Detecção de rotavírus em um cão doméstico na cidade de Manaus-AM

The group A rotaviruses are frequently associated with gastroenteritis in mammals and birds. The objective of this study was to detect the presence of rotavirus in feces of symptomatic and asymptomatic dogs for acute diarrhea. 32 samples of dog feces were collected. All the samples were submitted to viral RNA extraction followed by electrophoresis in poliacrylamide gels (PAGE), where only one case of rotavirus infection in one asymptomatic sample was found. The electrophoretic analysis showed 4:2:3:2 long profile, and the homology between human and dog rotaviruses was very high. This suggests a possible interspecies infection.

Os rotavírus do grupo A, são frequentemente associados com gastroenterites em mamíferos e aves. O objetivo deste trabalho foi detectar a presença de rotavírus em fezes de cães sintomáticos e assintomáticos para diarréia aguda. Foram coletadas 32 amostras de fezes de cães. Todas as amostras foram submetidas à extração do RNA viral seguida da Eletroforese em Gel de Poliacrilamida (EGPA), onde se identificou apenas 1 (um) caso de infecção por rotavírus, em amostra assintomática. A análise do eletroferótipo mostrou um perfil 4:2:3:2 longo, e a homologia dos eletroferótipos de rotavírus humano e canino foi muito alta, sugerindo uma possível infecção interespécie.

Detecção de rotavírus em um cão doméstico na cidade de Manaus-AM / Rotavirus detection in a domestic dog in the City of Manaus-AM

Os rotavírus do grupo A, são frequentemente associados com gastroenterites em mamíferos e aves. O objetivo deste trabalho foi detectar a presença de rotavírus em fezes de cães sintomáticos e assintomáticos para diarréia aguda. Foram coletadas 32 amostras de fezes de cães. Todas as amostras foram submetidas à extração do RNA viral seguida da Eletroforese em Gel de Poliacrilamida (EGPA), onde se identificou apenas 1 (um) caso de infecção por rotavírus, em amostra assintomática. A análise do eletroferótipo mostrou um perfil 4:2:3:2 longo, e a homologia dos eletroferótipos de rotavírus humano e canino foi muito alta, sugerindo uma possível infecção interespécie.

The group A rotaviruses are frequently associated with gastroenteritis in mammals and birds. The objective of this study was to detect the presence of rotavirus in feces of symptomatic and asymptomatic dogs for acute diarrhea. 32 samples of dog feces were collected. All the samples were submitted to viral RNA extraction followed by electrophoresis in poliacrylamide gels (PAGE), where only one case of rotavirus infection in one asymptomatic sample was found. The electrophoretic analysis showed 4:2:3:2 long profile, and the homology between human and dog rotaviruses was very high. This suggests a possible interspecies infection.

Isolation of rotavirus from asymptomatic dogs in Brazil / Isolamento de rotavírus de cães assintomáticos no Brasil

Relata-se o isolamento de rotavírus, a partir de material fecal de dois cães assintomáticos, no Brasil. A ocorrência de rotavírus foi pesquisada em amostras fecais de nove cães assintomáticos, provenientes do Centro de Controle de Zoonoses do município de Osasco, SP. Duas das nove amostras analisadas, por eletroforese em gel de poliacrilamida, foram positivas. O isolamento de rotavírus foi realizado em linhagem de células MA-104, com adição de 10,0µg/mL de tripsina ao meio de manutenção, e confirmado pelo eletroferótipo característico de grupo A.(AU)

Serological and molecular diversity of human rotavirus in São Paulo, Brazil

From a total of 187 fecal samples from children with ages between 0 and 5 years, collected in the Hospital Universitário -USP, Brazil, from 1994 to 1996, 54 (28.9%) were positive for rotavirus. Positive samples were characterized by electropherotyping, subgrouping, G serotype and genotype and P genotype. Rotavirus electropherotypes were characterized in four different long genome patterns (38.9%), one short genome pattern (34.0%) and 18.0% were characterized as an unusual pattern. Subgroup I was found in 38.9% strains, subgroup II in 50.0% and 7.7% was subgroup nonI-nonII. For G serotypes, G2 was found in 59.3%, G1 was identified in 33.3% of strains, two samples showed mixtures of G1+G2 and one sample was G1+G3. Ten samples characterized as serotype G2 showed a long eletropherotype. Genotype G2 was the most frequently and was found in 37 (44.0%) samples (23 samples as a single genotype and 14 as mixtures of genotypes). G1 was found in 15 samples. G3 and G4 was detected mainly in mixtures of genotypes and G5, G6 and G9 were identified only in mixtures. A total of 20 (38.5%) samples were characterized as G genotype mixtures and P mixtures were found in 16 (29.6%) samples. P[4] was found in 55.6% of samples, P[8] in 51.9% and P[6-M37 like] in 22.3% of cases. P[6-Gottfried like] and P[11] were detected only in mixtures. One sample with G6 specificity, mixed with a G2 rotavirus and a P[11] strain, mixed with P[4] and P[8]strain was described for the first time in Latin America.

