Sperm cryopreservation of lane snapper Lutjanus synagris(Linnaeus, 1758) / Criopreservação do sêmen do ariocó Lutjanus synagris (Linnaeus, 1758)

This study aims developing and evaluate a protocol of semen cryopreservation of the lane snapper Lutjanus synagris. Firstly, sperm motility rate, motility time, density and spermatocrit were appraised to characterize the sperm quality of the lane snapper. The effect of three extenders with distinct ionic compositions and pH values combined with seven concentrations of cryoprotector dimethylsulfoxide (0; 2.5; 5.0; 7.5; 10.0; 12.5 e 15.0%), five cooling rates (110, 90, 60, 45 e 30°C –min), nine equilibration time (1; 2,5; 5; 10; 15; 20; 25; 30 e 60 minutes) e five dilutions ratio (1:1; 1:3; 1:6; 1:10 e 1:20) on the sperm motility rate and motility time were analyzed. Fertilization test was accomplished to evaluate the viability of the cryopreserved sperm. The higher sperm motility rate and motility time (P<0.05) was achieved by combining extender with pH 8.2 with 10% concentration of dimethylsulfoxide and cooling rate 60°C –min, 1 minute of equilibration time and 1:3 (v/v) dilution ratio. The use of cryopreserved sperm presented fertilization rates >60% validating the present protocol for lane snapper. The cryoconserved sperm of lane snapper is a viable alternative, being possible to maintain appropriate sperm viability.(AU)

Este estudo teve a finalidade de desenvolver e avaliar um protocolo de crioconservação do sêmen do ariocó Lutjanus synagris. Para caracterizar o sêmen foram avaliados a taxa de motilidade, a duração da motilidade, a concentração espermática e o espermatócrito. Em seis experimentos foram analisados os efeitos de três diluentes, com distintas composições iônicas e valores de pH distintos, combinados com sete concentrações de dimetilsulfóxido (0; 2,5; 5,0; 7,5; 10,0; 12,5 e 15,0%), cinco velocidades de congelamento (–110, –90, –60, –45 e –30°C/min), nove tempos de equilíbrio (1; 2,5; 5; 10; 15; 20; 25; 30 e 60 minutos) e cinco proporções de sêmen:diluente (1:1; 1:3; 1:6; 1:10 e 1:20) sobre a taxa de motilidade e a duração da motilidade espermáticas. Posteriormente um teste de fertilização foi realizado para avaliar a viabilidade do sêmen crioconservado. O tratamento que propiciou maior taxa de motilidade e duração da motilidade espermáticas (P<0,05) foi aquele proporcionado pelo emprego do diluente com pH 8,2 com dimetilsulfóxido a 10%, em uma velocidade de congelamento de –60°C/min, com tempo de equilíbrio de 1 minuto e na proporção de 1:3 (v/v). O sêmen crioconservado apresentou taxa de fertilização superior a 69% validando o presente protocolo para o ariocó. A crioconservação do sêmen do ariocó é uma alternativa viável, sendo possível manter uma apropriada qualidade espermática.(AU)

Suplementação do meio de criopreservação de sêmen de bovino pantaneiro com vitaminas C e E

O objetivo do trabalho foi avaliar o efeito da adição de vitamina C e/ou Trolox (análogo hidrossolúvel da vitamina E) sobre parâmetros relacionados à fertilidade do sêmen criopreservado de touros da raça Pantaneiro (Bos taurus) criados na região central do Brasil. Foram utilizados 6 touros Pantaneiros, dos quais foi coletado sêmen e dividido em T1 Controle: apenas o diluente base (Triladyl® + gema de ovo); T2: diluente base com adição de 0,6 mg/ml de Vitamina C. T3: diluente base + 0,3 mg/ml de Vitamina E/Trolox e T4: diluente base + 0,6 mg/ml de Vitamina C + 0,3 mg/ml de Vitamina E/Trolox. Após o descongelamento foram realizadas as análises de motilidade, vigor, viabilidade espermática, integridade de membrana acrossomal, atividade citoquímica mitocondrial, peroxidação lipídica induzida e espontânea, produção in vitro de embriões e analisado quanto a qualidade de movimento (CASA). O experimento foi realizado em delineamento inteiramente casualizado sendo os dados analisados através da Anava e teste Tukey e Wilcoxon, com nível de significância de 5%. A motilidade, vigor, integridade acrossomal não foram afetadas independente dos tratamentos (P>0,05) a atividade mitocondrial foi reduzida (P<0,0001) com a adição de antioxidantes em especial a interação entre controle, vitamina C, E e associação para DAB 1 (41,33±4,13 vs 6,52±2,20 vs 5,41±1,52 vs 32,50±6,02) e aumentou (P<0,0001) o numero de DAB 3 quando comparado o controle, vitamina C, E e associação (9,00±1,84 vs 33,79±3,56 vs 50,00±5,98 vs 17,50±2,38) respectivamente. Na produção in vitro de embriões não foi observado diferença, independente dos tratamentos usados (P>0,05). Conclui-se que o nível de antioxidantes usados podem não ter sido suficientes expressar uma melhora na qualidade seminal e diminuir os níveis de espécies reativas de oxigênio, levando assim a uma maior diminuição da atividade mitocondrial.

