Caracterização estrutural do hormônio folículo estimulante e seu papel na fisiologia de células ovarianas / Structural Characterization of the Follicle Stimulating Hormone and its role in the physiology of ovarian cells

The follicle stimulating hormone (FSH) is a heterodimeric glycoprotein synthesized and secreted in the pituitary anterior portion (adenohypophysis). The FSH performs important actions in the later stages of follicular development and maturation. The FSH exerts multiple functions such as the activation of more than 100 genes encoding different answers. The action of FSH is restricted to the granulosa cells. This gonadotropin acts through the activation of the enzyme adenylate cyclase in the plasma membrane, which forms AMPc from ATP. The AMPc promotes metabolic changes that characterize the gonadotropic action, usually through the phosphorylation of protein kinases. During the physiological process of ovulation, estrogens enhance the stimulatory effect of FSH and cause the release of FSH/LH required for ovulation. The mature follicle itself is responsible for ovulation, as it secrets estradiol, hormone responsible for the pre-ovulatory peak of LH, resulting in ovulation. Thus, the addition of FSH to the culture media characterizes important actions, as the follicular development and the ovulation process. Thus, the revision of the objective was to describe the role of FSH and its mechanism of action and receptor in ovarian follicular development. And as well as the effect of this on survival, activation and follicular growth.

O hormônio folículo estimulante (FSH) é uma glicoproteína heterodímera sintetizada e secretada na porção anterior da hipófise (adenohipófise). O FSH desempenha ações relevantes nos estádios mais avançados do desenvolvimento e maturação folicular. O FSH exerce múltiplas funções como a ativação de mais de 100 genes que codificam diferentes respostas. A ação do FSH está restrita as células da granulosa. Esta gonadotrofina atua por meio da ativação da enzima adenilciclase na membrana plasmática, a qual forma AMPc a partir de ATP. O AMPc promove as mudanças metabólicas que caracterizam a ação gonadotrópica, normalmente por meio da fosforilação de proteínas-quinases. Durante o processo fisiológico da ovulação, os estrógenos melhoram o efeito estimulador do FSH e provocam a liberação de FSH/LH necessária para a ovulação. O próprio folículo maduro é responsável pela ovulação, pois secreta estradiol, hormônio responsável pelo pico pré-ovulatório de LH, resultando na ovulação. Diante disso, a adição de FSH aos meios de cultivo caracteriza ações importantes, como, o desenvolvimento folicular e o processo de ovulação. Desta forma, o objetivo da revisão foi descrever o papel do FSH e seu mecanismo de ação e receptores no desenvolvimento folicular ovariano. E bem como, o efeito deste sobre a sobrevivência, a ativação e o crescimento folicular.

Caracterização estrutural do hormônio folículo estimulante e seu papel na fisiologia de células ovarianas / Structural Characterization of the Follicle Stimulating Hormone and its role in the physiology of ovarian cells

The follicle stimulating hormone (FSH) is a heterodimeric glycoprotein synthesized and secreted in the pituitary anterior portion (adenohypophysis). The FSH performs important actions in the later stages of follicular development and maturation. The FSH exerts multiple functions such as the activation of more than 100 genes encoding different answers. The action of FSH is restricted to the granulosa cells. This gonadotropin acts through the activation of the enzyme adenylate cyclase in the plasma membrane, which forms AMPc from ATP. The AMPc promotes metabolic changes that characterize the gonadotropic action, usually through the phosphorylation of protein kinases. During the physiological process of ovulation, estrogens enhance the stimulatory effect of FSH and cause the release of FSH/LH required for ovulation. The mature follicle itself is responsible for ovulation, as it secrets estradiol, hormone responsible for the pre-ovulatory peak of LH, resulting in ovulation. Thus, the addition of FSH to the culture media characterizes important actions, as the follicular development and the ovulation process. Thus, the revision of the objective was to describe the role of FSH and its mechanism of action and receptor in ovarian follicular development. And as well as the effect of this on survival, activation and follicular growth.(AU)

