Hematology and serum biochemistry of broilers fed diets supplemented with chondroitin and glucosamine sulfates

The objective of this study was to evaluate the hematology and serum biochemistry of broilers fed diets supplemented with chondroitin and glucosamine sulfates. An experiment was laid out in a completely randomized design with a 3 × 3 factorial arrangement (three levels of chondroitin sulfate: 0, 0.05 and 0.10%; and three levels of glucosamine sulfate: 0, 0.15, and 0.30%), with each treatment involving six replicates of 30 birds. Hematology (red blood cells, hemoglobin, hematocrit, total plasma protein [TPP], thrombocytes, white blood cells, eosinophils, monocytes, heterophils, and lymphocytes) and serum biochemistry (totalinteraction between sulfates influenced (p < 0.05) total calcium by 21 days, ionic calcium by 21 and 42 days, and phosphorus, chlorides, and sodium by 42 days. Supplementation with chondroitin and glucosamine sulfates in the broilers' diet favored their immune system and mineral metabolism, increasing serum concentrations of calcium, phosphorus, and sodium. serum protein [TSP], albumin, globulins, aspartate aminotransferase [AST], gamma-glutamyltransferase [GGT], alkaline phosphatase [AP], total calcium, ionic calcium, phosphorus, sodium, potassium, and chlorides) variables were evaluated at 21 and 42 days. Data were subjected to analysis of variance. When the means differed significantly by the F-test, orthogonal analysis was performed to test the linear and quadratic effects of chondroitin and glucosamine sulfate levels. Glucosamine sulfate reduced the number of monocytes linearly, by 42 days (p = 0.0399). There was an interaction effect between the sulfates on total white blood cells (p = 0.0099) and lymphocytes (p = 0.0004) by 21 days. Chickens supplemented with 0.10% chondroitin sulfate showed a linear increase in white blood cells (p = 0.0287) and lymphocytes (p = 0.0144) with the addition of glucosamine sulfate. Chondroitin sulfate supplementation increased serum albumin linearly (p = 0.0099) and TSP quadratically (p = 0.0140), by 21 days. Glucosamine sulfate induced a quadratic response (p < 0.05) in albumin by 42 days, with the lowest value found with the inclusion of 0.06%. Glucosamine sulfate reduced chlorides linearly (p = 0.0237) by 21 days and increased calcium linearly (p = 0.0012) by 42 days. The interaction between sulfates influenced (p < 0.05) total calcium by 21 days, ionic calcium by 21 and 42 days, and phosphorus, chlorides, and sodium by 42 days. Supplementation with chondroitin and glucosamine sulfates in the broilers' diet favored their immune system and mineral metabolism, increasing serum concentrations of calcium, phosphorus, and sodium.(AU)

Objetivou-se avaliar a hematologia e a bioquímica sérica de frangos de corte suplementados com sulfatos de condroitina e de glucosamina na ração. Foi conduzido um experimento em delineamento inteiramente casualizado, em esquema fatorial 3 x 3 (três níveis de sulfato de condroitina: 0; 0,05 e 0,10%; e três níveis de sulfato de glucosamina: 0; 0,15 e 0,30%), cada tratamento com seis repetições de 30 aves. Foram avaliadas as variáveis de hematologia (hemácias, hemoglobina, hematócrito, proteínas plasmáticas totais [PPT], trombócitos, leucócitos, eosinófilos, monócitos, heterofilos e linfócitos) e bioquímica sérica (proteínas séricas totais [PST], albumina, globulinas, aspartato aminotransferase [AST], gama glutamiltransferase [GGT], fosfatase alcalina [FA], cálcio total, cálcio iônico, fósforo, sódio, potássio e cloretos) aos 21 e 42 dias. Os dados foram submetidos à análise de variância. Quando as médias diferiram significativamente pelo teste F, a análise ortogonal foi realizada para testar os efeitos lineares e quadráticos dos níveis dos sulfatos de condroitina e de glucosamina. Observou-se efeito linear decrescente (p = 0,0399) do sulfato de glucosamina na quantidade de monócitos aos 42 dias. Houve interação dos sulfatos para leucócitos totais (p = 0,0099) e linfócitos (p = 0,0004) aos 21 dias. Frangos suplementados com 0,10% de sulfato de condroitina mostraram um aumento linear dos leucócitos (p = 0,0287) e dos linfócitos (p = 0,0144) com a inclusão de sulfato de glucosamina. A suplementação com sulfato de condroitina aumentou linearmente (p = 0,0099) a albumina sérica e afetou de forma quadrática (p = 0,0140) as PST aos 21 dias. O sulfato de glucosamina demonstrou um efeito quadrático (p < 0,05) sobre a albumina aos 42 dias, o menor valor foi encontrado para a inclusão de 0,06%, respectivamente. O sulfato de glucosamina reduziu linearmente (p = 0,0237) os cloretos aos 21 dias e aumentou linearmente (p = 0,0012) o cálcio total aos 42 dias. Verificouse interação (p < 0,05) dos sulfatos para cálcio total aos 21 dias, cálcio iônico aos 21 e 42 dias e para fósforo, cloretos e sódio aos 42 dias. A suplementação com os sulfatos de condroitina e de glucosamina na ração de frangos de corte favoreceram o sistema imune e o metabolismo de minerais, com aumento nas concentrações séricas de cálcio, fósforo e sódio.(AU)

Clinical study of chondroitin sulfate urinary excretion following intramuscular application of the chondroitin sulfate and glucosamine association in horses / Estudo da excreção urinária de condroitim sulfato após administração intramuscular da associação de condroitim sulfato e glucosamina em cavalos

A osteoartrite é uma importante afecção do aparelho locomotor de equinos, e os condroprotetores têm obtido papel importante no manejo da dor e como adjuvantes na redução de doses e na frequência de aplicação de outros fármacos que apresentam efeitos deletérios. O condroitim sulfato (CS) e a glucosamina (GlcN) são condroprotetores com potenciais efeitos anti-inflamatórios e anticatabólicos, cuja administração oral é a via mais frequente e controversa por resultar em baixa biodisponibilidade. Por essa razão, a administração intramuscular pode ser mais vantajosa. O objetivo do presente estudo foi avaliar os períodos de tempo para se atingir o pico de excreção urinária de CS e o início de declínio, após injeção intramuscular de produto à base de CS e de GlcN, em seis cavalos hígidos, na dose de 2 mL/100kg de condroitim sulfato A (750 mg/mL) e sulfato de glucosamina (750 mg/mL). Amostras de urina foram coletadas, no mesmo horário, no dia anterior (D-1), no dia da administração (D0), as quais constituíram o valor basal, e por mais sete dias (D1 a D7). O CS urinário foi extraído por cromatografia de troca iônica em coluna de Q-Sepharose Fast Flow, identificado por eletroforese em gel de agarose e mensurado por meio de densitometria, enquanto a creatinina urinária foi mensurada por analisador bioquímico automático. Os níveis de CS excretado (mg/L) aumentaram (P<0,0097) no D1 (24 horas) em relação ao momento basal (D0) e diminuíram no D7 (P<0,05) em relação ao D1, além dos níveis da relação CS/creatinina (mg/g) se elevarem significativamente (P<0,012) no D1 (24 horas) em relação ao basal e diminuírem no D5 (P<0,015), se comparados ao D1 e ao D2 (P<0,002). Não houve diferença significativa (P<0,05) da creatinina (g/L) nos momentos avaliados. Uma única aplicação de CS e de GlcN injetável foi capaz de aumentar consideravelmente as concentrações urinárias de CS 24 horas após, decaindo a partir do quinto dia. Esse período fundamenta o intervalo de cinco dias entre tratamentos injetáveis desses condroprotetores na OA em equinos.

