Relationships between antral follicle counts and ovarian morphology of Bos indicus of different ages / Relações entre a contagem de folículos antrais e a morfologia ovariana de Bos indicus de diferentes idades

This study aimed to evaluate the relationship between the antral follicle count (AFC) and the ovarian morphology of Bos indicus in different age groups: 12-23 months (G1), 24-35 months (G2), 36-47 months (G3), 48-59 months (G4), and >60 months (G5). Ovaries were collected individually and sent to the laboratory, where we measured AFC, the diameter and weight of the ovaries, dominant follicle (DF, >8mm), corpus luteum (CL), and small follicles (SF, <8mm). AFC were classified as high, intermediate-high, intermediate-low, and low. A group of ovaries was subjected to follicular aspiration to evaluate the morphological quality of the recovered cumulus oocyte complexes (COCs). Mean AFC did not vary between ages. The morphological characteristic that was most closely correlated with AFC was the weight of the small follicles. There was no relationship between AFC and the weight and diameter of the DF and CL. Quality of the COCs was superior in ovaries in which the CL was present, but it did not vary between the AFC classes. We conclude that AFC can be performed on a single ovary, regardless of the presence, diameter, and weight of the CL and DF in zebu between 12 and 60 months old.

O presente estudo teve como objetivo avaliar a relação entre a contagem de folículos antrais (CFA) e a morfologia ovariana de Bos indicus em diferentes faixas etárias: 12-23 meses (G1), 24-35 meses (G2), 36-47 meses (G3), 48-59 meses (G4) e >60 meses (G5). Os ovários foram coletados individualmente e enviados ao laboratório, onde suas características morfológicas foram medidas: CFA, diâmetro e peso dos ovários, do folículo dominante (FD, ≥8 mm), do corpo lúteo (CL) e dos folículos pequenos (SF, <8 mm). A CFA foi classificada como alta, intermediária-alta, intermediária-baixa e baixa. Um grupo de ovários foi submetido à aspiração folicular para avaliar a qualidade morfológica dos complexos cumulus oócitos (COCs) recuperados. A CFA média não variou entre as idades. A característica morfológica que se correlacionou mais intimamente com a CFA foi o peso dos folículos pequenos. Não houve relação entre a CFA e o peso e o diâmetro do FD e do CL. A qualidade dos COCs foi superior em ovários em que o CL estava presente, mas não variou entre as classes de CFA. Concluiu-se que a CFA pode ser realizada em um único ovário, independentemente da presença, do diâmetro e do peso do CL e do FD em zebuínos entre 12 e 60 meses de vida.

DESEMPENHO PRODUTIVO E PERFIL METABÓLICO DE VACAS PRIMÍPARAS F1 HOLANDÊS X GIR E SUA RELAÇÃO COM A REPRODUÇÃO

Este trabalho foi realizado com os seguintes objetivos: a) descrever o perfil metabólico de vacas primíparas F1 Holandês x Gir criadas em sistema de confinamento total, durante o período de transição. Para o estudo foram utilizadas 29 novilhas mestiças F1 Holandês x Gir (HG) diagnosticadas gestantes. O escore de condição corporal foi acompanhado no pré e no pós-parto. Foram realizadas coletas de sangue semanalmente nos dias -21, -14 e -7 do pré-parto, no dia do parto (D0), e nos dias 7, 14 e 21 após o parto para análises de glicose e ureia, e nos dias -7 pré-parto, e 7, 14 e 21 dias pós-parto para análises de ácidos graxos não esterificados e beta-hidroxibutirato. O escore de condição corporal foi maior na última semana antes do parto (3,9 ± 0,19) e diferiu para os dias 7, 14 e 21 após o parto, que foram de 3,70 ± 0,20; 3,67 ± 0,27 e 3,8 ± 0,22 respectivamente. Todavia, o escore de condição corporal não diferiu entre os dias pós-parto, nos primeiros 21 dias de lactação. As concentrações de glicose foram semelhantes tanto no período do pré-parto quanto no pós-parto. As concentrações de ureia se mantiveram sem alterações desde o pré-parto até o pós-parto com exceção ao dia 7 após o parto, em que foi observada uma queda nas concentrações. Para o beta-hidroxibutirato as concentrações foram aumentando desde o pré-parto até o dia 21 após o parto. Foi evidenciada redução nas concentrações dos ácidos graxos não esterificados desde o pré-parto até os dias 21 após o parto; b) a descrição do perfil metabólico no sangue e no fluido folicular e a sua correlação com a qualidade dos oócitos aspirados, em diferentes períodos após o parto, de vacas lactantes primíparas F1 Holandês x Gir. Aspirações foliculares guiadas por ultrassom, via transvaginal, para coleta de oócitos foram realizadas nos dias 30 ± 2, 60 ± 2 e 100 ± 2 após o parto. Nos mesmos dias das coletas dos oócitos, sangue e fluido folicular do folículo dominante foram coletados para dosagens de glicose, ácidos graxos não esterificados (NEFA), beta-hidroxibutirato (BHBA) e ureia. No laboratório, foi verificada a taxa de recuperação de oócitos, maturação in vitro e apoptose por meio da técnica de TUNEL. A concentração média de glicose no dia 30 pós-parto foi superior no fluido folicular quando comparada com o plasma sanguíneo, porém, nos dias 60 e 100 após o parto não houve diferença entre as concentrações de glicose. As concentrações de ureia no plasma e no fluido folicular não diferiram entre os dias 30, 60 e 100, porém, foi verificado que as concentrações médias de uréia no fluido folicular foram significativamente inferiores às do plasma sanguíneo. Para BHBA, não foi observada diferença entre as concentrações do fluido folicular e o soro sanguíneo entre os dias 30, 60 e 100 após o parto. As concentrações de NEFA não diferiram no soro sanguíneo e o fluido folicular nos dias 30,60 e 100 pós-parto. Não houve diferença na taxa de recuperação de oócitos entre os tempos de coleta, porém, foi observado que as coletas realizadas nos dias 30 e 60 apresentaram menor percentual de oócitos viáveis, quando comparado com as coletas do dia 100. Não foi observada diferença na negatividade do TUNEL entre os tempos analisados, porém, foi evidenciado que oócitos coletados no dia 30 pós-parto apresentaram maior percentual de maturação em relação aos coletados no dia 100 (55,2 ± 4,9 vs 23,8 ± 4,5); c) avaliar as diferenças na produção e composição do leite, e nas medidas ponderais de vacas leiteiras primíparas F1 Holandês x Gir mantidas em sistema de confinamento total, pertencentes a três grupos de eficiência produtiva. Variáveis analisadas após o parto como o consumo de matéria seca, produção de leite total, produção de leite corrigida para gordura a 3,5%, produção de leite corrigida para 305 dias, produção de leite diária, foram maiores para as vacas de alta eficiência. Vacas pertencentes ao grupo de baixa eficiência após o parto tiveram maior ganho de peso e consequentemente maior escore de condição corporal quando comparada com as vacas de eficiência intermediária e alta eficiência. Percentual de gordura no leite foi maior para vacas com baixa eficiência do que para vacas com eficiência intermediária e alta eficiência. A proteína do leite foi igual para vacas com baixa eficiência e vacas com alta eficiência, porém foi diferente para vacas com eficiência intermediária. Lactose e nitrogênio ureico no leite foram menores para vacas com baixa eficiência do que para vacas com alta eficiência. A contagem de células somáticas durante a lactação foi igual para vacas de alta eficiência e vacas de baixa eficiência, porém as vacas com eficiência intermediária tiveram menor contagem de células somáticas.