The objective of this work was to evaluate the effect of the addition of vitamin C and / or Trolox (water soluble analogue of vitamin E) on parameters related to the fertility of cryopreserved semen of Pantaneiro bulls (Bos taurus) breeds in central Brazil. Six Pantaneiros bulls were used, from which semen was collected and divided into T1 Control: only the base diluent (Triladyl® + egg yolk); T2: base diluent with addition of 0.6 mg / ml Vitamin C. T3: base diluent + 0.3 mg / ml Vitamin E / Trolox and T4: base diluent + 0.6 mg / ml Vitamin C + 0 , 3 mg / ml Vitamin E / Trolox. After thawing, the analyzes of motility, vigor, sperm viability, acrosomal membrane integrity, mitochondrial cytochemical activity, induced and spontaneous lipid peroxidation, in vitro embryo production and analyzed for movement quality (CASA) were performed. The experiment was carried out in a completely randomized design with data analyzed through Anava and Tukey and Wilcoxon tests, with a significance level of 5%. The mitochondrial activity was reduced (P <0.0001) with the addition of antioxidants, especially the interaction between control, vitamin C, E and association for DAB 1 (41.33 ± 4.13 vs 6.52 ± 2.20 vs 5.41 ± 1.52 vs 32.50 ± 6.02) and increased (P <0.0001) the number of DAB 3 (9.00 ± 1.84 vs 33.79 ± 3.56 vs 50.00 ± 5.98 vs 17.50 ± 2.38), respectively. In the in vitro production of embryos no difference was observed, independent of the treatments used (P> 0.05). It is concluded that the level of antioxidants used may not have been sufficient to express an improvement in seminal quality and decrease the levels of reactive oxygen species, thus leading to a greater decrease in mitochondrial activity.

Análise dos grãos de pólen de diferentes cultivares de manona (ricinus communis l., euphorbiaceae): conservação e viabilidade

ABSTRACT The analysis of the pollen grain fertility of Riccinus communis (castor-oil plant) is of great importance for breeding programs, allowing for suitable handling and use of collections and the creation of cultivars of interest for biodiesel production. In this work, a predictive process was chosen based on the cytological method of pollen-grain staining and in-vitro pollen germination after low-temperature treatments for preservation to verify the pollen viability, which is important in seed fertilization and formation. The conventional cytological staining technique with 2% acetic carmine was used for pollen grain viability analysis for the cultivars IAC-80, Cafelista, AL-Preta and AL-Guarany 2002, while the method of in-vitro germination after treatment at -196° C, -80° C and -18° C, from 15 to 30 days, was used for the cultivar IAC-80. The IAC-80 and Cafelista cultivars showed pollen viability values above 95%, while AL-Preta and AL-Guarany 2002 showed 88.48 and 86.46%, respectively. The pollen grains of castor-oil cultivars also presented a high percentage of pollen viability at anthesis. Therefore, it is possible to use the pollen grains of all the analyzed cultivars for fertilization induction in breeding programs. The results indicate that the average percentage of the pollen-grain viability in-vivo was not influenced by the storage period. It was also observed that there were differences among the low-temperature treatments, although the percentage of viability was low, suggesting the need for the application of a suitable evaluation technique.

