Meningoencephalitis secondary to rhinitis caused by Pythium insidiosum in sheep / Meningoencefalite secundária a rinite por Pythium insidiosum em um ovino

ABSTRACT: A case of meningoencephalitis caused by Pythium insidiosum secondary to rhinitis is reported in a three-year-old crossbred sheep from a herd of 15 animals, raised extensively and with free access to a weir. The animal presented mild dyspnea, blindness, mydriasis, opisthotonos, nystagmus, incoordination, decreased mandibular tone, and spasticity of the pelvic limbs. Macroscopic examination of the nasal cavity showed a blackish-red, irregular, friable mass that bilaterally compromised the nasal septum and the rostral portion of the nasal turbinates. In the brain, there was diffuse thickening of the leptomeninges of the cerebellum and ventral portion of the brainstem characterized by yellowish, granular material associated with vessel hyperemia. On the floor of the fourth ventricle, there was deposition of yellowish, irregular, slightly granular material that protruded towards the obex and displaced the cerebellum dorsolaterally. Microscopically, there were pyogranulomatous, eosinophilic, necrotizing rhinitis and fibrinosuppurative, eosinophilic, necrotizing meningoencephalitis, both associated with thrombosis, vasculitis, and intralesional hyphae. The hyphae were impregnated with silver and presented thin, parallel walls, rarely septate and branched. At immunohistochemistry, the hyphae were immunostained with polyclonal anti-P. insidiosum antibody in fragments of the cerebellum and nasal cavity. The findings showed that P. insidiosum rhinitis can secondarily affect the nervous system of sheep, causing nonspecific neurological clinical signs.

RESUMO: Relata-se um caso de meningoencefalite por Pythium insidiosum secundária a rinite em uma ovelha mestiça, três anos de idade, proveniente de um rebanho de 15 animais, criados extensivamente e com acesso livre a açude. O animal apresentava dispneia leve, cegueira, midríase, opistótono, nistagmo, incoordenação, diminuição do tônus mandibular e espasticidade dos membros pélvicos. O exame macroscópico da cavidade nasal evidenciou uma massa vermelho-escura, irregular, friável, que comprometia bilateralmente o septo nasal e a porção rostral dos cornetos nasais. No encéfalo, havia espessamento difuso das leptomeninges do cerebelo e porção ventral do tronco encefálico caracterizado por material granular amarelado associado à hiperemia dos vasos. No assoalho do quarto ventrículo, havia deposição de material amarelado, irregular, levemente granuloso, que se projetava em direção ao óbex e deslocava o cerebelo dorsolateralmente. Microscopicamente, havia rinite piogranulomatosa, eosinofílica, necrosante e meningoencefalite fibrinossupurativa, eosinofílica, necrosante, ambas associadas à trombose, vasculite e hifas intralesionais. Pela utilização da técnica de GMS as hifas foram impregnadas pela prata e apresentavam paredes finas e paralelas, raramente septadas e ramificadas. Na imuno-histoquímica, houve imunomarcação com o anticorpo policlonal anti-P. insidiosum em fragmentos do cerebelo e cavidade nasal. Os achados evidenciaram que rinite por P. insidiosum pode afetar secundariamente o sistema nervoso de ovinos, causando sinais clínicos neurológicos inespecíficos.

Nasal leiomyosarcoma in a Quarter Horse / Leiomiossarcoma nasal em equino Quarto de Milha

ABSTRACT: We described the clinical and anatomopathological findings observed in a case of nasal leiomyosarcoma in a five-year-old male Quarter Mile horse, whose main complaints were decreased sports performance and bilateral purulent nasal discharge. The nodule was observed in the nasal cavity, obstructing the left nostril and associated with purulent drainage. The nodule was of irregular shape and yellow color, measuring 19.4 cm × 6.9 cm × 4.3 cm in size, with coalescent multifocal areas that were brownish, friable, opaque, and fetid. When cut, the surface was compact, grayish-white, and smooth with yellow, friable, irregular multifocal areas, measuring 1-3.2 cm in diameter. Histopathological examination showed spindle-shaped neoplastic cells, which was negative on Masson's trichromic stain. A diagnosis of leiomyosarcoma was established based on the morphotintorial aspects of neoplastic cells and confirmed through immunohistochemistry, with positive immunostaining for antibodies 1A4, HHF35, desmin, and S100. Leiomyosarcoma primarily affects the nasal cavity of horses and should be included in the differential diagnosis of diseases that affect the nasal cavity and cause nasal obstruction associated with dyspnea.

RESUMO: Descreve-se os achados clínicos e anatomopatológicos observados em um caso de leiomiossarcoma nasal em um equino, Quarto de Milha, macho, de cinco anos de idade, com queixa principal de diminuição do rendimento esportivo e secreção nasal purulenta bilateral. Na cavidade nasal, observou-se um nódulo obstruindo a narina esquerda associada à secreção purulenta. O nódulo era de superfície irregular, amarelada, brilhante, fibroelástica, medindo 19,4 x 6,9 x 4,3cm de tamanho, com áreas multifocais a coalescente acastanhadas, friáveis, opacas e fétidas. Ao corte, a superfície era compacta, branco-acinzentada e lisa com áreas multifocais amarelas, friáveis e irregulares, medindo 1-3,2 cm de diâmetro. No exame histopatológico foi observado proliferação de células neoplásicas fusiformes, que foram negativas na coloração de Tricrômico de Masson. O diagnóstico de leiomiossarcoma foi estabelecido com base nos aspectos morfotintoriais das células neoplásicas e confirmado através da imuno-histoquímica, no qual houve imunomarcação positiva para os anticorpos 1A4, HHF35, Desmina e S100. O leiomiossarcoma pode afetar primariamente a cavidade nasal de equinos, devendo ser incluído no diagnóstico diferencial de doenças que afetam a cavidade nasal e que provocam quadros de obstrução nasal associado a dispneia.

