Intraspecific C-value variation and the outcomes in Psidium cattleyanum Sabine essential oil / Variação do valor C intraespecífico e os efeitos no óleo essencial de Psidium cattleyanum Sabine

Polyploidy, a numerical alteration of the karyotype, is one of the most important mechanisms in plant speciation and diversification, but could also be detected among populations, the cytotypes. For example, Psidium cattleyanum, a polyploid complex, has chromosome numbers ranging from 2n=3x=33 to 2n=12x=132. Polyploidization causes an increase in DNA content, and both modifications may cause alteration in plant growth, physiology, and epigenetics. Based on this possibility, here we aim to verify the influence of the polyploidization on the production of P. cattleyanum essential oil chemotypes. Differences in the DNA contents, as a proxy to different ploidies, were observed and three distinct chemotypes were identified through the chromatographic profile analysis. The Psidium cattleyanum DNA content and qualitative and quantitative characteristics of the essential oils presented a positive relationship. Plants with higher DNA contents presented higher levels of oil production, which was mostly composed of hydrogenated sesquiterpenes, while plants with lower DNA contents produced lower amount of oil, which was mostly composed of hydrogenated monoterpenes. Based on the importance of essential oils, polyploid plants, which present higher DNA content, are recommended as possible matrices for the propagation of new plants with the potential to produce major compounds of agronomic and pharmacological interest.

A poliploidia, uma alteração numérica do cariótipo, é um dos mecanismos mais importantes na especiação e diversificação das plantas, mas também pode ser detectada entre populações, os citótipos. Por exemplo, Psidium cattleyanum, um complexo poliplóide, tem números de cromossomos que variam de 2n=3x=33 a 2n=12x=132. A poliploidização causa um aumento no conteúdo de DNA, e ambas as modificações podem alterar o crescimento, a fisiologia e a epigenética da planta. Com base nessa possibilidade, objetivamos verificar a influência da poliploidização na produção de quimiotipos de óleo essencial de P. cattleyanum. Diferenças nos conteúdos de DNA, representando diferentes ploidias, foram observadas e três quimiotipos distintos foram identificados através da análise do perfil cromatográfico. O conteúdo de DNA de Psidium cattleyanum e as características qualitativas e quantitativas dos óleos essenciais apresentaram correlação positiva. Plantas com maiores conteúdos de DNA apresentaram maiores rendimentos na produção de óleo, que era majoritariamente composto por sesquiterpenos hidrogenados, enquanto plantas com menores conteúdos de DNA produziram menores quantidade de óleo, que era majoritariamente composto por monoterpenos hidrogenados. Com base na importância dos óleos essenciais, plantas poliplóides, que apresentam maiores conteúdos de DNA, são recomendadas como possíveis matrizes para a propagação de novas plantas com potencial para produzir compostos importantes de interesse agronômico e farmacológico.

High rDNA polymorphisms in Astyanax lacustris (Characiformes: Characidae): new insights about the cryptic diversity in A. bimaculatus species complex with emphasis on the Paraná River basin

This study aimed to identify species of Astyanax bimaculatus group from four Itaipu Reservoir tributaries (Paraná River Basin) by cytogenetics and molecular markers (COI) to investigate the possible occurrence of cryptic diversity in part of this basin. The four populations showed only one karyotype formula and simple AgNORs. FISH with 18S rDNA probe showed a high variation, and 5S rDNA probes evidenced simple sites in most of the specimens, although multiple sites are present in two specimens. The variations of 5S and 18S cistrons generated 13 cytotypes. The molecular data did not reveal cryptic diversity in the populations; however, its grouping with 82 sequences from other stretches of the Paraná River Basin originated three haplogroups (distances of 3.12% and 8.82%) and 33 haplotypes were identified. DNA Barcode suggests that cytogenetic variations represent a high polymorphism degree, and it identified the analyzed specimens as Astyanax lacustris, which confirms the morphological identification. Our data suggest that the cryptic diversity of this group in the tributaries of the Paraná River Basin is different than the proposed by the synonymizations of A. altiparanae and A. asuncionensis to A. lacustris. This study reinforces the importance of integrative cytogenetics and molecular methods for taxonomy.(AU)

Este trabalho teve como objetivo identificar espécies do complexo Astyanax bimaculatus de quatro afluentes do reservatório de Itaipu (bacia do Rio Paraná) por métodos citogenéticos e moleculares (COI), investigando a possibilidade de ocorrência de diversidade críptica em parte desta bacia. As quatro populações apresentaram apenas uma fórmula cariotípica e AgNORs simples. A FISH com rDNA 18S apresentou alto grau de variação e as sondas de rDNA 5S evidenciaram sítios simples na maioria dos exemplares, embora sítios múltiplos tenham sido evidenciados em dois espécimes. As variações dos cistrons 5S e 18S geraram 13 citótipos. Os dados moleculares não revelaram diversidade críptica nas populações, entretanto, seu agrupamento com 82 sequências de outros trechos da mesma bacia formou três haplogrupos (distâncias de 3,12% e 8,82%) e gerou 33 haplótipos. O DNA Barcode sugere que as variações citogenéticas representam um alto grau de polimorfismo e identificou os espécimes analisados como Astyanax lacustris, confirmando a identificação por caracteres morfológicos. Nossos dados sugerem que a diversidade críptica do grupo nos afluentes da bacia do Rio Paraná é diferente do proposto pelas sinonimizações de A. altiparanae e A. asuncionensis para A. lacustris, reforçando a importância da integração de métodos citogenéticos e moleculares para a taxonomia.(AU)

SEGREGAÇÃO GAMÉTICA DE CROMOSSOMOS ENVOLVIDOS EM TRANSLOCAÇÕES E SEU PAPEL NO ISOLAMENTO REPRODUTIVO DE ESPÉCIES DO GÊNERO Mazama (MAMMALIA; CERVIDAE)

A família Cervidae destaca-se por possuir uma das maiores taxas de evolução cariotípica dentre os mamíferos, reflexo de uma fragilidade cromossômica acentuada, que facilita a ocorrência de quebras e rearranjos cromossômicos. Estas, quando vinculadas ao isolamento geográfico em um curto período, poderiam levar as populações a um processo de especiação. Isso é evidenciado na ampla diversificação cariotípica da família, apresentando exemplos extremos de baixo e alto número diploide, como Muntiacus muntjak (2n = 6/7) e Capreolus pygargus (2n = 70 + 1 14 Bs), respectivamente. Muitas espécies crípticas estão escondidas pela grande similaridade morfológica, acompanhada de ampla variação cariotípica, intra e interespecífica. Animais portadores de rearranjos cromossômicos podem apresentar diferentes padrões na segregação meiótica durante a espermiogênese, dando passo à formação de gametas desbalanceados. Isso pode estar relacionado com desordens reprodutivas, como evidenciado em animais domésticos, onde é observada a queda da capacidade reprodutiva. A técnica de hibridização in situ fluorescente (FISH) permite a marcação, identificação e localização dos cromossomos envolvidos nas translocações a partir de sondas de DNA com marcadores fluorescentes. Dada a falta de sondas específicas para espécies de cervídeos, diversos estudos apontam para o uso de sondas bovinas devido ao conhecido mapa genético bovino e à proximidade filogenética entre as famílias Cervidae e Bovidae. Dessa forma, a aplicação da FISH em células espermáticas (também chamada de sperm-FISH) permite estimar a proporção de gametas normais/balanceados e desbalanceados (portadores de aneuploidias). Assim, o presente estudo teve como objetivo: a) Estimar a proporção dos produtos da segregação meiótica em indivíduos portadores de translocações cromossômicas dentro do gênero Mazama, b) Avaliar os potenciais efeitos dos rearranjos cromossômicos na aptidão reprodutiva dos portadores, e c) Avaliar o papel dos rearranjos cromossômicos nos processos de especiação dentro do gênero Mazama. Na espécie M. gouazoubira foi possível avaliar uma translocação Robertsoniana (TR) em quatro animais, sendo que dois incluíam a presença de uma inversão paracêntrica (IPA). O valor médio dos espermatozoides desbalanceados nos portadores da TR/IPA (6,68%) quase dobrou em relação àquele dos portadores de TR (3,76%), mas não houve diferença significativa. Na espécie M. americana, foram avaliadas TRs em diferentes citótipos e fusões em tandem (FT) heterozigotas em híbridos entre citótipos da mesma linhagem cromossômica. Os portadores de TR apresentaram valor médio para a taxa de segregação adjacente de 1,80% e os portadores da FT apresentaram valor médio de 29,07% para os produtos equivalentes a aqueles da segregação adjacente na TR. Nossos resultados indicam um impacto de baixo a moderado do rearranjo cromossômico na aptidão reprodutiva dos machos de M. gouazoubira heterozigotos para TR e TR/IPA e um impacto baixo no caso das TRs em M. americana. No caso dos híbridos de M. americana portadores de FT em heterozigose, os resultados sugerem a formação de uma barreira pós-zigótica eficiente representada pela redução severa da fertilidade dos indivíduos.

