Susceptibility of Alabama argillacea and Chrysodeixis includens (Lepidoptera: Noctuidae) larvae to Beauveria bassiana associated with kaolin / Susceptibilidade de larvas de Alabama argillacea e Chrysodeixis includens (Lepidoptera: Noctuidae) a Beauveria bassiana associada com caulim

The mortality of the Alabama argillacea and Chrysodeixis includens (Lepidoptera: Noctuidae) larvae caused by the kaolin inert powder and the entomopathogenic fungus Beauveria bassiana were determined under laboratory conditions. Using the caterpillar submersion method, the CG 138 B. bassiana isolate was more pathogenic to A. argillacea than the CG 70, GC 82, ESALQ 634, and ESALQ 645. All five tested isolates caused similar mortality of C. includens. The mortality of first-instar larvae of A. argillacea and C. includens by feeding on leaf-disc impregnated with B. bassiana (CG 138) and kaolin was also determined. Higher A. argillacea mortalities were observed in the B. bassiana (CG 138) treatments, regardless of the presence of kaolin. However, the activity of kaolin + B. bassiana (CG 138) against C. includens was higher than each ingredient alone, indicating an additive action against C. includes larvae. The mortality of A. argillacea and C. includens larvae treated with kaolin + B. bassiana (CG 138) was similar, and the A. argillacea mortality was higher than that of C. includens with kaolin and B. bassiana (GC 138) separated. The treatment kaolin + B. bassiana (CG 138) is promising for the simultaneous management of these two defoliator pests, mainly A. includes. In addition, the monophagous A. argillacea is more susceptible to both kaolin and B. bassiana (GC 138) than the polyphagous C. includens, suggesting that the nutritional ecology plays an important role in the susceptibility of these defoliator species to alternative insecticides.(AU)

A mortalidade de larvas de Alabama argillacea e Chrysodeixis includens (Lepidoptera: Noctuidae), causada pelo pó inerte do caulim e pelo fungo entomopatogênico Beauveria bassiana, foi determinada em condições de laboratório. Usando o método de submersão da lagarta, o isolado CG 138 de B. bassiana foi mais patogênico para A. argillacea que os CG 70, GC 82, ESALQ 634 e ESALQ 645 desse fungo. Os cinco isolados testados causaram mortalidade semelhante de C. includens. A mortalidade de larvas de primeiro ínstar de A. argillacea e C. includens pelo método de alimentação em discos foliares impregnados com B. bassiana (CG 138) e caulim foi, também, determinada. A mortalidade de A. argillacea foi maior nos tratamentos com B. bassiana (CG 138), independentemente da presença do caulim. A atividade do caulim + B. bassiana (CG 138) contra C. includens foi maior que cada ingrediente isolado, indicando ação aditiva contra larvas desse Lepidoptera. A mortalidade de larvas de A. argillacea e C. includens, com caulim + B. bassiana (CG 138), foi semelhante e as de A. argillacea maiores que as de C. includens com caulim e B. bassiana (GC 138) isoladamente. O tratamento caulin + B. bassiana (CG 138) é promissor para o manejo simultâneo dessas duas pragas desfolhadoras, principalmente A. includens. Além disso, a monófaga, A. argilacea, é mais suscetível ao caulim e à B. bassiana (GC 138) que a polífaga, C. includens, sugerindo que a ecologia nutricional desempenha papel importante na suscetibilidade dessas espécies desfolhadoras a inseticidas alternativos.(AU)

Susceptibility of Alabama argillacea and Chrysodeixis includens (Lepidoptera: Noctuidae) larvae to Beauveria bassiana associated with kaolin

Abstract The mortality of the Alabama argillacea and Chrysodeixis includens (Lepidoptera: Noctuidae) larvae caused by the kaolin inert powder and the entomopathogenic fungus Beauveria bassiana were determined under laboratory conditions. Using the caterpillar submersion method, the CG 138 B. bassiana isolate was more pathogenic to A. argillacea than the CG 70, GC 82, ESALQ 634, and ESALQ 645. All five tested isolates caused similar mortality of C. includens. The mortality of first-instar larvae of A. argillacea and C. includens by feeding on leaf-disc impregnated with B. bassiana (CG 138) and kaolin was also determined. Higher A. argillacea mortalities were observed in the B. bassiana (CG 138) treatments, regardless of the presence of kaolin. However, the activity of kaolin + B. bassiana (CG 138) against C. includens was higher than each ingredient alone, indicating an additive action against C. includes larvae. The mortality of A. argillacea and C. includens larvae treated with kaolin + B. bassiana (CG 138) was similar, and the A. argillacea mortality was higher than that of C. includens with kaolin and B. bassiana (GC 138) separated. The treatment kaolin + B. bassiana (CG 138) is promising for the simultaneous management of these two defoliator pests, mainly A. includes. In addition, the monophagous A. argillacea is more susceptible to both kaolin and B. bassiana (GC 138) than the polyphagous C. includens, suggesting that the nutritional ecology plays an important role in the susceptibility of these defoliator species to alternative insecticides.

Resumo A mortalidade de larvas de Alabama argillacea e Chrysodeixis includens (Lepidoptera: Noctuidae), causada pelo pó inerte do caulim e pelo fungo entomopatogênico Beauveria bassiana, foi determinada em condições de laboratório. Usando o método de submersão da lagarta, o isolado CG 138 de B. bassiana foi mais patogênico para A. argillacea que os CG 70, GC 82, ESALQ 634 e ESALQ 645 desse fungo. Os cinco isolados testados causaram mortalidade semelhante de C. includens. A mortalidade de larvas de primeiro ínstar de A. argillacea e C. includens pelo método de alimentação em discos foliares impregnados com B. bassiana (CG 138) e caulim foi, também, determinada. A mortalidade de A. argillacea foi maior nos tratamentos com B. bassiana (CG 138), independentemente da presença do caulim. A atividade do caulim + B. bassiana (CG 138) contra C. includens foi maior que cada ingrediente isolado, indicando ação aditiva contra larvas desse Lepidoptera. A mortalidade de larvas de A. argillacea e C. includens, com caulim + B. bassiana (CG 138), foi semelhante e as de A. argillacea maiores que as de C. includens com caulim e B. bassiana (GC 138) isoladamente. O tratamento caulin + B. bassiana (CG 138) é promissor para o manejo simultâneo dessas duas pragas desfolhadoras, principalmente A. includens. Além disso, a monófaga, A. argilacea, é mais suscetível ao caulim e à B. bassiana (GC 138) que a polífaga, C. includens, sugerindo que a ecologia nutricional desempenha papel importante na suscetibilidade dessas espécies desfolhadoras a inseticidas alternativos.

Alternative substrates for conidiogenesis of the entomopathogenic fungus Beauveria bassiana (Bals) Vuillemin (Deuteromycotina: Hyphomycetes) / Substratos alternativos para conidiogênese do fungo entomopatogênico Beauveria bassiana (Bals) Vuillemin (Deuteromycotina: Hyphomycetes)

Beauveria bassiana is a promising fungus for the biological control of insect pests. The growing costs of conidia production have raised the need to ascertain the efficiency of some low cost substrates. The aim of this study was to analyze the potential use of different raw substrates without nutritional supplement for B. bassiana conidiogenesis. Growth and sporulation were evaluated using 30 g of substrate and 0.3 μL of a conidia suspension (1 x 106 conidia/mL). After 10 days of incubation (70 ± 10% humidity and temperature (T) = 29 ± 1 °C), rice (2.00 x 106 conidia/g substrate), algaroba (2.36 x 106 conidia/g), malt A (1.22 x 106 conidia/g) and malt B (1.75 x 106 conidia/g) showed the highest levels of conidia production. The resulting conidia showed insecticidal activity higher than 80% on coconut termites. These new raw substrates may represent viable alternatives for the production of entomopathogenic fungi for use in the biological control of various insect pests.(AU)

