Effects of supplementation with vitamins C and E on the acute inflammatory response in Piaractus mesopotamicus / Efeitos da suplementação com vitaminas C e E na resposta inflamatória aguda em Piaractus mesopotamicus

Vitamins C and E are potent antioxidants that reduces the harmful effects of stress in several species including fish. In this study, it was evaluated the effect of vitamins C, E and their combination in the acute aerocystitis induced by inactivated Aeromonas hydrophila in pacu. 288 fish were distributed into 4 groups supplemented for 90 days: G1-control; G2- supplemented with 500 mg of Vitamin C; G3-supplemented with 500 mg of Vitamin E; G4-supplemented with 500 mg of Vitamin C + 500 mg of Vitamin E. The fish were divided in three groups, the first was not inoculated; second were inoculated in the swim bladder with 3 x 109 CFU of inactivated A. hydrophila and the last one with saline. The inflammatory exudate was collected from the swim bladder for assessment of cellular component and cytochemistry. The results showed higher accumulation of leukocytes in fish inoculated with bacteria. Cytochemistry was effective identifying thrombocytes, lymphocytes, macrophages and, granulocytes present in the exudate. It was also observed fish that received supplementation with vitamins presented higher accumulation of total cells in the exudate with a predominance of lymphocytes and thrombocytes. These results suggested that supplementation with vitamins improved the immunological responses.

As vitaminas C e E são potentes antioxidantes que reduzem os efeitos nocivos do estresse em várias espécies, incluindo peixes. Neste estudo, avaliou-se o efeito das vitaminas C, E e sua combinação na aerocistite aguda induzida por Aeromonas hydrophila inativada em pacu. 288 peixes foram distribuídos em 4 grupos suplementados por 90 dias: G1-controle; G2- suplementado com 500 mg de Vitamina C; G3-suplementado com 500 mg de Vitamina E; G4-suplementado com 500 mg de Vitamina C + 500 mg de Vitamina E. Os peixes foram divididos em três grupos, o primeiro não foi inoculado; o segundo foi inoculado na bexiga natatória com 3 x 109 UFC de A. hydrophila inativada e a última com soro fisiológico. O exsudato inflamatório foi coletado da bexiga natatória para avaliação do componente celular e citoquímica. Os resultados mostraram maior acúmulo de leucócitos nos peixes inoculados com a bactéria. A citoquímica foi eficaz na identificação de trombócitos, linfócitos, macrófagos e granulócitos presentes no exsudato. Também foi observado que os peixes que receberam suplementação com vitaminas apresentaram maior acúmulo de células totais no exsudato com predominância de linfócitos e trombócitos. Esses resultados sugeriram que a suplementação com vitaminas melhorou as respostas imunológicas.

Morphological and cytochemical characterization of the peripheral blood cells of farmed streaked prochilod Prochilodus lineatus (Characiformes, Prochilodontidae) / [Caracterização morfológica e citoquímica das células do sangue periférico do curimatã Prochilodus lineatus (Characiformes, Prochilodontidae) em cultivo]

Morphological and cytochemical studies of peripheral blood cells of fish have improved the understanding of their functions and cell types. The present study performed the Morphological and cytochemical analysis of the peripheral blood of Prochilodus lineatus, Characiform native to South America, which has been gaining space in local aquaculture and as a species introduced in Asia. Our analysis provided information on the morphological and cytochemical characteristics of the leukocytes, for the formulation of hypothesis about their role in the immune system of the species. It was found that Prochilodus lineatus has morphological and cytochemical features in common with other fish species, mainly of the Characiformes order. However, we detected the presence of heterophils and PAS positive granulocytes simultaneously with neutrophils. We also found that heterophils and PAS positive granulocytes are very similar, both morphologically and cytochemically.(AU)

O estudo da morfologia e da citoquímica das células do sangue periférico dos peixes tem sido eficaz para o entendimento de suas funções e dos tipos celulares. Este estudo realizou a análise morfológica e citoquímica do sangue periférico de Prochilodus lineatus, caracídeo nativo da América do Sul que vem ganhando espaço na aquicultura local e como espécie introduzida na Ásia. Essa análise forneceu informações sobre a morfologia e as características citoquímicas dos leucócitos, visando a hipóteses sobre suas funções. Verificou-se que estas são semelhantes em vários aspectos a outras espécies, principalmente da ordem Characiformes. No entanto, neste estudo detectou-se a presença dos heterofilos e da célula granulocítica especial, simultaneamente à presença dos neutrófilos. Ainda, foi verificado que os heterofilos e a célula granulocítica especial são muito semelhantes morfológica e citoquimicamente.(AU)

Cotesia flavipes Cameron (Hymenoptera: Braconidae) alters the nutrients in the hemolymph, fat body, and cytochemistry of Diatraea flavipennella Box (Lepidoptera: Crambidae) hemocytes / Cotesia flavipes Cameron (Hymenoptera: Braconidae) altera nutrientes na hemolinfa, corpo gorduroso e citoquímica de hemócitos em Diatraea flavipennella Box (Lepidoptera: Crambidae)

Nutritional and physiological interactions depend on the evolutionary history of the host-parasitoid interaction considering that the hosts regulation by the parasitoid is species-specific. Cotesia flavipes Cameron was introduced in Brazil in the 70s to be used in the control of Diatraea sugarcane borer complex; however, Diatraea flavipennella Box is restricted to Brazil. Thus, this study investigated the possible nutritional changes in the hemolymph and fat body, and cytochemistry of D. flavipennella hemocytes parasitized by Cotesia flavipes. The levels of nutrients were quantified using colorimetric tests in the hemolymph and fat body. Levels of acidic polysaccharides, mucin, and lipids were investigated only in hemocytes using cytochemical techniques. In addition, histological sections of parasitized and non-parasitized caterpillars were prepared to observe volume changes and the presence of glycogen in the fat body. The results showed a reduction in protein and lipid concentration in the hemolymph of parasitized caterpillars. The parasitism reduced the levels of total carbohydrate, glycogen, and protein in the fat body and almost completely consumed the perivisceral fat body. It changed the cytochemistry of hemocytes and reduced acidic glycans in prohemocytes and oenocytoids, mucin in plasmatocytes and granulocytes, and lipids in adipohemocytes, granulocytes, and...(AU)

