Dimethyl acetamide and dimethyl sulfoxide associated at glucose and egg yolk for cryopreservation of Pseudoplatystoma corruscans semen

This study aimed to develop a protocol for the cryopreservation of Pseudoplatystoma corruscans semen. For this, mature males were hormonally induced with a single dose of carp pituitary extract (5 mg/kg body weight). Semen was collected and evaluated. Two cryoprotectants were tested to compose the diluents: dimethyl acetamide (DMA) and dimethyl sulfoxide (Me2SO), in two concentrations (8% and 10%), + 5.0% glucose + 10% egg yolk. The semen was diluted in a 1: 4 ratio (semen: extender), packed in 0.5 mL straws and frozen in a dry shipper container in liquid nitrogen vapors. After thawing, sperm kinetics, sperm morphology and DNA integrity of cryopreserved sperm were evaluated. Pseudoplatystoma corruscans males produced semen with sperm motility > 80%. After thawing, all treatments provided semen with total sperm motility > 40%, with no significant difference (P < 0.05) between them, as well as between the other sperm kinetic parameters evaluated. The treatments with DMA provided a smaller fragmentation of the DNA of the gametes. Sperm malformations were identified in both fresh and cryopreserved semen, with a slight increase in these malformations being identified in sperm from thawed P. corruscans semen samples.(AU)

Este estudo teve como objetivo desenvolver um protocolo para a criopreservação do sêmen de Pseudoplatystoma corruscans. Para tal, machos maduros foram induzidos hormonalmente com uma dose única de extrato de hipófise de carpa (5 mg/kg de peso vivo). O sêmen foi coletado e avaliado. Sendo testados para compor os diluentes, dois crioprotetores: dimetil acetamida (DMA) e dimetil sulfóxido (Me2SO), em duas concentrações (8% e 10%), + 5,0% glicose + 10% gema de ovo. O sêmen foi diluído na proporção 1: 4 (sêmen: extensor), embalado em palhetas de 0,5 mL e congelado em container dryshipper em vapores de nitrogênio líquido. Após o descongelamento, foram avaliados os aspectos cinéticos espermáticos, a morfologia espermática e a integridade do DNA dos espermatozoides criopreservados. Os machos de P. corruscans produziram sêmen com motilidade espermática > 80%. Todos os tratamentos proporcionaram após o descongelamento sêmen com motilidade espermática total > 40%, sem diferença significativa (P < 0,05) entre eles, como também entre os demais parâmetros cinéticos espermáticos avaliados. Os tratamentos com DMA proporcionaram uma menor fragmentação do DNA dos gametas. Malformações espermáticas foram identificadas, tanto no sêmen fresco, como no criopreservado, sendo identificado um aumento discreto dessas malformações nos espermatozoides das amostras de sêmen descongeladas de P. corruscans.(AU)

Cryopreservation of jaguar (Panthera onca) sperm cells using different cryoprotectants and different thawing temperatures

The cryopreservation of jaguar semen must be improved to produce high-quality biobanking doses. Until now, the rare studies of semen freezing in the species have only evaluated glycerol, always with a significant reduction in sperm quality in thawed semen. The purpose of this study was to assess the efficacy of three cryoprotectants, dimethylsulfoxide (DMSO), glycerol (GLY), and methanol (MET), in the cryopreservation of jaguar semen in an LDL-based extender, as well as the effect of thawing temperature on dosage quality. Five mature males with a history of reproduction were used. On the males, an infrared thermal image (IRT) was captured, the spicules and testes were analyzed, and the CASA system was used to evaluate the quality of fresh and thawed sperm. The superficial IRT was 4.6 ± 1.2 °C cooler than the anal sphincter, and the semen measured between 27.3 and 28.7 °C shortly after exiting the urethra. The total motility of fresh sperm was 55.3 ± 22.6%, and progressive motility was 36.3 ± 18%. The total motility of thawed sperm was 5.28 ± 2.51%, 4.49 ± %2.49, and 0.51 ± 0.62% for DMSO, GLY, and MET, respectively. DMSO and GLY performed better than MET, and there was no difference in thawing temperature (37°C 30 s vs. 50°C 12 s). All animals exhibit a considerable level of morphological changes in sperm. Low amounts of total and progressive motility were found in the thawed sperm. Males with a high level of sperm morphological changes were found to be fertile, but the lone male with normospermia was infertile. Thus, we contest the applicability of the commonly used morphological classification for bovines to felid species.(AU)

Phytochemical prospection and larvicidal bioactivity of the janaguba (Himatanthus drasticus) Mart. Plumel (Apocynaceae) latex against Aedes aegypti L. (Diptera: Culicidae) / Prospecção fitoquímica e bioatividade larvicida do látex da janaguba (Himatanthus drasticus) Mart. Plumel (Apocynaceae) sobre Aedes aegypti L. (Diptera: Culicidae)

The aim of this study was to carry out phytochemical prospecting and evaluate the larvicidal activity of Himatanthus drasticus latex extracts against Aedes aegypti. The extracts were obtained by maceration from 5 g of latex powder concentrated separately in 100 mL of methanol, ethyl acetate, and hexane solvents. The concentrations of 100, 200, 300, 400, and 500 ppm of each extract were tested in triplicate with a solution of pyriproxyfen as the positive control and distilled water and dimethylsulfoxide as the negative control. The phytochemical prospection of the methanolic extract showed the presence of phenolic compounds, such as anthocyanins, anthocyanidins, catechins, chalcones, aurones, leucoanthocyanidins, and condensed tannins. The insecticidal bioactivity was most significant for the methanolic extract. The methanolic extract lethal concentrations (LC) of 50 and 90% were 190.76 and 464.74 ppm, respectively. After 48 hours of exposure, the extracts using methanol, ethyl acetate, and hexane at their highest concentrations (500 ppm) caused larval mortality of 100, 73.33, and 66.67%, respectively. These extracts also promoted changes in the external morphology of the larvae, such as damage to the anal papillae, darkening of the body, and reduction in the number of bristles. The methanolic extract showed greater expressivity for morphological changes. The latex of H. drasticus has larvicidal activity against third-stade larvae of A. aegypti and it is more significant when obtained through maceration in methanol. The methanolic extract of H. drasticus latex contains phenolic compounds with insecticidal activity against A. aegypti larvae.

O objetivo deste estudo foi realizar a prospecção fitoquímica e avaliar a atividade larvicida de extratos de látex de Himatanthus drasticus contra A. aegypti. Os extratos foram obtidos por maceração de 5 g de látex em pó concentrado separadamente em 100 mL dos solventes metanol, acetato de etila e hexano. As concentrações de 100, 200, 300, 400 e 500 ppm de cada extrato foram testadas em triplicata com uma solução de piriproxifeno como controle positivo e água destilada e dimetilsulfóxido como controle negativo. A prospecção fitoquímica do extrato metanólico mostrou a presença de compostos fenólicos, como antocianinas, antocianidinas, catequinas, chalconas, auronas, leucoantocianidinas e taninos condensados. A bioatividade inseticida foi mais significativa para o extrato metanólico. As concentrações letais (CL) do extrato metanólico de 50 e 90% foram 190,76 e 464,74 ppm, respectivamente. Após 48 horas de exposição, os extratos utilizando metanol, acetato de etila e hexano em suas maiores concentrações (500 ppm) causaram mortalidade larval de 100, 73,33 e 66,67%, respectivamente. Esses extratos também promoveram alterações na morfologia externa das larvas, como danos às papilas anais, escurecimento do corpo e redução do número de cerdas. O extrato metanólico apresentou maior expressividade para alterações morfológicas. O látex de H. drasticus possui atividade larvicida contra larvas de terceiro estádio de A. aegypti e é mais significativa quando obtido por maceração em metanol. O extrato metanólico do látex de H. drasticus contém compostos fenólicos com atividade inseticida contra larvas de A. aegypti.

