Modeling and analysis of a time series of equine infectious anemia cases in the state of Tocantins, Brazil, between 2007 and 2019 / Modelagem e análise da série temporal dos casos de anemia infecciosa equina em equídeos no estado do Tocantins, Brasil, entre 2007 e 2019

Equine infectious anemia (EIA) is a viral infectious disease that affects Equidae and is clinically characterized by intermittent fever, anemia, depression, emaciation, and edema. To evaluate disease dynamics in the state of Tocantins, Brazil, a time series of EIA cases in the period 2007–2019 was analyzed to describe the pattern of occurrence and define the autoregressive integrated by moving average (ARIMA) model best suited to make predictions of cases of this disease for the period 2020–2021. The modeling and statistical analysis of the time series were performed using R software. The ARIMA model (2,1,1) was evaluated by Holdout cross-validation, in which data from the periods 2007–2017 and 2018–2019 were used as training and test data, respectively. The analyses showed that EIA was endemic and non-seasonal in Tocantins. The ARIMA model (2,1,1) showed good predictive capacity adjusted for this time series. However, the prediction of 276 cases of EIA in Tocantins for the period 2020–2021 may vary depending on the demand for diagnostic tests for Equidae transportation and herd sanitation in farms considered infection foci. The ARIMA model helps predict the number of EIA cases in Tocantins and improves planning for disease control by the Official Veterinary Service.

A anemia infecciosa equina (AIE), doença infecciosa viral que acomete os equídeos, é caracterizada clinicamente por causar febre intermitente, anemia, depressão, emaciação e edema. Com o objetivo de elucidar a dinâmica dessa doença no estado do Tocantins, foi realizada a análise da série temporal dos casos de AIE em equídeos entre 2007 e 2019 para descrever o padrão de sua ocorrência, além de definir o modelo autorregressivo integrado por média móvel (Autoregressive Integrated by Moving Average - ARIMA) mais adequado para se realizar previsões dos casos dessa doença para os anos de2020 e 2021. A modelagem e análise estatística da série temporal em estudo foi realizada por meio do software R. O modelo preditivo ARIMA (2,1,1) foi avaliado por meio da validação cruzada utilizando a técnica de Holdout, em que os dados de 2007 a 2017 foram utilizados como treino e os dados de 2018 e2019 foram utilizados como teste. As análises mostraram que a AIE é endêmica no estado do Tocantins e sem padrão de sazonalidade. O modelo ARIMA (2,1,1) apresentou boa capacidade preditiva ajustada para a série temporal em estudo. Porém, a previsão aproximada de 276 casos de AIE em equídeos para os anos de 2020 e 2021 no estado do Tocantins pode variar em decorrência da demanda por exames dessa doença para o trânsito dos equídeos, bem como do saneamento de propriedades consideradas foco. A modelagem ARIMA pode ser utilizada na previsão dos casos de AIE em equídeos no estado do Tocantins o que permite melhorar o planejamento para a execução das ações de controle dessa doença por parte do Serviço Veterinário Oficial.

Modeling and analysis of a time series of equine infectious anemia cases in the state of Tocantins, Brazil, between 2007 and 2019 / Modelagem e análise da série temporal dos casos de anemia infecciosa equina em equídeos no estado do Tocantins, Brasil, entre 2007 e 2019

Equine infectious anemia (EIA) is a viral infectious disease that affects Equidae and is clinically characterized by intermittent fever, anemia, depression, emaciation, and edema. To evaluate disease dynamics in the state of Tocantins, Brazil, a time series of EIA cases in the period 2007–2019 was analyzed to describe the pattern of occurrence and define the autoregressive integrated by moving average (ARIMA) model best suited to make predictions of cases of this disease for the period 2020–2021. The modeling and statistical analysis of the time series were performed using R software. The ARIMA model (2,1,1) was evaluated by Holdout cross-validation, in which data from the periods 2007–2017 and 2018–2019 were used as training and test data, respectively. The analyses showed that EIA was endemic and non-seasonal in Tocantins. The ARIMA model (2,1,1) showed good predictive capacity adjusted for this time series. However, the prediction of 276 cases of EIA in Tocantins for the period 2020–2021 may vary depending on the demand for diagnostic tests for Equidae transportation and herd sanitation in farms considered infection foci. The ARIMA model helps predict the number of EIA cases in Tocantins and improves planning for disease control by the Official Veterinary Service.(AU)

A anemia infecciosa equina (AIE), doença infecciosa viral que acomete os equídeos, é caracterizada clinicamente por causar febre intermitente, anemia, depressão, emaciação e edema. Com o objetivo de elucidar a dinâmica dessa doença no estado do Tocantins, foi realizada a análise da série temporal dos casos de AIE em equídeos entre 2007 e 2019 para descrever o padrão de sua ocorrência, além de definir o modelo autorregressivo integrado por média móvel (Autoregressive Integrated by Moving Average - ARIMA) mais adequado para se realizar previsões dos casos dessa doença para os anos de2020 e 2021. A modelagem e análise estatística da série temporal em estudo foi realizada por meio do software R. O modelo preditivo ARIMA (2,1,1) foi avaliado por meio da validação cruzada utilizando a técnica de Holdout, em que os dados de 2007 a 2017 foram utilizados como treino e os dados de 2018 e2019 foram utilizados como teste. As análises mostraram que a AIE é endêmica no estado do Tocantins e sem padrão de sazonalidade. O modelo ARIMA (2,1,1) apresentou boa capacidade preditiva ajustada para a série temporal em estudo. Porém, a previsão aproximada de 276 casos de AIE em equídeos para os anos de 2020 e 2021 no estado do Tocantins pode variar em decorrência da demanda por exames dessa doença para o trânsito dos equídeos, bem como do saneamento de propriedades consideradas foco. A modelagem ARIMA pode ser utilizada na previsão dos casos de AIE em equídeos no estado do Tocantins o que permite melhorar o planejamento para a execução das ações de controle dessa doença por parte do Serviço Veterinário Oficial.(AU)

Implicações no diagnóstico da mastite subclínica bovina de vacas em lactação coinfectadas por Streptococcus agalactiae e Staphylococcus aureus