Beauveria bassiana é um fungo promissor no controle biológico de insetos-praga. As crescentes despesas na produção de conídios levantam a necessidade de averiguar a eficiência de alguns substratos de baixo custo. O objetivo deste trabalho foi analisar o potencial de utilização de diferentes substratos brutos para a conidiogênese de B. bassiana. O crescimento e esporulação foram realizados utilizando 30 g do substrato e 0,3 µL da suspensão de conídios (1 x 106 conídios/mL). Após 10 dias de incubação (umidade 70 ± 10% e temperatura T = 29 ± 1° C), o arroz (2,00 x 106 conídios/g de substrato), algaroba (2,36 x 106 conídios/g), malte A (1,22 x 106 conídios/g) e B (1,75 x 106 conídios/g), apresentaram maior produção de conídios. Os conídios produzidos mostraram atividade inseticida sobre o cupim do coqueiro acima de 80% de mortalidade. Estes novos substratos brutos podem representar uma alternativa viável para produção de fungos entomopatogênicos para uso no controle biológico de vários insetos praga.(AU)

Control agents on the quality of Africanized honeybee queens / Agentes de controle sobre a qualidade de rainhas de abelhas africanizadas

The objective of this study was to evaluate the effect of the entomopathogenic fungus Beauveria bassiana, used in large field crops, and of the pomegranate Punica granatum aqueous extract, with insecticidal potential for insect control, on the quality of Africanized Apis mellifera queens. The control sample was composed of sterile distilled water with Tween®. The treatments were incorporated into a voile fabric, covered with an acrylic plate and packed with queen rearing nucleus hive, so the worker bees could be in contact with control agents (B. bassiana and P. granatum). In the next day, frames with 30 cell cups for queen rearing with larvae were introduced to produce queens, which were monitored at moment of emergency. Measurements included live weight, wing size, abdomen size, thorax size, the time of emergence, and analysis of the breeding area size. Histological analyses of the hypopharyngeal glands of attendant worker bees and of the midgut of virgin queens were performed. There was no reduction in the weight of queens, no changes in the length, width, and height of their thoraxes, no changes in the width and length of the wing, and no changes in total length. However, B. bassiana increased the weight of the queens and reduced emergency time. The control agents did not interfere in villi height and breeding area. No differences were found in tissues when the treatments were compared with their control. P. granatum extract and the fungus B. bassiana did not interfere in the quality of Africanized A. mellifera queens.(AU)

O objetivo foi avaliar o efeito do fungo entomopatogênico Beauveria bassiana, usado em grandes culturas, e o extrato aquoso de romã Punica granatum, com potencial efeito inseticida para o controle de insetos, sobre a qualidade de rainhas de Apis mellifera africanizadas. A testemunha foi composta por água destilada esterilizada com Tween®. Os tratamentos foram incorporados em um tecido tipo gaze, envolto em uma placa de acrílico e acondicionados no interior de colônias tipo minirrecrias, para que as operárias entrassem em contato com o agente testado (B. bassiana and P. granatum). No dia seguinte foram introduzidos sarrafos com 30 cúpulas com larvas para produção de rainhas, as quais foram monitoradas à emergência, mensurando peso vivo, comprimento e largura da asa e do abdome, comprimento, largura e altura do tórax, tempo de emergência e área de cria. Análises histológicas das glândulas hipofaringeanas das operárias amas e do mesêntero das rainhas virgens também foram realizadas. Não houve redução no peso das rainhas e no comprimento do tórax e tampouco alteração na largura e altura do tórax, comprimento e largura do abdome, comprimento e largura da asa e comprimento total. No entanto B. bassiana induziu aumento no peso das rainhas e redução no tempo de emergência. Os agentes não interferiram na altura das vilosidades do mesêntero e na área de cria. Na análise histológica não foram observadas diferenças nos tecidos quando os tratamentos foram comparados com as respectivas testemunhas. O extrato de P. granatum e o fungo B. bassiana não interferiram na qualidade de rainhas de A. mellifera africanizada.(AU)

In vitro efficacy of two commercial products of Metarhizium anisopliae s.l. for controlling the cattle tick Rhipicephalus microplus / Eficácia in vitro de dois produtos comerciais de Metarhizium anisopliae s.l. no controle do carrapato bovino Rhipicephalus microplus

The effects of two different products - Metarril® SP Organic (dry conidia) and Metarril® SC Organic (emulsifiable concentrated conidia in vegetable oil) - on eggs, larvae and Rhipicephalus microplus engorged females were here explored. Three concentrations (108, 107, and 106 conidia mL-1) for both products were prepared in water + 0.1% Tween® 80 (v/v); afterward, bioassays were carried out for all R. microplus stages by immersion in suspensions (Metarril® SP) or formulations (Metarril® SC). Metarril® SP suspensions showed low efficacy and did not affect biological parameters of treated engorged females; for eggs and larvae, only slight decreases in hatchability and larvae population were observed. Despite a delay in germination, Metarril® SC presented better results; for females, reductions in Egg Mass Weight (EMW) and Egg Production Index (EPI) were reported. On eggs, 108 conidia mL-1 increased Incubation Period (IP), shortened Hatching Period (HP) and decreased hatchability by up to 61%; for larvae, 107 and 108 conidia mL-1 reached 99.6 and 100% larval mortality respectively, 10 days after fungal exposure. Thus, further studies involving the use of oil-based formulations for ticks such as Metarril® SC need to be performed, especially to control the most susceptible stages (eggs and larvae).(AU)

No presente trabalho, os efeitos de dois diferentes produtos foram avaliados - Metarril® SP Organic (conídios secos) e Metarril® SC Organic (conídios concentrados em óleo vegetal) - para ovos, larvas e fêmeas ingurgitadas de Rhipicephalus microplus. Três concentrações (108, 107 e 106 conídios mL-1) para cada produto foram preparadas em água + Tween® 80 0,1% (v/v); os bioensaios foram realizados para todos os estágios de R. microplus por imersão nas suspensões (Metarril® SP) ou formulações (Metarril® SC). Metarril® SP não afetou os parâmetros biológicos das fêmeas, demonstrando assim baixa eficácia; para ovos e larvas, foram observadas discretas diminuições na eclodibilidade e na população de larvas. Apesar de um atraso na germinação, Metarril® SC apresentou melhores resultados; para as fêmeas, foram detectadas reduções no Peso da Massa de Ovos (PMO) e no Índice de Produção de Ovos (IPO). Para os ovos, a concentração de 108 conídios mL-1 aumentou o Período de Incubação (PI), reduziu o Período de Eclosão (PE) e também o da eclodibilidade em até 61%; para larvas, 107 e 108 conídios mL-1 atingiram 99,6 e 100% de mortalidade larval, respectivamente, 10 dias após a exposição fúngica. Com isso, estudos adicionais que envolvem o uso de formulações à base de óleo para carrapatos, como Metarril® SC, precisam ser realizados, especialmente para controlar os estágios mais suscetíveis (ovos e larvas).(AU)

Behavior manipulation of Crabronidae and Pompilidae (Hymenoptera) by the entomopathogenic fungus Ophiocordyceps humbertii (Ascomycota: Hypocreales) in an Amazonian rainforest, Brazil / Manipulação de comportamento de Crabronidae e Pompilidae (Hymenoptera) por fungo entomopatogênico Ophiocordyceps humbertii (Ascomycota: Hypocreales) em floresta amazônica, Brasil

Registramos e descrevemos a manipulação do parasitismo e do comportamento de três espécies diferentes de vespas aculeadas pelo fungo entomopatogênico Ophiocordyceps humbertii. Foram observados e coletados 30 espécimes parasitados, sendo cinco espécimes de Larra (Crabronidae), 21 de Liris (Crabronidae) e quatro de Epysiron (Pompilidae).

The parasitism and behavior manipulation of three different species of aculeate wasps by the entomopathogenic fungus Ophiocordyceps humbertii was recorded and described. A total of 30 parasitized specimens were observed and collected, being five specimens of Larra (Crabronidae), 21 of Liris (Crabronidae), and four of Epysiron (Pompilidae).