A interação nutricional e fisiológica depende da história evolutiva da interação entre hospedeiro e parasitoide, sendo a regulação do hospedeiro pelo parasitoide espécie-específica. Cotesia flavipes Cameron foi introduzida no Brasil na década de 70 para o controle do complexo de brocas Diatraea, contudo Diatraea flavipennella Box é restrita ao Brasil. Assim, este estudo investigou as possíveis alterações nutricionais da hemolinfa e do corpo gorduroso, e citoquímica dos hemócitos de D. flavipennella parasitada por C. flavipes. Os níveis de nutrientes foram quantificados por meio de testes colorimétricos da hemolinfa e corpo gorduroso. Já os níveis de glicanos ácidos, mucina e lipídeo foram investigados, somente nos hemócitos, utilizando técnicas citoquímicas. Adicionalmente, cortes histológicos da lagarta parasitada e não parasitada foram preparados para observar alterações no volume e na presença de glicogênio no corpo gorduroso. Os resultados mostraram uma redução na concentração de proteína e lipídeos na hemolinfa de lagartas parasitadas. O parasitismo reduziu os níveis de carboidratos totais, glicogênio e proteína no corpo gorduroso e consumiu quase todo o corpo gorduroso perivisceral. Parasitismo alterou a citoquímica dos hemócitos, reduzindo glicanos ácidos em prohemócitos e oenocitóides, mucina em plasmatócitos e granulócitos, e lipídeos em adipohemócitos, granulócitos e...(AU)

Aspectos citoquímicos e morfológicos de elementos sanguíneos das serpentes dos gêneros Bothrops e Crotalus mantidas em cativeiro no serpentário do Instituto Vital Brasil / Cytochemical and morphological aspects of blood cells from Bothrops and Crotalus kept in captivity in the serpentarium of the Institute Vital Brazil

A criação de serpentes peçonhentas em cativeiro vem se tornando prática cada vez mais difundida no país. Dessa forma, o conhecimento do manejo e da clínica de serpentes se torna prioritário, a fim de permitir maior sobrevida dos animais. No que concerne a serpentes peçonhentas, dados hematológicos já foram descritos na literatura, no entanto, apesar dos recursos utilizados, os dados analisados ainda são insipientes. Com o objetivo de caracterizar, morfologicamente, as células sanguíneas e de esclarecer diferenças morfológicas e funcionais, foram coletadas amostras de sangue de 50 serpentes pertencentes ao plantel do Instituto Vital Brasil. Foram confeccionados e analisados por microscopia óptica e citoquimicamente os esfregaços sanguíneos corados por métodos de Romanowsky e citoquímicos. Foi possível diferenciar as células, caracterizar e confirmar a existência de eosinófilo em B. atrox e C. durissus. Concluiu-se que a caracterização celular pode fornecer evidências indispensáveis ao entendimento da fisiologia de serpentes.(AU)

Breeding of venomous snakes in captivity is becoming increasingly widespread in the country, so clinical and management knowledge on these animals has become priority to increase survival of animals. Regarding venomous snakes, hematological data have been described in some studies; however, despite the resources used, data analyzed are still unrecognized. Aiming to characterize morphology of blood cells and clarify morphological and functional differences, blood samples were collected from 50 snakes belonging to the Instituto Vital Brazil squad. Blood smears were prepared and analyzed by optical microscopy and cytochemistrically, stained by Romanowsky and cytochemical methods. Cell differentiation was possible as well as characterization and confirmation of eosinophil in B. atrox and C. durissus. In conclusion, cell characterization can provide vital evidence to the understanding of the physiology of snakes.(AU)

Aspectos citoquímicos e morfológicos de elementos sanguíneos das serpentes dos gêneros Bothrops e Crotalus mantidas em cativeiro no serpentário do Instituto Vital Brasil / Cytochemical and morphological aspects of blood cells from Bothrops and Crotalus kept in captivity in the serpentarium of the Institute Vital Brazil

A criação de serpentes peçonhentas em cativeiro vem se tornando prática cada vez mais difundida no país. Dessa forma, o conhecimento do manejo e da clínica de serpentes se torna prioritário, a fim de permitir maior sobrevida dos animais. No que concerne a serpentes peçonhentas, dados hematológicos já foram descritos na literatura, no entanto, apesar dos recursos utilizados, os dados analisados ainda são insipientes. Com o objetivo de caracterizar, morfologicamente, as células sanguíneas e de esclarecer diferenças morfológicas e funcionais, foram coletadas amostras de sangue de 50 serpentes pertencentes ao plantel do Instituto Vital Brasil. Foram confeccionados e analisados por microscopia óptica e citoquimicamente os esfregaços sanguíneos corados por métodos de Romanowsky e citoquímicos. Foi possível diferenciar as células, caracterizar e confirmar a existência de eosinófilo em B. atrox e C. durissus. Concluiu-se que a caracterização celular pode fornecer evidências indispensáveis ao entendimento da fisiologia de serpentes.(AU)

Breeding of venomous snakes in captivity is becoming increasingly widespread in the country, so clinical and management knowledge on these animals has become priority to increase survival of animals. Regarding venomous snakes, hematological data have been described in some studies; however, despite the resources used, data analyzed are still unrecognized. Aiming to characterize morphology of blood cells and clarify morphological and functional differences, blood samples were collected from 50 snakes belonging to the Instituto Vital Brazil squad. Blood smears were prepared and analyzed by optical microscopy and cytochemistrically, stained by Romanowsky and cytochemical methods. Cell differentiation was possible as well as characterization and confirmation of eosinophil in B. atrox and C. durissus. In conclusion, cell characterization can provide vital evidence to the understanding of the physiology of snakes.(AU)

Ultrastructural detection of lipids in the cephalic salivary glands of Apis mellifera and Scaptotrigona postica (Hymenoptera: Apidae) workers

Secretory cells of the cephalic salivary glands (CSGs) of eusocial bees produce and accumulate lipid-like secretion in the lumens of their alveoli. Correspondingly, secretory cells present typical ultrastructural features of lipid-compound producers. Previous work on bees has revealed inter-specific differences in the chemical composition of secretion, and the production mechanisms and secretory cycle of secretory cells. In this work a comparative analysis of the mechanisms of lipid storage in the CSGs of Apis mellifera (Linnaeus, 1758) and Scaptotrigona postica (Latreille, 1807) workers was carried out. The ultrastructural location of lipids was ascertained using imidazole-osmium (IO), using individuals in different stages of their life cycles. Lipid deposits were identified inside glandular cells and in the alveolar lumens in all individuals, but differences were observed between the species. The glandular cells of A. mellifera workers presented positive reactions to IO as droplets dispersed in the cytoplasm, as vesicles and in the channels formed by apical plasma membrane infolds. In S. postica , lipid compounds were detected inside the mitochondrial matrix and in smooth endoplasmic reticulum cisterns. In both species, forager workers exhibited the largest amounts of lipids stored in the alveolar lumen. The differences between the species are discussed, taking into account specific behavioral differences.

