Cross-genera amplification and identification of Colpodella sp. with Cryptosporidium primers in fecal samples of zoo felids from northeast China / Amplificação cruzada de gêneros e identificação de Colpodella sp. com iniciadores de Cryptosporidium em amostras fecais de zoofilia do nordeste da China

Abstract The protozoans include many intracellular human pathogens. Accurate detection of these pathogens is necessary to treat the diseases. In clinical epidemiology, molecular identification of protozoan is considered a more reliable and rapid method for identification than microscopy. Among these protozoans, Cryptosporidium considered being one of the important water-borne zoonotic pathogens and a major cause of a diarrheal disease named cryptosporidiosis in humans, domestic animals, and wild animals. This study was aimed to identify Cryptosporidium in zoo felids (N= 56) belonging to different zoo of China, but accidentlly Colpodella was encountered in the zoo felids sample and phylogenetic data confirmed this unexpected amplification from fecal samples using two-step nested-PCR. Phylogenetic analysis revealed the fact about the specific primers used previously by many researchers and cross-genera amplification. We came to know that genetically sequenced amplicon gives more accurate identification of species. This study suggests more investigation on Colpodella which has been neglected previously but gains the attention of researchers after identified from humans and animals and has been known to correlate with neurological symptoms in patients.

Resumo Os protozoários incluem muitos patógenos humanos intracelulares. A detecção acurada desses patógenos é necessária para tratar as doenças. Na epidemiologia clínica, a identificação molecular de protozoários é considerada o método de identificação mais confiável e rápido do que a microscopia. Entre esses protozoários, o Cryptosporidium é considerado um dos importantes patógenos zoonóticos transmitidos pela água e uma das principais causas de uma doença diarreica denominada criptosporidiose em humanos, animais domésticos e selvagens. Este estudo teve como objetivo identificar Cryptosporidium em zoofelídeos (N = 56) pertencentes a diferentes zoológicos da China, mas acidentalmente Colpodella foi encontrada na amostra de zoofelídeos e os dados filogenéticos confirmaram essa amplificação inesperada de amostras fecais usando nested-PCR em duas etapas. A análise filogenética revelou o fato sobre os primers específicos usados ​​anteriormente por muitos pesquisadores e a amplificação entre gêneros. Ficamos sabendo que o amplicon sequenciado geneticamente fornece uma identificação mais acurada das espécies. Este estudo sugere mais investigação sobre Colpodella, que foi negligenciada anteriormente, mas ganha a atenção dos pesquisadores depois de identificada em humanos e animais e é conhecida por se correlacionar com sintomas neurológicos em pacientes.

Cryptosporidium spp. in dogs - prevalence and genotype distribution

Background: Cryptosporidium spp. is a zoonotic protozoan parasite that affects the gastrointestinal tract of humans and animals. The disease can cause acute and chronic diarrhoea and even death in both humans and animals. In this study, it was aimed to determine the prevalence and genotype distribution of Cryptosporidiosis in shelter dogs in Diyarbakir province located in the Southeastern Anatolia Region of Turkey. Materials, Methods & Results: The animal material of the study consisted of 100 dogs of different breeds and sexes. Faecal samples were collected from the rectum with disposable latex gloves and placed in individual sample containers. All of the samples were examined for Cryptosporidium spp. by Kinyoun Acid Fast and Nested PCR methods. In the Kinyoun Acid Fast staining method, firstly, smear preparations were prepared from fresh faecal samples, fixed in pure methanol for 1 min and allowed to dry. The slides were kept in Kinyoun Carbol-Fuxin for 5 min, dipped in 50% ethyl alcohol, shaken, washed in tap water, kept in 1% sulphuric acid for 2 min and washed in tap water. The slides were kept in methylene blue for 1 min, washed in tap water and allowed to dry. After drying, immersion oil was dripped and examined under a microscope at 100 magnification. DNA extraction was performed from all samples using GeneMATRIX Stool DNA Purification Kit according to the manufacturer's protocol. After Nested PCR analysis was performed. In the PCR step, primers 5'-TTCTAGAGCTAATACATGCG-3' and 5'- CCCATTTCCTTCCTTCGAAACAGGA-3' were used to amplify the 1325 bp gene region. In the nested PCR step, primers 5'- GGAAGGGTTGTATTTATTTATTAGATAAAG-3' and 5'-AAGGAGTAAGGAACAACCTCCA-3' were used to amplify the 826-864 bp gene region. As a result of both methods, a prevalence of 3% was determined. The infection rate was higher in males (3.57%) than females (2.27%) and in younger than 1 year (5.56%) than in older than 1 year (1.56%). The DNA sequences obtained from the sequence analysis of 3 positive PCR samples were analysed in BioEdit software. A phylogenetic tree was constructed with the data set created by using the 18s rRNA gene sequences obtained from the NCBI genbank database and the DNA sequences obtained as a result of the study, and it was shown which Cryptosporidium species the study samples were related to. Today, many Cryptosporidium species have been identified and most of these species have host adaptation. Although C. canis is the most common species in dogs, C. muris, C. meleagridis, and C. parvum have also been detected. Among these species, C. parvum is recognized as a zoonotic species infecting a wide range of mammals. In this study, DNA sequencing of nested PCR positive samples revealed that 3 samples were zoonotic C. parvum. Discussion: This suggests that dogs may be a reservoir for zoonotic transmission of Cryptosporidium. Consequently, it is recommended that people should be informed about the potential for transmission of this protozoan to humans and animals and that control programmes should be implemented, including the prevention of free entry of stray dogs into public places and homes.

Cross-genera amplification and identification of Colpodella sp. with Cryptosporidium primers in fecal samples of zoo felids from northeast China

Abstract The protozoans include many intracellular human pathogens. Accurate detection of these pathogens is necessary to treat the diseases. In clinical epidemiology, molecular identification of protozoan is considered a more reliable and rapid method for identification than microscopy. Among these protozoans, Cryptosporidium considered being one of the important water-borne zoonotic pathogens and a major cause of a diarrheal disease named cryptosporidiosis in humans, domestic animals, and wild animals. This study was aimed to identify Cryptosporidium in zoo felids (N= 56) belonging to different zoo of China, but accidentlly Colpodella was encountered in the zoo felids sample and phylogenetic data confirmed this unexpected amplification from fecal samples using two-step nested-PCR. Phylogenetic analysis revealed the fact about the specific primers used previously by many researchers and cross-genera amplification. We came to know that genetically sequenced amplicon gives more accurate identification of species. This study suggests more investigation on Colpodella which has been neglected previously but gains the attention of researchers after identified from humans and animals and has been known to correlate with neurological symptoms in patients.