Characterization of nonpathological intrascleral cartilage in the domestic sheep (Ovis aries) / Caracterização de cartilagem intraescleral não patológica em ovinos (Ovis aries)

ABSTRACT: Birds, cartilaginous and teleost fish, reptiles, and some amphibians have intrascleral cartilage and/or bone; however, these are rarely reported in therian mammals. This study aimed to investigate and characterize a nonpathological formation of cartilage in the posterior sclera of sheep macroscopically, histologically, and by immunohistochemical exam (IHC). Ninety eyes from 45 domestic sheep were collected, underwent gross examination, fixed in formalin, and embedded in paraffin for the microscopical assessment. Sections with histological shreds of cartilage were selected to perform IHC to confirm the presence of cartilage. Intrascleral cartilage was detected in 60 eyeballs (66.66%) from 37 sheep (82.22%). A slight whitish thickening was grossly seen in the posterior sclera. The histologic exam revealed a few scattered, isolated chondrocytes to larger aggregates of cartilaginous islands in the posterior sclera. Eighteen (30%) of 60 eyeballs revealed marked anti-collagen type II immunolabeling. The development of cartilaginous structures in the eyes is considered rare in mammalian animals. The high occurrence of intrascleral cartilage in the examined sheep eyes suggests that this finding corresponds to an anatomical component of sheep sclera, despite the age, breed, or body condition.

RESUMO: Aves, peixes cartilaginosos e teleósteos e répteis, bem como alguns anfíbios possuem cartilagem e/ou osso intraescleral, contudo, isso é raramente descrito em marsupiais. O objetivo deste trabalho foi investigar e caracterizar a formação não patológica de cartilagem hialina na esclera posterior de ovinos, por exame macroscópico, histológico e imuno-histoquímico. Olhos de 45 ovinos foram coletados, submetidos a exame macroscópico, fixados em formalina a 10% tamponada e incluídos em parafina para o exame histológico. Amostras com evidência de formação cartilaginosa ao exame histológico foram selecionadas para a realização da técnica de imuno-histoquímica para confirmação. Cartilagem intraescleral foi detectada em 60 amostras oculares (66,66%) de 37 ovinos (82,22%), caracterizada na avaliação macroscópica como discretos espessamentos esbranquiçados na esclera posterior. O exame histológico revelou formações que variaram de condrócitos isolados e dispersos a grandes agregados, formando ilhas cartilaginosas na esclera. Dezoito (30%) de 60 bulbos oculares mostraram imunomarcação anti-colágeno tipo II. O desenvolvimento de estruturas cartilaginosas nos bulbos oculares é considerado raro em mamíferos. A identificação de cartilagem intraescleral em 66% dos olhos ovinos avaliados no estudo indica que a formação de cartilagem corresponde a um componente anatômico normal na esclera de ovinos, independente de idade, raça ou condição corporal.

Meningoencephalitis secondary to rhinitis caused by Pythium insidiosum in sheep / Meningoencefalite secundária a rinite por Pythium insidiosum em um ovino

A case of meningoencephalitis caused by Pythium insidiosum secondary to rhinitis is reported in a three-year-old crossbred sheep from a herd of 15 animals, raised extensively and with free access to a weir. The animal presented mild dyspnea, blindness, mydriasis, opisthotonos, nystagmus, incoordination, decreased mandibular tone, and spasticity of the pelvic limbs. Macroscopic examination of the nasal cavity showed a blackish-red, irregular, friable mass that bilaterally compromised the nasal septum and the rostral portion of the nasal turbinates. In the brain, there was diffuse thickening of the leptomeninges of the cerebellum and ventral portion of the brainstem characterized by yellowish, granular material associated with vessel hyperemia. On the floor of the fourth ventricle, there was deposition of yellowish, irregular, slightly granular material that protruded towards the obex and displaced the cerebellum dorsolaterally. Microscopically, there were pyogranulomatous, eosinophilic, necrotizing rhinitis and fibrinosuppurative, eosinophilic, necrotizing meningoencephalitis, both associated with thrombosis, vasculitis, and intralesional hyphae. The hyphae were impregnated with silver and presented thin, parallel walls, rarely septate and branched. At immunohistochemistry, the hyphae were immunostained with polyclonal anti-P. insidiosum antibody in fragments of the cerebellum and nasal cavity. The findings showed that P. insidiosum rhinitis can secondarily affect the nervous system of sheep, causing nonspecific neurological clinical signs.

Relata-se um caso de meningoencefalite por Pythium insidiosum secundária a rinite em uma ovelha mestiça, três anos de idade, proveniente de um rebanho de 15 animais, criados extensivamente e com acesso livre a açude. O animal apresentava dispneia leve, cegueira, midríase, opistótono, nistagmo, incoordenação, diminuição do tônus mandibular e espasticidade dos membros pélvicos. O exame macroscópico da cavidade nasal evidenciou uma massa vermelho-escura, irregular, friável, que comprometia bilateralmente o septo nasal e a porção rostral dos cornetos nasais. No encéfalo, havia espessamento difuso das leptomeninges do cerebelo e porção ventral do tronco encefálico caracterizado por material granular amarelado associado à hiperemia dos vasos. No assoalho do quarto ventrículo, havia deposição de material amarelado, irregular, levemente granuloso, que se projetava em direção ao óbex e deslocava o cerebelo dorsolateralmente. Microscopicamente, havia rinite piogranulomatosa, eosinofílica, necrosante e meningoencefalite fibrinossupurativa, eosinofílica, necrosante, ambas associadas à trombose, vasculite e hifas intralesionais. Pela utilização da técnica de GMS as hifas foram impregnadas pela prata e apresentavam paredes finas e paralelas, raramente septadas e ramificadas. Na imuno-histoquímica, houve imunomarcação com o anticorpo policlonal anti-P. insidiosum em fragmentos do cerebelo e cavidade nasal. Os achados evidenciaram que rinite por P. insidiosum pode afetar secundariamente o sistema nervoso de ovinos, causando sinais clínicos neurológicos inespecíficos.