Ultrastructural detection of lipids in the cephalic salivary glands of Apis mellifera and Scaptotrigona postica (Hymenoptera: Apidae) workers

Secretory cells of the cephalic salivary glands (CSGs) of eusocial bees produce and accumulate lipid-like secretion in the lumens of their alveoli. Correspondingly, secretory cells present typical ultrastructural features of lipid-compound producers. Previous work on bees has revealed inter-specific differences in the chemical composition of secretion, and the production mechanisms and secretory cycle of secretory cells. In this work a comparative analysis of the mechanisms of lipid storage in the CSGs of Apis mellifera (Linnaeus, 1758) and Scaptotrigona postica (Latreille, 1807) workers was carried out. The ultrastructural location of lipids was ascertained using imidazole-osmium (IO), using individuals in different stages of their life cycles. Lipid deposits were identified inside glandular cells and in the alveolar lumens in all individuals, but differences were observed between the species. The glandular cells of A. mellifera workers presented positive reactions to IO as droplets dispersed in the cytoplasm, as vesicles and in the channels formed by apical plasma membrane infolds. In S. postica , lipid compounds were detected inside the mitochondrial matrix and in smooth endoplasmic reticulum cisterns. In both species, forager workers exhibited the largest amounts of lipids stored in the alveolar lumen. The differences between the species are discussed, taking into account specific behavioral differences.(AU)

PERFIL HEMATOLÓGICO E CITOQUÍMICO DO CURIMATÃ (Prochilodus lineatus CHARACIFORMES, PROCHILODONTIDAE) EM CULTIVO DA REGIÃO SERRANA DO ESTADO DO RIO DE JANEIRO

O estudo dos parâmetros hematológicos das espécies de peixes de cultivo tem proporcionado o discernimento entre reações fisiológicas e reações patológicas, e dentre os fatores ambientais, a temperatura é reconhecidamente um fator chave a promover mudanças fisiológicas. O estudo da morfologia e citoquímica das células do sangue periférico dos peixes também tem sido uma ferramenta útil ao estudo da hematologia de peixes, pois tem sido eficaz para o entendimento de suas funções e tipos celulares. O objetivo do presente estudo foi realizar a análise dos parâmetros hematológicos (hematimetria, volume globular, número de trombócitos, proteínas plasmáticas, índices hematimétricos, leucometria global e contagem diferencial de leucócitos) considerando a sazonalidade, e a análise citoquímica (peroxidase, PAS e Sudan Black B) e morfológica das células do sangue periférico do Prochilodus lineatus em cultivo. Foram utilizados 160 exemplares juvenis de Prochilodus lineatus, 40 no período de inverno de 2018, 60 no período primavera / verão de 2018 / 2019 e 60 animais no período outono / inverno de 2019. A análise estatística evidenciou diferenças significativas (p<0,02) nos parâmetros hematológicos entre estações do ano, nos valores médios de hematimetria, leucometria global, número absoluto de neutrófilos, números absoluto e relativo de heterófilos e número absoluto e relativo de eosinófilos, com maiores valores observadas no período primavera/verão, e nos valores médios de hemoglobinometria, VCM, HCM, número relativo de linfócitos e números absoluto e relativo de monócitos, com maiores médias no período outono/inverno. Observamos que há mecanismos fisiológicos de resposta à influência da temperatura, como a diminuição do tamanho dos eritrócitos em temperaturas mais quentes e predomínio das funções imunes específicas na primavera/verão, enquanto a função imune inespecífica predomina no outono/inverno. Com estes dados, formulamos intervalos de referência, adequados para cada estação do ano analisada. A análise citoquímica das células do sangue periférico mostrou que estas são semelhantes em vários aspectos a outras espécies, principalmente da ordem Characiformes. No entanto, detectamos a presença dos heterofilos e do granulócito PAS positivo, simultaneamente a presença dos neutrófilos, e que os heterófilos e a célula granulocítica especial são muito semelhantes morfológica e citoquimicamente.

The study of the hematological parameters of farmed fish species has provided insight into physiological and pathological reactions, and among environmental factors, temperature is recognized as a key factor in promoting physiological changes. The study of the morphology and cytochemistry of peripheral blood cells of fish has also been a useful tool in the study of fish hematology, as it has been effective in understanding their functions and cell types. The aim of the present study was to perform the analysis of hematological parameters (hematimetry, globular volume, number of thrombocytes, plasmatic proteins, hematimetric indexes, global leucometry and differential leucocyte count) considering seasonality, and the cytochemical (peroxidase, PAS and Sudan Black B) and morphological analysis of Prochilodus lineatus peripheral blood cells in farm conditions. We used 160 juveniles of Prochilodus lineatus, 40 in the winter period of 2018, 60 in the spring / summer period of 2018 / 2019 and 60 in the fall/winter period of 2019. Statistical analysis showed significant differences (p<0.02) in hematological parameters between seasons, mean values of hematimetry, global leucometry, absolute number of neutrophils, absolute and relative numbers of heterophiles, and absolute and relative numbers of eosinophils, with higher values observed in the spring/summer period, and mean values of hemoglobinometry, VCM, HCM, relative number of lymphocytes, and absolute and relative numbers of monocytes, with higher average in the fall/winter period. We observed that there are physiological mechanisms of response to the influence of temperature, such as a decrease in the size of erythrocytes at warmer temperatures and the predominance of the specific immune function at spring/summer, while the inespecific function is predominant at fall/winter. With these data, we formulate reference intervals, suitable for each season. The cytochemical analysis of the peripheral blood cells showed that they are similar in several aspects to other species, mainly of the Characiformes order. However, we detected the presence of heterophylls and PAS positive granulocyte, simultaneously the presence of neutrophils, and that the heterophylls and the special granulocytic cell are remarkably similar morphologically and cytochemically.