Resumo Os protozoários incluem muitos patógenos humanos intracelulares. A detecção acurada desses patógenos é necessária para tratar as doenças. Na epidemiologia clínica, a identificação molecular de protozoários é considerada o método de identificação mais confiável e rápido do que a microscopia. Entre esses protozoários, o Cryptosporidium é considerado um dos importantes patógenos zoonóticos transmitidos pela água e uma das principais causas de uma doença diarreica denominada criptosporidiose em humanos, animais domésticos e selvagens. Este estudo teve como objetivo identificar Cryptosporidium em zoofelídeos (N = 56) pertencentes a diferentes zoológicos da China, mas acidentalmente Colpodella foi encontrada na amostra de zoofelídeos e os dados filogenéticos confirmaram essa amplificação inesperada de amostras fecais usando nested-PCR em duas etapas. A análise filogenética revelou o fato sobre os primers específicos usados anteriormente por muitos pesquisadores e a amplificação entre gêneros. Ficamos sabendo que o amplicon sequenciado geneticamente fornece uma identificação mais acurada das espécies. Este estudo sugere mais investigação sobre Colpodella, que foi negligenciada anteriormente, mas ganha a atenção dos pesquisadores depois de identificada em humanos e animais e é conhecida por se correlacionar com sintomas neurológicos em pacientes.

Occurrence of Cryptosporidium in Anglonubian goats in the municipality of Teresina, state of Piauí, Brazil / Ocorrência de Cryptosporidium em cabras da raça Anglonubiana no município de Teresina, estado do Piauí, Brasil

This research aimed to investigate the occurrence of Cryptosporidium and correlate it with types of housing, feces consistency, and physiological parameters related to the reproductive status of Anglo-Nubian goats reared in the State of Piauí, Brazil. A total of 180 fecal samples were collected from 60 non-pregnant and lactating goats with a mean weight of 35 kg, a body condition score of 3.5, and a mean age of three years from an experimental herd at the Federal University of Piauí (UFPI). Oocysts of protozoa of the genus Cryptosporidium could be found in the studied animals using the modified Ziehl-Neelsen technique in fecal smears and the image analysis system to perform morphometry. Each independent variable in the quantitative and qualitative analyses, that is, weight, body condition score (BCS), physiological status (non-pregnant or lactating), feces consistency (normal, pasty, or diarrheal), and floor types (concrete and slatted), was tested with the dependent variable (positive samples, i.e., the presence of Cryptosporidium oocysts). Twenty-four out of the total number of fecal samples were considered positive for the presence of the protozoan, which means that 13.3% of the animals were parasitized. Moreover, 100% of the positive feces samples had normal consistency (firm) and all parasitized animals were reared in pens with a concrete floor. A statistical variation was observed in the BCS of parasitized animals compared to non-parasitized ones (p > 0.0253). The results showed that the occurrence of Cryptosporidium in experimental goats located in the municipality of Teresina, State of Piauí, Brazil, was considered low, requiring sanitary management measures to prevent infection in animals and humans. This is the first report of Cryptosporidium infection in goats in the State of Piauí.

O objetivo desta pesquisa foi investigar a ocorrência de Crypstoporidium e correlacionar com tipos de alojamento, consistência das fezes e parâmetros fisiológicos ligados ao estado reprodutivo de cabras da raça Anglonubiana criadas no estado do Piauí, Brasil. Foram utilizadas 180 amostras de fezes de 60 cabra, com peso médio de 35kg, escore de condição corporal de 3,5, com idade em média de três anos, e cabras vazias e lactantes, de um rebanho experimental da Universidade Federal do Piauí (UFPI). Utilizando-se a técnica de Ziehl-Neelsen modificada em esfregaço fecal e sistema de análise de imagens para a realização da morfometria, foi possível encontrar oocistos de protozoários do gênero Crypstoporidium nos animais estudados. Nas análises quantitativa e qualitativa, cada variável independente: peso, escore de condição corporal (ECC), estado fisiológico (vazia ou lactante), consistência das fezes (normal, pastosa ou diarreica) e tipos de piso (concreto e ripado), foi testada com a variável dependente (amostras positivas, ou seja, presença de oocistos de Cryptosporidium). Do total de amostras fecais analisadas, 24 delas foram consideradas positivas à presença do protozoário, o que significa que 13,3% dos animais estavam parasitados na ocasião da pesquisa. Foi observado que 100% das amostras de fezes positivas apresentaram consistência normal (firme) e que todos os animais parasitados eram criados em aprisco com piso de concreto. Houve uma variação estatística no ECC dos animais parasitados comparados aos não parasitados (p > 0,0253). Os resultados evidenciaram que a ocorrência de Cryptosporidium em caprinos experimentais localizados no município de Teresina, no estado do Piauí, foi considerada baixa, sendo necessária medidas de manejo sanitário para prevenir a infecção nos animais e no homem. Este é o primeiro relato da infecção por Cryptosporidium em cabras no estado do Piauí.

Cryptosporidium infection in diarrheal bovine dairy calves: occurrence and risk factors in Santa Catarina, Brazil / Infecção por Cryptosporidium em bezerros com diarreia: ocorrência e fatores de risco em Santa Catarina, Brasil

Cryptosporidium protozoa genus are parasites that cause acute enteric disease in young and immunocompromised animals, resulting in anorexia, loss and decrease in weight gain, and, in severe cases, death. Therefore, this study aimed: i) to determine the occurrence of Cryptosporidium spp. in calves with clinical diarrhea in different regions of Santa Catarina, Brazil; ii) to evaluate the risk factors involved with the frequency of infection. iii) to determine the species most involved with the disease in the region. For this, 425 samples were collected in 141 dairy farms, from animals with ages ranging from 0 to 150 days. For this purpose, the samples were submitted to the modified Ziehl-Neelsen technique, with molecular analysis of the positive samples being performed. It was observed 62.1% occurrence of Cryptosporidium spp. in this sampling, especially between 8 to 15 days. Regarding the risk factors evaluated, such as age, management, facilities, water source and Koppen climate (CFA and CFB), none showed statistical significance. Samples positive by the Ziehl-Neelsen technique (32 samples) were randomly selected for molecular diagnosis. Of these, 10 were sequenced, allowing the identification of Crypstosporidium parvum in 6 samples. However, this study proves the existence and high occurrence of the protozoan in different regions of the state of Santa Catarina, Brazil.

Os protozoários do gênero Cryptosporidium são parasitas que causam doença entérica aguda em animais jovens e imunocomprometidos, resultando em anorexia, perda e diminuição do ganho de peso e, em casos graves, morte. Portanto, este estudo teve como objetivo determinar a ocorrência de Cryptosporidium spp. em bezerros com diarreia clínica em diferentes regiões de Santa Catarina, Brasil; bem como avaliar os fatores de risco envolvidos com a frequência de infecção. Além disso, com um número seleto de amostras, buscou-se determinar as espécies mais envolvidas com a doença na região por meio de técnicas moleculares. Para isso, foram coletadas 425 amostras em 141 fazendas leiteiras, de animais com idade variando de 0 a 150 dias. Observou-se 62,1% de ocorrência de Cryptosporidium spp. nesta amostragem, principalmente entre 8 a 15 dias. Em relação aos fatores de risco avaliados, como idade, manejo, instalações, fonte hídrica e clima de Koppen (CFA e CFB), nenhum apresentou significância estatística. No entanto, este estudo comprova a existência e alta ocorrência do protozoário em diferentes regiões do estado de Santa Catarina, Brasil.