Nasal leiomyosarcoma in a Quarter Horse / Leiomiossarcoma nasal em equino Quarto de Milha

We described the clinical and anatomopathological findings observed in a case of nasal leiomyosarcoma in a five-year-old male Quarter Mile horse, whose main complaints were decreased sports performance and bilateral purulent nasal discharge. The nodule was observed in the nasal cavity, obstructing the left nostril and associated with purulent drainage. The nodule was of irregular shape and yellow color, measuring 19.4 cm × 6.9 cm × 4.3 cm in size, with coalescent multifocal areas that were brownish, friable, opaque, and fetid. When cut, the surface was compact, grayish-white, and smooth with yellow, friable, irregular multifocal areas, measuring 1-3.2 cm in diameter. Histopathological examination showed spindle-shaped neoplastic cells, which was negative on Masson's trichromic stain. A diagnosis of leiomyosarcoma was established based on the morphotintorial aspects of neoplastic cells and confirmed through immunohistochemistry, with positive immunostaining for antibodies 1A4, HHF35, desmin, and S100. Leiomyosarcoma primarily affects the nasal cavity of horses and should be included in the differential diagnosis of diseases that affect the nasal cavity and cause nasal obstruction associated with dyspnea.

Descreve-se os achados clínicos e anatomopatológicos observados em um caso de leiomiossarcoma nasal em um equino, Quarto de Milha, macho, de cinco anos de idade, com queixa principal de diminuição do rendimento esportivo e secreção nasal purulenta bilateral. Na cavidade nasal, observou-se um nódulo obstruindo a narina esquerda associada à secreção purulenta. O nódulo era de superfície irregular, amarelada, brilhante, fibroelástica, medindo 19,4 x 6,9 x 4,3cm de tamanho, com áreas multifocais a coalescente acastanhadas, friáveis, opacas e fétidas. Ao corte, a superfície era compacta, branco-acinzentada e lisa com áreas multifocais amarelas, friáveis e irregulares, medindo 1-3,2 cm de diâmetro. No exame histopatológico foi observado proliferação de células neoplásicas fusiformes, que foram negativas na coloração de Tricrômico de Masson. O diagnóstico de leiomiossarcoma foi estabelecido com base nos aspectos morfotintoriais das células neoplásicas e confirmado através da imuno-histoquímica, no qual houve imunomarcação positiva para os anticorpos 1A4, HHF35, Desmina e S100. O leiomiossarcoma pode afetar primariamente a cavidade nasal de equinos, devendo ser incluído no diagnóstico diferencial de doenças que afetam a cavidade nasal e que provocam quadros de obstrução nasal associado a dispneia.

Immunohistochemical analysis of ORF2 protein and ORF3 protein of hepatitis E virus in livers of swine in Mato Grosso state, Brazil / Análise imuno-histoquímica da proteína ORF2 e proteína ORF3 do vírus da hepatite E em fígados de suínos no estado de Mato Grosso, Brasil

Hepatitis E is an emerging zoonotic disease caused by hepatitis E virus (HEV). Immunohistochemistry (IHC) can be used to verify viral presence in human and swine livers. The aim of this study was to comparatively analyze the immunolabeling of the ORF2 protein (pORF2) versus the ORF3 protein (pORF3) of HEV in swine livers from subsistence farms in the state of Mato Grosso, Brazil. This study included 25 liver samples formalin fixed paraffin embedded tissue block from a published molecular detection and immunohistochemistry (IHC) study, which used the HEV pORF3 protein, demonstrating 4% (1/25) of positive immunolabeling and 96% (24/25) negative, in contrast to the molecular exam that showed 24% (6/25) of liver samples positive and 76% (19/25) negative. In order to increase the sensitivity of the IHC technique, these samples were analyzed using the antibody for the detection of HEV pORF2, showing 24% (6/25) immunolabeling positive and 76% (19/25) negative, equivalent to the result of molecular analysis on corresponding samples. Thus, the use of antibody to pORF2 increased the number of HEV cases detectable in the IHC by 600%. The IHC added to molecular techniques can be used as a tool for monitoring viral presence in swine livers, constituting a sensitive diagnostic methodology when liver samples fixed in formalin and embedded in paraffin are available.

A hepatite E é uma enfermidade emergente de caráter zoonótico causada pelo Vírus da Hepatite E (HEV). A imuno-histoquímica (IHQ) pode ser utilizada para verificar a presença viral em fígados de humanos e suínos. O objetivo deste estudo foi analisar comparativamente a imunomarcação da proteína ORF2 (pORF2) versus proteína ORF3 (pORF3) de HEV em fígados de suínos de criatórios de subsistência no estado de Mato Grosso, Brasil. Este trabalho incluiu 25 amostras de fígados de suínos fixados em formol e embebidos em parafina provenientes de um estudo publicado de detecção molecular e imuno-histoquímica (IHQ), que utilizou pORF3 de HEV, demonstrando 4% (1/25) de imunomarcação positiva e 96% (24/25) negativa, em contraste com o exame molecular que apresentou 24% (6/25) das amostras de fígado positivas e 76% (19/25) negativas. Com o objetivo de aumentar a sensibilidade da técnica de IHQ, essas amostras foram analisadas utilizando o anticorpo para detecção da pORF2 de HEV, apresentando 24% (6/25) de imunomarcação positiva e 76% (19/25) negativa, equivalente ao resultado da análise molecular em amostras correspondentes. Desta forma, o uso do anticorpo para pORF2 ampliou o número de casos de HEV detectáveis na IHQ em 600%. A IHQ somada a técnica molecular pode ser utilizada como ferramenta de monitoramento da presença viral em fígados de suínos, constituindo uma metodologia diagnóstica sensível quando há disponibilidade de amostras de fígado fixadas em formol e embebidas em parafina.

