Use of omentum flap for induction of free skin graft healing / [Utilização de flap de omento para indução da cicatrização de enxertos cutâneos]

The objective of this study was to assess healing induction of free skin grafts following transposition of omental flap through a subcutaneous tunnel to the recipient bed. Macroscopic and microscopic evaluations were performed. Nineteen piglets were used. Two surgical wounds were created of each subject. The graft removed from the left side (LS) was placed on the right side (RS) without the omental flap in the graft-bed (control group-CG). On the LS, an omental flap was placed between the graft removed from the RS and the recipient bed (omentum group-OG). Macroscopic evaluations showed edema, which gradually decreased on both groups. Suture dehiscence was highest at day 10 compared to other days in both groups. The CG had a higher incidence of unvitalized tissue compared to OG, although no difference was found among days of postoperative evaluation. The presence of unvitalized tissue was seen on 32% on OG and 53% on CG. Microscopic evaluations revealed higher collagenization, reepithelization, keratinization and less swelling in the OG compared to CG. In conclusion, mesh skin grafts evolved satisfactorily in swine even in newly created bedding without granulation tissue, but with appropriate vascularization. The omentum flap provided better macroscopic and microscopic outcomes regarding graft integration.

O objetivo deste estudo foi verificar a indução da cicatrização de enxertos cutâneos em malha após a utilização de flap de omento transposto através de túnel no subcutâneo até o leito receptor. Avaliações macroscópica e microscópica foram realizadas. Foram utilizados 19 suínos. Duas feridas cirúrgicas foram criadas em cada animal. O enxerto removido do lado esquerdo (LE) foi fixado do lado direito (LD), sem a presença do flap de omento entre o enxerto e o leito receptor (grupo controle - GC). No LE, foi fixado um flap de omento entre o enxerto cutâneo removido do LD e o leito receptor (grupo omento - GO). As avaliações macroscópicas mostraram que o edema diminuiu gradativamente em ambos os grupos. A deiscência foi maior no dia 10 em comparação aos demais dias, em ambos os grupos, entre os diferentes dias de avaliação. Foi verificada a presença de tecido desvitalizado em 32% do GO e em 53% no GC. Foi observada, na avaliação microscópica, maior colagenização, reepitelização, queratinização e menor edema no GO, quando comparado ao GC. Concluiu-se, com este estudo, que enxertos cutâneos em malha evoluíram satisfatoriamente em suínos, mesmo em leito receptor recém-criado e sem presença de tecido de granulação, desde que vascularizado, e que o flap de omento propiciou melhores resultados macro e microscópicos relativos à integração do enxerto.

Diminuição do índice de necrose em enxertos cutâneos em coelhos mediante a aplicação de células tronco mesenquimais xenógenas / Reducing of the necrosis index in skin grafts in rabbits through application of xenogenous mesenchymal stem cells

O presente estudo teve como objetivo avaliar a inflamação em auto-enxertos cutâneos obtidos no terceiro, sétimo e décimo quarto dia de pós-operatório, além disso, buscou-se determinar diferenças no processo de cicatrização no grupo tratado com células tronco mesenquimais xenógenas em relação ao grupo controle utilizando a avaliação microscópica e imuno-histoquímico. A avaliação microscópica foi realizada utilizando cortes histológicos corados pela técnica de histoquímica com hematoxilina-eosina (HE), e a imuno-histoquímica, com cortes submetidos a anticorpos específicos. As variáveis analisadas foram quantidade de vasos, células inflamatórias, COX-2, Macrófagos e presença de necrose. Os dados foram analisados estatisticamente pelo software R. A quantidade de vasos foi maior (p<0,0001) no grupo tratamento (GT) durante o dia 3, enquanto no grupo controle (GC) foi maior no dia 7. No dia 3 houve menor porcentagem de necrose no grupo tratamento (GT) (p = 0,038). Nos demais dias avaliados não houve diferença entre a porcentagem de necrose observada nos dois tratamentos (p = 0,98), sendo de 53% para o grupo controle (GC) e 47% para o grupo tratamento (GT). Em relação ao número de macrófagos não houve diferença entre os grupos (p = 0,5637). Entretanto, entre os dias houve diferença significativa (p = 0,0223), sendo menor número de macrófagos no terceiro dia. A imunomarcação de COX-2 foi similar entre os grupos (p = 0,5637) e entre os dias (p = 0,9843). Portanto, o emprego das células tronco mesenquimais xenógenas em enxertos cutâneos promoveu menor ocorrência de necrose, favorecendo sua cicatrização, e não induziu o processo inflamatório, sendo assim factível seu uso em cirurgias reconstrutivas.

The present study aimed to assess inflammation in skin autografts obtained on the third, seventh and fourteenth postoperative day, in addition, it sought to determine differences in the healing process in the group treated with xenogenous mesenchymal stem cells in relation to to the control group using microscopic and immunohistochemical evaluation. Microscopic evaluation was performed using histological sections, stained by the hematoxylin-eosin (HE) histochemistry technique, and immunohistochemistry with sections were subjected to specific antibodies. The variables analyzed were the number of vessels, inflammatory cells (COX-2 and Macrophages) and the presence of necrosis. The data were analyzed statistically by software R. The number of vessels was higher (p< 0.0001) ) in the treatment group (GT) during day 3, while in the control group (CG) it was higher on day 7. On day 3 there was a lower percentage of necrosis in the treatment group (GT) (p = 0.038). On the other evaluated days, there was no difference between the percentage of necrosis observed in the two treatments (p = 0.98), being 53% for the control group (CG) and 47% for the treatment group (GT). Regarding the number of macrophages, there was no difference between groups (p = 0.5637). However, between days there was a significant difference (p = 0.0223), with a lower number of macrophages on the third day. The immunostaining of COX-2 was similar between groups (p = 0.5637) and between days (p = 0.9843). Therefore, the use of xenogenous mesenchymal stem cells in skin grafts promoted a lower occurrence of necrosis, favoring its healing, and did not induce the inflammatory process, thus making its use in reconstructive surgery feasible.

Diminuição do índice de necrose em enxertos cutâneos em coelhos mediante a aplicação de células tronco mesenquimais xenógenas / Reducing of the necrosis index in skin grafts in rabbits through application of xenogenous mesenchymal stem cells

O presente estudo teve como objetivo avaliar a inflamação em auto-enxertos cutâneos obtidos no terceiro, sétimo e décimo quarto dia de pós-operatório, além disso, buscou-se determinar diferenças no processo de cicatrização no grupo tratado com células tronco mesenquimais xenógenas em relação ao grupo controle utilizando a avaliação microscópica e imuno-histoquímico. A avaliação microscópica foi realizada utilizando cortes histológicos corados pela técnica de histoquímica com hematoxilina-eosina (HE), e a imuno-histoquímica, com cortes submetidos a anticorpos específicos. As variáveis analisadas foram quantidade de vasos, células inflamatórias, COX-2, Macrófagos e presença de necrose. Os dados foram analisados estatisticamente pelo software R. A quantidade de vasos foi maior (p<0,0001) no grupo tratamento (GT) durante o dia 3, enquanto no grupo controle (GC) foi maior no dia 7. No dia 3 houve menor porcentagem de necrose no grupo tratamento (GT) (p = 0,038). Nos demais dias avaliados não houve diferença entre a porcentagem de necrose observada nos dois tratamentos (p = 0,98), sendo de 53% para o grupo controle (GC) e 47% para o grupo tratamento (GT). Em relação ao número de macrófagos não houve diferença entre os grupos (p = 0,5637). Entretanto, entre os dias houve diferença significativa (p = 0,0223), sendo menor número de macrófagos no terceiro dia. A imunomarcação de COX-2 foi similar entre os grupos (p = 0,5637) e entre os dias (p = 0,9843). Portanto, o emprego das células tronco mesenquimais xenógenas em enxertos cutâneos promoveu menor ocorrência de necrose, favorecendo sua cicatrização, e não induziu o processo inflamatório, sendo assim factível seu uso em cirurgias reconstrutivas.(AU)