The family Cervidae stands out for showing one of the highest rates of karyotype evolution among mammals, reflecting a marked chromosomal fragility. Thus, the occurrence of chromosomal breaks and rearrangements is facilitated and lead populations to process of speciation when linked to geographic isolation in a short period. Besides, a wide karyotype diversification of the family has been observed in their extreme examples of low and high diploid numbers, such as Muntiacus muntjak (2n = 6/7) and Capreolus pygargus (2n = 70 + 1 14 Bs), respectively. Many cryptic species are hidden due to the great morphological similarity, accompanied by wide intra and interspecific karyotypic variation. Thus, animals with chromosomal rearrangements may present different patterns of meiotic segregation during spermiogenesis, giving way to the formation of unbalanced gametes. This can be related to reproductive disorders, as observed in domestic animals with reproductive fitness reduction. The fluorescent in situ hybridization (FISH) technique allows the marking, identification, and location of the chromosomes involved in translocations using DNA probes with fluorescent markers. Given the lack of specific probes for deer species, several studies point to the use of bovine probes due to the well-known bovine genetic map and the phylogenetic proximity between families Cervidae and Bovidae. Thus, the application of FISH in sperm cells (also called sperm-FISH) allows estimating the proportion of normal/balanced and unbalanced gametes (carriers of aneuploidies). The present study aimed to a) Estimate the mean rate of meiotic segregation products in carriers of chromosomal translocations within the genus Mazama, b) Assess the potential effects of chromosomal translocations on the reproductive fitness of carriers, and c) Assess the role of chromosomal polymorphisms in speciation processes within the genus Mazama. In the M. gouazoubira species, it was possible to evaluate a Robertsonian translocation (RT) in four animals, two of which included the presence of a paracentric inversion (PAI). The mean value of unbalanced gametes in carriers of the RT/PAI (6.68%) almost doubled in relation to that of carriers with the RT (3.76%); however, no significant difference was observed. Regarding M. americana, RTs were evaluated in different cytotypes and heterozygous tandem fusion (TF) was evaluated in hybrids from the same chromosomal lineage cytotypes. Carriers of RT showed a mean value for the adjacent segregation rate of 1.80% and carriers of TF showed a mean value of 29.07% for products equivalent to those of the adjacent segregation in RT. Our results indicate low to moderate impacts of chromosomal rearrangement on the reproductive fitness of M. gouazoubira heterozygotes for RT and RT/PAI and a low impact in the case of RTs in M. americana. In the case of M. americana hybrids with heterozygous TF, our results suggest an efficient postzygotic barrier represented by the severe reduction in the individuals' fertility.

FILOGENIA E DELIMITAÇÃO MOLECULAR DE ESPÉCIES DO GÊNERO Mazama RAFINESQUE, 1817 (CETARTIODACTYLA:CERVIDAE)

O veado-mateiro (Mazama americana Erxleben, 1777) representa um complexo de espécies crípticas cujo caráter polifilético e diferenças cromossômicas já foram demonstrados. Dependendo do grau de divergência, essas diferenças são uma barreira reprodutiva que levam ao isolamento e reforçam a necessidade de revisão taxonômica do grupo. Assim, foi proposta a revalidação da espécie Mazama rufa Illiger 1811 para Mata Atlântica. A resolução da incerteza taxonômica que ainda cerca o complexo é vital na avaliação e conservação do grupo, posto que várias lacunas amostrais e espécies em potencial carecem de avalição. Nesse sentido, o presente trabalho buscou avaliar as relações filogenéticas entre as variantes cromossômicas do complexo M. americana e delimitar potenciais novas espécies a partir de dados moleculares. Também foi testada a validade da espécie M. rufa e inferidos aspectos de sua distribuição e estado de conservação. Um conjunto de espécimes com informação cromossômica (citótipo) e outro, de amostras fecais coletadas na natureza, foram sequenciados para parte dos genes mitocondriais Cytb, D-loop e ND5. Foram realizadas análises filogenéticas por meio de inferência Bayesiana e Máxima Verossimilhança e aplicados métodos coalescentes de delimitação molecular de espécie (GMYC e PTP) para identificar unidades taxonômicas operacionais moleculares (MOTUs). A hipótese filogenética mostrou relação de monofilia recíproca entre todos os citótipos, com exceção do citótipo Carajás. As espécies M. americana (sensu strictu) e M. rufa foram consideradas como espécies irmãs e válidas. Já os citótipos Juína e Rondônia representam duas potenciais espécies distintas de M. americana. A espécie M. rufa é composta pelos citótipos Paraná e Carajás, apresenta ampla distribuição, do sul do Brasil até a faixa sul-sudeste da Amazônia, e potencialmente não deve ser classificada como ameaçada de extinção. Ficou demonstrado que até a menor diferença cromossômica (uma fusão em tandem) pode implicar em espécies distintas, dependendo do tempo de divergência.

The red brocket deer (Mazama americana Erxleben, 1777)) is considered cryptic species complex whose polyphyletic state and chromosomal differences have been already demonstrated. These chromossomal differences act as a reproductive barrier that can lead to isolation, depending on the level of divergence, thus, reinforce the need for taxonomic revision. In this sense a species revalidation has just been proposed for Mazama rufa Illiger 1811 in the Atlantic Forest. The resolution of the remaning taxonomic uncertainty is vital in this taxa assessment and conservation, once there is several sampling gaps and other potential species to be evaluated. Therefore, the present work sought to evaluate the phylogenetic relationships between the chromosomal variants and to delimit potential new species for the M. americana complex from molecular data. The validity of M. rufa was tested and aspects of its distribution and conservation status were also inferred. A set of specimens with chromosomal information (cytotype) and another set of fecal samples collected in nature were sequenced for part of the mitochondrial regions Cytb, D-loop and ND5. Bayesian inference and Maximum Likelihood phylogenetic analyzes were performed and coalescent methods of molecular species delimitation (GMYC and PTP) were applied to identify molecular operational taxonomic units (MOTUs). The phylogenetic hypothesis demonstrated a reciprocal monophiletic relationship between all cytotypes, with the exception of Carajás. The red brocket deers M. americana (sensu strictu) and M. rufa were recovered as sisters and valid species. On the other hand, Juína and Rondônia cytotypes should represent two distinct species from M. americana. The M. rufa species is composed of Paraná and Carajás cytotypes, has a wide distribution from the south of Brazil up to the south-southeast of the Amazon Forest, and potentially will not be categorized as threatened with extinction. The results demonstrated that even the minimal chromosomal difference (a tandem fusion) can imply different species, depending on other factors as the time since divergence.