RESUMO A análise da fertilidade dos grãos de pólen de Ricinus communis (mamona) é de grande importância para programas de melhoramento, permitindo o manejo e uso adequado das coleções existentes e a criação de cultivares interessantes na produção de biodiesel. Neste trabalho, optou-se por um processo preditivo baseado no método citológico de coloração dos grãos de pólen e no método de germinação in vitro dos grãos, após tratamentos de conservação a baixas temperaturas, para a verificação da viabilidade, importante na formação das sementes, alvo dos programas de melhoramento. Utilizou-se a técnica de coloração com carmim acético 2% na análise da viabilidade dos grãos de pólen nas cultivares IAC-80, Cafelista, AL-Preta e AL-Guarany 2002, enquanto que o método de germinação in vitro após tratamento de -196° C, -80° C e -18° C, por 15 e 30 dias, foi aplicado somente na cultivar IAC-80. A viabilidade polínica foi acima de 95% em IAC-80 e Cafelista de 88,48% em AL-Preta e de 86,46% em e AL-Guarany 2002. Estas cultivares apresentaram também alto percentual de viabilidade polínica na antese, sendo possível a utilização de todas as cultivares analisadas na indução de fertilização em programas de melhoramento. Os resultados obtidos com a germinação in vitro dos grãos de IAC-80, após a criopreservação, indicaram que o percentual médio da viabilidade polínica in vivo não foi influenciado pelo período de armazenamento. Observaram-se diferenças entre os tratamentos a baixas temperaturas, porém o percentual de viabilidade dos mesmos foi baixo, sugerindo necessidade de adequação na técnica de avaliação.

Crioconservação do sêmen da garoupa-verdadeira Epinephelus marginatus

Este trabalho teve a finalidade de desenvolver um protocolo de crioconservação do sêmen da garoupa-verdadeira Epinephelus marginatus. Em três experimentos foram analisados os efeitos de três diluentes (pH 6,1; 7,8 e 8,2), quatro diluições (1:0; 1:1; 1:2 e 1:3), seis concentrações de crioprotetor dimetilsulfóxido (0; 2,5; 5,0; 7,5; 10,0 e 12,5%) e cinco velocidades de congelamento (90, 60, 45, 30 e 15C.min-1) sobre a motilidade e o tempo de motilidade espermáticas no sêmen crioconservado. O sêmen foi congelado em vapor de nitrogênio empregando-se palhetas criogênicas, e posteriormente mantido em nitrogênio líquido. O tratamento que propiciou maior motilidade e tempo de motilidade espermáticas (p 0,05) foi aquele proporcionado pelo emprego do diluente B (pH 7,8), na proporção de 1:3 (v/v), com crioprotetor (dimetilsulfóxido) a 5% e em uma velocidade de congelamento de 60C.min-1. Estes resultados possibilitaram a implantação do primeiro banco de sêmen da garoupa-verdadeira no Brasil.Palavras-chave: Crioconservação. Sêmen. Epinephelus marginatus. Garoupaverdadeira. Reprodução. Maricultura.

Desempenho reprodutivo de Nasonia vitripennis Walker (Hymenoptera: Pteromalidae) em pupas crioconservadas de Chrysomya megacephala Fabricius (Diptera: Calliphoridae): avaliação preliminar

The reproductive performance of Nasonia vitripennis Walker (Hymenoptera: Pteromalidae) was evaluated on pupae of Chrysomya megacephala Fabricius (Diptera: Calliphoridae) kept at -20ºC, during 77 days, with and no previous passage for liquid nitrogen (NL) by one, three and 15 minutes. Control groups were characterized for fresh pupae hosts. There was one pupa for each parasitoid. The sample of fresh pupae exhibited average of 15 emergent parasitoids / pupa while pupae stored directly at freezer (-20ºC) presented an average of 10 emergent parasitoids / pupa. In the samples exposed at one, three and 15 minutes in NL, accentuated decrease was observed on emergent hymenopterans reproductive performance ( img border=0 id="_x0000_i1028" src="../../../../img/revistas/cr/v34n1/n1a32fr01.gif">: 6.1; 5.5 and 5.7 respectively). The dissection of pupae revealed a large number of immature pteromalid in the groups with liquid nitrogen passage and farate adults in all the groups.