The present study aimed to assess inflammation in skin autografts obtained on the third, seventh and fourteenth postoperative day, in addition, it sought to determine differences in the healing process in the group treated with xenogenous mesenchymal stem cells in relation to to the control group using microscopic and immunohistochemical evaluation. Microscopic evaluation was performed using histological sections, stained by the hematoxylin-eosin (HE) histochemistry technique, and immunohistochemistry with sections were subjected to specific antibodies. The variables analyzed were the number of vessels, inflammatory cells (COX-2 and Macrophages) and the presence of necrosis. The data were analyzed statistically by software R. The number of vessels was higher (p< 0.0001) ) in the treatment group (GT) during day 3, while in the control group (CG) it was higher on day 7. On day 3 there was a lower percentage of necrosis in the treatment group (GT) (p = 0.038). On the other evaluated days, there was no difference between the percentage of necrosis observed in the two treatments (p = 0.98), being 53% for the control group (CG) and 47% for the treatment group (GT). Regarding the number of macrophages, there was no difference between groups (p = 0.5637). However, between days there was a significant difference (p = 0.0223), with a lower number of macrophages on the third day. The immunostaining of COX-2 was similar between groups (p = 0.5637) and between days (p = 0.9843). Therefore, the use of xenogenous mesenchymal stem cells in skin grafts promoted a lower occurrence of necrosis, favoring its healing, and did not induce the inflammatory process, thus making its use in reconstructive surgery feasible.(AU)

Clínica cirúrgica de pequenos animais: controle microbiológico na obtenção do plasma rico em plaquetas (PRP) / Microbiological control in obtaining platelet-rich plasma (PRP)

O plasma rico em plaquetas é um produto obtido por meio da centrifugação do sangue, e devido as suas propriedades de estimular a angiogênese, este é utilizado em cirurgias reconstrutivas a fim de evitar complicações pós-cirúrgicas. A coleta do sangue é feita de forma asséptica para obtenção do PRP, porém há possibilidade de contaminação bacteriana no momento da sua confecção podendo assim ocasionar complicações ao paciente. Objetivou-se ressaltar a importância do rigor no controle microbiológico do produto obtido, bem como avaliar a possibilidade de contaminação bacteriana no momento da confecção (PRP), antes do seu emprego no leito de enxertos cutâneos em coelhos. No presente estudo, apenas quatro amostras das sessenta confeccionadas apresentaram colônias bacterianas, indicando que o plasma rico em plaquetas obtido de maneira asséptica é propício e seguro em cirurgias reconstrutivas. Conclui-se que o rigor no controle microbiológico aliado a adequada desinfecção do centro cirúrgico e antissepsia do campo operatório, bem como o preparo asséptico do PRP, seu uso é indicado e seguro, não provocando riscos de contaminação da ferida cirúrgica.

Platelet-rich plasma is a product obtained by centrifuging blood, and due to its properties of stimulating angiogenesis, it is used in reconstructive surgery in order to avoid post-surgical complications. Blood collection is done aseptically to obtain platelet-rich plasma, but there is a possibility of bacterial contamination at the time of making it, thus causing complications to the patient. The objective was to emphasize the importance of rigor in the microbiological control of the product obtained, as well as to evaluate the possibility of bacterial contamination when making plateletrich plasma (PRP), before its use in the bed of skin grafts in rabbits. In the present study, only four samples of the sixty made had bacterial colonies, indicating that the platelet-rich plasma obtained aseptically is conducive and safe in reconstructive surgery. It is concluded that the rigor in microbiological control combined with adequate disinfection of the operating room and antisepsis of the operating field, as well as the aseptic preparation of the PRP, its use is indicated and safe, without causing risks of contamination of the surgical wound.

Clínica cirúrgica de pequenos animais: controle microbiológico na obtenção do plasma rico em plaquetas (PRP) / Microbiological control in obtaining platelet-rich plasma (PRP)

O plasma rico em plaquetas é um produto obtido por meio da centrifugação do sangue, e devido as suas propriedades de estimular a angiogênese, este é utilizado em cirurgias reconstrutivas a fim de evitar complicações pós-cirúrgicas. A coleta do sangue é feita de forma asséptica para obtenção do PRP, porém há possibilidade de contaminação bacteriana no momento da sua confecção podendo assim ocasionar complicações ao paciente. Objetivou-se ressaltar a importância do rigor no controle microbiológico do produto obtido, bem como avaliar a possibilidade de contaminação bacteriana no momento da confecção (PRP), antes do seu emprego no leito de enxertos cutâneos em coelhos. No presente estudo, apenas quatro amostras das sessenta confeccionadas apresentaram colônias bacterianas, indicando que o plasma rico em plaquetas obtido de maneira asséptica é propício e seguro em cirurgias reconstrutivas. Conclui-se que o rigor no controle microbiológico aliado a adequada desinfecção do centro cirúrgico e antissepsia do campo operatório, bem como o preparo asséptico do PRP, seu uso é indicado e seguro, não provocando riscos de contaminação da ferida cirúrgica.(AU)

Platelet-rich plasma is a product obtained by centrifuging blood, and due to its properties of stimulating angiogenesis, it is used in reconstructive surgery in order to avoid post-surgical complications. Blood collection is done aseptically to obtain platelet-rich plasma, but there is a possibility of bacterial contamination at the time of making it, thus causing complications to the patient. The objective was to emphasize the importance of rigor in the microbiological control of the product obtained, as well as to evaluate the possibility of bacterial contamination when making plateletrich plasma (PRP), before its use in the bed of skin grafts in rabbits. In the present study, only four samples of the sixty made had bacterial colonies, indicating that the platelet-rich plasma obtained aseptically is conducive and safe in reconstructive surgery. It is concluded that the rigor in microbiological control combined with adequate disinfection of the operating room and antisepsis of the operating field, as well as the aseptic preparation of the PRP, its use is indicated and safe, without causing risks of contamination of the surgical wound.(AU)

Autologous and homologous skin grafts treated with platelet-rich plasma (PRP): experimental study in rabbits / Enxertos cutâneos autólogos e homólogos tratados com plasma rico em plaquetas (PRP): estudo experimental em coelhos

The aim of the present study was to compare tissue repair of skin defects in rabbits submitted to autologous and homologous grafts treated or not with platelet-rich plasma (PRP). We selected nine rabbits and constituted four groups, designated as G1, in which were performed autologous graft treated with PRP; G2, autologous graft only; G3, homologous graft treated with PRP; and G4, homologous graft only. Macroscopic and histomorphometric evaluation was realized. The histomorphometric evaluation was performed by Hematoxylin/Eosin and Masson´s Trichrome staining with quantification of collagen fibers, macrophages, fibroblasts and vessels. The autologous graft treated with PRP showed positive influence on the early stage of the tissue repair process at the macroscopic evaluation, characterized by rosy color and cosmetic appearance. At the histomorphometric evaluation, there was no statistical difference in the number of macrophages and fibroblasts between the treated grafts or not with the PRP, as well as the quantification of vessels and collagen fibers. It can be concluded that PRP promotes a positive influence on the initial phase or "take" of the graft.(AU)

Objetiva-se com o presente estudo comparar a reparação tecidual de defeitos cutâneos em coelhos, submetidos a enxertos autólogos e homólogos, tratados ou não com plasma rico em plaquetas (PRP). Para isso, foram selecionados nove coelhos e constituídos quatro grupos experimentais, designados como G1, no qual foi realizado enxerto autólogo tratado com PRP; G2, enxerto autólogo; G3, enxerto homólogo tratado com PRP; e G4, enxerto homólogo. Foram realizadas avaliações macroscópica e histomorfométrica, por meio das colorações de Hematoxilina/Eosina e Tricômio de Masson, incluindo quantificação de fibras colágenas, contagem de macrófagos, fibroblastos e vasos. O uso do enxerto autólogo com PRP influenciou positivamente na fase inicial do processo de reparação tecidual à avaliação macroscópica, caracterizada por coloração rósea e de aspecto cosmético. À avaliação histomorfométrica, não houve diferença estatística quanto ao número de macrófagos e fibroblastos entre os enxertos tratados ou não com o PRP, bem como quanto às contagens de vasos e a quantificação das fibras colágenas. Conclui-se que o PRP sob a promoveu influência positiva na fase inicial ou de "pega" do enxerto autólogo.(AU)

Surgical sponge associated with platelets rich plasma in skin mesh grafts and layer in rabbits (Oryctolagus cuniculus) / Esponja cirúrgica associada com plasma rico em plaquetas em enxertos cutâneos em malha e camada em coelhos (Oryctolagus cuniculus)