EFEITO DA OCITOCINA E CLOPROSTENOL NOS PARÂMETROS SEMINAIS DE VEADO-MATEIRO-DO-SUL (Mazama rufa) AO LONGO DO PROCEDIMENTO DE ELETROEJACULAÇÃO

O veado-mateiro (Mazama americana) é uma espécie de cervídeo neotropical com ampla distribuição classificado como Dados Deficientes pela IUCN. Essa classificaçãoo se dá pelo fato da espécie possuir inconsistência taxonômica que inviabiliza a aplicação dos protocolos utilizados para categorizar as espécies em categorias de ameaça. Estudos morfológicos, moleculares e citogenéticos demonstraram que se trata de um complexo de espécies que possuem características morfológicas semelhante, demonstrando a existência de seis citótipos para a espécie. A partir de material coletado na localidade tipo da espécie (Caiena Guiana Francesa) e de material coletado próximo localidade tipo de M. rufa (Foz do Iguaçu, PR) ficou comprovado que o citotipo Paraná é na verdade a espécie de ceado-mateiro-do-sul (M. rufa) descrito por Illiger em 1811. O veado-mateiro-do-sul ainda não foi classificado devido a sua redescrição recente (2018), porém acredita-se que este esteja vulnerável. Sendo assim, se faz prioritário o estabelecimento de estratégias de conservação in situ e ex situ para a espécie, destacando a formação de banco de germoplasma. A colheita de sêmen pode ser feita por diferentes técnicas, porém para cervídeos as técnicas mais utilizadas são a colheita por vagina artificial e a eletroejaculação. Na colheita por eletroejaculação, o animal deve estar contido quimicamente e recebe estímulos elétricos nas glândulas acessórias que irão promover a ejaculação. A desvantagem da técnica sêmen colhido é mais diluído devido a maior secreção de plasma seminal, mas apresenta a vantagem de poder coletar material de animal cativo e de vida livre sem a necessidade que que o mesmo apresente libido. Com a finalidade de se minimizar os efeitos deletérios da técnica, tem se associado o uso de protocolos hormonais utilizando ocitocina e cloprostenol (prostaglandina F2 sintética) aumentando o volume e concentração seminal, além de diminuir o tempo e número de estímulos necessário para a eletroejaculação devido a sua ação favorecendo a contração de musculo liso dos túbulos seminíferos e epididimo. Assim, no presente trabalho o objetivo foi avaliar se protocolos utilizando ocitocina e cloprostenol (associados ou não) podem aumentar o volume e concentração hormonal de M. rufa ao longo do procedimento de eletroejaculação sem que houvesse a alteração de parâmetros de avaliação seminal. Ficou demonstrado que não houve aumento significativo no volume e concentração espermática entre os tratamentos realizados. O tratamento em que utilizou apenas cloprostenol apresentou os piores resultados, sendo este não indicado para a colheita de sêmen de M. rufa.

The Red Brocket deer (Mazama americana) is a neotropical deer species with large distribution, and taxonomic inconsistency so is classified as Data Deficient by IUCN. Because of this, it is impossible to apply the protocols used to categorize the species into threat categories. Morphological, molecular and cytogenetic studies have shown that it is a complex of species that have similar morphological characteristics, demonstrating the existence of six cytotypes for the species. From material collected in the type locality of the species (Cayenne - French Guiana) and material collected near the type locality of M. rufa (Foz do Iguaçu, PR), it was proven that the cytotype Paraná is actually the species of Southern Red Brocket deer (M. rufa) described by Illiger in 1811. Southern Red Brocket deer has not yet been classified due to its recent redescription (2018), but it is believed to be vulnerable. Therefore, it is a priority to establish in situ and ex situ conservation strategies for the species, highlighting the formation of a germplasm bank. Semen collection can be done by different techniques, but for deer, the most used techniques are artificial vagina collection and electroejaculation. With electroejaculation, the animal must be chemically contained and receive electrical stimuli in the accessory glands that will promote ejaculation. The disadvantage of this technique is more diluted semen due to greater secretion of seminal plasma, but it is useful to collect material from captive and wild life animals without the need for it to show libido. In order to minimize the deleterious effects of the technique, the use of hormonal protocols using oxytocin and cloprostenol (synthetic prostaglandin F2) has been associated, increasing seminal volume and concentration, in addition to decreasing the time and number of stimuli required for electroejaculation. This is possible because the hormonal action favoring the contraction of smooth muscle of the seminiferous and epididymal tubules. Thus, in the present study, the objective was to evaluate whether protocols using oxytocin and cloprostenol (associated or not) can increase the volume and hormonal concentration of M. rufa throughout the electroejaculation procedure without changing seminal evaluation parameters. It was demonstrated that there was no significant increase in the volume and sperm concentration between the treatments performed. The treatment using only cloprostenol showed the worst results, which has not indicated for the collection of M. rufa semen.

O STATUS TAXONÔMICO DE Cervus rufus Illiger, 1811 E SUA CARACTERIZAÇÃO GENÉTICA E MORFOLÓGICA

A espécie Mazama americana passou por diferentes classificações taxonômicas não havendo consenso em relação ao número de subespécies e ao desdobramento destas em espécies. Em diferentes espécimes de M. americana não foram observadas diferenças a partir de análises morfológicas ao contrário das análises citogenéticas que demonstraram uma grande variação cariotípica com estruturação geográfica. Este resultado, juntamente com o estudo mostrando isolamento reprodutivo pós-zigótico com esterilidade ou subfertilidade dos híbridos entre citótipos distintos, demonstra que este é um complexo de espécies. O presente estudo objetivou a caracterização de Cervus rufus, por muitos considerado como sinônimo de M. americana, utilizando para isso técnicas integrativas de análise citogenética, genética molecular e morfológica. O padrão morfológico do espécime acompanha o padrão da espécie M. americana. Entretanto, citogeneticamente, o exemplar se assemelha ao padrão apresentado pelo citótipo Paraná, muito distinto das espécies descritas anteriormente (M. americana e M. temama). O padrão molecular também formou com os exemplares do citótipo Paraná um ramo monofilético com forte suporte estatístico. Esses aspectos indicam que Cervus rufus seja uma espécie válida e por falta de um holótipo, propõe-se um neótipo, permanecendo o nome Mazama rufa. A descrição de uma nova espécie de cervídeo na Mata Atlântica do interior é um fator muito relevante, mesmo porque há indícios de que esta espécie possa estar sob eminente risco de extinção.

The Mazama americana species has undergone different taxonomic classifications, without consensus regarding the number of subspecies nor the unfolding of these subspecies into species. In different specimens of M. americana, no differences were observed from morphological analyzes, yet cytogenetic analyzes showed a wide karyotypic variation with geographic structuring. This result, along with the reproduction study showing postzygotic reproductive isolation with sterility or subfertility of hybrids between different cytotypes, demonstrates that this is a complex of species. Therefore, the present study aimed at the redescription of Cervus rufus, by many considered as synonymous with M. americana, using for this purpose, integrated techniques of analysis such as cytogenetics, molecular genetics and morphology. The morphological patterns of the specimen accompanies the pattern of the M. americana. However, cytogenetically, the specimen resembles the standard shown by Paraná cytotype very different from the species described above (M. americana and M. temama). The molecular pattern also formed, with the Paraná cytotype, a phylogenetic clade monophyletic with strong statistical support. These aspects indicate that Cervus rufus is a valid species and for lack of a holotype is proposed a holotype for her, remaining Mazama rufa. The description of a new species of deer in the Atlantic Forest of the interior is a very relevant fact even though there are indications this species may be in emminet danger of extinction.