Avaliou-se o desempenho reprodutivo de Nasonia vitripennis Walker (Hymenoptera: Pteromalidae) em pupas de Chrysomya megacephala Fabricius (Diptera: Calliphoridae) previamente armazenadas a - 20ºC de temperatura, durante 77 dias, com e sem passagem prévia em nitrogênio líquido (NL) por um, três e 15 minutos. O grupo controle foi caracterizado por pupas hospedeiras frescas. Os muscóides foram expostos aos parasitóides durante 72 horas. Utilizou-se a relação de uma pupa muscóide por fêmea parasitóide. A amostra de pupas frescas permitiu a emergência de 15 parasitóides/ pupa, em média, enquanto 10 parasitóides / pupa emergiram dos espécimens prévia e diretamente armazenados em freezer (-20ºC). Observou-se um acentuado decréscimo do desempenho reprodutivo dos microhimenópteros que exploraram os substratos previamente submetidos ao NL durante um, três e 15 minutos ( img border=0 id="_x0000_i1026" src="../../../../img/revistas/cr/v34n1/n1a32fr01.gif">: 6,1; 5,5 e 5,7, respectivamente). A dissecação das pupas hospedeiras revelou um expressivo número de pteromalídeos imaturos, nas amostras que foram expostas ao NL, e de adultos faratos, em todos os tratamentos

Crioconservação do sêmen da garoupa-verdadeira Epinephelus marginatus

Este trabalho teve a finalidade de desenvolver um protocolo de crioconservação do sêmen da garoupa-verdadeira Epinephelus marginatus. Em três experimentos foram analisados os efeitos de três diluentes (pH 6,1; 7,8 e 8,2), quatro diluições (1:0; 1:1; 1:2 e 1:3), seis concentrações de crioprotetor dimetilsulfóxido (0; 2,5; 5,0; 7,5; 10,0 e 12,5%) e cinco velocidades de congelamento (90, 60, 45, 30 e 15C.min-1) sobre a motilidade e o tempo de motilidade espermáticas no sêmen crioconservado. O sêmen foi congelado em vapor de nitrogênio empregando-se palhetas criogênicas, e posteriormente mantido em nitrogênio líquido. O tratamento que propiciou maior motilidade e tempo de motilidade espermáticas (p 0,05) foi aquele proporcionado pelo emprego do diluente B (pH 7,8), na proporção de 1:3 (v/v), com crioprotetor (dimetilsulfóxido) a 5% e em uma velocidade de congelamento de 60C.min-1. Estes resultados possibilitaram a implantação do primeiro banco de sêmen da garoupa-verdadeira no Brasil.Palavras-chave: Crioconservação. Sêmen. Epinephelus marginatus. Garoupaverdadeira. Reprodução. Maricultura.

Sobrevivência de blastocistos Mus domesticus domesticus vitrificados em meio contendo 9,0m de etileno glicol na presença de sacarose

The aim of these experiments was to determine the in vitro and in vivo survivability of Mus domesticus domesticus blastocysts, following exposure and vitrification in modified PBS solution containing 9.0M of ethylene glycol (EG) and 0.3M of sucrose. The cryoprotectant solutions were denominated I (without sucrose) and IS (with sucrose) when the embryo exposure to the solutions has been done in two steps. First the embryos were exposed to a modified PBS solution with 1,8M EG + 6% BSA during 2 minutes, and after they were transferred to straws containing modified PBS plus 9.0M EG + 6% BSA and after 30 seconds immersed into liquid nitrogen. The others cryoprotectant solutions, denominated II (without sucrose) and IIS (with sucrose) the embryos were exposed directly to the 9.0M EG and after 30 seconds plunged into the liquid nitrogen. In the first experiment a survival rate of 299 blastocysts was observed following exposure to cryoprotectant solutions. There was no statistical diference among control and treatment groups. The experiment II allowed to evaluate the in vitro embryo survival, after vitrification of 330 blastocysts, the cryoprotectant solutions I and IS determinated statistically different (p 0.05) embryo survival rates, showing in vitro hatching rates of 49 and 40%, respectively. In experiment 3, 141 blastocysts were exposed to the cryoprotectant solutions I and IS, vitrified and then transferred into the recipients. The number of implantations and fetuses were observed after 14 days of gestation. There was no statistical difference (p>0.05) among the solutions I and IS in the number of implantations (37 and 32%) and fetuses (27 and 27%), respectively. The survival rate of Mus domesticus domesticus blastocysts did not improve with the addition of sucrose to the vitrification solution containing 9.0M of EG.