Behavior manipulation of Crabronidae and Pompilidae (Hymenoptera) by the entomopathogenic fungus Ophiocordyceps humbertii (Ascomycota: Hypocreales) in an Amazonian rainforest, Brazil / Manipulação de comportamento de Crabronidae e Pompilidae (Hymenoptera) por fungo entomopatogênico Ophiocordyceps humbertii (Ascomycota: Hypocreales) em floresta amazônica, Brasil

Registramos e descrevemos a manipulação do parasitismo e do comportamento de três espécies diferentes de vespas aculeadas pelo fungo entomopatogênico Ophiocordyceps humbertii. Foram observados e coletados 30 espécimes parasitados, sendo cinco espécimes de Larra (Crabronidae), 21 de Liris (Crabronidae) e quatro de Epysiron (Pompilidae).(AU)

The parasitism and behavior manipulation of three different species of aculeate wasps by the entomopathogenic fungus Ophiocordyceps humbertii was recorded and described. A total of 30 parasitized specimens were observed and collected, being five specimens of Larra (Crabronidae), 21 of Liris (Crabronidae), and four of Epysiron (Pompilidae).(AU)

Mortality of Conotrachelus humeropictus in response to combined application of the nematode Steinernema brazilense and the fungus Beauveria bassiana / Mortalidade de Conotrachelus humeropictus pela aplicação combinada do nematoide Steinernema brazilense com o fungo entomopatogênico Beauveria bassiana

The fruit borer Conotrachelus humeropictus is one of the most important pests of the cupuaçu crop, and can promote yield losses of around 50%. The present study involved the selection of Beauveria bassiana isolates on Conotrachelus psidii larvae, which was used as test insect due to its taxonomic closeness to C. humeropictus. In order to assess their interaction using combined application, we studied the ability of the nematode to carry conidia of B. bassiana and Metarhizium anisopliae to soil layers. This study also aimed to establish a biological control method for cupuaçu borer with the use of the fungus B. bassiana at 10 kg/ha and the entomopathogenic nematode Steinernema brazilense at 1, 3, 9, and 27 IJ/cm2, applied as single and combined treatments. In the selection of B. bassiana strains for C. psidii, the IBCB 276 and IBCB 165 isolates were the most promising ones, causing 86 and 84% mortality, respectively. The IBCB 276 strain was applied in the field to control C. humeropictus. In the study of carriage of conidia in soil, the nematode S. brazilense was found to be capable of carrying conidia of B. bassiana to deep 7 to 10 cm soil layers. This was not observed with M. anisopliae, found only in the topsoil. In field trials against C. humeropictus larvae, B. bassiana promoted 15.6% mortality. The nematode promoted 60.0% mortality at the highest concentration used, and their combined use with B. bassiana (10 kg/ha) increased mortality to 65.6%, with an additive interaction observed between the two entomopathogens.(AU)

A broca-do-cupuaçu, Conotrachelus humeropictus, é uma das principais pragas da cultura, podendo ocasionar perdas de 50% na produção. O presente trabalho envolveu uma seleção prévia de isolados de Beauveria bassiana em larvas de Conotrachelus psidii, utilizado como inseto teste por ser próximo taxonomicamente à C. humeropictus. Com o objetivo de avaliar causa-efeitos da interação na aplicação combinada, foi estudada a capacidade do nematoide carrear conídios de B. bassiana e Metarhizium anisopliae pelas camadas de solo. O trabalho também objetivou avaliar o controle biológico da broca-do-cupuaçu, através do uso do fungo B. bassiana 10 kg/ha, e do nematoide entomopatogênico Steinernema brazilense 1, 3, 9 e 27 JI/cm2, aplicados em tratamentos isolados e em combinação. Na seleção de isolados de B. bassiana para C. psidii, os isolados IBCB 276 e IBCB 165 foram os mais promissores, causando, respectivamente, 86 e 84% de mortalidade confirmada. O isolado IBCB 276 foi aplicado em campo para controlar C. humeropictus. No estudo de carreamento de conídios, o nematoide S. brazilense foi capaz de carrear conídios de B. bassiana para a camada de 7 a 10 cm de profundidade no solo. A mesma ação não foi observada com M. anisopliae, encontrado somente na camada superficial do solo. Nos ensaios de campo contra C. humeropictus, B. bassiana promoveu 15,6% de mortalidade. O nematoide promoveu 60,0% de mortalidade na maior concentração utilizada e, na combinação dessa concentração do NEP com B. bassiana (10 kg/ha), a mortalidade atingiu 65,6%, observando-se interação aditiva entre os dois entomopatógenos.(AU)

Mortality of Conotrachelus humeropictus in response to combined application of the nematode Steinernema brazilense and the fungus Beauveria bassiana / Mortalidade de Conotrachelus humeropictus pela aplicação combinada do nematoide Steinernema brazilense com o fungo entomopatogênico Beauveria bassiana

The fruit borer Conotrachelus humeropictus is one of the most important pests of the cupuaçu crop, and can promote yield losses of around 50%. The present study involved the selection of Beauveria bassiana isolates on Conotrachelus psidii larvae, which was used as test insect due to its taxonomic closeness to C. humeropictus. In order to assess their interaction using combined application, we studied the ability of the nematode to carry conidia of B. bassiana and Metarhizium anisopliae to soil layers. This study also aimed to establish a biological control method for cupuaçu borer with the use of the fungus B. bassiana at 10 kg/ha and the entomopathogenic nematode Steinernema brazilense at 1, 3, 9, and 27 IJ/cm2, applied as single and combined treatments. In the selection of B. bassiana strains for C. psidii, the IBCB 276 and IBCB 165 isolates were the most promising ones, causing 86 and 84% mortality, respectively. The IBCB 276 strain was applied in the field to control C. humeropictus. In the study of carriage of conidia in soil, the nematode S. brazilense was found to be capable of carrying conidia of B. bassiana to deep 7 to 10 cm soil layers. This was not observed with M. anisopliae, found only in the topsoil. In field trials against C. humeropictus larvae, B. bassiana promoted 15.6% mortality. The nematode promoted 60.0% mortality at the highest concentration used, and their combined use with B. bassiana (10 kg/ha) increased mortality to 65.6%, with an additive interaction observed between the two entomopathogens.(AU)

A broca-do-cupuaçu, Conotrachelus humeropictus, é uma das principais pragas da cultura, podendo ocasionar perdas de 50% na produção. O presente trabalho envolveu uma seleção prévia de isolados de Beauveria bassiana em larvas de Conotrachelus psidii, utilizado como inseto teste por ser próximo taxonomicamente à C. humeropictus. Com o objetivo de avaliar causa-efeitos da interação na aplicação combinada, foi estudada a capacidade do nematoide carrear conídios de B. bassiana e Metarhizium anisopliae pelas camadas de solo. O trabalho também objetivou avaliar o controle biológico da broca-do-cupuaçu, através do uso do fungo B. bassiana 10 kg/ha, e do nematoide entomopatogênico Steinernema brazilense 1, 3, 9 e 27 JI/cm2, aplicados em tratamentos isolados e em combinação. Na seleção de isolados de B. bassiana para C. psidii, os isolados IBCB 276 e IBCB 165 foram os mais promissores, causando, respectivamente, 86 e 84% de mortalidade confirmada. O isolado IBCB 276 foi aplicado em campo para controlar C. humeropictus. No estudo de carreamento de conídios, o nematoide S. brazilense foi capaz de carrear conídios de B. bassiana para a camada de 7 a 10 cm de profundidade no solo. A mesma ação não foi observada com M. anisopliae, encontrado somente na camada superficial do solo. Nos ensaios de campo contra C. humeropictus, B. bassiana promoveu 15,6% de mortalidade. O nematoide promoveu 60,0% de mortalidade na maior concentração utilizada e, na combinação dessa concentração do NEP com B. bassiana (10 kg/ha), a mortalidade atingiu 65,6%, observando-se interação aditiva entre os dois entomopatógenos.(AU)