This work was carried out with the following objectives: a) to describe the metabolic profile of primiparous F1 Holstein x Gyr cows raised in a free stall barn system during the period of transition. The bodily condition score was monitored before and after birth. Blood was collected weekly on the -21th, -14th and -7th day before birth, on the birth day (D0) and on the 7th, 14th and 21st days for glucose and urea analysis, and on the -7th day before birth and 7th, 14th and 21st days after birth for non-esterified fatty acid and beta-hydroxybutyrate analysis. The bodily condition score was greater on the last week before birth (3.9 ± 0.19) and differed to the 7th, 14th and 21st days after birth that showed a score of 3.70 ± 0.20; 3.67 ± 0.27 and 3.8 ± 0.22 respectively. Furthermore, the bodily condition score did not differ among the days after birth, on the first 21 days of lactation. The glucose concentrations were similar in both before and after birth days. The urea concentrations maintained unaltered from before birth to after birth except for the 7th day after birth where a decrease in the concentrations was evidenced. For the beta-hydroxybutyrate the concentrations increased gradually from before birth until the 21st day after birth. The concentrations of the non-esterified fatty acids decreased from before birth until the 21st day after birth; b) to describe the blood metabolic profile, the follicular fluid and its correlation with the quantity of aspired oocytes in different periods after birth in primiparous F1 Holstein x Gyr cows in lactation. Oocyte collections were made using a technique of follicular aspiration guided by transvaginal ultrasound on the days 30 ± 2, 60 ± 2 and 100 ± 2 after birth. On the same days of the oocyte collections, blood was also collected through coccygeal intravenous puncture and follicular fluid from the dominant follicle, which were used for glucose analysis, non-esterified fatty acids (NEFA), beta-hydroxybutyrate (BHBA), and urea. Recently after the recovery of the oocytes they were sent to the laboratory where the recovery rate, in vitro maturation and apoptosis through the TUNEL technique. The average concentration of glucose on the 30th day was higher on the follicular fluid than in the plasma, however on the 60th and 100th day after birth there was no difference among the glucose concentrations. The urea concentrations on the 30th, 60th and 100th days did not display difference on the plasma as much as on the follicular fluid, nonetheless, it was observed that the average concentrations of urea on the follicular fluid were significatively inferior to the plasma. The BHBA did not disclose noticeable differences between the concentrations of the follicular fluid and the blood serum among the 30th, 60th and 100th days after birth. The concentrations of the NEFA did not evidence differences between the concentrations in the blood serum and the follicular fluid on the 30th, 60th and 100th days after birth. There was no difference in the total production of oocyte in-between the collection times, however it was observed that the collections done between the 30th and 60th days evidenced less viable oocyte percentiles than those collected on the 100th day. Difference in the negativity of the TUNEL was imperceptible between the analyzed times, nevertheless it was evidenced that the oocytes collected on the 10th day evidenced higher maturation percentile compared to those collected on the 100th day (55.2 ± 4.9 vs 23.8 ± 4.5); c) assess the differences in milk production and composition and weight measures of F1 Holstein x Gyr primiparous cows raised in free stall barn corresponding to three groups of productive efficiency. The variables analyzed after birth such as the intake of dry feed, total milk production corrected to fat at 3,5%, milk production corrected to 305 days, daily milk production, were greater for the high efficiency cows. Cows belonging to the low efficiency group after birth showed higher weight gain and consequently higher bodily condition score when compared with cows of intermediate and high efficiency. The percentile of fat in the milk was greater for cows with low efficiency than for those of intermediate and high efficiency. The protein was equal for both high and low efficiency groups, however it was different for cows with intermediate efficiency. Lactose and ureic nitrogen in the milk were lower for cows of the low efficiency group than for those of the high efficiency group. The somatic cell count during lactation was equal for low and high efficiency cows, yet cows with intermediate efficiency showed lower count.

Effect of follicle wave synchronization and gonadotropin treatments on the number and quality of cumulus-oocyte complex obtained by ultrasound-guided ovum pick-up in beef cattle

Four experiments were designed to evaluate the effect of different hormonal treatments on the number and quality of cumulus oocyte complexes (COCs) recovered by ovum pick-up (OPU) in beef cattle. Experiment 1 compared the synchronization of follicle wave emergence with 2 mg estradiol benzoate (EB) and 50 mg progesterone (P4) given intramuscularly (i.m.) 6 days before OPU versus a control group in which donors did not receive any treatment. Experiment 2 evaluated the use of equine chorionic gonadotropin (eCG) and prostaglandin F2α prior to OPU. Experiment 3 compared the effect of dominant follicle removal (DFR) by ultrasound guided follicle aspiration or EB+P4 to control follicular wave emergence, and treatment with eCG or FSH to superstimulate follicle growth. Experiment 4 evaluated the effect of inserting a progesterone releasing device (CIDR) during the superstimulation treatment. In experiment 1, treatment with EB+P4 resulted in more (P < 0.05) viable COCs (5.2 ± 0.9 vs. 2.1 ± 0.4) than the controls. In experiment 2, prostaglandin F2α prior to OPU increased (P < 0.05) the number of viable COCs (7.9 ± 1.1), but treatment with eCG did not affect (P > 0.1) the number of COCs (4.5 ± 1.0) recovered compared to the controls (4.7± 0.7). In experiment 3, there were no differences (P > 0.1) between DFR and EB+P4; however, treatment with FSH resulted in more (P < 0.05) COCs recovered than eCG (6.8 ± 0.6 vs. 3.7 ± 0.6). In experiment 4, insertion of a CIDR device did not affect the number of COCsrecovered compared to the controls (6.3 ± 0.7 vs. 5.8 ± 0.7,respectively). In conclusion, the use of treatments that synchronize follicle wave emergence, prostaglandin F2a to avoid the presence CL at the time of OPU and superstimulation with FSH were useful to improve the number of COCs recovered in beef cattle. Conversely, the insertion of a CIDR device during the superstimulation treatment prior to OPU did not improve the number of COCs recovered nor their quality.(AU)

Effect of follicle wave synchronization and gonadotropin treatments on the number and quality of cumulus-oocyte complex obtained by ultrasound-guided ovum pick-up in beef cattle

Four experiments were designed to evaluate the effect of different hormonal treatments on the number and quality of cumulus oocyte complexes (COCs) recovered by ovum pick-up (OPU) in beef cattle. Experiment 1 compared the synchronization of follicle wave emergence with 2 mg estradiol benzoate (EB) and 50 mg progesterone (P4) given intramuscularly (i.m.) 6 days before OPU versus a control group in which donors did not receive any treatment. Experiment 2 evaluated the use of equine chorionic gonadotropin (eCG) and prostaglandin F2α prior to OPU. Experiment 3 compared the effect of dominant follicle removal (DFR) by ultrasound guided follicle aspiration or EB+P4 to control follicular wave emergence, and treatment with eCG or FSH to superstimulate follicle growth. Experiment 4 evaluated the effect of inserting a progesterone releasing device (CIDR) during the superstimulation treatment. In experiment 1, treatment with EB+P4 resulted in more (P 0.1) the number of COCs (4.5 ± 1.0) recovered compared to the controls (4.7± 0.7). In experiment 3, there were no differences (P > 0.1) between DFR and EB+P4; however, treatment with FSH resulted in more (P < 0.05) COCs recovered than eCG (6.8 ± 0.6 vs. 3.7 ± 0.6). In experiment 4, insertion of a CIDR device did not affect the number of COCsrecovered compared to the controls (6.3 ± 0.7 vs. 5.8 ± 0.7,respectively). In conclusion, the use of treatments that synchronize follicle wave emergence, prostaglandin F2a to avoid the presence CL at the time of OPU and superstimulation with FSH were useful to improve the number of COCs recovered in beef cattle. Conversely, the insertion of a CIDR device during the superstimulation treatment prior to OPU did not improve the number of COCs recovered nor their quality.

A INFLUÊNCIA DO MOMENTO DA ONDA DE CRESCIMENTO FOLICULAR EM OVÁRIOS DE ABATEDOURO SOBRE A PRODUÇÃO IN VITRO DE EMBRIÕES BOVINOS

A produção in vitro de embriões (PIVE) muito tem contribuído para o desenvolvimento da pecuária. Para tornar esta biotécnica mais eficiente busca-se agora determinar o momento ideal do ciclo estral da fêmea bovina para a recuperação de oócitos com melhor qualidade. Visando o uso racional da aspiração folicular, seja por ovum pick up (OPU) ou em ovários de abatedouro, o presente estudo teve como objetivo investigar qual o impacto do momento da onda de crescimento folicular sobre a taxa de produção in vitro de embriões. Para isto, ovários de fêmeas Bos indicus (N = 196) foram coletados em abatedouro local e transportados ao laboratório em recipiente térmico contendo solução de NaCl 0,9% aquecida a temperatura de 36ºC. Em seguida, no laboratório, foi realizada a avaliação de cada par de ovários individualmente. As estruturas analisadas foram os folículos, quanto à ocorrência ou não da divergência folicular (sendo considerado folículo dominante FD - aquele 6mm), e o corpo lúteo (CL), quanto à sua presença/ausência e estágio de desenvolvimento. Posteriormente, os pares ovarianos foram alocados entre os seguintes grupos experimentais: G1 CL inicial e ausência de folículo dominante; G2 CL e ausência de folículo dominante; G3 CL inicial e presença de folículo dominante; G4- CL e presença de folículo dominante. O grupo controle não passou por avaliação e classificação, todos os ovários foram aspirados aleatoriamente (n= 13 pares). Os oócitos foram recuperados por aspiração folicular, em seguida foram maturados, fecundados e cultivados in vitro, cada grupo individualmente. As taxas de clivagem e blastocisto foram analizadas por teste de regressão logística binária (P 0,05). A taxa de clivagem obtida, em ordem decrescente entre os grupos, foi de 50,22% (229/456) para o grupo G4 (CL e presença de FD); 45,65% (252/552) grupo G3 (CL inicial e presença de FD); 44,06% (89/202) grupo G2 (CL e ausência de FD); 36,23% (50/138) grupo Controle e 35,19% (120/341) grupo G1 (CL inicial e ausência de FD; P < 0,0001). Por outro lado, a melhor taxa de blastocisto obtida em D7 foi de 37,62% (76/202) pertencente ao grupo G2; seguida por 29,62% (101/341) referente ao grupo G1 e 26,81% (37/138) do grupo Controle; sendo que as menores taxas de blastocisto foram dos grupos G4 e G3; 10,09% (46/456) e 9,24% (51/552), respectivamente (P < 0,0001). Como conclusão, podemos sugerir que a aspiração folicular pós abate de pares ovarianos com presença de corpo lúteo funcional associado à ausência de folículo dominante proporciona a recuperação de oócitos com maior qualidade e o incremento nos resultados da produção in vitro de embriões.

