Brazil, bovine brucellosis is enzootic, and its control/erradication requires effective action at all levels of the public service, as well as private initiative engagement. The National Program for the Control and Eradication of Brucellosis and Animal Tuberculosis (PNCEBT), instituted by the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply (MAPA), has the adoption of compulsory measures (heifer vaccination and traffic control), complemented by measures of voluntary membership (certification of free properties). The official diagnosis uses the Acidified Buffered Antigen (AAT), 2-Mercaptoethanol (2-ME), Complement Fixation (FC) and Flourescent Polarization Test (FPA) tests. The present article aimed to address the main aspects of bovine brucellosis, as well as its context regarding official control programs.(AU)

Brucelose bovina: aspectos gerais e contexto nos programas oficiais de controle

A brucelose é uma zoonose de distribuição mundial causada por bactérias do gênero Brucella. No Brasil, a brucelose bovina é enzoótica, e o seu controle/erradicação requer ações efetivas em todos os níveis do serviço público e ainda, engajamento da iniciativa privada. O Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose Animal –PNCEBT, instituído pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento -MAPA, possui como estratégia de atuação a adoção de medidas compulsórias (vacinação de bezerras e controle de trânsito), complementada por medidas de adesão voluntária (certificação de propriedades em livres). O diagnóstico oficial utiliza as provas do Antígeno Acidificado Tamponado (AAT), 2-Mercaptoetanol (2-ME), Fixação de Complemento (FC) e Teste de Polarização Flourescente (FPA). O presente artigo objetivou abordar os principais aspectos da brucelose bovina, e ainda, o contexto da mesma quanto aos programas oficiais de controle.

Brucellosis is a zoonosis of worldwide distribution caused by bacteria of the genus Brucella. In Brazil, bovine brucellosis is enzootic, and its control/erradication requires effective action at all levels of the public service, as well as private initiative engagement. The National Program for the Control and Eradication of Brucellosis and Animal Tuberculosis (PNCEBT), instituted by the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply (MAPA), has the adoption of compulsory measures (heifer vaccination and traffic control), complemented by measures of voluntary membership (certification of free properties). The official diagnosis uses the Acidified Buffered Antigen (AAT), 2-Mercaptoethanol (2-ME), Complement Fixation (FC) and Flourescent Polarization Test (FPA) tests. The present article aimed to address the main aspects of bovine brucellosis, as well as its context regarding official control programs.

Linfoma cutâneo em equino Quarto de Milha / Cutaneous lymphoma in a Quarter Mile horse

Background: Lymphoma, although rare, is the most common hematopoietic neoplasia in horses. The overall incidence of lymphoma is between 1.3-2.8% of all equine neoplasia and it has a prevalence of 0.002-0.5% in the equine population. Lymphoma can be classified as multicentric, alimentary, mediastinal, cutaneous and solitary. The cutaneous is the rarest form and it usually presents with multifocal skin lesions, with no other clinical signs. The diagnoses is accomplished by histopathological examination of a biopsy or cytological examination of a fine needle aspirate. The aim of the current study is to report a case of the rarest form of equine lymphoma, the cutaneous. Case: An 8-year-old equine female, Quarter Mile, was evaluated due to volumes increase and subcutaneous nodules disseminated along the body. These lesions developed gradually during 2 years. The mare was used for ridding, it was kept in the field with 10 other equines and was the only one affected. The mare was vaccinated for influenza and was negative for glanders and equine infectious anemia. During clinical exam, all vital parameters were within limits and body condition score was classified as 6 (Henneke Chart). It was observed bilateral nasal secretion and depigmentation in ocular and vulvar mucous. It was observed multiple delimited areas with size ranging from few cm up to 7 cm, hard, mobile, painless, located in the subcutaneous and disseminated in the body (including head, neck, thorax, limbs and perineum). Red blood cell, leucocytes, fibrinogen, total plasmatic protein were within normal limits. Due to clinical signs and the potential risk of a zoonosis, the glanders test was repeated (complement fixation test) and the result was negative. Differential diagnoses also included insect hypersensitive, which was discarded since the female did not presented pruritus nor alopecia, lesions gradually increased in size and no […](AU)

Linfoma cutâneo em equino Quarto de Milha / Cutaneous lymphoma in a Quarter Mile horse

