In vitro development and acclimatization of Cyrtopodium aliciae L. Linden & Rolfe, an endemic species of the Chapada Diamantina / Desenvolvimento in vitro e aclimatização de Cyrtopodium aliciae L. Linden & Rolfe: uma bela e endêmica espécie da Chapada Diamantina

ABSTRACT: Orchids are valued as ornamental plants, bioindicators, and medicinal plants, which implies that some species may be over-collected. Some inhabit very fragile environments and are under threat by the misuse of habitats and anthropogenic impacts. The search for beautiful plants and flowers has increased the number of facilities for micropropagation either by seeding or by cloning plants using in vitro techniques. However, not all species have appropriate media for growth and development that would help in conservation efforts. Cyrtopodium aliciae is an endemic species of rupestrian grassland in Brazil t. It has appeal as an ornamental plant or for use in hybridisation programs dueo its small size and white brownish-purple dotted flowers. This study compared three different media, namely ½ concentration Murashige and Skoog (MS), Vacin and Wendt, and Knudson C, during plant growth and their effect on the acclimatization of Cyrtopodium aliciae. The number and length of shoots and roots, increase in mass, and survival in vitro and ex vitro were analyzed. The experiment was conducted as completely random with a factorial arrangement of treatments (3 × 3) with 10 repetitions per treatment containing 10 plants for the in vitro experiment and 3 repetitions of 10 plants for the ex vitro experiment. Cyrtopodium aliciae performed better in the ½ concentration MS medium with a higher increase in mass, plant development, and survival under both in vitro and ex vitro conditions.

RESUMO: As orquídeas são valiosas como plantas ornamentais, bioindicadores ou medicinais, o que implica que algumas espécies podem ser coletadas em demasia. Algumas habitam ambientes muito frágeis e devido ao impacto antrópico, estão sob ameaça devido ao mau uso destes habitats. A busca por belas plantas e flores aumentou as facilidades para micropropagação, seja por semeadura ou por clonagem de plantas com técnicas in vitro. No entanto, nem todas as espécies possuem meios apropriados para crescimento e desenvolvimento que ajudem nos esforços de conservação. Cyrtopodium aliciae é uma bela espécie endêmica de campos rupestres do Brasil, apresenta bom apelo tanto como planta ornamental quanto como potencial para ser usada em programas de hibridização, devido ao seu pequeno tamanho de planta e belas flores brancas pontilhadas com marrom-púrpura. Este trabalho teve como objetivo comparar três meios diferentes, Murashige e Skoog à ½ concentração (MS); Vacin e Wendt (VW) e Knudson C (KC), durante o crescimento e na aclimatização. Foram analisadas as seguintes variáveis: número e comprimento de brotos e raízes, aumento de massa, sobrevivência in vitro e ex vitro. O experimento foi conduzido em delineamento inteiramente casualizado, com os tratamentos em um arranjo fatorial 3x3 (meios x tempo) com 10 repetições por tratamento contendo 10 plantas cada para a fase in vitro e três repetições com 10 plantas para a fase ex vitro. Cyrtopodium aliciae teve melhor desempenho na concentração de ½ MS com o maior aumento de massa, desenvolvimento da planta e sobrevivência tanto em condições in vitro quanto em condições ex vitro.

In vitro development and acclimatization of Cyrtopodium aliciae L. Linden & Rolfe, an endemic species of the Chapada Diamantina / Desenvolvimento in vitro e aclimatização de Cyrtopodium aliciae L. Linden & Rolfe: uma bela e endêmica espécie da Chapada Diamantina