In vitro embryo production (PIVE) has contributed to the development of livestock. To make this biotech more efficient, it is now sought to determine the ideal moment of the estrous cycle of the bovine female for the recovery of oocytes with better quality. Aiming at the rational use of follicular aspiration, either by ovum pick up (OPU) or with slaughter ovaries, the present study had as objective to investigate the impact of the moment of the wave of follicular growth on the rate of in vitro production of embryos. For this, ovaries of Bos indicus females (N = 196) were collected in the local slaughterhouse and transported to the laboratory in a thermostatic container containing NaCl 0,9% solution heated to 36 ° C. Then, in the laboratory, the evaluation of each pair of ovaries individually was performed. The structures analyzed were the follicles, whether or not follicular divergence was established (dominant follicle - FD - that 6mm), and the corpus luteum (CL), in terms of their presence/absence and stage of development. Subsequently, ovarian pairs (N = 196) were allocated between the following experimental groups: G1 initial CL and absence of dominant follicle; G2 - CL and absence of dominant follicle; G3 - initial CL and presence of dominant follicle; G4-CL and presence of dominant follicle. The control group did not undergo evaluation and classification, all ovaries were randomly aspirated (n = 13 pairs). The oocytes were recovered by follicular aspiration, then matured, fertilized and cultured in vitro, each group individually. The cleavage and blastocyst rates were analyzed per binary logistic regression test (P 0,05). The cleavage rate obtained, in decreasing order among the groups, was 50.22% (229/456) for the G4 group (CL and presence of FD); 45.65% (252/552) G3 group (initial CL and presence of FD); 44.06% (89/202) G2 group (CL and absence of FD); 36.23% (50/138) Control group and 35.19% (120/341) G1 group (initial CL and absence of FD; P < 0,0001). On the other hand, the best blastocyst rate obtained in D7 was 37.62% (76/202) belonging to the G2 group; followed by 29.62% (101/341) for the G1 group and 26.81% (37/138) for the Control group; with the lowest rates of blastocyst being in groups G4 and G3; 10.09% (46/456) and 9.24% (51/552), respectively (P < 0,0001). As a conclusion, we can suggest that follicular aspiration after the slaughter of ovarian pairs with the presence of functional corpus luteum associated with the absence of dominant follicle provides the recovery of oocytes with higher quality and increase in the results of in vitro production of embryos.

MASTITE SUBCLÍNICA REDUZ A OVULAÇÃO E A QUALIDADE DE OÓCITOS EM VACAS PRODUTORAS DE LEITE

Avaliou-se a relação entre a mastite pela contagem de células somáticas (CCS) e a dinâmica folicular, ovulação, qualidade dos oócitos e das células do cumulus, concentração e tamanho de exossomos em vacas produtoras de leite. Vacas cruzadas (Bos taurus Holandesa x Bos indicus Gir) foram distribuídas em grupo controle (CCS<200.000 células/mL de leite) e o grupo mastite (CCS>400.000 células/mL de leite). No experimento 1 (Dinâmica folicular), as vacas (n=57) foram submetidas à avaliações ultrassonográficas a cada 24 horas, a partir da retirada do dispositivo intravaginal de progesterona (D8) até 48 horas depois (D10). A partir do D10, as avaliações foram realizadas a cada 12 horas, até a ovulação ou até 96 horas após a retirada do dispositivo de progesterona, visando o acompanhamento do crescimento final do folículo dominante e da ovulação. No experimento 2 (Avaliação dos oócitos, das células do cumulus e do fluído folicular), as vacas (n=23) foram submetidas às aspirações foliculares, precedidas pela sincronização da emergência da onda de crescimento folicular. Os níveis de genes alvos em células do cumulus (BCL2, BAX, PI3K, PTEN, FOXO3) foram avaliados pelo ensaio de Real Time Polymerase Chain Reaction. No fluído folicular foram isolados exossomos para avaliação da concentração e tamanho das partículas. A taxa de ovulação (P=0,09) e de oócitos viáveis (P=0,01), foram maiores em animais do grupo controle, [controle 77,42% (24/31) e mastite 57,69% (15/26)] e [controle 59,1% (130/220) e mastite 41,9% (125/298)], respectivamente. A dinâmica de crescimento folicular não diferiu entre os grupos. Verificou-se maior número de oócitos degenerados (P=0,001) em animais do grupo mastite. Na avaliação da expressão gênica em células do cumulus, observou-se maior abundância de transcritos para BAX (P=0,003) em vacas do grupo mastite. Ainda, vacas com mastite apresentaram diâmetro de exossomos com menor média (P=0,03) e menor moda (P=0,02). Em conclusão, houve efeito da mastite sobre a ovulação, qualidade oocitária e diâmetro dos exossomos do fluído folicular.

The aim was to evaluate the association between of mastitis by somatic cell count (SCC) on follicular dynamics, ovulation, quality of oocytes and cumulus cells, concentration and size of exosomes in milk producing cows submitted to synchronization of ovulation. Cross cows (Bos taurus Holstein x Bos indicus Gir) were distributed in a control group (SCC<200.000 cells/mL milk) and the mastitis group (SCC>400.000 cells/mL milk). In the experiment 1 (follicular dynamics), the cows (n=57) were submitted to ultrasonographic evaluations every 24 hours, after the removal of the progesterone intravaginal device (D8) up to 48 hours later (D10). From the D10, evaluations were performed every 12 hours until ovulation, or up to 96 hours after withdrawal of the progesterone device, aiming at monitoring the final growth of the dominant follicle and the ovulation. In experiment 2 (Evaluation of oocytes, cumulus cells and follicular fluid), cows (n=23) were submitted to follicular aspiration, preceded by synchronization of the emergence of follicular growth wave. The levels of target genes in cumulus cells (BCL2, BAX, PI3K, PTEN, FOXO3) were evaluated by the Real Time Polymerase Chain Reaction assay. In the follicular fluid, exosomes were isolated to evaluate the concentration and size of the particles. The ovulation rate (P =0,09) and viable oocytes rate (P=0,01) were higher in control animals, [control 77,42% (24/31) and mastitis 57,69% (15/26)] and [control 59,1% (130/220) and mastitis 41,9% (125/298)], respectively. The follicular growth dynamics did not differ between the groups. There was a higher number of degenerate oocytes (P=0,001) were observed in animals from the mastitis group. In the evaluation of gene expression in cumulus cells, the greater abundance of BAX transcripts (P=0,003) was observed in cows in the mastitis group. Also, cows with mastitis had exosomes diameter with lower mean (P=0,03) and lower mode (P=0,02). In conclusion, there was effect of mastitis on ovulation, oocyte quality and diameter of exosomes of follicular fluid.

Efeito da inibicao da enzima conversora de angiotensina no desenvolvimento folicular, dopplerfluxometria e expressao genica ovariana em bovinos.