Background: Lymphoma, although rare, is the most common hematopoietic neoplasia in horses. The overall incidence of lymphoma is between 1.3-2.8% of all equine neoplasia and it has a prevalence of 0.002-0.5% in the equine population. Lymphoma can be classified as multicentric, alimentary, mediastinal, cutaneous and solitary. The cutaneous is the rarest form and it usually presents with multifocal skin lesions, with no other clinical signs. The diagnoses is accomplished by histopathological examination of a biopsy or cytological examination of a fine needle aspirate. The aim of the current study is to report a case of the rarest form of equine lymphoma, the cutaneous. Case: An 8-year-old equine female, Quarter Mile, was evaluated due to volume’s increase and subcutaneous nodules disseminated along the body. These lesions developed gradually during 2 years. The mare was used for ridding, it was kept in the field with 10 other equines and was the only one affected. The mare was vaccinated for influenza and was negative for glanders and equine infectious anemia. During clinical exam, all vital parameters were within limits and body condition score was classified as 6 (Henneke Chart). It was observed bilateral nasal secretion and depigmentation in ocular and vulvar mucous. It was observed multiple delimited areas with size ranging from few cm up to 7 cm, hard, mobile, painless, located in the subcutaneous and disseminated in the body (including head, neck, thorax, limbs and perineum). Red blood cell, leucocytes, fibrinogen, total plasmatic protein were within normal limits. Due to clinical signs and the potential risk of a zoonosis, the glanders test was repeated (complement fixation test) and the result was negative. Differential diagnoses also included insect hypersensitive, which was discarded since the female did not presented pruritus nor alopecia, lesions gradually increased in size and no […]

Situação epidemiológica da brucelose bovina no Estado de Alagoas

De abril a outubro de 2018, realizou-se estudo populacional para estimar a prevalência e os fatores de risco associados a brucelose bovina no estado de Alagoas, Brasil. Por meio do delineamento amostral em dois estágios, foram colhidas amostras de sangue de 3.046 fêmeas bovinas com idade 24 meses oriundas de 634 rebanhos. Em cada rebanho foi aplicado um questionário para avaliar o grau de associação de possíveis fatores de risco com a doença. Um modelo de regressão logística foi aplicado para quantificar a associação entre as características demográficas e de manejo com o status sanitário do rebanho. Para o diagnóstico, aplicou-se protocolo de testes sorológicos em série, utilizado o teste do antígeno acidificado tamponado como triagem e a fixação de complemento como teste confirmatório. A prevalência estimada de rebanhos de Alagoas com pelo menos um animal soropositivo foi de 3,2% [95% IC 2,1-4,9], e a prevalência estimada de animais soropositivos foi de 0,9% [95% IC 0,5-1,4]. Aluguel de pasto (OR = 3,11 [95% IC 1,28-7,37]) e rebanhos com 14 fêmeas em idade reprodutiva (OR=4,91 [95% IC 2,02-11,66]) foram as variáveis mais associadas à condição de foco de brucelose. Preconizam-se ações de educação sanitária das cadeias produtivas da carne e do leite para evitar aluguéis de pastagem e incentivar adoção de cuidados sanitários para a brucelose nos plantéis. A estruturação de sistema de vigilância visando erradicar a brucelose bovina deve ser considerada pelo estado.

From April to October 2018, a population study was carried out to estimate the prevalence of bovine brucellosis and associated risk factors in the State of Alagoas, Brazil. Blood samples were collected from 3,046 cows aged 24 months from 634 herds, through application of a two-stage sampling design. In each farm, a questionnaire was applied to assess the degree of association of possible risk factors with the disease. Logistic regression model was used to quantify the association between demographic and management characteristics with the herd's health status. For the diagnosis, a serial serologic testing protocol was applied, using Rose-Bengal test as screening and complement fixation as confirmatory test. The estimated prevalence of herds in Alagoas with at least one seropositive animal was 3.2% [95% CI 2.1-4.9], and the estimated prevalence of seropositive animals was 0.9% [95% CI 0.5-1.4]. Pasture rental (OR = 3.11 [95% CI 1.28-7.37]) and herd size larger or equal to 14 cows aged 24 months (OR = 4.91 [95% CI 2.02-11.66]) were the variables most associated with brucellosis herd infection. Health education actions for meat and milk production chains are recommended to avoid pasture rental and to encourage the adoption of sanitary measures to prevent the entrance of brucellosis in the herds. Structuring of a surveillance system aimed at eradicating bovine brucellosis should be considered.