Cryptosporidium sp. in cultivated oysters and the natural oyster stock of the state of Maranhão, Brazil / Detecção de Cryptosporidium sp. em ostras de cultivo e estoque natural no estado do Maranhão, Brasil

ABSTRACT: This study detected Cryptosporidium spp. in cultivated oysters and the natural oyster stock of the state of Maranhão and determine the elective tissue(s) to examine this protozoan. For this purpose, 200 cultivated oysters were purchased from the municipality of Raposa and another 100 from Paço do Lumiar. Additionally, 100 oysters were extracted from the natural stock of the municipality of Primeira Cruz, thus making up a total of 400 oysters. They were grouped into 80 pools consisting of 5 oysters each. From each pool, the gills and visceral mass were removed to obtain 160 pools, 80 pools for the gill group and another 80 for the visceral mass group. Then, DNA was extracted from each pool using a commercial kit with modifications. Subsequently, the protozoan DNA was detected using nested polymerase chain reaction. With this technique, the DNA of the protozoan under investigation was detected in 2.5% (n = 2/80) of the pools containing gills, with 1.25% of the pools (n = 1/80) belonging to the cultivation group of oysters and the other 1.25% (n = 1/80) to the natural stock. With the results obtained in this study, it was concluded that the analyzed oysters of the genus Crassostrea, from cultivation and natural stock groups, found in the state of Maranhão, were contaminated by Cryptosporidium spp. and may become potential sources of infection in humans and other animals. In addition, the gills are the elective tissue for the study of Cryptosporidium spp. in oysters.

RESUMO: Objetivou-se com o estudo detectar Cryptosporidium sp. em ostras de cultivo e estoque natural no estado do Maranhão e determinar o(s) tecido(s) eletivo(s) para pesquisa desse protozoário. Para a realização do estudo foram adquiridas 200 ostras de cultivo do município de Raposa e 100 de Paço do Lumiar, além de 100 ostras extraídas de estoque natural do município de Primeira Cruz, totalizando 400 ostras. Estas foram agrupadas em 80 pools constituídos por cinco animais. De cada pool, as brânquias e a massa visceral foram removidas totalizando 160 pools, sendo 80 para o grupo das brânquias e 80 para o grupo de massa visceral. Na sequência, procedeu-se à extração de DNA de cada pool com a utilização de kit comercial com modificações. Posteriormente, realizou-se a detecção do DNA do protozoário por meio da técnica de Nested-PCR. Com a técnica utilizada, foi detectado o DNA do protozoário pesquisado em 2,5% (n=2/80) pools apenas de brânquias, sendo 1,25% pools (n=1/80) oriundos de cultivo e os outros 1,25% (n=1/80) de estoque natural. Com os resultados obtidos nesse estudo, conclui-se que as ostras analisadas do gênero Crassostrea sp., oriundas de cultivo e estoque natural no estado do Maranhão, estavam contaminadas por Cryptosporidium sp. e podem se reverter em fontes potenciais para seres humanos e outros animais. Para a pesquisa de Cryptosporidium sp. em ostras, as brânquias são o tecido eletivo.

Cross-genera amplification and identification of Colpodella sp. with Cryptosporidium primers in fecal samples of zoo felids from northeast China / Amplificação cruzada de gêneros e identificação de Colpodella sp. com iniciadores de Cryptosporidium em amostras fecais de zoofilia do nordeste da China

The protozoans include many intracellular human pathogens. Accurate detection of these pathogens is necessary to treat the diseases. In clinical epidemiology, molecular identification of protozoan is considered a more reliable and rapid method for identification than microscopy. Among these protozoans, Cryptosporidium considered being one of the important water-borne zoonotic pathogens and a major cause of a diarrheal disease named cryptosporidiosis in humans, domestic animals, and wild animals. This study was aimed to identify Cryptosporidium in zoo felids (N= 56) belonging to different zoo of China, but accidentlly Colpodella was encountered in the zoo felids sample and phylogenetic data confirmed this unexpected amplification from fecal samples using two-step nested-PCR. Phylogenetic analysis revealed the fact about the specific primers used previously by many researchers and cross-genera amplification. We came to know that genetically sequenced amplicon gives more accurate identification of species. This study suggests more investigation on Colpodella which has been neglected previously but gains the attention of researchers after identified from humans and animals and has been known to correlate with neurological symptoms in patients.

Os protozoários incluem muitos patógenos humanos intracelulares. A detecção acurada desses patógenos é necessária para tratar as doenças. Na epidemiologia clínica, a identificação molecular de protozoários é considerada o método de identificação mais confiável e rápido do que a microscopia. Entre esses protozoários, o Cryptosporidium é considerado um dos importantes patógenos zoonóticos transmitidos pela água e uma das principais causas de uma doença diarreica denominada criptosporidiose em humanos, animais domésticos e selvagens. Este estudo teve como objetivo identificar Cryptosporidium em zoofelídeos (N = 56) pertencentes a diferentes zoológicos da China, mas acidentalmente Colpodella foi encontrada na amostra de zoofelídeos e os dados filogenéticos confirmaram essa amplificação inesperada de amostras fecais usando nested-PCR em duas etapas. A análise filogenética revelou o fato sobre os primers específicos usados anteriormente por muitos pesquisadores e a amplificação entre gêneros. Ficamos sabendo que o amplicon sequenciado geneticamente fornece uma identificação mais acurada das espécies. Este estudo sugere mais investigação sobre Colpodella, que foi negligenciada anteriormente, mas ganha a atenção dos pesquisadores depois de identificada em humanos e animais e é conhecida por se correlacionar com sintomas neurológicos em pacientes.

Cryptosporidium sp. in cultivated oysters and the natural oyster stock of the state of Maranhão, Brazil / Detecção de Cryptosporidium sp. em ostras de cultivo e estoque natural no estado do Maranhão, Brasil

This study detected Cryptosporidium spp. in cultivated oysters and the natural oyster stock of the state of Maranhão and determine the elective tissue(s) to examine this protozoan. For this purpose, 200 cultivated oysters were purchased from the municipality of Raposa and another 100 from Paço do Lumiar. Additionally, 100 oysters were extracted from the natural stock of the municipality of Primeira Cruz, thus making up a total of 400 oysters. They were grouped into 80 pools consisting of 5 oysters each. From each pool, the gills and visceral mass were removed to obtain 160 pools, 80 pools for the gill group and another 80 for the visceral mass group. Then, DNA was extracted from each pool using a commercial kit with modifications. Subsequently, the protozoan DNA was detected using nested polymerase chain reaction. With this technique, the DNA of the protozoan under investigation was detected in 2.5% (n = 2/80) of the pools containing gills, with 1.25% of the pools (n = 1/80) belonging to the cultivation group of oysters and the other 1.25% (n = 1/80) to the natural stock. With the results obtained in this study, it was concluded that the analyzed oysters of the genus Crassostrea, from cultivation and natural stock groups, found in the state of Maranhão, were contaminated by Cryptosporidium spp. and may become potential sources of infection in humans and other animals. In addition, the gills are the elective tissue for the study of Cryptosporidium spp. in oysters.

