An RT-rtPCR assay for detection of rabies virus in bovine specimens / Um ensaio RT-rtPCR para detecção de vírus da raiva em espécimes bovinos

ABSTRACT: Bovine rabies is endemic in most Brazilian States, including Rio Grande do Sul (RS), which has faced an unprecedented rabies outbreak between 2011 and 2018. We described a real-time reverse transcription quantitative PCR (RT-rtPCR) for detection of rabies virus (RABV) in bovine samples. The primers were designed targeting a highly conserved region of the nucleoprotein (N) gene of RABV obtained from cattle. The detection limit corresponded to 13 DNA copies and the intra- and inter-run repeatability was adequate (CV<9%) in all dilutions tested. Amplification of other pathogens associated with neurological disease in cattle or cross-contamination was not observed. Brain samples from cattle suspicious of rabies (n=21) were tested in triplicate by the RT-rtPCR and by the gold-standard direct fluorescent antibody test (DFAT), resulting in 100% of sensitivity and specificity of the RT-rtPCR. Testing of additional 41 bovine brain samples submitted to the routine DFAT testing yielded 37 (90.2%) concordant results (30 positive/7 negative) and 4 (9.7%) inconclusive in DFAT and RT-rtPCR positive. These results showed a good concordance between the tests and a higher sensitivity of the RT-rtPCR. This assay represents an alternative for RABV detection, either as a confirmatory test or for large-scale diagnosis in endemic regions.

RESUMO: A raiva bovina é endêmica na maioria dos estados brasileiros, inclusive no Rio Grande do Sul (RS), que enfrentou um surto de raiva sem precedentes entre 2011 e 2018. Descrevemos um PCR quantitativo de transcrição reversa em tempo real (RT-rtPCR) para detecção do vírus da raiva (RABV) em bovinos. Os primers foram desenhados visando uma região altamente conservada do gene da nucleoproteína (N) de RABV obtido de bovinos. O limite de detecção correspondeu a 13 cópias de DNA e a repetibilidade intra e inter-ensaios foi adequada (CV <9%) em todas as diluições testadas. Não foi observada amplificação de outros patógenos associados a doenças neurológicas em bovinos ou contaminação cruzada. Amostras de cérebro de bovinos com suspeita de raiva (n = 21) foram testadas em triplicata no RT-rtPCR e pelo teste de anticorpo fluorescente padrão ouro (DFAT), resultando em 100% de sensibilidade e especificidade do RT-rtPCR. O teste de 41 amostras de cérebro bovino adicionais submetidas ao teste de DFAT de rotina rendeu 37 (90,2%) resultados concordantes (30 positivos / sete negativos) e quatro (9,7%) inconclusivos em DFAT e RT-rtPCR positivo. Esses resultados mostraram boa concordância entre os testes e maior sensibilidade do RT-rtPCR. Este ensaio representa uma alternativa para a detecção do vírus da raiva, seja como teste confirmatório ou para diagnóstico em larga escala em regiões endêmicas.

Pesticide residues in strawberries cultivated in the state of Rio Grande do Sul, Brazil / Resíduos de agrotóxicos em morangos produzidos no estado do Rio Grande do Sul, Brasil

ABSTRACT: Strawberries are of high social and economic importance and the crop is mainly produced at small family enterprises. Strawberries are repetitively amongst products in which unauthorized pesticide residues are determined. The PARA program launched in Brazil by ANVISA has disclosed that many samples have residues above the maximum residue limit (MRL). The present study appraised the pesticide residues detected in strawberries produced in the state of Rio Grande do Sul and marketed at the CEASA / RS. Along the harvesting seasons of 2018 and 2019, 62 strawberry samples were collected at the CEASA-pavilion destined for growers from the state of Rio Grande do Sul. Each sample was tested for 238 active ingredients of pesticides. Of the 62 samples retrieved, 40% were considered satisfactory and 60% resulted as unsatisfactory. Of the 25 satisfactory samples, three samples did not present any residues, and 22 had residues below the MRL. Of the 37 samples with an unsatisfactory outcome, 11 had active ingredients not allowed (NA) for use on strawberries, 13 presented active ingredients above the MRL and 13 reports presented the sum of both: residues above the MRL and NA. Thirty five different active ingredients were detected in the samples summing up to a total of 303 detection events. The active ingredients detected most frequently were procymidone (66.13%); carbendazim (53.22%) and difenoconazole (50%).

RESUMO: A cultura do morangueiro tem grande participação econômica e social no estado do Rio Grande do Sul, especialmente devido a sua importância na agricultura familiar. No entanto, o morango está constantemente entre as principais culturas com resíduos de agrotóxicos não autorizados ou acima do limite máximo de resíduos no principal Programa de Análise de Resíduos de Agrotóxicos em Alimentos (PARA) do Brasil. O presente estudo teve por objetivo avaliar os resíduos de agrotóxicos encontrados em morangos produzidos no estado do Rio Grande do Sul comercializados na CEASA/RS. Nos anos de 2018 e 2019 foram coletadas 62 amostras de morangos no pavilhão destinado aos produtores gaúchos desta central de abastecimento. Cada amostra foi analisada para presença de 238 ingredientes ativos de agrotóxicos. Das 62 amostras, 40% foram consideradas satisfatórias e 60% apresentaram resultado insatisfatório. Das 25 amostras satisfatórias, três amostras não continham resíduos de agrotóxicos e 22 apresentaram resíduos abaixo do limite máximo de resíduos (LMR) estipulado pela ANVISA. Dos 37 casos de amostras insatisfatórias, 11 foram por ingrediente ativo não permitido para a cultura (NPC), 13 por ingrediente ativo acima do LMR e 13 laudos apresentaram o somatório de resíduos acima do LMR e NPC. Foram encontrados 35 diferentes ingredientes ativos nas 62 amostras de morango, totalizando 303 eventos de detecção. Os ingredientes ativos detectados com maior frequência nas 62 amostras de morango foram procimidona (66,13%); carbendazim (53,22%) e difenoconazol (50%).