Karyotype description of possible new species of the Hypostomus ancistroides complex (Teleostei: Loricariidae) and other Hypostominae - doi: 10.4025/actascibiolsci.v34i2.9318

Cytogenetic analyses were performed in four species of the Hypostominae subfamily, three from Hypostomus (Hypostomini) genus and Rhinelepis aspera (Rhinelepini). Three populations of Hypostomus ancistroides were analyzed, which had 2n=68 chromosomes, but presented different karyotype formulas. Hypostomus regani and H. strigaticeps, both from Ivaí river, showed 2n=72 chromosomes with two distinct cytotypes. In turn, R. aspera of the upper Paraná river basin presented 2n=54 chromosome. Multiple Nucleolar Organizer Regions (NORs) have been evidenced by silver nitrate staining in species of Hypostomus and single NOR in R. aspera. The observed variation in the chromosome number and the marked variability in karyotype formulas and NORs reveal a certain amount of karyotype variation in the genus Hypostomus suggesting the probable existence of cryptic species with independent chromosome traits. Therefore, our data can be of great value in discriminating species and understanding their chromosomal evolution.

Karyotype description of possible new species of the Hypostomus ancistroides complex (Teleostei: Loricariidae) and other Hypostominae / Descrição cariotípica de possíveis novas espécies do complexo Hypostomus ancistroides e outros Hypostominae

Cytogenetic analyses were performed in four species of the Hypostominae subfamily, three from Hypostomus (Hypostomini) genus and Rhinelepis aspera (Rhinelepini). Three populations of Hypostomus ancistroides were analyzed, which had 2n=68 chromosomes, but presented different karyotype formulas. Hypostomus regani and H. strigaticeps, both from Ivaí river, showed 2n=72 chromosomes with two distinct cytotypes. In turn, R. aspera of the upper Paraná river basin presented 2n=54 chromosome. Multiple Nucleolar Organizer Regions (NORs) have been evidenced by silver nitrate staining in species of Hypostomus and single NOR in R. aspera. The observed variation in the chromosome number and the marked variability in karyotype formulas and NORs reveal a certain amount of karyotype variation in the genus Hypostomus suggesting the probable existence of cryptic species with independent chromosome traits. Therefore, our data can be of great value in discriminating species and understanding their chromosomal evolution.

Foram analisadas três populações de peixes identificadas como Hypostomus ancistroides, as quais apresentaram 2n=68 cromossomos, com distintas fórmulas cariotípicas. Hypostomus regani e H. strigaticeps, ambas do rio Ivaí, apresentaram 2n=72 cromossomos com citótipos distintos. Rinelepis aspera da bacia do alto rio Paraná apresentou 2n=54 cromossomos. Nucleolar Organizer Regions (NORs) múltiplas foram evidenciadas por nitrato de Prata para as espécies do gênero Hypostomus e NOR simples para R. aspera. A variação de número cromossômico observada, como também a acentuada variação nas fórmulas cariotípicas e nas NORs, são discutidas, sugerindo a existência de possíveis espécies crípticas com caracteres cromossômicos independentes. Portanto, nossos dados podem ser de grande valia na discriminação das espécies e no entendimento de sua evolução cromossômica.

FILOGENIA MOLECULAR DE Mazama americana (ARTIODACTYLA: CERVIDAE) COMO AUXÍLIO NA RESOLUÇÃO DAS INCERTEZAS TAXONÔMICAS

Estudos recentes com a espécie Mazama americana apontam duas linhagens cromossômicas dentro deste possível complexo de espécies crípticas e entre elas verificou-se a existência de eficiente barreira reprodutiva por isolamento pós-zigótico. No entanto, o efeito das pequenas diferenças cromossômicas entre populações é ainda pouco esclarecido, não sendo claro se seriam polimorfismos intraespecíficos, diferenças subespecíficas ou específicas. Marcadores moleculares permitem investigar se ocorreu fluxo entre estas populações e se este fluxo ainda ocorre no presente, auxiliando na elucidação dos processos evolutivos que ocorreram na diferenciação cromossômica e qual o real efeito dessas variações no isolamento e especiação no táxon. Diante do exposto, o presente trabalho estudou as relações filogenéticas entre variantes cromossômicas, com alto número diplóide, de M. americana com o objetivo de compreender melhor a história evolutiva da espécie e verificar a existência de unidades evolutivamente significativas dentro deste complexo específico, contribuindo para o delineamento de programas de conservação da espécie. As relações filogenéticas da espécie foram examinadas utilizando genes mitocondriais (citocromo b, citocromo oxidade I, região controladora D-loop e NADH dehigrogenase subunit 5), com 44 indivíduos de veados-mateiro provenientes de diferentes localidades do Brasil. Os resultados encontrados não corroboram a existência de unidades evolutivamente significativas dentro do grupo amostrado. A topologia encontrada nas árvores filogenéticas não mostram agrupamentos por citótipos, mas sim uma polifilia dos clados das árvores filogenéticas.

Recent studies on the species Mazama americana point two chromosomal lineages within red brocket deer and among them there was the existence of effective reproductive barrier post-zygotic isolation. However, the effect of these small chromosomal differences between these populations is not clearly established, it is not clear whether they would be intraspecific polymorphisms, subspecific or specific diferences. The molecular markers allow to investigate if there was flows occurred between these populations and whether these flows still occur in the present, helping to unravel the evolutionary processes that have occurred on chromosome differentiation and what the actual effect of these changes in isolation and speciation in the taxon. Given the above, this research project studied the phylogenetic relationships among chromosomal variants of M. americana with the aim of elucidating the evolutionary history of the species and verify the existence of evolutionarily significant units within this particular complex, contributing to the design of programs conservation of the species. The phylogenetic relationships of the species were examined using mitochondrial genes (cytochrome-b, cytochrome oxidase I, control region D-loop and NADH dehidrogenase subunit 5), with 44 individuals of red brocket deer from different locations in Brazil. The results do not support the existence of distinct evolutionary units within the sampled groups. The topologies found in phylogenetic tree show no groupings cytotypes but a polyphyly of clades of the phylogenetic tree.

MACACO DA NOITE (Aotus azarai infulatus) COMO MODELO BIOLÓGICO PARA ESTUDOS COM CÉLULAS-TRONCO MESENQUIMAIS DERIVADAS DE TECIDO ADIPOSO