Objetivou-se com o estudo detectar Cryptosporidium sp. em ostras de cultivo e estoque natural no estado do Maranhão e determinar o(s) tecido(s) eletivo(s) para pesquisa desse protozoário. Para a realização do estudo foram adquiridas 200 ostras de cultivo do município de Raposa e 100 de Paço do Lumiar, além de 100 ostras extraídas de estoque natural do município de Primeira Cruz, totalizando 400 ostras. Estas foram agrupadas em 80 pools constituídos por cinco animais. De cada pool, as brânquias e a massa visceral foram removidas totalizando 160 pools, sendo 80 para o grupo das brânquias e 80 para o grupo de massa visceral. Na sequência, procedeu-se à extração de DNA de cada pool com a utilização de kit comercial com modificações. Posteriormente, realizou-se a detecção do DNA do protozoário por meio da técnica de Nested-PCR. Com a técnica utilizada, foi detectado o DNA do protozoário pesquisado em 2,5% (n=2/80) pools apenas de brânquias, sendo 1,25% pools (n=1/80) oriundos de cultivo e os outros 1,25% (n=1/80) de estoque natural. Com os resultados obtidos nesse estudo, conclui-se que as ostras analisadas do gênero Crassostrea sp., oriundas de cultivo e estoque natural no estado do Maranhão, estavam contaminadas por Cryptosporidium sp. e podem se reverter em fontes potenciais para seres humanos e outros animais. Para a pesquisa de Cryptosporidium sp. em ostras, as brânquias são o tecido eletivo.

Cross-genera amplification and identification of Colpodella sp. with Cryptosporidium primers in fecal samples of zoo felids from northeast China / Amplificação cruzada de gêneros e identificação de Colpodella sp. com iniciadores de Cryptosporidium em amostras fecais de zoofilia do nordeste da China

The protozoans include many intracellular human pathogens. Accurate detection of these pathogens is necessary to treat the diseases. In clinical epidemiology, molecular identification of protozoan is considered a more reliable and rapid method for identification than microscopy. Among these protozoans, Cryptosporidium considered being one of the important water-borne zoonotic pathogens and a major cause of a diarrheal disease named cryptosporidiosis in humans, domestic animals, and wild animals. This study was aimed to identify Cryptosporidium in zoo felids (N= 56) belonging to different zoo of China, but accidentlly Colpodella was encountered in the zoo felids sample and phylogenetic data confirmed this unexpected amplification from fecal samples using two-step nested-PCR. Phylogenetic analysis revealed the fact about the specific primers used previously by many researchers and cross-genera amplification. We came to know that genetically sequenced amplicon gives more accurate identification of species. This study suggests more investigation on Colpodella which has been neglected previously but gains the attention of researchers after identified from humans and animals and has been known to correlate with neurological symptoms in patients.(AU)

Os protozoários incluem muitos patógenos humanos intracelulares. A detecção acurada desses patógenos é necessária para tratar as doenças. Na epidemiologia clínica, a identificação molecular de protozoários é considerada o método de identificação mais confiável e rápido do que a microscopia. Entre esses protozoários, o Cryptosporidium é considerado um dos importantes patógenos zoonóticos transmitidos pela água e uma das principais causas de uma doença diarreica denominada criptosporidiose em humanos, animais domésticos e selvagens. Este estudo teve como objetivo identificar Cryptosporidium em zoofelídeos (N = 56) pertencentes a diferentes zoológicos da China, mas acidentalmente Colpodella foi encontrada na amostra de zoofelídeos e os dados filogenéticos confirmaram essa amplificação inesperada de amostras fecais usando nested-PCR em duas etapas. A análise filogenética revelou o fato sobre os primers específicos usados anteriormente por muitos pesquisadores e a amplificação entre gêneros. Ficamos sabendo que o amplicon sequenciado geneticamente fornece uma identificação mais acurada das espécies. Este estudo sugere mais investigação sobre Colpodella, que foi negligenciada anteriormente, mas ganha a atenção dos pesquisadores depois de identificada em humanos e animais e é conhecida por se correlacionar com sintomas neurológicos em pacientes.(AU)

Molecular identification of Cryptosporidium baileyi in Muscovy ducks (Cairina moschata domesticus) in free-range production systems / Identificação molecular de Cryptosporidium baileyi em patos Muscovy (Cairina moschata domesticus) em sistemas de produção ao ar livre

Cryptosporidiosis is considered an infection with impact on animal health. It has been associated with high morbidity and mortality rates, leading to significant economic losses to the poultry industry. This study investigated the presence of Cryptosporidium spp. in domestic ducks of family Anatidae (Cairina moschata) from two rustic commercial aviaries located in the city of Rio de Janeiro, Brazil. A total of 315 fecal samples were collected from domestic ducks in two different areas (N=186 in area A and N=129 in area B). The microscopic analysis was conducted using a sugar centrifugal flotation technique for the identification of Cryptosporidium spp. oocysts, followed by PCR/sequencing analyses of the partial sequence of the 18S rDNA gene to determine the Cryptosporidium species. Of the 315 samples collected, only 10 (186/5.38%) from area A were positive for Cryptosporidium. The nucleotide sequence and phylogenetic analyses identified that all samples were identical (100%) and belonged to Cryptosporidium baileyi species, which is closely related to gastric species and of importance in animal health.

Criptosporidiose é considerada uma infeção com impacto na saúde animal. Tem sido associada a altas taxas de morbidade e mortalidade, levando a perdas econômicas significativas para a indústria avícola. Este estudo teve como objetivo investigar a presença de Cryptosporidium spp. em patos domésticos da família Anatidae (Cairina moschata) de dois aviários comerciais rústicos localizados na cidade do Rio de Janeiro, Brasil. Um total de 315 amostras fecais foram coletadas de patos domésticos em duas áreas (Área A / n= 186; Área B / n= 129). Amostras fecais foram processadas e utilizando a técnica de centrífuga e flutuação em solução saturada de açúcar para a identificação de oocistos de Cryptosporidium spp. através da observação microscópica. Naquelas amostras positivas, procedeu-se com o diagnóstico molecular para determinação de espécie de Cryptosporidium. Das 315 amostras coletadas, apenas 10 (186 / 5,38%) da área A foram positivas para Cryptosporidium. A sequência de nucleotídeos e as análises filogenéticas identificaram que todas as amostras eram idênticas (100%) e pertenciam à espécie Cryptosporidium baileyi, intimamente relacionada às espécies gástricas e de importância na saúde animal.