First record of Ophiocordyceps dipterigena (Ascomycota: Hypocreales: Ophiocordycipitaceae) infecting adults of Melanagromyza sojae (Diptera: Agromyzidae) in Brazil / Primeiro registro de Ophiocordyceps dipterigena (Ascomycota: Hypocreales: Ophiocordycipitaceae) infectando adultos de Melanagromyza sojae (Diptera: Agromyzidae) no Brasil

This note is the first report on the infection of adult stage of Melanagromyza sojae Zehntner, 1900 (Diptera: Agromyzidae) by the entomopathogenic fungus Ophiocordyceps dipterigena (Hypocreales: Ophiocordycipitaceae) (Berk. & Broome) G. H. Sung, J.M. Sung, Hywel-Jones & Spatafora, in subtropical Brazil. Entomopathogenic fungi, which attack dipteran insects, are of great scientific and economic importance mainly due to their potential as biological control agents of insect pests. Our findings bring new perspectives on the geographical distribution and host range of Ophiocordyceps dipterigena. We emphasize the need of further studies and research on new biological control agents of agricultural pests such as the soybean stem miner fly.(AU)

Esta nota é o primeiro registro da infecção no estágio adulto de Melanagromyza sojae Zehntner, 1900 (Diptera: Agromyzidae) pelo fungo entomopatogênico Ophiocordyceps dipterigena (Hypocreales: Ophiocordycipitaceae) (Berk & Broome) G. H. Sung, J.M. Sung, Hywel-Jones & Spatafora, no Brasil subtropical. Fungos entomopatogênicos, que atacam dípteros, são de importância científica e econômica principalmente devido ao potencial como agentes de controle biológico de pragas de insetos. Este trabalho traz novas perspectivas sobre a distribuição geográfica e variação de hospedeiro de Ophiocordyceps dipterigena. Destacamos a necessidade de ampliar o conhecimento sobre novos agentes de controle biológico de pragas agrícolas como a mosca minadora do caule da soja.(AU)

Susceptibility of Alabama argillacea and Chrysodeixis includens (Lepidoptera: Noctuidae) larvae to Beauveria bassiana associated with kaolin

Abstract The mortality of the Alabama argillacea and Chrysodeixis includens (Lepidoptera: Noctuidae) larvae caused by the kaolin inert powder and the entomopathogenic fungus Beauveria bassiana were determined under laboratory conditions. Using the caterpillar submersion method, the CG 138 B. bassiana isolate was more pathogenic to A. argillacea than the CG 70, GC 82, ESALQ 634, and ESALQ 645. All five tested isolates caused similar mortality of C. includens. The mortality of first-instar larvae of A. argillacea and C. includens by feeding on leaf-disc impregnated with B. bassiana (CG 138) and kaolin was also determined. Higher A. argillacea mortalities were observed in the B. bassiana (CG 138) treatments, regardless of the presence of kaolin. However, the activity of kaolin + B. bassiana (CG 138) against C. includens was higher than each ingredient alone, indicating an additive action against C. includes larvae. The mortality of A. argillacea and C. includens larvae treated with kaolin + B. bassiana (CG 138) was similar, and the A. argillacea mortality was higher than that of C. includens with kaolin and B. bassiana (GC 138) separated. The treatment kaolin + B. bassiana (CG 138) is promising for the simultaneous management of these two defoliator pests, mainly A. includes. In addition, the monophagous A. argillacea is more susceptible to both kaolin and B. bassiana (GC 138) than the polyphagous C. includens, suggesting that the nutritional ecology plays an important role in the susceptibility of these defoliator species to alternative insecticides.

Resumo A mortalidade de larvas de Alabama argillacea e Chrysodeixis includens (Lepidoptera: Noctuidae), causada pelo pó inerte do caulim e pelo fungo entomopatogênico Beauveria bassiana, foi determinada em condições de laboratório. Usando o método de submersão da lagarta, o isolado CG 138 de B. bassiana foi mais patogênico para A. argillacea que os CG 70, GC 82, ESALQ 634 e ESALQ 645 desse fungo. Os cinco isolados testados causaram mortalidade semelhante de C. includens. A mortalidade de larvas de primeiro ínstar de A. argillacea e C. includens pelo método de alimentação em discos foliares impregnados com B. bassiana (CG 138) e caulim foi, também, determinada. A mortalidade de A. argillacea foi maior nos tratamentos com B. bassiana (CG 138), independentemente da presença do caulim. A atividade do caulim + B. bassiana (CG 138) contra C. includens foi maior que cada ingrediente isolado, indicando ação aditiva contra larvas desse Lepidoptera. A mortalidade de larvas de A. argillacea e C. includens, com caulim + B. bassiana (CG 138), foi semelhante e as de A. argillacea maiores que as de C. includens com caulim e B. bassiana (GC 138) isoladamente. O tratamento caulin + B. bassiana (CG 138) é promissor para o manejo simultâneo dessas duas pragas desfolhadoras, principalmente A. includens. Além disso, a monófaga, A. argilacea, é mais suscetível ao caulim e à B. bassiana (GC 138) que a polífaga, C. includens, sugerindo que a ecologia nutricional desempenha papel importante na suscetibilidade dessas espécies desfolhadoras a inseticidas alternativos.

Pathogenicity of Metarhizium anisopliae isolates on Nezara viridula and Dichelops melacanthus in wheat crop / Patogenicidade de isolados de Metarhizium anisopliae (Metsch. ) sobre Nezara viridula e Dichelops melacanthus (Hemiptera: Pentatomidae) na cultura do trigo

Bugs such as Nezara viridula (Linnaeus) and Dichelops melacanthus (Dallas) are considered the main insect pests of wheat crop in Brazil. The use of the entomopathogenic fungus Metarhizium anisopliae (Metschnikoff) may be an alternative for the management of these insects in the crop. The objective of this work was to verify the pathogenicity of different isolates of M. anisopliae on adults of N. ­viridula and D. melacanthus under laboratory and greenhouse conditions. In the laboratory, isolates 05RA, 11RA, 08RA and 02RA were obtained from N. viridula and D. melacanthus infested with M. anisopliae. Also, a high pathogenicity (100% of mortality) of both species was recorded in a bioassay of the topical application 8 Days After Application (DAA). However, compared to the other isolates, the 08RA isolate showed the highest pathogenicity in a shorter time interval for N. ­viridula (Mean Time “MT” = 2.8 days) and D. melacanthus (MT = 4.0 days). Under greenhouse conditions, the 08RA isolate provided a mortality of 44.9% (N. viridula) and 35.7% (D. melacanthus) in the same evaluation period. However, at 14 DAA, the mortality was 100% for both species, with the MT values of N. ­viridula and D. ­melacanthus being obtained at 8 days and 10 days, respectively. The fungus M. anisopliae is a promising alternative for the control of adult N. viridula and D. melacanthus in wheat crop.

Os percevejos Nezaraviridula (Linnaeus) e o Dichelops melacanthus (Dallas) são considerados os principais insetos-pragas na cultura do trigo no Brasil. A utilização do fungo entomopatogênico Metarhiziumanisopliae (Metschnikoff) pode ser uma alternativa para o manejo destes insetos na cultura. O objetivo do trabalho foi verificar a patogenicidade de diferentes isolados de M.anisopliae sobre adultos de N. viridula ou D. ­melacanthus em condições de laboratório e casa de vegetação. Em laboratório, os isolados 05RA, 11RA, 08RA e 02RA provenientes de adultos de N. ­viridula ou D. melacanthus, infestados a campo pelo fungo M. anisopliae, apresentaram elevada patogenicidade (100% de mortalidade) de ambas as espécies em bioensaio de aplicação tópica 8 dias após aplicação (DAA). Entretanto, o isolado 08RA apresentou a maior patogenicidade em um menor intervalo de tempo para N. ­viridula (Tempo Médio “TM” = 2,8 dias) e D. melacanthus (TM = 4,0 dias) em relação aos demais isolados. Em casa de vegetação, o isolado 08RA proporcionou mortalidade de 44,9% (N. ­viridula) e 35,7% (D. ­melacanthus) no mesmo período de avaliação. Contudo, aos 14 DAA, a mortalidade foi de 100% para ambas as espécies, com valores de TM de 8 dias e 10 dias para N. viridula e D. ­melacanthus, respectivamente. O fungo M. anisopliae constitui uma alternativa promissora de controle de adultos de N. ­viridula ou D. ­melacanthus na cultura do trigo.