Hypocholesterolemic effects of Kluyveromyces marxianus M3 isolated from Tibetan mushrooms on diet-induced hypercholesterolemia in rat

To investigate the effects of Kluyveromyces marxianus M3 isolated from Tibetan mushrooms on diet-induced hypercholesterolemia in rats, female Wistar rats were fed a high-cholesterol diet (HCD) for 28 d to generate hyperlipidemic models. Hyperlipidemic rats were assigned to four groups, which were individually treated with three different dosages of K. marxianus M3+HCD or physiological saline+HCD via oral gavage for 28 d. The total cholesterol (TC), triglycerides (TG), high-density lipoprotein cholesterol (HDL-C), and low-density lipoprotein cholesterol (LDL-C) levels in the serum and liver of the rats were measured using commercially available enzyme kits. In addition, the liver morphology was also examined using hematoxylin and eosin staining and optical microscopy. According to our results, the serum and liver TC, TG, LDL-C levels and atherogenic index (AI) were significantly decreased in rats orally administered K. marxianus M3 (p <0.01), and the HDL-C levels and anti atherogenic index (AAI) were significantly increased (p <0.01) compared to the control group. Moreover, K. marxianus M3 treatment also reduced the build-up of lipid droplets in the liver and exhibited normal hepatocytes, suggesting a protective effect of K. marxianus M3 in hyperlipidemic rats.(AU)

AVALIAÇÃO DOS PARÂMETROS HEMATOLÓGICOS DE GALINHAS (Gallus gallus domesticus) COMERCIAIS E ORNAMENTAIS DO MUNICÍPIO DE MARICÁ, RIO DE JANEIRO. Estudo Sazonal

O objetivo deste estudo foi observar e avaliar os valores hematológicos e descrever a análise citoquímica das células sanguíneas de linhagens de galinhas nas diferentes estações do ano, para verificar a influência da sazonalidade e a existência de diferenças entre as linhagens. Foram coletadas amostras de sangue de galinhas comerciais Embrapa 51, Isa Brown e Caipira Negra (Gallus gallus domesticus) de uma granja no setor aviário de Maricá, RJ, e da ave ornamental Gigante Negra (Gallus gallus domesticus) de residência particular na mesma região. Houve diferença estatística entre os valores de parâmetros hematológicos em relação as estações do ano tendo o verão como o diferencial de todas as outras estações. Quanto à citoquímica, os resultados se mantiveram em todas as estações do ano. Concluiu-se que a hematologia é um instrumento importante na avaliação da saúde e que os valores de referencias podem variar conforme as estações do ano. Além disso, o setor aviário precisa ser mais explorado na medicina veterinária onde a prevenção é a melhor alternativa em se tratando de grande importância econômica do nosso País.

The objective of this study was to observe and evaluate the hematological values and to describe the cytochemical analysis of the blood cells of chicken lines in the different seasons of the year, in order to verify the influence of the seasonality and the existence of differences between the lineages. Blood samples were collected from commercial chickens Embrapa 51, Isa Brown and Caipira Negra (Gallus gallus domesticus) from a farm in the poultry sector of Maricá, RJ, and the ornamental bird Gigante Negra (Gallus gallus domesticus) from private residence in the same region. There was a statistical difference between the values of hematological parameters in relation to the seasons of the year and summer as the differential of all other seasons. As for cytochemistry, the results remained at all seasons of the year. It was concluded that hematology is an important instrument in health assessment and that reference values may vary according to the seasons. In addition, the poultry sector needs to be more exploited in veterinary medicine where prevention is the best alternative in the case of great economic importance of our Country.

Cytochemical study of Rhodnius neglectus and Rhodnius prolixus salivary gland cells (Hemiptera, Triatominae) / Estudo citoquímico de células da glândula salivar de Rhodnius neglectus e Rhodnius prolixus (Hemiptera, Triatominae)

Triatomines are hematophagous bugs of medical interest in South and Central America, where they may act as invertebrate hosts of the hemoflagellate protozoa Trypanosoma cruzi (the causative of Chagas disease) and Trypanosoma rangeli (Tejera, 1920). Triatomines of Rhodnius genus have salivary gland formed by two close and independent units: the principal and the accessory. This gland secretes saliva that abounds in substances that facilitate and permit feeding. Despite this importance, there are few reports on its cytochemistry. In purpose of amplifying this understanding, in this work it was investigated the nuclear structures (chromatin and nucleolar corpuscles) of salivary gland cells of Rhodnius neglectus (Lent, 1954) and Rhodnius prolixus (Stål, 1859). The salivary glands were removed from adult insects, fixed and submitted to different cytochemical methods: lacto-acetic orcein, silver ion impregnation, Feulgen reaction, Toluidine Blue, Variant method of critical electrolyte concentration and C-banding. The results evidenced predominance of binucleated cells, with bulky and polyploid nucleus, decondensed chromatin and a large nucleolar area. In addition, cytoplasmic metachromasy and a clear association between nucleolar and heterochromatic corpuscles were observed. Such characteristics were associated with intense synthesis activity to produce saliva. Besides, the heterochromatic corpuscles observed with C Banding permitted the differentiation of sexes and species.(AU)

Os triatomíneos são insetos hematófagos que apresentam interesse médico nas América do Sul e Central por serem hospedeiros invertebrados dos protozoários hemoflagelados Trypanosoma cruzi (agente etiológico da doença de Chagas) e Trypanosoma rangeli (Tejera, 1920). Os triatomíneos do gênero Rhodnius possuem glândula salivar formada por duas unidades próximas e independentes: a principal e a acessória. Esta glândula secreta uma saliva que contém substâncias que facilitam e permitem a hematofagia. Entretanto, apesar da sua importância, poucos estudos realizaram sua análise citoquímica. No propósito de ampliar esse entendimento, neste trabalho foram investigadas as estruturas nucleares (cromatina e corpúsculos nucleolares) das células da glândula salivar de Rhodnius neglectus (Lent, 1954) e Rhodnius prolixus (Stål, 1859). As glândulas foram removidas de insetos adultos, fixadas e submetidas a diferentes métodos citoquímicos: Orceína Lacto-Acética, Impregnação por Íons de Prata, Reação de Feulgen, Azul de Toluidina, Variante da Concentração Eletrolítica Crítica e Bandamento C. Os resultados evidenciaram predomínio de células binucleadas, com núcleos volumosos e poliplóides, cromatina descondensada e uma grande área nucleolar. Além disso, foi observada metacromasia citoplasmática e uma clara associação entre os corpúsculos nucleolares e heterocromáticos. Tais características foram associadas às atividades de intensa síntese proteica para a produção de saliva. Além disso, os corpúsculos heterocromáticos observados no Bandamento C permitiram a diferenciação dos sexos e das espécies.(AU)

Cytochemical study of Rhodnius neglectus and Rhodnius prolixus salivary gland cells (Hemiptera, Triatominae) / Estudo citoquímico de células da glândula salivar de Rhodnius neglectus e Rhodnius prolixus (Hemiptera, Triatominae)

Triatomines are hematophagous bugs of medical interest in South and Central America, where they may act as invertebrate hosts of the hemoflagellate protozoa Trypanosoma cruzi (the causative of Chagas’ disease) and Trypanosoma rangeli (Tejera, 1920). Triatomines of Rhodnius genus have salivary gland formed by two close and independent units: the principal and the accessory. This gland secretes saliva that abounds in substances that facilitate and permit feeding. Despite this importance, there are few reports on its cytochemistry. In purpose of amplifying this understanding, in this work it was investigated the nuclear structures (chromatin and nucleolar corpuscles) of salivary gland cells of Rhodnius neglectus (Lent, 1954) and Rhodnius prolixus (Stål, 1859). The salivary glands were removed from adult insects, fixed and submitted to different cytochemical methods: lacto-acetic orcein, silver ion impregnation, Feulgen reaction, Toluidine Blue, Variant method of critical electrolyte concentration and C-banding. The results evidenced predominance of binucleated cells, with bulky and polyploid nucleus, decondensed chromatin and a large nucleolar area. In addition, cytoplasmic metachromasy and a clear association between nucleolar and heterochromatic corpuscles were observed. Such characteristics were associated with intense synthesis activity to produce saliva. Besides, the heterochromatic corpuscles observed with C Banding permitted the differentiation of sexes and species.