Diagnóstico precoce de acetonemia subclínica em vacas holandesas por mensuração de corpos cetônicos / Early diagnosis of subclinical acetonemia in holstein cows by measuring ketone bodies / Diagnóstico precoz de acetonemia subclínica en vacas holstein mediante la medición de cuerpos cetónicos

O trabalho foi realizado em uma fazenda de exploração leiteira em Castrolanda, no município de Castro ­ PR. O sistema de manejo é free-stall, com 220 vacas da raça Holandesa com RHA305 de 6.740 litros. Foram coletadas amostras de sangue de 18 vacas de pré-parto, 4 dias antes da data prevista para o parto; e nos dias 4, 7 e 12 pós-parto, mediante punção venosa coccígea, utilizando-se SnapTest digital Ketovet®, constituindo 72 amostras, no período de fevereiro a maio de 2020. Em 4 vacas o BHB do sangue total apresentou-se acima do limite para cetose subclínica no quarto dia após o parto e 17 apresentaram-se acima do limite no sétimo dia, declinando em seguida, principalmente devido às intervenções clínicas. As médias e desvios-padrão foram: D - 4: 0,89 ± 0,257061; D 4: 1,05 ± 0,283279; D 7: 1,81 ± 0,456131; e D 12: 1,19 ± 0,437762. O benefício do monitoramento de BHB foi a imediata intervenção clínica, evitando-se a severidade por instalação de quadro clínico e as enfermidades concomitantes.(AU)

The study was carried out on a dairy farm in Castrolanda, in the county of Castro - PR. The management system is free stall, with 220 Holstein cows with RHA305 of 6,740 liters. Blood samples were collected from 18 pre-calving cows, 4 days before the expected date of calving; and on days 4, 7 and 12 postpartum, by means of coccygeal venipuncture, using SnapTest digital Ketovet®, constituting 72 samples, from February to May 2020. In 4 cows the BHB of whole blood was shown above the limit for subclinical ketosis on the fourth day after delivery and 17 presented above the limit on the seventh day, then declining mainly due to clinical interventions. The means and standard deviations were D -4: 0.89 ± 0.257061; D 4: 1.05 ± 0.283279; D 7: 1.81 ± 0.456131; and D 12: 1.19 ± 0.437762. The benefit of monitoring BHB was immediate clinical intervention, avoiding clinical ketosis and concomitant illnesses.(AU)

El estudio se realizó en una explotación lechera de Castrolanda, en la comarca de Castro - PR. El sistema de manejo es estabulación libre, con 220 vacas Holstein con RHA305 de 6.740 litros. Se recogieron muestras de sangre de 18 vacas pre- parto, 4 días antes de la fecha prevista de parto; y en los días 4, 7 y 12 postparto, mediante venopunción coccígea, utilizando SnapTest digital Ketovet®, constituyendo 72 muestras, desde febrero a mayo de 2020. En 4 vacas la BHB de sangre total se mostró por encima del límite para cetosis subclínica en el cuarto día después del parto y 17 presentaron por encima del límite en el séptimo día, disminuyendo después debido principalmente a intervenciones clínicas. Las medias y desviaciones estándar fueron D -4: 0,89 ± 0,257061; D 4: 1,05 ± 0,283279; D 7: 1,81 ± 0,456131; y D 12: 1,19 ± 0,437762. El beneficio de monitorizar la BHB fue la intervención clínica inmediata, evitando la cetosis clínica y las enfermedades concomitantes.(AU)

An RT-rtPCR assay for detection of rabies virus in bovine specimens / Um ensaio RT-rtPCR para detecção de vírus da raiva em espécimes bovinos

Bovine rabies is endemic in most Brazilian States, including Rio Grande do Sul (RS), which has faced an unprecedented rabies outbreak between 2011 and 2018. We described a real-time reverse transcription quantitative PCR (RT-rtPCR) for detection of rabies virus (RABV) in bovine samples. The primers were designed targeting a highly conserved region of the nucleoprotein (N) gene of RABV obtained from cattle. The detection limit corresponded to 13 DNA copies and the intra- and inter-run repeatability was adequate (CV<9%) in all dilutions tested. Amplification of other pathogens associated with neurological disease in cattle or cross-contamination was not observed. Brain samples from cattle suspicious of rabies (n=21) were tested in triplicate by the RT-rtPCR and by the gold-standard direct fluorescent antibody test (DFAT), resulting in 100% of sensitivity and specificity of the RT-rtPCR. Testing of additional 41 bovine brain samples submitted to the routine DFAT testing yielded 37 (90.2%) concordant results (30 positive/7 negative) and 4 (9.7%) inconclusive in DFAT and RT-rtPCR positive. These results showed a good concordance between the tests and a higher sensitivity of the RT-rtPCR. This assay represents an alternative for RABV detection, either as a confirmatory test or for large-scale diagnosis in endemic regions.

A raiva bovina é endêmica na maioria dos estados brasileiros, inclusive no Rio Grande do Sul (RS), que enfrentou um surto de raiva sem precedentes entre 2011 e 2018. Descrevemos um PCR quantitativo de transcrição reversa em tempo real (RT-rtPCR) para detecção do vírus da raiva (RABV) em bovinos. Os primers foram desenhados visando uma região altamente conservada do gene da nucleoproteína (N) de RABV obtido de bovinos. O limite de detecção correspondeu a 13 cópias de DNA e a repetibilidade intra e inter-ensaios foi adequada (CV <9%) em todas as diluições testadas. Não foi observada amplificação de outros patógenos associados a doenças neurológicas em bovinos ou contaminação cruzada. Amostras de cérebro de bovinos com suspeita de raiva (n = 21) foram testadas em triplicata no RT-rtPCR e pelo teste de anticorpo fluorescente padrão ouro (DFAT), resultando em 100% de sensibilidade e especificidade do RT-rtPCR. O teste de 41 amostras de cérebro bovino adicionais submetidas ao teste de DFAT de rotina rendeu 37 (90,2%) resultados concordantes (30 positivos / sete negativos) e quatro (9,7%) inconclusivos em DFAT e RT-rtPCR positivo. Esses resultados mostraram boa concordância entre os testes e maior sensibilidade do RT-rtPCR. Este ensaio representa uma alternativa para a detecção do vírus da raiva, seja como teste confirmatório ou para diagnóstico em larga escala em regiões endêmicas.

Pesticide residues in strawberries cultivated in the state of Rio Grande do Sul, Brazil / Resíduos de agrotóxicos em morangos produzidos no estado do Rio Grande do Sul, Brasil

Strawberries are of high social and economic importance and the crop is mainly produced at small family enterprises. Strawberries are repetitively amongst products in which unauthorized pesticide residues are determined. The PARA program launched in Brazil by ANVISA has disclosed that many samples have residues above the maximum residue limit (MRL). The present study appraised the pesticide residues detected in strawberries produced in the state of Rio Grande do Sul and marketed at the CEASA / RS. Along the harvesting seasons of 2018 and 2019, 62 strawberry samples were collected at the CEASA-pavilion destined for growers from the state of Rio Grande do Sul. Each sample was tested for 238 active ingredients of pesticides. Of the 62 samples retrieved, 40% were considered satisfactory and 60% resulted as unsatisfactory. Of the 25 satisfactory samples, three samples did not present any residues, and 22 had residues below the MRL. Of the 37 samples with an unsatisfactory outcome, 11 had active ingredients not allowed (NA) for use on strawberries, 13 presented active ingredients above the MRL and 13 reports presented the sum of both: residues above the MRL and NA. Thirty five different active ingredients were detected in the samples summing up to a total of 303 detection events. The active ingredients detected most frequently were procymidone (66.13%); carbendazim (53.22%) and difenoconazole (50%).