The aim of this study was to evaluate of the efficacy of PRP employment associated with surgical sponges to improve the integration of the graft in the recipient bed. It was held at the Veterinary Hospital UNESP, Campus of Jaboticabal - SP, a study of 64 rabbits, divided into eight groups with eight animals. The groups were divided in control with saline solution 0,9%, control with PRP both without the sponge, surgical sponge with PRP, surgical sponge without PRP, and were used mesh and layer grafts in the respective groups. The data were submitted to statistical analysis (paired t-test, Kruskal-Wallis test, with subsequent use of the multiple comparison tests of Dunn, analysis of variance (F) test, Tukey test, P< 0.05). Edema and exudate with 3 and 3 and 7 days (P= 0,03 e P= 0,0049); coloring on the 14th day (P= 0,0001); cosmetic appearance on the 7th and 14th day (P= 0,0026 and P= 0,0001); mononuclear cells (P= 0,01) and polymorphonuclear (P= 0,01); fibroblast proliferation (P= 0,01); collagenous (P= 0,05); hemorrhage (P-007); necrosis and re-epithelialization (P= 0,2928 and P= 0,1). We concluded that the use of Platelet Rich Plasma Gel on skin grafts associated with a sponge as a compressive dressing promote the skin graft survival without a previous granulation tissue.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia do PRP associado com esponjas cirúrgicas na integração do enxerto ao leito receptor. Realizou-se, no Hospital Veterinário da Unesp, Jaboticabal, SP, um estudo com 64 coelhos, separados em oito grupos, com oito animais. Os grupos foram: Gprpc (PRP, sem esponja cirúrgica, enxerto camada), Gprpce (PRP, esponja cirúrgica, enxerto camada), Gcc (solução fisiológica 0,9%, sem esponja cirúrgica, enxerto camada), Gcce (solução fisiológica 0,9%, esponjas cirúrgicas, enxerto camada), Gprpm (PRP, sem esponja cirúrgica, enxerto malha), Gprpme (PRP, esponja cirúrgica, enxerto malha), Gcm (solução fisiológica 0,9%, sem esponja cirúrgica, enxerto malha) e Gcce (solução fisiológica 0,9%, esponjas cirúrgicas, malha). Os dados foram analisados pelo teste t emparelhado, Kruskal-Wallis, análise de variância, e teste de Tukey (P<0,05). Edema e exsudato presente com três e sete dias (P=0,03 e P=0,0049); coloração cianótica no 14º dia (P=0,0001); aspecto cosmético bom no sétimo e no 14º dia (P=0,00026 e P=0,0001); presença de células mononucleares (P=0,01) e polimorfonucleares (P=0,01); proliferação de fibroblastos discreta (P=0,01); colagenização intensa (P=0,05); hemorragia discreta (P=0,007); ausência de diferença significativa em necrose e reepitelização (P=0,2928 e P=0,1). Conclui-se que o emprego do PRP gel em enxertos cutâneos associando esponjas cirúrgicas como curativo compressivo favorece sua integração ao leito receptor sem a presença prévia de tecido de granulação.(AU)

Surgical sponge associated with platelets rich plasma in skin mesh grafts and layer in rabbits (Oryctolagus cuniculus) / Esponja cirúrgica associada com plasma rico em plaquetas em enxertos cutâneos em malha e camada em coelhos (Oryctolagus cuniculus)

The aim of this study was to evaluate of the efficacy of PRP employment associated with surgical sponges to improve the integration of the graft in the recipient bed. It was held at the Veterinary Hospital UNESP, Campus of Jaboticabal - SP, a study of 64 rabbits, divided into eight groups with eight animals. The groups were divided in control with saline solution 0,9%, control with PRP both without the sponge, surgical sponge with PRP, surgical sponge without PRP, and were used mesh and layer grafts in the respective groups. The data were submitted to statistical analysis (paired t-test, Kruskal-Wallis test, with subsequent use of the multiple comparison tests of Dunn, analysis of variance (F) test, Tukey test, P< 0.05). Edema and exudate with 3 and 3 and 7 days (P= 0,03 e P= 0,0049); coloring on the 14th day (P= 0,0001); cosmetic appearance on the 7th and 14th day (P= 0,0026 and P= 0,0001); mononuclear cells (P= 0,01) and polymorphonuclear (P= 0,01); fibroblast proliferation (P= 0,01); collagenous (P= 0,05); hemorrhage (P-007); necrosis and re-epithelialization (P= 0,2928 and P= 0,1). We concluded that the use of Platelet Rich Plasma Gel on skin grafts associated with a sponge as a compressive dressing promote the skin graft survival without a previous granulation tissue.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia do PRP associado com esponjas cirúrgicas na integração do enxerto ao leito receptor. Realizou-se, no Hospital Veterinário da Unesp, Jaboticabal, SP, um estudo com 64 coelhos, separados em oito grupos, com oito animais. Os grupos foram: Gprpc (PRP, sem esponja cirúrgica, enxerto camada), Gprpce (PRP, esponja cirúrgica, enxerto camada), Gcc (solução fisiológica 0,9%, sem esponja cirúrgica, enxerto camada), Gcce (solução fisiológica 0,9%, esponjas cirúrgicas, enxerto camada), Gprpm (PRP, sem esponja cirúrgica, enxerto malha), Gprpme (PRP, esponja cirúrgica, enxerto malha), Gcm (solução fisiológica 0,9%, sem esponja cirúrgica, enxerto malha) e Gcce (solução fisiológica 0,9%, esponjas cirúrgicas, malha). Os dados foram analisados pelo teste t emparelhado, Kruskal-Wallis, análise de variância, e teste de Tukey (P<0,05). Edema e exsudato presente com três e sete dias (P=0,03 e P=0,0049); coloração cianótica no 14º dia (P=0,0001); aspecto cosmético bom no sétimo e no 14º dia (P=0,00026 e P=0,0001); presença de células mononucleares (P=0,01) e polimorfonucleares (P=0,01); proliferação de fibroblastos discreta (P=0,01); colagenização intensa (P=0,05); hemorragia discreta (P=0,007); ausência de diferença significativa em necrose e reepitelização (P=0,2928 e P=0,1). Conclui-se que o emprego do PRP gel em enxertos cutâneos associando esponjas cirúrgicas como curativo compressivo favorece sua integração ao leito receptor sem a presença prévia de tecido de granulação.(AU)

EFEITO DO GEL DE PLASMA RICO EM PLAQUETAS NA CICATRIZAÇÃO DE ENXERTOS CUTÂNEOS EM EQUINOS

Abstract The platelet-rich plasma (PRP) gel is an autologous platelet concentration in a small plasma volume with the potential to improve the integration of the grafts. Eight adult equines were used, performing skin grafts, with 2.5x2.5 centimeters, on both sides of the neck, in which one was the treatment side, using the PRP gel, and the other side was the control. The animals were assessed after the surgery on days 0, 7, 14, 21, and 28, by clinical, histological, morphometric, and culture analysis of the grafts. The clinical, morphological, and biological analysis of tissue grafts revealed no significant differences between the control group and the treatment group with PRP. Histologic evaluation revealed an increase in acute inflammation on day 7 and collagen concentration on day 14, resulting from the release of growth factors by the platelets present in the gel, which did not differ in further moments. According to the experimental conditions used in this study, we concluded there were no significant differences between the side treated with PRP and the control side in skin grafts in horses.

Resumo O gel de plasma rico em plaquetas (PRP) é uma concentração autóloga de plaquetas em um pequeno volume de plasma com potencial de melhorar a integração dos enxertos. Foram utilizados oito equinos adultos, realizando-se enxertos de pele com largura de 2,5 x 2,5 centímetros em cada lado do pescoço, sendo um lado o tratamento, com o uso do gel de PRP e do outro lado o controle. Os animais foram avaliados nos dias 0, 7, 14, 21 e 28 após a cirurgia por meio de avaliação clínica, histológica, morfométrica e cultura bacteriana dos enxertos. As avaliações clínicas, morfométricas e bacteriológicas dos tecidos enxertados não revelaram diferenças significativas entre o grupo controle e o grupo tratamento com PRP. A avaliação histológica revelou um aumento da inflamação aguda no momento 7 e de concentração de colágeno no momento 14 no grupo tratamento, decorrente da liberação de fatores de crescimento pelas plaquetas presentes no gel, que não diferiu nos demais momentos. De acordo com as condições experimentais utilizadas neste estudo, pode-se concluir que não houve diferenças significativas entre o lado tratado com PRP e o lado controle em enxertos cutâneos em equinos.