Os patógenos da mastite podem ocasionar diferentes faixas de contagem de células somáticas (CCS) e podem ser liberados pela glândula mamária em quantidades e padrões específicos. Devido a esta dinâmica, a infecção intramamária mista por Streptococcus agalactiae e Staphylococcus aureus pode gerar interferência no isolamento de S. aureus na cultura microbiológica. Esteestudo teve como objetivos avaliar a variação dos parâmetros de avaliação do exame microbiológico para diagnóstico de S. aureus em vacas naturalmente infectadas por S. aureus e S. agalactiae durante a erradicação de S. agalactiae e estimar médias de CCS e liberação de bactérias de acordo com patógenos isolados.Um rebanho foi selecionado e coletas mensais e exames microbiológicos do leite foram realizados durante cinco meses. Através dos resultados obtidos, o protocolo de blitz terapia foi implementado em vacas positivas S. agalactiae. Para estimativa dos parâmetros de avaliação do teste, os resultados do exame microbiológico a cada dois meses foram comparados. Logo, a sensibilidade, especificidade, valores preditivos e acurácia foram estimados para o diagnóstico de S. aureus através do exame microbiológico. Prevalência, incidência, taxa de eliminação e taxa de infecções crônicas foram calculados para S. aureus e S. agalactiae ao decorrer do estudo. O padrão de liberação de bactérias encontrado para S. agalactiae foi 2,3 vezes maior do que S. aureus, embora ambos os patógenos implicarem em altos valores de CCS. A sensibilidade do exame microbiológico para S. aureus aumentou de 50,0% para 76,5% no final do estudo. Todavia, no momento em que houve queda abrupta da prevalência de S. agalactiae, a sensibilidade chegou ao auge de 89,7%. Ao decorrer dos 5 meses de estudo, a especificidade aumentou de 79,0% para 91,4%. Valores preditivos positivo e negativo foram de 62,2% e 69,5% no inicio do estudo, enquanto na última comparação apresentaram as estimativas 85,7% e 85,2%, respectivamente. Acurácia aumentou de 67,1% para 85,4% após 4 procedimentos de tratamento de S. agalactiae. A prevalência de S. agalactiae diminuiu de 61,0% para 3,8% enquanto a de S. aureus aumentou de 28,3% para 35,0%. A taxa de infecções crônicas por S. aureus se elevou de 19,4% para 28,7%. De acordo com a melhora das estimativas de avaliação da cultura microbiológica enquanto o tratamento de S. agalactiae ocorria, é possível confirmar a interferência que este patógeno implicava no exame microbiológico de S. aureus. Após cinco meses de blitz terapia, a sensibilidade do exame microbiológico para S. aureus aumentou de forma significante, melhorando o diagnóstico de infecções crônicas, impactando a prevalência estimada para este patógeno.

Mastitis pathogens cause differents levels of somatic cell counts (SCC) and can be shedded by mammary gland in quantity and specific patterns. Through this dynamic, the mixed intramammary infection by Streptococcus agalactiae and Staphylococcus aureus can cause interference in S. aureus isolation in microbiological culture. The objectives of this study were evaluate the variation of evaluation parameters of microbiological culture to diagnose S. aureus in naturally infected cows by S. aureus and S. agalactiae during S. agalactiae eradication; and estimate SCC means and shedding patterns according to pathogens isolated. A herd was selected and monthly milk collection were proceeded during five months. Through obtained results, the blitz therapy protocol was implemented in cows positive to S. agalactiae. To estimate the evaluation parameters of the test, the microbiological exam results of each two months were compared. Sensitivity, specificity, predictive values and accuracy were estimated to S. aureus diagnose by microbiological culture. Prevalence, incidence, elimination and chronic infected rates were determined to S. aureus and S. agalactiae during the study. Shedding pattern of S. agalactiae was 2.3 times higher than S. aureus, although both pathogens implied in a high SCC pattern. Sensitivity of microbiological exam to S. aureus raised from 50.0% to 76.5% at final of the study. However, at the same time that S. agalactiae prevalence had sudden decrease, the sensitivity reached the peak of 89.7%. During the five months of study, specificity raised from 79.0% to 91.4%. Predictive positive and predictive negative values were 62.2% and 69.5% at first results, while the last comparison these parameters showed 85.7% and 85.2%, respectively. Accuracy increased from 67.1% to 85.4% after four S. agalactiae treatment procedures. S. agalactiae prevalence decreased from 61.0% to 3.8%, while S. aureus prevalence raised from 28.3% to 35.0%.Chronic infection rate of S. aureus raised from 19.4% to 28.7%. According to the better estimatives results of microbiological culture during S. agalactiae treatment, it is possible to confirm the interference that this pathogen implied S. aureus microbiological exam. After 5 months of blitz therapy protocol, microbiological exam sensitivity to S. aureus significantly improved, as well as the diagnose of chronic infections, affecting the prevalence of this pathogen

Molecular characterization of Staphylococcus aureus and Streptococcus uberis isolates of intramammary infections of dairy cows

A mastite bovina é a doença mais frequente em vacas leiteiras, o que resulta em significativas perdas econômicas. Staphyloccoccus aureus e Streptococcus uberis estão entre as principais causas de mastite clínica (MC) e subclínica (MSC), pois são de difícil controle por medidas convencionais, já que ambos possuem mecanismos de evasão do sistema imune, aderência e internalização nos tecidos mamários. Sendo assim, esta tese foi organizada em três experimentos: 1) Caracterização genotípica de S. aureus isolados de mastite de rebanhos brasileiros e de outros países; 2) Caracterização genotípica e sensibilidade aos antimicrobianos de isolados de S. aureus identificados antes e após o tratamento de MSC durante a lactação e 3) Diversidade genotípica e fatores de virulência de S. uberis cepas de infecções intramamárias de vacas leiteiras no Brasil. No experimento 1, 70 isolados de S. aureus (35 de MC e 35 de MSC) foram isoladas de amostras de leite de quartos mamários de vacas em 16 rebanhos do Brasil. Estes isolados foram agrupados à isolados provenientes da Argentina, Colômbia, Alemanha, Itália, EUA, África do Sul e Tunísia para genotipagem por RS-PCR, baseada na amplificação do espaço intergênico 16S-23S rRNA e investigados em relação a 26 fatores de virulência. No experimento 2, 79 isolados de S. aureus foram genotipados por eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE) e avaliados quanto à concentração inibitória mínima (CIM) para determinação dos perfis de resistência aos antimicrobianos. No experimento 3, 44 isolados de S. uberis foram avaliados por hibridização de DNA através da metodologia dot blot para determinação da diversidade genotípica. Os resultados do experimento 1 indicaram alta variabilidade genotípica de S. aureus de acordo com os países avaliados, e prevalência de genes relacionados à invasão ao organismo do hospedeiro (clfA, nuc, lukE, lukE-lukD, lukS/F-P, scn, chp, fmtB, sak, cna) e genes associados à evasão da resposta imune (tsst, eta, etb, sea, sec, sed, seg, seh, sei, sej, sel, mecA). Além disso, foi demonstrado que o padrão genotípico de isolados de S. aureus foi específico para cada país, sugerindo que as estratégias de controle devem ser formuladas de acordo com a região em questão e com a virulência das cepas envolvidas na infecção. No experimento 2, foi identificada alta similaridade entre os isolados de um mesmo rebanho indicando especificidade genotípica dentro de uma mesma região, mesmo após os tratamentos durante a lactação. Além disso, grande porcentagem dos isolados se mostrou suscetível à gentamicina, enrofloxacina, ciprofloxacina e tetraciclina, embora alta resistência para a amoxicilina e cefalexina tenha sido também observada. No experimento 3, foram observados nove padrões de dot blot, indicando alta heterogeneidade dos isolados de S. uberis. Foi possível observar alta prevalência dos genes reguladores de fatores de virulência, como sua e gapC, responsáveis pela aderência e internalização de S. uberis nos tecidos da glândula mamária. Assim, após a conclusão dos três experimentos desta tese, foi possível concluir que há alta diversidade genotípica em S. aureus e S. uberis isolados de infecções intramamárias no Brasil e em outros países. Além disso, foi confirmado que estas duas espécies apresentam inúmeros fatores de virulência que contribuem para sua permanência na glândula mamária e dificultam o controle da mastite por meio de medidas convencionais. As técnicas moleculares são eficientes na identificação e caracterização genética de isolados bacterianos e são ferramentas auxiliares no diagnóstico e epidemiologia da mastite.