O hormônio folículo estimulante (FSH) é uma glicoproteína heterodímera sintetizada e secretada na porção anterior da hipófise (adenohipófise). O FSH desempenha ações relevantes nos estádios mais avançados do desenvolvimento e maturação folicular. O FSH exerce múltiplas funções como a ativação de mais de 100 genes que codificam diferentes respostas. A ação do FSH está restrita as células da granulosa. Esta gonadotrofina atua por meio da ativação da enzima adenilciclase na membrana plasmática, a qual forma AMPc a partir de ATP. O AMPc promove as mudanças metabólicas que caracterizam a ação gonadotrópica, normalmente por meio da fosforilação de proteínas-quinases. Durante o processo fisiológico da ovulação, os estrógenos melhoram o efeito estimulador do FSH e provocam a liberação de FSH/LH necessária para a ovulação. O próprio folículo maduro é responsável pela ovulação, pois secreta estradiol, hormônio responsável pelo pico pré-ovulatório de LH, resultando na ovulação. Diante disso, a adição de FSH aos meios de cultivo caracteriza ações importantes, como, o desenvolvimento folicular e o processo de ovulação. Desta forma, o objetivo da revisão foi descrever o papel do FSH e seu mecanismo de ação e receptores no desenvolvimento folicular ovariano. E bem como, o efeito deste sobre a sobrevivência, a ativação e o crescimento folicular.(AU)

FISIOLOGIA REPRODUTIVA DAS FEMEAS DE Potamotrygon wallacei Carvalho, Rosa e Araujo (2016): GONADOTROFINAS, HORMONIOS ESTEROIDES, CONDICAO CORPORAL E PERFIL BIOQUIMICO

Este estudo investigou durante diferentes momentos do ciclo reprodutivo, o perfil dos hormonios gonadotroficos (FSH e LH), dos esteroides (T, E2, P4 e 11-CT) e as variaveis bioquimicas (lipidios, proteinas, glicose, sais minerais e compostos nitrogenados) no plasma e no fluido uterino de femeas de Potamotrygon wallacei. Foram coletadas 71 femeas de P. wallacei das quais 26 estavam gravidas (8 em gravidez inicial e 18 em gravidez final), 28 em pos-parto e 16 em repouso reprodutivo. Percebeu-se que a gravidez ocorre durante todo o periodo de vazante, enquanto o parto durante a seca e inicio da enchente no Rio Negro. O custo da reproducao e elevado na arraia cururu, isso pode ser visto pelos baixos valores fator de condicao relativo (Kn 0,93) nas femeas em pos-parto. Assim como o Kn, o IHS tende a diminuir gradativamente do inicio da gravidez (3,55%) ate no momento do parto (2,75%). A gravidez pode estimular a mobilizacao de sais minerais materno para o embriao, em vista que os ions plasmaticos calcio (Ca2+), cloreto (Cl-) e magnesio (Mg2+) estavam em baixa concentracao (2,50 mM; 109,26 mM e 0,94 mM) nessa fase. Na contramao, a ureia tem um aumento (12,36mM) durante a gravidez, indicando que isso deve-se as atividades ureogenicas tanto materna, quanto embrionaria. Os lipideos estao entre os mais importantes substratos envolvidos na reproducao. A correlacao positiva entre o IHS e a concentracao de triglicerideos (TGC) plasmaticos (p<0,005) reforca o papel do figado como importante orgao de reserva energetica para o periodo de gravidez. Observou-se que as femeas de P. wallacei com elevados teores dos hormonios esteroides plasmaticos 17-Estradiol (E2) e progesterona (P4) apresentavam baixo conteudo de lipideos (TGC e colesterois totais) plasmaticos. De maneira semelhante, tanto E2, quanto P4 apresentaram baixos valores durante a gravidez da arraia cururu, especialmente na fase final da gestacao (2060 pg/mL e 309,70 pg/mL), porem aumentam apos o parto (2679,70 pg/mL e 741,36 pg/mL) e se mantem durante o repouso reprodutivo (2760,95 pg/mL e 458,25 pg/mL). Quantos aos androgenos, no caso da T, assume-se como sendo o precursor do E2; enquanto o aumento de 11-CT (9,23 pg/mL) durante a gravidez, pode ser justificado pela agressividade das femeas nesse periodo. As concentracoes de FSH e LH foram quantificaveis no plasma da arraia cururu, porem, nao apresentaram variacao em funcao do estado reprodutivo. Nossos estudos revelam que a femea supre o feto produzindo e/ou transferindo varios compostos nutricionais. Contudo, o custo da reproducao e extremamente elevado, sugerindo que as populacoes da arraia cururu podem ser extremamente dependentes da qualidade ambiental. Portanto, a pesca negativa (captura ou morte do animal sem uso racional do recurso), a pesca dirigida sobre as femeas, a perda de habitats e as mudancas climaticas extremas podem representar os principais perigos para a conservacao desta especie.