Uso do carprofeno associado aos glicosaminoglicanos em cães com osteoartrite / Use of carprofen associated with glycosaminoglycans in dogs with osteoarthritis

O presente trabalho avaliou os efeitos analgésicos do carprofeno associado ou não à condroitina com glicosamina no tratamento de 26 cães com osteoartrite, distribuídos nos grupos: GT ­ carprofeno (Carproflan®); GTP ­ carprofeno e glicosaminoglicanos (Carproflan® e Procart®); e GC ­ somente analgésico (dipirona). A evolução dos pacientes foi classificada na escala de claudicação no dia do primeiro atendimento e aos 7, 14 e 21 dias. No GT, 60% dos animais apresentou melhora clínica a partir do 7º dia, 30% não alterou seu escore de claudicação e 10% apresentou êmese a partir do 7º dia, com suspensão da medicação. No GTP, 60% dos animais apresentou melhora clínica a partir do 7º dia, 30% não alterou seu escore de claudicação, 5% apresentou êmese a partir do 7º dia e 5% a partir do 14º dia, com suspensão da medicação. No GC, nenhum animal apresentou melhora clínica. Conclui-se que os animais submetidos ao tratamento com carprofeno apresentaram melhora na claudicação, principalmente quando associado aos glicosaminoglicanos.(AU)

The analgesic effects of carprofen associated or not with chondroitin with glucosamine were evaluated in the treatment of 26 dogs with osteoarthritis, distributed into groups: TG ­ carprofen (Carproflan®); PTG ­ carprofen and glycosaminoglycans (Carproflan® and Procart®); and CG ­ only analgesic (dipyrone). The evolution of patients was classified on the lameness scale on the first day of care and at 7, 14 and 21 days. In the TG, 60% of the animals showed clinical improvement from the 7th day, 30% did not change their lameness score and 10% had emesis from the 7th day, with discontinuation of the medication. In the PTG, 60% of the animals showed clinical improvement from the 7th day, 30% did not change their lameness score, 5% had emesis from the 7th day and 5% from the 14th day, with discontinuation of the medication. In the CG, no animal showed clinical improvement. It was concluded that animals undergoing treatment with carprofen showed improvement in lameness, especially when associated with glycosaminoglycans.(AU)

Use of glycosaminoglycans from Oreochromisniloticus skin as an antioxidant supplement for milt cryopreservation of Brazilian bocachico / Uso de glicosaminoglicanos da pele Oreochromis niloticus como suplemento antioxidante na criopreservação de sêmen de curimatã comum (Prochilodus brevis)

The study aimed to evaluate the in vitro antioxidant action of glycosaminoglycans (GAGs) from the skinof Oreochromis niloticus, and to determine their ideal concentration to supplement the sperm freezing medium of Prochilodus brevis. In experiment 1, the in vitro antioxidant properties of GAGs were verified through the analysis of DPPH, chelating ferrous ability, and total antioxidant capacity. In experiment 2, milt pools were formed, which were frozen in solution supplemented or not with different GAGs concentrations: 0 (control), 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, or 5.0 mg mL-¹ (total of 10 treatments). The samples were evaluated for membrane integrity, DNA integrity, sperm morphology, and sperm kinetics. The results of experiment 1 showed that the GAGs exhibited, with the increase of the concentration, significant antioxidant action, for all the evaluated tests, mainly in the chelating ferrous ability. In experiment 2, it was observed that the increase of GAGs concentration decreased kinetic parameters (P < 0.05), however, the control and 0.5 mg mL-1 GAGs concentration showed similar results. For the other parameters (membrane integrity, DNA integrity, and sperm morphology), there was no decrease in results with the increase of GAGs concentration. In conclusion, GAGs extracted from O. niloticus skin have antioxidant action, and the concentration of 0.5 mg mL-¹ was the most adequate to supplement the P. brevis sperm-freezing medium.

O estudo teve como objetivo avaliar in vitro a ação antioxidante de glicosaminoglicanos (GAGs) da pele de Oreochromis niloticus e determinar sua concentração ideal para suplementar o meio de congelação espermático de Prochilodus brevis. No experimento 1, foram verificadas as propriedades antioxidantes in vitro dos GAGs por meio das análises de DPPH, capacidade quelante do ferro e capacidade antioxidante total. No experimento 2, foram formados pool de sêmen, que foram congelados em solução suplementada, ou não, com diferentes concentrações de GAGs: 0 (controle); 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0; 3,5; 4,0; 4,5 ou5,0 mg mL-¹ (total de 10 tratamentos). As amostras foram avaliadas quanto à integridade da membrana, integridade do DNA, morfologia e cinética espermática. Os resultados do experimento 1, mostraram que os GAGs exibiram, com o aumento da concentração, ação antioxidante significativa, para todos os testes avaliados, principalmente na capacidade quelante do ferro. No experimento 2, observou-se que o aumento da concentração de GAGs diminuiu os parâmetros cinéticos (P < 0,05), porém o controle e a concentração de 0,5 mg mL-1 de GAGs apresentaram resultados semelhantes. Para os demais parâmetros (morfologia, integridade de membrana e de DNA), não houve diminuição dos resultados com o aumento da concentração de GAGs. Em conclusão, os GAGs, extraídos da pele de O. niloticus, possuem ação antioxidante, sendo a concentração de 0,5 mg mL-1 a mais adequada para suplementar o meio de congelação espermático de P. brevis.

Use of glycosaminoglycans from Oreochromisniloticus skin as an antioxidant supplement for milt cryopreservation of Brazilian bocachico / Uso de glicosaminoglicanos da pele Oreochromis niloticus como suplemento antioxidante na criopreservação de sêmen de curimatã comum (Prochilodus brevis)

The study aimed to evaluate the in vitro antioxidant action of glycosaminoglycans (GAGs) from the skinof Oreochromis niloticus, and to determine their ideal concentration to supplement the sperm freezing medium of Prochilodus brevis. In experiment 1, the in vitro antioxidant properties of GAGs were verified through the analysis of DPPH, chelating ferrous ability, and total antioxidant capacity. In experiment 2, milt pools were formed, which were frozen in solution supplemented or not with different GAGs concentrations: 0 (control), 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, or 5.0 mg mL-¹ (total of 10 treatments). The samples were evaluated for membrane integrity, DNA integrity, sperm morphology, and sperm kinetics. The results of experiment 1 showed that the GAGs exhibited, with the increase of the concentration, significant antioxidant action, for all the evaluated tests, mainly in the chelating ferrous ability. In experiment 2, it was observed that the increase of GAGs concentration decreased kinetic parameters (P < 0.05), however, the control and 0.5 mg mL-1 GAGs concentration showed similar results. For the other parameters (membrane integrity, DNA integrity, and sperm morphology), there was no decrease in results with the increase of GAGs concentration. In conclusion, GAGs extracted from O. niloticus skin have antioxidant action, and the concentration of 0.5 mg mL-¹ was the most adequate to supplement the P. brevis sperm-freezing medium.(AU)