Orchids are valued as ornamental plants, bioindicators, and medicinal plants, which implies that some species may be over-collected. Some inhabit very fragile environments and are under threat by the misuse of habitats and anthropogenic impacts. The search for beautiful plants and flowers has increased the number of facilities for micropropagation either by seeding or by cloning plants using in vitro techniques. However, not all species have appropriate media for growth and development that would help in conservation efforts. Cyrtopodium aliciae is an endemic species of rupestrian grassland in Brazil t. It has appeal as an ornamental plant or for use in hybridisation programs dueo its small size and white brownish-purple dotted flowers. This study compared three different media, namely ½ concentration Murashige and Skoog (MS), Vacin and Wendt, and Knudson C, during plant growth and their effect on the acclimatization of Cyrtopodium aliciae. The number and length of shoots and roots, increase in mass, and survival in vitro and ex vitro were analyzed. The experiment was conducted as completely random with a factorial arrangement of treatments (3 × 3) with 10 repetitions per treatment containing 10 plants for the in vitro experiment and 3 repetitions of 10 plants for the ex vitro experiment. Cyrtopodium aliciae performed better in the ½ concentration MS medium with a higher increase in mass, plant development, and survival under both in vitro and ex vitro conditions.

As orquídeas são valiosas como plantas ornamentais, bioindicadores ou medicinais, o que implica que algumas espécies podem ser coletadas em demasia. Algumas habitam ambientes muito frágeis e devido ao impacto antrópico, estão sob ameaça devido ao mau uso destes habitats. A busca por belas plantas e flores aumentou as facilidades para micropropagação, seja por semeadura ou por clonagem de plantas com técnicas in vitro. No entanto, nem todas as espécies possuem meios apropriados para crescimento e desenvolvimento que ajudem nos esforços de conservação. Cyrtopodium aliciae é uma bela espécie endêmica de campos rupestres do Brasil, apresenta bom apelo tanto como planta ornamental quanto como potencial para ser usada em programas de hibridização, devido ao seu pequeno tamanho de planta e belas flores brancas pontilhadas com marrom-púrpura. Este trabalho teve como objetivo comparar três meios diferentes, Murashige e Skoog à ½ concentração (MS); Vacin e Wendt (VW) e Knudson C (KC), durante o crescimento e na aclimatização. Foram analisadas as seguintes variáveis: número e comprimento de brotos e raízes, aumento de massa, sobrevivência in vitro e ex vitro. O experimento foi conduzido em delineamento inteiramente casualizado, com os tratamentos em um arranjo fatorial 3x3 (meios x tempo) com 10 repetições por tratamento contendo 10 plantas cada para a fase in vitro e três repetições com 10 plantas para a fase ex vitro. Cyrtopodium aliciae teve melhor desempenho na concentração de ½ MS com o maior aumento de massa, desenvolvimento da planta e sobrevivência tanto em condições in vitro quanto em condições ex vitro.

Hybrids of Solanum corymbiflorumand S. diploconos(Solanaceae) –a hope for new commercial varieties of edible fruits / Híbridos de Solanum Corymbiflorum e S. diploconos (Solanaceae) –uma alternativa paranovas cultivares comerciais defrutas comestíveis

Solanum diploconos(Mart.) Bohs („guava tamarillo”) and Solanum corymbiflorum(Sendtn.) Bohs („hardy tamarillo”) are wild relatives to subtropical, orchard, small tree –Solanum betaceumCav. (called simply „tamarillo”). Both these species create edible fruits, but they have not been cultivated widely so far as fruit trees. However, each one of these species has valuable features. Solanum corymbiflorumis quite hardy to frost, deciduous and early blooming both in fenological year time as well as in its lifespan but has untasty fruits. Solanum diploconoshas quite good tasting fruits and it is pest and disease resistant. This work has been an attempt to connect their best features in hybrids to create new, potentially commercial cultivars to grow as fruit plants. Three types of hybrids were created: F1 hybrid type –Solanum corymbiflorum× Solanum diploconos, BC1 backrossing type -(Solanum corymbiflorum× Solanum diploconos) × Solanum corymbiflorum and the second BC1 backcrossing type –(Solanum corymbiflorum× Solanum diploconos) × Solanum diploconos. Out of the numerous variable individuals within each type, we selected three very valuable from an agronomic point of view cultivars (Solanum'Lynn', 'Pinczow Springs' and 'Iwona'). The work with crossing and selecting the next cultivars will be continued.