The bovine mastitis is the disease more frequent of dairy cows, which results in significant economic losses. Staphyloccoccus aureus and Streptococcus uberis are among the main causes of clinical (CM) and subclinical (MSC) mastitis, because they are difficult to control by conventional measures, since both have mechanisms of immune system evasion, adherence and internalization in the mammary tissues. Therefore, this thesis was organized in three experiments: 1) Genotypic characterization of S. aureus isolated from mastitis from Brazilian herds and from other countries; 2) Genotypic characterization and antimicrobial sensitivity of S. aureus isolates identified before and after treatment of MSC during lactation; and 3) Genotypic diversity and virulence factors of S. uberis isolated from intramammary infections of dairy cows in Brazil. In experiment 1, 70 S. aureus isolates (35 from MC and 35 from MSC) were identified in milk samples from cows' mammary quarters in 16 herds in Brazil. These isolates were grouped with isolates from Argentina, Colombia, Germany, Italy, USA, South Africa and Tunisia for genotyping by RS-PCR, based on the amplification of the 16S-23S rRNA intergenic space and investigated in relation to 26 virulence factors. In experiment 2, 79 S. aureus isolates were genotyped by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) and evaluated by minimum inhibitory concentration (MIC) to assess antimicrobial resitance profiles. In experiment 3, 44 isolates of S. uberis were evaluated by DNA hybridization using the dot blot methodology, to determine the genotypic diversity. The results of experiment 1 indicated high genotypic variability of S. aureus according to the countries evaluated, prevalence of genes related to invasion to the host organism (clfA, nuc, lukE, lukE-lukD, lukS / FP, scn, chp, fmtB, sak, cna) and presence of genes associated to the evasion of the immune response (tsst, eta, etb, sea, sec, sed, sec, seh, sei, sej, sel, mecA). In addition, it was shown that the genotype pattern os S. aureus isolates were specific to each country, suggesting that control strategies should be formulated according to the region in question and the virulence of the strains involved in the infection. In experiment 2, a high similarity was identified between the isolates of the same herd, indicating genotypic specificity within the same region, even after treatments during lactation. In addition, a large percentage of the isolates were susceptible to gentamicin, enrofloxacin, ciprofloxacin and tetracycline, although high resistance to amoxicillin and cephalexin has also been observed. In experiment 3, nine dot blot patterns were observed, indicating high heterogeneity of S. uberis isolates. It was possible to observe a high prevalence of genes regulating virulence factors, such as sua and gapC, responsible for the adherence and internalization of S. uberis in the mammary gland tissues. Thus, after the conclusion of the three experiments in this thesis, it was possible to conclude that there is a high genotypic diversity in S. aureus and S. uberis isolated from intramammary infections in Brazil and other countries. In addition, it has been confirmed that these two species have numerous virulence factors that contribute to their permanence in the mammary gland and that hinder the conventional mastitis control measures. The molecular techniques are efficient in the identification and genetic characterization of bacterial isolates and are auxiliary tools in the diagnosis and epidemiology of mastitis.

Investigação metagenômica em queijos artesanais produzidos com leite não pasteurizado

INVESTIGAÇÃO METAGENÔMICA EM QUEIJOS ARTESANAIS PRODUZIDOS COM LEITE NÃO PASTEURIZADO Autor: Ezequiel Davi dos Santos Orientador: Elci Lotar Dickel Passo Fundo, 30 de Julho de 2019 Os queijos artesanais informais/clandestinos são produzidos com leite cru oriundo de vacas muitas vezes sem status sanitário e possivelmente obtido sem boas práticas de ordenha, e fabricado sem cuidados higiênicos. Isso pode permitir a disseminação tanto de agentes prejudiciais à tecnologia de produção de lácteos como de microrganismos zoonóticos e/ou que podem causar intoxicação, infecção ou toxinfecção alimentar. Verificar a qualidade microbiológica de produtos artesanais legais ou informais é sempre um desafio, pois são alimentos que precisam da atuação de um microbioma diverso para manifestação de características ligadas ao aroma, sabor, cor, textura e tempo de prateleira. Até pouco tempo era utilizada somente análises dependentes de cultivo microbiano, o que limitava a identificação do microbioma. Entretanto, nos últimos anos estão sendo utilizadas técnicas moleculares cada vez mais modernas tais como o sequenciamento gênico e a metagenômica, pois essas ferramentas conseguem fornecer uma identificação ampla dos microrganismos que estão na amostra, sem a necessidade de cultivo. Nesse contexto, o presente estudo buscou investigar e descrever o bacterioma de cinco amostras de leite cru e 45 amostras de queijos artesanais informais/clandestinos, de municípios do Norte do Rio Grande do Sul. O leite era recém-obtido, com controle sanitário do rebanho e oriundo de cinco propriedades distintas de um mesmo município, servindo como grupo controle. Os queijos informais foram adquiridos em nove municípios, sendo cinco queijos de cada localidade. Os queijos foram avaliados quanto ao seu aspecto visual, e as amostras de leite e queijos foram submetidas a sequenciamento de nova geração (NGS) e metagenômica. Visualmente os queijos apresentaram ausência de padrão de formato, casca, maturação, massa interna e número de olhaduras. As análises moleculares identificaram 199 espécies difundidas em 59 gêneros bacterianos distintos. Onze gêneros foram classificados como benéficos ao aroma, sabor, cor e textura dos queijos, enquanto outros 31 gêneros foram classificados como prejudiciais para essas características. Também foram identificados 17 gêneros com potencial patogênico para a saúde humana e animal. Os testes KruskalWallis e Dunn mostraram diferença significativa (p<0,05) entre a quantidade de gêneros bacterianos encontrados no grupo controle (leite) e queijos informais de dois municípios amostrados, inferindo que nesses locais a aquisição desses lácteos possui maior risco relativo. Diante dos resultados, o presente estudo demonstrou que as ferramentas moleculares utilizadas foram de grande eficácia na detecção e identificação do microbioma de queijos artesanais informais, bem como na aferição de riscos aos consumidores desses produtos lácteos.