O estudo teve como objetivo avaliar in vitro a ação antioxidante de glicosaminoglicanos (GAGs) da pele de Oreochromis niloticus e determinar sua concentração ideal para suplementar o meio de congelação espermático de Prochilodus brevis. No experimento 1, foram verificadas as propriedades antioxidantes in vitro dos GAGs por meio das análises de DPPH, capacidade quelante do ferro e capacidade antioxidante total. No experimento 2, foram formados pool de sêmen, que foram congelados em solução suplementada, ou não, com diferentes concentrações de GAGs: 0 (controle); 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0; 3,5; 4,0; 4,5 ou5,0 mg mL-¹ (total de 10 tratamentos). As amostras foram avaliadas quanto à integridade da membrana, integridade do DNA, morfologia e cinética espermática. Os resultados do experimento 1, mostraram que os GAGs exibiram, com o aumento da concentração, ação antioxidante significativa, para todos os testes avaliados, principalmente na capacidade quelante do ferro. No experimento 2, observou-se que o aumento da concentração de GAGs diminuiu os parâmetros cinéticos (P < 0,05), porém o controle e a concentração de 0,5 mg mL-1 de GAGs apresentaram resultados semelhantes. Para os demais parâmetros (morfologia, integridade de membrana e de DNA), não houve diminuição dos resultados com o aumento da concentração de GAGs. Em conclusão, os GAGs, extraídos da pele de O. niloticus, possuem ação antioxidante, sendo a concentração de 0,5 mg mL-1 a mais adequada para suplementar o meio de congelação espermático de P. brevis.(AU)

Properties, bioactive potential and extraction processes of glycosaminoglycans: an overview / Propriedades, potencial bioativo e processos de extração de glicosaminoglicanos: uma visão geral

Glycosaminoglycans (GAGs) are long-chain polysaccharides that are divided into sulphates and non-sulphates, these being chondroitin sulphate, heparan sulphate, dermatan sulphate, heparin sulphate and the only non-sulphate in the group is hyaluronic acid. GAGs are obtained from animal tissue and by an expensive low-yield extraction process; however, they are highly commercially valued polysaccharides and exploited in the biomedical market. Their disaccharidic composition, chain length and sulfation pattern present great variability depending on the species and extraction factors. GAGs possess immunomodulatory, antioxidant, antiviral, anti-inflammatory, neuroprotective, antiproliferative and anticoagulant properties, functioning as therapeutic agents modulating an array of biological processes. This report presents the general aspects of each GAG, source and extraction process, in addition to the characteristics that give them the most varied therapeutic properties and pharmacological applications.(AU)

Os glicosaminoglicanos (GAGs) são polissacarídeos de cadeias longas que se dividem em sulfatados e não sulfatados, sendo estes, sulfato de condroitina, sulfato de heparana, sulfato de dermatana, sulfato de heparina e o único não sulfatado do grupo que é o ácido hialurônico. Os GAGs são encontrados em todo tecido animal, são extraídos por um processo de alto custo e baixo rendimento, no entanto, o material obtido é valorizado comercialmente e amplamente explorado no mercado biomédico. Sua composição dissacarídica, comprimento da cadeia e padrão de sulfatação apresentam grande variabilidade dependendo das espécies e fatores de extração. Os GAGs possuem propriedades imunomoduladoras, antioxidantes, antivirais, anti-inflamatórias, neuroprotetoras, antiproliferativas e anticoagulantes, além de farmacológicas, funcionando como agentes terapêuticos moduladores de uma série de processos biológicos. Este relatório apresenta os aspectos gerais de cada GAG, fonte e processo de extração, além das características que lhes conferem as mais variadas propriedades terapêuticas e aplicações farmacológicas.(AU)

Mucopolissacaridose tipo I em cão / Mucopolysaccharidosis type I in a dog

Background: Mucopolysaccharidoses (MPS) are a group of rare illnesses caused by deficient activity of enzymes requiredfor degradation of glycosaminoglycans (GAGs). Each type of MPS is caused by mutations in one of the genes that encodethe 11 acid hydrolases involved in this degradation process, which are present in the lysosomes. Progressive accumulationof GAGs in the lysosomes result in cellular dysfunction and multisystemic clinical signs, with consequent decrease in quality of life and lifespan of the affected patients. The objective of the present work is to report a case of MPS type I in a dog.Case: A mixed-breed male dog of approximately 2-month-old weighing 2.5 kg was referred to Hospital Veterinário deUberaba with a distended abdomen. At the clinical examination, the patient exhibited a regular nutritional status, pale mucous membranes, 7% dehydration, an arterial pulse rate of 120 beats per minute, a respiratory rate of 40 breaths per minute,and a heart rate of 120 beats per minute. There were increased abdominal volume and tension, and hepatosplenomegaly.The abdominal percussion exam produced a dull tone. Additional findings included muscular atrophy, increased volume inthe metaphyseal areas of the thoracic and pelvic limbs, valgus limb deformity in the thoracic limbs, and instability of thehip joint. Radiographic examination revealed a series of bone alterations such as reduced vertebral bodies, a generalizeddecrease in radiopacity, thin cortical areas in long bones, narrowing of the pelvic canal, and marked deformation and irregularities in acetabular and epiphyseal (both proximal and distal) areas of the femurs and tibias. Ankylosis of the tibiotarsal andtarsometatarsal joints was also observed. There was also loss of trabecular structure and irregularities on the surfaces of allepiphyses of the bones, epiphyseal lines markedly open, and bones that were...

Mucopolissacaridose tipo I em cão / Mucopolysaccharidosis type I in a dog

Background: Mucopolysaccharidoses (MPS) are a group of rare illnesses caused by deficient activity of enzymes requiredfor degradation of glycosaminoglycans (GAGs). Each type of MPS is caused by mutations in one of the genes that encodethe 11 acid hydrolases involved in this degradation process, which are present in the lysosomes. Progressive accumulationof GAGs in the lysosomes result in cellular dysfunction and multisystemic clinical signs, with consequent decrease in quality of life and lifespan of the affected patients. The objective of the present work is to report a case of MPS type I in a dog.Case: A mixed-breed male dog of approximately 2-month-old weighing 2.5 kg was referred to Hospital Veterinário deUberaba with a distended abdomen. At the clinical examination, the patient exhibited a regular nutritional status, pale mucous membranes, 7% dehydration, an arterial pulse rate of 120 beats per minute, a respiratory rate of 40 breaths per minute,and a heart rate of 120 beats per minute. There were increased abdominal volume and tension, and hepatosplenomegaly.The abdominal percussion exam produced a dull tone. Additional findings included muscular atrophy, increased volume inthe metaphyseal areas of the thoracic and pelvic limbs, valgus limb deformity in the thoracic limbs, and instability of thehip joint. Radiographic examination revealed a series of bone alterations such as reduced vertebral bodies, a generalizeddecrease in radiopacity, thin cortical areas in long bones, narrowing of the pelvic canal, and marked deformation and irregularities in acetabular and epiphyseal (both proximal and distal) areas of the femurs and tibias. Ankylosis of the tibiotarsal andtarsometatarsal joints was also observed. There was also loss of trabecular structure and irregularities on the surfaces of allepiphyses of the bones, epiphyseal lines markedly open, and bones that were...(AU)

Influência de polissacarídeos sulfatados sobre a motilidade e morfologia espermática pós descongelação de Prochilodus brevis / (Influence of sulfated polysaccharides on post-thawing sperm motility and morphology of Prochilodus brevis

This research aims to verify the influence of sulfated polysaccharides, extracted from the skin of tilapia, on the after thawing motility and morphology of P. brevis sperm. For this, 17 males were hormonally induced to reproduce, through the application of two doses of pituitary carp extract, 0.4 and 4.0mg kg-1. After the seminal collection, objective analyzes were performed and samples with motility greater than 80% were selected to form the pools. Then, the pools were frozen in solution supplemented, or not, with different concentrations of glycosaminoglycans (GAGs): 0 (control); 0.5; 1.0; 1.5; 2.0; 2.5; 3.0; 3.5; 4.0; 4.5 or 5.0mg mL-¹ (total of 10 treatments). The samples were placed in 0.25 mL French straws and submitted to an equilibrium time of 10 minutes at 4 ºC. Then, they were kept in the dry shipper for 15 minutes and finally stored in liquid nitrogen. After 15 days, samples were thawed in a water bath at 30 ºC for 16 seconds and evaluated for sperm motility and morphology. Thus, it was observed that the increase in GAGs caused a decrease in sperm motility, however the control and the concentration of 0.5mg mL-¹ presented very similar data. On the other hand, no decrease in normal sperm was observed with an increase in the concentration of GAGs. Therefore, it is concluded that the lowest concentration of GAGs is the most adequate to supplement the sperm freezing medium.