Os experimentos realizados tiveram como objetivo determinar a taxa de sobrevivência in vitro e in vivo de blastocistos Mus domesticus domesticus vitrificados em meio contendo 9,0M de etileno glicol e 0,3M de sacarose. As soluções testadas foram denominadas de I e IS, quando a adição do crioprotetor foi realizada em duas etapas, e II e IIS, quando a adição deste foi realizada em apenas uma etapa. Na solução de vitrificação I, foi realizada inicialmente uma desidratação prévia dos embriões por um período de 2 minutos em solução de 1,8M de EG em PBS + 6% de BSA e, logo após, eles foram transferidos, por um período de 30 segundos, para a solução composta por uma associação de 9,0M de EG em PBS + 6% de BSA, antes da imersão em nitrogênio líquido. Na solução de vitrificação IS, o procedimento foi idêntico ao da solução I, apenas com o acréscimo de 0,3M de sacarose às soluções crioprotetoras. Na solução de vitrificação II, os embriões foram expostos diretamente a uma solução composta por uma associação de 9,0M de EG em PBS + 6% de BSA, onde permaneciam por 30 segundos antes da imersão em nitrogênio líquido. Na solução de vitrificação IIS, o procedimento foi idêntico ao da solução II, apenas com a adição de 0,3M de sacarose à solução crioprotetora. No experimento I, foi determinada a taxa de sobrevivência de 299 blastocistos após a exposição às soluções crioprotetoras, não sendo observada diferença estatística entre os tratamentos e o grupo controle. O experimento II permitiu avaliar a sobrevivência embrionária in vitro (taxa de eclosão) após a vitrificação de 330 blastocistos, onde as soluções I e IS foram estatisticamente superiores às demais, apresentando taxas de eclosão de 49 e 40%, respectivamente. No experimento III, realizou-se a transferência de 141 blastocistos vitrificados, após a exposição às soluções I e IS, para fêmeas receptoras. Não houve diferenças estatísticas entre as taxas de sobrevivência embrionária determinadas aos 14 dias de prenhez, tanto para implantações (37 e 32%) quanto para fetos (27 e 27%), respectivamente. A presença de sacarose na solução de vitrificação não proporcionou uma maior sobrevivência de blastocistos Mus domesticus domesticus vitrificados em uma solução contendo 9,0M EG.

Sobrevivência de blastocistos Mus domesticus domesticus vitrificados em meio contendo 9,0m de etileno glicol na presença de sacarose

The aim of these experiments was to determine the in vitro and in vivo survivability of Mus domesticus domesticus blastocysts, following exposure and vitrification in modified PBS solution containing 9.0M of ethylene glycol (EG) and 0.3M of sucrose. The cryoprotectant solutions were denominated I (without sucrose) and IS (with sucrose) when the embryo exposure to the solutions has been done in two steps. First the embryos were exposed to a modified PBS solution with 1,8M EG + 6% BSA during 2 minutes, and after they were transferred to straws containing modified PBS plus 9.0M EG + 6% BSA and after 30 seconds immersed into liquid nitrogen. The others cryoprotectant solutions, denominated II (without sucrose) and IIS (with sucrose) the embryos were exposed directly to the 9.0M EG and after 30 seconds plunged into the liquid nitrogen. In the first experiment a survival rate of 299 blastocysts was observed following exposure to cryoprotectant solutions. There was no statistical diference among control and treatment groups. The experiment II allowed to evaluate the in vitro embryo survival, after vitrification of 330 blastocysts, the cryoprotectant solutions I and IS determinated statistically different (p 0.05) embryo survival rates, showing in vitro hatching rates of 49 and 40%, respectively. In experiment 3, 141 blastocysts were exposed to the cryoprotectant solutions I and IS, vitrified and then transferred into the recipients. The number of implantations and fetuses were observed after 14 days of gestation. There was no statistical difference (p>0.05) among the solutions I and IS in the number of implantations (37 and 32%) and fetuses (27 and 27%), respectively. The survival rate of Mus domesticus domesticus blastocysts did not improve with the addition of sucrose to the vitrification solution containing 9.0M of EG.