Efeito do gel de plasma rico em plaquetas na cicatrização de enxertos cutâneos em equinos / Effect of platelet-rich plasma gel on graft skin healing in equines

O gel de plasma rico em plaquetas (PRP) é uma concentração autóloga de plaquetas em um pequeno volume de plasma com potencial de melhorar a integração dos enxertos. Foram utilizados oito equinos adultos, realizando-se enxertos de pele com largura de 2,5 x 2,5 centímetros em cada lado do pescoço, sendo um lado o tratamento, com o uso do gel de PRP e do outro lado o controle. Os animais foram avaliados nos dias 0, 7, 14, 21 e 28 após a cirurgia por meio de avaliação clínica, histológica, morfométrica e cultura bacteriana dos enxertos. As avaliações clínicas, morfométricas e bacteriológicas dos tecidos enxertados não revelaram diferenças significativas entre o grupo controle e o grupo tratamento com PRP. A avaliação histológica revelou um aumento da inflamação aguda no momento 7 e de concentração de colágeno no momento 14 no grupo tratamento, decorrente da liberação de fatores de crescimento pelas plaquetas presentes no gel, que não diferiu nos demais momentos. De acordo com as condições experimentais utilizadas neste estudo, pode-se concluir que não houve diferenças significativas entre o lado tratado com PRP e o lado controle em enxertos cutâneos em equinos.(AU)

The platelet-rich plasma (PRP) gel is an autologous platelet concentration in a small plasma volume with the potential to improve the integration of the grafts. Eight adult equines were used, performing skin grafts, with 2.5x2.5 centimeters, on both sides of the neck, in which one was the treatment side, using the PRP gel, and the other side was the control. The animals were assessed after the surgery on days 0, 7, 14, 21, and 28, by clinical, histological, morphometric, and culture analysis of the grafts. The clinical, morphological, and biological analysis of tissue grafts revealed no significant differences between the control group and the treatment group with PRP. Histologic evaluation revealed an increase in acute inflammation on day 7 and collagen concentration on day 14, resulting from the release of growth factors by the platelets present in the gel, which did not differ in further moments. According to the experimental conditions used in this study, we concluded there were no significant differences between the side treated with PRP and the control side in skin grafts in horses.(AU)

Efeito do gel de plasma rico em plaquetas na cicatrização de enxertos cutâneos em equinos / Effect of platelet-rich plasma gel on graft skin healing in equines

O gel de plasma rico em plaquetas (PRP) é uma concentração autóloga de plaquetas em um pequeno volume de plasma com potencial de melhorar a integração dos enxertos. Foram utilizados oito equinos adultos, realizando-se enxertos de pele com largura de 2,5 x 2,5 centímetros em cada lado do pescoço, sendo um lado o tratamento, com o uso do gel de PRP e do outro lado o controle. Os animais foram avaliados nos dias 0, 7, 14, 21 e 28 após a cirurgia por meio de avaliação clínica, histológica, morfométrica e cultura bacteriana dos enxertos. As avaliações clínicas, morfométricas e bacteriológicas dos tecidos enxertados não revelaram diferenças significativas entre o grupo controle e o grupo tratamento com PRP. A avaliação histológica revelou um aumento da inflamação aguda no momento 7 e de concentração de colágeno no momento 14 no grupo tratamento, decorrente da liberação de fatores de crescimento pelas plaquetas presentes no gel, que não diferiu nos demais momentos. De acordo com as condições experimentais utilizadas neste estudo, pode-se concluir que não houve diferenças significativas entre o lado tratado com PRP e o lado controle em enxertos cutâneos em equinos.

The platelet-rich plasma (PRP) gel is an autologous platelet concentration in a small plasma volume with the potential to improve the integration of the grafts. Eight adult equines were used, performing skin grafts, with 2.5x2.5 centimeters, on both sides of the neck, in which one was the treatment side, using the PRP gel, and the other side was the control. The animals were assessed after the surgery on days 0, 7, 14, 21, and 28, by clinical, histological, morphometric, and culture analysis of the grafts. The clinical, morphological, and biological analysis of tissue grafts revealed no significant differences between the control group and the treatment group with PRP. Histologic evaluation revealed an increase in acute inflammation on day 7 and collagen concentration on day 14, resulting from the release of growth factors by the platelets present in the gel, which did not differ in further moments. According to the experimental conditions used in this study, we concluded there were no significant differences between the side treated with PRP and the control side in skin grafts in horses.

Histochemical and immunohistochemical evaluation of angiogenesis in rabbits (Oryctolagus cuniculus) submitted to skin grafts associated with platelet-rich plasma / Histoquímica e imunohistoquíca na avaliação da angiogênese em coelhos submetidos ao emprego de enxertos cutâneos associado com plasma rico em plaquetas

Histochemical staining consists of a set of specific chemical reactions of structures or tissue-endogenous substances. Immunohistochemistry allows verification of proteins in tissues related to biological and pathological factors. The standardization of methods to assess angiogenesis resulting from formation of new blood vessels in procedures with stimulants is important to facilitate the implementation of research as well as to assist interpretation of data. In rabbits some markers of angiogenesis antibodies in the skin are not standardized because of cross-reactions that may occur because the antibodies are made from such animals.The aim of this study was to analyze the immunohistochemical methods through dyes and immunohistochemical markers angiogenesis in rabbits (Oryctolagus cuniculus) having undergone reconstructive surgery with skin grafts associated with plasma angiogenesis stimulator rich in platelets, in order to evaluate which method would be better to visualize the vessels, as well as to evaluate which antibody would promote better immunostaining, and find the differences between the methods and to standardize the methodology to be applied in experiments using rabbits. Sixteen rabbits were used, split into two groups of eight animals: Gprp (plasma rich in platelets) and Gc (control, saline solution, 9%).(AU)

Colorações histoquímicas consistem de um conjunto de reações químicas específicas das estruturas ou substâncias endógenas do tecido. Logo a Imunohistoquímica permite observar proteínas presentes nos tecidos relacionadas com fatores determinantes do comportamento biológico e patológico. A padronização dos métodos que avaliam a angiogênese decorrente de procedimentos que utilizam substâncias estimulantes à formação de novos vasos são importantes, a fim de facilitar a execução das pesquisas, bem como auxiliar na interpretação dos dados, visto que em coelhos alguns anticorpos marcadores de angiogênese na pele ainda não são padronizadas em virtude das reações cruzadas que podem ocorrer devido aos anticorpos serem confeccionados a partir de tais animais. Objetivou-se analisar os métodos histoquímicos por meio das colorações e imunohistoquímicas com marcadores de angiogênese em coelhos (Oryctolagus cuniculus) submetidos ao emprego de enxertos cutâneos associado com estimulador de angiogênese plasma rico em plaquetas, a fim de avaliar qual método seria melhor para visualização dos vasos, bem como avaliar qual anticorpo promoveria melhor imunomarcação, buscando-se assim encontrar a diferenças entre os métodos e padronizar a metodologia a ser aplicada em experimentos que utilizem coelhos.(AU)

Epitelização de enxertos cutâneos em feridas recentes de coelhos tratados com membrana amniótica canina e/ou laserterapia / Skin graft epithelialization in rabbit fresh wounds treated with amniotic membrane and/or laser therapy

A enxertia cutânea é uma técnica cirúrgica simples e bastante útil para o reparo de feridas, principalmente aquelas onde existe dificuldade da aplicação do fechamento primário ou de outras técnicas reconstrutivas. Entretanto, para a sobrevivência do enxerto, é necessário que o leito da ferida esteja saudável e com presença de tecido de granulação exuberante. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a aplicação da membrana amniótica e da laserterapia como potenciais estimulantes da cicatrização em enxertos aplicados em feridas sem tecido de granulação. Foram utilizados 42 coelhos, divididos em quatro grupos: grupo controle (GC), grupo membrana (GM), grupo laser (GL) e grupo membrana e laser (GML), submetidos a avaliações macro e microscópicas. Na avaliação macroscópica, foi possível notar que os pacientes dos grupos nos quais a membrana amniótica foi utilizada (GM e GML) apresentaram evidências associadas à acentuada reação inflamatória, à falha de integração do enxerto e à consequente necrose dele. Já os pacientes do GL apresentaram melhor aspecto do enxerto no último dia de avaliação. Na análise microscópica, observou-se intensa integração do enxerto à derme, reepitelização acentuada e escassas células inflamatórias no local do enxerto no GL. O contrário foi observado nos pacientes do GM e GML, nos quais aparentemente houve rejeição da membrana. A formação de colágeno não se correlacionou com outros fatores, como inflamação e necrose, em nenhum dos grupos de tratamento. Dessa forma, é possível afirmar que a laserterapia mostrou ser efetiva, contribuindo para o processo cicatricial e a integração do enxerto. Já a membrana amniótica canina não deve ser utilizada para esse fim, pois provoca intensa reação inflamatória, além de impedir a nutrição do enxerto.(AU)