Influência de polissacarídeos sulfatados sobre a motilidade e morfologia espermática pós descongelação de Prochilodus brevis / (Influence of sulfated polysaccharides on post-thawing sperm motility and morphology of Prochilodus brevis

This research aims to verify the influence of sulfated polysaccharides, extracted from the skin of tilapia, on the after thawing motility and morphology of P. brevis sperm. For this, 17 males were hormonally induced to reproduce, through the application of two doses of pituitary carp extract, 0.4 and 4.0mg kg-1. After the seminal collection, objective analyzes were performed and samples with motility greater than 80% were selected to form the pools. Then, the pools were frozen in solution supplemented, or not, with different concentrations of glycosaminoglycans (GAGs): 0 (control); 0.5; 1.0; 1.5; 2.0; 2.5; 3.0; 3.5; 4.0; 4.5 or 5.0mg mL-¹ (total of 10 treatments). The samples were placed in 0.25 mL French straws and submitted to an equilibrium time of 10 minutes at 4 ºC. Then, they were kept in the dry shipper for 15 minutes and finally stored in liquid nitrogen. After 15 days, samples were thawed in a water bath at 30 ºC for 16 seconds and evaluated for sperm motility and morphology. Thus, it was observed that the increase in GAGs caused a decrease in sperm motility, however the control and the concentration of 0.5mg mL-¹ presented very similar data. On the other hand, no decrease in normal sperm was observed with an increase in the concentration of GAGs. Therefore, it is concluded that the lowest concentration of GAGs is the most adequate to supplement the sperm freezing medium.(AU)

Desenvolvimento embrionário/fetal, placentação e glicosaminoglicanos no aparelho reprodutor feminino e na placenta / Embryonic/fetal development, placentation and glycosaminoglycans in the female reproductive tract and placenta

Background: Fetal attachments, placentation and embryonic development have been widely discussed in rodents such as agoutisand cavies, as well as research on glycosaminoglycans (GAGs) in rats and rabbits. Moreover, studies on buffalo, cattle and sheep aredescribed in ruminants, and work has also been reported in sheep with GAGs in placentoma. However, further studies are needed inthis regard, since there are reports of economic losses associated with reproductive failures described for cattle such as changes in thechorion and allantois, and in sheep in which changes between the transition from vitelline to allantois circulation have been discussed.Review: In relation to embryonic development, detailed studies have been described in rodents such as rats (12 days old), desertmouse (15 days old) and agoutis at 30 days. Macroscopic structures such as the cephalic region, nose, optic vesicle, cervical curvature, thoracic and pelvic limbs were observed, as well as microscopic structures such as the pituitary, lung, heart, brain cavity, liver,retina, and ossification regions. There are reports of buffalo and cattle studies in ruminants describing early embryonic development.However, the research in the case of sheep is limited, meaning there is only the ultrasound examination, such as gestational diagnosisand morphometric measurement of the embryonic vesicle. Still, studies with umbilical funicular and placental development of sheepwith different gestational ages can be highlighted. Regarding extraembryonic annexes, four important structures which contributeto embryonic maintenance have been reported. These are called the chorion, amnion, allantois and yolk sac, respectively, and areresponsible for originating the placenta, embryonic protection, collecting metabolic waste and early embryonic nutrition. In...

Desenvolvimento embrionário/fetal, placentação e glicosaminoglicanos no aparelho reprodutor feminino e na placenta / Embryonic/fetal development, placentation and glycosaminoglycans in the female reproductive tract and placenta

Background: Fetal attachments, placentation and embryonic development have been widely discussed in rodents such as agoutisand cavies, as well as research on glycosaminoglycans (GAGs) in rats and rabbits. Moreover, studies on buffalo, cattle and sheep aredescribed in ruminants, and work has also been reported in sheep with GAGs in placentoma. However, further studies are needed inthis regard, since there are reports of economic losses associated with reproductive failures described for cattle such as changes in thechorion and allantois, and in sheep in which changes between the transition from vitelline to allantois circulation have been discussed.Review: In relation to embryonic development, detailed studies have been described in rodents such as rats (12 days old), desertmouse (15 days old) and agoutis at 30 days. Macroscopic structures such as the cephalic region, nose, optic vesicle, cervical curvature, thoracic and pelvic limbs were observed, as well as microscopic structures such as the pituitary, lung, heart, brain cavity, liver,retina, and ossification regions. There are reports of buffalo and cattle studies in ruminants describing early embryonic development.However, the research in the case of sheep is limited, meaning there is only the ultrasound examination, such as gestational diagnosisand morphometric measurement of the embryonic vesicle. Still, studies with umbilical funicular and placental development of sheepwith different gestational ages can be highlighted. Regarding extraembryonic annexes, four important structures which contributeto embryonic maintenance have been reported. These are called the chorion, amnion, allantois and yolk sac, respectively, and areresponsible for originating the placenta, embryonic protection, collecting metabolic waste and early embryonic nutrition. In...(AU)

Envolvimento da matriz extracelular no tumor mamário canino / Extracellular matrix involviment in canine mammary tumor

A glândula mamária (GM) é um tecido dinâmico, derivado da epiderme e o seu desenvolvimento depende da interação entre as células mamárias e o estroma. A matriz extracelular (MEC) representa o principal conteúdo extracelular, responsável pela sustentação do tecido conjuntivo, da membrana basal e serve como reservatório para muitos fatores de crescimento. MEC é constituída por fibras proteicas insolúveis, como colágenos, lamininas, fibronectinas, e polímeros solúveis, como proteoglicanos e glicosaminoglicanos. Essas moléculas que compõem a MEC são importantes, tanto durante a morfogênese da GM, como para a sua manutenção conferindo-lhe a sustentação e o armazenamento de substratos necessários para seu crescimento. A desorganização da MEC na GM pode ser um indício necessário para o início e a progressão dotumor de mama. O Tumor mamário canino (TMC) é referido como um complexo de neoplasias que tem a participação de diversos fatores para seu desenvolvimento, incluindo os componentes da MEC. Desta forma, a investigação da MEC no diagnóstico dos TMC torna-se importante, para estabelecer a correlação entre os seus componentes e as células neoplásicas, além de fornecer informações sobre o comportamento biológico e o estadiamento clínico dos TMC. O entendimento da participação dessas moléculas da MEC para o desenvolvimento do TMC pode favorecer abordagens terapêuticas mais específicas, tendo como alvo elementos da MEC. Portanto, esta revisão tem como foco a participação dos componentes da MEC nos processos que contribuem para o estabelecimento do TMC, o que pode favorecer abordagens terapêuticas que visem elementos da MEC.