O objetivo com este estudo foi avaliar o efeito da inibição da Enzima Conversora de Angiotensina (ECA), utilizando Maleato de Enalapril, na pressão arterial, crescimento folicular, taxa de ovulação, hemodinâmica útero-ovariana, concentrações de P4 e E2 e expressão gênica de células foliculares. Utilizou-se 31 fêmeas bovinas da raça Nelore (Bos indicus), que foram sincronizadas com protocolo à base de progesterona/ estradiol e, em seguida, tratadas com maleato de enalapril (0,5 mg/kg/dia) ou placebo (NaCl 0,9%) durante todo o protocolo (10 dias). Metade das fêmeas sincronizadas (n=17) foram submetidas a avaliações ultrassonográficas para acompanhamento da dinâmica folicular e dopplerfluxometria útero-ovariana. A outra metade (n=14) foi submetida à aspiração folicular guiada por ultrassom (Ovum pick up; OPU) para aferição da síntese hormonal e expressão gênica pelas células foliculares ovarianas. Não houve efeito do enalapril na pressão arterial média, na hemodinâmica útero-ovariana e no crescimento folicular e luteínico, porém a taxa de ovulação (%) foi significativamente maior no grupo Enalapril. As concentrações plasmáticas e intrafoliculares de Progesterona e Estradiol não diferiram significativamente entre tratamentos. O Enalapril alterou significativamente expressão gênica das enzimas P450aromatase, ECA2 e do receptor MAS nas células da granulosa dos folículos dominantes.

The aim of this study was to evaluate the effect of inhibition of the Angiotensin Converting Enzyme (ECA) with enalapril maleate, on blood pressure, follicular growth, ovulation rate, utero-ovarian hemodynamics, P4/E2 concentrations and gene expression of follicular cells. Were used 31 Nelore (Bos indicus) cows. The females were synchronized with progesterone/estradiol-based protocol and then treated with enalapril maleate (0.5 mg/kg/day) or placebo (NaCl 0.9%) throughout the protocol (10 days). A half of the synchronized cows (n=17) were ultrasonographically evaluated for monitoring the follicular dynamics and utero-ovarian dopplerflowmetry. A half of animals (n=14) were submitted to follicular aspiration guided by ultrasound Ovum pick up (OPU) for measurement of the follicular hormonal synthesis and gene expression. There was no effect of enalapril on arterial pressure, in utero-ovarian hemodynamics and follicular and luteal growth. The ovulation rate (%) was significantly higher in the enalapril treated cows. The plasma and intrafollicular concentrations of progesterone and estradiol not differed significantly between treatments. The enalapril altered significantly the gene expression of enzymes P450aromatase, ECA2 and MAS receptor in the granulosa cells of dominant follicles.

"Perfil hormonal e expressão de genes associados ao desvio folicular ovariano em bovinos"

O experimento 1 objetivou estabelecer um modelo de estudo do desvio folicular, permitindo identificar o momento exato do início do desvio. Vacas das raças Nelore (NEL; n=11) e Holandês (HPB; n=10) tiveram emergência da onda folicular ovariana sincronizada e avaliação ultrassonográfica ovariana realizada a cada 12 h. Quando o maior folículo (F1) atingiu tamanho médio de início do desvio para sua raça (NEL: 6,5; HPB: 8,5 mm), em crossover, foram aleatorizadas em dois grupos (CON: Controle; ASP: Aspiração), com aspiração do F1 ASP e nas vacas do grupo CON não houve aspiração. Avaliações ultrassonográficas foram mantidas até 48h pós-desvio. Os dados foram analisados pelo PROC MIXED (P<=0,05). No grupo CON,12h após F1 atingir tamanho de desvio, diferiu em diâmetro com os demais (F2/F3), caracterizando desvio. Não foi observada diferença entre F1 na aspiração e F2 12h após, no grupo ASP nas duas raças. Não houve diferença entre F1 CON com F2 ASP após aspiração do F1. Todavia, F2 ASP apresentou maior diâmetro em relação ao F2 CON a partir de 12h após o momento do desvio, em ambas as raças. Foi realizada colheita de sangue em 0, 3, 6, 12 e 24h após aspiração, para avaliação da concentração plasmática de FSH e aumentou em 12h após aspiração do F1 ASP. O experimento 2, objetivou verificar expressão de genes associados ao desvio, CYP19A1 (Aromatase), receptor de LH (LHr) e PAPP-A (Pappalysin 1) em vacas NEL utilizando o mesmo modelo do experimento 1, entretanto obtendo células da granulosa por meio de lavagem intrafolicular. As vacas (n=10) tiveram emergência da onda sincronizada. Foram estabelecidos três tratamentos: 0h, o maior folículo atingiu 6,5 mm, e os dois maiores folículos foram aspirados (FD0h; FS0h); 12h, os dois maiores folículos (FD12h; FS12h) foram aspirados 12h após o maior atingir 6,5 mm; e grupo desvio, o maior folículo (FD0h) foi aspirado quando atingiu 6,5 mm, e o segundo maior (FS->FD) 12h depois. A suspensão contendo células da granulosa, foi centrifugada, o sobrenadante dosado para estradiol-17 (E2) por ELISA. O pellet foi analisado para expressão de RNAm. Análise estatística foi realizada pelo PROC MIXED do SAS. Concentração de E2 (ng/mL) para FS->FD diferiu do FS0h e FS12h e não diferiu de FD0h e FD12h comprovando que FS->FD na ausência de um FD0h aumenta sua concentração de E2 semelhante aos folículos dominantes. Não houve diferença entre os grupos para a expressão relativa para PAPP-A e CYP19A1. Para LHr, houve tendência de aumento na expressão nos folículos FS->FD, quando comparados ao do grupo 0h. Não houve diferença entre FS->FD e o grupo 12h. FD12h diferiu do grupo 0h (FD0h e FS0h) e FS12h. Conclui-se que, o segundo maior folículo é capaz de se tornar dominante quando se aspira o maior folículo permitindo que se tenha estimativa mais segura do momento exato da dominância; também, ocorre um aumento no FSH plasmático 12h após a aspiração do maior folículo. O aumento na expressão de LHr foi o principal fator para o estabelecimento do desvio em vacas NEL.

This study was conducted in two experiments. Experiment 1 aimed to establish a manipulative model to study follicle deviation. Nelore (NEL n=11) and Holstein (HOL n=10) cows had the emergence of the wave synchronized. Ovarian ultrasonography was performed every 12h. When largest follicle (F1) reached the average size of deviation to its breed (NEL: 6.5; HOL: 8.5 mm), cows were randomized into two groups (CON: control; ASP: Aspiration) in a crossover design. F1ASP was aspirated, and for cows of CON group there was no aspiration. Ultrasound exams were maintained through 48h post-deviation. Data were analyzed using PROC MIXED (P<=0.05). In the CON group, 12h after F1 has reached deviation size, there was difference in diameter in relation to F2 and F3, characterizing deviation. There was no difference between diameters of F1 at the time of aspiration and F2 12h after in the ASP group for both breeds. There was no difference between the F1 from CON group with F2 ASP group after F1 aspiration. However, F2ASP had a bigger diameter compared to the CON group F2 12h after the time of deviation in both breeds. Blood samples were collected at 0, 3, 6, 12 and 24h after aspiration, to evaluate plasma concentrations of FSH. FSH increased at 12h after the F1 aspiration in ASP group. Experiment 2 was conducted to verify the expression of genes associated with follicle deviation, CYP19A1 (aromatase), LH receptor (LHR) and PAPP-A (Pappalysin 1) in NEL cows using same model of experiment 1, however by obtaining granulosa cells through intrafollicular flushing. Cows (n=10) had the wave emergence synchronized. Three treatments were established: 0h, when the biggest follicle reached 6.5 mm, the two biggest follicles were aspirated (DF0h; SF0h); 12h, the two biggest follicles (DF12h; SF12h) were aspirated 12h after the biggest follicle had reached 6.5 mm; and deviation group, biggest follicle (DF0h) was aspirated when reached 6.5 mm, and the second biggest follicle (SF->DF) was aspirated 12h later. The follicular fluid granulosa cells was centrifuged and supernatant was assayed for 17-estradiol (E2) concentration by ELISA. The pellet was analyzed for mRNA expression. Statistical analysis was performed using the SAS PROC MIXED. Concentration of E2 (ng/mL) for SF->DF differed from SF0h and SF12h and did not differ from DF0h and DF12h showing that SF->DF in the absence of a DF0h had an increased concentration of E2 similar to dominant follicles. There was no difference between groups for the relative expression of mRNA for PAPP-A and CYP19A1. For LHr expression, there was a tendency to increase in SF->DF follicles when compared to the group 0h. There was no difference between SF->DF and group 12h. DF12h differed from group 0h (DF0h/SF0h) and SF12h. In conclusion, second biggest follicle can become dominant when the biggest follicle is aspirated, allowing to have more reliable estimation of the exact moment of follicle deviation, associated with an increase in plasma FSH 12h after aspiration of the biggest follicle. Increased expression of LHr was the main characteristic of establishment of deviation in NEL cows.