Solanum diploconos(Mart.) Bohs (”guava tamarillo”) e Solanum corymbiflorum(Sendtn.) Bohs (”hardy tamarillo”) são espécies silvestres de forma arbustiva –Solanum betaceumCav. (chamado simplesmente “tamarillo”). Ambas as espécies geram frutos comestíveis, mas não têm sido cultivadas como árvores frutíferas. Entretanto, cada uma destas espécies tem características valiosas. Solanum corymbiflorumé bastante resistente à geada, perde suas folhas periodicamente e possui floração precoce, tanto no ano fenológico como em sua vida útil, mas tem frutos pouco saborosos. No entanto, Solanum diploconostem frutos bastante saborosos e é resistente a pragas e doenças. Este estudo foiuma tentativa de captar as melhores características existentes em híbridos para criar novas cultivares, potencialmente comerciais, e que possam desenvolver como planta frutífera. Três tipos de híbridos foram criados: tipo híbrido F1 –(Solanum corymbiflorum× Solanum diploconos), tipo BC1 retrocruzamento -(Solanum corymbiflorum× Solanum diploconos) × Solanum corymbiflorume o segundo tipo BC1 retrocruzamento -(Solanum corymbiflorum× Solanum diploconos) × Solanum diploconos. Dos numerosos indivíduos variáveis dentro de cada tipo, foram selecionados três cultivares muito valiosas do ponto de vista agronômico (Solanum'Lynn', 'Pinczow Springs' e 'Iwona'). O trabalho de cruzamento e seleção das próximas cultivares terá continuidade e aprimoramento.

Hybrids of Solanum corymbiflorumand S. diploconos(Solanaceae) –a hope for new commercial varieties of edible fruits / Híbridos de Solanum Corymbiflorum e S. diploconos (Solanaceae) –uma alternativa paranovas cultivares comerciais defrutas comestíveis

Solanum diploconos(Mart.) Bohs („guava tamarillo”) and Solanum corymbiflorum(Sendtn.) Bohs („hardy tamarillo”) are wild relatives to subtropical, orchard, small tree –Solanum betaceumCav. (called simply „tamarillo”). Both these species create edible fruits, but they have not been cultivated widely so far as fruit trees. However, each one of these species has valuable features. Solanum corymbiflorumis quite hardy to frost, deciduous and early blooming both in fenological year time as well as in its lifespan but has untasty fruits. Solanum diploconoshas quite good tasting fruits and it is pest and disease resistant. This work has been an attempt to connect their best features in hybrids to create new, potentially commercial cultivars to grow as fruit plants. Three types of hybrids were created: F1 hybrid type –Solanum corymbiflorum× Solanum diploconos, BC1 backrossing type -(Solanum corymbiflorum× Solanum diploconos) × Solanum corymbiflorum and the second BC1 backcrossing type –(Solanum corymbiflorum× Solanum diploconos) × Solanum diploconos. Out of the numerous variable individuals within each type, we selected three very valuable from an agronomic point of view cultivars (Solanum'Lynn', 'Pinczow Springs' and 'Iwona'). The work with crossing and selecting the next cultivars will be continued.(AU)

Solanum diploconos(Mart.) Bohs (”guava tamarillo”) e Solanum corymbiflorum(Sendtn.) Bohs (”hardy tamarillo”) são espécies silvestres de forma arbustiva –Solanum betaceumCav. (chamado simplesmente “tamarillo”). Ambas as espécies geram frutos comestíveis, mas não têm sido cultivadas como árvores frutíferas. Entretanto, cada uma destas espécies tem características valiosas. Solanum corymbiflorumé bastante resistente à geada, perde suas folhas periodicamente e possui floração precoce, tanto no ano fenológico como em sua vida útil, mas tem frutos pouco saborosos. No entanto, Solanum diploconostem frutos bastante saborosos e é resistente a pragas e doenças. Este estudo foiuma tentativa de captar as melhores características existentes em híbridos para criar novas cultivares, potencialmente comerciais, e que possam desenvolver como planta frutífera. Três tipos de híbridos foram criados: tipo híbrido F1 –(Solanum corymbiflorum× Solanum diploconos), tipo BC1 retrocruzamento -(Solanum corymbiflorum× Solanum diploconos) × Solanum corymbiflorume o segundo tipo BC1 retrocruzamento -(Solanum corymbiflorum× Solanum diploconos) × Solanum diploconos. Dos numerosos indivíduos variáveis dentro de cada tipo, foram selecionados três cultivares muito valiosas do ponto de vista agronômico (Solanum'Lynn', 'Pinczow Springs' e 'Iwona'). O trabalho de cruzamento e seleção das próximas cultivares terá continuidade e aprimoramento.(AU)