Mammary gland (MG) is a dynamic tissue derived from the epidermis and your development depends on the interaction between mammary cells and stroma. Extracellular matrix (ECM) is the major extracellular content of tissues responsible for supporting connective tissue and basement membrane, and serves as a reservoir for many growth factors. ECM is comprised of insoluble protein fibers as collagens, laminins, fibronectins and soluble polymers as proteoglycans, and glycosaminoglycans. The ECM components are important both during morphogenesis of MG as to maintain this fabric giving support and storage of substrates needed for the growth. ECM disorder in GM may be the progression trigger of the breast tumor. Canine mammary tumor (CMT) is a complex of malignancies that have the participation of several factors for its development, including ECM components. Therefore an investigation of ECM in the diagnosis of CMT becomes important to establish a relationship between componentes of matrix and neoplastic cells, including information on the biological behavior and clinical staging of CMT. The knowledge of ECM molecules participation in the development of CMT may further therapeutic approaches targeting elements of ECM. Thus, this review has a focus on the ECM components participation in the processes that contribute to CMT establishment, which may favor therapeutic approaches targeting elements of ECM.

Envolvimento da matriz extracelular no tumor mamário canino / Extracellular matrix involviment in canine mammary tumor

A glândula mamária (GM) é um tecido dinâmico, derivado da epiderme e o seu desenvolvimento depende da interação entre as células mamárias e o estroma. A matriz extracelular (MEC) representa o principal conteúdo extracelular, responsável pela sustentação do tecido conjuntivo, da membrana basal e serve como reservatório para muitos fatores de crescimento. MEC é constituída por fibras proteicas insolúveis, como colágenos, lamininas, fibronectinas, e polímeros solúveis, como proteoglicanos e glicosaminoglicanos. Essas moléculas que compõem a MEC são importantes, tanto durante a morfogênese da GM, como para a sua manutenção conferindo-lhe a sustentação e o armazenamento de substratos necessários para seu crescimento. A desorganização da MEC na GM pode ser um indício necessário para o início e a progressão dotumor de mama. O Tumor mamário canino (TMC) é referido como um complexo de neoplasias que tem a participação de diversos fatores para seu desenvolvimento, incluindo os componentes da MEC. Desta forma, a investigação da MEC no diagnóstico dos TMC torna-se importante, para estabelecer a correlação entre os seus componentes e as células neoplásicas, além de fornecer informações sobre o comportamento biológico e o estadiamento clínico dos TMC. O entendimento da participação dessas moléculas da MEC para o desenvolvimento do TMC pode favorecer abordagens terapêuticas mais específicas, tendo como alvo elementos da MEC. Portanto, esta revisão tem como foco a participação dos componentes da MEC nos processos que contribuem para o estabelecimento do TMC, o que pode favorecer abordagens terapêuticas que visem elementos da MEC.(AU)

Mammary gland (MG) is a dynamic tissue derived from the epidermis and your development depends on the interaction between mammary cells and stroma. Extracellular matrix (ECM) is the major extracellular content of tissues responsible for supporting connective tissue and basement membrane, and serves as a reservoir for many growth factors. ECM is comprised of insoluble protein fibers as collagens, laminins, fibronectins and soluble polymers as proteoglycans, and glycosaminoglycans. The ECM components are important both during morphogenesis of MG as to maintain this fabric giving support and storage of substrates needed for the growth. ECM disorder in GM may be the progression trigger of the breast tumor. Canine mammary tumor (CMT) is a complex of malignancies that have the participation of several factors for its development, including ECM components. Therefore an investigation of ECM in the diagnosis of CMT becomes important to establish a relationship between componentes of matrix and neoplastic cells, including information on the biological behavior and clinical staging of CMT. The knowledge of ECM molecules participation in the development of CMT may further therapeutic approaches targeting elements of ECM. Thus, this review has a focus on the ECM components participation in the processes that contribute to CMT establishment, which may favor therapeutic approaches targeting elements of ECM.(AU)

Recelularização de scaffolds biológicos provenientes de traqueia canina para a bioengenharia de tecidos

A bioengenharia tecidual é uma ferramenta recente e promissora que busca alternativas para tentar solucionar, ou ao menos diminuir a necessidade de órgãos para transplante. A descelularização da matriz extracelular (MEC), aplicada à engenharia de órgãos e tecidos pode fabricar scaffolds biológicos acelulares. A MEC, amplamente utilizada em estudos na medicina regenerativa, pode ser derivada tanto de pacientes doadores humanos como de espécies animais. Ao ser aplicada in vivo, a MEC descelularizada pode influenciar na proliferação e diferenciação celular, favorecendo assim a controle da resposta imune do órgão transplantado. Utilizando-se scaffolds acelulares, é possível cultivar células- tronco e ou outras células de interesse para recelularização, que associadas a fatores de crescimento, podem auxiliar na obtenção de um órgão viável e funcional, sem riscos de rejeição. Frente à longa espera de pacientes com disfunções traqueais, doenças congênitas e ou adquiridas (i.e.: neoplasias, fístula, estenose / reestenose e colapso de traqueia), este projeto buscou obter e padronizar a descelularização de scaffolds biológicos de traqueia caninas, avaliando se estes são passíveis de recelularização com células epiteliais da traqueia canina (EpC) e células progenitoras endoteliais do saco vitelino canino (SV). Padronizamos três protocolos otimizados de descelularização (químico e físico) para obtenção dos scaffolds acelulares de traqueia canina, com estrutura tridimensional e componentes da MEC preservados. A utilização da alta pressão à vácuo associado ao detergente SDS resultou na maior redução de DNA genômico e, preservação da estrutura e da composição de glicosaminoglicanos (GAGs) e proteoglicanos (PGs) da MEC traqueal descelularizada. A associação in vitro da MEC com as células EpC e SV por 7 e 14 dias, demonstraram sucesso no processo de recelularização promovendo a adesão e proliferação celular, bem como sua capacidade de biocompatibilidade quando implantadas in vivo. Por fim, nossos resultados corroboram com esforços de obtenção de possíveis substitutos parciais de traqueia para futura aplicação na medicina veterinária regenerativa e engenharia de tecidos.

Tissue bioengineering is a recent and hopeful tool that seeks alternatives to solve, or at least reduce the organs transplantation needed. Decellularization of the extracellular matrix (ECM), applied to organ and tissue engineering, can generate acellular biological scaffolds. The ECM, widely used in regenerative medicine studies, can be derived from both human donor patients and animal species. When applied in vivo, decellularized ECM can influence cell proliferation and differentiation, thus improving the control of the immune response of the transplanted organ. Using acellular scaffolds, it is possible to culture stem cells or other cells of interest for recellularization, which associated with growth factors, could improve to obtain a viable and functional organ, without rejection risk. Faced with the long wait of patients with tracheal dysfunctions, congenital and/or acquired diseases (i.e.: neoplasms, fistula, stenosis / restenosis and tracheal collapse), this project aims to obtain and standardize the decellularization of canine tracheal biological scaffolds, evaluating whether they are susceptible of recellularization with canine tracheal epithelial cells (EpC) and canine endothelial progenitor yolk sac cells (YS). We standardized three optimized decellularization protocols (chemical and physical) in order to obtain acellular canine trachea scaffolds, with three-dimensional structure and ECM components preserved. The use of high vacuum pressure associated with SDS detergent resulted in a better reduction of genomic DNA and, the structure and composition of glycosaminoglycans (GAGs) and proteoglycans (PGs) of the decellularized tracheal ECM preserved. The MEC associated in vitro with EpC and SV cells for 7 and 14 days, demonstrated success in the recellularization process promoting cell adhesion and proliferation, as well as its biocompatibility capacity when implanted in vivo. Finally, our results corroborate efforts to obtain possible partial replacements of the trachea for future application in regenerative veterinary medicine and tissue engineering.