A cultura do morangueiro tem grande participação econômica e social no estado do Rio Grande do Sul, especialmente devido a sua importância na agricultura familiar. No entanto, o morango está constantemente entre as principais culturas com resíduos de agrotóxicos não autorizados ou acima do limite máximo de resíduos no principal Programa de Análise de Resíduos de Agrotóxicos em Alimentos (PARA) do Brasil. O presente estudo teve por objetivo avaliar os resíduos de agrotóxicos encontrados em morangos produzidos no estado do Rio Grande do Sul comercializados na CEASA/RS. Nos anos de 2018 e 2019 foram coletadas 62 amostras de morangos no pavilhão destinado aos produtores gaúchos desta central de abastecimento. Cada amostra foi analisada para presença de 238 ingredientes ativos de agrotóxicos. Das 62 amostras, 40% foram consideradas satisfatórias e 60% apresentaram resultado insatisfatório. Das 25 amostras satisfatórias, três amostras não continham resíduos de agrotóxicos e 22 apresentaram resíduos abaixo do limite máximo de resíduos (LMR) estipulado pela ANVISA. Dos 37 casos de amostras insatisfatórias, 11 foram por ingrediente ativo não permitido para a cultura (NPC), 13 por ingrediente ativo acima do LMR e 13 laudos apresentaram o somatório de resíduos acima do LMR e NPC. Foram encontrados 35 diferentes ingredientes ativos nas 62 amostras de morango, totalizando 303 eventos de detecção. Os ingredientes ativos detectados com maior frequência nas 62 amostras de morango foram procimidona (66,13%); carbendazim (53,22%) e difenoconazol (50%).

Evaluation of Analytical Sensitivity of Sdf I based PCR and Sandwich ELISA for Salmonella Enteritidis detection and On-Farm prevalence in Punjab, Pakistan

Salmonella Enteritidis (SE) is a dominant serotype among non-typhoidal Salmonella which renders poultry products unsafe for human consumption. Due to frequent reporting of egg associated outbreaks, broiler breeder flocks are understudied although farm environment present supporting conditions for the growth of SE. In this study, two rapid detection techniques for SE were compared in terms of analytical sensitivity and the extent of SE contamination in broiler breeder farm environment was determined. Analytical sensitivity as limit of detection (LOD) was evaluated quantitatively for serotype specific PCR based on amplification of Sdf I gene and a commercially available sandwich ELISA for antigen detection. In triplicate experiments, tenfold serial dilutions of SE were prepared and tested with each technique. Using pure cultures, analytical sensitivity of PCR and ELISA were found to be 18.6 CFU/ml and 2.77×105 CFU/ml respectively. PCR (LOD, log 1.2) was found to be more sensitive and rapid than ELISA (LOD, log 5.4). Environmental swab samples (n = 260) were collected from 22 hen houses representing 8 broiler breeder farms located in and around Lahore and Sheikhupura districts of Punjab province. From each hen house swab samples were collected from litter, nests, feeders, drinkers, fans, pads, ceiling, walls and walkways. Following selective enrichment, pooled swab samples were subjected to PCR. Results showed that 36.3 % (8/22) hen houses were detected positive for SE. These findings suggest improvement in farm biosecurity measures and advocate implementation of integrated Salmonellosis control programs in broiler breeder houses to minimize carcass contamination.(AU)

Padronização de uma PCR multiplex para a detecção de fraude em leite bubalino e caprino por adição de leite bovino / Standardization of a multiplex PCR for detection of fraud in buffalo and goat milk by addition of bovine milk

O consumo de leite de espécies como bubalino e caprino tem se popularizado por representarem uma alternativa para indivíduos que possuem restrições alimentares relacionadas ao leite bovino e em virtude das propriedades nutricionais desses alimentos. No entanto, fatores como a baixa produção e a sazonalidade predispõem a adulterações destes alimentos, principalmente pela adição de leite bovino, visando maior rendimento e lucratividade. Assim, o objetivo do estudo foi padronizar um método de PCR multiplex para autenticação de leites bubalino e caprino. Para isso, amostras de leite exclusivamente de cada espécie foram utilizados para a padronização da técnica. Em seguida, foi realizada a fraude pela adição de leite bovino ao caprino e ao bubalino, em proporções de 0,1% até 100%. A técnica foi eficaz, precisa, rápida e prática para a detecção do DNA de bovino, bubalino e caprino, separadamente e em conjunto. Na fraude experimental, o limite de detecção da técnica ocorreu a partir do menor percentual testado (0,1%) tanto no leite caprino quanto no bubalino. Dessa forma, a PCR multiplex testada mostrou ser uma importante ferramenta para a autenticação de leite, pendendo ser utilizada para fins de fiscalização por órgãos competentes.

Milk consumption of species such as buffalo and goat has become popular due to the nutritional properties of these foods and because they represent an alternative for individuals who have dietary restrictions related to bovine milk. However, factors such as low production and seasonality predispose to adulteration, mainly by the addition of bovine milk, aiming at higher yield and profitability. Thus, the aim of the present study was to standard a multiplex PCR method for buffalo and goat milks authentication. For this, the milks exclusively of each species were used to standardize the technique. Subsequently, fraud was performed by the addition of bovine milk to goat and buffalo in proportions from 0.1% to 100%. The technique was effective and accurate for detecting bovine, buffalo and goat DNA separately and together quickly and practically. In experimental fraud, the detection limit of the technique occurred from the lowest percentage tested (0.1%) in both goat and buffalo milk. Thus, the multiplex PCR tested proved to be an important tool for milk authentication, pending to be used for supervision by competent agencies.