Células-tronco mesenquimais (CTMs) são caracterizadas por serem células indiferenciadas que possuem como principais características a capacidade de autorenovação, alto potencial de proliferação e diferenciação em diversos tecidos. São facilmente isoladas in vitro, apresentando morfologia semelhante a fibroblastos e devem apresentar a capacidade de realizarem in vitro a diferenciação condrogênica, osteogênica e adipogênica, assim como serem positivas para CD105, CD73 e CD90 e negativas para CD45, CD34, CD79. O presente estudo tem como objetivo avaliar o potencial das células-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo de Aotus azarai infulatus KUHL-1820, oriundos do Centro Nacional de Primatas (CENP)- Ananindeua, PA. Acredita-se que tal espécie animal possui características que lhes permitem ser um excelente modelo biológico para estudos com fins de terapia celular, objetivou também analisar a curva de crescimento celular, porcentagem da viabilidade celular, antes e após a criopreservação, realizar análises morfológicas, testes imunocitoquímicos e a análises do cariótipo. As células foram isoladas por digestão enzimática com colagenase tipo IV e cultivadas in vitro. Os resultados mostraram que as células-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo possuem elevada capacidade de proliferação se expandindo rápido nas garrafas de cultivo, apresentaram viabilidade em média acima de 90% e não apresentou diferença significativa quando se comparou células submetidas à criopreservação com células não criopreservadas. Apresentaram morfologia semelhante a fibroblastos e uma cinética de crescimento esperada para esse tipo de célula, foram positivas para CD105, CD73, e CD90 e negativa para CD34, CD79 e CD45. Na análise cariotípica foi observado um rearranjo em heterozigose no par 3, no qual um dos cromossomos sofreu uma fissão cêntrica, originando dois acrocêntricos, sugerindo que o mesmo é uma alteração constitucional do animal analisado, sugerindo que o mesmo seja híbrido entre dois citótipos diferentes. As células responderam de maneira positiva para a diferenciação adipogênica, condrgênica e osteogênica, comprovando sua multipotencialidade.Conclui-se, através dos resultados obtidos, que os testes básicos necessários para que uma célula seja considerada célula-tronco mesenquimal foram positivos nestes experimento, induzindo que a espécie Aotus azarai infulatus pode servir como excelente modelo biológico em estudos utilizando células-tronco mesenquimais e terapia celular

The Mesenchymal Stem Cells (MSCs) are characterized by undifferentiated cells that have the main characteristics self-renewal, high potential for proliferation and differentiation in many tissues. The Mesenchymal Stem Cells are easily isolated in vitro, with fibroblast-like morphology and should exhibit the ability to perform in vitro chondrogenic, adipogenic and osteogenic differentiation, as well as being positive for CD105, CD73, and CD90 and negative for CD45, CD34, CD79. This study aims to evaluate the potential of AdiposeDerived Mesenchymal Stem Cells of Aotus azarai infulatus KUHL-1820, obtained from the National Primate Center (CENP) - Ananindeua, PA. It is believed that this specie has characteristics that allows them to be an excellent biological model for studies of cellular therapy, also examining the cell growth curve, the percentage of cell viability before and after cryopreservation, performing morphological analysis, immunocytochemical tests and karyotype analyzes. The Cells were isolated by enzymatic digestion with type IV collagenase and cultured in vitro. The results showed that Adipose-Derived Mesenchymal Stem Cells has high proliferation capacity expanding fast in bottles of cultivation, showed average viability above 90% and was not significantly different when compared with cells subjected to cryopreservation and not cryopreserved cells . Showed fibroblast-like morphology and growth kinetics expected for this type of cells. Were positive for CD105, CD73, and CD90 and negative for CD34, CD45 and CD79. In karyotype analysis showed a rearrangement heterozygous at par 3, in which one of the chromosomes underwent a centric fission, yielding two acrocentric, suggesting that it is a constitutional alteration of the analyzed animal, suggesting that it is hybrid between two different cytotypes. The cells responded positively to the adipogenic, chondrogenic and osteogenic differentiation. The results, showed that the basic tests required for a cell to be considered mesenchymal stem cells were positive in these experiments, leading to the Aotus azarai infulatus may be an excellent biological model in studies using mesenchymal stem cells and cellular therapy.

Chromosome polymorphism in Ancistrus cuiabae Knaack, 1999 (Siluriformes: Loricariidae: Ancistrini)

Cytogenetic and FISH analyses were performed in 30 Ancistrus cuiabae specimens from a bay near the town of Poconé, in the Pantanal of Mato Grosso, Brazil. The observed diploid number was 2n = 34 chromosomes for both sexes and three distinct katyotypic formulae were found, namely cytotype A (20m, 8sm, 6st, Fundamental Number/FN = 68; 6 males and 11 females), cytotype B (19m, 8sm, 6st, 1a, FN = 67; 8 males and 4 females) and cytotype C (18m, 8sm, 6st, 2a, FN = 66; a single male). NORs's analyses showed that these regions were located in distinct sites on the NOR-bearing chromosome pair, according to cytotypes. Thus, in cytotype A, NORs were located in the terminal region of the short arm of the second metacentric chromosome pair; in cytotype B, they were detected in the short arm of the metacentric chromosome and interstitially on the acrocentric chromosome and, in cytotype C, NORs were observed in the interstitial region of the acrocentric chromosome pair. C-positive heterochromatic bands were adjacent to the rDNA sites in the corresponding chromosomes. Thus, the chromosomal polymorphism of A. cuiabae was probably originated through a pericentric inversion in chromosome pair nº 2 involving the NOR sites, which represents a novelty in the Ancistrini tribe. The results also broaden the knowledge of the chromosomal evolution in Ancistrus, the most derived genus of the Ancistrini tribe.(AU)

Foram analisados, com técnicas convencionais de citogenética e FISH, 30 exemplares da espécie Ancistrus cuiabae da baía Arrombado, próximo a Poconé, Pantanal do Mato Grosso. Foram observadas metáfases com número diploide 2n = 34 cromossomos para ambos os sexos e três fórmulas cariotípicas distintas, aqui denominadas de citótipo A, verificado em 06 machos e 11 fêmeas (20m, 8sm, 6st, Número Fundamental, NF = 68); citótipo B, em 08 machos e 04 fêmeas (19m, 8sm, 6st, 1a, NF = 67) e citótipo C em apenas 01 macho (18m, 8sm, 6st, 2a, NF = 66). As NORs confirmaram os distintos citótipos verificados, além de evidenciar que os cromossomos portadores de rDNA são os que representam o polimorfismo na espécie Ancistrus cuiabae. No citótipo A, as NORs foram verificadas na região terminal do braço curto do segundo par de cromossomos metacêntricos; no citótipo B, foram evidenciadas no segundo par, heteromórfico, no braço curto do cromossomo metacêntrico e intersticial no seu homólogo acrocêntrico; no citótipo C as NORs foram observadas na região intersticial num par de cromossomos acrocêntricos. A análise da heterocromatina constitutiva evidenciou blocos discretos adjacentes ao rDNA no segundo par de cromossomos de ambos os citótipos. Uma provável inversão pericêntrica é a hipótese proposta para a origem deste polimorfismo na espécie Ancistrus cuiabae. Estes resultados ampliam o conhecimento sobre o gênero Ancistrus, o mais derivado da tribo, contribuem para o conhecimento sobre este grupo de peixes e para inferir sobre a evolução cromossômica dos Ancistrini(AU)

Chromosome polymorphism in Ancistrus cuiabae Knaack, 1999 (Siluriformes: Loricariidae: Ancistrini)

Cytogenetic and FISH analyses were performed in 30 Ancistrus cuiabae specimens from a bay near the town of Poconé, in the Pantanal of Mato Grosso, Brazil. The observed diploid number was 2n = 34 chromosomes for both sexes and three distinct katyotypic formulae were found, namely cytotype A (20m, 8sm, 6st, Fundamental Number/FN = 68; 6 males and 11 females), cytotype B (19m, 8sm, 6st, 1a, FN = 67; 8 males and 4 females) and cytotype C (18m, 8sm, 6st, 2a, FN = 66; a single male). NORs's analyses showed that these regions were located in distinct sites on the NOR-bearing chromosome pair, according to cytotypes. Thus, in cytotype A, NORs were located in the terminal region of the short arm of the second metacentric chromosome pair; in cytotype B, they were detected in the short arm of the metacentric chromosome and interstitially on the acrocentric chromosome and, in cytotype C, NORs were observed in the interstitial region of the acrocentric chromosome pair. C-positive heterochromatic bands were adjacent to the rDNA sites in the corresponding chromosomes. Thus, the chromosomal polymorphism of A. cuiabae was probably originated through a pericentric inversion in chromosome pair nº 2 involving the NOR sites, which represents a novelty in the Ancistrini tribe. The results also broaden the knowledge of the chromosomal evolution in Ancistrus, the most derived genus of the Ancistrini tribe.(AU)