Os triatomíneos são insetos hematófagos que apresentam interesse médico nas América do Sul e Central por serem hospedeiros invertebrados dos protozoários hemoflagelados Trypanosoma cruzi (agente etiológico da doença de Chagas) e Trypanosoma rangeli (Tejera, 1920). Os triatomíneos do gênero Rhodnius possuem glândula salivar formada por duas unidades próximas e independentes: a principal e a acessória. Esta glândula secreta uma saliva que contém substâncias que facilitam e permitem a hematofagia. Entretanto, apesar da sua importância, poucos estudos realizaram sua análise citoquímica. No propósito de ampliar esse entendimento, neste trabalho foram investigadas as estruturas nucleares (cromatina e corpúsculos nucleolares) das células da glândula salivar de Rhodnius neglectus (Lent, 1954) e Rhodnius prolixus (Stål, 1859). As glândulas foram removidas de insetos adultos, fixadas e submetidas a diferentes métodos citoquímicos: Orceína Lacto-Acética, Impregnação por Íons de Prata, Reação de Feulgen, Azul de Toluidina, Variante da Concentração Eletrolítica Crítica e Bandamento C. Os resultados evidenciaram predomínio de células binucleadas, com núcleos volumosos e poliplóides, cromatina descondensada e uma grande área nucleolar. Além disso, foi observada metacromasia citoplasmática e uma clara associação entre os corpúsculos nucleolares e heterocromáticos. Tais características foram associadas às atividades de intensa síntese proteica para a produção de saliva. Além disso, os corpúsculos heterocromáticos observados no Bandamento C permitiram a diferenciação dos sexos e das espécies.

Cytochemical characterization of gill and hepatopancreatic cells of the crab Ucides cordatus (Crustacea, Brachyura) validated by cell metal transport / Caracterização citoquímica de células de brânquias e hepatopâncreas de Ucides cordatus (Crustacea, Brachyura) validado por transporte celular de metais

Ucides cordatus (Linnaeus, 1763) is a hypo-hyper-regulating mangrove crab possessing gills for respiratory and osmoregulatory processes, separated in anterior and posterior sections. They also have hepatopancreas, which is responsible for digestion and absorption of nutrients and detoxification of toxic metals. Each of these organs has specific cells that are important for in vitro studies in cell biology, ion and toxic metals transport. In order to study and characterize cells from gills and hepatopancreas, both were separated using a Sucrose Gradient (SG) from 10 to 40% and cells in each gradient were characterized using the vital mitochondrial dye DASPEI (2-(4-dimethylaminostyryl)-N- ethylpyridinium iodide) and Trichrome Mallorys stain. Both in 20 and 40% SG for gill cells and 30% SG for hepatopancreatic cells, a greater number of cells were colored with DASPEI, indicating a larger number of mitochondria in these cells. It is concluded that the gill cells present in 20% and 40% SG are Thin cells, responsible for respiratory processes and Ionocytes responsible for ion transport, respectively. For hepatopancreatic cells, the 30% SG is composed of Fibrillar cells that possess larger number of membrane ion and nutrient transporters. Moreover, the transport of toxic metal cadmium (Cd) by isolated hepatopancreatic cells was performed as a way of following cell physiological integrity after cell separation and to study differences in transport among the cells. All hepatopancreatic cells were able to transport Cd. These findings are the first step for further work on isolated cells of these important exchange epithelia of crabs, using a simple separation method and to further develop successful in vitro cell culture in crabs.(AU)

Ucides cordatus (Linnaeus, 1763) é um caranguejo de mangue hiper-hipo-regulador que possui brânquias responsáveis por processos respiratórios e osmorregulatórios. Apresentam também hepatopâncreas, que realizam digestão, absorção de nutrientes e detoxificação de metais tóxicos. Cada um desses órgãos possui células específicas que são importantes para estudos in vitro em biologia celular e transporte de íons e metais tóxicos. Visando estudar e caracterizar as células de cada órgão, estas foram separadas em um gradiente de sacarose (SG) de 10 a 40% e as células de cada gradiente foram caracterizadas usando o marcador de mitocôndria DASPEI (2-(4-dimethylaminostyryl)-N- ethylpyridinium iodide) e o corante Tricromo de Mallory. No SG de 20 e 40% para células branquiais e 30% para células hepatopancreáticas, foi observado um maior número de células coradas com DASPEI, indicando um maior número de mitocôndrias nessas células. Conclui-se que células branquiais presentes no SG de 20 e 40% são “Thin cells”, responsáveis por processos respiratórios, e Ionócitos, responsáveis pelo transporte iônico, respectivamente. Para as células hepatopancreáticas, o SG de 30% é composto de células Fibrilares que possuem um maior número de transportadores de membrana para íons e nutrientes. Adicionalmente, o transporte do metal tóxico cádmio (Cd) em células hepatopancreáticas isoladas foi realizado para testar a integridade fisiológica das células isoladas e estudar o transporte entre os diferentes tipos celulares. Todas as células hepatopancreáticas transportaram Cd. Os resultados obtidos são um primeiro passo para trabalhos adicionais em células isoladas de importantes epitélios de troca em caranguejos, utilizando um método de separação simples e visando futuros estudos com cultura de células em caranguejos. (AU)

Cytochemical characterization of gill and hepatopancreatic cells of the crab Ucides cordatus (Crustacea, Brachyura) validated by cell metal transport / Caracterização citoquímica de células de brânquias e hepatopâncreas de Ucides cordatus (Crustacea, Brachyura) validado por transporte celular de metais