Supplementation of cryodiluent medium with sulfated polysaccharides from green seaweeds in the freezing of Colossoma macropomum semen / Suplementação do meio criodiluidor com polissacarídeos sulfatados de macroalgas verdes na congelação do sêmen de Colossoma macropomum

This study proposes to investigate the addition of sulfated polysaccharides (SP) extracted from two species of green seaweeds, Ulva lactuca and Caulerpa racemosa, to Colossoma macropomum semen cryodiluent medium. Four concentrations of SP (1.0, 2.0, 3.0, or 4.0 mg mL-1) of each seaweed were evaluated. Semen was collected during the month of September in Fortaleza - CE, Brazil. Fresh semen samples were analyzed for the parameters of total sperm motility, curvilinear velocity (VCL), straight line velocity (VSL), average path velocity (VAP), sperm morphology, membrane integrity, and DNA integrity. Then, the samples were cryopreserved in freezing medium containing 10% dimethyl sulfoxide (DMSO) + 5% glucose, which was supplemented with different concentrations of SP. An unsupplemented treatment was used as control. After 15 days, they were thawed in a water bath at 45 ºC for eight seconds and the same analyses of fresh semen were performed. Statistical analysis revealed that there were no significant differences (p > 0.05) between the different tested concentrations of SP for any of the evaluated parameters. Compared with the control, there was no difference in concentrations (p > 0.05) for total motility; however, for VCL, VSL, and VAP, the U. lactuca concentrations of 3.0 and 4.0 mg mL-1 were detrimental (p < 0.05). The same was observed with 4.0 mg mL-1 of C. racemosa for VSL and VAP. In terms of morphology, 1.0 and 4.0 mg mL-1 of C. racemosa reduced normal sperm (p < 0.05), whereas for the other concentrations there was no difference (p > 0.05). All concentrations of both seaweeds maintained plasma membrane integrity (p > 0.05). As for DNA integrity, only 4.0 mg mL-1 of U. lactuca produced lower results than the control (p < 0.05), whereas the other concentrations maintained the number of spermatozoa with intact DNA (p > 0.05). Based on the results, higher concentrations of SP are harmful to tambaqui sperm in the freezing medium, whereas lower concentrations maintain sperm parameters. Further research is warranted to better investigate the antioxidant potential of these polymers in cryodiluent medium for C. macropomum as well as other fish species.

O estudo teve como objetivo avaliar a adição de polissacarídeos sulfatados (PS) extraídos de duas espécies de macroalgas verdes, Ulva lactuca e Caulerpa racemosa, no meio criodiluidor do sêmen de Colossoma macropomum. Para isso, foram avaliadas quatro concentrações de PS (1,0; 2,0; 3,0 ou 4,0 mg mL-1), de cada macroalga. A coleta de sêmen foi realizada durante o mês de setembro, em Fortaleza, Ceará, Brasil. As amostras de sêmen fresco foram analisadas quanto aos parâmetros de motilidade total dos espermatozoides, velocidade curvilinear (VCL), velocidade em linha reta (VSL), velocidade média do trajeto (VAP), morfologia espermática, integridade de membrana e integridade de DNA. Em seguida, foram criopreservadas em meio de congelação contendo dimetilsulfóxido (DMSO) 10% + glicose 5%, e suplementadas com as diferentes concentrações de PS, tendo ainda um tratamento não suplementado como controle. Após 15 dias, foram descongeladas em banho-maria a 45 ºC por oito segundos, e as mesmas análises do sêmen fresco foram realizadas. Através da análise estatística, os resultados mostraram que não houveram diferenças significativas (p > 0,05) entre as diferentes concentrações de PS testadas para nenhum dos parâmetros avaliados. Já em relação ao controle, não houve diferença nas concentrações (p > 0,05) para a motilidade total, no entanto, para VCL, VSL e VAP, as concentrações de 3,0 e 4,0 mg mL-1 de U. lactuca foram prejudiciais (p < 0,05). O mesmo foi observado em 4,0 mg mL-1 de C. racemosa para VSL e VAP. Para a morfologia, 1,0 e 4,0 mg mL-1 de C. racemosa reduziram os espermatozoides normais (p < 0,05), enquanto para as demais concentrações não houve diferença (p > 0,05). Para todas as concentrações de ambas as macroalgas, a integridade de membrana plasmática foi mantida (p > 0,05). Quanto à integridade do DNA, apenas 4,0 mg mL-1 de U. lactuca foi inferior ao controle (p < 0,05), enquanto as demais concentrações mantiveram o número de espermatozoides com DNA íntegro (p > 0,05). De acordo com os resultados obtidos, concentrações mais elevadas de PS são prejudiciais aos espermatozoides de tambaqui no meio de congelação, enquanto concentrações mais baixas mantiveram parâmetros espermáticos. Estudos posteriores são indicados para melhor avaliar o potencial antioxidante destes polímeros no meio criodiluidor do sêmen de C. macropomum, bem como de outras espécies de peixes.

Effect of cryoprotectant on the motility, viability, fertilization, and DNA integrity of naleh fish Barbonymus sp. (Cyprinidae) sperm / Efeito do crioprotetor na motilidade, viabilidade, fertilização e integridade do DNA no sêmen de peixes naleh Barbonymus sp. (Cyprinidae)

Naleh fish Barbonymus sp. is a commercial freshwater fish, which is indigenous to Aceh, Indonesia. The population of this species has declined over the years as a result of habitat perturbations and overfishing. Hence, the crucial need to develop a cryopreservation method to support breeding programs. This involved the use of a cryoprotectant as an important component. The objective of this study, therefore, was to explore the best cryoprotectant for naleh fish spermatozoa, and a total of five types were tested. These include the DMSO, Methanol, Ethanol, Glycerol, and Ethylene Glycol at a similar concentration of 10%, which were individually combined with 15% egg yolk, and every treatment was performed in three replications. Conversely, Ringer's solution was adopted as an extender, and the sperm was cryopreserved in liquid nitrogen for 15 days. The results showed significant influence on sperm motility and viability, as well as egg fertility of naleh fish (P <0.05), although the DMSO provided the best outcome, compared to others at 47.17%, 50.13%, and 45.67%, respectively. Furthermore, DNA fragmentation had not occurred in the fresh and cryopreserved sperm samples, indicating the protective effect of tested cryoprotectants. It is concluded that the 10% DMSO and 15% egg yolk is the best cryoprotectant for naleh fish spermatozoa.(AU)

O peixe naleh Barbonymus sp. é um peixe comercial de água doce, originário de Aceh, Indonésia. Durante vários anos, as perturbações provocadas no seu habitat e a pesca predatória determinaram o declínio da sua população, cuja preservação deve apoiar-se em um programa de reprodução controlada, com o emprego de espermatozoides criopreservados. O presente trabalho realizou um estudo comparativo de cinco crioprotetores: dimetilsultóxido, metanol, etanol, glicerol e etileno glicol. Todos os crioprotetores foram testados na concentração de 10%, combinados a 15% de gema de ovo. Cada tratamento foi efetuado em triplicatas. A solução de ringer foi utilizada como extensor e o esperma foi criopreservado em nitrogênio líquido por 15 dias. Os resultados obtidos revelaram a existência de influência significante (P<0,05) na viabilidade e motilidade espermática bem como na fertilidade dos ovos do peixe naleh, em que o dimetilsulfóxido apresentou o melhor resultado com os valores de 47,17%, 50,13% e 45,67%, respectivamente. Por outro lado, a fragmentação do DNA não ocorreu nas amostras de esperma fresco e criopreservado, indicando o efeito protetor dos crioprotetores testados. A conclusão obtida foi que o dimetilsulfóxido e 15% de gema de ovo foram o melhor crioprotetor para os espermatozoides do peixe naleh.(AU)