Antifungal activity of liriodenine on clinical strains of Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii species complexes

Background: Cryptoccocal meningitis continues to present high incidence among AIDS patients. The treatment of choice is the synergistic combination of flucytosine (5-FC) with amphotericin B deoxycholate (AmBd) or its lipid formulations. However, 5-FC is unavailable in many countries and AmB demands hospitalization. The combination of AmB with the fungistatic fluconazole (FLC) or the use of high FLC daily doses alone became the choice. Nonetheless, sterilization of cerebrospinal fluid is delayed with FLC monotherapy, mainly with high fungal burden. These findings suggest the search for new antifungal compounds, such as liriodenine. Methods: Liriodenine antifungal activity was evaluated by three procedures: determining the minimum inhibitory concentration (MIC) on 30 strains of the Cryptococcus neoformans (C. neoformans) complex and 30 of the Cryptococcus gattii (C. gattii) complex, using EUCAST methodology and amphotericin B deoxycholate as control; performing the time-kill methodology in two strains of the C. neoformans complex and one of the C. gattii complex; and injury to cryptococcal cells, evaluated by transmission electron microscopy (TEM). Liriodenine absorption and safety at 0.75 and 1.50 mg.kg-1 doses were evaluated in BALB/c mice. Results: Liriodenine MICs ranged from 3.9 to 62.5 µg.mL-1 for both species complexes, with no differences between them. Time-kill methodology confirmed its concentration-dependent fungicidal effect, killing all the strains below the limit of detection (33 CFU.mL-1) at the highest liriodenine concentration (32-fold MIC), with predominant activity during the first 48 hours. Liriodenine induced severe Cryptococcus alterations ­ cytoplasm with intense rarefaction and/or degradation, injury of organelles, and presence of vacuoles. Liriodenine was better absorbed at lower doses, with no histopathological alterations on the digestive tract. Conclusion: The fungicidal activity confirmed by time-kill methodology, the intense Cryptococcus injury observed by TEM, the absorption after gavage administration, and the safety at the tested doses indicate that the liriodenine molecule is a promising drug lead for development of anticryptococcal agents.(AU)

New sensitive real-time PCR targeting p28 gene for detection of Ehrlichia canis in blood samples from dogs / Novo PCR em tempo real sensível que visa o gene p28 para a detecção de Ehrlichia canis em amostras de sangue de cães

ABSTRACT: This study aims to describe a new detection method of a quantitative real-time polymerase chain reaction (qPCR) targeting the 28 kDa outer membrane protein gene (p28) as well as to compare this method with a conventional PCR (cPCR), which targets the same gene, in order to evaluate the performance of the technique designed in this study in detecting Ehrlichia canis (E. canis). Optimum oligonucleotides concentrations were reached, and the analytical sensitivity and specificity of the qPCR were performed. A total of 218 dogs' whole blood samples were conventionally collected for this study. The DNA was extracted from each sample. Subsequently, the samples were tested by an established cPCR and the new qPCR to compare each technique's performances. This new qPCR method for the molecular detection of E. canis presented a detection limit of ten copies of the fragment and was considered specific for E. canis according to analytical specificity analyses performed in vitro and in silico. The standard curve revealed 100% efficiency and a coefficient of determination (R2) equivalent to 99.8%. Among the samples examined by qPCR, 24.31% were considered positive, significantly greater than those detected by cPCR (15.13%). The qPCR technique reached a higher sensitivity than the cPCR when targeting the p28 gene in detecting E. canis. The qPCR standardized in this study is an efficient method for confirming canine monocytic ehrlichiosis (CME) diagnosis and might provide the parasitemia monitoring during the disease treatment.

RESUMO: Este estudo tem como objetivo descrever um novo método de detecção de uma reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qPCR) visando o gene da proteína da membrana externa de 28 kDa (p28), bem como comparar este método com um PCR convencional (cPCR), que visa o mesmo gene, a fim de avaliar o desempenho da técnica desenhada neste estudo na detecção de Ehrlichia canis (E. canis). As concentrações ideais de oligonucleotídeos foram alcançadas e a sensibilidade analítica e a especificidade do qPCR foram determinadas. Um total de 218 amostras de sangue total de cães foram coletadas convencionalmente para este estudo. O DNA foi extraído de cada amostra. Posteriormente, as amostras foram testadas por um cPCR estabelecido e o novo qPCR para comparar os desempenhos entre cada técnica. A curva padrão revelou 100% de eficiência e coeficiente de determinação (R2) equivalente a 99,8%. Dentre as amostras examinadas por qPCR, 24,31% foram consideradas positivas, percentual significativamente maior do que as detectadas por cPCR (15,13%). A técnica qPCR atingiu uma sensibilidade maior do que a cPCR na detecção de E. canis. A qPCR padronizada neste estudo é um método eficiente para a confirmação do diagnóstico de erliquiose monocítica canina (EMC) e pode fornecer o monitoramento de níveis de parasitemia ao longo do tratamento da doença.

New sensitive real-time PCR targeting p28 gene for detection of Ehrlichia canis in blood samples from dogs / Novo PCR em tempo real sensível que visa o gene p28 para a detecção de Ehrlichia canis em amostras de sangue de cães

This study aims to describe a new detection method of a quantitative real-time polymerase chain reaction (qPCR) targeting the 28 kDa outer membrane protein gene (p28) as well as to compare this method with a conventional PCR (cPCR), which targets the same gene, in order to evaluate the performance of the technique designed in this study in detecting Ehrlichia canis (E. canis). Optimum oligonucleotides concentrations were reached, and the analytical sensitivity and specificity of the qPCR were performed. A total of 218 dogs’ whole blood samples were conventionally collected for this study. The DNA was extracted from each sample. Subsequently, the samples were tested by an established cPCR and the new qPCR to compare each technique’s performances. This new qPCR method for the molecular detection of E. canis presented a detection limit of ten copies of the fragment and was considered specific for E. canis according to analytical specificity analyses performed in vitro and in silico. The standard curve revealed 100% efficiency and a coefficient of determination (R²) equivalent to 99.8%. Among the samples examined by qPCR, 24.31% were considered positive, significantly greater than those detected by cPCR (15.13%). The qPCR technique reached a higher sensitivity than the cPCR when targeting the p28 gene in detecting E. canis. The qPCR standardized in this study is an efficient method for confirming canine monocytic ehrlichiosis (CME) diagnosis and might provide the parasitemia monitoring during the disease treatment.

Este estudo tem como objetivo descrever um novo método de detecção de uma reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qPCR) visando o gene da proteína da membrana externa de 28 kDa (p28), bem como comparar este método com um PCR convencional (cPCR), que visa o mesmo gene, a fim de avaliar o desempenho da técnica desenhada neste estudo na detecção de Ehrlichia canis (E. canis). As concentrações ideais de oligonucleotídeos foram alcançadas e a sensibilidade analítica e a especificidade do qPCR foram determinadas. Um total de 218 amostras de sangue total de cães foram coletadas convencionalmente para este estudo. O DNA foi extraído de cada amostra. Posteriormente, as amostras foram testadas por um cPCR estabelecido e o novo qPCR para comparar os desempenhos entre cada técnica. A curva padrão revelou 100% de eficiência e coeficiente de determinação (R²) equivalente a 99,8%. Dentre as amostras examinadas por qPCR, 24,31% foram consideradas positivas, percentual significativamente maior do que as detectadas por cPCR (15,13%). A técnica qPCR atingiu uma sensibilidade maior do que a cPCR na detecção de E. canis. A qPCR padronizada neste estudo é um método eficiente para a confirmação do diagnóstico de erliquiose monocítica canina (EMC) e pode fornecer o monitoramento de níveis de parasitemia ao longo do tratamento da doença.