SUPLEMENTAÇÃO DO MEIO DE CONGELAÇÃO SEMINAL DE Prochilodus brevis COM POLISSACARÍDEOS SULFATADOS EXTRAÍDOS DE PELE DE TILÁPIA E DE ALGAS MARINHAS

Prochilodus brevis, ou curimatã comum, é um peixe reofílico que encontra-se com sua sobrevivência ameaçada por ações antrópicas. Assim, esforços pela preservação da espécie têm sido tomados, o que tornou necessário aprimorar as biotécnicas reprodutivas, como a criopreservação seminal, com potenciais agentes antioxidantes. Diante disso, o estudo objetivou elaborar um protocolo de criopreservação seminal de P. brevis suplementando o meio de congelação com polissacarídeos sulfatados (PS), extraídos de algas marinhas (Gracilaria domingensis ou Ulva fasciata) ou pele de tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus). Para isso, no experimento 1, verificou-se o potencial antioxidante in vitro (análises de DPPH, capacidade quelante do ferro e capacidade antioxidante total) das glicosaminoglicanos (GAG) da pele de O. niloticus e sua suplementação, em diferentes concentrações (0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0; 3,5; 4,0; 4,5 ou 5,0 mg/mL), no meio de congelação seminal (Glicose + dimetilsufóxido - DMSO). No experimento 2, o sêmen foi diluído no meio de congelação (Glicose + DMSO) suplementado com diferentes concentrações (0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5 e 3.0 mg/mL) de PS de duas algas marinhas (G. domingensis ou U. fasciata). Em ambos os experimentos, um tratamento não suplementado foi utilizado como controle, as amostras foram criopreservadas e, após um período, analisadas: cinética (motilidade total; motilidade progressiva; velocidade curvilinear [VCL], velocidade em linha reta [VSL], velocidade média de deslocamento [VAP], linearidade [LIN] e oscilação [WOB]), morfologia, integridade de membrana plasmática (IMP) e de DNA espermáticos (IDE) e potencial de membrana mitocondrial (PMM experimento 2). No experimento 1, foi verificado que os GAG nas maiores concentrações apresentam maior ação antioxidante in vitro, especialmente na atividade quelante do ferro, contudo o aumento das concentrações dos GAG diminuiu os parâmetros cinéticos, porém a concentração de 0,5 mg mL-1 apresentou resultados semelhantes ao controle. Para os parâmetros de morfologia, IMP e IDE, não houve diminuição dos resultados com o aumento das concentrações das GAG. No experimento 2, não houve interação entre as algas e as concentrações. As algas testadas, independentemente da concentração, não diferiram entre si. Ao comparar as concentrações, independentemente da alga, 1,0 mg/mL de PS apresentou melhores resultados para VCL e VSL. Para VAP e WOB, 1,0 mg/mL de PS apresentou melhores resultados, mas diferiu estatisticamente apenas de 3,0 mg/mL. LIN seguiu o mesmo padrão, mas diferiu estatisticamente das concentrações de 2,5 e 3,0 mg/mL de PS. Para motilidade progressiva, 1,0 mg/mL de G. domingensis apresentou resultados superiores em relação ao controle. Para PMM, G. domingensis foi superior a U. fasciata, independentemente da concentração. As menores concentrações (0,5 e 1,0 mg/mL) apresentaram os melhores resultados, independentemente da alga. No entanto, para PMM, o controle foi superior a todos os tratamentos testados. Dessa forma, conclui-se que os GAG, extraídos da pele de O. niloticus, possuem ação antioxidantes in vitro e as menores concentrações (0,5 mg/mL) de GAG e PS de G. domingensis são um suplemento em potencial para o meio de congelação de P. brevis.

Prochilodus brevis, or Brazilian bocachico, is a rheophilic fish that meets its threats through anthropic actions. Thus, efforts to preserve the species have been taken, which made it necessary to improve reproductive biotechniques, such as seminal cryopreservation, with potential antioxidant agents. Therefore, the study aimed to develop a protocol for seminal cryopreservation of P. brevis supplementing the freezing medium with sulfated polysaccharides (PS), extracted from seaweed (Gracilaria domingensis or Ulva fasciata) or Nile tilapia skin (Oreochromis niloticus). For this, in experiment 1, the in vitro antioxidant potential (DPPH analysis, iron chelating capacity and total antioxidant capacity) of the O. niloticus skin glycosaminoglycans (GAG) and their supplementation at different concentrations (0.5; 1.0; 1.5; 2.0; 2.5; 3.0; 3.5; 4.0; 4.5 or 5.0 mg/mL), in the seminal freezing medium (Glucose + dimethyl sufoxide - DMSO). In experiment 2, semen was diluted in freezing medium (Glucose + DMSO) supplemented with different concentrations (0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5 and 3.0 mg/mL) of PS from two marine algae (G. domingensis or U. fasciata). In both experiments, an unsupplemented treatment was used as a control, the samples were cryopreserved and, after a period, analyzed: kinetics (total motility; Progressive motility; curvilinear velocity [VCL], straight line velocity [VSL], mean velocity of the path [VAP], linearity [LIN] and wobble [WOB]), morphology, plasma membrane integrity (IMP) and sperm DNA (IDE) and mitochondrial membrane potential (PMM experiment 2). In experiment 1, it was verified that GAGs at higher concentrations have greater antioxidant action in vitro, especially in the chelating activity of iron, however the increase in GAG concentrations decreased the kinetic parameters, but the concentration of 0.5 mg mL-1 presented results similar to the control. For the parameters of morphology, IMP and IDE, there was no decrease in results with increasing concentrations of GAG. In experiment 2, there was no interaction between algae and concentrations. The algae tested, regardless of concentration, did not differ from each other. When comparing the concentrations, regardless of the alga, 1.0 mg/mL of PS showed better results for VCL and VSL. For VAP and WOB, 1.0 mg/mL of PS showed better results, but statistically differed only from 3.0 mg/mL. LIN followed the same pattern, but differed statistically from the concentrations of 2.5 and 3.0 mg/mL of PS. For progressive motility, 1.0 mg/mL of G. domingensis showed superior results compared to the control. For PMM, G. domingensis was superior to U. fasciata, regardless of concentration. The lowest concentrations (0.5 and 1.0 mg/mL) showed the best results, regardless of the alga. However, for PMM, the control was superior to all tested treatments. Thus, it is concluded that the GAG, extracted from the skin of O. niloticus, have antioxidant action in vitro and the lowest concentrations (0.5 mg/mL) of GAG and PS of G. domingensis are a potential supplement for the freezing medium of P. brevis.

Effect of fermentation conditions on the production of hyaluronic acid by Streptococcus zooepidemicus ATCC 39920 / Efeito das condições de fermentação na produção de ácido hialurônico por Streptococcus zooepidemicus ATCC 39920

The production of hyaluronic acid by Streptococcus zooepidemicus ATCC 39920 with varying rates of pH (6.0, 7.0, 8.0), temperature (34; 37; 40°C), agitation (100, 150, 200 rpm), glucose (10, 20, 30 g L-1) and yeast extract concentration (10, 20, 30 g L-1) was evaluated by statistical approaches. The best conditions for the production of hyaluronic acid was pH 8.0, 37°C and 100 rpm in a medium containing 30 g L-1 glucose and yeast extract, for a production of 0.787 g L-1. Temperature, pH and yeast extract were significant variables (p 0.05). Yeast extract and pH had a positive effect on the production of the polymer. Lactate, formate and acetate synthesis were also analyzed. Current assay showed the feasibility of statistical tools to optimize the physical and nutritional parameters for the production of hyaluronic acid and the improvement of the fermentation process.(AU)