Effect of cryoprotectant on the motility, viability, fertilization, and DNA integrity of naleh fish Barbonymus sp. (Cyprinidae) sperm / Efeito do crioprotetor na motilidade, viabilidade, fertilização e integridade do DNA no sêmen de peixes naleh Barbonymus sp. (Cyprinidae)

Naleh fish Barbonymus sp. is a commercial freshwater fish, which is indigenous to Aceh, Indonesia. The population of this species has declined over the years as a result of habitat perturbations and overfishing. Hence, the crucial need to develop a cryopreservation method to support breeding programs. This involved the use of a cryoprotectant as an important component. The objective of this study, therefore, was to explore the best cryoprotectant for naleh fish spermatozoa, and a total of five types were tested. These include the DMSO, Methanol, Ethanol, Glycerol, and Ethylene Glycol at a similar concentration of 10%, which were individually combined with 15% egg yolk, and every treatment was performed in three replications. Conversely, Ringer's solution was adopted as an extender, and the sperm was cryopreserved in liquid nitrogen for 15 days. The results showed significant influence on sperm motility and viability, as well as egg fertility of naleh fish (P <0.05), although the DMSO provided the best outcome, compared to others at 47.17%, 50.13%, and 45.67%, respectively. Furthermore, DNA fragmentation had not occurred in the fresh and cryopreserved sperm samples, indicating the protective effect of tested cryoprotectants. It is concluded that the 10% DMSO and 15% egg yolk is the best cryoprotectant for naleh fish spermatozoa.(AU)

O peixe naleh Barbonymus sp. é um peixe comercial de água doce, originário de Aceh, Indonésia. Durante vários anos, as perturbações provocadas no seu habitat e a pesca predatória determinaram o declínio da sua população, cuja preservação deve apoiar-se em um programa de reprodução controlada, com o emprego de espermatozoides criopreservados. O presente trabalho realizou um estudo comparativo de cinco crioprotetores: dimetilsultóxido, metanol, etanol, glicerol e etileno glicol. Todos os crioprotetores foram testados na concentração de 10%, combinados a 15% de gema de ovo. Cada tratamento foi efetuado em triplicatas. A solução de ringer foi utilizada como extensor e o esperma foi criopreservado em nitrogênio líquido por 15 dias. Os resultados obtidos revelaram a existência de influência significante (P<0,05) na viabilidade e motilidade espermática bem como na fertilidade dos ovos do peixe naleh, em que o dimetilsulfóxido apresentou o melhor resultado com os valores de 47,17%, 50,13% e 45,67%, respectivamente. Por outro lado, a fragmentação do DNA não ocorreu nas amostras de esperma fresco e criopreservado, indicando o efeito protetor dos crioprotetores testados. A conclusão obtida foi que o dimetilsulfóxido e 15% de gema de ovo foram o melhor crioprotetor para os espermatozoides do peixe naleh.(AU)

BPA toxicity during development of zebrafish embryo / Toxicidade do BPA durante o desenvolvimento de embriões de zebrafish

Bisphenol A (BPA) is a monomer used in the production of polycarbonate, a polymer commonly found in plastics, epoxy resins and thermal papers. The presence of BPA in food, water, air and dust has been of great concern in recent years not only due to environmental and ecological issues but also because of its supposed risk to public health related to its mutagenic and carcinogenic potential. In this study we evaluated the toxicity of bisphenol A in zebrafish embryos (Danio rerio) and determined the 50% lethal concentration (LC50) of this chemical. BPA was used at concentrations ranging from 1 M to 100 M in E3 medium/0.5% dimethylsulfoxide (DMSO) from previously prepared stock solutions in 100% DMSO. Controls included embryos exposed only to E3 medium or supplemented with 0.5% DMSO. Camptothecin (CPT), a known inhibitor of cell proliferation was used as positive control at a concentration of 0.001 M in E3 medium/0.5% DMSO. Adults zebrafish were placed for breeding a day before the experimental set up, then, viable embryos were collected and selected for use. Experiments were carried out in triplicates, according to specifications from Organization for Economic Cooperation and Development (OECD). One embryo/well (25 embryos per concentration) was distributed in 96 well microplates in presence or absence of the chemicals. The plates were kept in BOD incubators with a controlled temperature of 28.5 ºC and with photoperiod of 14 h light:10 h dark. After 24h, 48h, 72h and 96h exposure, the exposed embryos were evaluated according to the following parameters: mortality, coagulation, rate of heartbeat, hatching and presence of morphological abnormalities. Photography was obtained by photomicroscopy. Apoptosis was evaluated by DNA ladder assay. DNA was extracted by phenol:chloroform method and analyzed by 2% agarose gel electrophoresis. DNA fragments were visualized after ethidium bromide staining in ultraviolet transilluminator. The LC50 determined for BPA was 70 M after 24 hours, 72 M after 48 hours, 47 M after 72 hours and 31 M after 96 hours exposure. BPA induced morphological and physiological alterations such as yolk sac and pericardial edema, hatching delay or inhibition, spine deformation, decreasing in heartbeat rate and mortality. In conclusion, this study demonstrated that BPA induced marked malformations in zebrafish embryos at concentrations above 25 M corroborating the current concerns related to the widespread presence of BPA in the air, food and water used by humans as well as in the bodily fluids and tissues.(AU)

Bisfenol A (BPA) é um monômero utilizado na produção de policarbonato, um polímero comumente encontrado em plásticos, resinas epóxi e papéis térmicos. A presença de BPA em alimentos, água, ar e poeira tem sido motivo de grande preocupação nos últimos anos, não só devido a questões ambientais e ecológicas, mas também ao suposto risco para a saúde pública relacionado ao seu potencial mutagênico e carcinogênico. Neste estudo avaliamos a toxicidade do bisfenol A em embriões de peixe-zebra (Danio rerio) e determinamos a concentração letal 50% (LC50) deste composto químico. O BPA foi usado na faixa de concentração entre 1 M e 100M em meio E3/0,5% de dimetilsulfóxido (DMSO), preparado a partir de soluções estoques em 100% DMSO. Os controles negativos incluíram embriões expostos apenas ao meio E3 ou suplementado com 0,5% DMSO. Camptotecina (CPT), um conhecido inibidor da proliferação celular, foi usado como controle positivo a uma concentração de 0,001 M em meio E3/0,5% DMSO. Peixes-zebra adultos foram colocados para reprodução um dia antes da montagem experimental, em seguida, embriões viáveis foram coletados e selecionados para uso. Os experimentos foram realizados em triplicata, de acordo com as especificações da Organização para Cooperação e Desenvolvimento Econômico (OCDE). Um embrião/ poço (25 embriões por concentração) foi distribuído em microplacas de 96 poços na presença ou ausência dos compostos químicos. As placas foram mantidas em incubadoras BOD com temperatura controlada de 28,5 ºC e com fotoperíodo de 14h claro:10h escuro. Após 24h, 48h, 72h e 96h, os embriões expostos foram avaliados de acordo com os seguintes parâmetros: mortalidade, presença de coagulação, taxa do batimento cardíaco, eclosão e presença de anormalidades morfológicas. Fotografias foram obtidas por fotomicroscopia. A apoptose foi avaliada pelo ensaio de DNA ladder. O DNA foi extraído pelo método fenol:clorofórmio e analisado por eletroforese em gel de agarose a 2%. Fragmentos de DNA foram visualizadas após coloração com brometo de etídio em um transiluminador ultravioleta. A LC50 determinada para o BPA foi 70 M após 24 horas, 72 M após 48 horas, 47 M após 72 horas e 31 M após exposição por 96 horas. O BPA induziu alterações morfológicas e fisiológicas como edema de saco vitelino e edema pericárdico, atraso no tempo ou inibição da eclosão, deformação da coluna vertebral, diminuição da taxa de batimentos cardíacos e mortalidade. Em conclusão, este estudo demonstrou que o BPA induziu grande número de malformações em embriões de peixe-zebra em concentrações acima de 25 M, corroborando as preocupações atuais relacionadas a presença generalizada do BPA no ar, alimento e água usados pelos seres humanos bem como nos fluidos e tecidos corporais.(AU)