This study investigated during different moments of the reproductive cycle, the profile of gonadotropic hormones (FSH and LH), steroids (T, E2, P4 and 11-CT) and biochemical variables (lipids, proteins, glucose, mineral salts and nitrogen compounds) in plasma and uterine fluid of Potamotrygon wallacei females. Seventy-one P. wallacei females were collected from which 26 were pregnant (8 in early pregnancy and 18 in late pregnancy), 28 postpartum and 16 in reproductive rest. It was noticed that pregnancy occurs during the whole period of ebb, while childbirth during drought and the beginning of the flood in Rio Negro. The cost of reproduction is high in the cane stingray, this could be seen by the low relative condition factor values (Kn 0,93) in postpartum females. Like Kn, IHS tends to decrease gradually from early pregnancy (3,55%) to the moment of delivery (2,75%). Pregnancy may stimulate the mobilization of maternal mineral salts to the embryo, as the calcium (Ca2+), chloride (Cl-) and magnesium (Mg2+) plasma ions were in low concentration (2,50 mM, 109,26 mM and 0,94 mM) at this stage. In contrast, urea has an increase (12,36 mM) during pregnancy, indicating that this is due to both maternal and embryonic ureogenic activities. Lipids are among the most important substrates involved in reproduction. The positive correlation between IHS and plasma triglyceride (TGC) concentration (p<0,005) reinforces the role of the liver as an important energy reserve organ for the pregnancy period. It was observed that P. wallacei females with high levels of plasma steroid hormones 17-Estradiol (E2) and progesterone (P4) had low plasma lipid content (TGC and total cholesterols). Similarly, both E2 and P4 showed low values during cane stingray pregnancy, especially in late gestation (2060 pg/mL and 309.70 pg/mL), but increased after delivery (2679,70 pg/mL); 741,36 pg/mL) and is maintained during reproductive rest (2760,95 pg/mL and 458,25 pg/mL). As for androgens, in the case of T, it is assumed to be the precursor of E2; while the increase of 11-CT (9,23 pg/mL) during pregnancy may be justified by the aggressiveness of females during this period. The concentrations of FSH and LH were quantifiable in the plasma of the stingray stingray, however, they did not vary according to the reproductive state. Our studies reveal that the female supplies the fetus by producing and/or transferring various nutritional compounds. However, the cost of reproduction is extremely high, suggesting that canary stingray populations may be extremely dependent on environmental quality. Therefore, negative fishing (capture or death of the animal without rational use of the resource), female-directed fishing, habitat loss and extreme climate change may pose major dangers to the conservation of this species

Resposta superovulatória de caprinos da raça Boer submetidos a produtos com diferentes relações FSH:LH

This study aimed to investigate the efficiency and standards in the superrovulatory response to products with different relationships FSH:LH. It Were used 43 female Boer goats breed. On a random day of the estrous cycle, the animals received half of an implant of progesterone (Crestar®). In the eleventh day, began stimulation to superovulation through the use of FSH fractionated in six decreasing doses administered every 12 hours and the animals were separated into two groups: group I (GI, n=22) received 200mg of FSH (Folltropin®) intramuscularly (i.m) on days D11 (62,5mg), D12 (35,0mg) and D13 (2,5mg), while the group II (GII, n=21) received 300UI FSH (Pluset®) intramuscularly on days D11 (75UI), D12 (50UI) and D13 (25UI). In 60 and 72h after onset of superovulation the implants were removed and applied two doses of 125µg de Cloprostenol (Ciosin®) by intravulvosubmucosal in all animals. Twelve, 24 and 36 hours after removal of the implant, the females were placed with four breeders to be covered. In D16, the implants were reinserted and 24 hours before collection of embryos the implants were withdrawl and administered 125µg de Cloprostenol in each animal intramuscularly. Embryo were collected on D21, selected and classified. The results obtained in this study showed no statistical difference between groups regarding the number of recovered structures, viable embryos, degenerate embryos and unfertilized structures. So, the different relationships FSH:LH evaluated did not affect embryos production and quality.