Validation of a one-tube nested real-time PCR assay for the detection of Cryptosporidium spp. in avian fecal samples / Validação da nested PCR em tempo real em um tubo para detecção de Cryptosporidium spp. em amostras fecais de aves

Abstract The aim of this study was to validate a one-tube nested real-time PCR assay followed by genetic sequencing to detect and identify Cryptosporidium species and genotypes in birds. A total of 443 genomic DNA extracted from avian fecal samples were analyzed by one-tube nested real-time PCR and conventional nested PCR. By one-tube nested real-time PCR, 90/443 (20.3%) samples were positive for Cryptosporidium spp. In contrast, 36/443 (8.1%) samples were positive for Cryptosporidium spp. by conventional nested PCR. The analytical sensitivity test showed that one-tube nested real-time PCR detects approximately 0.5 oocyst (2 sporozoites) per reaction. An evaluation of analytical specificity did not reveal amplification of microorganisms that commonly present nonspecific amplification with primers used for the diagnosis of Cryptosporidium spp. The repeatability analysis showed the same result in 27 out of 30 samples (90%). As for the reproducibility of one-tube nested real-time PCR, 24 of the 30 samples examined (80%) showed the same result. All the 90 samples amplified by one-tube real-time nested PCR were successfully sequenced, leading to the identification of C. baileyi, C. galli, C. meleagridis, C. proventriculi, and Cryptosporidium avian genotype I. Genetic sequencing of conventional nested PCR amplicons was successful in 10/36 (27.8%) of positive samples.

Resumo O objetivo deste trabalho foi validar um protocolo de nested PCR em tempo real em um tubo (nPCR-TR-1T) seguida de sequenciamento genético para detectar e caracterizar as espécies e genótipos de Cryptosporidium em aves. Um total de 443 amostras de DNA genômico, extraído de amostras fecais de aves, foi analisado pela nPCR-TR-1T e pela nested PCR convencional. Pela nPCR-TR-1T, foi observada positividade para Cryptosporidium spp. de 20,3% (90/443), em contraste com a nested PCR convencional, que apresentou positividade de 8,1% (36/443). O teste de sensibilidade analítica mostrou que a nPCR-TR-1T detecta aproximadamente 0,5 oocisto (2 esporozoítos) por reação. A avaliação da especificidade analítica não revelou amplificação de microrganismos que comumente apresentam amplificação inespecífica com primers utilizados para o diagnóstico de Cryptosporidium spp. O cálculo da repetibilidade evidenciou o mesmo resultado em 27 de 30 amostras (90%). Em relação à reprodutibilidade da nPCR-TR-1T, foi observado o mesmo resultado em 80% (24/30) das amostras examinadas. Foi possível realizar o sequenciamento em todas as 90 amostras amplificadas pela nPCR-TR-1T, com identificação de C. baileyi, C. galli, C. meleagridis, C. proventriculi e Cryptosporidium genótipo I em aves. O sequenciamento dos fragmentos amplificados pela nested PCR convencional foi possível em 10/36 (27,8%) das amostras positivas.

Zoonoses parasitárias oriundas de fezes de cães no Brasil / Parasitic zoonoses arising from dog feces in Brazil

O crescente número de animais de companhia, principalmente nos grandes centros, tem estreitado o contato entre esses e o homem, aumentando a exposição humana a agentes de zoonoses. A incidência de zoonoses parasitárias é frequente em cães. Entre as zoonoses parasitárias estão: Giardíase, Dipilidiose, Criptosporodiose, Toxocaríase, Larva migrans cutânea, Larva migrans ocular e Larva migrans visceral. Diante do exposto, o objetivo deste estudo foi realizar uma revisão de literatura dessas zoonoses transmitidas por fezes de cães no Brasil. Foi realizada, para isso, uma busca em revistas acadêmicas científicas disponíveis on-line e impressas, com os seguintes termos de indexação: zoonoses parasitárias e parasitos intestinais em cães; sendo incluídos no estudo artigos publicados a partir de 1958 até 2021. Dessa forma, foram reunidos e comparados os diferentes dados encontrados nas fontes de consulta e listadas as principais zoonoses parasitárias em cães, além de etiologia, forma de transmissão e tratamento.

The growing number of companion animals, especially in large cities, has narrowed the contact between these animals and man, increasing human exposure to agents of zoonoses. The incidence of parasitic zoonoses is frequent in dogs. Among the parasitary zoonoses are Giardiasis, Dipilidiosis, Cryptosporodiosis, Toxocariasis, cutaneous larva migrans, ocular larva migrans, and visceral larva migrans. The aim of this study was to conduct a literature review of these zoonoses transmitted by dog feces in Brazil. A search was performed in scientific academic journals available online and in print, with the following indexing terms: parasitary zoonoses and intestinal parasites in dogs. Articles published from 1958 to 2021 were included in the study. Based on these articles, the different data related to the main parasitic zoonoses in dogs, etiology, form of transmission, and treatment were gathered and compared.

Prevalence of cestodes infection among school children of urban parts of Lower Dir district, Pakistan / Prevalência de infecção de cestóides entre crianças em idade escolar de partes urbanas do distrito de Lower Dir, Paquistão

Tapeworms of zoonotic importance have been described as a leading public health problem. Current research was aim to assess the prevalence of tapeworms among 5-12years school children residing in district Lower Dir, Pakistan from January 2019-December 2019. The wet mount preparation in saline/iodine/methods were used for stool examination. Data was analyzed using appropriate descriptive, static methods. Of the 400 children studied 71.7% were infected with one or more species of intestinal parasites. Single infection of cestode species was found in 69 individuals with 17.2% prevalence and multiple parasitic infections were identified in 19.7% (n=79/400) individuals. The multiple infection were comprised as 10% (n=40) double, 6.75% (n=27) triple and 3% (n=12) quadruple. A total of 9 species of helminths and one species of protozoan infection. Among the helminths Ascaris lumbricoides was the most prevalent 33.1% (n=95), Taenia saginata 22.6% (n=65), hookworm 19.8% (n=57), Hymenolepis nana 18.8% (n=54), Enterobius vermicularis and Hymenolepis diminuta 1.39% (n=4each), Trichuris trichura 1.04% (n=3), Toxocara spp 0.69% (n=2) and Schistosoma japonicum 0.34% (n=1) were reported. One protozoan species was Cryptosporidium spp 0.69% (n=2) in current study. In case of A.lumbricoides, hookworm, E.vermicularis, T.trichura, T.saginata, H.nana and H.diminuta the male children of below 8 years of age were highly infected. Other infections are reported in the same prevalence with slight difference if any. We conclude that there is a need for mass scale campaigns to create awareness regarding health and hygiene in children and the need for development of effective poverty control programs because deworming alone is not adequate to control parasitic infections.