RÁPIDA DETECÇÃO DE Cryptococcus gattii USANDO NANOPARTÍCULAS DE OURO

A rápida identificação de Cryptococcus sp. é importante para facilitar o tratamento imediato da criptococose, reduzir o impacto da doença e melhorar as taxas de sobrevivência. Neste trabalho, apresentamos o desenvolvimento da técnica de nanopartícula de ouro (AuNPs) com foco na detecção de C. gattii. DNA de 21 isolados clínicos de C. gattii e quatro de C. neoformans de humanos e animais foram investigados. Isolados de referência (WM 148, WM626, WM628, WM629, WM179, WM178, WM161 WM779), que representam cada um dos oito principais tipos moleculares, foram utilizados como controle de C. neoformans e C. gattii. Para testar a especificidade da técnica isolados de Candida albicans, Malassezia pachydermatis, Conidiobolus lamprauges, Aspergillus fumigatus e Pichia sp. foram utilizados. Oligonucleotídeos desenhados a partir da região do gene superóxido dismutase associados com AuNPs e utilizados para hibridação e detecção específica, permitiram o diagnóstico colorimétrico com base nas propriedades visuais das partículas e a leitura em espectrofotômetro de absorção. A técnica detectou o DNA dos isolados de C. gattii e as estirpes de referência usadas como controle. Os isolados clínicos e as estirpes padrão de C. neoformans, bem como as leveduras utilizadas para a especificidade, foram negativos. A técnica tem sido utilizada para a detecção de outros agentes patogênicos com resultados de boa sensibilidade e especificidade. Neste estudo, a técnica foi AuNPs foi rápida e de baixo custo para detecção de isolados clínico de C. gattii.

Rapid identification of Cryptococcus sp is imperative for the facilitation of prompt treatment, the reduced impact of diseases and the improvement of survival rates. In this paper, we present the development of a gold nanoparticle (AuNPs) technique, focusing on C. gattii detection. DNA from 21 clinical isolates of Cryptococcus gattii and four of C. neoformans from humans and animals were investigated. Reference isolates (WM148, WM626, WM628, WM629, WM179, WM178, WM161 and WM779) representing each of the eight major molecular types were used as controls. To test specificity the isolates of Candida albicans, Malassezia pachydermatis, Conidiobolus lamprauges, Aspergillus fumigatus and Pichia sp were used. Oligonucleotides designed from the regional superoxide dismutase gene associated with AuNPs and used for hybridisation and specific detection, allowed for diagnosis based on the visual colorimetric properties of the particles and readings from spectrophotometer absorption. The technique detected both the DNA C. gattii isolates and the reference strains patterns used as controls. The clinical isolates and standard strain of C. neoformans, as well as the yeasts used for specificity, were negative. The technique was used for the detection of other pathogens with good sensitivity and specificity results. In this study, the AuNPs technique was rapid and low cost for the detection of suspected C. gattii clinical isolates.