METAGENOMIC INVESTIGATION IN ARTISANAL CHEESES PRODUCED WITH UNPASTEURIZED MILK Author: Ezequiel Davi dos Santos Advisor: Elci Lotar Dickel Passo Fundo, 30 de Julho de 2019 Informal/clandestine artisanal cheeses are produced from raw cow milk that is often unhealthy and possibly obtained without good milking practices and manufactured without hygienic care. This may allow the spread of both harmful dairy technology and zoonotic microorganisms and/or agents that may cause food poisoning, infection or toxinfection. Checking the microbiological quality of legal or informal artisanal products is always a challenge since they are foods that need the action of a diverse microbiome to manifest characteristics related to aroma, taste, color, texture and shelf time. Until recently, only microbial culture-dependent analyses were used, which limited microbiome identification. However, in recent years, increasingly modern molecular techniques such as gene sequencing and metagenomics have been used, as these tools can provide a broad identification of the microorganisms in the sample without the need for cultivation. In this context, the present study sought to investigate and describe the bacterioma of five samples of raw milk and 45 samples of informal/clandestine artisanal cheeses from municipalities of northern Rio Grande do Sul. The milk was recently obtained, with sanitary control of the herd. and coming from five different properties of the same municipality, serving as a control group. Informal cheeses were purchased in nine municipalities, five of them from each locality. The cheeses were evaluated for visual appearance, and the milk and cheese samples were subjected to next-generation sequencing (NGS) and metagenomics. Visually the cheeses had no pattern shape, rind, maturation, internal mass and number of eyes. Molecular analyses identified 199 species spread in 59 distinct bacterial genera. Eleven genus were classified as beneficial to cheese aroma, taste, color, and texture, while 31 other genus were classified as harmful to these characteristics. Seventeen genus with pathogenic potential for human and animal health were also identified. Kruskal-Wallis and Dunn tests showed a significant difference (p <0.05) between the amount of bacterial genera found in the control group (milk) and informal cheese from two sampled municipalities, inferring that in these places the acquisition of these dairy products has a higher relative risk. Given the results, the present study demonstrated that the molecular tools used were very effective in detecting and identifying the informal artisanal cheese microbiome, as well as in assessing risks to consumers of these dairy products.

Seasonal distribution of gastrointestinal nematode infections in sheep in a semiarid region, northeastern Brazil / Distribuição sazonal de infecção por nematóides gastrintestinais em ovinos em área semiárida, nordeste do Brasil

The objective of this study was to determine the seasonal distribution and gastrointestinal nematode parasite load in crossbred Santa Inês tracer lambs, and to correlate the rainfall during the study period with occurrences of parasitic infections. Sixty-four male tracer lambs between the ages of four and eight months were used in the study. Two tracer lambs were inserted into the herd every 28 days to determine the pattern of infective larvae available in the environment. Variation in the fecal egg count (FEC) of nematodes was observed at the study site, with many samples containing undetectable parasite loads during the dry season. The larvae identified in coprocultures were Haemonchus sp., Trichostrongylus sp., Cooperia sp., Strongyloides sp. and Oesophagostomum sp. The nematodes recovered at necropsy were Haemonchus contortus, Trichostrongylus colubriformis, Cooperia punctata, C. pectinata, Trichuris sp., Oesophagostomum sp. and Skrajabinema ovis. The total number of larvae and the total number of immature and adult forms recovered from the tracers showed seasonal distributions that significantly correlated with the amount of rainfall received that month (p value ≅ 0.000 in all cases ). The species H. contortus was predominant in the herd and should be considered to be main pathogenic nematode species in these hosts under these conditions.

O objetivo deste estudo foi determinar a distribuição sazonal e a carga parasitária de nematóides gastrintestinais em cordeiros traçadores, mestiços da raça Santa Inês, e relacionar a ocorrência dessas infecções com a variável chuva no mês. Foram utilizados 64 animais, machos, com idade variando entre quatro e oito meses. Em intervalos de 28 dias, dois traçadores foram inseridos no rebanho para determinar o padrão de disponibilidade de larvas infectantes no ambiente. Variação na contagem de ovos por grama (OPG) de nematóides foi observada no local do estudo, com alta frequência de amostras com carga parasitária indetectável no período seco. Das coproculturas foram identificadas larvas de Haemonchus sp., Trichostrongylus sp., Cooperia sp.,Strongyloides sp. e Oesophagostomum sp. Os nematóides recuperados à necropsia foram Haemonchus contortus, Trichostrongylus colubriformis, Cooperia punctata, C. pectinata, Trichurissp., Oesophagostomum sp. e Skrajabinema ovis. O total de larvas, de formas imaturas e de adultos recuperados dos traçadores, mostraram distribuição sazonal significativamente relacionada com a ocorrência de chuva no mês (valor-p ≅ 0,000, para todos os casos, ). A espécie H. contortus foi predominante no rebanho e deve ser considerada a espécie de nematóide mais importante nesses hospedeiros, sob as condições do estudo.

POLIMORFISMO DO GENE GOLA-DRB.2 E DETECÇÃO DE MYCOPLASMA AGALACTIAE E MYCOPLASMA MYCOIDES CLUSTER EM REBANHOS CAPRINOS NOS ESTADOS DE PERNAMBUCO E PARAÍBA, BRASIL

O programa de seleção de caprinos com aptidão leiteira tem sido, basicamente, voltado ao aumento na quantidade de leite, negligenciando fatores relacionados à resistência a doenças e à composição do leite. Este comportamento vem ocasionando o direcionamento a estudos voltados à rápida detecção de micro-organismos e à identificação de genes ou regiões cromossômicas relacionadas a doenças infectocontagiosas da glândula mamária. Diante do exposto, a presente tese teve como objetivo inicial, detectar Mycoplasma agalactiae (Ma) e Mycoplasma mycoides cluster (Mmcluster) em amostras de leite caprino e avaliar a composição e a contagem de células somáticas provenientes de animais positivos para Ma e Mmcluster (Experimento 1). Além disso, buscou-se identificar os polimorfismos do gene Goat Lymphocyte Antigen (GoLA-DRB.2) e associar com características do leite de cabra (Experimento 2). Para realização do Experimento 1, foram colhidas 373 amostras de leite de caprinos de diferentes raças pertencentes a rebanhos localizados nos estados de Pernambuco e da Paraíba. O DNA genômico das amostras de leite foi extraído pelo método sílica/isotiocianato de guanidina, seguida da amplificação genérica e espécie-específica por reação em cadeia da polimerase. A identificação da presença ou não de produtos gênicos foi realizada através de observação direta das bandas dos produtos de PCR visualizados em gel de eletroforese. Análises de variância e testes de comparação de médias foram realizados para verificar os efeitos da positividade sobre as características de composição e contagem de células somáticas. As frequências para Ma e Mmcluster foram de 43,21% e 5,70%, nos rebanhos avaliados, respectivamente. Foram considerados fatores de risco o sistema de criação (p<0,001) e o padrão racial (p<0,001). Em todos os grupos genéticos foram detectadas amostras positivas para Ma, sendo observada maior ocorrência na raça Marota. Amostras positivas para Mmc só foram observadas em animais das raças Moxotó (18,28%), Parda Sertaneja (1,92%) e SPRD (3,12%). No estudo de associação entre a positividade e composição do leite, observou-se diferença estatística para as médias de proteína, caseína e contagem de células somáticas. A detecção de Mycoplasma em amostras de leite caprino sugere a introdução de animais infectados nos rebanhos avaliados, como também o possível contato com os agentes etiológicos em feiras e exposições. Além disso, o sistema de criação adotado na propriedade influencia a disseminação da infecção no rebanho. Para execução do Experimento 2, um total de 181 fêmeas caprinas de diferentes raças provenientes do estado de Pernambuco e da Paraíba foram selecionadas. Amostras de leite foram colhidas e submetidas à extração do DNA genômico como descrito no Experimento 1. A genotipagem dos animais para o fragmento de 285 pb do gene GoLADRB. 2 foi resultante da amplificação pela técnica de PCR-RFLP, utilizando as enzimas de restrição PstI e TaqI. A frequência alélica encontrada para a população total com a utilização da enzima PstI foi de A igual a 0,7254 e B a 0,2746, sendo as frequências dos genótipos AA, AB e BB de 0,6740, 0,0387 e 0,2873, respectivamente. As frequências alélicas obtidas a partir da digestão com a enzima TaqI foi de C = 0,8149 e D = 0,1851, sendo as frequências dos genótipos: 0,7403 (CC), 0,1492 (CD) e 0,1105 (DD), com predominância do genótipo CC em todos os padrões raciais avaliados. Os valores da Heterozigosidade observada foram menores do que os encontrado para Heterozigosidade esperada em todas as populações testadas, com rebanhos fora do equilíbrio de Hardy-Weinberg. Houve variação genética significativa entre raças, entre indivíduos da mesma raça e dentro da população. Não houve diferença significativa entre os genótipos e os padrões de haplótipos sobre os valores de gordura, proteína, lactose, sólidos totais, caseína e contagem de células somáticas. O gene GoLA-DRB.2 foi polimórfico na avaliação com as enzimas PstI e TaqI estudadas, mas não desempenhou efeitos sobre nenhumas das características de composição e contagem de células somáticas avaliadas.