Objetivou-se averiguar a eficiência e padrões na resposta superovulatória de caprinos da raça Boer submetidos a produtos com diferentes relações FSH:LH. Foram utilizadas 43 fêmeas caprinas da raça Boer. Em um dia aleatório do ciclo estral, os animais receberam metade de um implante de progesterona (Crestar®). No dia 11, iniciou-se o estímulo à superovulação por meio da utilização do FSH fracionado em seis doses decrescentes administradas a cada 12 horas e os animais foram separados em dois grupos: o grupo I (GI, n=22) recebeu 200mg de FSH (Folltropin®) por via intramuscular (i.m.) nos dias D11 (62,5mg), D12 (35,0mg) e D13 (2,5mg), enquanto o grupo II (GII, n=21) recebeu 300UI de FSH (Pluset®) por via i.m. nos dias D11 (75UI), D12 (50UI) e D13 (25UI). Nas 60 e 72h após o início da superovulação foram retirados os implantes, e aplicaram-se duas doses de 125µg de Cloprostenol (Ciosin®) por via intravulvosubmucosa em todos os animais. Doze, 24 e 36 horas após a remoção dos implantes, as fêmeas foram colocadas com quatro reprodutores para serem cobertas. No D16, os implantes foram reinseridos e, nas 24h antes da coleta dos embriões, retiraram-se os implantes, e administrou-se 125µg de Cloprostenol i.m. a cada animal. Os embriões foram coletados no D21, selecionados e classificados. Os resultados obtidos nesse estudo mostraram que não houve diferença estatística entre os grupos, quanto ao número de estruturas recuperadas, embriões viáveis, embriões degenerados e estruturas não fertilizadas. Portanto, as diferentes relações FSH:LH avaliadas não afetaram a produção e a qualidade de embriões.

MATURAÇÃO E FERTILIZAÇÃO IN VITRO DE OÓCITOS ESTÁDIO III DE ZEBRAFISH

Protocolos de sucesso para a maturação in vitro de oócitos de peixe são importantes, uma vez que é necessário para garantir uma fertilização bem sucedida, formação do zigoto, crescimento do embrião e seu completo desenvolvimento. Em algumas espécies, a eficiência deste processo ainda é muito baixa ou restrita a poucas substâncias que podem ser utilizadas. Assim, pesquisou-se a utilização de hormônios alternativos ao protocolo já existente para maturação in vitro de ovócitos de zebrafish. O objetivo foi avaliar a eficiência do extrato de hipófise de carpa (EHC), dos hormônios folículo estimulante (FSH) e luteinizante (LH) para fazer a maturação dos ovócitos estádio III de zebrafish. Os oócitos estádio III foram colocados em meio de cultivo Leibovitz modificado, suplementado com soro fetal bovino e adicionado o hormônio correspondente a seu tratamento (T1-controle; T2-16 µg/ml de EHC; T3- 32 µg/ml de EHC; T4- 48 µg/ml de EHC; T5- 64 µg/ml de EHC; T6- 80 µg/ml de EHC; T7- 0,5 µg/ml de FSH; T8- 0,5 µg/ml de LH e T9- 0,5 µg/ml de FSH e 0,5 µg/ml de LH). A taxa de maturação foi avaliada através da visualização da quebra da vesícula germinal (GVBD). Em todos os tratamentos houve maturação, embora o EHC tenha demonstrado taxas de maturação muito baixas (T2= 12,8%; T3=24,8%; T4=27%; T5=22,7%; T6=9,7%) e inferiores em relação a maior eficiência dos hormônios gonadotrópicos (T7=16%; T8=35%; T9=50%). Além disso foi possível verificar a viabilidade dos oócito através da fertilização in vitro do melhor tratamento (T9) com uma taxa de eclosão e desenvolvimento em larva de 60%. Os resultados da maturação in vitro utilizando estes indutores hormonais em oócitos estádio III de zebrafish mostraram-se promissores, e reforçam as perspectivas para o aprimoramento e uso desta técnica para produção in vitro de embriões viáveis.