Comparison between immunofluorescence and immunohistochemistry for Listeria monocytogenes detection in formalin-fixed paraffin-embedded tissues / Comparação entre imunofluorescência e imuno-histoquímica para detecção de Listeria monocytogenes em tecidos fixados e parafinizados

Listeria monocytogenes is a bacterium that infect humans and animals and causes a zoonotic disease characterized by encephalitis, septicemia or abortion. In addition, listeriosis leads to significant economic losses due to animal death and sacrifice. This research compared the technique of immunofluorescence (IF) and immunohistochemistry (IHC) for the diagnosis of L. monocytogenes in formalin-fixed and paraffin-embedded (FFPE) tissues. A total of 30 tissue blocks from 15 animals with history and/or lesions compatible with listeriosis were selected. For both IHC and IF, the same diluted (1:200) polyclonal primary antibody was used against L. monocytogenes serotypes 1 and 4. For IHC, a polymer secondary antibody conjugated to peroxidase (HRP) was used. For IF, samples were incubated with a fluorescein-labeled anti-rabbit IgG secondary antibody. Each sample was classified according to the presence and percentage of immunolabeling area. From 30 samples, 10 were positive at least for one technique, whereas eight samples were positive for both IHC and IF with similar score. There was strong immunolabeling in tissue samples from bovines experimentally infected with L. monocytogenes ATCC 7644, as well as in nervous tissues from naturally infected ruminants. Additionally, IF did not show any difference in sensitivity when compared to IHC. Using processed biological materials for IF, instead of fresh tissues, is a quite unique technique, since there are few protocols described. Therefore, this study demonstrated that both techniques are efficient to detect L. monocytogenes in FFPE tissues.

Listeria monocytogenes é uma bactéria que infecta humanos e animais, podendo causar uma doença zoonótica caracterizada por encefalite, septicemia e abortos. Além disso, a listeriose resulta em perdas econômicas significativas pela morte e sacrifício de animais. O objetivo deste trabalho foi comparar a técnica de imunofluorescência (IF) e imuno-histoquímica (IHQ) para detecção de L. monocytogenes em tecidos fixados e parafinizados. Foram selecionados 30 blocos de tecidos de 15 animais com histórico e/ou lesões compatíveis com listeriose. Para ambas as técnicas, foi utilizado o mesmo anticorpo primário policlonal diluído (1:200) para detecção de L. monocytogenes sorotipos 1 e 4. Para a IHQ foi utilizado anticorpo secundário em polímero acoplado a peroxidase (HRP). Para a IF, as amostras foram incubadas com anticorpo secundário anti-IgG de coelho marcado com fluoresceína. Cada amostra foi classificada quanto à presença de imunomarcação e porcentagem de área positiva. Das 30 amostras, 10 foram positivas em pelo menos uma das técnicas, sendo oito amostras positivas em ambas IHQ e IF com o mesmo escore. Houve forte imunomarcação tanto em amostras de bovino experimentalmente infectado com L. monocytogenes ATCC 7644, como em amostras de tecido nervoso de ruminantes naturalmente infectados. Além disso, a IF não apresentou diferença na sensibilidade quando comparada com a IHQ. O uso de materiais biológicos processados para IF, ao invés de tecidos frescos, é algo inovador, uma vez que existem poucos protocolos descritos. Portanto, este estudo demonstrou que as duas técnicas foram eficientes para detectar L. monocytogenes em tecidos fixados em formol e parafinizados.

Anatomopathological aspects and the use of immunohistochemistry in slaughter pigs with cutaneous lesions of erysipelas / Aspectos anatomopatológicos e o uso da imuno-histoquímica em suínos abatidos com lesões cutâneas de erisipela

Swine erysipelas is a disease of worldwide distribution, responsible for causing economic losses in swine and considered an occupational zoonotic disease. It is estimated that 30% to 50% of pigs are carriers and stress can predispose the appearance of clinical disease. The diagnosis of erysipelas in slaughter pigs becomes a challenge for pathologists, since scalding and dehairing, routine procedures in slaughterhouses, generate histological artifacts that often make the final diagnosis impossible. This study describes the anatomopathological aspects and evaluate the use of immunohistochemistry as a diagnostic tool in these cases. Forty-three cases of erysipelas in slaughter pigs were analyzed. Grossly, the cutaneous lesions were characteristic pink, red, or purple raised rhomboid, rectangular or square lesions ("diamond skin"). Histologically, in the dermis and subcutaneous tissue, there were suppurative vasculitis, hidradenitis and folliculitis, as well as degeneration and necrosis of the vessel wall, thrombosis and multifocal areas of necrosis. Suppurative vasculitis and damage to the blood vessel wall were observed in all cases, with varying degrees of severity. The immunohistochemical technique proved to be an effective complementary method of diagnosis, with positive immunostaining in 93%. In most cases, we observed mild immunostaining (57.5%), moderate in 22.5% and marked in 20%.

A erisipela suína é uma doença de distribuição mundial, responsável por causar prejuízos econômicos na suinocultura, além de ser uma doença zoonótica com caráter ocupacional. Estima-se que 30%-50% dos suínos sejam portadores e fatores estressantes podem predispor o aparecimento da doença clínica. O diagnóstico de erisipela em suínos de abate torna-se um desafio aos patologistas, uma vez que os processos de escaldagem e depila, rotineiros em abatedouros frigoríficos, geram artefatos histológicos que muitas vezes impossibilitam o diagnóstico final. Este trabalho descreve os aspectos anatomopatológicos e avalia o uso da imuno-histoquímica como uma ferramenta diagnóstica nestes casos. Foram analisados fragmentos de pele de 43 casos de erisipela em suínos de abate. Macroscopicamente, eram múltiplas lesões cutâneas romboides, retangulares ou quadradas rosa, vermelho ou roxo característicos ("pele de diamante"). Histologicamente, na derme e subcutâneo, havia vasculite, hidradenite e foliculite supurativas, bem como degeneração e necrose da parede de vasos, trombose e áreas de necrose multifocais. A vasculite supurativa e a lesão na parede de vasos sanguíneos foram observadas em todos os casos, em diferentes graus de severidade. A técnica imuno-histoquímica se mostrou um eficaz método complementar de diagnóstico, com imunomarcação positiva em 93%. Na maior parte dos casos observamos marcação discreta (57,5%), moderada em 22,5% e acentuada em 20%.