BPA toxicity during development of zebrafish embryo / Toxicidade do BPA durante o desenvolvimento de embriões de Zebrafish

Bisphenol A (BPA) is a monomer used in the production of polycarbonate, a polymer commonly found in plastics, epoxy resins and thermal papers. The presence of BPA in food, water, air and dust has been of great concern in recent years not only due to environmental and ecological issues but also because of its supposed risk to public health related to its mutagenic and carcinogenic potential. In this study we evaluated the toxicity of bisphenol A in zebrafish embryos (Danio rerio) and determined the 50% lethal concentration (LC50) of this chemical. BPA was used at concentrations ranging from 1 µM to 100 µM in E3 medium/0.5% dimethylsulfoxide (DMSO) from previously prepared stock solutions in 100% DMSO. Controls included embryos exposed only to E3 medium or supplemented with 0.5% DMSO. Camptothecin (CPT), a known inhibitor of cell proliferation was used as positive control at a concentration of 0.001 µM in E3 medium/0.5% DMSO. Adults zebrafish were placed for breeding a day before the experimental set up, then, viable embryos were collected and selected for use. Experiments were carried out in triplicates, according to specifications from Organization for Economic Cooperation and Development (OECD). One embryo/well (25 embryos per concentration) was distributed in 96 well microplates in presence or absence of the chemicals. The plates were kept in BOD incubators with a controlled temperature of 28.5 ºC and with photoperiod of 14 h light:10 h dark. After 24h, 48h, 72h and 96h exposure, the exposed embryos were evaluated according to the following parameters: mortality, coagulation, rate of heartbeat, hatching and presence of morphological abnormalities. Photography was obtained by photomicroscopy. Apoptosis was evaluated by DNA ladder assay. DNA was extracted by phenol:chloroform method and analyzed by 2% agarose gel electrophoresis. DNA fragments were visualized after ethidium bromide staining in ultraviolet transilluminator. The LC50 determined for BPA was 70 µM after 24 hours, 72 µM after 48 hours, 47 µM after 72 hours and 31 µM after 96 hours exposure. BPA induced morphological and physiological alterations such as yolk sac and pericardial edema, hatching delay or inhibition, spine deformation, decreasing in heartbeat rate and mortality. In conclusion, this study demonstrated that BPA induced marked malformations in zebrafish embryos at concentrations above 25 µM corroborating the current concerns related to the widespread presence of BPA in the air, food and water used by humans as well as in the bodily fluids and tissues.

Bisfenol A (BPA) é um monômero utilizado na produção de policarbonato, um polímero comumente encontrado em plásticos, resinas epóxi e papéis térmicos. A presença de BPA em alimentos, água, ar e poeira tem sido motivo de grande preocupação nos últimos anos, não só devido a questões ambientais e ecológicas, mas também ao suposto risco para a saúde pública relacionado ao seu potencial mutagênico e carcinogênico. Neste estudo avaliamos a toxicidade do bisfenol A em embriões de peixe-zebra (Danio rerio) e determinamos a concentração letal 50% (LC50) deste composto químico. O BPA foi usado na faixa de concentração entre 1 µM e 100µM em meio E3/0,5% de dimetilsulfóxido (DMSO), preparado a partir de soluções estoques em 100% DMSO. Os controles negativos incluíram embriões expostos apenas ao meio E3 ou suplementado com 0,5% DMSO. Camptotecina (CPT), um conhecido inibidor da proliferação celular, foi usado como controle positivo a uma concentração de 0,001 µM em meio E3/0,5% DMSO. Peixes-zebra adultos foram colocados para reprodução um dia antes da montagem experimental, em seguida, embriões viáveis foram coletados e selecionados para uso. Os experimentos foram realizados em triplicata, de acordo com as especificações da Organização para Cooperação e Desenvolvimento Econômico (OCDE). Um embrião/ poço (25 embriões por concentração) foi distribuído em microplacas de 96 poços na presença ou ausência dos compostos químicos. As placas foram mantidas em incubadoras BOD com temperatura controlada de 28,5 ºC e com fotoperíodo de 14h claro:10h escuro. Após 24h, 48h, 72h e 96h, os embriões expostos foram avaliados de acordo com os seguintes parâmetros: mortalidade, presença de coagulação, taxa do batimento cardíaco, eclosão e presença de anormalidades morfológicas. Fotografias foram obtidas por fotomicroscopia. A apoptose foi avaliada pelo ensaio de DNA ladder. O DNA foi extraído pelo método fenol:clorofórmio e analisado por eletroforese em gel de agarose a 2%. Fragmentos de DNA foram visualizadas após coloração com brometo de etídio em um transiluminador ultravioleta. A LC50 determinada para o BPA foi 70 µM após 24 horas, 72 µM após 48 horas, 47 µM após 72 horas e 31 µM após exposição por 96 horas. O BPA induziu alterações morfológicas e fisiológicas como edema de saco vitelino e edema pericárdico, atraso no tempo ou inibição da eclosão, deformação da coluna vertebral, diminuição da taxa de batimentos cardíacos e mortalidade. Em conclusão, este estudo demonstrou que o BPA induziu grande número de malformações em embriões de peixe-zebra em concentrações acima de 25 µM, corroborando as preocupações atuais relacionadas a presença generalizada do BPA no ar, alimento e água usados pelos seres humanos bem como nos fluidos e tecidos corporais.

Seminal characteristics and sensitivity of Astyanax lacustris (Characiformes: Characidae) sperm to cryoprotective solutions based on dimethylsufoxide and methylglicol

This study aimed to determine the semen characteristics of Astyanax lacustris after hormonal induction and to evaluate the sensitivity of the species sperm to cryoprotective solutions based on the cryoprotectants dimethyl sulfoxide and methyl glycol. Volume, color, sperm concentration, total motility and aspects of sperm movement were analyzed using "Integrated Semen Analysis System". Three different extenders were tested: A) glucose 5%+egg yolk 10%, B) BTS®5% and C) glucose 5% and two permeable cryoprotectants: dimethyl sulfoxide (Me2SO) and methyl glycol (MTG). Fresh A. lacustris semen presented total motility of 76.6±11.2%, motility duration of 33.0±2.2s, sperm concentration of 7.22±3.2×109sptz/mL and seminal osmolality of 219±0.03mOsm/kg-1. The toxicity test showed the highest total motility values at the MTG15%+A, Me2SO15%+B and Me2SO10%+C dilutions, and the Me2SO10%+C and Me2SO15%+C dilutions presented the highest values for curvilinear velocity, linear velocity and average velocity. The tested protocol was not effective at maintaining the viability of A. lacustris semen after freezing because no motility was observed in any of the dilutions. However, the Comet Assay demonstrated that cryoprotectant solutions were effective in protecting the genetic material of cells, as DNA damage levels were low, with no difference between control and Me2SO10% + A, dilutions MTG10%+C, Me2SO10%+B and Me2SO15%+B.(AU)