Skin grafting is a simple surgical technique and useful to repair wounds, especially those where there is a difficulty to apply primary closure skin or other reconstructive techniques. However, for graft survival a healthy wound bed and the presence of an exuberant granulation tissue are necessary. This study aimed to evaluate the application of amniotic membrane and laser therapy as potential healing stimulants in grafts applied in wounds without granulation tissue. For this, we used 42 rabbits divided into four treatment groups, control group (CG), membrane group (MG), laser group (LG) and membrane and laser group (MLG), submitted to macroscopic and microscopic evaluation. The macroscopic examination showed that the patients of the groups where the amniotic membrane was used in order to stimulate re-epithelialization (MG and MLG) presented evidences associated with severe inflammatory reaction, graft integration failure and consequent necrosis. LG patients apparently had the best graph aspect in the last valuation date. Microscopic examination showed intense integration of the graft to the dermis, high re-epithelialization level, and scarce inflammatory cells in the graft site of LG patients. The opposite was observed in patients in the MG and MLG groups, where a rejection of the membrane was observed. Finally, collagen formation was not correlated with other factors such as inflammation and necrosis in any of the treatment groups. We can conclude that laser therapy was effective, contributing to the healing process and integration of the graft. Thus, canine amniotic membrane should not be used for this purpose because it causes intense inflammatory reaction besides avoiding graft nutrition.(AU)

Epitelização de enxertos cutâneos em feridas recentes de coelhos tratados com membrana amniótica canina e/ou laserterapia / Skin graft epithelialization in rabbit fresh wounds treated with amniotic membrane and/or laser therapy

A enxertia cutânea é uma técnica cirúrgica simples e bastante útil para o reparo de feridas, principalmente aquelas onde existe dificuldade da aplicação do fechamento primário ou de outras técnicas reconstrutivas. Entretanto, para a sobrevivência do enxerto, é necessário que o leito da ferida esteja saudável e com presença de tecido de granulação exuberante. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a aplicação da membrana amniótica e da laserterapia como potenciais estimulantes da cicatrização em enxertos aplicados em feridas sem tecido de granulação. Foram utilizados 42 coelhos, divididos em quatro grupos: grupo controle (GC), grupo membrana (GM), grupo laser (GL) e grupo membrana e laser (GML), submetidos a avaliações macro e microscópicas. Na avaliação macroscópica, foi possível notar que os pacientes dos grupos nos quais a membrana amniótica foi utilizada (GM e GML) apresentaram evidências associadas à acentuada reação inflamatória, à falha de integração do enxerto e à consequente necrose dele. Já os pacientes do GL apresentaram melhor aspecto do enxerto no último dia de avaliação. Na análise microscópica, observou-se intensa integração do enxerto à derme, reepitelização acentuada e escassas células inflamatórias no local do enxerto no GL. O contrário foi observado nos pacientes do GM e GML, nos quais aparentemente houve rejeição da membrana. A formação de colágeno não se correlacionou com outros fatores, como inflamação e necrose, em nenhum dos grupos de tratamento. Dessa forma, é possível afirmar que a laserterapia mostrou ser efetiva, contribuindo para o processo cicatricial e a integração do enxerto. Já a membrana amniótica canina não deve ser utilizada para esse fim, pois provoca intensa reação inflamatória, além de impedir a nutrição do enxerto.(AU)

Skin grafting is a simple surgical technique and useful to repair wounds, especially those where there is a difficulty to apply primary closure skin or other reconstructive techniques. However, for graft survival a healthy wound bed and the presence of an exuberant granulation tissue are necessary. This study aimed to evaluate the application of amniotic membrane and laser therapy as potential healing stimulants in grafts applied in wounds without granulation tissue. For this, we used 42 rabbits divided into four treatment groups, control group (CG), membrane group (MG), laser group (LG) and membrane and laser group (MLG), submitted to macroscopic and microscopic evaluation. The macroscopic examination showed that the patients of the groups where the amniotic membrane was used in order to stimulate re-epithelialization (MG and MLG) presented evidences associated with severe inflammatory reaction, graft integration failure and consequent necrosis. LG patients apparently had the best graph aspect in the last valuation date. Microscopic examination showed intense integration of the graft to the dermis, high re-epithelialization level, and scarce inflammatory cells in the graft site of LG patients. The opposite was observed in patients in the MG and MLG groups, where a rejection of the membrane was observed. Finally, collagen formation was not correlated with other factors such as inflammation and necrosis in any of the treatment groups. We can conclude that laser therapy was effective, contributing to the healing process and integration of the graft. Thus, canine amniotic membrane should not be used for this purpose because it causes intense inflammatory reaction besides avoiding graft nutrition.(AU)

Histochemical and immunohistochemical evaluation of angiogenesis in rabbits (Oryctolagus cuniculus) submitted to skin grafts associated with platelet-rich plasma / Histoquímica e imunohistoquíca na avaliação da angiogênese em coelhos submetidos ao emprego de enxertos cutâneos associado com plasma rico em plaquetas

Histochemical staining consists of a set of specific chemical reactions of structures or tissue-endogenous substances. Immunohistochemistry allows verification of proteins in tissues related to biological and pathological factors. The standardization of methods to assess angiogenesis resulting from formation of new blood vessels in procedures with stimulants is important to facilitate the implementation of research as well as to assist interpretation of data. In rabbits some markers of angiogenesis antibodies in the skin are not standardized because of cross-reactions that may occur because the antibodies are made from such animals.The aim of this study was to analyze the immunohistochemical methods through dyes and immunohistochemical markers angiogenesis in rabbits (Oryctolagus cuniculus) having undergone reconstructive surgery with skin grafts associated with plasma angiogenesis stimulator rich in platelets, in order to evaluate which method would be better to visualize the vessels, as well as to evaluate which antibody would promote better immunostaining, and find the differences between the methods and to standardize the methodology to be applied in experiments using rabbits. Sixteen rabbits were used, split into two groups of eight animals: Gprp (plasma rich in platelets) and Gc (control, saline solution, 9%). The same technique of reconstructive surgery using graft mesh was performed on each rabbit. The groups differed only in the application of platelet-rich plasma before the surgical wound synthesis. Samples for evaluation of angiogenesis were collected 15 days after the surgical procedure. The dyes Hematoxylin & Eosin and Masson's Trichrome were used in the histochemical study to evaluate vascular proliferation. Markers CD31, CD34 and Caveolin-1 was used for the immunohistochemical study. The evaluation between the groups (Gprp and Gc) in regard to the categorical variable (vascular proliferation intensity) used the Kruskal-Wallis test with p values equal to or less than 0.05 being considered significant. The immunohistochemistry was subjected to analysis of variance for a completely randomized design, with two groups and five repetitions (medium) and 5% significance level. Multiple comparison of groups resulted in the Tukey test (p=0.05) used. The amount of vascular proliferation assessed by histochemical method HE and Masson's Trichrome was found to be a significant variable in Gprp when compared with group Gc. When evaluating the methods used, there was no significant difference. There was no difference in the three markers which were used for correlating microvessels; however, there was more intense staining of vessels when Caveolin-1 Antibody was used. This caused intense marking of the capillaries and small vessels, as well as of larger vessels. When using CD31 and CD34, the same was observed, but it was not as intense as with Caveolin-1; though some cases showed sincere and discreet marking. The results of this study demonstrated that the histochemical methods performed are effective for semi-quantitative assessment of angiogenesis. The immunohistochemical comparison of Caveolin-1, CD31, and CD34 as markers of angiogenesis in rabbits showed that both antibodies could immunostain the newly formed vessels; but the Caveolin-1 showed better immunostaining in small and medium-sized vessels, as well as a minor presence in the background. Although not specific markers for angiogenesis, they can be used as immunohistochemical markers of vascular endothelium in rabbits.(AU)