Outbreak of toxoplasmosis associated with muscular lesions in finishing pigs caused by an atypical Toxoplasma gondii genotype / Surto de toxoplasmose associado a lesões musculares em suínos de terminação causado por um genótipo atípico de T. gondii

Toxoplasma gondii infections are usually asymptomatic in pigs, and an acute clinical disease is rare in this host. This study aimed to determine the pathological and molecular aspects of an outbreak of fatal systemic toxoplasmosis in finishing pigs in Brazil. The outbreak occurred on a commercial finishing pig farm in the state of Santa Catarina in southern Brazil. The farm had 1500 pigs and 3.8% of mortality rate during the outbreak. The pigs had fever, anorexia, apathy, and locomotor deficits. Seven pigs were necropsied. Gross findings included multifocal to coalescent pale areas in skeletal muscles, lymphadenomegaly, hepatosplenomegaly, and non-colapsed lungs. The histological findings included granulomatous lymphadenitis, hepatitis and splenitis, necrotizing myositis, and lymphoplasmacytic interstitial pneumonia. Lung and liver lesions were occasionally accompanied by T. gondii parasitic structures. Positive immunolabeling for T. gondii tachyzoites and encysted bradyzoites was detected in all examined pigs. PCR-RFLP (11 markers) and microsatellite analysis (15 markers) identified the non-archetypal genotype #278 in pigs. This is the first report of systemic toxoplasmosis in pigs with muscle lesions and additionally shows the diversity of disease-causing T. gondii genotypes circulating in animals in Brazil.(AU)

As infecções por Toxoplasma gondii são geralmente assintomáticas em suínos, e uma doença clínica aguda é rara nessa espécie. Este estudo teve como objetivo determinar os aspectos patológicos e moleculares de um surto de toxoplasmose sistêmica fatal em suínos em terminação no Brasil. O surto ocorreu em uma granja comercial de suínos em terminação no estado de Santa Catarina, no sul do Brasil. A granja tinha 1500 suínos e a taxa de mortalidade durante o surto foi de 3,8%. Os suínos apresentaram febre, anorexia, apatia e déficits locomotores. Sete suínos foram necropsiados. Os achados macroscópicos incluíram áreas pálidas multifocais a coalescentes nos músculos esqueléticos, linfadenomegalia, hepatoesplenomegalia e pulmões não colapsados. Os achados histológicos incluíram linfadenite, hepatite, esplenite granulomatosa e miosite necrosante, assim como pneumonia intersticial linfoplasmocítica. Lesões pulmonares e hepáticas foram ocasionalmente acompanhadas por estruturas parasitárias de T. gondii. A imunomarcação positiva para taquizoítos e bradizoítos encistados de T. gondii foi observada em todos os suínos examinados. PCR-RFLP (11 marcadores) e análise de microssatélites (15 marcadores) identificaram o genótipo não arquetípico #278 em suínos. Este é o primeiro relato de toxoplasmose sistêmica em suínos com lesões musculares e, adicionalmente, demonstra a diversidade de genótipos de T. gondii causadores de doenças circulantes em animais no Brasil.(AU)

Systemic coccidioidomycosis in a dog in Northeastern Brazil / Coccidioidomicose sistêmica em um cão no Nordeste do Brasil

ABSTRACT: We described a case of systemic infection by Coccidioides sp. in a dog. An adult, mixed breed, free-ranging male dog presented with clinical signs that included apathy, cachexia, anorexia, limited mobility with sternal recumbency, bilateral mucopurulent ocular discharge, dyspnoea, pulmonary crepitation, erosive and nodular lesions on the skin, and swelling and stiffness of the left tibiotarsal joint. The dog was submitted to a postmortem examination. Grossly, there were multiple yellow to white nodules in various organs. Histologically, the lesions were characterized as pyogranulomatous inflammation associated with fungal spherules morphologically consistent with Coccidioides sp. The dog was concomitantly diagnosed with undifferentiated sarcoma affecting the skin, lymph nodes, liver, and testicles. The diagnosis of coccidioidomycosis was made based on the histologic changes associated with morphotintorial features and positive immunolabeling of organisms with anti-Coccidioides immunohistochemistry. This case demonstrated that Coccidioides sp. can infect dogs that inhabit urban centers in the semiarid region of Northeastern Brazil, likely due to exposure to dust from contaminated environments.

RESUMO: Descreve-se um caso de infecção sistêmica por Coccidioides em um cão. Um cão adulto, sem raça definida e errante, atendido com sinais clínicos que incluíram apatia, caquexia, anorexia, dificuldade de locomoção com decúbito esternal, secreção ocular bilateral mucopurulenta, dispneia, crepitação pulmonar, lesões erosivas e nodulares na pele, aumento de volume e rigidez na articulação tibiotársica do membro pélvico esquerdo. O cão foi submetido a um exame post-mortem. Macroscopicamente, haviam múltiplos nódulos amarelo-brancacentos em vários órgãos. Histologicamente, as lesões foram caracterizadas por inflamação piogranulomatosa associada a esférulas fúngicas morfologicamente consistentes com Coccidioides sp. O cão foi diagnosticado concomitantemente com sarcoma indiferenciado afetando a pele, linfonodos, fígado e testículos. O diagnóstico de coccidioidomicose foi realizado com base nas alterações histológicas associadas as características morfotintoriais e imunomarcação positiva dos organismos com anti-Coccidioides na imuno-histoquímica. Esse caso demonstra que Coccidioides sp. pode infectar cães que habitam centros urbanos no semiárido do Nordeste do Brasil, provavelmente devido à exposição a poeira de ambientes contaminados.