O objetivo deste estudo foi determinar as características do sêmen de Astyanax lacustris após indução hormonal e avaliar a sensibilidade dos espermatozoides da espécie a soluções crioprotetoras baseadas nos crioprotetores dimetilsulfóxido e metilglicol. Volume, cor, concentração espermática, motilidade total e aspectos do movimento espermático foram analisados usando o "Sistema Integrado de Análise de Sêmen (ISAS®CASA)". Três extensores diferentes foram testados: A) glicose 5%+gema de ovo 10%, B) BTS® 5% e C) glicose 5% e dois crioprotetores permeáveis: dimetilsulfóxido (Me2SO) e metilglicol (MTG). O sêmen fresco de A. lacustris apresentou motilidade total 76,6±11,2%, duração da motilidade 33,0±2,2s, concentração de espermatozoides 7,22±3,2×109sptz/mL e osmolalidade seminal 219±0,03mOsm/kg-1. O teste de toxicidade apresentou maiores valores de motilidade total nas diluições MTG15%+A, Me2SO15%+B e Me2SO10%+C, e as diluições Me2SO10%+C e Me2SO15%+C apresentaram maiores valores de velocidade curvilínea, velocidade linear e velocidade média. O protocolo testado não foi eficaz em manter a viabilidade do sêmen de A. lacustris pós-congelamento, pois não foi observada motilidade em nenhuma das diluições. No entanto, o Ensaio Cometa demonstrou que as soluções crioprotetoras eram eficazes na proteção do material genético das células, pois os níveis de dano ao DNA eram baixos, sem diferença entre controle e Me2SO10%+A, MTG10%+C, Me2SO10%+B e Me2SO15%+B.(AU)

Seminal characteristics and sensitivity of Astyanax lacustris (Characiformes: Characidae) sperm to cryoprotective solutions based on dimethylsufoxide and methylglicol

This study aimed to determine the semen characteristics of Astyanax lacustris after hormonal induction and to evaluate the sensitivity of the species sperm to cryoprotective solutions based on the cryoprotectants dimethyl sulfoxide and methyl glycol. Volume, color, sperm concentration, total motility and aspects of sperm movement were analyzed using "Integrated Semen Analysis System". Three different extenders were tested: A) glucose 5%+egg yolk 10%, B) BTS®5% and C) glucose 5% and two permeable cryoprotectants: dimethyl sulfoxide (Me2SO) and methyl glycol (MTG). Fresh A. lacustris semen presented total motility of 76.6±11.2%, motility duration of 33.0±2.2s, sperm concentration of 7.22±3.2×109sptz/mL and seminal osmolality of 219±0.03mOsm/kg-1. The toxicity test showed the highest total motility values at the MTG15%+A, Me2SO15%+B and Me2SO10%+C dilutions, and the Me2SO10%+C and Me2SO15%+C dilutions presented the highest values for curvilinear velocity, linear velocity and average velocity. The tested protocol was not effective at maintaining the viability of A. lacustris semen after freezing because no motility was observed in any of the dilutions. However, the Comet Assay demonstrated that cryoprotectant solutions were effective in protecting the genetic material of cells, as DNA damage levels were low, with no difference between control and Me2SO10% + A, dilutions MTG10%+C, Me2SO10%+B and Me2SO15%+B.(AU)

O objetivo deste estudo foi determinar as características do sêmen de Astyanax lacustris após indução hormonal e avaliar a sensibilidade dos espermatozoides da espécie a soluções crioprotetoras baseadas nos crioprotetores dimetilsulfóxido e metilglicol. Volume, cor, concentração espermática, motilidade total e aspectos do movimento espermático foram analisados usando o "Sistema Integrado de Análise de Sêmen (ISAS®CASA)". Três extensores diferentes foram testados: A) glicose 5%+gema de ovo 10%, B) BTS® 5% e C) glicose 5% e dois crioprotetores permeáveis: dimetilsulfóxido (Me2SO) e metilglicol (MTG). O sêmen fresco de A. lacustris apresentou motilidade total 76,6±11,2%, duração da motilidade 33,0±2,2s, concentração de espermatozoides 7,22±3,2×109sptz/mL e osmolalidade seminal 219±0,03mOsm/kg-1. O teste de toxicidade apresentou maiores valores de motilidade total nas diluições MTG15%+A, Me2SO15%+B e Me2SO10%+C, e as diluições Me2SO10%+C e Me2SO15%+C apresentaram maiores valores de velocidade curvilínea, velocidade linear e velocidade média. O protocolo testado não foi eficaz em manter a viabilidade do sêmen de A. lacustris pós-congelamento, pois não foi observada motilidade em nenhuma das diluições. No entanto, o Ensaio Cometa demonstrou que as soluções crioprotetoras eram eficazes na proteção do material genético das células, pois os níveis de dano ao DNA eram baixos, sem diferença entre controle e Me2SO10%+A, MTG10%+C, Me2SO10%+B e Me2SO15%+B.(AU)

Uso do DMSO a 3% e diferentes concentrações de glicerol na curva de resfriamento do sêmen suíno / Use of 3% DMSO and different glycerol concentrations in the swine semen cooling curve

Este trabalho teve como objetivo testar o crioprotetor Dimetilsulfóxido (DMSO-3%) e o glicerol, em cinco concentrações (0,5%, 1%, 3%, 5% e 7%) em uma nova curva de resfriamento. Foram feitas sete coletas de sete varrões (n=49) através da técnica da mão enluvada. O DMSO (3%) e o glicerol foram adicionados separadamente ao diluente de congelação. Durante a análise da curva, a menor média de vigor espermático foi observada à concentração de 7% de glicerol. Na concentração de 1% de glicerol obteve-se maior média de motilidade espermática (72±12,3), sem diferença em relação à concentração de 5%. Maiores médias de vigor e motilidade espermática pós-descongelação foram observadas a3% de glicerol, diferindo das concentrações de 0,5% de glicerol e 3% de DMSO quanto ao vigor e dos demais tratamentos quanto à motilidade espermática. No teste de resistência osmótica o glicerol a 3% como diluente de congelação proporcionou melhor proteção à membrana espermática, diferindo dos demais tratamentos, exceto do DMSO a 3% e glicerola 1%. Observou-se maior porcentagem de células vivas na concentração de 5% e 7% de glicerol, diferindo das demais concentrações. Já o maior percentual de espermatozoides com acrossomas intactos foi observado quando se utilizou o diluente de congelação contendo glicerol a 3% (73,8±11,9). Os resultados do presente estudo, sugeriram que o glicerol, ainda é a melhor opção de crioprotetor a ser utilizada nos processos de criopreservação do espermatozoide suíno.

This study aimed to test the cryoprotectant Dimethylsulfoxide (DMSO-3%) and glycerol, in five concentrations (0.5%, 1%, 3%, 5% and 7%) in a new cooling curve. Seven collections from seven boars (n=49) through the gloved hand technique were made. DMSO (3%) and glycerol were added separately to the freezing diluent. During the analysis of the curve, the lowest mean sperm count was observed at a concentration of 7% glycerol. The concentration of 1% glycerol obtained more sperm motility (72±12.3) but, did not differ in concentrations of 5% glycerol. Higher mean sperm motility and vigor after thawing were observed at 3%glycerol, differing from 0.5% glycerol and 3% DMSO concentrations regarding vigor and other treatments regarding sperm motility. In the osmotic resistance test, 3% glycerol as a freezing agent provided better protection to the spermatic membrane, differing from the other treatments except for 3% DMSO and 1% glycerol. A higher percentage of living cells was observed in the 5% and 7% glycerol concentration, differing from the other concentrations. The highest percentage of spermatozoa with intact acrosomes was observed when the freezing diluent containing 3% glycerol (73.8±11.9) was used. The results of this study suggested that glycerol is still the best cryoprotective option to be used in cryopreservation processes of swine sperm.