As tênias de importância zoonótica têm sido descritas como um dos principais problemas de saúde pública. A pesquisa atual teve como objetivo avaliar a prevalência de tênias entre crianças em idade escolar de 5 a 12 anos que residem no distrito de Lower Dir, Paquistão, de janeiro de 2019 a dezembro de 2019. Os métodos de preparação para montagem úmida em solução salina/iodo foram usados para exame de fezes. Os dados foram analisados usando métodos descritivos e estáticos apropriados. Das 400 crianças estudadas, 71,7% estavam infectadas com uma ou mais espécies de parasitas intestinais. Infecção única de espécies de cestóides foi encontrada em 69 indivíduos com prevalência de 17,2% e infecções parasitárias múltiplas foram identificadas em 19,7% (n = 79/400) indivíduos. As infecções múltiplas foram compostas por 10% (n = 40) dupla, 6,75% (n = 27) tripla e 3% (n = 12) quádrupla. Um total de 9 espécies de helmintos e uma espécie de infecção por protozoários. Entre os helmintos, Ascaris lumbricoides foi o mais prevalente 33,1% (n = 95), Taenia saginata 22,6% (n = 65), ancilóstomo 19,8% (n = 57), Hymenolepis nana 18,8% (n = 54), Enterobius vermicularis e Hymenolepis diminuta 1,39% (n = 4cada), Trichuris trichura 1,04% (n = 3), Toxocara spp 0,69% (n = 2) e Schistosoma japonicum 0,34% (n = 1). Uma espécie de protozoário foi Cryptosporidium spp 0,69% (n = 2) no estudo atual. No caso de A.lumbricoides, ancilostomíase, E.vermicularis, T.trichura, T.saginata, H.nana e H.diminuta, as crianças do sexo masculino com menos de 8 anos de idade estavam altamente infectadas. Outras infecções são relatadas na mesma prevalência, com ligeira diferença, se houver. Concluímos que há uma necessidade de campanhas em massa para criar consciência sobre saúde e higiene em crianças e a necessidade de desenvolvimento de programas eficazes de controle da pobreza, porque a desparasitação por si só não é adequada para controlar infecções parasitárias.

Identification, molecular characterization and factors associated with occurrences of Cryptosporidium spp. in calves on dairy farms in Brazil / Identificação, caracterização molecular e fatores associados à ocorrência de Cryptosporidium spp. em bezerros de propriedades leiteiras no Brasil

Abstract Cattle are an important source of zoonotic species of Cryptosporidium for humans. The aim of this study was to investigate the presence of Cryptosporidium, identify the species and determine the risk factors relating to environment, animals and management among dairy calves in eight Brazilian states. A total of 408 fecal samples from calves aged 1-60 days were analyzed. An epidemiological questionnaire was completed. Sample screening was performed using Ziehl-Neelsen technique and the positive samples were subjected to nested PCR. Cryptosporidium species were identified by means of the PCR-RFLP technique, using SSPI, ASEI and MBOII enzymes. The Ziehl-Neelsen technique showed that 89.7% (35/39) of the farms and 52.9% (216/408) of the samples were positive. Through nested PCR, these protozoa were detected in 54.6% of the samples. The 56 samples subjected to PCR-RFLP presented Cryptosporidium parvum. There was higher prevalence of the parasite in animals aged 7 to 28 days (62.6%). Diarrhea, ages between seven and 28 days and a spring water source were factors associated with the risk of infection. The calf hutch-type management system was associated with reduced infection. These findings demonstrate the high level of Cryptosporidium spp. circulation in cattle herds and the predominance of the species C. parvum.

Resumo O gado é uma fonte importante de espécies zoonóticas de Cryptosporidium para o homem. O objetivo deste estudo foi investigar a presença de Cryptosporidium, identificar a espécie e determinar os fatores de risco relacionados ao meio ambiente, aos animais e ao manejo em bezerros leiteiros em oito estados brasileiros. Um total de 408 amostras fecais de bezerros, com idade entre 1 e 60 dias, foram analisadas. Um questionário epidemiológico foi preenchido. A triagem das amostras foi realizada pela técnica de Ziehl-Neelsen, e as amostras positivas foram submetidas à "nested" PCR. As espécies de Cryptosporidium foram identificadas pela técnica de PCR-RFLP, utilizando-se as enzimas SSPI, ASEI e MBOII. A técnica de Ziehl-Neelsen mostrou que 89,7% (35/39) das fazendas e 52,9% (216/408) das amostras foram positivas. Por meio de nested PCR, esses protozoários foram detectados em 54,6% das amostras. As 56 amostras submetidas à PCR-RFLP apresentaram Cryptosporidium parvum. Houve maior prevalência do parasita em animais de 7 a 28 dias (62,6%). Diarreia, idade entre sete e 28 dias, e fonte de água mineral foram fatores associados ao risco de infecção. O sistema de manejo do tipo "casinha" para bezerros foi associado à redução da infecção. Esses achados demonstram o alto nível de Cryptosporidium spp. em circulação nos rebanhos bovinos e o predomínio da espécie C. parvum.

Antiparasitic and immunomodulating effects of nitazoxanide, ivermectin and selenium on Cryptosporidium infection in diabetic mice / Efeitos antiparasitários e imunomodulantes da nitazoxanida, ivermectina e selênio sobre a infecção por Cryptosporidium em camundongos diabéticos

Abstract The present work aims to investigate the antiparasitic and the immunomodulating effects of nitazoxanide (NTZ) and ivermectin (IVC) alone or combined together or combined with selenium (Se), on Cryptosporidium infection in diabetic mice. The results revealed that the combined NTZ and IVC therapy achieved the highest reduction of fecal oocysts (92%), whereas single NTZ showed the lowest reduction (63%). Also, adding Se to either NTZ or IVC resulted in elevation of oocyst reduction from 63% to 71% and from 82% to 84% respectively. All treatment regimens, with the exception of NTZ monotherapy, showed a significant improvement in the intestinal histopathology, the highest score was in combined NTZ and IVC therapy. The unique results of immunohistochemistry in this study showed reversal of the normal CD4/CD8 T cell ratio in the infected untreated mice, however, following therapy it reverts back to a normal balanced ratio. The combined (NTZ+ IVC) treatment demonstrated the highest level of CD4 T cell expression. Taken together, NTZ and IVC combined therapy showed remarkable anti-parasitic and immunostimulatory effects, specifically towards the CD4 population that seem to be promising in controlling cryptosporidiosis in diabetic individuals. Further research is required to explore other effective treatment strategies for those comorbid patients.