Systemic coccidioidomycosis in a dog in Northeastern Brazil / Coccidioidomicose sistêmica em um cão no Nordeste do Brasil

We described a case of systemic infection by Coccidioides sp. in a dog. An adult, mixed breed, free-ranging male dog presented with clinical signs that included apathy, cachexia, anorexia, limited mobility with sternal recumbency, bilateral mucopurulent ocular discharge, dyspnoea, pulmonary crepitation, erosive and nodular lesions on the skin, and swelling and stiffness of the left tibiotarsal joint. The dog was submitted to a postmortem examination. Grossly, there were multiple yellow to white nodules in various organs. Histologically, the lesions were characterized as pyogranulomatous inflammation associated with fungal spherules morphologically consistent with Coccidioides sp. The dog was concomitantly diagnosed with undifferentiated sarcoma affecting the skin, lymph nodes, liver, and testicles. The diagnosis of coccidioidomycosis was made based on the histologic changes associated with morphotintorial features and positive immunolabeling of organisms with anti-Coccidioides immunohistochemistry. This case demonstrated that Coccidioides sp. can infect dogs that inhabit urban centers in the semiarid region of Northeastern Brazil, likely due to exposure to dust from contaminated environments.

Descreve-se um caso de infecção sistêmica por Coccidioides em um cão. Um cão adulto, sem raça definida e errante, atendido com sinais clínicos que incluíram apatia, caquexia, anorexia, dificuldade de locomoção com decúbito esternal, secreção ocular bilateral mucopurulenta, dispneia, crepitação pulmonar, lesões erosivas e nodulares na pele, aumento de volume e rigidez na articulação tibiotársica do membro pélvico esquerdo. O cão foi submetido a um exame post-mortem. Macroscopicamente, haviam múltiplos nódulos amarelo-brancacentos em vários órgãos. Histologicamente, as lesões foram caracterizadas por inflamação piogranulomatosa associada a esférulas fúngicas morfologicamente consistentes com Coccidioides sp. O cão foi diagnosticado concomitantemente com sarcoma indiferenciado afetando a pele, linfonodos, fígado e testículos. O diagnóstico de coccidioidomicose foi realizado com base nas alterações histológicas associadas as características morfotintoriais e imunomarcação positiva dos organismos com anti-Coccidioides na imuno-histoquímica. Esse caso demonstra que Coccidioides sp. pode infectar cães que habitam centros urbanos no semiárido do Nordeste do Brasil, provavelmente devido à exposição a poeira de ambientes contaminados.

Influence of euthanasia, the intensity of inflammatory lesion and viral load in the laboratory diagnosis of rabies in cattle

ABSTRACT: This research reports the use of different diagnostic tests in cattle, naturally infected by Rabies lyssavirus (RABV), and correlates the positivity of the tests with the clinical moment of euthanasia, the intensity of the inflammatory lesion and viral load. It also highlights the possibility of euthanasia in early stages of the disease as a way to improve animal welfare. For that, samples of 34 bovine brains were collected for analysis, preserved in 10% buffered formaline and refrigerated with subsequent freezing. The samples were subjected to direct immunofluorescence antibody technique (DFAT) tests, viral isolation in cell culture (VICC), histopathology with hematoxylin and eosin staining (HE), immunohistochemistry (IHC), Shorr stainied neural tissue smears (DSS), Reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and polymerase chain reaction by quantitative reverse transcriptase (qRT-PCR). The areas used for analysis were the cerebellum, parietal telencephalon and thalamus. Samples with Negri bodies (NBs) or immunostaining in at least one of the analyzed areas were considered positive. For the study of the intensity of histological lesions, the lesions were classified into grades 0, 1, 2 and 3 and the positivity of the test in the presence or absence of NBs in one of the three areas analyzed. To verify the influence of the disease clinical evolution, 4-four groups of analysis were created according to the animals clinical status at moment of the euthanasia, being: M1 = animal euthanized while standing, M2 = euthanized when in sternal recumbence, M3 = euthanized when in lateral recumbence, M4 = animal with natural death. Of the 34 brains evaluated, IHC was positive in 100% of cases, DFAT was positive in 97.05% of them, and in this negative sample the presence of RABV was confirmed by VICC. NBs ere seen in 88.23% of the cases, and the DSS test was positive in 82.35% of them. All diagnostic techniques showed positive cases in all groups analyzed. Each case was positive in at least two diagnostic methods. All cases that contained NBs were positive for rabies in the other tests. In this study, it was observed that the variables analyzed (intensity of injury and clinical evolution at the moment of euthanasia) had an influence only on HE and DSS techniques, which are based on NB research to form the diagnosis, but did not interfere with the effectiveness of the diagnosis performed by detecting the viral antigen performed by DFAT and IHC. All isolated RABV samples included in the present study have a genetic lineage characteristic of hematophagous bats Desmodus rotundus. The evaluation of qRT-PCR showed that the amount of virus did not interfere in the positivity of the tests. This work shows that IHC and DFAT are safe diagnostic techniques. They are capable of detecting RABV even in euthanized animals in the early stages of clinical evolution with mild intensities of histological lesions.