Uso do DMSO a 3% e diferentes concentrações de glicerol na curva de resfriamento do sêmen suíno / Use of 3% DMSO and different glycerol concentrations in the swine semen cooling curve

Este trabalho teve como objetivo testar o crioprotetor Dimetilsulfóxido (DMSO-3%) e o glicerol, em cinco concentrações (0,5%, 1%, 3%, 5% e 7%) em uma nova curva de resfriamento. Foram feitas sete coletas de sete varrões (n=49) através da técnica da mão enluvada. O DMSO (3%) e o glicerol foram adicionados separadamente ao diluente de congelação. Durante a análise da curva, a menor média de vigor espermático foi observada à concentração de 7% de glicerol. Na concentração de 1% de glicerol obteve-se maior média de motilidade espermática (72±12,3), sem diferença em relação à concentração de 5%. Maiores médias de vigor e motilidade espermática pós-descongelação foram observadas a3% de glicerol, diferindo das concentrações de 0,5% de glicerol e 3% de DMSO quanto ao vigor e dos demais tratamentos quanto à motilidade espermática. No teste de resistência osmótica o glicerol a 3% como diluente de congelação proporcionou melhor proteção à membrana espermática, diferindo dos demais tratamentos, exceto do DMSO a 3% e glicerola 1%. Observou-se maior porcentagem de células vivas na concentração de 5% e 7% de glicerol, diferindo das demais concentrações. Já o maior percentual de espermatozoides com acrossomas intactos foi observado quando se utilizou o diluente de congelação contendo glicerol a 3% (73,8±11,9). Os resultados do presente estudo, sugeriram que o glicerol, ainda é a melhor opção de crioprotetor a ser utilizada nos processos de criopreservação do espermatozoide suíno.(AU)

This study aimed to test the cryoprotectant Dimethylsulfoxide (DMSO-3%) and glycerol, in five concentrations (0.5%, 1%, 3%, 5% and 7%) in a new cooling curve. Seven collections from seven boars (n=49) through the gloved hand technique were made. DMSO (3%) and glycerol were added separately to the freezing diluent. During the analysis of the curve, the lowest mean sperm count was observed at a concentration of 7% glycerol. The concentration of 1% glycerol obtained more sperm motility (72±12.3) but, did not differ in concentrations of 5% glycerol. Higher mean sperm motility and vigor after thawing were observed at 3%glycerol, differing from 0.5% glycerol and 3% DMSO concentrations regarding vigor and other treatments regarding sperm motility. In the osmotic resistance test, 3% glycerol as a freezing agent provided better protection to the spermatic membrane, differing from the other treatments except for 3% DMSO and 1% glycerol. A higher percentage of living cells was observed in the 5% and 7% glycerol concentration, differing from the other concentrations. The highest percentage of spermatozoa with intact acrosomes was observed when the freezing diluent containing 3% glycerol (73.8±11.9) was used. The results of this study suggested that glycerol is still the best cryoprotective option to be used in cryopreservation processes of swine sperm.(AU)

Avaliação morfológica do concentrado autólogo de plaquetas em cães sob refrigeração e criopreservação em DMSO 6% / [Morphological evaluation of the autologous platelet concentrate in dogs under refrigeration and criopreservation in 6% DMSO]

The morphological characteristics of the autologous platelet concentrate (APC) of 31 dogs were evaluated after cooling and freezing in 6% DMSO. Blood from the jugular vein of each patient was collected and centrifuged at 191g for six minutes to obtain APC. In the fresh sample, the platelet count, MPV, PDW and cell morphology were evaluated. Four samples of each animal were sent for storage, one refrigerated at 4°C for seven days, another for 30 days and two more stored in a freezer at -80°C in the same time interval, using 6% DMSO as cryoprotectant. The conserved samples were submitted to the same laboratory analysis as the fresh sample. There was a difference between fresh and preserved samples for platelet count, cell concentration, MPV and PDW (P<0.05), except in the 30-day refrigerated group, which showed severe morphological changes. In the frozen group for seven days, no difference was observed in the percentage of activation (P>0.05). The results obtained lead to the conclusion that cryopreservation with 6% DMSO at -80°C for seven days is a favorable option for the maintenance of platelet concentrations and the morphological characteristics of APC in dogs.(AU)

BPA toxicity during development of zebrafish embryo

Abstract Bisphenol A (BPA) is a monomer used in the production of polycarbonate, a polymer commonly found in plastics, epoxy resins and thermal papers. The presence of BPA in food, water, air and dust has been of great concern in recent years not only due to environmental and ecological issues but also because of its supposed risk to public health related to its mutagenic and carcinogenic potential. In this study we evaluated the toxicity of bisphenol A in zebrafish embryos (Danio rerio) and determined the 50% lethal concentration (LC50) of this chemical. BPA was used at concentrations ranging from 1 M to 100 M in E3 medium/0.5% dimethylsulfoxide (DMSO) from previously prepared stock solutions in 100% DMSO. Controls included embryos exposed only to E3 medium or supplemented with 0.5% DMSO. Camptothecin (CPT), a known inhibitor of cell proliferation was used as positive control at a concentration of 0.001 M in E3 medium/0.5% DMSO. Adults zebrafish were placed for breeding a day before the experimental set up, then, viable embryos were collected and selected for use. Experiments were carried out in triplicates, according to specifications from Organization for Economic Cooperation and Development (OECD). One embryo/well (25 embryos per concentration) was distributed in 96 well microplates in presence or absence of the chemicals. The plates were kept in BOD incubators with a controlled temperature of 28.5 ºC and with photoperiod of 14 h light:10 h dark. After 24h, 48h, 72h and 96h exposure, the exposed embryos were evaluated according to the following parameters: mortality, coagulation, rate of heartbeat, hatching and presence of morphological abnormalities. Photography was obtained by photomicroscopy. Apoptosis was evaluated by DNA ladder assay. DNA was extracted by phenol:chloroform method and analyzed by 2% agarose gel electrophoresis. DNA fragments were visualized after ethidium bromide staining in ultraviolet transilluminator. The LC50 determined for BPA was 70 M after 24 hours, 72 M after 48 hours, 47 M after 72 hours and 31 M after 96 hours exposure. BPA induced morphological and physiological alterations such as yolk sac and pericardial edema, hatching delay or inhibition, spine deformation, decreasing in heartbeat rate and mortality. In conclusion, this study demonstrated that BPA induced marked malformations in zebrafish embryos at concentrations above 25 M corroborating the current concerns related to the widespread presence of BPA in the air, food and water used by humans as well as in the bodily fluids and tissues.