Foram analisados, com técnicas convencionais de citogenética e FISH, 30 exemplares da espécie Ancistrus cuiabae da baía Arrombado, próximo a Poconé, Pantanal do Mato Grosso. Foram observadas metáfases com número diploide 2n = 34 cromossomos para ambos os sexos e três fórmulas cariotípicas distintas, aqui denominadas de citótipo A, verificado em 06 machos e 11 fêmeas (20m, 8sm, 6st, Número Fundamental, NF = 68); citótipo B, em 08 machos e 04 fêmeas (19m, 8sm, 6st, 1a, NF = 67) e citótipo C em apenas 01 macho (18m, 8sm, 6st, 2a, NF = 66). As NORs confirmaram os distintos citótipos verificados, além de evidenciar que os cromossomos portadores de rDNA são os que representam o polimorfismo na espécie Ancistrus cuiabae. No citótipo A, as NORs foram verificadas na região terminal do braço curto do segundo par de cromossomos metacêntricos; no citótipo B, foram evidenciadas no segundo par, heteromórfico, no braço curto do cromossomo metacêntrico e intersticial no seu homólogo acrocêntrico; no citótipo C as NORs foram observadas na região intersticial num par de cromossomos acrocêntricos. A análise da heterocromatina constitutiva evidenciou blocos discretos adjacentes ao rDNA no segundo par de cromossomos de ambos os citótipos. Uma provável inversão pericêntrica é a hipótese proposta para a origem deste polimorfismo na espécie Ancistrus cuiabae. Estes resultados ampliam o conhecimento sobre o gênero Ancistrus, o mais derivado da tribo, contribuem para o conhecimento sobre este grupo de peixes e para inferir sobre a evolução cromossômica dos Ancistrini(AU)

Cytogenetic studies in three species of Lutjanus (Perciformes: Lutjanidae: Lutjaninae) from the Isla Margarita, Venezuela

In the present study, three species of Lutjaninae, Lutjanus analis, L. griseus and L. synagris, were analyzed by conventional Giemsa staining, C-banding and silver staining, to reveal active Nucleolus Organizer Regions (NORs). Fluorescent in situ hybridization (FISH) was also applied to establish the number and location of the ribosomal gene clusters (18S and 5S rRNA genes). Counts of diploid metaphasic cells revealed a diploid modal chromosome complement composed of 48 acrocentric chromosomes in both L. analis and L. griseus. Two cytotypes were observed in L. synagris: cytotype I, with 2n=48 acrocentric chromosomes, found in 19 specimens, and cytotype II, with 46 acrocentric chromosomes and one large metacentric, found in two specimens. The large metacentric, which possibly originated from a Robertsonian rearrangement, was not found to be sex-related. In the three species, constitutive heterochromatin is located in the centromeres of all chromosomes. NORs were detected on the short arms of a single chromosome pair, number 24 in L. analis and number 6 in both cytotypes of L. synagris. In L. griseus, a polymorphism of the NORs number was detected, by both Ag-staining and FISH, as females show a maximum of three NORs, and males a maximum of six NORs. In all species, minor ribosomal genes were found located on a single chromosome pair. The obtained data, along with those previously reported for other five Lutjanidae species, show that a general chromosome homogeneity occurs within the family, but that derived karyotypes based on Robertsonian rearrangements as well as multiple and variable NORs sites can also be found.(AU)

No presente estudo três espécies de Lutjaninae, Lutjanus analis, L. griseus e L. synagris foram analisadas através da coloração convencional com Giemsa, banda C e coloração com nitrato de prata para identificar as Regiões Organizadoras de Nucléolo (NORs) ativas. Hibridação fluorescente in situ (FISH) foi também aplicada para estabelecimento do número e localização dos agrupamentos de genes ribossômicos (18S e 5S rRNA). A contagem de células metafásicas revelou um número diplóide modal de 48 cromossomos acrocêntricos em L. analis e L. griseus. Dois citótipos foram observados em L. synagris: citótipo I com 2n=48 cromossomos acrocêntricos, encontrado em 19 espécimes, e citótipo II com 46 cromossomos acrocêntricos e um grande metacêntrico, encontrado em dois espécimes. O grande metacêntrico, que possivelmente se originou por um rearranjo Robertsoniano, não está relacionado com o sexo. Nas três espécies a heterocromatina constitutiva está localizada nas regiões centroméricas de todos os cromossomos. NORs foram detectadas no braço curto de um único par cromossômico, número 24 em L. analis e número 6 em ambos os citótipos de L. synagris. Em L. griseus, um polimorfismo de número de NORs foi observado, após coloração com prata e por FISH, as fêmeas apresentaram um máximo de três NORs e os machos um máximo de seis NORs. Em todas as espécies os genes ribossômicos 5S foram encontrados em um único par cromossômico. Os dados obtidos, somados aos demais previamente publicados para cinco outras espécies de Lutjanidae, mostram que na família há uma homogeneidade cromossômica, porém também são encontrados cariótipos derivados, originados por rearranjos Robertsonianos, assim como pela ocorrência de sítios múltiplos e variados de NORs.(AU)

Astyanax aff. fasciatus Cuvier, 1819 (Teleostei; Characidae): evidences of a species complex in the upper rio Tibagi basin (Paraná, Brazil)

Four populations of Astyanax aff. fasciatus of the upper rio Tibagi (municipal district of Ponta Grossa, Paraná State, Brazil), had their karyotypes and morphometry analyzed. The cytogenetic data show the occurrence of distinct karyotypes (cytotypes), here named cytotype A, with 2n=48 chromosomes (6m+18sm+14st+10a), cytotype B, with 2n=50 chromosomes (8m+18sm+14st+10a) and cytotype C, with 2n=50 chromosomes (8m+18sm+14st+10a). The distribution pattern of the constitutive heterochromatin was very similar between cytotypes A and B, but diverged in relation to cytotype C. Distinct cytotypes may occur in sympatry in the upper rio Tibagi region, with the exception of the Furna 2 sample, which presents cytotype A exclusively. In addition, a specimen with 2n=49 chromosomes (7m+18sm+14st+10a) was also found and, by the characteristics presented, may be a consequence of a rare hybridization event between cytotypes A and B. The morphometric analyses of canonical variates indicate a consistent isolation of the Furna 2 sample, while the other samples seem to be superimposed, indicating a possible gene flow or even a recent isolation event. This model points to a probable complex of cryptic species in the studied region.

Quatro populações de Astyanax aff. fasciatus do alto rio Tibagi (município de Ponta Grossa, Paraná, Brasil) foram citogeneticamente e morfometricamente analisadas. Os dados citogenéticos mostram a ocorrência de distintos cariótipos (citótipos), aqui nomeados citótipo A, com 2n=48 (6m+18sm+14st+10a), citótipo B, com 2n=50 (8m+18sm+14st+10a) e citótipo C, com 2n=50 cromossomos (8m+18sm+14st+10a). O padrão de distribuição da heterocromatina constitutiva foi muito similar entre os citótipos A e B, mas mostrou-se divergente em relação ao citótipo C. Citótipos distintos podem ocorrer em simpatria na região do alto rio Tibagi, com exceção da amostra da Furna 2, a qual apresenta somente o citótipo A exclusivamente. Além disso, um exemplar com 2n=49 cromoossomos (7m+18sm+14st+10a) foi também encontrado e, pelas características apresentadas, pode ser uma conseqüência de um raro evento de hibridização entre os citótipos A e B. As análises morfométricas de variáveis canônicas indicam um isolamento consistente da amostra da Furna 2 enquanto as demais amostras analisadas se apresentam sobrepostas indicando um possível fluxo gênico ou evento de isolamento recente. Este modelo aponta para um complexo de espécies crípticas na região estudada.