A produção de ácido hialurônico por Streptococcus zooepidemicus ATCC 39920 foi avaliada variando pH (6,0; 7,0, 8,0), temperatura (34; 37; 40°C), agitação (100, 150, 200 rpm) e concentração de glicose (10, 20, 30 g L-1) e extrato de levedura (10, 20, 30 g L-1) por metodologias estatísticas. A condição otimizada foi pH 8,0, 37°C e 100 rpm, em meio contendo 30 g L-1 de glicose e extrato de levedura atingindo a produção de 0,787 g L-1. O pH, temperatura e extrato de levedura foram as variáveis significativas (p 0,05). Extrato de levedura e pH apresentaram efeito positivo para a produção do polímero. A síntese de ácido lático, fórmico e acético também foi analisada. Este estudo demonstra a viabilidade de utilização de ferramentas estatísticas para otimizar os parâmetros físicos e nutricionais para a produção de ácido hialurônico, permitindo a melhoria do processo fermentativo.(AU)

Descelularização de coração suíno: caracterização e quantificação estereológica da matriz extracelular do ventrículo esquerdo

As doenças cardiovasculares são responsáveis pela maior causa de mortes do mundo todo, e em casos como infarto agudo do miocárdio, o tratamento padrão ouro é o transplante do órgão. O número de doadores cresceu no país nos últimos anos, ainda não consegue suprir a demanda. Neste contexto, a medicina regenerativa vem ganhando espaço, mais precisamente na produção de órgãos e tecidos a partir da técnica de descelularização, onde todas as células e fatores imunogênicos são retirados, mantendo apenas a arquitetura tridimensional, formada a partir de matriz extracelular (MEC). A MEC é um microambiente composto principalmente por proteínas estruturais, como por exemplo colágeno e elastina, proteínas de adesão e também os glicosaminoglicanos (GAGs), responsáveis pela substância amorfa. Ela não é responsável apenas pela arquitetura do tecido, mas também é responsável por todo suporte de comunicação, sinalização e estruturação. Embora inúmeros trabalhos venham estudando os componentes da MEC, faz-se necessário quantifica-los para melhor compreensão e sua aplicação. A MEC cardíaca é composta, na sua maioria por colágeno e elastina, elementos que fornecem estrutura mecânica do órgão. Neste trabalho objetivou-se caracterizar corações suínos descelularizados como um scaffold e quantificar estereologicamente, por meio de colorações específicas, como o colágeno e glicosaminoglicano totais, além de avaliar a complacência do órgão. A descelularização foi testada com formas de canulação diferentes, adotando a canulação pela artéria aorta, realizada a perfusão retrógrada em 25 dias, com sódio dodecil sulfato (SDS) a 1%, focando na maior retenção possível da estrutura da MEC. Em relação à sua composição, os corações descelularizados não apresentaram diferenças significativas quanto à complacência e ao valor de colágeno total, enquanto houve a diminuição dos GAGs; Essa diminuição nos corações decelularizados pode ser justificada pelo uso do SDS, já que são moléculas que possuem características higroscópica. Esses resultados reforçam a ideia de que o nosso protocolo de descelularização foi eficiente em relação à retenção das proteínas da MEC.

Cardiovascular diseases are responsible for the biggest cause of death worldwide, and in cases such as acute myocardial infarction, the gold standard treatment is organ transplantation. The number of donors has grown in the country in recent years, still unable to meet the demand. In this context, regenerative medicine has been gaining space, more precisely in the production of organs and tissues using the decellularization technique, where all cells and immunogenic factors are removed, maintaining only the three-dimensional architecture, formed from extracellular matrix (ECM). MEC is a microenvironment mainly composed of structural proteins, such as collagen and elastin, adhesion proteins and also glycosaminoglycans (GAGs), responsible for the amorphous substance. She is not only responsible for the architecture of the tissue, but is also responsible for all communication, signage and structuring support. Although numerous studies have been studying the components of MEC, it is necessary to quantify them for better understanding and their application. Cardiac ECM is mostly composed of collagen and elastin, elements that provide the organ's mechanical structure. This work aimed to characterize decellularized pig hearts as a scaffold and to quantify stereologically, through specific stains, such as total collagen and glycosaminoglycan, in addition to assessing the organ's compliance. Decellularization was tested with different forms of cannulation, adopting cannulation through the aortic artery, performed a retrograde perfusion in 25 days, with 1% sodium dodecyl sulfate (SDS), focusing on the greatest possible retention of the ECM structure. Regarding their composition, decellularized hearts did not show significant differences regarding compliance and total collagen value, while there was a decrease in GAGs; This decrease in decellularized hearts can be justified by the use of SDS, since they are molecules that have hygroscopic characteristics. These results reinforce the idea that our decellularization protocol was efficient in relation to the retention of MEC proteins.

Avaliação da composição da matriz extracelular do músculo estriado esquelético de cães com distrofia muscular comparados com cães não distróficos SÃO PAULO 2020

A distrofia muscular de Duchenne (DMD) é uma doença que causa degeneração progressiva dos músculos estriados esqueléticos e cardíacos, causada pela perda da função do gene da distrofina, devido a uma mutação genética. É caracterizada por uma perda progressiva da função muscular. Músculos com deficiência de distrofina são vulneráveis à danos induzidos pela contração, o que leva a ciclos repetidos de necrose e regeneração, resultando em falha de regeneração, aumento da fibrose e perda progressiva da função muscular. Dentro do músculo esquelético, a matriz extracelular é duplamente importante para fornecer um suporte celular e transmitir forças contráteis musculares. No entanto, o acúmulo patológico de certos componentes na matriz extracelular muscular, que ocorre na fibrose especificamente, prejudica a função celular normal e a transmissão de força, bem como inibe o reparo e a regeneração, compondo desse modo o defeito celular primário. A DMD vem recebendo atenção especial das comunidades médicas por ser uma doença comum em homens (devido à mutação que ocorre no cromossomo X), além de ser um distúrbio grave e atualmente uma doença sem cura. Devido à necessidade de se descobrir o real impacto da DMD na estrutura molecular dos músculos estriados esqueléticos e cardíacos a partir dos componentes proteicos da matriz extracelular dos músculos , avaliamos o grau de alterações de distrofia muscular de cães usados como modelo da DMD comparados com cães não distróficos. Assim, utilizando modelos caninos com distrofia muscular, devido à proximidade de sinais fenotípicos humanos, a saber, atrofia muscular, perda de massa corporal, fadiga muscular e comprometimento cardíaco, buscamos verificar a influência da distrofia muscular na estrutura proteica do músculo estriado esquelético. A partir de amostras de músculos descelularizados de cães distróficos e não distróficos, realizamos análises histológicas e imunohistoquímicas visando avaliar alteração nos componentes da matriz extracelular em cães com deficiência de distrofina. Obtivemos uma satisfatória descelularização, com ausência de núcleos celulares na matriz, e também constatamos que houve alterações na estrutura da matriz extracelular, a saber, preservação de colágeno e proteínas adesivas como fibronectina e laminina, bem como uma diminuição dos glicosaminoglicanos após o processo de descelularização.