Resumo Bisfenol A (BPA) é um monômero utilizado na produção de policarbonato, um polímero comumente encontrado em plásticos, resinas epóxi e papéis térmicos. A presença de BPA em alimentos, água, ar e poeira tem sido motivo de grande preocupação nos últimos anos, não só devido a questões ambientais e ecológicas, mas também ao suposto risco para a saúde pública relacionado ao seu potencial mutagênico e carcinogênico. Neste estudo avaliamos a toxicidade do bisfenol A em embriões de peixe-zebra (Danio rerio) e determinamos a concentração letal 50% (LC50) deste composto químico. O BPA foi usado na faixa de concentração entre 1 M e 100M em meio E3/0,5% de dimetilsulfóxido (DMSO), preparado a partir de soluções estoques em 100% DMSO. Os controles negativos incluíram embriões expostos apenas ao meio E3 ou suplementado com 0,5% DMSO. Camptotecina (CPT), um conhecido inibidor da proliferação celular, foi usado como controle positivo a uma concentração de 0,001 M em meio E3/0,5% DMSO. Peixes-zebra adultos foram colocados para reprodução um dia antes da montagem experimental, em seguida, embriões viáveis foram coletados e selecionados para uso. Os experimentos foram realizados em triplicata, de acordo com as especificações da Organização para Cooperação e Desenvolvimento Econômico (OCDE). Um embrião/ poço (25 embriões por concentração) foi distribuído em microplacas de 96 poços na presença ou ausência dos compostos químicos. As placas foram mantidas em incubadoras BOD com temperatura controlada de 28,5 ºC e com fotoperíodo de 14h claro:10h escuro. Após 24h, 48h, 72h e 96h, os embriões expostos foram avaliados de acordo com os seguintes parâmetros: mortalidade, presença de coagulação, taxa do batimento cardíaco, eclosão e presença de anormalidades morfológicas. Fotografias foram obtidas por fotomicroscopia. A apoptose foi avaliada pelo ensaio de DNA ladder. O DNA foi extraído pelo método fenol:clorofórmio e analisado por eletroforese em gel de agarose a 2%. Fragmentos de DNA foram visualizadas após coloração com brometo de etídio em um transiluminador ultravioleta. A LC50 determinada para o BPA foi 70 M após 24 horas, 72 M após 48 horas, 47 M após 72 horas e 31 M após exposição por 96 horas. O BPA induziu alterações morfológicas e fisiológicas como edema de saco vitelino e edema pericárdico, atraso no tempo ou inibição da eclosão, deformação da coluna vertebral, diminuição da taxa de batimentos cardíacos e mortalidade. Em conclusão, este estudo demonstrou que o BPA induziu grande número de malformações em embriões de peixe-zebra em concentrações acima de 25 M, corroborando as preocupações atuais relacionadas a presença generalizada do BPA no ar, alimento e água usados pelos seres humanos bem como nos fluidos e tecidos corporais.

Efeito do DMSO e glicerol na criopreservação de células tronco mesenquimais derivadas de líquido amniótico de fetos caprinos / Effect of DMSO and glycerol in criopreservation of mesenquimial trunk cells derived from amniotic fluid of caprine fetus

O objetivo do estudo foi avaliar a viabilidade e taxa de proliferação de células-tronco mesenquimais (CTMs) derivadas do líquido amniótico (LA) após cultivo in vitro, e o efeito de dois agentes crioprotetores. Foram utilizadas 9 cabras prenhes. As amostras foram colhidas de fetos caprinos por laparotomia, e delas obtidos as (CTMs) e submetidas ao cultivo in vitro. Posteriormente, uma fração das células foi criopreservada em meio DMSO (dimetilsulfóxido) ou glicerol e vitrificadas para posterior avaliação da viabilidade. O meio DMSO promoveu melhores taxas de sobrevida celular preservando as características de pluripotencialidade e de replicação in vitro.

The objective of the study was to evaluate the viability and proliferation rate of mesenchymal stem cells (MTCs) derived from amniotic fluid (LA) after in vitro culture, and the effect of two cryoprotective agents. 9 pregnant goats were used. The samples were collected from goat fetuses by laparotomy, and from them (CTMs) were obtained and cultured in vitro. Subsequently, a fraction of the cells were cryopreserved in DMSO (dimethylsulfoxide) or glycerol medium and vitrified for further evaluation of viability. The DMSO medium promoted better cell survival rates while preserving the characteristics of pluripotency and replication in vitro.

Efeito do DMSO e glicerol na criopreservação de células tronco mesenquimais derivadas de líquido amniótico de fetos caprinos / Effect of DMSO and glycerol in criopreservation of mesenquimial trunk cells derived from amniotic fluid of caprine fetus

O objetivo do estudo foi avaliar a viabilidade e taxa de proliferação de células-tronco mesenquimais (CTMs) derivadas do líquido amniótico (LA) após cultivo in vitro, e o efeito de dois agentes crioprotetores. Foram utilizadas 9 cabras prenhes. As amostras foram colhidas de fetos caprinos por laparotomia, e delas obtidos as (CTMs) e submetidas ao cultivo in vitro. Posteriormente, uma fração das células foi criopreservada em meio DMSO (dimetilsulfóxido) ou glicerol e vitrificadas para posterior avaliação da viabilidade. O meio DMSO promoveu melhores taxas de sobrevida celular preservando as características de pluripotencialidade e de replicação in vitro.(AU)

The objective of the study was to evaluate the viability and proliferation rate of mesenchymal stem cells (MTCs) derived from amniotic fluid (LA) after in vitro culture, and the effect of two cryoprotective agents. 9 pregnant goats were used. The samples were collected from goat fetuses by laparotomy, and from them (CTMs) were obtained and cultured in vitro. Subsequently, a fraction of the cells were cryopreserved in DMSO (dimethylsulfoxide) or glycerol medium and vitrified for further evaluation of viability. The DMSO medium promoted better cell survival rates while preserving the characteristics of pluripotency and replication in vitro.(AU)

Capacidade fecundante do sêmen congelado de Prochilodus brevis / Fertilizing capacity of the cryopreserved sperm of Prochilodus brevis

Background: Seminal cryopreservation is a technique that optimizes aquacultural production, as it requires less breedingand enables reproduction outside of the breeding season. This technique also helps to preserve species, thus reducing thepressure on the natural stocks. Several studies have sought to develop freezing protocols that result in semen of a goodquality. However, some studies do not evaluate the ability of frozen semen to produce viable larvae. Therefore, the aimof this study was to verify the fertilizing capacity of the frozen semen of Prochilodus brevis.Materials, Methods & Results: Semen from twenty adult males of the Brazilian bocachico was collected and evaluatedto establish the total motility, curvilinear velocity, straight linear velocity, average path velocity, membrane integrity, pH,and concentration. Six pools were formed, each of which was diluted in a freezing medium containing 5% glucose with10% dimethyl sulfoxide (DMSO) or 5% glucose with 10% methyl glycol (MG). The samples were loaded into 0.25 mLFrench straws, frozen in a dry shipper, and stored in a liquid nitrogen canister. The semen was then thawed and evaluatedto establish the total motility, curvilinear velocity, straight linear velocity, average path velocity, and membrane integrity.For the fertilization test, four females were used. The oocytes from each female were divided into three batches and fertilized with either fresh or cryopreserved semen. The rates of fertilization, hatching, and larval survival were then measured.Data were expressed as the mean ± standard deviation and analyzed using SAS (2002). The frozen semen with glucose +DMSO was significantly higher (P < 0.001) than the frozen semen with glucose + MG, in all seminal quality parametersevaluated (63.95 ± 15.88% and 25.36 ± 3.53% for the motility, 36.38 ± 7.02 μm.s-1 and 20.45 ± 2.84 μm.s-1 for the curvilinear velocity, 19.26 ± 2.74 μm.s-1 and...