Ucides cordatus (Linnaeus, 1763) is a hypo-hyper-regulating mangrove crab possessing gills for respiratory and osmoregulatory processes, separated in anterior and posterior sections. They also have hepatopancreas, which is responsible for digestion and absorption of nutrients and detoxification of toxic metals. Each of these organs has specific cells that are important for in vitro studies in cell biology, ion and toxic metals transport. In order to study and characterize cells from gills and hepatopancreas, both were separated using a Sucrose Gradient (SG) from 10 to 40% and cells in each gradient were characterized using the vital mitochondrial dye DASPEI (2-(4-dimethylaminostyryl)-N- ethylpyridinium iodide) and Trichrome Mallory’s stain. Both in 20 and 40% SG for gill cells and 30% SG for hepatopancreatic cells, a greater number of cells were colored with DASPEI, indicating a larger number of mitochondria in these cells. It is concluded that the gill cells present in 20% and 40% SG are Thin cells, responsible for respiratory processes and Ionocytes responsible for ion transport, respectively. For hepatopancreatic cells, the 30% SG is composed of Fibrillar cells that possess larger number of membrane ion and nutrient transporters. Moreover, the transport of toxic metal cadmium (Cd) by isolated hepatopancreatic cells was performed as a way of following cell physiological integrity after cell separation and to study differences in transport among the cells. All hepatopancreatic cells were able to transport Cd. These findings are the first step for further work on isolated cells of these important exchange epithelia of crabs, using a simple separation method and to further develop successful in vitro cell culture in crabs.

Ucides cordatus (Linnaeus, 1763) é um caranguejo de mangue hiper-hipo-regulador que possui brânquias responsáveis por processos respiratórios e osmorregulatórios. Apresentam também hepatopâncreas, que realizam digestão, absorção de nutrientes e detoxificação de metais tóxicos. Cada um desses órgãos possui células específicas que são importantes para estudos in vitro em biologia celular e transporte de íons e metais tóxicos. Visando estudar e caracterizar as células de cada órgão, estas foram separadas em um gradiente de sacarose (SG) de 10 a 40% e as células de cada gradiente foram caracterizadas usando o marcador de mitocôndria DASPEI (2-(4-dimethylaminostyryl)-N- ethylpyridinium iodide) e o corante Tricromo de Mallory. No SG de 20 e 40% para células branquiais e 30% para células hepatopancreáticas, foi observado um maior número de células coradas com DASPEI, indicando um maior número de mitocôndrias nessas células. Conclui-se que células branquiais presentes no SG de 20 e 40% são “Thin cells”, responsáveis por processos respiratórios, e Ionócitos, responsáveis pelo transporte iônico, respectivamente. Para as células hepatopancreáticas, o SG de 30% é composto de células Fibrilares que possuem um maior número de transportadores de membrana para íons e nutrientes. Adicionalmente, o transporte do metal tóxico cádmio (Cd) em células hepatopancreáticas isoladas foi realizado para testar a integridade fisiológica das células isoladas e estudar o transporte entre os diferentes tipos celulares. Todas as células hepatopancreáticas transportaram Cd. Os resultados obtidos são um primeiro passo para trabalhos adicionais em células isoladas de importantes epitélios de troca em caranguejos, utilizando um método de separação simples e visando futuros estudos com cultura de células em caranguejos.

Paracoccidioidomycosis in southern Rio Grande do Sul: a retrospective study of histopathologically diagnosed cases

Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis caused by the fungus Paracoccidioides brasiliensis and is endemic to Brazil. The aim of this study was to perform a retrospective analysis of the PCM cases in the countryside south of Rio Grande do Sul, Brazil. The files from four histopathology laboratories located in the city of Pelotas were obtained, and all of the epidemiological and clinical data from the PCM diagnosed cases were collected for analysis. A total of 123 PCM cases diagnosed between 1966 and 2009 were selected. Of these patients, 104 (84.5%) were male, and 17 were female. The patients ranged from 02 to 92 years of age. Fifty-two cases (41.9%) were obtained from the oral pathology laboratory, and the remaining 71 cases (58.1%) were obtained from the three general pathology laboratories. Of all of the patients studied, 65.2% lived in rural zones and worked in agriculture or other related fields. Data on the evolution of this disease was available for 43 cases, and the time frame ranged from 20 to 2920 days (mean = 572.3 days). An accurate diagnosis performed in less than 30 days only occurred in 21% of the cases. PCM is endemic to the countryside of Rio Grande do Sul. Therefore, it is recommended that PCM be included as a differential diagnosis, mainly for individuals between 30 and 60 years of age, living in rural zones and who have respiratory signs and associated-oropharyngeal lesions.(AU)

Histochemistry profile of the biceps brachii muscle fibres of capuchin monkeys (Cebus apella, Linnaeus, 1758) / Perfil histoquímico das fibras do músculo bíceps braquial do macaco-prego (Cebus apella, Linnaeus, 1758)

A general analysis of the behaviour of “Cebus” shows that when this primate moves position to feed or perform another activity, it presents different ways of locomotion. This information shows that the brachial biceps muscle of this animal is frequently used in their locomotion activities, but it should also be remembered that this muscle is also used for other development activities like hiding, searching for objects, searching out in the woods, and digging in the soil. Considering the above, it was decided to research the histoenzimologic characteristics of the brachial biceps muscle to observe whether it is better adpted to postural or phasic function. To that end, samples were taken from the superficial and deep regions, the inserts proximal (medial and lateral) and distal brachial biceps six capuchin monkeys male and adult, which were subjected to the reactions of m-ATPase, NADH-Tr. Based on the results of these reactions fibres were classified as in Fast Twitch Glycolitic (FG), Fast Twitch Oxidative Glycolitic (FOG) and Slow Twitc (SO). In general, the results, considering the muscle as a whole, show a trend of frequency FOG> FG> SO. The data on the frequency were studied on three superficial regions FOG=FG>SO; the deep regions of the inserts proximal FOG=FG=SO and inserting the distal FOG>FG=SO. In conclusion, the biceps brachii of the capuchin monkey is well adapted for both postural and phasic activities.(AU)