Resumo O presente trabalho tem como objetivo investigar os efeitos anti-parasitários e imunomodulantes da nitazoxanida (NTZ) e ivermectina (IVC), isoladas ou em associação, e do selênio (SE), associado à NTZ ou à IVC, sobre a infecção por Cryptosporidium em camundongos diabéticos. Os resultados revelaram que a terapia combinada com NTZ e IVC resultou em maior redução de oocistos fecais, enquanto a NTZ isolada mostrou a menor redução de oocistos fecais (63%). Além disso, a associação do SE com a NTZ ou IVC resultou em redução do número de oocistos fecais de 63% para 71% e de 82% para 84%, respectivamente. Todos os tratamentos, com exceção da monoterapia com NTZ, mostraram uma melhora significativa nos índices relacionados à histopatologia intestinal. Os resultados da imuno-histoquímica mostraram reversão da razão celular CD4/CD8 T normal nos camundongos infectados não tratados, no entanto, após a terapia, houve retorno à razão celular CD4/CD8 T normal. O tratamento combinado (NTZ+ IVC) demonstrou o mais alto nível de expressão celular CD4 T. Em conclusão, a terapia combinada com NTZ e IVC mostrou efeitos anti-parasitários e imunoestimuladores notáveis, especificamente para a população CD4, que parecem ser promissores para o controle da criptosporidiose em indivíduos diabéticos.

Prevalence of infection by Cryptosporidium spp. in calves and associated risk factors in Northeastern Brazil / [Prevalência da infecção por Cryptosporidium spp. e fatores de risco associados em bezerros do Nordeste do Brasil]

Cryptosporidium spp. are zoonotic protozoa, frequently associated with diarrhea in calves, which are responsible for important economic losses. The aim of this study was to assess the prevalence of infection by Cryptosporidium spp. and its associated risk factors among calves raised in a milk production region of Northeastern Brazil. Fecal samples (n = 385) were obtained from young animals (up to ten months old) and evaluated by means of centrifugal fecal sedimentation in formalin-ether followed by the modified Ziehl-Neelsen staining technique. In addition, Odds Ratio (OR) was calculated to evaluate associations between variables and infection by these protozoa. Out of all samples analyzed, 25.7% (99/385) scored positive for the presence of Cryptosporidium spp. Contact with other species (goat and sheep) (OR = 3.33; p = 0.000), use of a semi-intensive rearing system (OR = 1.70; p = 0.024) and absence of hygienic conditions (fecal contamination of food and water) (OR = 1.64; p = 0.029) were considered to be risk factors. Data herein reported shows that the implementation of hygienic-sanitary measures on the farms studied, it is imperative to reduce Cryptosporidium spp. infection and consequently the economic impact caused by this pathogen.(AU)

Cryptosporidium spp. são protozoários zoonóticos frequentemente associados à diarreia em bezerros e responsáveis por importantes perdas econômicas. O objetivo deste estudo foi avaliar a prevalência e os fatores de risco associados à infecção por Cryptosporidium spp. em bezerros de propriedades leiteiras no Nordeste do Brasil. Amostras fecais (n = 385) foram obtidas de animais jovens (até 10 meses de idade) e avaliadas por centrífugo-sedimentação em formol éter, seguida da técnica de coloração de Ziehl-Neelsen modificada. A Odds Ratio (OR) foi calculada para avaliar a associação entre variáveis e infecção pelos protozoários. De todas as amostras analisadas, 25,7% (99/385) apresentaram oocistos de Cryptosporidium spp. Contato com outras espécies (caprino e ovino) (OR = 3,33; p = 0,000), sistema semi-intensivo de criação (OR = 1,70; p = 0,024) e ausência de condições higiênicas (contaminação fecal do alimento e da água) (OR = 1,64; p = 0,029) foram considerados fatores de risco. Com base nos resultados, é imprescindível a adoção de medidas higiênico-sanitárias nas fazendas estudadas, a fim de reduzir infecção por Cryptosporidium spp. e o impacto econômico causado por esse patógeno.(AU)

Prevalence and molecular characterization of Cryptosporidium spp. in Père Davids deer (Elaphurus davidianus) in Jiangsu, China / Prevalência e caracterização molecular de Cryptosporidium spp. no cervo de Père David (Elaphurus davidianus) em Jiangsu, China

Cryptosporidium is a zoonotic parasite that causes diarrhea in a broad range of animals, including deer. Little is known about the prevalence and genotype of Cryptosporidium spp. in Père Davids deer. In this study, 137 fecal samples from Père Davids deer were collected between July 2017 and August 2018 in the Dafeng Reserve and analyzed for Cryptosporidium spp. by nested-PCR based on the small subunit ribosomal RNA (SSU rRNA) gene, followed by sequence analyses to determine the species. The 60 kDa glycoprotein (gp60) gene was used to characterize Cryptosporidium spp. Among 137 samples, 2 (1.46%) were positive for Cryptosporidium spp. according to SSU rRNA gene sequencing results. Both samples belonged to the Cryptosporidium deer genotype, with two nucleotide deletions and one nucleotide substitution. The prevalence data and molecular characterization of this study provide basic knowledge for controlling and preventing Cryptosporidium infections in Père Davids deer in this area.(AU)

Cryptosporidium é um parasita zoonótico que causa diarreia em uma ampla gama de animais, incluindo veados. Pouco se sabe sobre a prevalência e o genótipo de Cryptosporidium spp. no cervo de Père David. Neste estudo, 137 amostras fecais do cervo de Père David foram coletadas entre julho de 2017 e agosto de 2018, na Reserva Dafeng, e analisadas para Cryptosporidium spp. por nested-PCR baseado no gene do RNA ribossômico da subunidade pequena (SSU rRNA), seguido de análises de sequências para determinar as espécies. O gene da glicoproteína de 60 kDa (gp60) foi utilizado para caracterizar Cryptosporidium spp. Dentre as 137 amostras, 2 (1,46%) foram positivas para Cryptosporidium spp. de acordo com os resultados do sequenciamento gênico de SSU rRNA. Ambas as amostras pertenciam ao genótipo do cervo Cryptosporidium, com duas deleções nucleotídicas e uma substituição nucleotídica. Os dados de prevalência e a caracterização molecular deste estudo fornecem conhecimentos básicos para controlar e prevenir infecções por Cryptosporidium nos cervos de Père David nessa.(AU)

Prevalence of Cryptosporidium infection in domestic cats from an urban area in Brazil / Prevalência de infecção por Cryptosporidium em gatos domiciliados em uma área urbana no Brasil

We investigated the occurrence of Cryptosporidium oocysts shedding by domestic cats in an urban setting. The calculation of minimum sample size was based on an estimated prevalence of 10%, 5% absolute sampling error and a 5% significance level, resulting in 138 cats. A total of 612 owners of 2,290 cats had to be contacted for achieving the minimal sample size. In the end, only 55 owners accepted to participate in this investigation. Stool samples collected from 138 dogs were examined by microscopy using modified Kinyoun acid-fast staining, capture ELISA and nested-PCR followed by sequencing. Samples were considered positive when Cryptosporidium were detected by at least two diagnostic methods. Thirteen samples were positive (9.4%; 95% CI: 4.5 - 14.3). Cryptosporidium amplicons from seven out of the 13 samples were successfully sequenced and shared 99% genetic similarity to Cryptosporidium felis, GenBank access AF112575.1 was found. We concluded that Cryptosporidium infection is common in domestic cats from urban area and veterinary practitioners should guide cat owners to adopt preventive measures against the parasite to reduce the chance of infection in cats and householders.