Colorações histoquímicas consistem de um conjunto de reações químicas específicas das estruturas ou substâncias endógenas do tecido. Logo a Imunohistoquímica permite observar proteínas presentes nos tecidos relacionadas com fatores determinantes do comportamento biológico e patológico. A padronização dos métodos que avaliam a angiogênese decorrente de procedimentos que utilizam substâncias estimulantes à formação de novos vasos são importantes, a fim de facilitar a execução das pesquisas, bem como auxiliar na interpretação dos dados, visto que em coelhos alguns anticorpos marcadores de angiogênese na pele ainda não são padronizadas em virtude das reações cruzadas que podem ocorrer devido aos anticorpos serem confeccionados a partir de tais animais. Objetivou-se analisar os métodos histoquímicos por meio das colorações e imunohistoquímicas com marcadores de angiogênese em coelhos (Oryctolagus cuniculus) submetidos ao emprego de enxertos cutâneos associado com estimulador de angiogênese plasma rico em plaquetas, a fim de avaliar qual método seria melhor para visualização dos vasos, bem como avaliar qual anticorpo promoveria melhor imunomarcação, buscando-se assim encontrar a diferenças entre os métodos e padronizar a metodologia a ser aplicada em experimentos que utilizem coelhos. Utilizou-se 16 coelhos, separados em dois grupos com oito animais, compreendendo os grupos Gprp (plasma rico em plaquetas) e Gc (controle, solução fisiológica 0,9%). Em todos os animais foi realizada a mesma técnica de cirurgia reconstrutiva de enxertia do tipo malha, os grupos diferiram apenas a aplicação do plasma rico em plaquetas antes da síntese da ferida cirúrgica. As amostras para avaliação da angiogênese foram coletadas após 15 dias do procedimento cirúrgico. Utilizou-se no estudo histoquímico as colorações Hematoxilina & Eosina e Tricrômico de Masson para avaliação da proliferação vascular, e os anticorpos CD31 e CD34 e Caveolina - 1 para avaliação imunohistoquímica. A comparação entre os grupos (Gprp e Gc) em relação à variável categórica (intensidade de proliferação vascular) foi utilizado o teste de Kruskal-Wallis, com valores de p iguais ou inferiores a 0,05 foram considerados significativos. Os dados imuno-histoquímico foram submetidos à análise de variância para um delineamento inteiramente ao acaso, com 2 grupos e 5 repetições (médias) e nível de significância de 5%. Nas comparações múltiplas das médias dos grupos, utilizou-se o teste de Tukey (α = 0,05). A intensidade de proliferação vascular avaliada pelo método histoquímico HE e Tricômico de Masson encontrou-se que tal variável foi significativa no Gprp, quando comparado com o Gc. Avaliando os métodos utilizados não houve diferença significativa. A contagem microvascular (MVC) realizada com os diferentes marcadores (Caveolina-1, CD31 e CD34) foi significativa no Gprp. Correlacionando a contagem microvascular dos três marcadores utilizados não houve diferença significativa, no entanto observou-se marcação mais intensa dos vasos utilizando o anticorpo Caveolina-1, sendo intensa a marcação dos capilares, vasos de pequeno calibre, bem como em vasos maiores. Nas avaliações de CD31 e CD34 observou que houve imunomarcação dos vasos, porém não foi intensa como a Caveolina-1, alguns casos apresentaram fundo, bem como marcação discreta. Os resultados encontrados neste estudo evidenciaram os métodos histoquímicos são eficazes para avaliação semiquantitativa da angiogênese. A comparação imunohistoquímicas da Caveolina-1, CD31 e CD34 como marcadores de angiogênese em coelhos evidenciaram que ambos os anticorpos são capazes de imunomarcar os vasos neoformados, porém a Caveolina-1 apresentou melhor imunomarcação de vasos de pequeno e médio calibre, bem como menor presença de fundo, embora não seja um marcador específico para angiogênese pode ser utilizada como marcador imunohistoquímico de endotélio vascular em coelhos.(AU)

LASERTERAPIA DE BAIXA INTENSIDADE NA AMPLIAÇÃO DAS DIMENSÕES DE RETALHOS SUBDÉRMICOS EM RATOS WISTAR

Atualmente houve aumento significativo de pacientes oncológicos atendidos na rotina Veterinária. A principal forma de controle de diversos neoplasmas é com a ressecção cirúrgica, e devido à excisão de grandes neoplasmas, é comum a confecção de extensos defeitos, aumentando a indicação de cirurgias reconstrutivas. Novas técnicas para síntese dos defeitos criados passaram a serem utilizadas na Medicina Veterinária, como o uso de retalhos ou enxertos. Na confecção de retalhos subdérmicos, uma das limitações é a proporção entre comprimento e largura do retalho, pois o comprimento não deve passar a proporção de 2,5:1, pois com o aumento desta proporção, eleva o risco de complicações no pós operatório. Sendo assim, novas maneiras para aperfeiçoar esta modalidade e melhorar a reparação tecidual no pós-operatório vem sendo pesquisadas, como por exemplo, a Laserterapia de Baixa Intensidade (LBI). Este trabalho teve como objetivo avaliar a eficácia da LBI em duas dosagens diferentes, afim de aumentar a proporção na extensão da confecção de retalhos subdérmicos, que atualmente é limitada à 2,5:1 (comprimento x largura). Foram utilizados 24 ratos (Rattus norvergicus albinus wistar), sendo cada um submetido à confecção de retalho cutâneo em seu dorso, distribuídos de forma aleatória em três grupos (Controle sem a terapia da LBI, grupo na dose de 4J/cm² e grupo na dose de 6J/cm²). Os dois grupos que foram irradiados pela terapia à laser sobre o retalho nos dias D0 (dia do procedimento cirúrgico), D2, D4 e D6. A avaliação macroscópica foi realizada aos dias três e sete não mostrou alteração de acordo com o tratamento estabelecido. A avaliação microscópica com a análise histopatológica não apontou diferença estatística entre os grupos. Conclui-se que a exposição de retalhos cutâneos à dose de energia 4J/cm² e 6J/cm² a cada 48 horas não interfere perceptivelmente sobre a cicatrização e a inflamação local, não contribuindo para o aumento da proporção do retalho.

Currently, there has been a significant increase in cancer patients treated in the veterinary routine. The main form of control of several neoplasms is with surgical resection, and due to the excision of large neoplasms, it is common to make extensive defects, increasing the indication for reconstructive surgery. New techniques for synthesizing the created defects started to be used in Veterinary Medicine, such as the use of flaps or grafts. In the manufacture of subdermal flaps, one of the limitations is the proportion between length and width of the flap, as the length should not exceed the proportion of 2.5:1, as the increase in this proportion increases the risk of complications in the postoperative period. Thus, new ways to improve this modality and improve tissue repair in the postoperative period have been researched, such as Low-level Laser Therapy (LLL). This study aimed to evaluate the effectiveness of LLLT at two different dosages, in order to increase the proportion in the extension of subdermal flaps, which is currently limited to 2.5:1 (length x width). Twenty-four rats (Rattus norvergicus albinus wistar) were used, each one submitted to a skin flap on its back, randomly distributed into three groups (Control - without LLL therapy, 4J/cm² dose group and no group dose of 6J/cm²). The two groups that were irradiated by laser therapy over the flap on days D0 (day of the surgical procedure), D2, D4 and D6. The macroscopic evaluation was carried out on days three and seven, showing no change in accordance with the established treatment. Microscopic evaluation with histopathological analysis showed no statistical difference between groups. It is concluded that the exposure of skin flaps to the dose of energy 4J/cm² and 6J/cm² every 48 hours does not perceptibly interfere with healing and local inflammation, not contributing to the increase in the proportion of the flap.

CÉLULAS MESENQUIMAIS ADIPODERIVADAS ALOGÊNICAS NA ANGIOGÊNESE DURANTE A FASE INFLAMATÓRIA DE CICATRIZAÇÃO EM ENXERTOS CUTÂNEOS DE ESPESSURA COMPLETA

Enxertos cutâneos de espessura completa possuem a característica inicial de nutrição sem um aporte sanguíneo autônomo, predispondo a altas taxas de necrose. Células mesenquimais adipoderivadas (ADSC) auxiliam no desenvolvimento da angiogênese e cicatrização cutânea, contudo, os mecanismos envolvidos ainda não são completamente compreendidos. Esse trabalho teve como objetivo investigar a influência de ADSCs no desenvolvimento de novos vasos sanguíneos, seu efeito anti-inflamatório e o tempo de sobrevida das células após sua aplicação em um modelo de enxerto cutâneo de espessura completa. As ADSCs foram isoladas de ratos Wistar positivos para a proteína fluorescente verde (GFP). Os demais animais experimentais foram submetidos aos enxertos e posteriormente atribuídos de forma aleatória aos grupos ADSC, solução salina ou SHAM. Animais pertencentes ao grupo ADSC receberam 1 x 106 células ressuspendidas em 200 uL de solução salina, o grupo SS recebeu apenas 200 g de solução salina e o grupo SHAM não recebeu nenhum tratamento. Dezoito animais foram eutanasiados aos três dias, os demais aos cinco dias. A avaliação macroscópica analisou a taxa de contração, presença de sangramento ou exsudato. Os enxertos foram coletados para avaliação molecular e histopatológica, e aqueles pertencentes ao grupo ADSC foram corados com anticorpo anti-GFP para avaliar a presença e localização das células. O grupo ADSCs demonstrou menor taxa de contração e aumento da expressão de enzimas, fatores de crescimento e marcadores de superfície pró-angiogênicos. Marcadores de hipóxia, inflamação e estresse oxidativo tiveram expressão reduzida no grupo tratado com ADSCs. As células marcadas foram localizadas em ambos os dias de avaliação. Em conclusão, baseado nos dados obtidos, as células marcadas permanecem no local de aplicação ao terceiro e quinto dias de avaliação e podem promover a angiogênese precoce em enxertos cutâneos de espessura completa, reduzindo o tempo de exposição à hipóxia e podem aumentar as taxas de sucesso do enxerto.