Uma análise geral do comportamento do “Cebus apella” mostra que este primata quando desloca para se alimentar ou realizar outra atividade apresenta diferentes maneiras de locomoção. Estas informações mostram que o músculo bíceps braquial deste animal é usado freqüentemente nas suas atividades de locomoção, mas deve ser lembrado ainda que este músculo é usado também para desenvolvimento de outras atividades como esconder-se, procurar objetos, vasculhar arboredos, além de cavar o chão. Considerando-se o exposto acima decidiu-se pesquisar as características histoenzimológicas do músculo bíceps braquial do macaco-prego com o objetivo de comparar se este músculo esta melhor adaptado para funções posturais ou fásicas. As amostras foram retiradas das regiões superficiais e profundas; inserções proximais (medial e lateral) e distal de seis macacos-prego machos e adultos, os quais foram submetidos às reações de m-ATPase, NADH-Tr. Baseado nos resultados das reações, as fibras foram classificadas em Fast Twitch Glycolitic (FG), Fast Twitch Oxidative Glycolitic (FOG) e Slow Twitch (SO). Quanto à área dos diferentes tipos de fibras, os resultados encontrados foram semelhantes em todas as amostras estudadas, e as fibras de contração rápida foram sempre maiores do que as de contração lenta (FG=FOG>SO). Os dados obtidos sobre a frequência foram: nas três regiões superficiais estudadas FOG=FG>SO; nas regiões profundas das inserções proximais FOG=FG=SO e na inserção distal FOG>FG=SO. Baseado nestes dados pode-se concluir que o músculo bíceps braquial do macaco-prego está bem adaptado tanto para atividades posturais como fásicas.(AU)

Acute myonecrosis in horse caused by Clostridium novyi type A

The objective of this study was to describe the first report involving a case of equine acute myonecrosis caused by C. novyi type A with an emphasis on clinical signs, the pathological and bacteriological analysis, and molecular identification of the microorganisms as the key of the definitive diagnosis.(AU)

EFEITOS DE ALTAS DILUIÇÕES DE PHYTOLACCA DECANDRA NA VIABILIDADE E EXPRESSÃO DO FATOR HER-2 EM ADENOCARCINOMA MAMÁRIO MURINO (4T1) IN VITRO

Em estudo anterior, experimental, in vivo, observou-se que o tratamento de camundongos inoculados com células 4T1 com Phytolacca decandra em diferentes diluições homeopáticas apresentavam mudanças no crescimento tumoral e na expressão de HER-2. HER-2 (receptor de fator de crescimento epidermal, com atividade tirosina-quinase) é super-expressa em cerca de 30% dos carcinomas ductais invasivos humanos e, por isso, é alvo de tratamentos específicos. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito de diferentes diluições homeopáticas de Phytolacca decandra, preparadas segundo a Farmacopéia Homeopática Brasileira, na apoptose, morfologia e expressão de HER-2 em células 4T1 in vitro. Células 4T1 tratadas no momento do cultivo foram analisadas após 24 horas quanto à positividade para anexina V pelo método Countess® para a avaliação da apoptose. A expressão de HER-2 foi avaliada pelo método da imuno-citoquímica e a morfologia das células foi avaliada pelas colorações hematoxilina-eosina e Giemsa, a partir de esfregaços obtidos das células em suspensão. Células tratadas com Phytolacca decandra 200cH mostraram aumento no número de células positivas à anexina V (células em apoptose) e ocorrência de células bi ou multinucleadas. A expressão de HER-2 na superfície celular foi irregular nessas células, bem como nas células tratadas com a diluição 12cH, sugerindo infrarregulação desse receptor. Em suma, os resultados mostram alterações fenotípicas significativas em células 4T1 tratadas com Phytolacca decandra 200cH, as quais merecem estudos mais aprofundados.

In a previous study, experimental, the treatment of mice inoculated with 4T1 cells with Phytolacca decandra at different homeopathic dilutions produced changes in tumor growth and expression of HER-2. HER-2 protein (epidermal growth factor receptor, with tyrosine kinase activity) is superexpressed in about 30% of human invasive ductal carcinomas and, therefore, is targeted by specific treatments. The objective of this study was to evaluate the effect of different homeopathic dilutions of Phytolacca decandra, according to the Brazilian Homeopathic Pharmacopea, on apoptosis, morphology and expression of HER-2 in 4T1 cells in vitro. Treated 4T1 cells were analyzed after 24 hours of culture, for positivity to annexin V, using the Countess® method, for apoptosis evaluation. HER-2 expression was assessed by the immuno-cytochemistry method and cell morphology was evaluated by hematoxylin-eosin and Giemsa staining, in smears obtained from suspended cells. Cells treated with Phytolacca decandra 200cH showed increase in the number of annexin V positive cells (apoptosis cells) and occurrence of bi or multinucleated cells. HER-2 expression on the membrane was irregular in these cells, as well as in those treated with the 12cH dilution, suggesting downregulation of the receptor. In short, the results show significant phenotypic changes in 4T1 cells treated with Phytolacca decandra 200cH, which deserve further studies.

Isolamento e caracterização de células mesenquimais do tecido adiposo de cães / Isolation and characterization of canine adipose-derived mesenchymal stem cells

As células-tronco mesenquimais (CTMs) diferenciam-se em várias linhagens e têm potencial de utilização na medicina regenerativa. As CTMs podem ser isoladas de vários tecidos de animais adultos. O objetivo deste estudo foi o isolamento das CTMs do tecido adiposo de cães, seu cultivo e diferenciação. Foram coletadas amostras de tecido adiposo subcutâneo de cinco cães. As CTMs foram isoladas, obtendo-se 146.803 (±49.533) células/g, cultivadas e diferenciadas em osteoblastos, adipócitos e condrócitos. Avaliaram-se a cinética do crescimento, a morfologia e a viabilidade celular. A caracterização citoquímica comprovou a natureza mesenquimal das células isoladas. O cultivo foi iniciado com 20.000 células/mL, verificando-se crescimento rápido até 72 horas (220.000 células/mL), fase exponencial entre 72 e 192 horas (455.000 células/mL), seguida de platô por saturação da densidade com 240 horas (355.000 células/mL). A viabilidade celular variou entre 96 e 100%. As CTMs em cultivo são fibroblásticas, fusiformes, com citoplasma basofílico e núcleo esférico. O comprimento médio das células variou entre 80,85 e 98,36µm, a largura média entre 17,40 e 28,79µm e o diâmetro médio do núcleo entre 15,46 e 17,74µm.(AU)

The applications of mesenchymal stem cells (MSCs) are becoming increasingly more promising for regenerative medicine and tissue engineering fields. MSCs can be isolated from adult animals from a variety of tissues, such as the adipose. This study focused on the isolation, culture and differentiation of MSCs from canine adipose tissue. Samples of subcutaneous adipose tissue from five dogs were collected. These cells were isolated, cultured and differentiated into osteoblasts, adipocytes and chondrocytes. We obtained 146,803 (±49,533) cells/g. Growth kinetics and viability studies were conducted during cell culture and the evaluation of cell differentiation was successfully performed by cytochemistry. The cell cultures were initiated with 20,000 MSCs/ml. Rapid growth was observed at 72 hours (220,000 cells/ml), the exponential phase between 72 and 192 hours (455,000 cells/ml) and saturation at 240 hours (355,000 cells/ml). The cellular viability ranged from 96 to 100%. MSCs in culture are fibroblastic cells, fusiform with basophilic cytoplasm and spherical nucleus. The length and width means of the cells and nuclear diameter ranged from 80.85-98.36µm, 17.40-28.79µm and 15.46-17.74µm respectively.(AU)