Pathogenicity of Metarhizium anisopliae isolates on Nezara viridula and Dichelops melacanthus in wheat crop / Patogenicidade de isolados de Metarhizium anisopliae (Metsch) sobre Nezara viridula e Dichelops melacanthus (Hemiptera: Pentatomidae) na cultura do trigo

Bugs such as Nezara viridula (Linnaeus) and Dichelops melacanthus (Dallas) are considered the main insect pests of wheat crop in Brazil. The use of the entomopathogenic fungus Metarhizium anisopliae (Metschnikoff) may be an alternative for the management of these insects in the crop. The objective of this work was to verify the pathogenicity of different isolates of M. anisopliae on adults of N. ­viridula and D. melacanthus under laboratory and greenhouse conditions. In the laboratory, isolates 05RA, 11RA, 08RA and 02RA were obtained from N. viridula and D. melacanthus infested with M. anisopliae. Also, a high pathogenicity (100% of mortality) of both species was recorded in a bioassay of the topical application 8 Days After Application (DAA). However, compared to the other isolates, the 08RA isolate showed the highest pathogenicity in a shorter time interval for N. ­viridula (Mean Time "MT" = 2.8 days) and D. melacanthus (MT = 4.0 days). Under greenhouse conditions, the 08RA isolate provided a mortality of 44.9% (N. viridula) and 35.7% (D. melacanthus) in the same evaluation period. However, at 14 DAA, the mortality was 100% for both species, with the MT values of N. ­viridula and D. ­melacanthus being obtained at 8 days and 10 days, respectively. The fungus M. anisopliae is a promising alternative for the control of adult N. viridula and D. melacanthus in wheat crop.(AU)

Os percevejos Nezaraviridula (Linnaeus) e o Dichelops melacanthus (Dallas) são considerados os principais insetos-pragas na cultura do trigo no Brasil. A utilização do fungo entomopatogênico Metarhiziumanisopliae (Metschnikoff) pode ser uma alternativa para o manejo destes insetos na cultura. O objetivo do trabalho foi verificar a patogenicidade de diferentes isolados de M.anisopliae sobre adultos de N. viridula ou D. ­melacanthus em condições de laboratório e casa de vegetação. Em laboratório, os isolados 05RA, 11RA, 08RA e 02RA provenientes de adultos de N. ­viridula ou D. melacanthus, infestados a campo pelo fungo M. anisopliae, apresentaram elevada patogenicidade (100% de mortalidade) de ambas as espécies em bioensaio de aplicação tópica 8 dias após aplicação (DAA). Entretanto, o isolado 08RA apresentou a maior patogenicidade em um menor intervalo de tempo para N. ­viridula (Tempo Médio "TM" = 2,8 dias) e D. melacanthus (TM = 4,0 dias) em relação aos demais isolados. Em casa de vegetação, o isolado 08RA proporcionou mortalidade de 44,9% (N. ­viridula) e 35,7% (D. ­melacanthus) no mesmo período de avaliação. Contudo, aos 14 DAA, a mortalidade foi de 100% para ambas as espécies, com valores de TM de 8 dias e 10 dias para N. viridula e D. ­melacanthus, respectivamente. O fungo M. anisopliae constitui uma alternativa promissora de controle de adultos de N. ­viridula ou D. ­melacanthus na cultura do trigo.(AU)

Pathogenicity of Metarhizium anisopliae isolates on Nezara viridula and Dichelops melacanthus in wheat crop / Patogenicidade de isolados de Metarhizium anisopliae (Metsch. ) sobre Nezara viridula e Dichelops melacanthus (Hemiptera: Pentatomidae) na cultura do trigo

Bugs such as Nezara viridula (Linnaeus) and Dichelops melacanthus (Dallas) are considered the main insect pests of wheat crop in Brazil. The use of the entomopathogenic fungus Metarhizium anisopliae (Metschnikoff) may be an alternative for the management of these insects in the crop. The objective of this work was to verify the pathogenicity of different isolates of M. anisopliae on adults of N. ­viridula and D. melacanthus under laboratory and greenhouse conditions. In the laboratory, isolates 05RA, 11RA, 08RA and 02RA were obtained from N. viridula and D. melacanthus infested with M. anisopliae. Also, a high pathogenicity (100% of mortality) of both species was recorded in a bioassay of the topical application 8 Days After Application (DAA). However, compared to the other isolates, the 08RA isolate showed the highest pathogenicity in a shorter time interval for N. ­viridula (Mean Time “MT” = 2.8 days) and D. melacanthus (MT = 4.0 days). Under greenhouse conditions, the 08RA isolate provided a mortality of 44.9% (N. viridula) and 35.7% (D. melacanthus) in the same evaluation period. However, at 14 DAA, the mortality was 100% for both species, with the MT values of N. ­viridula and D. ­melacanthus being obtained at 8 days and 10 days, respectively. The fungus M. anisopliae is a promising alternative for the control of adult N. viridula and D. melacanthus in wheat crop.(AU)

Os percevejos Nezaraviridula (Linnaeus) e o Dichelops melacanthus (Dallas) são considerados os principais insetos-pragas na cultura do trigo no Brasil. A utilização do fungo entomopatogênico Metarhiziumanisopliae (Metschnikoff) pode ser uma alternativa para o manejo destes insetos na cultura. O objetivo do trabalho foi verificar a patogenicidade de diferentes isolados de M.anisopliae sobre adultos de N. viridula ou D. ­melacanthus em condições de laboratório e casa de vegetação. Em laboratório, os isolados 05RA, 11RA, 08RA e 02RA provenientes de adultos de N. ­viridula ou D. melacanthus, infestados a campo pelo fungo M. anisopliae, apresentaram elevada patogenicidade (100% de mortalidade) de ambas as espécies em bioensaio de aplicação tópica 8 dias após aplicação (DAA). Entretanto, o isolado 08RA apresentou a maior patogenicidade em um menor intervalo de tempo para N. ­viridula (Tempo Médio “TM” = 2,8 dias) e D. melacanthus (TM = 4,0 dias) em relação aos demais isolados. Em casa de vegetação, o isolado 08RA proporcionou mortalidade de 44,9% (N. ­viridula) e 35,7% (D. ­melacanthus) no mesmo período de avaliação. Contudo, aos 14 DAA, a mortalidade foi de 100% para ambas as espécies, com valores de TM de 8 dias e 10 dias para N. viridula e D. ­melacanthus, respectivamente. O fungo M. anisopliae constitui uma alternativa promissora de controle de adultos de N. ­viridula ou D. ­melacanthus na cultura do trigo.(AU)

Infection of silkworm larvae by the entomopathogenic fungus Metarhizium anisopliae / Infecção de lagartas do bicho-da-seda pelo fungo entomopatogênico Metarhizium anisopliae

The isolate E9 of Metarhizium anisopliae was used in commercial hybrids of Bombyx mori larvae to evaluate its biological effect. Symptomatological analyses showed typical signs of fungal infection. Histopathology revealed the presence of large numbers of hemocytes in the hemocoel, and on the sixth dpi the bodies of the insects appeared to be colonised by the fungus. The isolate E9 is pathogenic to larvae B. mori and; therefore, death of the insects was caused by the colonization of fungus in the epidermal and mesodermal tissues.

O isolado E9 de Metarhizium anisopliae foi usado em larvas híbridas de Bombyx mori para avaliar seu efeito biológico. A sintomatologia revelou sinais típicos de infecção por fungos. Na histopatologia foi verificado um aumento no número de hemócitos, sendo que, no 6 dpi, todo o corpo do inseto se apresentou colonizado pelo fungo. O isolado E9 é patogênico para lagartas de B. mori, causando sua morte pela colonização dos tecidos de origem epidérmica e mesodérmica.