The program of selection of goats with milk aptitude has been focused on the increase in milk quantity, neglecting factors related to resistance to diseases and milk composition. This behavior has led to studies aimed at the rapid detection of microorganisms and the identification of genes or chromosomal regions related to infectious diseases of the mammary gland. The objective of the present thesis was to detect Mycoplasma agalactiae (Ma) and Mycoplasma mycoides cluster (Mmcluster) in goat milk samples and to evaluate the composition and counting of somatic cells from Ma and Mmcluster positive animals (Experiment 1). In addition, we sought to identify Goat Lymphocyte Antigen (GoLA-DRB.2) gene polymorphisms and to associate them with goat milk characteristics (Experiment 2). To perform the experiment 1, 373 samples of goat milk of different races belonging to herds located in the states of Pernambuco and Paraiba were collected. The genomic DNA of the milk samples was extracted by the silica / guanidine isothiocyanate method, followed by the generic and species-specific amplification by polymerase chain reaction. Identification of the presence or absence of gene products was performed by direct observation of the bands of the PCR products visualized on electrophoresis gel. Analysis of variance and comparison tests of averages were performed to verify the effects of positivity on somatic cell composition and counting characteristics. The frequencies for Ma and Mmcluster were 43.21% and 5.70%, respectively, in the herds evaluated. The breeding system was considered as risk factors (p <0.001) and the racial pattern (p <0.001). Ma positive samples were detected in all genetic groups, with higher occurrence in the and Marota race. Positive samples for Mmcluster were only observed in Moxotó (18.28%), Parda Sertaneja (1.92%) and SPRD (3.12%) rats. In the study of association between positivity and milk composition, a statistical difference was observed for protein, casein and somatic cell counts. The detection of Mycoplasma in samples of goat milk suggests the introduction of infected animals in the evaluated herds, as well as the possible contact with the etiological agents in fairs and exhibitions. In addition, the breeding system adopted on the property influences the spread of the infection in the herd. For the execution of Experiment 2, a total of 181 female goats of different races from the state of Pernambuco and Paraiba were selected. Milk samples were harvested and extracted from genomic DNA as described in Experiment 1. The genotyping of the animals for the 285bp fragment of the GoLA-DRB.2 gene was the result of amplification by PCR-RFLP technique, using the enzymes of Restriction PstI and TaqI. The allelic frequency found for the total population using the PstI enzyme was A equal to 0.7254 and B at 0.2746, with the frequencies of the AA, AB and BB genotypes being 0.6740, 0.0387 and 0, 2873 respectively. The allele frequencies obtained from the digestion with the TaqI enzyme were C = 0.8149 and D = 0.1851, with the frequencies of the genotypes: 0.7403 (CC), 0.1492 (CD) and 0.1105 ( DD), with predominance of the CC genotype in all the racial standards evaluated. The observed Heterozygosity values were lower than those found for expected Heterozygosity in all tested populations with herds out of Hardy-Weinberg equilibrium. There was significant genetic variation between races, among individuals of the same race and within the population. There was no significant difference between genotypes and haplotype patterns on the values of fat, protein, lactose, total solids, casein and somatic cell counts. The GoLA-DRB.2 gene was polymorphic in the evaluation with the PstI and TaqI enzymes studied but had no effect on any of the somatic cell composition and counting characteristics evaluated.

Prevalence of Cryptosporidium spp. and Giardia spp., spatial clustering and patterns of shedding in dairy calves from Córdoba, Argentina / Prevalência de Cryptosporidium spp. e Giardia spp., distribuição espacial e padrões de eliminação em bezerros de propriedades leiteiras em Córdoba, Argentina

The objectives of this study were to estimate calf and herd prevalence of Cryptosporidium spp. and Giardia spp., the herd prevalence clustering, spatial distribution according to soil type and shedding patterns in dairy calves from Cordoba, Argentina. Six hundred twenty calves younger than 7 weeks of age from 43 dairy herds were sampled. Samples were processed with the formol-ether and modified Ziehl-Neelsen techniques. Univariate analysis and Kruskall-Wallis tests were used. Factors associated were subjected to multivariate analysis with calf shedding intensity as the response variable. Clustering of herd prevalence was assessed by a scan method, and spatial analysis was applied to explore the overlapping of high prevalence herds and soil type. Overall calf prevalence for Cryptosporidium spp. oocysts and Giardia spp. cysts were 19.35% (95% CI: 16.14; 22.54) and 34.50% (95% CI: 30.69; 38.34), respectively. Calves younger than two weeks of age were almost four times more likely to be infected with Cryptosporidium, in comparison to older ones (RR: 3.78, 95% CI: 2.27; 6.26). Giardia spp. shedding showed a similar age pattern (RR: 1.33, 95% CI: 1.02; 1.75). A primary cluster of high Cryptosporidium prevalence was found, and high prevalence herds were located in areas with poor drained soil.(AU)