Successful protocols for maturation of oocytes are important, as it is necessary for ensuring successful fertilization, zygote formation, embryo growth and full development. In some species the efficiency of in vitro maturation is still very low or is still restricted to a little amount of substances which can be used for the matter. Thus, we studied the use of alternative hormones to the existing protocol for in vitro maturation of zebrafish oocytes. The aim of this study was to evaluate the efficiency of the use of carp pituitary extract (CPE), the follicle stimulating hormone (FSH) and luteinizing hormone (LH) to oocyte maturation stage III of zebrafish. Oocytes stage III were placed in modified Leibovitz culture medium, suplemented with fetal bovine serum and added to the correnponding hormone treatment (T1-control; T2-16 g / ml of CHE; T3 32 g / ml of CHE, T4 - 48 g / ml of CHE; T5- 64 g / ml of CHE; T6- 80 g / ml of CHE; T7- 0.5 g / ml of FSH, T8 0.5 mg / ml of LH and T9- 0.5 g / ml of FSH and 0.5 mg / ml LH). The maturation rate was assessed by the germinal vesicle break down (GVBD). In all cases there was maturation, though the EHC has demonstrated fairly low maturation rate (T2= 12,8%; T3=24,8%; T4=27%; T5=22,7%; T6=9,7%) and lower in relation of the high efficiency presented by the gonadotropic hormones (T7=16%; T8=35%; T9=50%). In addition it was possible to verify the viability of the oocyte through IVF of the best treatment (T9) with a result of 60% of hatching and larvae development rate. The results of maturation in turn using this hormones in stage III oocytes of zebrafish proved promising, and enhance the prospects for improvement and use of this technique for in vitro production of viable embryos.

Fontes lipídicas e ácidos graxos essenciais no desenvolvimento ovariano e desempenho reprodutivo de jundiás cinza Rhamdia quelen

A nutrição de reprodutores é um dos principais aspectos relacionados com a qualidade dos ovos e larvas produzidos. Os lípidos e sua composição em ácidos graxos são considerados importantes para o desenvolvimento das gônadas, sobre hormônios gonadotrópicos e esteroidiais, bem como influencia a formação de estruturas biológicas incluindo membranas celulares. Os ácidos graxos essenciais para os peixes são o ácido linoleico e o ácido linolênico, que quando convertidos fornecem os ácidos graxos poli-insaturados, como ARA, EPA e DHA, respectivamente. O óleo de pescado marinho é considerado uma fonte ideal de ácidos graxos poli-insaturados, no entanto, os óleos vegetais são mais comumente utilizados em dietas de peixe. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o desenvolvimento ovariano e o desempenho reprodutivo de jundiás (Rhamdia quelen) alimentados com diferentes fontes lipídicas (óleo de soja, óleo de peixe marinho, óleo de palma refinado e a mistura dos três óleos). As fontes lipídicas não influenciaram no desenvolvimento do ovário, nos níveis de estradiol e 17-hidroxyprogesterona, e nos índices gonadossomáticos. No entanto, o ácido graxos influenciaram no perfil de ácidos encontrados no fígado, gônadas e oócitos. Adicionalmente dietas `a base de o óleo de palma resultou em melhores taxas de fertilização, sendo recomendado sua utilização em substituição ao óleo de pescado marinho.

Broodstock nutrition is one of the main aspects related with the quality of eggs and larvae produced. Lipids and its fatty acid composition are considered important on gonadal development, gonadotropic and steroid hormones, as well as influencing the formation of biological structures including cell membranes. In fish linoleic and linolenic are the essential fatty acids, which mabe converted into polyunsaturated fatty acids, like ARA, EPA and DHA, respectively. The marine fish oil are good sources of polyunsaturated fatty acids, however, vegetable oils are more communly used in fish diets. Thus, the aim of this study was to evaluate the ovarian and reproductive development of silver catfish (Rhamdia quelen) fed with lipid sources (soybean oil, marine fish oil, refined palm oil and a mixture). The lipid sources did not influence ovarian development, levels of estradiol, 17-hidroxyprogesterona, and gonadosomatic index. However, the fatty acid changed fatty acid profile found in the liver, gonads and oocytes. Additionally, palm oil give rise to better fertilization rates and are recommended, suggesting that it may be used for fish oil replacement.