Infection of silkworm larvae by the entomopathogenic fungus Metarhizium anisopliae / Infecção de lagartas do bicho-da-seda pelo fungo entomopatogênico Metarhizium anisopliae

The isolate E9 of Metarhizium anisopliae was used in commercial hybrids of Bombyx mori larvae to evaluate its biological effect. Symptomatological analyses showed typical signs of fungal infection. Histopathology revealed the presence of large numbers of hemocytes in the hemocoel, and on the sixth dpi the bodies of the insects appeared to be colonised by the fungus. The isolate E9 is pathogenic to larvae B. mori and; therefore, death of the insects was caused by the colonization of fungus in the epidermal and mesodermal tissues.(AU)

O isolado E9 de Metarhizium anisopliae foi usado em larvas híbridas de Bombyx mori para avaliar seu efeito biológico. A sintomatologia revelou sinais típicos de infecção por fungos. Na histopatologia foi verificado um aumento no número de hemócitos, sendo que, no 6 dpi, todo o corpo do inseto se apresentou colonizado pelo fungo. O isolado E9 é patogênico para lagartas de B. mori, causando sua morte pela colonização dos tecidos de origem epidérmica e mesodérmica.(AU)

UTILIZAÇÃO DE Metarhizium anisopliae PARA CONTROLE DE NEMATOIDES GASTRINTESTINAIS DE RUMINANTES

Este trabalho teve como objetivos verificar a eficácia do fungo entomopatogênico Metarhizium anisopliae em formulações aquosas e oleosas sobre os estágios de vida livre de nematoides gastrintestinais de caprinos, por meio de testes in vitro e em condições seminaturais, e também analisar o período de permanência deste microrganismo no solo. Os experimentos foram compostos por quatro grupos: Controle água (solução de água e Tween 80 a 0,1%); Controle óleo (óleo mineral e Tween 80 a 0,1%); Formulação aquosa de M. anisopliae (conídios de M. anisopliae diluídos em solução de água e Tween 80 a 0,1%); Formulação oleosa de M. anisopliae (conídios de M. anisopliae diluídos em solução de água com Tween 80 a 0,1% com adição de 10% de óleo mineral), sendo cada grupo composto por 10 vasos com Brachiaria brizantha MG5. Além dos experimentos nos vasos, foram realizados ensaios laboratoriais com os mesmos grupos, através da coprocultura quantitativa. O percentual de eficácia das formulações no teste em condições seminaturais foi obtido a partir da comparação entre o número de larvas recuperadas das fezes, solo e gramíneas pelo teste de Baermann realizados no 7º, 14º, 21º e 28° após o início do experimento. Para a avaliação da presença de Metarhizium sp. no solo, o número de colônias encontradas em amostras coletadas e processadas dos tratamentos foram quantificadas, antes da pulverização e no 3º, 7º, 21º e 52º dia após o tratamento. No teste in vitro, os grupos tratados com as formulações aquosa e oleosa apresentaram eficácia no controle de nematoides gastrintestinais de caprinos, proporcionando redução de 45,5% e 70%, respectivamente, quando comparado com o controle água, e redução variando de 36% a 77,9% e 61,4 a 95,9%, respectivamente no experimento em condições seminaturais. O isolado de M. anisopliae testado mostrou ser eficaz contra nematoides gastrintestinais de caprinos, tanto em teste in vitro, quanto em condições seminaturais, sob as condições climáticas de Cruz das Almas, reduzindo significativamente o número de larvas, em ambas as formulações testadas, além de se mostrar capaz de permanecer ativo por um período prolongado de até 52 dias no solo dos vasos. Assim, este estudo fornece dados sobre a aplicação de Metarhizium spp. no solo e contribui para futuras pesquisas visando a utilização do controle biológico contra nematoides gastrintestinais de ruminantes.

This work aimed to verify the efficacy of the entomopathogenic fungus Metarhizium anisopliae in aqueous and oily formulations on the free life stages of gastrointestinal nematodes (GNs) from goats, by means of in vitro tests and in semi-natural conditions, as well as the persistence of the fungus in the soil was evaluated. The experiments were composed of four groups: Water control (water solution and 0.1% Tween 80); Oil-control (mineral oil and 0.1% Tween 80); Aqueous formulation of M. anisopliae (conidia of M. anisopliae diluted in water and 0.1% Tween 80); Oily formulation of M. anisopliae (conidia of M. anisopliae diluted in water solution with 0.1% Tween 80 with the addition of 10% mineral oil), each group consisting of 10 pots with grass Brachiaria brizantha MG5. In addition to the experiments on the pots, laboratory tests were carried out with the same groups, through quantitative coproculture. The percentage of effectiveness of the formulations in the test under semi-natural conditions was obtained from the comparison between the number of larvae recovered from feces, soil, and grasses by the Baermann test performed on the 7th, 14th, 21st, and 28th days after the beginning of the experiment. For the evaluation of the presence of Metarhizium sp. in the soil, the number of colonies found in samples collected and processed from the treatments was quantified, before spraying and on the 3rd, 7th, 21st, and 52nd days after treatment. In the in vitro test, the groups treated with the aqueous and oily formulations showed efficacy in the control of GNs, providing a reduction of 45.5% and 70%, respectively, when compared to the water control, and a reduction ranging from 36% 77.9% and 61.4 to 95.9%, respectively in the experiment under semi-natural conditions. The tested M. anisopliae isolate proved to be effective against GNs, both in vitro and in semi-natural conditions, under the climatic conditions of Cruz das Almas, significantly reducing the number of larvae in both tested formulations, in addition to being able to remain active for a prolonged period of up to 52 days in the soil of the pots. Thus, this study provides data about the application of Metarhizium spp. in the soil and contributes to future research aiming to use the biological control against GNs from ruminants.

Análise histopatológica e perfil lipídico de ovários de Rhipicephalus microplus submetidos ao tratamento com Beauveria bassiana e Eugenol

O carrapato Rhipicephalus microplus tem um impacto expressivo na pecuária bovina brasileira, sendo responsável por perdas econômicas estimadas em 3,24 bilhões de dólares por ano. O uso excessivo de acaricidas químicos leva à resistência dos carrapatos, além de afetar organismos não-alvo e o meio ambiente. Fungos entomopatogênicos e óleos essenciais têm demonstrado eficácia no controle de carrapatos bovinos. Aqui foram avaliados, o efeito do isolado de Beauveria bassiana CG 479 e do composto vegetal eugenol, sozinhos ou combinados em diferentes concentrações, contra os carrapatos dos bovinos. Foi inicialmente avaliada a taxa de germinação de B. bassiana a 1 × 106 con/mL combinados ou não com eugenol a 0,18 mg / mL ou 0,75 mg / mL. Independente da dose, o eugenol não foi capaz de reduzir a germinação do fungo. Assim como, foram analisados o impacto de ambos os bioagentes sobre os parâmetros biológicos e reprodutivos de fêmeas ingurgitadas de R. microplus. Os bioensaios foram conduzidos de acordo com Bennet (1974), como resultado, B. bassiana a 1 × 108 con/mL combinado com eugenol a 0,18 mg / mL ou 0,75 mg / mL demonstrou o melhor potencial de controle, bem como reduziu todos os parâmetros reprodutivos em cerca de 50%. Para avaliação por microscopia de luz, os ovários de fêmeas de carrapatos (24 e 72 horas pós-exposição ao fungo e/ou eugenol) foram coletados e corados com hematoxilina e eosina, sendo realizada a análise histopatológica identificando-se as alterações morfológicas nos tecidos ovarianos. Em geral, independentemente do tempo, foram observadas vacuolização no oócitos, hipertrofia dos pedicelos e desorganização das membranas oocitárias em ovários de fêmeas R. microplus expostas a B. bassiana a 1 × 108 con/mL combinado com eugenol a 0,18mg / mL ou 0,75 mg / mL. O perfil lipídico ovariano foi avaliado por cromatografia em camada fina de acordo com Bligh & Dyer (1959) e Angelo (2013). Os resultados obtidos demonstram que o ácido graxo e colesterol foram afetados apenas por B. bassiana combinado com eugenol em 72 horas pós-exposição. As alterações ocasionadas nos parâmetros reprodutivos, como a redução de 47,5% na postura total, que levou a um percentual de controle de até 56,48%, podem ser explicadas pelas alterações observadas nos ovários e perfil lipídico das fêmeas tratadas, e demonstram o potencial do fungo entomopatogênico combinado ao eugenol como alternativa para o controle de carrapatos bovinos e redução da eficiência reprodutiva de R. microplus.