De um total de 187 amostras fecais de crianças com idades entre 0 e 5 anos, coletadas no Hospital Universitário -USP, Brasil, de 1994 a 1996, 54 (28.9%) foram positivas para rotavírus. As amostras positivas foram caracterizadas quanto ao eletroferótipo, subgrupo, sorotipo G e genotipo G e P. Foram identificados quatro diferentes eletroferótipo longos em 38.9% das amostras, um eletroferótipo curto (34,0%) e 18,0% foram caracterizadas como um eletroferótipo não usual. O subgrupo I foi encontrado em 38,9% amostras, o subgrupo II em 50,0% e nãoI-nãoII em 7,7%. O sorotipo G2 foi encontrado em 59,3% e G1 em 33,3%. Duas amostras apresentaram misturas de G1+G2 e outra amostra G1+G3. Dez amostras caracterizadas como sorotipo G2 mostraram perfil eletroferótico longo. O genotipo G2 foi o mais freqüente, encontrado em 37 amostras (23 como único genotipo e 14 associados a outro genotipo). G1 foi encontrado em 15 amostras; G3 e G4 foram detectados principalmente em misturas e G5, G6 e G9, identificados somente em misturas. Um total de 20 (38,5%) amostras foram identificadas como misturas de genotipo G e foram encontradas 16 (29,6%) amostras com misturas de genotipo P. P[4] foi encontrado em 55,6% das amostras, P[8] em 51,9% e P[6-M37 like], em 5,5% das amostras. P[6-Gottfried like] e P[11] foram detectados somente em misturas. Uma amostra com especificidade G6, associada ao genotipo G2 e outra P[11] misturada com P[4] e de P[8] foram identificadas pela primeira vez na América Latina.

Caracterização eletroforética e análise de subgrupo de rotavírus em rebanhos bovinos leiteiros do Estado de São Paulo

A study was accomplished to determine the occurrence of rotavirus in feces of calves, in the State of São Paulo, Brazil. A total of 375 samples of feces from calves 1 to 45 day-old were collected. The animals belonged to farms situated in six counties of the northeast region of the State. One hundred and ninety tree out of these samples belonged to animals with a clinical picture of diarrhea and 182 were obtained from clinically healthy animals. The techniques used for the detection of rotavirus were the enzyme immunoassay (EIA) and the polyacrilamide gel electrophoresis (PAGE). By the use of EIA, 11.2% (42/375) of the samples were positive for rotavirus. Among the samples of diarrheic calves, 15% (29/193) were found to be positive for rotavirus, whereas 7.1 (13/182) positive samples were obtained from clinically healthy animals. The PAGE test presented a lower sensitivity than EIA, since from the 42 positive samples in EIA, only 36 presented an electrophoretical profile characteristic of rotavirus. The genome analysis indicated the presence of six distinct electrophoretical types characteristic of group A rotavirus. A unique electropherotype was detected in tree farms, which remained constant during the sampling period. In two farms a second electropherotype was detected. The serological characterization of the positive samples in subgroups was accomplished through EIA with "double sandwich", utilizing monoclonal antibodies ( I and II). Twenty two group A rotavirus strains I (52.4%, 22/42) reacted with MAb of subgroup I, none to subgroup II, and the remaining 47.6% (20/42) did not react with the two subgroups.

Foi realizado um estudo para determinar a ocorrência de infecção por rotavírus em rebanhos bovinos leiteiros. Foram analisadas 375 amostras de fezes de bezerros, na faixa etária 1 a 45 dias, provenientes de animais pertencentes a nove propriedades rurais, situadas em seis municípios da região nordeste do Estado de São Paulo. Destas, 193 pertenciam a animais com diarréia e 182 foram obtidas de animais clinicamente sadios. As técnicas utilizadas para a detecção de rotavírus foram o ensaio imunoenzimático (EIE) e a eletroforese em gel de poliacrilamida (EGPA). Por meio do EIE foram detectadas 11,2% (42/375) de amostras positivas, 15% delas (29/193) obtidas de animais com diarréia e 7,1% (13/182) colhidas de animais sem diarréia. A análise do perfil do genoma indicou a presença de seis eletroferótipos distintos, característicos de rotavírus do grupo A. Um único eletroferótipo foi detectado em três rebanhos, o qual permaneceu constante durante o período de amostragem. Em dois rebanhos diferentes eletroferótipos foram detectados, embora com maior prevalência de um dado perfil. A caracterização das amostras positivas em subgrupos foi realizada por meio do EIE com "duplo sanduíche", utilizando-se anticorpos monoclonais (MAb) específicos para antígenos de subgrupo (I e II). Foram caracterizadas como subgrupo I 52,4% (22/42) das amostras testadas, nenhuma reagiu com MAb de subgrupo II, enquanto as demais, 47,6% (20/42), não reagiram com nenhum dos dois subgrupos.