Astyanax aff. fasciatus Cuvier, 1819 (Teleostei; Characidae): evidences of a species complex in the upper rio Tibagi basin (Paraná, Brazil)

Four populations of Astyanax aff. fasciatus of the upper rio Tibagi (municipal district of Ponta Grossa, Paraná State, Brazil), had their karyotypes and morphometry analyzed. The cytogenetic data show the occurrence of distinct karyotypes (cytotypes), here named cytotype A, with 2n=48 chromosomes (6m+18sm+14st+10a), cytotype B, with 2n=50 chromosomes (8m+18sm+14st+10a) and cytotype C, with 2n=50 chromosomes (8m+18sm+14st+10a). The distribution pattern of the constitutive heterochromatin was very similar between cytotypes A and B, but diverged in relation to cytotype C. Distinct cytotypes may occur in sympatry in the upper rio Tibagi region, with the exception of the Furna 2 sample, which presents cytotype A exclusively. In addition, a specimen with 2n=49 chromosomes (7m+18sm+14st+10a) was also found and, by the characteristics presented, may be a consequence of a rare hybridization event between cytotypes A and B. The morphometric analyses of canonical variates indicate a consistent isolation of the Furna 2 sample, while the other samples seem to be superimposed, indicating a possible gene flow or even a recent isolation event. This model points to a probable complex of cryptic species in the studied region.

Quatro populações de Astyanax aff. fasciatus do alto rio Tibagi (município de Ponta Grossa, Paraná, Brasil) foram citogeneticamente e morfometricamente analisadas. Os dados citogenéticos mostram a ocorrência de distintos cariótipos (citótipos), aqui nomeados citótipo A, com 2n=48 (6m+18sm+14st+10a), citótipo B, com 2n=50 (8m+18sm+14st+10a) e citótipo C, com 2n=50 cromossomos (8m+18sm+14st+10a). O padrão de distribuição da heterocromatina constitutiva foi muito similar entre os citótipos A e B, mas mostrou-se divergente em relação ao citótipo C. Citótipos distintos podem ocorrer em simpatria na região do alto rio Tibagi, com exceção da amostra da Furna 2, a qual apresenta somente o citótipo A exclusivamente. Além disso, um exemplar com 2n=49 cromoossomos (7m+18sm+14st+10a) foi também encontrado e, pelas características apresentadas, pode ser uma conseqüência de um raro evento de hibridização entre os citótipos A e B. As análises morfométricas de variáveis canônicas indicam um isolamento consistente da amostra da Furna 2 enquanto as demais amostras analisadas se apresentam sobrepostas indicando um possível fluxo gênico ou evento de isolamento recente. Este modelo aponta para um complexo de espécies crípticas na região estudada.

Presença de isolamento pós-zigótico entre diferentes citótipos de Mazama americana : avaliação de fêmeas

O veado mateiro, Mazama americana, apresenta populações cariotipicamente diferentes (citótipos) em diferentes regiões brasileiras. Estes citótipos apresentam uma diferenciação cariotípica que originou duas linhagens evolutivas A e B. Estas linhagens apresentam uma distância genética entre elas, maior que em relação a outras espécies de Mazama. A existência de mecanismo de isolamento reprodutivo pós-zigótico, devido a distância cariotípica das linhagens, comprovaria a existência de pelo menos duas espécies dentro do que hoje denomina-se Mazama americana. Para tal foram realizados cruzamentos inter e intracitótipos obtendo prole F1 híbrida (n=6) e pura (n=3). As fêmeas F1 foram analisadas quanto aos seus parâmetros reprodutivos por meio da dosagem de metabólitos fecais de progesterona, histologia de ovário e produção de embriões in vitro. As fêmeas puras apresentaram parâmetros similares aos já descritos para fêmeas de M. americana, porém os parâmetros das fêmeas híbridas apresentaram-se distintos das puras. Duas híbridas apresentaram esterilidade com ausência de células germinativas, resposta negativa ao protocolo de superovulação e ausência de foliculos para aspiração e posterior produção de embriões in vitro. As outras híbridas apresentaram subfertilidade. Uma vez encontrado o isolamento reprodutivo entre as linhagens A e B, foi possível identificar ao menos duas espécies dentro de Mazama americana. Sugerimos que os citótipos podem ser divididos em subespécies das linhagens, porém outros estudos devem ser realizados para que esta hipótese seja comprovada

The red brocket deer, Mazama americana, shows populations that are karyotipically different (cytotypes) distinct regions in Brasil. These karyotype differentiation led to two evolutionary lineages A and B. These lineages have a genetic distance between them greater than for other species of Mazama. Once to these differences culminate in a division of the taxon, need to require a study of reproductive isolation among lineages. For these, crossings were performed within and between cytotypes obtaining F1 hybrid (n = 6) and pure (n = 3) offspring. The F1 females were analyzed as to their reproductive parameters. It was possible to infer the reproductive capacity of these through the measurement of fecal progesterone metabolites, histology of ovary and embryo production in vitro. The pure females showed parameters similar to those described for females of M. American, but the parameters of the hybrid females were lower than those of the pure. Two hybrid presented sterility with absence of germ cells, negative response to the superovulation protocol, and absence of follicles for aspiration and subsequent production of embryos. The other hybrids showed subfertility. Once found the reproductive isolation between strains A and B, it was possible to identify at least two species within Mazama americana. We suggest that these cytotypes can be divided into subspecies strains, but other studies must be conducted so that this hypothesis is verified

A new sympatric region for distinct karyotypic forms of Hoplias malabaricus (Pisces, Erythrinidae)

Specimens of Hoplias malabaricus from Lagoa Carioca, an isolated lake of the Rio Doce State Park (state of Minas Gerais, Brazil), were cytogenetically studied. The diploid number was found to be constant, i.e., 2n = 42 chromosomes, although two karyotypic forms were found: karyotype A, characterized by 22M + 20SM chromosomes, observed only in a male specimen, and karyotype B, characterized by 24M + 16SM + 2ST and 24M + 17SM + 1ST chromosomes in female and male specimens, respectively. This sex difference found in karyotype B is related to an XX/XY sex chromosome system. Another female specimen of H. malabaricus, also carrying karyotype A, had previously been found in the same lake. The available data indicate that two sympatric cytotypes of H. malabaricus exist in the Lagoa Carioca, with cytotype A occurring at a lower frequency and differing from cytotype B by undifferentiated sex chromosomes.

Foram analisados, cromossomicamente, espécimes de Hoplias malabaricus provenientes da Lagoa Carioca, localizada no Parque Estadual do Rio Doce (Minas Gerais, Brasil). O número diplóide de cromossomos foi constante, 2n = 42, mas duas formas cariotípicas distintas foram encontradas: cariótipo A, caracterizado por 22M + 20SM, presente em apenas um dos exemplares machos e cariótipo B, caracterizado por 24M + 16SM + 2ST e 24M + 17SM + 1ST em fêmeas e machos, respectivamente, diferença esta devida a um sistema de cromossomos sexuais do tipo XX/XY. Contudo, um outro exemplar fêmea, apresentando também o cariótipo A, foi previamente detectado nessa mesma lagoa, o que permite caracterizar o cariótipo A como portador de 2n = 42 cromossomos, mas sem um sistema diferenciado de cromossomos sexuais. Os dados disponíveis evidenciam que dois citótipos distintos (A e B) são encontrados em simpatria e sintopia na Lagoa Carioca, tendo o citótipo A uma freqüência reduzida.