Os objetivos deste estudo foram determinar a prevalência de Cryptosporidium spp. e Giardia spp., a presença de aglomerados, a distribuição espacial de acordo com o tipo de solo e padrões de eliminação de cistos e oocistos em bezerros de propriedades leiteiras em Córdoba, Argentina. Amostras fecais foram colhidas de 620 bezerros com menos de sete semanas de idade, provenientes de 43 propriedades leiteiras e examinadas pelas técnicas de formol-éter e Ziehl Neelsen modificada. Foram realizadas uma análise univariada e o teste de Kruskal-Wallis e, em seguida, uma análise multivariada com a intensidade de eliminação de cistos e oocistos, como um evento. A presença de aglomerados foi determinada com o método de varredura e a análise espacial foi realizada para explorar a sobreposição de rebanhos com alta prevalência e tipo de solo. A prevalência de Cryptosporidium spp. e Giardia spp. foi de 19,35% (IC 95%: 16,14; 22,54) e 34,50% (IC 95%: 30,69; 38,34), respectivamente. A probabilidade de infecção por Cryptosporidium spp. foi quase quatro vezes maior para bezerros com menos de 2 semanas em comparação com os bezerros mais velhos (RR: 3,78, IC 95% 2,27; 6,26). O mesmo padrão de infecção relacionada à idade foi observado para Giardia spp. (RR: 1,33, IC 95% 1,02; 1,75). Foi encontrado um aglomerado primário com alta prevalência de Cryptosporidium spp., e rebanhos com alta prevalência foram localizados em solos mal drenados.(AU)

Detecção e isolamento de rotavírus caprino do grupo A / Detection and isolation of group A caprine rotavirus

Rotavírus é a principal causa de diarreia em animais jovens de várias espécies. Os rotavirus estão classificados na família Reoviridae e contêm um genoma formado por 11 segmentos de RNA de cadeia dupla, envolvidos em três camadas proteicas. Neste estudo, foi detectado rotavírus pela eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE) em amostras de fezes de caprinos, com 80 dias de idade, durante surto de diarreia em um rebanho leiteiro. O perfil eletroforético das amostras, denominadas cap01/2007 e cap02/2007, foi caracterizado no PAGE como sendo de rotavírus do grupo A. Para o isolamento viral, suspensão fecal a 20% em tampão tris 0,1M pH 7,3 foi filtrada e tratada com tripsina cristalina na concentração de 5mg/mL. A amostra caprina cap01/2007 foi inoculada em cultura de células MA104 (Rim de Macaco Rhesus). Foram testados dois tratamentos (T1 e T2): após adsorção (estufa 37º C por uma hora) adicionou-se meio de manutenção (Dulbecco-MEM) sem tripsina, mantendo o inóculo (T1). No tratamento 2 (T2), foi realizado o mesmo pro cedimento anterior, porém o inóculo foi dispensado. O efeito citopático foi observado na primeira passagem para ambos os tratamentos (T1 e T2) com 48 horas de inoculação e o isolamento viral foi confirmado no PAGE. O perfil de migração manteve-se inalterado após três passagens sucessivas. Este é o primeiro relato de isolamento de rotavírus em caprinos no Brasil.

Rotavirus is the main cause of diarrhea in young animals of several species. They are classified as a genus within the virus family Reoviridae. Rotaviruses have a segmented genome made up of a double-stranded RNA. It is divided into 11 segments and surrounded by a triple protein capsid. In this study, Rotavirus was detected by polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) in feces samples of 80-day-old goats during a diarrhea outbreak in a milk-producing herd. The sample's electrophoretic pattern, called cap01/2007, was characterized as Group A rotavirus. A 20% fecal suspension in buffer TRIS 0.1M pH 7.3 was filtered and treated with crystalline trypsin in a 5 mg/mL concentration for viral isolation. Caprine sample Cap01/2007 was inoculated in MA-104 cells (Rhesus's kidneys) with a 48-hour growth. Two treatments (T1 and T2) were tested. In T1, maintenance medium without trypsin was added (Dulbecco-MEM) after adsorption (buffer at 37º C for 1h) the inoculum was maintained. In treatment T2, the previous procedure without the inoculum was performed. Cytopathic effect was observed in the first passage for both treatments (T1 and T2) with 48h inoculation, and viral isolation was then confirmed by PAGE. Migration design remained unchanged after 3 successive passages. This is the first report of isolation of caprine rotavirus in Brazil.

Infecções helmínticas em um rebanho leiteiro na região Campo das Vertentes de Minas Gerais / Helminth infectíon pattern of a dairy herd in Campo das Vertentes region in Minas Gerais state

Bezerros traçadores foram utilizados para avaliar a contaminação sazonal das pastagens por helmintos gastrintestinais e pulmonares em uma propriedade de exploração leiteira na região Campo das Vertentes, Minas Gerais. Os animais se infectaram durante todos os meses do ano. As maiores cargas parasitárias foram recuperadas no período chuvoso (setembro - abril), e o pico foi observado em abril-maio, final do período chuvoso. As espécies recuperadas foram Cooperia punctata, C. spatulata, Haemonchus contortus, H. similis, Oesophagostomum radiatum, Trichostrongylus axei, T. colubriformis, Trichuris discolor, T. globulosa, Dictyocaulus viviparus e Agriostomum vryburgi. Para avaliar a dinâmica das infecções, foi acompanhado um grupo de vacas com seus bezerros lactantes no período de janeiro de 1999 a fevereiro de 2000. Os valores da contagem de ovos por grama de fezes (OPG) dos bezerros apresentaram dois picos, em maio de 1999 e fevereiro de 2000, enquanto o pico da contagem de OPG das vacas ocorreu em julho e agosto de 2000. Nas coproculturas, os gêneros de maior ocorrência foram Cooperia e Haemonchus nos bezerros, e Haemonchus e Trichostrongylus nas vacas.(AU)

Tracer calves used to monitor contamination of pasture with pulmonary and gastrointestinal nematode helminths on a dairy farm were infected throughout the year. The highest parasite burdens were observed during the rainy season (September April). However, the highest peak occurred in April and May 1999, the end of the rainy season. Helminth species recovered from the calves were Cooperia punctata, C. spatulata, Haemonchus contortus, H. similis, Oesophagostomum radiatum, Trichostrongylus axei, T. colubriformis, Trichuris discolor, T. globulosa, Dictyocaulus viviparus and Agriostomum vryburgi. A group of lactating cows and their accompanying calves were followed during the period from January 1999 to February 2000 to evaluate the dynamics of their infection. Parasite eggs per gram of feces (EPG) exhibited two peaks in the calves, May 1999 and February 2000; while EPG peaks in cows occurred in July and August 2000. Cooperia and Haemonchus were the most prevalent genera in fecal cultures from calves, whereas in cow fecal cultures, the highest prevalence was for Haemonchus and Trichostrongylus.(AU)

Padrão de infecção intramamária em rebanhos leiteiros: exame de todos os quartos mamários das vacas em lactação