Full-thickness skin grafts have the initial characteristic of graft nutrition without an autonomous blood supply, predicting to high necrosis rates. Adipose-derived stem cells supports angiogenesis development and wound healing, however, the mechanisms involved still not completely understood. In this study, we aimed to investigate ADSC influence in blood vessels growth, its anti-inflammatory effect and the remaining cell survival time on skin graft in full-thickness skin graft rat model. ADSCs were isolated from green-fluorescent protein positive Wistar rats. All the remaining experimental animals were submitted to skin graft and randomly assigned to ADSC, saline solution or SHAM groups. ADSC animals received 1x106 ADSCs GFP-positives resuspended in 200 g of saline solution. SS group only received 200 g of saline solution and SHAM group did not receive any treatment. Eighteen animals were euthanized at three days, the remaining at five days. Macroscopic evaluation was based on FTSG contraction rates, bleeding and exudate presence. Skin grafts were collected for molecular and histopathological assessment, and the ADSC group grafts were also immunostained with anti-GFP antibody for presence and location of cells. ADSC group have showed lower contraction rates and significant enhanced expression of proangiogenic enzymes, growth factors, surface markers. Expression of hypoxia, proinflammatory cell types and oxidative stress markers was decreased on ADSC treated group. The labeled ADSCs could be found on grafted tissue at both evaluation times. In conclusion, based on the obtained data, labeled ADSC remain on injected site at third and fifth evaluation days and can promote early angiogenesis development of FTSG, reducing hypoxia exposure and may increase the graft survival rates.

EFEITO DE EXTRATOS DE PRÓPOLIS VERDE E GEOPRÓPOLIS DE ABELHA CANUDO (Scaptotrigona sp.) E JANDAÍRA (Melipona subnitida) NA RESPOSTA INFLAMATÓRIA E VIABILIDADE DE TRANSPLANTES CUTÂNEOS ALOGÊNICOS E AUTÓLOGOS

A própolis e a geoprópolis são produtos resinosos elaborados a partir de exsudatos, óleos e resinas colhidas de plantas pelas abelhas. Esses produtos são conhecidos por apresentarem efeitos biológicos e são utilizados por populares devido às propriedades medicinais, inclusive no tratamento de feridas. Objetivou-se avaliar o efeito do extrato hidroalcoólico de própolis verde (EHPv), geoprópolis de abelha canudo, Scaptotrigona sp., (EHG-Can) e geoprópolis de abelha jandaíra, Melipona subnitida, (EHG-Jan) sobre a inflamação aguda, inflamação crônica por corpo estranho, cicatrização e transplante cutâneo alogênico e autólogo em ratos wistar. Para tanto, foram utilizados 36 ratos adultos saudáveis, de ambos os sexos, distribuídos em cinco grupos: animais tratados com formulação contendo 20% de EHPv; tratados com 20% de EHG-Can; tratados com 20% de EHG-Jan; grupo controle positivo (GC+) com fármaco registrado, e; apenas veículo como controle negativo (GC-). Anteriormente as análises in vivo, foi feita uma análise físico-química das para caracterização preliminar dos extratos. A inflamação aguda foi induzida por carragenina a 1% (n = 36), a inflamação crônica foi realizada por corpo estranho (lâmina de vidro) (n = 16) e a cicatrização foi acompanhada a partir de ferida circular de 8 mm de diâmetro (n = 16). Os transplantes (n = 20) foram feitos com a incisão e realocação de dois enxertos cutâneos quadrados (1cm2), um para autoenxerto e outro para aloenxerto, respectivamente. Sobre o teor de flavonoides, amostra do grupo EHG-Jan apresentou a maior quantidade (p<0,05), EHPv quantidade intermediária e a do grupo EHG-Can apresentou a menor. Verificou-se um efeito positivo antiedematoso pronunciado do EHPv, moderado efeito nos grupos EHG-Can e EHG-Jan. Na inflamação crônica, o grupo EHG-Jan destacou-se por acelerar a formação do granuloma. Houve aceleração da cicatrização com reepitelização completa por efeito dos extratos EHPv e EHG-Can em 16 dias. Os extratos aumentaram a proteção das áreas lesionadas e induziram retardo na rejeição (necrose) dos enxertos autólogos. De modo similar, porém menos acentuado ocorreu com os transplantes alogênicos. Provavelmente as diversas classes químicas, com substâncias biologicamente ativas específicas, presentes na geoprópolis foram responsáveis pelo satisfatório desempenho nas análises. Além disso, é provável que o efeito protetor contra infecções oportunistas tenha colaborado com os bons resultados. Os extratos hidroalcoólicos de própolis e geoprópolis apresentaram efeitos positivos sobre os processos inflamatórios e reparo de ferida, assim como promoveram proteção do enxerto e retardo na rejeição.

Propolis and geopropolis are resinous products elaborated starting from exudates, oils and picked resins of plants by the bees. Those products are known for they present biological effects and they are used for popular due to the medicinal properties, besides in the treatment of wounds. The aim of this work was to evaluate the effect of the hydroalcoholic extract of green propolis (HEP), canudo bee geopropolis (Scaptotrigona sp.) (HEG-Can) And the geopropolis of bee jandaíra (Melipona subnitida) (HEG-Jan) on acute inflammation, chronic inflammation, cicatrization of wounds and autogenic and allogenic skin flaps. 36 healthy adult wistar rats, of both sexes, were distributed in five groups: treated animals with formulation containing 20% of; agreements with 20% of HEG-Can; agreements with 20% of HEG-Jan; group positive control (CG+) with pharmaceutical products registered as a positive control group (CG +); only vehicle as a negative control (CG-). Previously the analyses in vivo, was made a physical-chemical analysis for preliminary characterization of the extracts. The acute inflammation was induced by 1% carrageenan, chronic inflammation caused by a foreign body (circular sight glass) and wound healing was accompanied starting from wound circular of 8mm of diameter. Transplants were made with the incision and reallocation of two grafts cutaneous squares (1cm2), first to autograft and second to allograft, respectively. On the flavonoides content, the HEG-Jan group has a large amount (p<0.05), an intermediate amount of HEP and a lower amount of HEG-Can. HEP presented a pronounced effect on the acute inflammation (anti-edematous effect), moderate effect of the HEP-Can and HEG-Jan groups was registered. In chronic inflammation, the group HEG-Jan accelerated the process of formation of the granuloma when compared to the other extracts (HEP and HEP- Can). In healing wounds, there was acceleration of the cicatrization due to effect of the extracts of HEP and HEP-Can in 16 days. The extracts show the protection of the skin graft area and discreet retard in the graft rejection (necrosis) of the autografts. In a similar way, however fewer accentuated it happened with the allografts. The several chemical classes of the geopropolis were probably responsible for the satisfactory acting in the analyses. Possibly the effects are biologically related to the presence of substances specific active. Besides, it is probable that the protecting effect against infections opportunists has collaborated with the sastisfatory results. The hydroalcoholic extracts of propolis from geopropolis have positive effects on the inflammatory processes and I repair of wound, as well as they promoted protection of the graft and retard in the graft rejection.