Application of the concept of follicular waves in human assisted reproduction

Background: Ovulation induction (OI) is one of the cornerstones in human assisted reproduction treatments. OI is based on the understanding of ovarian follicular physiology. Current knowledge of human follicular dynamics relies on hystologic observations of ovaries in distinct moments during one menstrual cycle (interval between two menses). According to this data follicles in different stages of maturation are seen at any time during a menstrual cycle. Initial recruitment and grow of the primordial follicles is still a poorly understood process, but continued development of antral follicles, selection of the dominant follicle and ovulation depends on follicle stimulating hormone (FSH) and luteinizing hormone (LH) serum levels, which are influenced by estradiol and progesterone concentrations. With the degeneration of the corpus luteum at the end of the luteal phase, serum estradiol and progesterone concentrations fall, leading to menstruation and an increase in FSH levels. All this observations have led to the formulation of the current theory of human follicular dynamics by which follicles continuously grow from the primordial pool randomicaly, but only those which happen to be at the antral stage (FSH sensitive) during menses (FSH elevation) may continue to develop until the pre ovulatory stage and ovulate. Accordingly, in current OI protocols for human in vitro fertilization (IVF) stimulation usually beggins 2 to 5 days after the first day of menstruation. Review: Recently a new model of human folliculogenesis, based on the occurence of follicular waves, has been described. Major development of medical ultrasound technology has allowed for the precise detection of small antral follicles in the transvaginal route. Using this technology and shifting the landmark for observations from menses to ovulation, synchronic grow of a group of antral follicles (follicular wave) has been observed two or three times in an inter ovulatory interval. Emergence of a wave is preceeded by an elevation in FSH levels. The first wave emerges around ovulation and the last is the ovulatory follicular wave. This is in accordance with previous observations in other mono ovulatory animals like the cows and mares, but in contrast with the current model of human folliculogenesis, Application of follicular wave knowledge has proved to be very usefull to the development of more effective OI protocols used in Veterinary Medicine. It has been shown that synchronization of OI with wave emergence results in more oocytes and embryos with better quality in cows. Protocols to control wave emergence are currently standart of practice for in vitro production of some animals' embryos. The description of the follicular waves in humans gives the opportunity to develop new OI protocols for IVF. Synchronization of OI with wave emergence could be achieved through mechanical (aspiration of the dominant follicle folowed by ovarian stimulation) or chemical interventions (initiate ovulation or using high doses of estradiol and progesterone in any phase of the cycle, followed by ovulation induction). However some differences between in vitro production of animal embryos and Human IVF should be enfasized and could challenge the application of this knowledge. For instance, Human embryos are usually obtained and transfered to the same subject, therefore a synchronization of embryo and endometrial development is a major concern. Conclusions: Description of follicular waves in Human ovaries could have profound implications in OI for IVF, but some challenges should be expected to transpose the animal model to the Human setting.

Estudo em larga escala dos efeitos da idade sobre os parâmetros reprodutivos e viabilidade de oócitos equinos após injeção intracitoplasmática de espermatozóide (ICSI) usando sêmen sexado

O objetivo do presente estudo foi comparar o efeito da idade de doadores de oócitos sobre os parâmetros reprodutivos, a taxa de recuperação e qualidade de oócitos após ICSI utilizando sêmen sexado. Éguas Pôneis de Polo (n = 79) e Puro-Sangue (n = 23) doadoras de oócitos (400-600kg e 3-29 anos) foram utilizados durante as estações reprodutivas de 2009/2010 e 2011 no hemisfério Sul (San Luis, Argentina) e norte (Kentucky, EUA), respectivamente. As éguas foram divididas em três categorias experimentais: Jovens (YM: 3-10 anos), Meia Idade (MA: 11-17a) e Idosas (OM18a). Um total de 326 oócitos recuperados in vivo a partir de folículos pré-ovulatórios (n=279) e folículos imaturos em crescimento (n=47). Desses, 224 oócitos foram recuperados, classificado e dirigido a um programa comercial ICSI com Pôneis de Polo (primeira estação). Durante a segunda estação, 57 oócitos foram recuperados a partir de folículos pré-ovulatórios e 47 oócitos de folículos em crescimento e congelados em nitrogênio líquido para ser usado posteriormente em outro estudo. Os pontos experimentais avaliados foram: intervalos (dias) entre a aspiração ou a ovulação (AS/OV) ao PGF, PGF ao GnRH (Dia 0=GnRH), AS/OV ao Dia 0, e AS/OV ao Dia+1; edema uterino (UE); tonus cervical (CT); diâmetro máximo do folículo dominante (MdF1) em D0 e D+1, e a taxa de crescimento folicular. O número total de aspirações, o número de folículos aspirados e oócitos por aspiração e/ou folículo, o grau de expansão das células do cúmulos, a presença e qualidade do corpo polar (PB), o volume ooplasma, o intervalo de GnRH a aspiração, a GnRH a ICSI, e a taxa de clivagem (CR) depois da ICSI também foram avaliados. Foram observadas diferenças significativas entre as três categorias experimentais (YM, MA e OM) para: intervalos (dias) entre PGF-GnRH, AS/OV-GnRH, AS/OV-Day 1, edema uterino no Dia 0, CT em Dia 1, MdF1 no D0 e D+1 e volume de ooplasma. A taxa de recuperação in vivo (RR) não foi afetada pela idade (média de 102%, 85% e 73,4% de oócitos recuperados por ciclo, por F1 e por folículo, respectivamente, P> 0,05). O CR não diferiu entre as categorias experimentais. Em conclusão, um efeito de envelhecimento pode ser observado em vários parâmetros reprodutivos em éguas. Os ovócitos no presente estudo tiveram um menor volume de ooplasma para OM comparados com YM, mas isso não foi eficaz em predizer a viabilidade dos oócitos ou o potencial para o desenvolvimento para a avaliação da taxa de clivagem após ICSI utilizando sêmen sexado.

The aim of the present study was to compare the effect of oocyte donors` age on reproductive parameters, recovery rate and quality of oocytes after ICSI using sexed semen. Polo Ponies (n=79) and Thoroughbred (n=23) oocyte donor mares (400-600kg and 3-29 years) were used during the 2009/2010 and 2011 reproductive seasons in the Southern (San Luis, Argentina) and in the Northern hemispheres (Kentucky, USA), respectively. Mares were divided into three experimental categories: Young Mares (YM: 3-10y), Middle Age Mares (MA: 11-17y) and Old Mares (OM18y). A total of 326 oocytes were recovered in vivo from pre-ovulatory follicles (n=279) and immature-growing follicles (n=47). From those, 224 oocytes were recovered, sorted and directed to a commercial ICSI program with Polo Ponies (first season). During the study`s second season, 57 oocytes were recovered from pre-ovulatory follicles and 47 oocytes from growing follicles and frozen in liquid nitrogen to be used in another study. The evaluated experimental end-points were: Intervals (days) between aspiration or ovulation (AS/OV) to PGF, PGF to GnRH (Day 0=GnRH), AS/OV to Day 0, and AS/OV to Day + 1; uterine edema (UE); cervical tone (CT); maximum diameter of dominant follicle (MdF1) on D0 and D+1, and follicular growth rate. Total number of aspirations, number of follicles aspirated and oocytes recovered per aspiration and/or follicle, the degree of cumulus cell expansion, the presence and quality of polar body (PB), the ooplasm volume, the interval from GnRH to aspiration, GnRH to ICSI, and the cleavage rate (CR) after ICSI were also evaluated. Significant differences between the three experimental categories (YM, MA and OM) were observed for: intervals (days) between PGF-GnRH, AS/OV-GnRH, AS/OV-Day +1, uterine edema on Day 0, CT on Day +1, MdF1 on D0 and D+1 and ooplasm volume. The in vivo recovery rate (RR) was not affected by age (average of 102%, 85% and 73.4% of oocyte recovered per cycle, per F1 and per follicle, respectively; P>0.05). The CR did not differ among experimental categories. In conclusion, an effect of aging could be observed in several reproductive parameters in mares. The oocytes in the present study had a smaller ooplasm volume for OM compared to YM, but this was not effective in predicting oocyte viability or the potential to development through evaluation of the cleavage rate after ICSI using sexed semen.