Microbiological examination was carried out in 6,315 milk samples collected from all mammary quarters of 1,609 lactating cows from 48 herds, located in the regions of Zona da Mata and Campo das Vertentes, Minas Gerais State, Brazil. At sampling time, the udders were clinically examined and milk from all mammary quarters were evaluated by California Mastitis Test (CMT). A total of 3,919 agents were isolated, being 3,637 from quarters with single infection and 283 from mixed infection with two types of microorganisms. The mastitis agents found and the percentages of isolations were: Staphylococcus aureus, 19.2%, coagulase negative Staphylococcus sp. (SCN), 12.4%, Streptococcus agalactiae, 6.9%, esculin-positive Streptococcus sp. (ESCPOS), 4.0%, esculin-negative Streptococcus sp. (ESCNEG), 2.1%, Corynebacterium sp., 55.2%, yeast, 0.1% e Pseudomonas sp., 0.1%. Negative cultures were found in 2,463 (39%) samples and 216 samples were contaminated. Corynebacterium sp. was present in all 48 herds, with mammary quarters infection levels between 1.5% and 58.6%. S. aureus was isolated from 47 herds; in 37 of these there were up to 20% of infected mammary quarters. S. agalactiae was recovered from 29 herds (60%) and in 24 out of these the average of infected quarters was 2.7%. S. aureus, S. agalactiae, SCN, ESCPOS, ESCNEG and Corynebacterium sp. were isolated from mammary quarters with and without signs of inflammatory reaction (positive and negative scores on CMT, respectively). Comparing with minor pathogens (SCN and Corynebacterium sp.), the isolation frequency of major pathogens was significantly higher from quarters with positive scores on CMT (P 0.001). The results indicated that mammary quarters negative on CMT should also be considered when selecting samples for microbiological examination and that negative cows, infected with major pathogens, can be a source of infection for the others animals in the herd. The high prevalence of S. aureus, S. agalactiae and Corynebacterium sp. suggests that current control measures for contagious mastitis were not correctly practised in most of the herds.

Foram realizados exames microbiológicos de 6315 amostras de leite, obtidas de todos os quartos mamários de 1609 vacas em lactação, originárias de 48 rebanhos localizados na Zona da Mata e Campo das Vertentes do Estado de Minas Gerais. No momento da coleta das amostras foram realizados exames clínicos dos úberes e o Califórnia Mastite Teste (CMT) do leite. Isolaram-se 3919 microrganismos, sendo 3637 de quartos mamários com infecção por um único agente e 283 de infecção mista. As porcentagens dos agentes isolados foram: Staphylococcus aureus, 19,2%, Staphylococcus sp. coagulase negativos (SCN), 12,4%, Streptococcus agalactiae, 6,9%, Streptococcus sp. esculina positivos (ESCPOS), 4,0%, Streptococcus sp. esculina negativos (ESCNEG), 2,1%, Corynebacterium sp., 55,2%, leveduras, 0,1% e Pseudomonas sp., 0,1%. Em 2463 amostras (39% do total) não houve isolamento no exame microbiológico e 216 (3,4%) estavam contaminadas. Corynebacterium sp. foi o microrganismo mais freqüentemente isolado, presente em todos os rebanhos, com porcentagens de quartos mamários infectados que variaram entre 1% e 58,6%. S. aureus foi isolado de 47 rebanhos, 37 deles com até 20% de quartos infectados. S. agalactiae foi isolado em 29 rebanhos (60%) e em 24 deles a média de quartos infectados foi 2,7%. S. aureus, S. agalactiae, SCN, ESCNEG, ESCPOS e Corynebacterium sp. foram isolados de quartos mamários com e sem reação inflamatória (escores positivo e negativo no CMT, respectivamente). O número de isolamentos dos patógenos primários da mastite foi significativamente maior de quartos com escores positivos no CMT, enquanto o número de isolamentos dos patógenos secundários (Corynebacterium sp. e SCN) foi maior em quartos mamários com escore negativo no CMT (P 0,001). Há necessidade de se considerarem quartos mamários com escore negativo no CMT quando forem selecionadas amostras para exames microbiológicos, e vacas negativas no CMT e infectadas por patógenos primários da mastite podem servir de fonte de infecção para outros animais no rebanho. A alta prevalência de S. aureus, S. agalactiae e Corynebacterium sp. sugere que medidas de controle para as mastites contagiosas não estão sendo corretamente aplicadas nos rebanhos estudados.

Concentração mínima inibitória de dez antimicrobianos para amostras de Staphylococcus aureus isoladas de infecção intramamária bovina

The minimum inhibitory concentrations (MIC) for ampicillin, cephalothin, erythromycin, gentamicin, neomycin, norfloxacin, oxacillin, penicillin G, tetracycline and tylosin against 112 Staphylococcus aureus strains isolated from bovine intramammary infections were determined. The strains were originated from 33 dairy herds located in the Zona da Mata, Minas Gerais State. Twenty-four strains were isolated from clinical cases of mastitis, 66 from subclinical infections and 22 from chronic infections. The chronic infection strains were isolated from the same mammary quarters of nine cows of one herd over a period of 13 months. The MIC was performed on Mueller Hinton agar and concentrations, ranging from 0.015 to 128µgml-1, were evaluated for each antimicrobial agent. The American Type Culture Collection (ATCC) recommended quality control strains, S. aureus ATCC 29213, Escherichia coli ATCC 25922 and Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, were included on each batch of test. All strains were susceptible to cephalothin, erythromycin, gentamicin, norfloxacin and oxacillin, 91% were susceptible to tetracycline (MIC50: 0.5µgml-1) and tylosin (MIC50: 2.0µgml-1), 65% to ampicillin (MIC50: 0.125µgml-1) and penicillin G (MIC50: 0.06µgml-1). All strains but one in the intermediate pattern, were susceptible to neomycin (MIC50: 0.5µgml-1). The resistance levels to ampicillin and penicillin were higher in strains isolated from clinical and subclinical (positive scores on CMT) cases (P 0.02). The resistance level to tylosin was also higher among the strains isolated from clinical infections (P 0.02). The strains with MIC > or = 0.125µgml-1 to penicillin were positive for ß-lactamase production.

Determinou-se a concentração mínima inibitória (CMI) de ampicilina, cefalotina, eritromicina, gentamicina, neomicina, norfloxacina, oxacilina, penicilina G, tetraciclina e tilosina para 112 amostras de Staphylococcus aureus isoladas de infecções intramamárias bovina, em 33 rebanhos leiteiros da Zona da Mata do Estado de Minas Gerais. Foram isoladas 24 amostras de infecção clínica, 66 de subclínica e 22 de infecção crônica. As amostras de infecção crônica foram isoladas repetidas vezes dos mesmos quartos mamários de nove vacas de um rebanho, no período de 13 meses. A CMI foi realizada em ágar Mueller Hinton, com concentrações entre 0,015 e 128µgml-1 de cada antimicrobiano. As amostras da American Type Culture Collection (ATCC) recomendadas para controle de qualidade, S. aureus ATCC 29213, Escherichia coli ATCC 25922 e Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, foram incluídas em cada teste. Cem por cento das amostras foram susceptíveis à cefalotina, eritromicina, gentamicina, norfloxacina e oxacilina, 91% à tetraciclina (CMI50: 0,5µgml-1) e à tilosina (CMI50: 2,0µgml-1), 65% à ampicilina (CMI50: 0,125µgml-1) e à penicilina G (CMI50: 0,06µgml-1). Todas foram susceptíveis à neomicina (CMI50: 0,5µgml-1) exceto uma amostra que apresentou um padrão intermediário. O nível de resistência para ampicilina e penicilina foi maior nas amostras isoladas de casos clínicos e nas de infecção subclínica com escores positivos no CMT (P 0,02). Nas isoladas de infecção clínica, o nível de resistência à tilosina foi maior (P 0,02). As amostras que apresentaram CMI > ou = 0,125µgml-1 para penicilina foram positivas para produção de beta-lactamase.