RESUMO: Esta pesquisa relata a utilização de diferentes testes de diagnóstico em bovinos, naturalmente infectados pelo Rabies lyssavirus (RABV), e correlaciona a positividade dos testes com o momento clínico da eutanásia, a intensidade da lesão inflamatória, e a carga viral. Salienta também a possibilidade da eutanásia em estágios precoces da doença como forma de melhorar o bem-estar animal. Para isso amostras de 34 encéfalos bovinos foram coletados para análise, conservadas em formol tamponado 10% e sob refrigeração com posterior congelamento. As amostras foram submetidas aos testes de imunofluorescência direta (IFD), isolamento viral em cultivo de células (IVCC), histopatologia com coloração de hematoxilina e eosina (HE), imuno-histoquímica (IHQ), esfregaço direto com coloração de Shorr (EDS), reação da polimerase em cadeia por transcriptase reversa (RT-PCR) e reação da polimerase em cadeia por transcriptase reversa quantitativo (qRT-PCR). As áreas utilizadas para análise foram o cerebelo, telencéfalo parietal e tálamo. Foram consideradas positivas as amostras que apresentaram Corpúsculo de Negri (CNs) ou imuno-marcação em ao menos uma das áreas analisadas. Para o estudo da intensidade das lesões histológicas, as lesões foram classificadas em graus 0, 1, 2 e 3 e a positividade do teste na presença ou ausência de CN em uma das três áreas analisadas. Para verificar a influência da evolução clínica da doença foram criados 4 grupos de análise conforme o estado clínico do animal no momento da eutanásia, sendo: M1 = animal eutanasiado em estação, M2 = eutanasiado em decúbito esternal, M3 = eutanasiado em decúbito lateral, M4 = animal com morte natural. Dos 34 encéfalos avaliados a IHQ foi positiva em 100% dos casos, a IFD foi positiva em 97,05%, sendo que na amostra negativa a presença de RABV foi confirmada por IVCC. A histologia com HE, através da visualização das CNs, foi positiva em 88,23 % dos casos, e o teste de EDS, foi positivo em 82,35%. Todas as técnicas de diagnóstico apresentaram casos positivos em todos os grupos analisados. Cada caso foi positivo em, pelo menos, dois métodos de diagnóstico. Todos os casos que continham CN foram positivos para raiva nos demais testes. Nesse estudo observou-se que as variáveis analisadas intensidade de lesão e evolução clínica no momento da eutanásia tiveram influência somente nas técnicas de HE e EDS, que se baseiam na pesquisa do CN para formação do diagnóstico, mas não interferiram na eficácia do diagnóstico realizado através da detecção do antígeno viral realizado por IFD e IHQ. Todas as amostras RABV isoladas incluídas no presente estudo apresentam linhagem genética característica de morcegos hematófagos Desmodus rotundus. A avaliação de qRT-PCR demostrou que a quantidade de vírus não interferiu na positividade dos testes. Esse trabalho mostra que a IHQ e a IFD são técnicas seguras de diagnóstico e que mesmo em animais eutanasiados em estágios iniciais de evolução clínica com intensidades leve de lesões histológicas, são capazes de detectar o RABV.

Systemic coccidioidomycosis in a dog in Northeastern Brazil / Coccidioidomicose sistêmica em um cão no Nordeste do Brasil

We described a case of systemic infection by Coccidioides sp. in a dog. An adult, mixed breed, free-ranging male dog presented with clinical signs that included apathy, cachexia, anorexia, limited mobility with sternal recumbency, bilateral mucopurulent ocular discharge, dyspnoea, pulmonary crepitation, erosive and nodular lesions on the skin, and swelling and stiffness of the left tibiotarsal joint. The dog was submitted to a postmortem examination. Grossly, there were multiple yellow to white nodules in various organs. Histologically, the lesions were characterized as pyogranulomatous inflammation associated with fungal spherules morphologically consistent with Coccidioides sp. The dog was concomitantly diagnosed with undifferentiated sarcoma affecting the skin, lymph nodes, liver, and testicles. The diagnosis of coccidioidomycosis was made based on the histologic changes associated with morphotintorial features and positive immunolabeling of organisms with anti-Coccidioides immunohistochemistry. This case demonstrated that Coccidioides sp. can infect dogs that inhabit urban centers in the semiarid region of Northeastern Brazil, likely due to exposure to dust from contaminated environments.(AU)

Descreve-se um caso de infecção sistêmica por Coccidioides em um cão. Um cão adulto, sem raça definida e errante, atendido com sinais clínicos que incluíram apatia, caquexia, anorexia, dificuldade de locomoção com decúbito esternal, secreção ocular bilateral mucopurulenta, dispneia, crepitação pulmonar, lesões erosivas e nodulares na pele, aumento de volume e rigidez na articulação tibiotársica do membro pélvico esquerdo. O cão foi submetido a um exame post-mortem. Macroscopicamente, haviam múltiplos nódulos amarelo-brancacentos em vários órgãos. Histologicamente, as lesões foram caracterizadas por inflamação piogranulomatosa associada a esférulas fúngicas morfologicamente consistentes com Coccidioides sp. O cão foi diagnosticado concomitantemente com sarcoma indiferenciado afetando a pele, linfonodos, fígado e testículos. O diagnóstico de coccidioidomicose foi realizado com base nas alterações histológicas associadas as características morfotintoriais e imunomarcação positiva dos organismos com anti-Coccidioides na imuno-histoquímica. Esse caso demonstra que Coccidioides sp. pode infectar cães que habitam centros urbanos no semiárido do Nordeste do Brasil, provavelmente devido à exposição a poeira de ambientes contaminados.(AU)

Helicobacter spp. and gastric lesions association in minipigs / Associação entre Helicobacter spp. e lesões gástricas em minipigs