A new sympatric region for distinct karyotypic forms of Hoplias malabaricus (Pisces, Erythrinidae)

Specimens of Hoplias malabaricus from Lagoa Carioca, an isolated lake of the Rio Doce State Park (state of Minas Gerais, Brazil), were cytogenetically studied. The diploid number was found to be constant, i.e., 2n = 42 chromosomes, although two karyotypic forms were found: karyotype A, characterized by 22M + 20SM chromosomes, observed only in a male specimen, and karyotype B, characterized by 24M + 16SM + 2ST and 24M + 17SM + 1ST chromosomes in female and male specimens, respectively. This sex difference found in karyotype B is related to an XX/XY sex chromosome system. Another female specimen of H. malabaricus, also carrying karyotype A, had previously been found in the same lake. The available data indicate that two sympatric cytotypes of H. malabaricus exist in the Lagoa Carioca, with cytotype A occurring at a lower frequency and differing from cytotype B by undifferentiated sex chromosomes.

Foram analisados, cromossomicamente, espécimes de Hoplias malabaricus provenientes da Lagoa Carioca, localizada no Parque Estadual do Rio Doce (Minas Gerais, Brasil). O número diplóide de cromossomos foi constante, 2n = 42, mas duas formas cariotípicas distintas foram encontradas: cariótipo A, caracterizado por 22M + 20SM, presente em apenas um dos exemplares machos e cariótipo B, caracterizado por 24M + 16SM + 2ST e 24M + 17SM + 1ST em fêmeas e machos, respectivamente, diferença esta devida a um sistema de cromossomos sexuais do tipo XX/XY. Contudo, um outro exemplar fêmea, apresentando também o cariótipo A, foi previamente detectado nessa mesma lagoa, o que permite caracterizar o cariótipo A como portador de 2n = 42 cromossomos, mas sem um sistema diferenciado de cromossomos sexuais. Os dados disponíveis evidenciam que dois citótipos distintos (A e B) são encontrados em simpatria e sintopia na Lagoa Carioca, tendo o citótipo A uma freqüência reduzida.

Avaliação da existência de isolamento reprodutivo entre distintos citótipos de veado-mateiro (Mazama americana) por meio de machos híbridos

A espécie Mazama americana tem sido bastante estudada nas áreas de ecologia, genética e reprodução devido às recentes dúvidas quanto à validade de seu táxon. Estudos citogenéticos e moleculares demonstram que atualmente este táxon é composto de uma espécie que apresenta até seis citótipos diferentes. Instituições voltadas à conservação classificam este táxon como ?Dados insuficientes?, devido às incertezas taxonômicas. Este trabalho teve como objetivo avaliar a fertilidade dos animais resultantes de cruzamentos intra e intercitótipos para inferir sobre a existência de isolamento reprodutivo entre os citótipos e conclusões acerca da existência de espécies novas. Foram avaliados o sêmen, histologia testicular, perfil de metabólitos fecais de testosterona e a meiose de sete animais, sendo dois puros (cruzamento intracitótipo), três híbridos de mesma linhagem evolutiva e dois híbridos de linhagens evolutivas diferentes. Os resultados mostram que os animais puros tiveram melhores desempenhos reprodutivos seguidos pelos animais híbridos entre citótipos de mesmas linhagens evolutivas, que foram sugestivos de subfertilidade. Os animais de linhagens evolutivas diferentes apesar de apresentarem atividade estereidogênica foram azoospérmicos o que nos permite concluir que dentro do táxon existem pelo menos duas espécies diferentes com possibilidade de duas subespécies dentro de cada ramo filogenético. Estes resultados implicam na necessidade de novas caracterizações taxonômicas, inclusive para que sejam estruturados planos de ação para conservação de espécies que pudessem estar correndo risco de extinção

Mazama americana (Mammalia, Cervidae), has been widely studied in ecologic, genetic and reproductive areas given recent doubts about its taxonomic validity. Cytogenetic and molecular studies showed that currently this taxon is composed by a species with up to six different cytotypes. The World Conservation Union IUCN classified this taxon as ?data deficient? given the taxonomic uncertain of this species. This research aimed to evaluate the fertility of of intra and intercytotypic breeding products in order to conclude about the occurrence of novel species. Semen analysis, testicular histology, fecal testosterone metabolites and meiosis of seven breeding products, being two of them pure (intracytotipic breeding), three hybrids from the same evolutive lineage and two hybrids from different evolutive lineages. Results show that pure products have better reproductive performances, being the hybrids from the same evolutive lineage suggestive of subfertility. The hybrid products from different evolutive lineages were azoospermics, despite their steroid activity. These results show the occurrence of almost two different species and the possibility of almost four subspecies. It implies the necessity of new taxonomic review, which will aid in the design of action plans for the conservation of endangered species

Cytogenetical and morphological features reveal significant differences among Venezuelan and Brazilian samples of Mugil curema (Teleostei: Mugilidae)

Karyotype of M. curema from the Gulf of Mexico and Brazil have been reported as possessing chromosome complement with 2n=28 and FN=48, whereas specimens from Venezuela has been reported as possessing a diploid number 2n=24 and a conserved FN (48). Although at first sight this variation suggests the presence of a chromosomal intraspecific (interpopulational) variability, the possibility that we are dealing with two different species was examined. This work revisit the karyotypes of M. curema from Venezuela and Brazil, including new data on C-banding, and NOR localization, and compares morphologic characteristics of samples from both localities. Thus, besides diploid number, the constitutive heterochromatin distribution and NORs location, mark other differences between M. curema Cytotype 1 (2n=28; FN=48) and Cytotype 2 (2n=24; NF=48). Moreover, morphologic comparison revealed differences in the scale counts and pectoral fin rays: 35 scales in the middle body line and 15 pectoral fin rays in specimens possessing the karyotype 2n=28, compared with 37-39 scales in the middle body line and 17 pectoral fin rays in specimens with the karyotype 2n=24. These differences lead us to suggest that both cytotypes are not related merely to geographic polytipic variations but could correspond to different species.

Os cariótipos de M. curema do Golfo do México e do Brasil possuem 2n=28 cromossomos e NF=48. Espécimes da Venezuela, entretanto, apresentam um número diplóide de 28 cromossomos e um NF conservado (48). Apesar desta variação sugerir, a princípio, uma variabilidade intraespecífica (interpopulacional), a possibilidade de estarmos perante diferentes espécies foi investigada. O presente trabalho re-analisa os cariótipos de M. curema da Venezuela e do Brasil, incluindo novos dados sobre bandamento C e localização das NORs e compara caracteres merísticos e morfométricos de amostras de ambas as localidades. Assim, junto com o número cromossômico, a heterocromatina constitutiva e a distribuição das NORs trazem outras diferenças entre M. curema Citótipo 1 (2n=48, FN=48) e Citótipo 2 (2n=48, FN=48). Além disso, as comparações dos caracteres morfológicos revelam diferenças nas contagens, com 35 escamas na linha média do corpo e 15 raios nas nadadeiras peitorais nos espécimes com cariótipo 2n=28, já o cariótipo 2n=24 apresenta 37-39 escamas e 17 raios nas peitorais. Essas diferenças sugerem que ambos citótipos não estão relacionados meramente a variações geográficas politípicas mas que podem corresponder a diferentes espécies.