Rhipicephalus microplus tick has a significant impact on Brazilian cattle raising, being responsible for economic losses estimated at 3.24 billion dollars per year. Excessive use of chemical acaricides leads to tick resistance, in addition to affecting non-target organisms and the environment. Entomopathogenic fungi and essential oils have been shown to be effective in controlling bovine ticks. Here, the effect of the isolate of Beauveria bassiana CG 479 and the plant compound eugenol, alone or combined at different concentrations, against bovine ticks were evaluated. Initially, the germination rate of B. bassiana was evaluated at 1 × 106 con/mL combined or not with eugenol at 0.18 mg / mL or 0.75 mg / mL. Regardless of the dose, eugenol was not able to reduce fungus germination. As well, the impact of both bioagents on the biological and reproductive parameters of engorged females of R. microplus were analyzed. Bioassays were conducted according to Bennett (1974), as a result, B. bassiana at 1 × 108 con/mL combined with eugenol at 0.18 mg / mL or 0.75 mg / mL demonstrated the best control potential as well, how it reduced all reproductive parameters by about 50%. For evaluation by light microscopy, the ovaries of female ticks (24 and 72 hours after exposure to the fungus and/or eugenol) were collected and stained with hematoxylin and eosin, and histopathological analysis was performed to identify the morphological changes in the tissues ovaries. In general, regardless of time, oocyte vacuolization, pedicel hypertrophy and disorganization of oocyte membranes were observed in ovaries of R. microplus females exposed to B. bassiana at 1 × 108 con/mL combined with eugenol at 0.18mg/mL or 0.75 mg/ml. Ovarian lipid profile was evaluated by thin layer chromatography according to Bligh & Dyer (1959) and Angelo (2013). The results obtained demonstrate that fatty acid and cholesterol were only affected by B. bassiana combined with eugenol at 72 hours post-exposure. The changes caused in reproductive parameters, such as the 47.5% reduction in total posture, which led to a control percentage of up to 56.48%, can be explained by the changes observed in the ovaries and lipid profile of treated females, and demonstrate the potential of the entomopathogenic fungus combined with eugenol as an alternative to control bovine ticks and reduce the reproductive efficiency of R. microplus.

Metarhizium spp.: Seleção de isolados, ação antimicrobiana e eficácia de formulações granulares no controle de Rhipicephalus microplus

Metarhizium sp. é encontrado no solo e em raízes de plantas e a pastagem é um ambiente propício para o desenvolvimento desse entomopatogeno, tornando a rizosfera de forrageiras e a presença de hospedeiros como o carrapato Rhipicephalus microplus um nicho ecológico ideal. Porém, fatores bióticos e abióticos interferem na persistência fúngica, sendo fundamental selecionar bons isolados, considerar as interações ecológicas com outros microrganismos e formulá-los. Baseado nisso, o presente trabalho apresenta estudos aplicados ao gênero Metarhizium no controle de pragas. Foram avaliados: a tolerância térmica e a capacidade de diferentes isolados do fungo em colonizar tecidos da planta Vigna radiata; a expressão do gene de adesão na planta em diferentes substratos; o efeito antimicrobiano e acaricida do exsudato fúngico; e a eficácia de formulações granulares de microescleródios (MS) e blastosporos (BLS) para o controle R. microplus. No ensaio de tolerância térmica, suspensões conidiais foram expostas a 25ºC, 40°C e 45°C, por 2h, 4h, 8h e 12h, e posteriormente a germinação foi avaliada após incubação por 48h a 25 ± 1°C, para a atividade dos isolados no frio esses foram submetidos à temperatura de 5ºC durante 14 dias, selecionando assim os termotolerantes. Para o estudo de colonização endofítica, sementes, raiz, caule e folha de V. radiata foram tratadas com suspensões de diferentes isolados, e a colonização dos tecidos do vegetal foi avaliada. No ensaio de expressão gênica, após o cultivo do fungo sobre meio mínimo (MM), meio batata dextrose ágar (BDA) e sobre a planta, a expressão do Gene mad2 foi observada. Para avaliar o efeito do exsudato de Metarhizium sp. no carrapato e em bactérias, o líquido resultante da exsudação de colônias foi coletado e a partir do teste de difusão em disco sobre cepas de duas bactérias isoladas do solo e sobre cepas resistentes e sensíveis de Staphylococcus sp. e Escherichia coli foi avaliado. Para o efeito acaricida, o exsudato fúngico foi inoculado nas fêmeas do carrapato e parâmetros biológicos, mortalidade e resposta celular do artrópode foram avaliadas. Por último, no teste de eficácia de formulações granulares de MS e BLS, vasos contendo Urochloa decumbens foram tratados com os grânulos, e posteriormente fêmeas de R. microplus foram introduzidas. Foram avaliados, a mortalidade, o número de larvas infestantes, assim como a persistência do fungo no solo. Quanto aos resultados, no teste de tolerância térmica, todos os isolados de Metarhizium spp testados germinaram mais que 90% após 12h a 40 °C e após a incubação no frio. Foram considerados bons isolados, aqueles que não sofreram variação drástica na germinação ao longo do tempo de exposição. Ao avaliar a capacidade de colonizar V. radiata, todos os isolados testados foram capazes de colonizar raízes, caules e folhas, havendo variação na colonização dos diferentes tecidos. Quando o fungo se desenvolveu sobre a planta o gene mad2 foi mais expresso que em BDA, porem foi no MM que o gene foi mais expresso. O exsudato fúngico foi capaz de inibir o crescimento das cepas resistente e sensível de Staphylococcus spp., e afetou mais as cepas de bactérias isoladas do solo do que as demais quando comparadas entre si. O exsudato também afetou diretamente o carrapato, reduzindo a resposta celular, causando morte e diminuição da postura de ovos. As formulações granulares de M. robertsii mostraram-se eficazes em controlar o carrapato nas condições testadas e o isolado fúngico colonizou a rizosfera da de U. decumbens. Este estudo fornece dados sobre a aplicação de isolados de Metarhizium spp. no solo e contribui para futuras pesquisas e bioprospecção desse microrganismo.