Capacidade fecundante do sêmen congelado de Prochilodus brevis / Fertilizing capacity of the cryopreserved sperm of Prochilodus brevis

Background: Seminal cryopreservation is a technique that optimizes aquacultural production, as it requires less breedingand enables reproduction outside of the breeding season. This technique also helps to preserve species, thus reducing thepressure on the natural stocks. Several studies have sought to develop freezing protocols that result in semen of a goodquality. However, some studies do not evaluate the ability of frozen semen to produce viable larvae. Therefore, the aimof this study was to verify the fertilizing capacity of the frozen semen of Prochilodus brevis.Materials, Methods & Results: Semen from twenty adult males of the Brazilian bocachico was collected and evaluatedto establish the total motility, curvilinear velocity, straight linear velocity, average path velocity, membrane integrity, pH,and concentration. Six pools were formed, each of which was diluted in a freezing medium containing 5% glucose with10% dimethyl sulfoxide (DMSO) or 5% glucose with 10% methyl glycol (MG). The samples were loaded into 0.25 mLFrench straws, frozen in a dry shipper, and stored in a liquid nitrogen canister. The semen was then thawed and evaluatedto establish the total motility, curvilinear velocity, straight linear velocity, average path velocity, and membrane integrity.For the fertilization test, four females were used. The oocytes from each female were divided into three batches and fertilized with either fresh or cryopreserved semen. The rates of fertilization, hatching, and larval survival were then measured.Data were expressed as the mean ± standard deviation and analyzed using SAS (2002). The frozen semen with glucose +DMSO was significantly higher (P < 0.001) than the frozen semen with glucose + MG, in all seminal quality parametersevaluated (63.95 ± 15.88% and 25.36 ± 3.53% for the motility, 36.38 ± 7.02 μm.s-1 and 20.45 ± 2.84 μm.s-1 for the curvilinear velocity, 19.26 ± 2.74 μm.s-1 and...(AU)

Combination of ethylene glycol with sucrose increases survival rate after vitrification of somatic tissue of collared peccaries (Pecari tajacu Linnaeus, 1758)

ABSTRACT: The cryopreservation of somatic tissue in collared peccaries promotes an alternative source of genetic material of this specie. The solid-surface vitrification (SSV) is a great option for tissue conservation; nevertheless, the optimization of SSV requirements is necessary, especially when referred to cryoprotectants that will compose the vitrification solution. Therefore, the aim was to evaluate the effect of the presence of 0.25 M sucrose in addition to different combinations (only or association) and concentrations (1.5 M or 3.0 M) of ethylene glycol (EG) and/or dimethyl sulfoxide (DMSO) in the somatic tissue vitrification of collared peccaries. Subsequently, we tested six combinations of cryoprotectants with or without sucrose in Dulbecco modified Eagle medium (DMEM) plus 10% fetal bovine serum (FBS). Thus, 3.0 M EG with sucrose was able to maintain normal tissue characteristics compared with non-vitrified (control), especially for the volumetric ratio of epidermis (61.2 vs. 58.7%) and dermis (34.5 vs. 36.6%), number of fibroblast (90.3 vs. 127.0), argyrophilic nucleolar organizer region (AgNOR) ratio (0.09 vs. 0.17%) and nucleus area (15.4 vs. 14.5 m2) respectively. In conclusion, 3.0 M EG with 0.25 M sucrose and 10% FBS resulted in a better cryoprotectant composition in the SSV for somatic tissue of collared peccaries.

RESUMO: A criopreservação de tecido somático em catetos promove uma fonte alternativa de material genético nesta espécie. A vitrificação em superfície sólida (VSS) é uma ótima opção para a conservação do tecido; contudo, a otimização dos requerimentos da VSS é necessária, especialmente quanto aos crioprotetores que irão compor a solução de vitrificação. Portanto, o objetivo foi avaliar o efeito da presença de 0,25 M de sacarose em adição com diferentes combinações (individual ou associação) e concentrações (1,5 M ou 3,0 M) de etilenoglicol (EG) e/ou dimetilsulfóxido (DMSO) na vitrificação de tecido somático de catetos. Subsequentemente, nós testamos seis combinações de crioprotetores com ou sem sacarose em meio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) acrescido de 10% de soro fetal bovino (SFB). Assim, 3,0 M de EG com sacarose foi capaz de manter as características normais do tecido comparado com o não vitrificado (controle), especialmente para a proporção volumétrica da epiderme (61,2 vs. 58,7%) e derme (34,5 vs. 36,6%), número de fibroblastos (90,3 vs. 127,0), razão da região argirófila organizadora de nucléolo (AgNOR) (0,09 vs. 0,17%) e área do núcleo (15,4vs.14,5 m2), respectivamente. Em conclusão, 3,0 M de EG com 0,25 M de sacarose e 10% de SFB resultaram na melhor composição de crioprotetores na VSS para tecido somático de catetos.

Combination of ethylene glycol with sucrose increases survival rate after vitrification of somatic tissue of collared peccaries (Pecari tajacu Linnaeus, 1758) / Combinação de etilenoglicol com sacarose aumenta a taxa de sobrevivência após a vitrificação de tecido somático de catetos (Pecari tajacu Linnaeus, 1758)

The cryopreservation of somatic tissue in collared peccaries promotes an alternative source of genetic material of this specie. The solid-surface vitrification (SSV) is a great option for tissue conservation; nevertheless, the optimization of SSV requirements is necessary, especially when referred to cryoprotectants that will compose the vitrification solution. Therefore, the aim was to evaluate the effect of the presence of 0.25 M sucrose in addition to different combinations (only or association) and concentrations (1.5 M or 3.0 M) of ethylene glycol (EG) and/or dimethyl sulfoxide (DMSO) in the somatic tissue vitrification of collared peccaries. Subsequently, we tested six combinations of cryoprotectants with or without sucrose in Dulbecco modified Eagle medium (DMEM) plus 10% fetal bovine serum (FBS). Thus, 3.0 M EG with sucrose was able to maintain normal tissue characteristics compared with non-vitrified (control), especially for the volumetric ratio of epidermis (61.2 vs. 58.7%) and dermis (34.5 vs. 36.6%), number of fibroblast (90.3 vs. 127.0), argyrophilic nucleolar organizer region (AgNOR) ratio (0.09 vs. 0.17%) and nucleus area (15.4 vs. 14.5 µm2) respectively. In conclusion, 3.0 M EG with 0.25 M sucrose and 10% FBS resulted in a better cryoprotectant composition in the SSV for somatic tissue of collared peccaries.(AU)

A criopreservação de tecido somático em catetos promove uma fonte alternativa de material genético nesta espécie. A vitrificação em superfície sólida (VSS) é uma ótima opção para a conservação do tecido; contudo, a otimização dos requerimentos da VSS é necessária, especialmente quanto aos crioprotetores que irão compor a solução de vitrificação. Portanto, o objetivo foi avaliar o efeito da presença de 0,25 M de sacarose em adição com diferentes combinações (individual ou associação) e concentrações (1,5 M ou 3,0 M) de etilenoglicol (EG) e/ou dimetilsulfóxido (DMSO) na vitrificação de tecido somático de catetos. Subsequentemente, nós testamos seis combinações de crioprotetores com ou sem sacarose em meio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) acrescido de 10% de soro fetal bovino (SFB). Assim, 3,0 M de EG com sacarose foi capaz de manter as características normais do tecido comparado com o não vitrificado (controle), especialmente para a proporção volumétrica da epiderme (61,2 vs. 58,7%) e derme (34,5 vs. 36,6%), número de fibroblastos (90,3 vs. 127,0), razão da região argirófila organizadora de nucléolo (AgNOR) (0,09 vs. 0,17%) e área do núcleo (15,4vs.14,5 µm2), respectivamente. Em conclusão, 3,0 M de EG com 0,25 M de sacarose e 10% de SFB resultaram na melhor composição de crioprotetores na VSS para tecido somático de catetos.(AU)