Efeito da suplementação prolongada de ácidos graxos insaturados na alimentação de novilhas Bos taurus sobre a qualidade oocitária e embrionária e perfil metabólico

Objetivou-se avaliar os efeitos de diferentes fontes de ácidos graxos essenciais, ômega 3 e ômega 6, e o tempo de suplementação sobre a qualidade oocitária e embrionária em novilhas Bos taurus. Foram selecionadas 24 novilhas da raça Holandesa, divididas em três grupos experimentais os quais receberam as seguintes dietas: 1) Controle (CT) composto por dieta basal de aproximadamente 2,5% de extrato etéreo; 2) Grão de Soja (GS) composto por uma dieta com aproximadamente 4,5% de extrato etéreo, obtido com a inclusão de 11,5% de grão de soja cru e integral na matéria seca (MS) da dieta, sendo fonte de ômega 6; 3) Semente de Linhaça (SL), composto por uma dieta com aproximadamente 4,5% de extrato etéreo, baseada na inclusão de 6,0% de semente de linhaça na MS da dieta, sendo fonte de ômega 3. Os animais foram arraçoados em grupos, de acordo com o consumo de matéria seca do dia anterior de forma a ser mantido porcentual de sobras diárias, entre 5 e 10% do consumo. Foi avaliada, por ultrassonografia, a atividade ovariana de todos os animais durante todo período de coleta. Foram realizadas aspirações foliculares precedidas de sincronização da emergência de onda de crescimento folicular em seis períodos, -30, 0, 30, 60, 90 e 120 dias, os oócitos recuperados foram classificados de acordo com sua morfologia. Foram considerados como viáveis e, consequentemente aproveitados para FIV somente os oócitos classificados como graus I, II e III, os demais foram descartados. Os animais foram pesados para mensuração de ganho médio de peso diário, e amostras de fluido folicular do folículo dominante e sangue foram coletadas concomitante às aspirações foliculares a fim de se avaliar os parâmetros metabólicos como glicose, colesterol total, colesterol HDL, colesterol VLDL, colesterol LDL, triglicerídeos e ureia, Houve efeito de tempo para o número de oócitos classificados em Grau I, número e taxa de embriões. Na avaliação dos contrastes ortogonais, foi observado efeito para o contraste 1 (CT vs GS+SL) quando se analisou a taxa de embriões viáveis, onde a dieta CT apresentou menor desempenho. Não foi observado efeito significativo dos tratamentos para ganho de peso diário e peso corporal das novilhas, onde o ganho de peso médio diário (GPD) entre os tratamentos foi de 1072 gramas para os animais do grupo controle, 972 gramas para o grupo tratado com grão de soja e 840 gramas para suplementação com semente de linhaça. Houve efeito de tempo para a pesagem dos animais alimentados com as dietas experimentais, em que foi observado um aumento significativo de peso dos animais. Para o ganho de peso diário (GPD) foi observado efeito para o contraste 1, em que os animais tratados com a dieta controle apresentaram maiores ganho de peso que os animais alimentados com dietas suplementadas com lipídeos. AS duas fontes lipídicas avaliadas não diferiram entre si. Houve efeito de tempo para todas as variáveis do perfil metabólico sanguíneo analisadas ao longo de todo período experimental. Foi observado efeito significativo de interação entre tempo e dieta para a variável glicose. Na análise dos contrastes foi observado efeito para o C1 (controle vs grão de soja + semente de linhaça) onde os animais que consumiram dieta controle apresentaram em média 152,29 mg/dL de glicose em relação aos que consumiram dietas suplementadas com fontes de ácidos graxos (GS e SL) 141,74 e 144,78 respectivamente. Houve efeito estatístico para interação entre tempo e dieta para os níveis de ureia. Na análise do fluído folicular Foi observado interação entre tempo e dieta para as variáveis colesterol total e ureia. Foram observados efeitos significativos de dieta, interação tempo dieta e contraste 1 (CT vs GS + SL) quando se analisou a quantidade de triglicerídeos no fluído folicular. Portanto a suplementação prolongada com fontes de ácidos graxos insaturados na alimentação de novilhas não apresenta melhorias consideráveis na qualidade oocitária e embrionária dos animais, aumentando apenas a taxa de embriões viáveis, mas com prejuízos sobre o perfil metabólico e ganho médio de peso vivo.

This study aimed to evaluate the effects of different sources of essential fatty acids, omega 3 and omega 6, and the time of supplementation on oocyte and embryo quality in Holstein heifers. Will be selected 30 heifers Bos taurus, evenly divided into three groups which will receive the following diets: 1) Control (CT) basal diet composed of approximately 2,5% ethereal stratum; 2) Soya Bean (GS) consists of a diet with approximately 4,5% of ethereal layer based on inclusion of 12% of raw soybean and complete the concentrate, a source of omega 6; 3) Flax Seed (SL) composed of a diet with approximately 4,5% ethereal stratum based on inclusion of 6,0% of flaxseed in the concentrate, a source of omega 3. The animals are hand fed into groups according to the dry matter intake inside the day in order to be kept remains percentage of the diets on a daily basis between 5 and 10%. Will be evaluated by ultrasound ovarian activity of all animals throughout the collection period. Be preceded by follicular aspiration performed synchronization emergency follicular wave into six periods, -30, 0, 30, 60, 90 and 120 days, the oocytes retrieved will be ranked according to their morphology, by measuring the amount of layers and compacting cumulus cells and homogeneity of the ooplasm. Are considered viable and therefore only the recovered oocytes for IVF classified as grade I, II and III, the other is discarded. Follicular fluid samples of the dominant follicle and the concomitant blood will be collected follicular aspiration in order to evaluate the metabolic and hormonal parameters such as glucose, total cholesterol, HDL cholesterol, VLDL cholesterol, LDL cholesterol, triglycerides, and urea. As expected outcome of the present study suggest that supplementation with fat has beneficial effects on follicle, the oocyte quality, the quality of in vitro embryo production and metabolic and hormonal profile of dairy heifers. There was a time effect on the number of oocytes classified as Class I, number and rate of embryos. In assessing orthogonal contrasts, effect was observed for the first contrast (CT vs GS + SL) when analyzing the rate of viable embryos, where the CT diet showed lower performance. There was no significant treatment effect on daily weight gain and body weight of heifers, where the average daily gain weight (GPD) between treatments was 1072 grams for the control group, 972 grams for the group treated with grain of soybeans and 840 grams for supplementation with flaxseed. There was a time effect for weighing animals fed experimental diets, it was observed a significant increase in initial weight to the final weight of the treated animals. In assessing orthogonal contrasts, effect was observed for the first contrast (CT vs GS + SL) for the GPD (daily weight gain) in the animals treated with the control diet showed higher values for average found weight gain, compared to diets with added lipid. However, when we analyzed the contrast 2 (GS vs SL) was not observed statistical effect of the tested variables. There was a time effects for all variables examined the metabolic profile of blood throughout the experimental period. There was a significant interaction effect between time and diet to the variable glucose. In the analysis of contrasts effect was observed for C1 (control versus soybean grain, flaxseed) where the animals fed the control diet had an average of 152.29 mg / dL glucose compared to those fed diets supplemented with acid sources fatty (GS and SL) 141.74 and 144.78 respectively. There was no effect for interaction between time and diet for urea. In the analysis of follicular fluid was observed interaction between time and diet for the variables Total cholesterol and urea. Diet Significant effects were observed, time and diet interaction Contrast 1 (CT vs. GS + SL) where it is examined the amount of triglycerides in the follicular fluid. Therefore prolonged supplementation sources of unsaturated fatty acids in the diet of heifers not considerably improvements in oocyte and embryo quality animal, only increasing the rate of viable embryos, but with losses on the metabolic profile and average live weight gain.

Efeito do intervalo entre recrutamentos foliculares na superovulação de vacas da raça Holandesa não-lactantes / Effect of interval between follicular recruitments on superovulatory response in non-lactanting Holstein cows

Vacas da raça Holandesa não-lactantes, distribuídas em dois grupos, foram sincronizadas com o protocolo Ovsynch modificado. No dia sete (dia 0 = dia do segundo GnRH), o grupo 7 (G-7; n=19) recebeu CIDR usado previamente por cinco dias e 100mcg de GnRH, e o grupo 14 (G-14; n=21), CIDR e 25mg de PGF2alfa. No dia 14 foi aspirado o folículo dominante (FD), trocado o CIDR usado por um novo e foram aplicados 25mg de PGF2alfa. Iniciou-se o tratamento com FSH 36h depois, removeu-se o CIDR com o sétimo FSH e aplicou-se GnRH 36h depois. As inseminações foram feitas 12 e 24h depois. Recuperaram-se os embriões sete dias depois da inseminação artificial. O diâmetro do FD no G-7 foi 13,1±0,57mm no dia sete e 11,2±0,57mm no dia 14. O diâmetro FD persistente no G-14 aumentou de 12,6±0,55mm no dia sete para 16,4±0,55mm no dia 14 (P<0,001). O número de folículos >8mm, 48h após o início do tratamento com FSH, foi maior (P<0,05) no G-7 (15,6±0,05) que no G-14 (12,5±0,05). Não foi detectado efeito de tratamento sobre o número de corpos lúteos e de embriões. O menor intervalo entre recrutamentos foliculares aumentou o número de folículos recrutados, porém não alterou a quantidade e a qualidade dos embriões produzidos(AU)