PRODUÇÃO DE OÓCITOS E EMBRIÕES BUBALINOS: EFEITOS DA ÉPOCA DO ANO E DA ADIÇÃO DE ÓLEO ESSENCIAL DE Lippia origanoides NA MATURAÇÃO IN VITRO

Esta pesquisa pretendeu estabelecer estratégias para aumentar a eficiência da produção in vitro de embriões (PIVE) bubalinos. Neste contexto, avaliou a eficiência de protocolos de sincronização de doadoras de oócitos bubalinas visando aumentar a disponibilidade e qualidade dos oócitos obtidos pela aspiração folicular guiada por ultrassom (OPU) e o efeito da fonte de obtenção dos oócitos sobre a quantidade e qualidade dos mesmos. Além disso, analisou-se o efeito do fotoperíodo sobre a quantidade e qualidade do oócitos disponíveis, além da competência destes expressos pelas taxas de PIVE. Por fim, avaliou-se o efeito da adição do óleo essencial de Lippia origanoides (OELO) nas concentrações de 2,5; 5,0 e 10µg/mL, no meio de maturação in vitro (MIV) sobre as taxas de maturação oocitária, qualidade embrionária e PIVE em bovinos e bubalinos. Ovários e oócitos de animais não protocolados, protocolados por aspiração prévia dos folículos e protocolados com uso de hormônios esteróides e gonadotróficos, foram avaliados ultrassonograficamente e de acordo com a qualidade dos oócitos recolhidos por OPU. Demonstrou-se não haver variação na população folicular, no número e na qualidade dos oócitos recuperados por sessão, exceto uma redução dos folículos e oócitos Grau A foi notada quando o ciclo estral foi sincronizado por aspiração prévia dos folículos(p<0,05). Em relação a fonte de obtenção, para todos parâmetros avaliados, foi notada superioridade quando oócitos são recuperados de ovários de frigorífico(p<0,05). A qualidade dos oócitos recolhidos por OPU e a PIVE bubalinos foi influenciada pelo fotoperíodo na região estudada, elevando-se durante os meses de baixa luminosidade(p<0,05), fato não observado em bovinos. Por fim, a partir de avaliações da cromatina com DAPI, encontrou-se uma elevação da taxa de maturação nuclear em bovinos quando utilizou-se concentrações de 2,5µg/mL de OELO(p<0,05). A qualidade dos embriões, expressa pelo número de células, aumentou quando utilizou-se concentrações de 2,5 e 5µg/mL do OELO em bubalinos(p<0,05). Embora não tenha alterado a taxa final de PIVE em ambas as espécies, o OELO apresentou boas perspectivas quando acrescido aos meios MIV em razão da melhoria da qualidade embrionária e da maturação nuclear dos oócitos.

This study aimed to develop strategies to increase the efficiency of buffalo in vitro embryo production (IVEP). In this context, we evaluated the efficiency of synchronization protocols on buffalo oocyte donor aimed at increasing the availability and quality of oocytes obtained by ovum pick-up (OPU) and the effect of the source of obtaining oocytes on the quantity and quality. In addition, we analyzed the effect of photoperiod on the quantity and quality of oocytes available on ovary, beyond the competence of those expressed by the blastocyst rate. Finally, we evaluate the effect of essential oil of Lippia origanoides (EOLO) added at concentrations of 2.5, 5.0 and 10¿g/ml, on in vitro maturation (IVM) media over oocyte maturation rate, embryo quality and IVEP on cattle and buffalo. Ovaries and oocytes of animals without protocol, protocol by prior aspiration of follicles and protocol with use of steroids and gonadotropic hormones were evaluated by ultrasonography and according to the of oocyte quality. It was demonstrated not vary the follicular population, number and quality of oocytes retrieved per session between the protocols but a reduction of follicles and Grade A oocytes was noted when the follicles were aspirated previously OPU. Regarding the oocyte source (live animals and abattoir ovaries), all evaluated parameters showed superiority when oocytes were derived from abattoir ovaries. The quality of oocytes collected by OPU and IVEP buffaloes was influenced by photoperiod in the region studied, increased when daylight decreases, which was not observed in cattle. Finally, from evaluations of chromatin stained with DAPI, it was found that bovine nuclear maturation rate increased when used concentrations of 2,5¿g/ml EOLO. The quality of oocytes, expressed by cell number, increased when used concentrations of 2.5 and 5¿g/ml of EOLO in buffaloes. Although it has not changed the blastocyst rate of PIVE in both species, the EOLO has good prospects when added to IVM media.