New sensitive real-time PCR targeting p28 gene for detection of Ehrlichia canis in blood samples from dogs / Novo PCR em tempo real sensível que visa o gene p28 para a detecção de Ehrlichia canis em amostras de sangue de cães

This study aims to describe a new detection method of a quantitative real-time polymerase chain reaction (qPCR) targeting the 28 kDa outer membrane protein gene (p28) as well as to compare this method with a conventional PCR (cPCR), which targets the same gene, in order to evaluate the performance of the technique designed in this study in detecting Ehrlichia canis (E. canis). Optimum oligonucleotides concentrations were reached, and the analytical sensitivity and specificity of the qPCR were performed. A total of 218 dogs whole blood samples were conventionally collected for this study. The DNA was extracted from each sample. Subsequently, the samples were tested by an established cPCR and the new qPCR to compare each techniques performances. This new qPCR method for the molecular detection of E. canis presented a detection limit of ten copies of the fragment and was considered specific for E. canis according to analytical specificity analyses performed in vitro and in silico. The standard curve revealed 100% efficiency and a coefficient of determination (R²) equivalent to 99.8%. Among the samples examined by qPCR, 24.31% were considered positive, significantly greater than those detected by cPCR (15.13%). The qPCR technique reached a higher sensitivity than the cPCR when targeting the p28 gene in detecting E. canis. The qPCR standardized in this study is an efficient method for confirming canine monocytic ehrlichiosis (CME) diagnosis and might provide the parasitemia monitoring during the disease treatment.(AU)

Este estudo tem como objetivo descrever um novo método de detecção de uma reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qPCR) visando o gene da proteína da membrana externa de 28 kDa (p28), bem como comparar este método com um PCR convencional (cPCR), que visa o mesmo gene, a fim de avaliar o desempenho da técnica desenhada neste estudo na detecção de Ehrlichia canis (E. canis). As concentrações ideais de oligonucleotídeos foram alcançadas e a sensibilidade analítica e a especificidade do qPCR foram determinadas. Um total de 218 amostras de sangue total de cães foram coletadas convencionalmente para este estudo. O DNA foi extraído de cada amostra. Posteriormente, as amostras foram testadas por um cPCR estabelecido e o novo qPCR para comparar os desempenhos entre cada técnica. A curva padrão revelou 100% de eficiência e coeficiente de determinação (R²) equivalente a 99,8%. Dentre as amostras examinadas por qPCR, 24,31% foram consideradas positivas, percentual significativamente maior do que as detectadas por cPCR (15,13%). A técnica qPCR atingiu uma sensibilidade maior do que a cPCR na detecção de E. canis. A qPCR padronizada neste estudo é um método eficiente para a confirmação do diagnóstico de erliquiose monocítica canina (EMC) e pode fornecer o monitoramento de níveis de parasitemia ao longo do tratamento da doença.(AU)

Optimized broad-range real-time PCR-based method for bacterial screening of platelet concentrates / Otimização de um método baseado em PCR em tempo real para rastreamento de bactérias em concentrados de plaquetas

Bacterial contamination of blood components remains a major challenge in transfusion medicine, particularly, platelet concentrates (PCs) due to the storage conditions that support bacterial proliferation. In this study, we develop a rapid, sensitive and specific real-time PCR protocol for bacterial screening of PCs. An internally controlled real-time PCR-based method was optimized and validated with our proprietary 16S Universal PCR Master Mix (IBMP/Fiocruz), which targets a conserved region of the bacterial 16S rRNA gene. Nonspecific background DNA was completely eliminated by treating the PCR Master Mix with ethidium monoazide (EMA). A lower limit of detection was observed for 10 genome equivalents with an observed Ct value of 34±1.07 in calibration curve generated with 10-fold serial dilutions of E. coli DNA. The turnaround time for processing, including microbial DNA purification, was approximately 4 hours. The developed method showed a high sensitivity with no non-specific amplification and a lower time-to-detection than traditional microbiological methods, demonstrating it to be an efficient means of screening pre-transfusion PCs.(AU)

A contaminação bacteriana dos componentes sanguíneos é um grande desafio na medicina transfusional, principalmente nos concentrados de plaquetas (PCs) devido às condições de armazenamento que favorecem a proliferação bacteriana. Neste estudo, desenvolvemos um protocolo de PCR em tempo real rápido, sensível e específico para a triagem bacteriana de PCs. Um método baseado em PCR em tempo real, controlado internamente, foi otimizado e validado com um Master Mix Universal PCR 16S (IBMP / Fiocruz), que detecta uma região conservada do gene 16S rRNA bacteriano. O background de DNA não específico foi completamente eliminado tratando a PCR Master Mix com monoazida de etídio (EMA). O limite de detecção inferior observado foi de 10 cópias equivalentes do genoma com um valor de Ct 34 ± 1,07, a curva de calibração foi gerada com diluições seriada de 10 vezes do DNA de E. coli. O tempo de processamento, incluindo a purificação microbiana do DNA, foi de aproximadamente 4 horas. O método desenvolvido mostrou alta sensibilidade sem amplificação inespecífica e menor tempo de detecção do que os métodos microbiológicos tradicionais, demonstrando ser um meio eficiente de triagem de PCs pré-transfusionais.(AU)

Daily activity patterns and occurrence of Leopardus guttulus (Carnivora, Felidae) in Lami Biological Reserve, southern Brazil

ABSTRACT Daily activity patterns are important elements of species behavior that reflect how they interact with their environment and with other related species. To investigate these patterns is crucial to understand how environmental or community changes may affect this behavior in each particular species. Within the Felidae family, research becomes fundamental to assess how small wild cats respond to local conditions and pressures, once there is a large gap in studies addressing such issues. Leopardus guttulus (Hensel, 1872) is an endangered species classified as Vulnerable (VU) at a regional and global level, being threatened mainly by the loss and fragmentation of its habitats. The aim of this study is to document the daily activity patterns of L. guttulus at the Lami Biological Reserve, and the influence of seasonality and temperature on those patterns. We also aimed to quantify how many individuals were using the Biological Reserve during the study period and evaluate their permanence in the area. We obtained 25 independent records for L. guttulus, which was the only cat species recorded at the site during the study period. In general, the species presented a cathemeral habit, being active throughout the 24 hours of the day, but with a more crepuscular/nocturnal activity in the spring and summer. The relationship between the species activity and temperature showed that more than 70% of the records were obtained in a narrow range of 10-17°C. We identified at least two individuals that remained at the site from four to six months of the year, with a higher detection frequency between August and November. Our results showed some interesting trends for the temporal activity of L. guttulus, suggesting flexibility related to seasonality, and the importance of the biological reserve to the preservation of this cat species in the southern limit of its distribution.