Dry Holstein cows were synchronized by a modified Ovsynch protocol. On day 7 (day 0 = day of the second GnRH), group 7 (G-7; n=19) received an used CIDR and GnRH (100'g). Group 14 (G-14; n=21) received an used CIDR and PGF2alpha (25mg). On day 14, the dominant follicle (DF) was removed, by aspiration; the used CIDR was changed for a new CIDR plus PGF2alpha. Thirty-six hours later, the FSH treatment was initiated. On the seventh injection of FSH, the CIDR was removed. Thirty-six hours after, the cows received GnRH. Donors were inseminated 12 and 24h after the GnRH injection. Embryos were recovered seven days after AI. The DF diameter in G-7 was 13.1mm on day 7 and 11.2mm on day 14. The persistent DF in the G-14 increased from 12.6mm on day 7 to 16.4mm on day 14 (P<0.001). The number of follicles >8mm, 48h after the beginning of the FSH treatment, was 15.6 in G-7 and 12.5 in G-14 (P<0.05). No treatment effects were detected on number of corpus luteum and embryos. The shorter interval between follicular recruitment the higher the number of recruited follicles, but it did not have effects on the number or quality of embryos produced(AU)

Obtenção de oócitos e produção in vitro de embriões em doadoras lactantes da raça Gir (Bos taurus indicus)

Raças zebuínas (Bos taurus indicus) e seus cruzamentos têm papel fundamental na pecuária brasileira, e a raça Gir, em especial, acrescenta rusticidade e produtividade nas suas descendentes leiteiras. A produção in vitro de embriões bovinos é uma biotécnica de alto valor econômico, que, aliada à utilização de sêmen sexado para cromossoma X, possibilita a multiplicação com fêmeas de valor genético superior. Foram realizados dois experimentos com o objetivo de avaliar a produção in vitro (PIV) de embriões de doadoras da raça Gir na Fazenda Experimental da EPAMIG, em Uberaba, MG. O experimento 1 (EXP 1) visou verificar o efeito da ablação do folículo dominante sobre os resultados da PIV. No experimento 2 (EXP 2) os efeitos da estação do ano, idade da doadora, DNA mitocondrial materno e efeito do touro sobre a PIV foram estudados. No EXP 1, 42 multíparas e primíparas foram submetidas à aspiração de oócitos (OPU) a partir dos 15 dias pós-parto e a intervalos de 21 dias, sendo efetuada (65 sessões de OPU) ou não (115 sessões de OPU) a ablação do folículo dominante 3 dias antes da aspiração. Das 198 aspirações realizadas foram coletados 3.884 oócitos viáveis, que resultaram em 1.114 blastocistos. O número médio de oócitos viáveis aspirados e de blastocistos por sessão foi de 20,0 ± 10,6 e de 5,70 ± 4,9, respectivamente. Não foram identificados efeito da ordem de parto e aspiração, do dia após o parto para início da coleta e da condição corporal da doadora nos resultados da PIV. No entanto, a produção de blastocistos por sessão foi superior (5,65±1,02 vs. 3,78±0,97) nas vacas que sofreram ablação do folículo dominante (p<0,05). No EXP 2 foram avaliadas 363 aspirações de 85 doadoras fertilizadas com 23 touros diferentes que geraram 6.084 oócitos viáveis, 2.537 embriões, 1.105 gestações...

Zebu breeds (Bos taurus indicus) and its crosses have an essential role on the Brazilian cattle industry, and the Gyr breed, especially, incorporates hardiness and productivity onto its dairy descendants. The in vitro production of bovine embryos is a biotechnique of high economic value, which, combined to the use of sex-sorted semen bearing X chromosomes, allows for the multiplication of superior genetic value dams. Two experiments were conducted to evaluate the in vitro production (IVP) of embryos from Gyr donor cows at the EPAMIG Research Farm in Uberaba, MG, Brazil. Experiment 1 (EXP 1) aimed to verify the effect of ablation of the dominant follicle on IVP results. In experiment 2 (EXP 2), the effects of season, donor age, mitochondrial DNA and sire on IVP were studied. In EXP 1, 42 multiparous and primiparous cows underwent ovum pick up (OPU) after removal (65 OPU sessions- DFR) or non removal (115 OPU sessions- Control) of the dominant follicle 3 days before aspiration, starting from 15 days postpartum at approximately 21 day-intervals. Of the 180 OPU sessions performed, 3,884 viable oocytes were collected, which resulted in 1,114 blastocysts. The overall average numbers of oocytes aspirated and viable blastocysts per session were 20.0 ± 10.6 ± 4.9 and 5.70, respectively. OPU session, parity, calving to OPU interval and donor body condition did not influence IVP results. However, the production of blastocysts per session was higher (5.65 ± 1.02 vs. 3.78 ± 0.97) in DFR-cows (P <0.05). In EXP 2, a total of 363 OPU sessions from 85 donors was studied. Semen from 23 different bulls was used for in vitro fertilization, yielding 6,084 viable oocytes, 2,537 embryos and 1,105 pregnancies overall. Thirty and sixty-day day pregnancy rates after embryo transfer were 41.7% and 39.5%, respectively...

Dominant follicle removal by ultrasound guided transvaginal aspiration and superovulatory response in Nellore cows

The present study analyzed the physiological significance of the dominant follicle (DF) and its removal on the superovulatory response of 42 Nellore cows and tested the hypothesis that the number of subordinate small follicles (3-8mm) could be used as a single criterion for the evaluation of the presence or absence of a DF in the ovaries. Ultrasonographic examinations were performed two days before the beginning of superovulatory treatment (D0) and the cows divided into three groups: group without DF (NDF), group with a DF (DF) and group with an aspirated DF (ADF). The superovulatory response of the donors did not differ between groups, but the rate of embryonic viability was higher in NDF (69.40%) and ADF (68.99%) groups compared to DF (48.54%). The number of unfertilized structures did not differ between NDF and DF or between NDF and ADF groups, but was higher in DF compared to ADF. It is concluded that, in Nellore cows, the number of subordinate follicles is a safe criterion for the evaluation of the presence of a DF in the ovaries, but errors could be avoided if only 4-8mm follicles were considered, and that the presence of a DF at the beginning of superovulation reduced the embryonic viability rate and its removal by transvaginal aspiration guided by ultrasound induced embryonic viability rates similar to that observed in the absence of a DF.

O presente estudo analisou o significado fisiológico do folículo dominante (FD) e sua remoção na resposta superovulatória de 42 vacas Nelore e testou a hipótese de que o número de folículos subordinados pequenos (3-8mm) poderia ser usado como critério único para a avaliação da presença ou ausência de um FD nos ovários. Exames ultra-sonográficos foram realizados dois dias antes do início do tratamento superovulatório (D0) e as vacas foram divididas em três grupos: grupo sem FD (SFD), grupo com FD (FD) e grupo com um FD aspirado (FDA). A resposta superovulatória das doadoras não diferiu entre os grupos, mas a taxa de viabilidade embrionária foi maior nos grupos SFD (69,40%) e FDA (68,99%) grupos, comparados ao FD (48,54%). O número de estruturas não fertilizadas não diferiu entre os grupos SFD e FD nem entre SFD e FDA, mas foi maior no grupo FD comparados ao FDA. Pode-se concluir que, em vacas Nelore, a determinação do número de folículos subordinados é um critério seguro para a avaliação da presença ou ausência de um FD nos ovários, mas erros poderiam ser evitados se apenas folículos de 4-8mm fossem considerados, e que a presença de um FD no início da superovulação reduz a taxa de viabilidade embrionária e sua remoção por aspiração transvaginal guiada por ultra-som induziu taxas de viablidade embrionárias semelhantes àquelas observadas na ausência de um FD.