Occurrence of anti-Brucella antibodies in intensive pig farming and in non-technified pig herds / Ocorrência de anticorpos anti-Brucella em suínos de granjas comercias e de criações de subsistência

The aim of this study was to determine the occurrence of antibodies anti-Brucella in 1,940 swine blood samples. Out of the 1,940 sera samples, 1,594 were from 30 intensive pig farming from seven different states, collected during the slaughtering of animals, and 346 samples from 56 non-technified (subsistence) pig herds from Jaboticabal region, São Paulo State, Brazil. All samples were tested by Buffered Plate Acidified Antigen (BPAA) and considered positive in case of agglutination. If positive, the samples were tested by Complement Fixation Reaction (CFR) as a confirmatory test. Out of the 1,594, two were positive for BPAA but negative for CFR, so the occurrence was 0%. Among the 346 samples, two were positive for BPAA but only one was positive in the confirmatory test, whith a titer of 1:8. Thus, the occurrence was 0.29%, an important result to demonstrate the improvement of the sanitary status of Brazilian non-technified pig herds, despite the low conditions of production.(AU)

O presente estudo foi realizado com o objetivo de se determinar a ocorrência de anticorpos anti-Brucella spp. em 1.940 amostras de sangue de suínos, das quais 1.594 amostras eram de 30 granjas comerciais, de sete diferentes Estados, coletadas durante o abate dos animais, e 346 amostras de 56 criações de subsistência da região de Jaboticabal, Estado de São Paulo, Brasil. Todas as amostras foram submetidas ao teste do Antígeno Acidificado Tamponado (AAT) e consideradas positivas caso ocorresse aglutinação. Quando positivas, as amostras eram submetidas ao teste de Reação de Fixação de Complemento (RFC) como teste confirmatório. Dentre as 1.594 amostras de suínos de granjas comerciais, duas se mostraram sensíveis ao AAT, porém, quando foram submetidas à RFC, ambas apresentaram reação negativa, levando a uma porcentagem de ocorrência de 0%. Já entre as 346 amostras de criações de subsistência, duas foram positivas ao AAT, sendo que apenas uma apresentou reação positiva no teste confirmatório, cujo título foi de 1:8. Desta forma, a ocorrência foi de 0,29%, resultado importante para demonstrar a melhoria do status sanitário dos rebanhos de subsistência brasileiros, apesar das condições precárias em que vivem.(AU)

Occurrence of anti-Brucella antibodies in intensive pig farming and in non-technified pig herds / Ocorrência de anticorpos anti-Brucella em suínos de granjas comercias e de criações de subsistência

The aim of this study was to determine the occurrence of antibodies anti-Brucella in 1,940 swine blood samples. Out of the 1,940 sera samples, 1,594 were from 30 intensive pig farming from seven different states, collected during the slaughtering of animals, and 346 samples from 56 non-technified (subsistence) pig herds from Jaboticabal region, São Paulo State, Brazil. All samples were tested by Buffered Plate Acidified Antigen (BPAA) and considered positive in case of agglutination. If positive, the samples were tested by Complement Fixation Reaction (CFR) as a confirmatory test. Out of the 1,594, two were positive for BPAA but negative for CFR, so the occurrence was 0%. Among the 346 samples, two were positive for BPAA but only one was positive in the confirmatory test, whith a titer of 1:8. Thus, the occurrence was 0.29%, an important result to demonstrate the improvement of the sanitary status of Brazilian non-technified pig herds, despite the low conditions of production.(AU)

O presente estudo foi realizado com o objetivo de se determinar a ocorrência de anticorpos anti-Brucella spp. em 1.940 amostras de sangue de suínos, das quais 1.594 amostras eram de 30 granjas comerciais, de sete diferentes Estados, coletadas durante o abate dos animais, e 346 amostras de 56 criações de subsistência da região de Jaboticabal, Estado de São Paulo, Brasil. Todas as amostras foram submetidas ao teste do Antígeno Acidificado Tamponado (AAT) e consideradas positivas caso ocorresse aglutinação. Quando positivas, as amostras eram submetidas ao teste de Reação de Fixação de Complemento (RFC) como teste confirmatório. Dentre as 1.594 amostras de suínos de granjas comerciais, duas se mostraram sensíveis ao AAT, porém, quando foram submetidas à RFC, ambas apresentaram reação negativa, levando a uma porcentagem de ocorrência de 0%. Já entre as 346 amostras de criações de subsistência, duas foram positivas ao AAT, sendo que apenas uma apresentou reação positiva no teste confirmatório, cujo título foi de 1:8. Desta forma, a ocorrência foi de 0,29%, resultado importante para demonstrar a melhoria do status sanitário dos rebanhos de subsistência brasileiros, apesar das condições precárias em que vivem.(AU)