RESUMO Os padrões de atividade diária são elementos importantes do comportamento das espécies que refletem como elas interagem com seu ambiente e com outras espécies relacionadas. Investigar esses padrões é crucial para entender como as mudanças ambientais ou na comunidade podem afetar esse comportamento em cada espécie em particular. Dentro da família Felidae, os felinos silvestres de menor porte sofrem com uma grande lacuna de estudos nesse sentido, e pesquisas se tornam fundamentais para avaliar como eles respondem às condições e pressões locais. Leopardus guttulus (Hensel, 1872) é uma espécie ameaçada de extinção classificada como Vulnerável (VU) em nível regional e mundial, sendo ameaçada principalmente pela perda e fragmentação de seus habitats. O objetivo deste estudo é documentar o padrão de atividade diária de L. guttulus na Reserva Biológica do Lami e verificar a influência da sazonalidade e da temperatura nestes padrões. Nós também tentamos identificar o número de indivíduos usando a reserva biológica durante o período monitorado e avaliar o tempo de permanência destes na área. Obtivemos 25 registros independentes para L. guttulus, sendo a única espécie de felídeo silvestre registrada no local durante o período amostrado. No geral a espécie apresentou um hábito catemeral com atividade ao longo das 24 horas do dia, mas com uma maior atividade crepuscular/noturna nas estações da primavera e verão. A relação entre a atividade da espécie e a temperatura mostrou que mais de 70% dos registros foram obtidos em uma estreita faixa de temperatura de 10-17°C. Nós identificamos pelo menos dois indivíduos que permaneceram no local durante quatro a seis meses no ano, com maior frequência de detecção nos meses entre agosto e novembro. Nossos resultados demonstram algumas tendências interessantes sobre a atividade temporal de L. guttulus, sugerindo uma flexibilidade sazonal, e demonstram também a importância da reserva biológica para a preservação desta espécie no limite sul de sua distribuição.

Correlation of maternal concentrations of plasma testosterone with fetal sex in horses / Correlação das concentrações plasmáticas de testosterona materna com o sexo fetal em equinos

The objectives of this study were to evaluate the correlation of fetal sex and plasma testosterone concentrations between the 5th and 8th months of pregnancy in mares and to verify the applicability of this test to predict fetal sex. Blood samples were collected from 21 mares at 30-day intervals of between 150 and 240 days of pregnancy. Plasma testosterone was determined by radioimmunoassay and the sex of the foals confirmed at birth. The levels of maternal testosterone were higher in mares carrying female fetuses at months 5 and 8 (P 0.05). Limit values were determined by analyzing the receiver operating characteristic (ROC) estimates: 35.5 pg/mL and 40 pg/mL for the 5th and 8th month, respectively. For the mares with plasma testosterone values equal to or above the threshold, gestation of female foals was predicted, and for those with plasma testosterone below the threshold values pregnancy of male foals was predicted. In the 5th month, the predictive values for male and female fetuses were 70% and 88.9%, respectively; the detection rates were 87.5% and 72.7%, and the total accuracy of the examination was 78.9%. In the 8th month, the predictive values for male and female fetuses were 80% and 90%, respectively; the detection rates were 88.9% and 81.8%, and the total accuracy of the examination was 85%. It was concluded that there was a correlation between fetal sex and plasma testosterone concentrations in pregnant mares. Prediction of fetal sex based on plasma concentrations of maternal testosterone can be performed in months 5 and 8 with 78.9% and 85% accuracy, respectively.(AU)

Os objetivos do estudo foram avaliar a correlação do sexo fetal com as concentrações plasmáticas de testosterona entre o 5° e o 8º mês de gestação na égua e verificar a aplicabilidade deste exame para a predição do sexo fetal. Amostras de sangue foram coletadas de 21 éguas, com intervalos de 30 dias, entre 150 e 240 dias de gestação. A testosterona plasmática foi determinada por radioimunoensaio e o sexo dos potros foi confirmado ao nascimento. Os valores de testosterona materna foram superiores nas éguas gestando fetos fêmeas aos cinco e oito meses (P 0.05). Através da análise da curva ROC (receiver operating characteristic) foram determinados valores limites de 35,5 pg/mL e 40 pg/mL para o 5º e o 8° mês, respectivamente. Éguas com testosterona plasmática igual ou acima dos valores limites foram preditas como gestando fêmeas e éguas com testosterona plasmática abaixo dos valores limites foram preditas como gestando machos. Aos cinco meses, os valores preditivos para fetos machos e fêmeas foram 70% e 88,9%, respectivamente; as taxas de detecção foram 87,5% e 72,7% e a acurácia total do exame foi de 78,9%. Aos oito meses, os valores preditivos para fetos machos e fêmeas foram 80% e 90%, respectivamente; as taxas de detecção foram 88,9% e 81,8% e a acurácia total do exame foi de 85%. Conclui-se que houve correlação entre o sexo fetal e as concentrações de testosterona plasmática em éguas prenhes. A predição do sexo fetal baseada nas concentrações plasmáticas de testosterona materna pode ser realizada aos cinco e oito meses de gestação com 78,9% e 85% de acurácia, respectivamente.(AU)

Daily activity patterns and occurrence of Leopardus guttulus (Carnivora, Felidae) in Lami Biological Reserve, southern Brazil / Padrões de atividade diária e ocorrência de Leopardus guttulus (Carnivora, Felidae) na Reserva Biológica do Lami, sul do Brasil

Daily activity patterns are important elements of species behavior that reflect how they interact with their environment and with other related species. To investigate these patterns is crucial to understand how environmental or community changes may affect this behavior in each particular species. Within the Felidae family, research becomes fundamental to assess how small wild cats respond to local conditions and pressures, once there is a large gap in studies addressing such issues. Leopardus guttulus (Hensel, 1872) is an endangered species classified as Vulnerable (VU) at a regional and global level, being threatened mainly by the loss and fragmentation of its habitats. The aim of this study is to document the daily activity patterns of L. guttulus at the Lami Biological Reserve, and the influence of seasonality and temperature on those patterns. We also aimed to quantify how many individuals were using the Biological Reserve during the study period and evaluate their permanence in the area. We obtained 25 independent records for L. guttulus, which was the only cat species recorded at the site during the study period. In general, the species presented a cathemeral habit, being active throughout the 24 hours of the day, but with a more crepuscular/nocturnal activity in the spring and summer. The relationship between the species activity and temperature showed that more than 70% of the records were obtained in a narrow range of 10-17°C. We identified at least two individuals that remained at the site from four to six months of the year, with a higher detection frequency between August and November. Our results showed some interesting trends for the temporal activity of L. guttulus, suggesting flexibility related to seasonality, and the importance of the biological reserve to the preservation of this cat species in the southern limit of its distribution.(AU)