Identificação imunohistoquímica de receptores para hormônio luteinizante, estrôgeno e progesterona no trato reprodutivo extragonadal da égua / Immunohistochemical identification of luteinizing, estrogen and progesterone receptors in the extra-gonadal reproductive tract of mares

O objetivo deste trabalho foi verificar a presença e a localização de receptores para hormônios esteróides e gonadotróficos, através da técnica de imunohistoquímica, pelo método de peroxidase-antiperoxidase (PAP), nos diferentes tecidos que compõe o trato genital da égua e a variação de reatividade destes receptores durante o ciclo estral e no anestro fisiológico. Também se objetivou verificar se há diferença de reatividade em éguas com e sem endometrose. Foram coletadas amostras de útero, cérvice e oviduto, de 41 éguas sem raça definida e com histórico reprodutivo desconhecido, em um abatedouro. Quinze éguas se encontravam em estro, dezoito em diestro e oito éguas em anestro. Concluiu-se que a intensidade e a distribuição da coloração para os receptores de estrógeno (RE), progesterona (RP) e hormônio luteinizante (RLH) variaram de acordo com o tipo de célula e o estágio do ciclo estral. Nas amostras de endométrio observou-se imunorreatividade alta no epitélio luminal para RE e RP tanto no estro quanto no diestro; o epitélio glandular, estroma e miométrio mostraram reatividade moderada para os dois receptores durante as duas fases. Durante o anestro os resultados foram semelhantes aos encontrados durante a fase cíclica. Na avaliação da reatividade para RLH, durante o estro e diestro, o epitélio luminal mostrou reatividade de fraca a moderada, mas no diestro houve maior reatividade média. O epitélio glandular apresentou menor reatividade do que o luminal. No miométrio a coloração foi fraca durante todo o ciclo. Durante o anestro a reatividade foi fraca no epitélio luminal, ausente em quase todas as amostras no epitélio glandular e de fraca a ausente no miométrio. Neste experimento, não foi observada diferença significativa de reatividade entre os endométrios com e sem endometrose, mas as áreas afetadas mostraram coloração assíncrona para RE, RP e RLH. Na cérvice, foi observada imunorreatividade moderada a alta para RE e RP no epitélio luminal, no estroma e no músculo. A intensidade de coloração das células epiteliais e musculares variou pouco entre o estro e o diestro, mas durante o anestro houve maior reatividade no tecido muscular e no estroma. Foi observada reatividade para RLH no epitélio e camada muscular, sem variação significativa nas fases do ciclo. A intensidade de coloração foi de fraca a moderada no epitélio e fraca na camada muscular. No oviduto, observou-se imunorreatividade para RE e RP nos três tecidos, durante a fase cíclica e o anestro. No epitélio, os valores encontrados foram de moderados a altos, sem variação significativa nas três fases. A coloração das células epiteliais do oviduto foi nitidamente irregular, com o núcleo muito corado no que parecem ser células secretoras e pouco corado ou sem coloração nas células ciliadas, refletindo provavelmente as diferentes funções das células epiteliais neste órgão. No estroma a reatividade foi moderada durante a fase luteal, mostrando reatividade mais alta no estro e no anestro. A camada muscular apresentou reatividade máxima para RE no estro e no diestro. A reatividade para RLH no epitélio luminal foi de fraca a moderada durante todo o ciclo. No músculo também foi observada reatividade, porém bem mais fraca do que no epitélio. Durante o anestro somente três das oito amostras apresentaram reatividade no tecido muscular. No diestro foi observada maior reatividade do que no estro. Os resultados do presente estudo evidenciam, pela primeira vez, a presença de receptores para LH nos diferentes tecidos do trato reprodutor extragonadal da égua. Embora existam relatos da expressão e localização de RE e RP no endométrio equino, esta é a primeira vez que se utiliza a técnica de imunohistoquímica para localizar estes receptores na cérvice e no oviduto desta espécie. Foi observada variação individual bastante acentuada entre as amostras, em uma mesma fase cíclica. Provavelmente estes resultados sejam o reflexo da variação entre o dia do ciclo em que os animais se encontravam, bem como da complexidade dos mecanismos envolvidos na presença desses receptores. Os achados deste estudo indicam que tanto os hormônios gonadais quanto o LH atuam por meio de seus receptores nos diferentes tecidos do trato reprodutivo da égua, podendo servir para a elaboração de novas estratégias para melhorar a eficiência reprodutiva nesta espécie