Os experimentos realizados tiveram como objetivo determinar a taxa de sobrevivência in vitro e in vivo de blastocistos Mus domesticus domesticus vitrificados em meio contendo 9,0M de etileno glicol e 0,3M de sacarose. As soluções testadas foram denominadas de I e IS, quando a adição do crioprotetor foi realizada em duas etapas, e II e IIS, quando a adição deste foi realizada em apenas uma etapa. Na solução de vitrificação I, foi realizada inicialmente uma desidratação prévia dos embriões por um período de 2 minutos em solução de 1,8M de EG em PBS + 6% de BSA e, logo após, eles foram transferidos, por um período de 30 segundos, para a solução composta por uma associação de 9,0M de EG em PBS + 6% de BSA, antes da imersão em nitrogênio líquido. Na solução de vitrificação IS, o procedimento foi idêntico ao da solução I, apenas com o acréscimo de 0,3M de sacarose às soluções crioprotetoras. Na solução de vitrificação II, os embriões foram expostos diretamente a uma solução composta por uma associação de 9,0M de EG em PBS + 6% de BSA, onde permaneciam por 30 segundos antes da imersão em nitrogênio líquido. Na solução de vitrificação IIS, o procedimento foi idêntico ao da solução II, apenas com a adição de 0,3M de sacarose à solução crioprotetora. No experimento I, foi determinada a taxa de sobrevivência de 299 blastocistos após a exposição às soluções crioprotetoras, não sendo observada diferença estatística entre os tratamentos e o grupo controle. O experimento II permitiu avaliar a sobrevivência embrionária in vitro (taxa de eclosão) após a vitrificação de 330 blastocistos, onde as soluções I e IS foram estatisticamente superiores às demais, apresentando taxas de eclosão de 49 e 40%, respectivamente. No experimento III, realizou-se a transferência de 141 blastocistos vitrificados, após a exposição às soluções I e IS, para fêmeas receptoras. Não houve diferenças estatísticas entre as taxas de sobrevivência embrionária determinadas aos 14 dias de prenhez, tanto para implantações (37 e 32%) quanto para fetos (27 e 27%), respectivamente. A presença de sacarose na solução de vitrificação não proporcionou uma maior sobrevivência de blastocistos Mus domesticus domesticus vitrificados em uma solução contendo 9,0M EG.

Crioconservação de embriões de tambaqui (Colossoma macropomum)

A criopreservação do material genético de peixes tornou uma ferramenta imprescindível, tanto para conservação de biodiversidade como para produção. No entanto, estocar embriões de peixes em nitrogênio líquido (-196ºC) e conservar por tempo indeterminado ainda não é possível. Recentemente, a evolução nas pesquisas com criopreservação possibilitou estocar embriões a ?8ºC, por até 24 horas. Este fato aponta a possibilidade de criopreservar embriões de peixe, e a biotécnica de resfriamento por curto período já tem aplicações práticas. O presente estudo teve como objetivo avaliar a eficiência de diferentes crioprotetores nos processos da criopreservação (congelação, vitrificação e resfriamento) de embriões de tambaqui (Colossoma macropomum). Embora parte dos objetivos propostos tenha sido alcançados, nos testes de criopreservação, somando ao esclarecimento dos aspectos importantes quanto aos danos causados aos embriões, existem ainda muitas etapas para tornar viável a criopreservação de embriões de peixes. Nos testes, foram identificadas injúrias nos embriões em todas as etapas do processo de congelação, sendo a fase com maior incidência na estabilização em -35ºC e após a submissão em nitrogênio líquido e posterior descongelamento. No momento do ?seeding? (indução a cristalização a -7ºC), além de menor ocorrência de injúrias, maior porcentagem de embriões com córion foram verificados. As curvas de resfriamento nos testes de congelação não evitaram a formação de cristais de gelo, o que inviabilizou a congelação dos embriões de C. macropomum. No experimento de vitrificação, o metanol 20% com dois minutos de exposição pré-imersão ao nitrogênio líquido preservou o córion e algumas estruturas celulares. Embora tenha evitado maiores danos não foi suficiente para evitar a mortalidade dos embriões, o que abre perspectivas para continuidade nos estudos em criopreservação de embriões de peixes. Etilenoglicol, DMSO e glicerol foram tóxicos nas concentrações mais elevadas (20 e 30%), não sendo interessante para a vitrificação dos embriões de C. macropomum. Nos testes de resfriamento a -8ºC, os tratamentos com etilenoglicol, glicerol e DMSO associados à sacarose não resultaram em respostas satisfatórias. Para armazenar embriões de C. macropomum a -8°C, por um período de seis horas, sugere-se soluções crioprotetoras com sacarose 17% associada ao metanol 10%