Estimativa da participação do genoma de Bos taurus no rebanho Nelore / Bos taurus contribution in Nellore (Bos indicus) breed

A espécie Bos indicus, particularmente a raça Nelore, é grande maioria no rebanho bovino da região acima do trópico no Brasil. Embora a habilidade desses animais em resistir às doenças parasitárias, condições climáticas e pastagens de baixa qualidade enalteçam a utilização em larga escala desta raça, estes animais não são considerados bons conversores de alimento e, conseqüentemente, precoces em comparação aos seus homólogos Bos taurus. Durante a formação das raças zebuínas brasileiras, houve uma participação das linhas maternas de Bos taurus, que pode ser demonstrada pela contribuição majoritária do genoma mitocondrial desta subespécie. Embora em escala muito menor, estima-se que exista também uma participação destas linhas maternas no genoma nuclear. O objetivo deste trabalho foi iniciar os estudos para estimar esta participação. Para os estudos foram utilizados 104 animais da raça Nelore e 8 animais de diferentes raças européias. Cinco regiões do DNA que produzem fragmentos microssatélites taurus/indicus específicos (HEL1, HEL9, ETH225, ILSTS005 e INRA063) foram amplificadas com a utilização de primers marcados com sondas fluorescentes. Os fragmentos foram submetidos à eletroforese em gel de poliacrilamida desnaturante 6% e visualizados após excitação com laser. No total foram encontrados 23 alelos para os microssatélites analisados o que representa uma média de 4,6±1,82 alelos por locus. Amplificou-se também uma região do DNA satélite 1711b que posteriormente foi digerida com a enzima de restrição Msp I. Verificou-se a existência de três possíveis genótipos entre os animais Nelore mtDNA Bos taurus e mtDNA Bos indicus. Os animais europeus analisados apresentaram sempre o mesmo padrão de restrição. A comparação dos componentes de variância do tamanho dos alelos intra e inter população usando os fragmentos microssatélites permitem a separação dos animais Bos taurus dos animais Nelore, mas não dos Nelore de origem materna distinta. No entanto, a freqüência de alelos indicus específicos nos microssatélites e de padrões de digestão do DNA satélite também indicus específicos sugerem uma participação da ordem de aproximadamente 6% do genoma taurus na população de gado Nelore

Bos indicus specie, especially Nellore breed is responsible for the majority of Brazilian tropical herd. These animals are notably capable to endure parasite infection as well as hot weather and low quality feed. In one hand this qualities suggest the large scale application of this breed, but in other hand this same breed is well characterized as bad food converter and consequently far from having good precocity status compared with its Bos taurus homologues. It has been reported a matrilineal European participation in Zebu cattle since its introduction in American lands. This hybridization is confirmed by the majority contribution of Bos taurus mtDNA in these animals. Although in a much lower frequency, we hypothesize a Bos taurus cow participation in nuclei genome. The main aim of this work was to give the firsts steps towards the estimation of this participation. A total of 104 Nellore and 8 animals of different European breeds were used for DNA analysis. Five microsatellites fragments (HEL1, HEL9, ETH225, ILSTS005 e INRA063) were amplified applying primers with fluorescent dye. Amplified fragments were used in 6% polyacrilamide electrophoresis and visualized after laser excitation. Overall 23 alleles were detected averaging 4.6±1,82/locus. Variance components of microsatellites allele size comparisons allowed the formation of two clusters separating both subspecies. No significant variation was observed between Nellore with different maternal origins. A satellite 1711b DNA was also amplified and digested with the restriction enzyme Msp I. Three possible genotypes were identified in Nellore animals harboring B. taurus and B. indicus mtDNA. European originated animals always showed the same restriction pattern. Finally B. indicus specific microsatellite allele and satellite 1711b digestion patterns frequency allowed the estimation of 6% of B. taurus contribution in purebred Nellore. These results are discussed in terms of application in cattle genetic improvement

Estudo da Transmissão Vertical de Neospora caninum em ovelhas deslanadas

SOUZA e SILVA, Carlos Henryque M.S., Universidade Federal de Viçosa, novembro de 2005. Estudo da transmissão vertical de Neospora caninum em ovelhas deslanadas. Orientador: Joaquín Hernán Patarroyo Salcedo. Conselheiros: Marlene Isabel Vargas Vilória, Jackson Victor de Araújo. Neospora caninum é um protozoário importante por causar abortamento em bovinos em todo o mundo. O seu ciclo biológico completo foi descrito em 1998, tendo como hospedeiros definitivos os canídeos e entre os hospedeiros intermediários os herbívoros. A principal forma de permanência da infecção nos rebanhos é pela via transplacentária. Ovelhas infectadas experimentalmente são utilizadas como modelo da neosporose bovina e para se estudar a transmissão vertical e a patologia da infecção nas várias gestações subseqüentes, sendo utilizadas sete ovelhas adultas e seus respectivos filhotes de segunda, terceira, quarta e quinta gestações com diferentes idades. Lesões características de neosporose foram encontradas nos animais estudados, compreendendo focos inflamatórios não-supurativos no fígado, cérebro e pulmão, além de infiltrado inflamatório mononuclear perivascular nos mesmos, principalmente nos filhotes da segunda gestação. Além disso, observaram-se cistos teciduais de Neospora caninum na língua e coração de ovelhas adultas. Comprovou-se através de imunofluorescência indireta que todos os animais apresentaram-se positivos à infecção. Estes dados demonstram que o parasita é transmitido verticalmente durante várias gestações, causando lesões características, o que pode em condições naturais manter a infecção no rebanho sem, no entanto, causar a morte fetal. ABSTRACT SOUZA e SILVA, Carlos Henryque M.S., Universidade Federal de Viçosa, november 2005. Vertical transmission study of Neospora caninum in sheep out of fleece. Adviser: Joaquín Hernán Patarroyo Salcedo. Counselor: Marlene Isabel Vargas Vilória, Jackson Victor de Araújo. Neospora caninum its an important protozoan cause of abortion in cattle worldwide. The whole life cycle was described in 1998, had canids as definitive hosts and herbivores as intermediate hosts. The main pattern of persistent infection in herds it is by transplacental route. Sheep experimentally infected were utilized as a model of bovine neosporosis and to study vertical transmission and the pathology of infection at several subsequent gestations, being used seven ewes and their respective offspring at second, third, fourth and fifth pregnancies in different ages. Typical neosporosis lesions were found in the studied animals, consisting of non-suppurative inflammatory focuses on liver, brain and lungs, besides mononuclear perivascular infiltrate, principally on lambs of second gestation. Moreover, Neospora caninum tissues cysts were observed on the tongue and heart of adult sheep. It was proved by indirect immunofluorescence that all the animals were positives to the infection. These data demonstrate the parasite is vertically transmitted during several pregnancies, causing characteristic lesions, which, in natural conditions, keep the infection in herd without, nevertheless, to induce fetal death