Metarhizium sp. species could be found in soil and plant roots, and the pasture is ideal environment for this fungus development, where the plant's rhizosphere and the presence of hosts such as the tick Rhipicephalus microplus make the best ecological niche. However, biotic and abiotic factors interfere on its persistence been essential to select good isolates, consider ecological interactions with other microorganisms, and formulate them. Based on this, the present study considers the applicability of the genus Metarhizium spp. in pest control. Were evaluated: thermal tolerance and the ability of different isolates of the fungus to colonize tissues of the Vigna radiata plant; the antimicrobial and acaricidal effect of fungal exudate; and the effectiveness of granular formulations of microsclerotia (MS) and blastospores(BLS) to control cattle ticks. In the thermal tolerance test, conidial suspensions of the fungus were exposed to 25 ° C, 40 ° C and 45 ° C, for 2h, 4h, 8h and 12h, the germination was evaluated after incubation for 48h at 28 ± 1 ° C, and also the cold activity of the isolates (at 5 ºC for 14 days) were evaluated, based on that, thermal tolerant isolates were selected. For the study of endophytic colonization, seeds, root, stem, and leaf of V. radiata were treated with fungus suspensions, and the colonization of the plant tissues by different isolates was evaluated. In the gene expression assay, after cultivating the fungus on minimal medium (MM), potato dextrose agar (BDA) and on the plant, the expression of the mad2 gene was observed. To assess the effect of Metarhizium sp. exudate on ticks and bacteria, the liquid resulting from colonies exudation was collected. Then, using disk diffusion test, the effect on strains of two bacteria isolated from the soil and on resistant and sensitive strains of Staphylococcus and Escherichia coli was evaluated. For the action on ticks, the fungal exudate was inoculated in tick females and the biological parameters, mortality, and immune response of the arthropod were evaluated. Finally, for the test with MS and BLS granular formulations, pots containing Urochloa decumbens were used and their soil was treated with the granular formulations, where later R. microplus females were introduced and the mortality, the number of larvae obtained in each group, as well as the persistence of the fungus in the soil were evaluated. As regards to the results, in the thermal tolerance test, all Metarhizium spp. isolates tested germinated more than 90% after 12h at 40 °C and after the be cooled, been considered good isolates those that did not suffer drastic variation in germination over the time of exposure. When evaluated the ability to colonize V. radiata, all tested isolates were able to colonize roots, stems, and leaves, with variation in the colonization of different tissues. When the fungus developed on the plant, the mad2 gene was more expressed than in PDA, but it was in the MM that the gene obtained greater expression. The fungal exudate was also able to inhibit the growth of the resistant and sensitive strains of Staphylococcus spp., and it affected more the strains of bacteria isolated from the soil than the others. The exudate also directly affected engorged R. microplus females, reducing the cellular response, causing death, and decreased egg production. The treatment with different concentrations of granular formulations of M. robertsii proved to be effective in controlling the cattle tick under the conditions tested and the fungus isolate colonized U. decumbens rhizosphere. This study provides data about the application of Metarhizium spp. in the soil and contributes to future research, showing the bioprospecting of this microorganism.

Uso de Metarhizium anisopliae s.l. no controle de Biomphalaria glabrata hospedeira intermediária de Schistosoma mansoni

A esquistossomose é uma doença que afeta aproximadamente 200 milhões de pessoas em todo o mundo. É considerada uma das Doenças Tropicais Negligenciadas, está em segundo lugar dentre estas, perdendo apenas para a malária em morbidade. A esquistossomose mansônica é uma parasitose veiculada na água, ocasionada pelo trematódeo S. mansoni e tem como hospedeiro intermediário moluscos do gênero Biomphalaria. O controle dos caramujos tem sido proposto como uma medida para reduzir e interromper a transmissão da doença, complementar a outras estratégias, focalizadas principalmente no tratamento populacional em larga escala. Parte deste estudo focou em apresentar uma análise sistemática dos trabalhos científicos publicados sobre o controle biológico de Biomphalaria spp., hospedeiros intermediários da esquistossomose, apresentando desafios e perspectivas futuras. Quarenta e sete artigos no total foram analisados, no período de 1945 a 2021. Os países com destaque de publicação foram: França (08 artigos), Brasil (08 artigos), EUA (06 artigos), e Egito (06 artigos). Sendo a predação o principal tipo de controle biológico utilizado. A década com o maior número de estudos entre 2010-2019 com 14 artigos, enquanto que o período de 2010 a 2019, foi utilizada uma maior diversidade de agentes de controle biológico. Estes últimos, como mencionado acima, particularmente fungos e bactérias, têm atraído a atenção dos pesquisadores nos últimos dez anos. Estes agentes microbianos podem funcionar como agentes disruptores fisiológicos, reprodutivos e/ou epigenéticos que podem manipular e/ou influenciar a dinâmica da interação entre Biomphalaria e Schistosoma. Este estudo também deu ênfase a análise experimental de um agente de controle biológico, com objetivo de avaliar os efeitos de Metarhizium anisopliae s.l. CG 347 contra Biomphalaria glabrata. Os caramujos infectados pelo S. mansoni foram expostos por 24 horas ao fungo e analisados quanto aos seguintes aspectos: sobrevivência dos caracóis, impacto do tratamento de M. anisopliae na eliminação de cercárias, número de hemócitos circulantes na hemolinfa e histopatologia. Os caramujos não infectados e tratados com fungos foram analisados quanto a: sobrevivência, concentração total de proteínas na hemolinfa e na glândula digestiva, e número de hemócitos circulantes na hemolinfa. Não houve morte dos moluscos após o período de tratamento, mas foi observada uma redução de 20% do conteúdo total de proteínas na hemolinfa quando comparado ao controle da água. A eliminação de cercárias de S. mansoni foi um parâmetro impactado, com redução de 32,7% quando os moluscos foram tratados com M. anisopliae. O grupo infectado apresentou menor número de hemócitos e o grupo infectado e exposto a M. anisopliae. Em relação à histopatologia dos moluscos, os grupos UNI + MA e INF + MA, apresentaram o fungo no interior dos seguintes órgãos esôfago, estômago e intestino. Este estudo abordou o primeiro relato de redução da eliminação de cercárias de S. mansoni após tratamento de B. glabrata usando um fungo entomopatogênico, o M. anisopliae. Contudo, são recomendáveis novas análises com maior período de exposição e diferentes propágulos fúngicos. Contudo, contribuímos fornecendo informações que contribuem para fomentar o controle biológico, alternativo e sustentável da transmissão da esquistossomose. Sendo este fungo, um possível agente promissor de controle biológico que pode contribuir para limitar a transmissão da esquistossomose.

Schistosomiasis is a disease that affects approximately 200 million people worldwide. It is considered one of the Neglected Tropical Diseases, second only to malaria in morbidity. Schistosomiasis mansoni is a waterborne parasitic disease caused by the trematode S. mansoni and has as an intermediate host mollusks of the genus Biomphalaria. Snail control has been proposed as a measure to reduce and interrupt transmission of the disease, complementary to other strategies that focus mainly on large-scale population treatment. Part of this study focused on presenting a systematic review of published scientific papers on the biological control of Biomphalaria spp. intermediate hosts of schistosomiasis, presenting challenges and future perspectives. Forty-seven articles in total were analyzed, from 1945 to 2021. The countries with the most published papers were: France (08 papers), Brazil (08 papers), USA (06 papers), and Egypt (06 papers). Predation was the main type of biological control used. The decade with the highest number of studies between 2010-2019 with 14 articles, while the period from 2010 to 2019, a greater diversity of biological control agents was used. The latter, as mentioned above, particularly fungi and bacteria, have attracted the attention of researchers in the last ten years. These microbial agents may function as physiological, reproductive and/or epigenetic disruptors that can manipulate and/or influence the dynamics of the interaction between Biomphalaria and Schistosoma. This study also emphasized the experimental analysis of a biological control agent, aiming to evaluate the effects of Metarhizium anisopliae s.l. CG 347 against Biomphalaria glabrata. S. mansoni infected snails were exposed for 24 hours to the fungus and analyzed for the following aspects: snail survival, impact of M. anisopliae treatment on cercariae elimination, number of circulating hemocytes in the hemolymph, and histopathology. The uninfected and fungus-treated snails were analyzed for: survival, total protein concentration in the hemolymph and digestive gland, and number of circulating hemocytes in the hemolymph. There was no death of the mollusks after the treatment period, but a 20% reduction of the total protein content in the hemolymph was observed when compared to the water control. The shedding cercariae of S. mansoni was an impacted parameter, with a 32.7% reduction when the mollusks were treated with M. anisopliae. The infected group presented lower number of hemocytes and the group infected and exposed to M. anisopliae. Regarding the histopathology of the mollusks, the groups UNI + MA and INF + MA, presented the fungus inside the following organs esophagus, stomach and intestine. This study addressed the first report of reduced cercariae S. mansoni shedding after treatment of B. glabrata using an entomopathogenic fungus, M. anisopliae. However, further analyses with longer exposure times and different fungal propagules are recommended. However, we contribute by providing information that contributes to foster the biological, alternative, and sustainable control of schistosomiasis transmission. This fungus is a possible promising biological control agent that can contribute to limit the transmission of schistosomiasis.