False positive reaction due to endogenous biotin activity in glandular epithelium of decidua

Biotin-labeled probe was used in an in situ hybridisation assay to localize virus infection in formalin-fixed, paraffin embedded tissues taken from eleven abortion cases. Probes for human cytomegalovirus (HCMV), human Parvovirus B19 (B19) and human adenovirus type 2 (HAd2), were labeled with biotin-11-dUTP by nick-translation reaction. Streptavidin-alkaline-phosphatase (SAP) was used to detect biotin, followed by 4-nitroblue tetrazolium/5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate (NBT/BCIP) solution. Positive reaction was observed in nucleus of glandular ephitelium cells of decidua either in positive or in negative control at first and second gestational trimester. The reaction was not inhibited with blocking solution for alkaline phosphatase endogenous activity and it persisted even with probes omission. The use of adequate negative control permitted to reveal the presence of nuclear biotin in glandular epithelium of decidua, responsible for false positivity in detection systems involving streptavidin biotin system (StrepABC). The stained cells resembled to cytophatic effect due to herpesvirus, which could induce further misinterpretation. The results obtained in this study strongly recommend that DNA detection by in situ hybridisation reaction in gestational endometrium should be done without using StrepABC system.

Sondas marcadas com biotina foram utilizadas neste trabalho para detecção de infecção viral por hibridização in situ em tecidos fixados com formalina e embebidos em parafina de 11 casos obtidos de abortamento. Sondas para citomegalovírus humano (HCMV), parvovírus B19 humano (B19) e adenovírus humano tipo 2 (HAd2), foram marcadas com biotina-11-dUTP através da reação de nick-translation. Estreptavidina conjugada com fosfatase alcalina (SAP) seguida por solução de 4-nitro-azul de tetrazolio/5-bromo-4-cloro-3-indolil fosfato (NBT/BCIP) foram utilizadas para detecção da biotina após a reação de hibridização. Reação positiva foi observada no núcleo de células do epitélio glandular da decídua tanto no controle positivo quanto no negativo em tecidos de primeiro e segundo trimestre gestacional. Esta reação não foi inibida com solução bloqueadora da atividade endógena de fosfatase alcalina e persistiu mesmo com a omissão das sondas. O uso de controles negativos permitiu revelar atividade endógena de biotina nuclear em epitélio glandular da decídua, responsável por reações falso positivas em sistemas de detecção estreptavidina-biotina (StrepABC). Os resultados obtidos neste estudo fortemente recomendam que a detecção de ADN por hibridização in situ em endométrio gestacional seja feita com outro sistema de detecção que não o StrepABC.

Resistência de piperáceas nativas da Amazônia á infecção causada por Nectria haematococca f. sp. piperis

The resistance of Piper aduncum, P. arboreum, P. carniconnectivum, P. colubrinum, P. hispidinervium, P. hispidum, P. hostmannianum, P. nigrum, P. tuberculatum and Piper sp. to the infection caused by two Nectria haematococca f. sp. piperis isolates was detected under laboratory and shade house conditions. Due to their high susceptibility, black pepper (Piper nigrum) plants were used as control. When grown in soil infested with the isolate from P. aduncum (Adu), no root rot symptoms were observed on the majority of Piper spp., except on Piper sp. and black pepper. However, in soil infested with the isolate from P. nigrum (Nig) root rot was noticed on black pepper, although not on the other Piper spp. Significant differences (p 0.01) were observed when stems of Piper spp. plants were inoculated with Adu and Nig isolates. On P. nigrum stems typical lesions were followed by yellowish, stem blight and death of plants were observed, while on Piper spp. canker-like tissues around stem lesions were detected, evidencing the high resistance of these related species. These results showed that the isolate from P. aduncum has no ability to colonise Piper spp. root tissues and that at least seven related species are highly resistant to N. haematococca f. sp. piperis. This suggests that these species may be used either as rootstocks or for somatic hybridisation and protoplast fusion in amelioration studies aiming to control Fusarium diseases on black pepper.