Duchenne muscular dystrophy (DMD) is a disease that causes progressive degeneration of the skeletal and cardiac striated muscles, caused by the loss of dystrophin gene function due to a genetic mutation. It is characterized by a progressive loss of muscle function. Muscles with dystrophin deficiency are vulnerable to contraction-induced damage, which leads to repeated cycles of necrosis and regeneration, resulting in failed regeneration, increased fibrosis, and progressive loss of muscle function. Within the skeletal muscle, the extracellular matrix is doubly important for providing cellular support and transmitting contractile muscle forces. However, the pathological accumulation of certain components in the extracellular muscle matrix, which occurs in fibrosis specifically, normal cell function and force transmission impairs, as well as inhibits repair and regeneration, thus composing the primary cell defect. DMD has been receiving special attention from medical communities because it is a common disease in men (due to the mutation that occurs in the X chromosome), as well as being a serious disorder and currently a disease without cure. Due to the need to discover the real impact of DMD on the molecular structure of the skeletal and cardiac striated muscles - from the protein components of the extracellular muscle matrix -, I evaluated the degree of muscular dystrophy changes in dogs used as a model of DMD compared with non-dystrophic dogs. Thus, using canine models with muscular dystrophy, due to the proximity of human phenotypic signs, namely, muscle atrophy, loss of body mass, muscle fatigue and cardiac involvement, I sought to verify the influence of muscular dystrophy on the protein structure of skeletal striated muscle. From samples of decellularized muscles of dystrophic and non-dystrophic dogs, we performed histological and immunohistochemical analyzes to evaluate changes in extracellular matrix components in dogs with dystrophin deficiency.We obtained satisfactory decellularization, with absence of cell nuclei in the matrix, and we also found that there were changes in the structure of the extracellular matrix, namely, preservation of collagen and adhesive proteins such as fibronectin and laminin, well as a decrease in glycosaminoglycans after the process of decellularization.

Implante de nova prótese helicoidal de nitinol para a correção de colapso traqueal

O colapso de traqueia (CT) é uma doença degenerativa e progressiva, que afeta principalmente pets de meia idade a idosos. Até o presente momento, não se sabe todo o mecanismo fisiopatológico por detrás dessa alteração, mas alguns autores já demonstraram que os anéis traqueais de animais acometidos apresentam degeneração com concomitante diminuição de glicosaminoglicanos e hipocelularidade. Tais alterações acarretam maior fragilidade cartilaginosa, e afrouxamento da membrana traqueal. Consequentemente, há um colapso dinâmico da traqueia (LOPEZ-MINGUEZ et al., 2019). Sabe-se que os animais mais acometidos são cães de pequeno porte, sendo algumas raças mais frequentemente observadas, tais como: shih-tzu; chihuahua; maltês; Lulu da Pomerânia; Yorkshire terrier; Pinscher. Além de maior prevalência nessas raças, observa-se ainda maior ocorrência de sinais clínicos em pacientes obesos e mais velhos (ROZANSKI, 2015; JEUNG et al., 2019; LOPEZMINGUEZ et al., 2019). Pacientes acometidos podem apresentar distintos sinais clínicos inerentes ao trato respiratório. Contudo, a tosse seca e alta é o sinal clínico mais frequentemente observado. Além desta, intolerância a exercícios, cianose, dispneia e síncope podem se fazer presentes (LOPEZ-MINGUEZ et al., 2019). Os tratamentos medicamentosos, atualmente utilizados para o manejo de pacientes com CT visam diminuir o estresse respiratório, sendo assim, melhorar a qualidade de vida dos mesmos. São inúmeras as abordagens terapêuticas já relatadas, dentre elas a utilização de corticoesteróides, antitussígenos, broncodilatadores, antibióticos, na presença de infecção secundária e até mesmo a utilização de esteroides androgênicos como o stanozolol (ADAMAMA-MORAITOU et al., 2011; KORMAN & WHITE, 2013; LOPEZ-MINGUEZ et al., 2019). Contudo o manejo terapêutico nem sempre se mostra eficaz, e o paciente continua apresentando alta frequência de sinais clínicos, sendo muitas vezes necessário manejo cirúrgico para prover melhor qualidade de vida a esses pacientes. Não há um consenso de qual é a técnica cirúrgica mais adequada para o tratamento do CT. Porém diferentes metodologias já foram descritas, desde abordagens para a colocação de próteses de polipropileno extraluminais, previamente relatadas por HOBSON (1976), à colocação de próteses intraluminais confeccionadas a partir de nitinol (MORITZ et al., 2004; BEAL, 2013; TINGA et al., 2015; SUEMATSU et al., 2019). Sabe-se que poucos estudos buscaram compreender e estabelecer melhores protocolos terapêuticos para o CT em cães. Portanto, devido as altas taxas de complicações relatadas nas técnicas cirúrgicas preconizadas, bem como a biocompatibilidade do material utilizado nessas próteses, faz-se necessária a realização de novos estudos que busquem melhores taxas de sucesso e menores taxas de complicações no manejo de CT em cães, a fim de garantir melhor qualidade e expectativa de vida a estes pacientes. Assim sendo, tem-se como hipótese deste estudo a utilização de nova prótese helicoidal de nitinol, para resolução do CT intratorácico, com consequente estabilização traqueal e menores complicações respiratórias geradas pelo CT nos pacientes acometidos. Espera-se que essa prótese mostre-se efetiva em relação à técnica operatória, bem como na redução das complicações trans ou pós operatórias.

Tracheal collapse (CT) is a progressive and degenerative disease that mainly affects middle-aged pets to the elderly. To date, the entire pathophysiological mechanism behind this change is unknown, but some authors have already demonstrated that the tracheal rings of affected animals show degeneration with a concomitant decrease in glycosaminoglycans and hypocellularity. Such changes lead to greater cartilaginous fragility, and loosening of the tracheal membrane. Consequently, there is a dynamic collapse of the trachea (LOPEZ-MINGUEZ et al., 2019). It is known that the animals most affected are small dogs, with some breeds being more frequently observed, such as: shih-tzu; chihuahua; Maltese; Pomeranian Lulu; Yorkshire terrier; Pinscher. In addition to a higher prevalence in these breeds, there is an even greater occurrence of clinical signs in obese and older patients (ROZANSKI, 2015; JEUNG et al., 2019; LOPEZMINGUEZ et al., 2019). Affected patients may present distinct clinical signs inherent to the respiratory tract. However, a high, dry cough is the most frequently observed clinical sign. In addition to this, exercise intolerance, cyanosis, dyspnoea and syncope may be present (LOPEZ-MINGUEZ et al., 2019). Drug treatments, currently used for the management of patients with CT aim to reduce respiratory stress, thus improving their quality of life. There are countless therapeutic approaches already reported, including the use of corticosteroids, antitussives, bronchodilators, antibiotics, in the presence of secondary infection and even the use of androgenic steroids such as stanozolol (ADAMAMA-MORAITOU et al., 2011; KORMAN & WHITE , 2013; LOPEZ-MINGUEZ et al., 2019). However, therapeutic management is not always effective, and the patient continues to have a high frequency of clinical signs, and surgical management is often necessary to provide a better quality of life for these patients. There is no consensus on the most appropriate surgical technique for the treatment of CT. However, different methodologies have already been described, from approaches to the placement of extraluminal polypropylene prostheses, previously reported by HOBSON (1976), to the placement of intraluminal prostheses made from nitinol (MORITZ et al., 2004; BEAL, 2013; TINGA et al., 2015; SUEMATSU et al., 2019). It is known that few studies have sought to understand and establish better therapeutic protocols for CT in dogs. Therefore, due to the high rates of complications reported in the recommended surgical techniques, as well as the biocompatibility of the material used in these prostheses, it is necessary to carry out new studies that seek better success rates and lower rates of complications in the management of CT in dogs in order to ensure better quality and life expectancy for these patients. Therefore, the hypothesis of this study is the use of a new helical nitinol prosthesis for the resolution of intrathoracic CT, with consequent tracheal stabilization and less respiratory complications generated by CT in the affected patients. It is expected that this prosthesis will prove effective in relation to the operative technique, as well as in reducing trans or post-operative complications.