Criopreservação de sêmen canino utilizando diferentes meios de conservação / Cryopreservation of canine semen in different extenders

O objetivo deste trabalho foi avaliar a utilização de dois meios diluidores na crioconservação do sêmen canino, considerando os efeitos destes sobre a qualidade espermática in vitro, após o descongelamento. Os meios diluidores testados foram Tris-leite e o Tris-gema-Equex. Foram utilizados três machos, submetidos a colheitas semanais, durante seis semanas, totalizando dezoito amostras de cada delineamento experimental. Os testes in vitro aplicados às amostras de sêmen foram: avaliação da motilidade espermática progressiva; avaliação da integridade da célula espermática e do acrossoma, através de análise em microscopia de contraste de fase; e avaliação da longevidade espermática, por meio de teste de termo-resistência. A análise comparativa entre os meios diluidores evidenciou que não houve diferença entre os meios após a diluição, entretanto o diluidor Tris-gema-Equex apresentou valores de motilidade progressiva superiores (p>0,05) ao diluidor Tris-leite logo após o resfriamento, após o descongelamento e durante o teste de termorresistência. A avaliação da integridade celular também revelou valores maiores de células intactos após o descongelamento e ao final do teste de termorresistência nas amostras diluídas com This-gema-Equex(AU)

The main purpose of this study was to evaluate the use of two extenders in the cryopreservation of canine semen, considering their effects on sperm quality in vitro. The studied extenders were Tris-milk and Tris-yolk-Equex. It was used the semen of three dogs, collected once a week, during six weeks. The in vitro evaluations applied to the semen were sperm motility and forward progression; sperm cell and acrosome integrity, evaluated under phase contrast microscopy and sperm longevity, analysed by thermoresistance test. The comparative analysis between the extenders showed that there was no difference between the extenders after dilution, however the extender Tris-yolk-Equex showed increased values (p>0,05) of progressive motility, when compared to extender Tris-milk right after cooling, freezing, thawing and in the thermoresistance test in the samples diluted with Tris-yolk-Equex(AU)

Criopreservação de sêmen canino utilizando diferentes meios de conservação / Cryopreservation of canine semen in different extenders

O objetivo deste trabalho foi avaliar a utilização de dois meios diluidores na crioconservação do sêmen canino, considerando os efeitos destes sobre a qualidade espermática in vitro, após o descongelamento. Os meios diluidores testados foram Tris-leite e o Tris-gema-Equex. Foram utilizados três machos, submetidos a colheitas semanais, durante seis semanas, totalizando dezoito amostras de cada delineamento experimental. Os testes in vitro aplicados às amostras de sêmen foram: avaliação da motilidade espermática progressiva; avaliação da integridade da célula espermática e do acrossoma, através de análise em microscopia de contraste de fase; e avaliação da longevidade espermática, por meio de teste de termo-resistência. A análise comparativa entre os meios diluidores evidenciou que não houve diferença entre os meios após a diluição, entretanto o diluidor Tris-gema-Equex apresentou valores de motilidade progressiva superiores (p>0,05) ao diluidor Tris-leite logo após o resfriamento, após o descongelamento e durante o teste de termorresistência. A avaliação da integridade celular também revelou valores maiores de células intactos após o descongelamento e ao final do teste de termorresistência nas amostras diluídas com This-gema-Equex

The main purpose of this study was to evaluate the use of two extenders in the cryopreservation of canine semen, considering their effects on sperm quality in vitro. The studied extenders were Tris-milk and Tris-yolk-Equex. It was used the semen of three dogs, collected once a week, during six weeks. The in vitro evaluations applied to the semen were sperm motility and forward progression; sperm cell and acrosome integrity, evaluated under phase contrast microscopy and sperm longevity, analysed by thermoresistance test. The comparative analysis between the extenders showed that there was no difference between the extenders after dilution, however the extender Tris-yolk-Equex showed increased values (p>0,05) of progressive motility, when compared to extender Tris-milk right after cooling, freezing, thawing and in the thermoresistance test in the samples diluted with Tris-yolk-Equex