Análise funcional de leucócitos de sangue periférico de serpentes (Boidae e Viperidae) durante o processo de adaptação ao cativeiro

O processo inflamatório é conhecido por proteger os vertebrados de lesões e infecções. No entanto, sob uma perspectiva imunológica, as funções dos leucócitos no processo inflamatório das serpentes são pouco compreendidas. Neste contexto, a caracterização leucocitária nestes animais ainda não está definida, havendo discordância na literatura sobre os tipos celulares existentes e suas classificações. Devido à grande variação citoquímica apresentada por estas células, uma análise focada apenas na morfologia óptica é insuficiente para determinar os diferentes tipos celulares. Assim, o empego de métodos mais avançados, como a citometria de fluxo, são importantes para o melhor entendimento da função e da origem de cada tipo celular. Em particular, estudos sobre o estresse crônico induzido pelo cativeiro em répteis demonstram que níveis séricos de corticosterona aumentam durante o período de adaptação, e estão associados à imunossupressão; no entanto, ainda não está claro como as funções leucocitárias são alteradas nestas condições. Neste cenário, o objetivo do presente estudo foi pesquisar gradientes de densidade (ficoll e percoll) para a recuperação de leucócitos provenientes do sangue periférico de serpentes, e caracterizar, por meio da citometria de fluxo, as células recuperadas com base no tamanho, presença de grânulos e complexidade interna (organelas), e em suas funções celulares inatas (burst oxidativo e fagocitose) frente a desafios bacterianos, fúngicos e químicos, possibilitando, desta forma, a avaliação qualitativa e quantitativa das funções apresentadas pelos leucócitos constituintes do sistema imunológico de três serpentes neotropicais, Boa constrictor, Bothrops jararaca e Crotalus durissus. Ainda, o estudo propôs correlacionar o desempenho destas funções com as concentrações séricas de corticosterona em viperídeos (B. jararaca e C. durissus) recém capturados da natureza, em dois momentos de adaptação ao cativeiro (após cinco e 60 dias de cativeiro). A comparação entre os dois métodos de recuperação leucocitária (ficoll e percoll) não apresentou diferença estatística em relação aos tipos e proporção dos leucócitos recuperados do sangue periférico de serpentes de mesma espécie. Nas três espécies, após análise por citometria de fluxo, as populações leucocitárias obtidas nos citogramas foram identificadas mediante procedimento de sorting celular, com posterior análise por microscopia óptica, sendo compostas por azurófilos, heterófilos, linfócitos grandes e linfócitos pequenos. Em relação às funções leucocitárias, heterófilos, linfócitos e azurófilos apresentaram capacidade de fagocitose nas três espécies. Com relação ao burst oxidativo, apenas os azurófilos apresentaram uma atividade significativa em relação aos respectivos valores basais para as espécies investigadas. Na fase de adaptação ao cativeiro, a atividade fagocítica dos heterófilos de B. jararaca mostrou correlação positiva com os níveis séricos de corticosterona. Entretanto, a porcentagem de fagocitose apresentada pelos azurófilos e a quantidade de partículas ingeridas pelos linfócitos apresentaram correlações negativas. Para C. durissus, a porcentagem de fagocitose dos linfócitos também apresentou correlação negativa com os níveis de corticosterona. Em ambas as espécies, não houve correlação entre a atividade de burst oxidativo e as concentrações séricas de corticosterona. Acreditamos que os dados gerados nesta pesquisa contribuirão para o desenvolvimento de novos testes diagnósticos, análises filogenéticas, estudos ecotoxicológicos e ecoimunológicos, além de auxiliar no manejo clínico-sanitário de serpentes em cativeiro

Inflammatory processes are known to protect vertebrates from injuries and infections. However, from an immunological perspective the role of leukocytes in snakes inflammatory process is poorly understood. Within this context, leukocyte classification in these animals is not clearly defined, with authors disagreeing on existent cell types and their classification. Due to the great variation of snakes leukocytes on cytochemistry, an analysis focused exclusively on optical morphology is insufficient to determine different cell types. Thus, additional methods, as flow cytometry, are important to better understand the function and origin of each cell type. In particular, studies of chronic stress induced by captivity in reptiles demonstrate that serum corticosterone levels rise during the adaptation period and are associated with immune suppression. However, it is not known how the leukocyte functions of reptiles are altered under these conditions. The objective of this research was to adapt leukocyte density gradients (ficoll and percoll) for snake blood samples, and characterize recovered cells based on size, presence of granules and internal complexity (organelle), and on their cellular innate functions (oxidative burst and phagocytosis), in front of bacterial, fungal and chemical challenges, by flow cytometry; enabling the qualitative and quantitative assessment of innate activities presented by cells constituting the immune system of Boa constrictor, Bothrops jararaca and Crotalus durissus. Additionally, the study proposes to correlate innate leukocyte functions performances with serum corticosterone concentrations, in recent wild-caught viperids (B. jararaca and C. durissus), at two moments of adaptation to captivity (5 and 60 days of captivity). Comparison between gradient methods for leukocyte isolation did not show any statistical difference in types and proportion of leukocytes populations between snakes of the same species. When verified by means of flow cytometric cell sorting and confirmed by optical microscopy, populations were mainly composed of azurophils, heterophils, large lymphocytes and small lymphocytes. Concerning innate leukocyte functions, heterophils, lymphocytes and azurophils were involved in the phagocytosis response. Regarding oxidative burst activity, only azurophils presented a significative and strong oxidative burst when compared to their respective baseline. During adaptation to captivity process, B. jararaca heterophils phagocytic activity showed a positive correlation with serum corticosterone levels. However, the percentage of phagocytosis presented by azurophils and the quantity of particles ingested by lymphocytes, presented a negative correlation with serum corticosterone concentrations. For C. durissus, phagocytosis displayed by lymphocytes also presented a negative correlation with serum corticosterone levels. In both vipers species, oxidative burst activity showed no correlation with serum corticosterone concentrations. We believe that the data generated in this research will contribute to the development of new diagnostic tests, phylogenetic analyzes, ecotoxicological and ecoimmunological studies, as well as assisting in the clinic-sanitary management of snakes in captivity.