Os padrões de atividade diária são elementos importantes do comportamento das espécies que refletem como elas interagem com seu ambiente e com outras espécies relacionadas. Investigar esses padrões é crucial para entender como as mudanças ambientais ou na comunidade podem afetar esse comportamento em cada espécie em particular. Dentro da família Felidae, os felinos silvestres de menor porte sofrem com uma grande lacuna de estudos nesse sentido, e pesquisas se tornam fundamentais para avaliar como eles respondem às condições e pressões locais. Leopardus guttulus (Hensel, 1872) é uma espécie ameaçada de extinção classificada como Vulnerável (VU) em nível regional e mundial, sendo ameaçada principalmente pela perda e fragmentação de seus habitats. O objetivo deste estudo é documentar o padrão de atividade diária de L. guttulus na Reserva Biológica do Lami e verificar a influência da sazonalidade e da temperatura nestes padrões. Nós também tentamos identificar o número de indivíduos usando a reserva biológica durante o período monitorado e avaliar o tempo de permanência destes na área. Obtivemos 25 registros independentes para L. guttulus, sendo a única espécie de felídeo silvestre registrada no local durante o período amostrado. No geral a espécie apresentou um hábito catemeral com atividade ao longo das 24 horas do dia, mas com uma maior atividade crepuscular/noturna nas estações da primavera e verão. A relação entre a atividade da espécie e a temperatura mostrou que mais de 70% dos registros foram obtidos em uma estreita faixa de temperatura de 10-17°C. Nós identificamos pelo menos dois indivíduos que permaneceram no local durante quatro a seis meses no ano, com maior frequência de detecção nos meses entre agosto e novembro. Nossos resultados demonstram algumas tendências interessantes sobre a atividade temporal de L. guttulus, sugerindo uma flexibilidade sazonal, e demonstram também a importância da reserva biológica para a preservação desta espécie no limite sul de sua distribuição.(AU)

Daily activity patterns and occurrence of Leopardus guttulus (Carnivora, Felidae) in Lami Biological Reserve, southern Brazil / Padrões de atividade diária e ocorrência de Leopardus guttulus (Carnivora, Felidae) na Reserva Biológica do Lami, sul do Brasil

Daily activity patterns are important elements of species behavior that reflect how they interact with their environment and with other related species. To investigate these patterns is crucial to understand how environmental or community changes may affect this behavior in each particular species. Within the Felidae family, research becomes fundamental to assess how small wild cats respond to local conditions and pressures, once there is a large gap in studies addressing such issues. Leopardus guttulus (Hensel, 1872) is an endangered species classified as Vulnerable (VU) at a regional and global level, being threatened mainly by the loss and fragmentation of its habitats. The aim of this study is to document the daily activity patterns of L. guttulus at the Lami Biological Reserve, and the influence of seasonality and temperature on those patterns. We also aimed to quantify how many individuals were using the Biological Reserve during the study period and evaluate their permanence in the area. We obtained 25 independent records for L. guttulus, which was the only cat species recorded at the site during the study period. In general, the species presented a cathemeral habit, being active throughout the 24 hours of the day, but with a more crepuscular/nocturnal activity in the spring and summer. The relationship between the species’ activity and temperature showed that more than 70% of the records were obtained in a narrow range of 10-17°C. We identified at least two individuals that remained at the site from four to six months of the year, with a higher detection frequency between August and November. Our results showed some interesting trends for the temporal activity of L. guttulus, suggesting flexibility related to seasonality, and the importance of the biological reserve to the preservation of this cat species in the southern limit of its distribution.

Os padrões de atividade diária são elementos importantes do comportamento das espécies que refletem como elas interagem com seu ambiente e com outras espécies relacionadas. Investigar esses padrões é crucial para entender como as mudanças ambientais ou na comunidade podem afetar esse comportamento em cada espécie em particular. Dentro da família Felidae, os felinos silvestres de menor porte sofrem com uma grande lacuna de estudos nesse sentido, e pesquisas se tornam fundamentais para avaliar como eles respondem às condições e pressões locais. Leopardus guttulus (Hensel, 1872) é uma espécie ameaçada de extinção classificada como Vulnerável (VU) em nível regional e mundial, sendo ameaçada principalmente pela perda e fragmentação de seus habitats. O objetivo deste estudo é documentar o padrão de atividade diária de L. guttulus na Reserva Biológica do Lami e verificar a influência da sazonalidade e da temperatura nestes padrões. Nós também tentamos identificar o número de indivíduos usando a reserva biológica durante o período monitorado e avaliar o tempo de permanência destes na área. Obtivemos 25 registros independentes para L. guttulus, sendo a única espécie de felídeo silvestre registrada no local durante o período amostrado. No geral a espécie apresentou um hábito catemeral com atividade ao longo das 24 horas do dia, mas com uma maior atividade crepuscular/noturna nas estações da primavera e verão. A relação entre a atividade da espécie e a temperatura mostrou que mais de 70% dos registros foram obtidos em uma estreita faixa de temperatura de 10-17°C. Nós identificamos pelo menos dois indivíduos que permaneceram no local durante quatro a seis meses no ano, com maior frequência de detecção nos meses entre agosto e novembro. Nossos resultados demonstram algumas tendências interessantes sobre a atividade temporal de L. guttulus, sugerindo uma flexibilidade sazonal, e demonstram também a importância da reserva biológica para a preservação desta espécie no limite sul de sua distribuição.

Optimized broad-range real-time PCR-based method for bacterial screening of platelet concentrates

Abstract Bacterial contamination of blood components remains a major challenge in transfusion medicine, particularly, platelet concentrates (PCs) due to the storage conditions that support bacterial proliferation. In this study, we develop a rapid, sensitive and specific real-time PCR protocol for bacterial screening of PCs. An internally controlled real-time PCR-based method was optimized and validated with our proprietary 16S Universal PCR Master Mix (IBMP/Fiocruz), which targets a conserved region of the bacterial 16S rRNA gene. Nonspecific background DNA was completely eliminated by treating the PCR Master Mix with ethidium monoazide (EMA). A lower limit of detection was observed for 10 genome equivalents with an observed Ct value of 34±1.07 in calibration curve generated with 10-fold serial dilutions of E. coli DNA. The turnaround time for processing, including microbial DNA purification, was approximately 4 hours. The developed method showed a high sensitivity with no non-specific amplification and a lower time-to-detection than traditional microbiological methods, demonstrating it to be an efficient means of screening pre-transfusion PCs.