The aim of this study was to demonstrate the presence and localization of gonadotropic and steroid hormone receptors, in different tissues of the mare genital tract and the different reactivity to these receptors during the endometrial cycle and physiologic anestrus. Another objective was to compare the reactivity to theses receptors in mares with and without endometrosis. Immunohistochemistry was performed using the peroxidase anti-peroxidase technique (PAP). Uterus, cervix and oviduct of 41 criollo mares were collected in an abattoir. There was variation in the intensity of the staining and distribution for estrogen receptors (PR), progesterone receptors (PR) and luteinizing hormone receptors (LHR) with the endometrial cycle and different tissues. The endometrial surface epithelial cells were stained strongly for ER and PR in the estrous and dioestrus; glandular epithelial cells, stromal cells and smooth muscle cells of the myometrium had moderate staining for ER and PR during these two phases and in anestrus too. The immunoreactive score for LHR in the surface epithelial cells during endometrial cycle was weak to moderate but, in general, strong staining was observed in dioestrus. More weak staining intensity was observed in the glandular epithelial cells than luminal epithelial cells. Smooth muscle cells of the myometrium showed weak staining for LHR throughout the endometrial cycle. During the anestrus, the immunoreactivity score was weak in the surface epithelial cells. In general, the glandular epithelium was not stained. Myometrium cells were weak to not staining for LHR, in this phase. In this study there was no significant difference in immunoreactive score for ER, PR and LHR in endometrium with or without endometrosis but fibrotic glands showed different expression patterns of ER, PR and LHR, could evidence for functionally glandular maldifferentiation in endometrosis. The cervical epithelial surface, stromal cells and smooth muscle cells were moderate to strongly staining for ER and PR, with little variation throughout the endometrial cycle but the immunorectivity was strongest during the anestrus in muscular and stromal cells. Surface epithelial cells of cervix were weak to moderate stained for LHR; smooth muscle cells showed weak staining for these receptors. There was no variation during cycle. In the oviduct, epithelial, stromal and muscle cells showed reactivity for RE and RP, during cycle and anestrus. Epithelial cells were moderate to strongly staining for these receptors, with evident irregularity in different types of cells. Apparently ciliated epithelial cells were stained but the intensity was much less than that observed in nonciliated epithelial cells, probably reflecting different functions of these cells. Stromal cells showed moderate staining during dioestrus and strongest reactivity in estrous and anestrus; muscle cells showed strong reactivity for ER throughout the cycle. The reactivity for LHR was weak to moderate throughout the cycle in the epithelial cells and weak in the muscle cells. During anestrus only three strains of muscle cells showed reactivity for LHR. In dioestrus the intensity was strongest. These findings evidence for the firs time the presence for LHR in extra-gonadal reproductive organs of mare. Though there were reports of ER and PR expression in equine endometrium, this is the first report of localization of these receptors in cervix and oviduct of mare using immunohistochemistry. It was found marked individual variation among the strains. These results probably were caused by the variation among the day of cycle and the complexity of mechanisms involved in the presence of these receptors. The findings of the present study allow us to infer that the ovarian steroid hormones nad LH function through their receptors in different tissues of mare reproductive tract, can help us to elaborate new strategies to improve the reproductive efficiency in this specie