Investigamos a ocorrência de eliminação de oocistos de Cryptosporidium em fezes de gatos domésticos em ambiente urbano. O cálculo do tamanho mínimo amostral baseou-se em uma prevalência estimada de 10%, erro amostral absoluto de 5% e nível de significância de 5%, resultando em 138 gatos. Um total de 612 proprietários de 2.290 gatos precisou ser contatado para atingir o tamanho mínimo amostral. No final, apenas 55 proprietários aceitaram participar dessa investigação. As amostras de fezes coletadas de 138 gatos foram examinadas por microscopia, usando coloração de Kinyoun modificada, ELISA de captura e nested-PCR, seguida de sequenciamento. As amostras foram consideradas positivas quando Cryptosporidium foi detectado por pelo menos duas técnicas de diagnóstico. Treze amostras foram positivas (9,4%; IC95%: 4,5 - 14,3). Os amplicons de Cryptosporidium de sete das 13 amostras foram sequenciados com sucesso e compartilharam 99% de similaridade genética com Cryptosporidium felis (acesso ao GenBank: AF112575.1). Concluímos que a infecção por Cryptosporidium é comum em gatos domésticos em área urbana e os médicos veterinários devem orientar os proprietários de gatos a adotarem medidas preventivas contra o parasita para reduzir a chance de infecção em gatos e humanos.

Prevalence of Cryptosporidium infection in domestic cats from an urban area in Brazil / Prevalência de infecção por Cryptosporidium em gatos domiciliados em uma área urbana no Brasil

We investigated the occurrence of Cryptosporidium oocysts shedding by domestic cats in an urban setting. The calculation of minimum sample size was based on an estimated prevalence of 10%, 5% absolute sampling error and a 5% significance level, resulting in 138 cats. A total of 612 owners of 2,290 cats had to be contacted for achieving the minimal sample size. In the end, only 55 owners accepted to participate in this investigation. Stool samples collected from 138 dogs were examined by microscopy using modified Kinyoun acid-fast staining, capture ELISA and nested-PCR followed by sequencing. Samples were considered positive when Cryptosporidium were detected by at least two diagnostic methods. Thirteen samples were positive (9.4%; 95% CI: 4.5 - 14.3). Cryptosporidium amplicons from seven out of the 13 samples were successfully sequenced and shared 99% genetic similarity to Cryptosporidium felis, GenBank access AF112575.1 was found. We concluded that Cryptosporidium infection is common in domestic cats from urban area and veterinary practitioners should guide cat owners to adopt preventive measures against the parasite to reduce the chance of infection in cats and householders.(AU)

Investigamos a ocorrência de eliminação de oocistos de Cryptosporidium em fezes de gatos domésticos em ambiente urbano. O cálculo do tamanho mínimo amostral baseou-se em uma prevalência estimada de 10%, erro amostral absoluto de 5% e nível de significância de 5%, resultando em 138 gatos. Um total de 612 proprietários de 2.290 gatos precisou ser contatado para atingir o tamanho mínimo amostral. No final, apenas 55 proprietários aceitaram participar dessa investigação. As amostras de fezes coletadas de 138 gatos foram examinadas por microscopia, usando coloração de Kinyoun modificada, ELISA de captura e nested-PCR, seguida de sequenciamento. As amostras foram consideradas positivas quando Cryptosporidium foi detectado por pelo menos duas técnicas de diagnóstico. Treze amostras foram positivas (9,4%; IC95%: 4,5 - 14,3). Os amplicons de Cryptosporidium de sete das 13 amostras foram sequenciados com sucesso e compartilharam 99% de similaridade genética com Cryptosporidium felis (acesso ao GenBank: AF112575.1). Concluímos que a infecção por Cryptosporidium é comum em gatos domésticos em área urbana e os médicos veterinários devem orientar os proprietários de gatos a adotarem medidas preventivas contra o parasita para reduzir a chance de infecção em gatos e humanos.(AU)

Prevalence of intestinal parasite infections in stray and farm dogs from Spain / Prevalência de infecções por parasitos intestinais em cães errantes e de fazenda na Espanha

Dogs play a potential role as reservoirs for zoonotic parasites, being especially problematic uncontrolled dog populations such as stray and farm dogs with access to populated areas. In order to investigate the prevalence of canine intestinal parasites in at-risk dog populations, we tested a total of 233 faecal samples shed by stray and dairy farm dogs from northern Spain. Telemann method was used to detect the presence of eggs and (oo)cysts of common dog intestinal parasites and Cryptosporidium was detected by PCR. One hundred and forty eight out of 233 samples (63.5%) were positive for at least one intestinal parasite, being Ancylostomidae (35.6%; 83/233) and Trichuris (35.2%; 82/233) the parasites most frequently identified. Cryptosporidium DNA was not detected in any of the faecal samples analysed. The overall prevalence was significantly higher in stray dogs than in farm dogs (72.5% vs 58.8%). Specifically, stray dogs had a significantly higher prevalence of Ancylostomatidae, Toxocara, Toxascaris and Taenidae. These dog populations are an important source of environmental contamination with intestinal parasite forms, which could be of significance to animal and human health.(AU)

Os cães desempenham um importante papel como reservatório de parasitos zoonóticos, sendo especialmente problemáticas as populações descontroladas, como a de cães errantes e de fazenda, com acesso às áreas povoadas. Para investigar a prevalência de parasitos intestinais em populações caninas de risco, foram analisadas 233 amostras fecais provenientes de cães de fazendas leiteiras e errantes do norte da Espanha. O método Telemann foi utilizado para detectar ovos, cistos e oocistos dos parasitos caninos mais comuns e para a detecção de Cryptosporidium foi utilizada a técnica da PCR. Cento e quarenta e oito de 233 amostras analisadas (63,5%) foram positivas para pelo menos um parasito intestinal, sendo Ancyostomatidae (35,6%; 83/233) e Trichuris sp. (35,2%; 82/233) os parasitos identificados com maior frequência. O DNA de Cryptosporidium sp. não foi detectado em nenhuma das amostras fecais analisadas. A prevalência geral foi significativamente maior em cães errantes do que em cães de fazenda (72,5% vs 58,8%). Especificamente, os cães errantes tiveram prevalência maior para Ancylostomatidae, Toxocara, Toxascaris e Taenidae. Essas populações de cães são importantes fontes de contaminação ambiental, pois eliminam formas de vida desses parasitos, que podem ter impacto na saúde animal e humana.(AU)