Produção in vitro de embriões derivados de oócitos obtidos em diferentes fases da onda folicular de vacas Nelore(Bos taurus indicus)

O objetivo foi avaliar, em vacas Nelore, a influência da fase da onda folicular na qualidade e quantidade dos oócitos recuperados, através da OPU (ovum pick-up), assim como a produção de blastocistos. Todos os animais (n=10) receberam em dia aleatório do ciclo estral um implante auricular de progestágeno (Crestar?) e uma aplicação de 2 mg de Benzoato de Estradiol (Estrogin?) com o objetivo de sincronizar a onda folicular. Após sete dias o implante foi retirado e foi aplicada uma dose de 2ml de um análogo da PGF2? (Preloban®). Após de 24 hs as doadoras foram submetidas à aspiração do folículo dominante (AFD) sendo então este momento considerado dia 0. Após a AFD, as doadoras foram submetidos a OPU nos dias 3, 5, 7, e 9 (Grupo D3, D5, D7 e D9) da nova onda folicular. Foram realizadas quatro fases (Fase 1, 2, 3 e 4) onde os animais foram trocados de grupo a cada fase, de forma que cada animal foi submetido aos quatro tratamentos. A cada fase o protocolo era iniciado com dois dias de intervalo entre um grupo e outro, iniciando pelo grupo D9 e na seqüência os grupos D7, D5, D3, desta forma todas as doadoras foram aspiradas no mesmo dia, porém com a onda folicular em dias diferentes. O objetivo deste delineamento foi para que as aspirações fossem efetuadas no mesmo dia, de forma que os oócitos recuperados fossem maturados, fertilizados e cultivados in vitro numa mesma sessão de PIV. Duas hipóteses foram testadas: 1- O número de oócitos viáveis recuperados seria maior na fase inicial da onda folicular (dia 3) ou logo após a divergência folicular (dia 5) do que obtidos em períodos mais tardios da fase de dominância (dias 7 e 9). 2- Os oócitos aspirados no início da onda folicular (dia 3 ou 5) teriam melhor competência e produziriam maior número de blastocistos do que oócitos obtidos no final da onda (dias 7 e 9), pois estes estariam num grau de atresia avançado. Não houve diferença no número

The objective of this experiment was to evaluate in Nelore cows the influence of the moment of the follicular wave in the quality and amount of the recovered oocytes, through the OPU, (ovum pick-up), as well as the production of blastocysts. All the animals (n=10) received in random day of the estrous cycle an auricular progestogen implant (Crestar?) and was administered of 2mg of estradiol benzoate (Estrogin?) with the objective of synchronizing the follicular wave. After seven days the implant was removed and a dose of 2ml of an analogous of PGF2 was administrated (Preloban®). After 24 hours the donors were submitted later of the dominant follicle aspiration (DFA) being then this moment considered day 0. After DFA the donors were submitted to OPU after on the 3, 5, 7, and 9 days (Groups D3, D5, D7 and D9) of the new follicular wave. Four sessions were accomplished (sessions 1, 2, 3 and 4) where the animals were changed from group to each phase, so that each animal it was submitted to the four treatments. To each phase the protocol was begun with two days of interval among a group and other, beginning for the group D9 and in the sequence the groups D7, D5, D3, this way all of the donors were aspirated in the same day, however with the follicular wave in different days. The objective of this outline was so that the aspirations were made in the same day, so that the recovered oocytes they went maturated, fertilized and development in vitro in a same session of IVP. Two hypotheses were tested: 1 - the number of recovered viable oocytes would be larger numerical in the initial phase of the wave follicular (day 3) or soon after the follicular divergence (day 5) of those obtained in later periods of the dominancy phase (days 7 and 9). 2 - The oocytes aspirated in the beginning of the follicular wave (day 3 or 5) they would be better competent and they would produce larger number of blastocysts than oocytes obtained in the end of the wave

A remoção do folículo dominante como estratégia anti-luteolítica em bovinos / The removal of the dominant follicle as antiluteolytic strategy in cattle

O estradiol secretado pelo folículo dominante (DOM) desempenha importante papel na luteólise da vaca. Em adição, o reconhecimento materno da prenhez (MRP) requer um ambiente uterino otimizado, o qual por sua vez depende da função luteínica e de adequadas concentrações de progesterona circulante. Os objetivos do presente estudo foi testar diferentes estratégias para otimizar a função luteínica e prevenir a influência de um DOM durante o período crítico (CP) para o MRP (de D13 a D20 após o estro o estro). Diferentes abordagens foram testadas. No exp.1, 23 vacas Nelore foram tratadas com o protocolo ovsynch para induzir um cio sincronizado (D0). As vacas receberam: Gc (n=7) - nada mais; ThCG (n=5) - 3000 IU de hCG no D5; TE2 (n=6) - 5mg de 17b-estradiol (E2) no D12; ThCG/E2 (n=5) - hCG/D5 + E2/D12. Ultra-sonografias e dosagens de progesterona plasmática durante o ciclo estral permitiram determinar que o E2 reprogramou o ciclo ovariano ao prevenir a presença (P⁢0,05) de um DOM durante quase todo CP (0,6±0,7 dias entre D15 e D20), porém o E2 induziu a luteólise. As vacas que receberam a hCG desenvolveram corpo lúteo acessório e tiveram [P4] mais alta até o D13 (P⁢0,05). Portanto, a fase luteínica não foi prolongada No exp.2, os mesmos tratamentos foram impostos a 220 vacas Nelore (55 por grupo) após uma inseminação artificial em tempo fixo (TAI). As taxas de prenhez (PR) à TAI ou às inseminais de repasse durante uma estação com 64 dias de duração foram diminuídas (P⁢0,05) quando o E2 foi usado e a hCG não foi capaz de aumentar aquelas PR. No exp.3, vacas Red Angus no pós-parto tiveram seu estro sincronizado (D0) e receberam: nada mais (GCT, n=5) ou 200mg de gonadorrelina no D5 mais 3000 IU hCG no D13 (GRF, n=5); ou ablação de todos folículos ³7mm através de aspiração folicular em D14, D17 e D20 (GRM, n=5). GRF teve luteólise retardada (18,2±1,0b dias, 23,6±1,0a dias e 18,7±1,2b dias para GCT, GRF e GRM, respectivamente) e maior [P4] que os outros grupos. Folículos maiores que 7mm foram observados quando das aspirações. Foi possível concluir que: a) E2 permitiu consistentemente reprogramar o desenvolvimento folicular, porém causou luteólise e o seu uso trouxe efeitos negativos sobre as PR; b) a hCG melhorou a função luteínica mas não aumentou as PR; c) a ablação dos folículos ³7mm não preveniu a presença do DOM no CP para o MRP e d) a associação GnRH/hCG otimizou a função luteínica, retardou a luteólise e prolongou a fase luteínica de modo que todo o CP esteve sob influência da progesterona

Estradiol secreted from the dominant follicle (DOM) plays a key role in triggering luteolysis in the cow. In addition, maternal recognition of pregnancy (MRP) requires an optimum uterine environment, which directly depends on luteal function and adequate levels of circulating progesterone. The aim of this study was to test different strategies to optimize luteal function and prevent the influence of a DOM throughout the critical period (CP) for MRP (from D13 to D20 after estrus). Different approaches were tested. In exp.1, 23 Nelore cows were treated with the ovsync protocol to induce a synchronized estrus (D0). Cows received: Gc (n=7) - nothing else; ThCG (n=5) - 3000 IU of hCG five days (D5) after estrus; TE2 (n=6) - 5mg of 17b-estradiol (E2) on D12; ThCG/E2 (n=5) - hCG/D5 + E2/D12. Ultrasound evaluation and plasmatic progesterone concentration ([P4]) throughout estrous cycle allowed to conclude: E2 reprogrammed ovarian cycle by preventing the presence (P⁢.05) of a DOM during almost all CP (0.6±.7 days within the D15 to D20 interval) but induced luteolysis; cows receiving hCG developed accessory corpus luteum and had higher [P4] up to D13 (P⁢.05). Therefore, luteolysis was not delayed and luteal phase was not prolonged. In exp.2, same treatments were imposed to 220 Nelore cows (55 per group) after a timed artificial insemination (TAI). Pregnancy rates (PR) at TAI or at AIs thereafter over a 64-day period were reduced (P⁢0.05) by using E2 and hCG was not capable to improve those PR. In exp.3, postpartum Red Angus cows were estrus synchronized (D0) and received: nothing else (GCT, n=5) or 200mg of gonadorrelin on D5 plus 3000 IU hCG on D13 (GRF, n=5); or ablation of all follicles ³7mm through follicular aspiration on D14, D17 and D20 (GRM, n=5). GRF had delayed luteolysis (18.2±1.0b days, 23.6±1.0a days, 18.7±1.2b days for GCT, GRF, GRM, respectively) and higher [P4] than other groups. Follicles larger than 7mm were observed in all occasions of aspiration. In could be concluded that: a) E2 allowed to consistently reschedule follicular development but caused luteolysis and its use was detrimental to PR; b) hCG improved luteal function but did not increase PR; c) ablation of 7mm follicles did not prevent a DOM throughout CP for MRP and d) GnRH/hCG association optimized luteal function, delayed luteolysis and prolonged luteal phase in such a way that all CP was under progesterone influence