Prevalência de rotavírus do grupo A em fezes diarréicas de bezerros de corte em sistema semi-intensivo de produção / Prevalence of group A rotavirus in diarrheic feaces of beef calves in semi-intensive production system

Determinou-se a prevalência de rotavírus durante surto de diarréia em bezerros de um rebanho de corte, criado em regime semi-intensivo de produção. Analisaram-se, por meio de técnicas de eletroforese em gel de poliacrilamida (EGPA) e ensaio imunoenzimático (kit EIARA - Fiocruz), 69 amostras de fezes de bezerros, entre 30 e 60 dias de idade, colhidas em três estações de parição consecutivas (agosto a novembro/1999, janeiro a abril e agosto a novembro/2000). Pelo EIARA foram detectadas 63,8 por cento (44/69) de amostras positivas. Na primeira estação de parição foi detectado rotavírus em 82,4 por cento (14/17) dos bezerros que apresentaram quadro clínico de diarréia. No ano de 2000 a presença de rotavírus foi detectada em 41,7 por cento (5/12) e 62,5 por cento (25/40) do total de amostras examinadas. A análise do perfil eletroforético do genoma indicou grande diversidade, com quatro eletroferótipos distintos, todos com perfil longo, característico de rotavírus do grupo A.(AU)

During three successive seasons of calving (August to November 1999, January to April and August to November 2000) 69 fecal samples were collected from calves between 30 and 60 days of age presenting diarrhea, to account for the detection and prevalence of rotavirus. Samples were submited to an immunoenzymatic assay for rotavirus and adenovirus (kit EIARA-Fiocruz) and polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE). Of the 69 samples tested, 63.8% (44/69) were positive by EIARA. At the first calving season rotavirus was detected in feces from 14 of 17 calves (82.4%) with clinical signals of diarrhea. For the year 2000 seasons, rotavirus was detected in 5 of 12 (41.7%) and 25 of 40 (62.5%) of samples, respectively. The analysis of the eletrophoretic pattern of the positive samples showed four distinct group A rotavirus genome eletropherotypes.(AU)

Perfil eletroforético de rotavírus em amostras fecais diarréicas e após isolamento em cultura de células da linhagem MA104 / Rotaviruses electropherotyes in diarrhoeal faeces and after isolation in MA104 cell cultures

No presente estudo foi analisado o perfil eletroforético de 15 amostras de rotavírus, sendo 11 de bezerros, 02 de leitões e 02 de criança, que foram cultivadas até a sexta passagem em células da linhagem MA104, com o monitoramento realizado pela técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE). O objetivo foi comparar o perfil eletroforético de amostras fecais e após o isolamento As amostras leitões não revelaram mudanças de migração aparente, mas uma amostra apresentou um segmento adicional entre os segmentos 5 e 6, tanto no material anterior ao cultivo, quanto na amostra isolada. Em relação as amostras de crianças, uma apresentou diferença na velocidade de migração eletroforética. Além disso, uma amostra de bezerro apresentou um segmento adicional entre os segmentos 5 e 6. Estes dados ressaltam a importância da PAGE como uma técnica de triagem de amostras, que podem, posteriormente serem analisadas por técnicas moleculares mais especificas. As mudanças de comportamento na migração eletroforética dos segmentos genômicos do RNA viral podem ser sugestivas de alteração nas propriedades antigênicas, além do fato de que mudanças que ocorreram in vitro poderão, também, ocorrer in vivo

In the present work, we have analyzed the electrophoretic profile of 15 samples of rotavírus, 11 of calves, 02 of pigs and 02 of children, that have been cultivated on MA,104 cell up to the sixth passage. The polyacrilamide gel electrophoresis(PAGE) was used to confirm the viral isolation. The aim of the work was to compare the electropherotic profile of fecal samples before and after isolation in MA104 cells. The samples from pigs did not reveal apparent changes in bands migration. However, an additional segment, betweem segments 5 and 6 was detected, in one fecal sample and after isolation. Furthermore, one child sample showed differences in the electrophoretic mobility and also an additional segment was detected between segments 5 - 6 in one sample from a calf. The results emphasize the importance of PAGE as a technique to screen samples that could be analyzed posteriorly by more specific molecular techniques. The changes in the electrophoretic profiles of genomic segments of viral RNA might be suggestive of changes in the antigenic properties, besides the fact that changes that occurred in vitro may also happen in vivo