A reação de resistência das espécies Piper aduncum, P. arboreum, P. carniconnectivum, P. colubrinum, P. hispidinervium, P. hispidum, P. hostmannianum, P. tuberculatum, P. nigrum e Piper sp. à infecção causada por dois isolados de Nectria haematococca f. sp. piperis foi determinada em condições de telado, através do cultivo em solo infestado e de inoculações no internódio de mudas com três meses de desenvolvimento. Mudas de P. nigrum (pimenta-do-reino) foram usadas como controle, devido a alta suscetibilidade ao patógeno. Aos 110 dias observou-se que o isolado Adu obtido de . aduncum não causou podridão das raízes em todas as espécies, com exceção de Piper sp. e de P. nigrum, enquanto que o isolado Nig obtido de P. nigrum causou infecção apenas nas raízes desse hospedeiro. Diferenças significativas (p 0,01) foram observadas no nível de resistência entre as espécies, sendo as espécies nativas mais resistentes à infecção causada pelo fungo. Os isolados apresentaram variação para virulência (p 0,01), sendo o isolado Nig mais virulento do que o Adu. Não ocorreu, porém, interação entre Piper spp. e os dois isolados de N. haematococca f. sp. piperis. Concluiu-se, portanto, que o isolado Adu não tem habilidade de infectar os tecidos radiculares das espécies estudadas e que pelo menos sete espécies nativas apresentam uma alta resistência ao patógeno, podendo ser utilizadas como porta-enxertos resistentes para controlar doenças radiculares da pimenta-do-reino.

Resistência de piperáceas nativas da Amazônia á infecção causada por Nectria haematococca f. sp. piperis

The resistance of Piper aduncum, P. arboreum, P. carniconnectivum, P. colubrinum, P. hispidinervium, P. hispidum, P. hostmannianum, P. nigrum, P. tuberculatum and Piper sp. to the infection caused by two Nectria haematococca f. sp. piperis isolates was detected under laboratory and shade house conditions. Due to their high susceptibility, black pepper (Piper nigrum) plants were used as control. When grown in soil infested with the isolate from P. aduncum (Adu), no root rot symptoms were observed on the majority of Piper spp., except on Piper sp. and black pepper. However, in soil infested with the isolate from P. nigrum (Nig) root rot was noticed on black pepper, although not on the other Piper spp. Significant differences (p 0.01) were observed when stems of Piper spp. plants were inoculated with Adu and Nig isolates. On P. nigrum stems typical lesions were followed by yellowish, stem blight and death of plants were observed, while on Piper spp. canker-like tissues around stem lesions were detected, evidencing the high resistance of these related species. These results showed that the isolate from P. aduncum has no ability to colonise Piper spp. root tissues and that at least seven related species are highly resistant to N. haematococca f. sp. piperis. This suggests that these species may be used either as rootstocks or for somatic hybridisation and protoplast fusion in amelioration studies aiming to control Fusarium diseases on black pepper.

A reação de resistência das espécies Piper aduncum, P. arboreum, P. carniconnectivum, P. colubrinum, P. hispidinervium, P. hispidum, P. hostmannianum, P. tuberculatum, P. nigrum e Piper sp. à infecção causada por dois isolados de Nectria haematococca f. sp. piperis foi determinada em condições de telado, através do cultivo em solo infestado e de inoculações no internódio de mudas com três meses de desenvolvimento. Mudas de P. nigrum (pimenta-do-reino) foram usadas como controle, devido a alta suscetibilidade ao patógeno. Aos 110 dias observou-se que o isolado Adu obtido de . aduncum não causou podridão das raízes em todas as espécies, com exceção de Piper sp. e de P. nigrum, enquanto que o isolado Nig obtido de P. nigrum causou infecção apenas nas raízes desse hospedeiro. Diferenças significativas (p 0,01) foram observadas no nível de resistência entre as espécies, sendo as espécies nativas mais resistentes à infecção causada pelo fungo. Os isolados apresentaram variação para virulência (p 0,01), sendo o isolado Nig mais virulento do que o Adu. Não ocorreu, porém, interação entre Piper spp. e os dois isolados de N. haematococca f. sp. piperis. Concluiu-se, portanto, que o isolado Adu não tem habilidade de infectar os tecidos radiculares das espécies estudadas e que pelo menos sete espécies nativas apresentam uma alta resistência ao patógeno, podendo ser utilizadas como porta-enxertos resistentes para controlar doenças radiculares da pimenta-do-reino.