Resumo A contaminação bacteriana dos componentes sanguíneos é um grande desafio na medicina transfusional, principalmente nos concentrados de plaquetas (PCs) devido às condições de armazenamento que favorecem a proliferação bacteriana. Neste estudo, desenvolvemos um protocolo de PCR em tempo real rápido, sensível e específico para a triagem bacteriana de PCs. Um método baseado em PCR em tempo real, controlado internamente, foi otimizado e validado com um Master Mix Universal PCR 16S (IBMP / Fiocruz), que detecta uma região conservada do gene 16S rRNA bacteriano. O background de DNA não específico foi completamente eliminado tratando a PCR Master Mix com monoazida de etídio (EMA). O limite de detecção inferior observado foi de 10 cópias equivalentes do genoma com um valor de Ct 34 ± 1,07, a curva de calibração foi gerada com diluições seriada de 10 vezes do DNA de E. coli. O tempo de processamento, incluindo a purificação microbiana do DNA, foi de aproximadamente 4 horas. O método desenvolvido mostrou alta sensibilidade sem amplificação inespecífica e menor tempo de detecção do que os métodos microbiológicos tradicionais, demonstrando ser um meio eficiente de triagem de PCs pré-transfusionais.

Ultrassonografia gestacional no diagnóstico de anormalidades fetais em pequenos animais / Gestational ultrasonography in the diagnosis of fetal abnormalities in small animals

A ultrassonografia gestacional em pequenos animais permite, além da confirmação e do monitoramento da prenhez, a detecção precoce de malformações e anormalidades fetais, representando uma importante ferramenta de acompanhamento pré-natal. Médicos veterinários, tutores e criadores podem beneficiar-se deste diagnóstico, uma vez que o conhecimento prévio de anormalidades fetais que exigem cirurgia ou intervenções neonatais permite o planejamento adequado por parte destes indivíduos. Na medicina humana, a detecção precoce de anormalidades fetais já é amplamente empregada no planejamento da conduta em relação à gestante e ao feto antes e após o nascimento. Em medicina veterinária, apesar de escassos, há relatos de malformações fetais diagnosticadas ao exame ultrassonográfico gestacional em pequenos animais. Entretanto, limitações inerentes ao aparelho, ao operador e à anatomia animal podem limitar o diagnóstico na totalidade dos exames, levando à ocorrência de diagnósticos falso-positivos e falso-negativos.(AU)

Gestational ultrasonography in small animals allows, in addition to the confirmation and monitoring of pregnancy, the early detection of malformations and fetal abnormalities, representing an important prenatal monitoring tool. Veterinarians, owners and breeders may benefit from this diagnosis, since prior knowledge of fetal abnormalities that require surgery or neonatal interventions allows adequate planning for these individuals. In human medicine, the early detection of fetal abnormalities is already widely used in planning the conduct in relation to the pregnant woman and the fetus before and after birth. In veterinary medicine, although there are few, there are reports of fetal malformations diagnosed at the ultrasound gestational examination in small animals. However, limitations inherent in the device, the operator and the animal anatomy may limit the diagnosis in all the exams, leading to the occurrence of false positive and false-negative diagnoses.(AU)

Ultrassonografia gestacional no diagnóstico de anormalidades fetais em pequenos animais / Gestational ultrasonography in the diagnosis of fetal abnormalities in small animals

A ultrassonografia gestacional em pequenos animais permite, além da confirmação e do monitoramento da prenhez, a detecção precoce de malformações e anormalidades fetais, representando uma importante ferramenta de acompanhamento pré-natal. Médicos veterinários, tutores e criadores podem beneficiar-se deste diagnóstico, uma vez que o conhecimento prévio de anormalidades fetais que exigem cirurgia ou intervenções neonatais permite o planejamento adequado por parte destes indivíduos. Na medicina humana, a detecção precoce de anormalidades fetais já é amplamente empregada no planejamento da conduta em relação à gestante e ao feto antes e após o nascimento. Em medicina veterinária, apesar de escassos, há relatos de malformações fetais diagnosticadas ao exame ultrassonográfico gestacional em pequenos animais. Entretanto, limitações inerentes ao aparelho, ao operador e à anatomia animal podem limitar o diagnóstico na totalidade dos exames, levando à ocorrência de diagnósticos falso-positivos e falso-negativos.

Gestational ultrasonography in small animals allows, in addition to the confirmation and monitoring of pregnancy, the early detection of malformations and fetal abnormalities, representing an important prenatal monitoring tool. Veterinarians, owners and breeders may benefit from this diagnosis, since prior knowledge of fetal abnormalities that require surgery or neonatal interventions allows adequate planning for these individuals. In human medicine, the early detection of fetal abnormalities is already widely used in planning the conduct in relation to the pregnant woman and the fetus before and after birth. In veterinary medicine, although there are few, there are reports of fetal malformations diagnosed at the ultrasound gestational examination in small animals. However, limitations inherent in the device, the operator and the animal anatomy may limit the diagnosis in all the exams, leading to the occurrence of false positive and false-negative diagnoses.

New record of the fringed leaf frog, Cruziohyla craspedopus (Anura: Phyllomedusidae) extends its eastern range limit / Novo registro de ocorrência da perereca-franjada, Cruziohyla craspedopus (Anura: Phyllomedusidae) estende o limite oriental de sua distribuição

The fringed leaf frog, Cruziohyla craspedopus is rarely sampled in the Brazilian Amazon, probably due to low detection probability associated with its arboreal habit. The knowledge about the species distribution stems from successive additions of occasional occurrence records, which indicate that the species is widely distributed throughout Amazonia. We present new occurrence records to update the geographic range of the species, which is hereby extended 224 km to the northeast. We also present morphological data from collected specimens and discuss the updated range from the geographic and ecological points of view. We show that the range of the leaf frog crosses several main tributaries along the southern bank of the Amazonas River, although the species occurrence is apparently limited by a minimum tree cover of 70%.(AU)

A perereca franjada, Cruziohyla craspedopus é raramente amostrada na Amazônia brasileira, provavelmente devido à baixa probabilidade de detecção associada ao seu hábito arborícola. A distribuição geográfica conhecida da espécie é resultado da adição sucessiva de registros ocasionais de ocorrência, que indicam que ela é amplamente distribuída na Amazônia. Nós apresentamos novos pontos de ocorrência para atualizar a distribuição geográfica da espécie, estendendo-a em 224 km na direção nordeste. Nós também apresentamos dados morfológicos dos espécimes coletados e discutimos a distribuição atualizada sob pontos de vista geográfico e ecológico. Mostramos que a distribuição de pererecas franjadas cruza vários tributários da margem sul do Rio Amazonas, embora esteja aparentemente limitada por cobertura arbórea mínima de 70%.(AU)