Quemaduras térmicas en perros y gatos / Thermal burns in dogs and cats / Queimaduras térmicas em cães e gatos

Las quemaduras se producen cuando el tejido vivo está en contacto durante un largo periodo con un objeto o sustancia caliente. Se describen varias áreas de participación, que varían de acuerdo con el potencial de reversión de la lesión, como la zona de coagulación, estasis e hiperemia. Con respecto a la profundidad de la lesión, pueden ser clasificadas de acuerdo a el espesor, en superficial, superficial parcial, parcial profunda y completa. La extensión de piel afectada se calcula en base a la "regla de los nueves", que establece que cada parte del cuerpo corresponde a un múltiplo de 9% de la superficie corporal total. Aunque es poco frecuente en los pacientes veterinarios, quemaduras graves pueden llevar a un shock al disminuir el flujo de sangre periférica. Se debe realizar como terapia tópica inicial la tricotomia amplia seguida de la aplicación de solución salina fria, lavar con solución isotónica estéril, debridamiento, aplicación de ungüento antimicrobiano como sulfadiazina de plata y cubrir con vendas húmedas no adherentes. El debridamiento del tejido desvitalizado debe realizarse lo antes posible y, preferentemente, de forma agresiva. En la imposibilidad de realización de cirugía se puede utilizar los agentes conservadores enzimáticos de debridamiento, la inmersión en el agua y la aplicación de vendajes húmedos-húmedas. Después de la formación del lecho vascular sin tejido necrótico o infectado, quemaduras extensas se pueden cerrar mediante colgajos, injertos de piel, la técnica de avance de piel, o tratadas como herida abierta hasta que sea posible el tratamiento quirúrgico. Pueden ocurrir complicaciones como infección, cicatrización excesiva y la contractura de la herida, sobre todo cuando no hay un tratamiento temprano. [...](AU)

Burns occur when living tissues are in contact for a long period with a heated object or substance. Various zones of involvement are described, ranging as the reversal potential of the lesion, they are the zone of coagulation, stasis and hyperemia. Regarding the depth of the lesion, they can be graded according to the thikness, as superficial, superficial partialthickness, deep partial-thickness and full-thickness. The extent of affected skin can be calculated based on the “Rule of Nines”, which states that each part of the body corresponds to a multiple of 9% of the total body surface. Although rare in veterinary patients, severe burns can lead to shock by decreasing of peripheral blood flow. Wide hair removal, followed by application of cold saline solution, lavage with sterile isotonic solution, debridement, application of antimicrobial ointment as silver sulfadiazine and cover with moist nonadherent dress must be performed as the initial topical therapy. The debridement of devitalized tissue should be performed as early as possible and preferably aggressively. The impossibility to performing the surgery, conservative debridement can be done with enzymatic agents, immersion in water and the application of wet-wet dress. After formation of a vascular bed free of necrotic and infected tissue, extensive burns can be closed by flaps, skin grafting techniques, skin advance techniques or treated as an open wound until surgical treatment can be possible. Complications as infection, excessive scarring and wound contracture can occur, especially when there is not early treatment. The final cosmetic result is usually satisfactory when there is surgical intervention and complete hair covering. Although rare in veterinary medicine, severe burns are challenging and unlike traumatic wounds, presents different features and therapeutic. The abundant literature nowadays is mostly human and more veterinary studies are necessary in this area.(AU)

Queimaduras ocorrem quando tecido vivo entra em contato por um longo período com um objeto ou substância aquecida. São descritas diversas zonas de acometimento, variando conforme o potencial de reversão da lesão, sendo elas a zona de coagulação, estase e hiperemia. Em relação à profundidade da lesão, estas podem ser graduadas conforme a espessura em superficial, parcial superficial, parcial profunda e total. A extensão de pele acometida pode ser calculada com base na “regra dos nove”, que determina que cada parte do corpo corresponde a um múltiplo de 9% do total da superfície corpórea. Apesar de raro nos pacientes veterinários, queimaduras graves podem levar ao choque por diminuição do fluxo sanguíneo periférico. Deve-se realizar como terapia tópica inicial a tricotomia ampla seguida da aplicação de solução salina gelada, lavagem com solução isotônica estéril, debridamento, aplicação de pomada antimicrobiana como sulfadiazina de prata e a cobertura com bandagens úmidas não aderentes. O debridamento de tecido desvitalizado deve ser realizado o mais precocemente possível e preferencialmente de forma agressiva. Na impossibilidade de realização da intervenção cirúrgica, pode-se realizar o debridamento conservativo com agentes enzimáticos, imersão em água e a aplicação de bandagens úmida-úmida. Após a formação do leito vascular livre de tecido necrótico e infectado, as queimaduras extensas podem ser fechadas por meio de retalhos, enxertos cutâneos, técnicas de avanço de pele ou ainda tratadas como ferida aberta até que o tratamento cirúrgico seja possível. Como complicações, podem ocorrer infecção, cicatrização excessiva e contratura da ferida, especialmente quando não há tratamento precoce. O resultado cosmético final normalmente é satisfatório quando há intervenção cirúrgica e recobrimento piloso completo. [...](AU)

AVALIAÇÃO DA ANGIOGÊNESE E RESPOSTA INFLAMATÓRIA EM ENXERTOS CUTÂNEOS SUBMETIDOS À LASERTERAPIA EM RATOS (Rattusnovergicusalbinuswistar)

As técnicas reconstrutivas têm sido amplamente utilizadas na Medicina Veterinária. Com a intenção de reduzir complicações inerentes às técnicas reconstrutivas, são utilizadas terapias adjuvantes pós-operatórias como a laserterapia de baixa intensidade (LBI). Objetivou-se definir os efeitos da laserterapia de baixa intensidade sobre a cicatrização, inflamação e vascularização de enxertos cutâneos em intervalos de tempo aplicáveis à rotina cirúrgica veterinária. Foram utilizados 40 ratos (Rattusnovergicusalbinuswistar), sendo cada animal submetido à enxertia cutânea autógena em região interescapular, sendo distribuídos de forma aleatória em cinco grupos (G1, G2, G3, G4 e G5) de acordo com a dose de 6 J/cm² ou 10 J/cm² a cada 3 ou 5 dias, aplicada sobre o enxerto cutâneo durante 15 dias. Avaliação macroscópica aos dias três, sete e 15 não demonstrou alteração com a aplicação de LBI sobre os enxertos. Avaliação histoquímica com picrosirius apresentou maior expressão de colágeno tipo I vermelho em enxertos de G5 (p<0,05), enquanto não houve expressão do mesmo em G1; a expressão de colágeno tipo III verde não foi influenciada pela LBI. A avaliação histoquímica com hematoxilina-eosina evidenciou maior número de fibroblastos em enxertos de G4 (p<0,05) e menor hemorragia em enxertos de G5 (p<0,05). Houve modulação da resposta inflamatória em enxertos cutâneos irradiados, enquanto a LBI não teve efeito sobre a angiogênese. Conclui-se que a exposição de enxertos cutâneos à dose de energia de 6 J/cm² ou 10 J/cm² a cada 5 dias beneficiaram a cicatrização e a modulação da inflamação local.

The reconstructivetechniqueshasbeenwidelyused in Veterinary Medicine. Toreduceinherentcomplicationstothereconstructivetechniques, thepostoperativeadjuvantstherapies are used, such as low-level laser therapy (LLLT). The aimofthiswork is to determine the low-level laser therapyseffectsonthe healing, inflammationandvascularizationofthefree skin graftsgrafts in applicable time intervalstothe veterinary surgeryroutine. Forty rats (Rattus novergicusalbinuswistar) wereused, andeachonewassubmittedtotheautogenousfree skin graftontheinterescapular region. Theywereallocatedrandomly in fivegroups (G1, G2, G3, G4 and G5) accordingtothe 6 J/cm² or 10 J/cm² doses every 3 or 5 days for 15 days. The macroscopicevaluationonthethird, seventhandfifteenthdaydidnot show alterationsofthe LLLT onthegrafts. The histochemicalevaluation with picrosirius had more expressionofthetype I collagenous red in thegraftsof G5 (p<0,05), while in the G1 didnot; theexpressionofthetype III collagenous greenwasnotinfluencedby LPLT. The histochemicalevaluation with hematoxylin-eosinshowed more numbersoffibroblasts in thegraftsof G4 (p<0,05) andlesshemorrhage in graftsof G5 p<0,05). It hadmodulationofthe inflammatory response in theirradiatedcutaneousgrafts, whilethe LPLT had no effectontheangiogenesis. Then, it observedthattheexposureofthecutaneousgraftstothe 6 J/cm² or 10 J/cm² doses every 5 daysimprovedthe healing andthemodulationofthe local inflammation.