Due to their similarity to humans, studies regarding gastric ulcers in pigs have become of great interest. It is known that Helicobacter spp. is related to the occurrence of these ulcers, as they possess a high prevalence in pigs. This study aimed to associate gastric lesions findings naturally occurring in minipigs related to or not related to the presence of Helicobacter spp., through the ultra-rapid urease test and immunohistochemical analysis, reaffirming the disease in swine as a natural biomedical model for human cases. For this, samples of formalin-fixed paraffin-embedded gastric tissues from 40 minipigs were obtained at the Laboratório de Morfologia e Patologia Animal (LMPA) in the Universidade Estadual do Norte Fluminense (UENF). Regarding the ultra-rapid urease test, no animal was positive in all regions. However, 18 were positive in at least one: six (15%) were positive in the aglandular region, eight (20%) in the antrum region, 13 (32.5%) in the region of the cardiac gland, and one (2.5%) in the region of the fundic gland. Regarding immunohistochemical analysis, only one animal was positive in all regions, and 32 animals were positive in at least one: four (10%) were positive in the aglandular region, 10 (25%) in the antrum region, 23 (57.5%) in the region of the cardiac gland, and three (7.5%) in the region of the fundic gland. The gastric lesion findings showed a close relationship with Helicobacter spp., enriching the laboratory animal pathologies list. The immunostaining of the bacteria not associated with gastric lesions in certain regions demonstrated the saprophytic and opportunisitic nature of Helicobacter.(AU)

Por sua semelhança com a da espécie humana, a úlcera gástrica nos suínos tem despertado muito interesse. Sabe-se que o Helicobacter spp. está relacionado à ocorrência dessas úlceras, apresentando alta prevalência. Este estudo teve como objetivo associar as lesões gástricas, de ocorrência natural em miniporcos, à presença, ou não, de Helicobacter spp., por meio do teste ultra-rápido da urease e da análise imunohistoquímica, reafirmando a enfermidade em suínos como modelo biomédico natural para os casos em humanos. Para este fim, foram utilizados histossetes de tecido gástrico de 40 minipigs obtidos no Laboratório de Morfologia e Patologia Animal (LMPA) da Universidade Estadual do Norte Fluminense (UENF). Em relação ao teste ultra-rápido da urease, nenhum animal foi positivo em todas as regiões, entretanto, 18 foram positivos em pelo menos uma: seis foram positivos na região aglandular, oito na região do antro, 13 na região das glândulas cárdicas e um na região das glândulas fúndicas. Em relação à análise imuno-histoquímica, somente um animal foi positivo em todas as regiões e 32 animais foram positivos em pelo menos uma: quatro foram positivos na região aglandular, 10 na região do antro, 23 na região das glândulas cárdicas e três na região das glândulas fúndicas. As lesões gástricas demonstraram estreita relação com o Helicobacter spp. em miniporcos, enriquecendo a lista de patologias de animais de laboratório. A imunomarcação da bactéria não associada à lesão, em certas regiões gástricas, demonstra seu caráter saprofítico e oportunista.(AU)

Probiotic supplementation affects IGF-1 and leptin levels in Nile tilapia hepatopancreatic tissue / Suplementação com probiótico afeta os níveis de IGF-1 e leptina no tecido hepatopancreático de tilápias-do-nilo

This work aimed to assess the effect of the probiotic strain, Lactobacillus plantarum, on the levels of leptin, IGF-1 and their receptors on the hepatopancreatic tissues of Nile tilapia (Oreochromis niloticus) and then correlate fish growth performance and gut microbiological parameters. Fish juveniles (±23g) were reared in a recirculation system with constant aeration and temperature (25°C). They were distributed into six polyethylene tanks (45L) and fed twice a day at 5% of the tank biomass with the respective diets: control (commercial diet without probiotic) and supplemented with L. plantarum inoculum (1 x 108 CFU mL-1), both in triplicate. After 30 days of feeding, L. plantarum-fed fishes showed greater weekly growth rate, final weight, and feed conversion rate, in addition to higher count of lactic-acid bacteria and lower count of pathogenic bacteria in the intestinal tract, when compared to the control group. The immunostaining intensity for IGF-1 and leptin hormones was lower after L. plantarum supplementation than in the control group, with no change in the level for receptors. This reduction could implicate important changes in fish metabolism and homeostasis.(AU)

O presente trabalho teve como objetivo avaliar o efeito da cepa probiótica Lactobacillus plantarum sobre os níveis de leptina, IGF-1 e seus receptores no tecido hepatopancreático de tilápia-do-nilo (Oreochromis niloticus) e correlacionar com o desempenho zootécnico e os parâmetros microbiológicos intestinais dos peixes. Juvenis de tilápia-do-nilo (±23g) foram distribuídos em seis tanques de polietileno (45L) conectados a um sistema de recirculação, com aeração e temperatura constantes (25°C). Os peixes foram alimentados duas vezes ao dia, a 5% da biomassa do tanque, com as respectivas dietas: controle (dieta comercial sem probiótico) e suplementada com L. plantarum (1 x 108 UFC mL-1), ambas em triplicata. Após 30 dias de cultivo, os peixes alimentados com L. plantarum apresentaram maiores ganho de peso semanal, peso final e conversão alimentar, bem como maior contagem de bactérias ácido-láticas e menor contagem de bactérias patogênicas no trato intestinal das tilápias alimentadas com dieta probiótica, em comparação ao grupo controle. A intensidade da imunomarcação para os hormônios IGF-1 e leptina foi menor com a suplementação de L. plantarum do que no grupo controle, sem alterar os níveis de seus receptores. Essa redução pode implicar mudanças importantes no metabolismo e na homeostase dos peixes.(AU)

Influence of euthanasia, the intensity of inflammatory lesion and viral load in the laboratory diagnosis of rabies in cattle / Influência da eutanásia, intensidade da lesão inflamatória e carga viral no diagnóstico laboratorial da raiva em bovinos

This research reports the use of different diagnostic tests in cattle, naturally infected by Rabies lyssavirus (RABV), and correlates the positivity of the tests with the clinical moment of euthanasia, the intensity of the inflammatory lesion and viral load. It also highlights the possibility of euthanasia in early stages of the disease as a way to improve animal welfare. For that, samples of 34 bovine brains were collected for analysis, preserved in 10% buffered formaline and refrigerated with subsequent freezing. The samples were subjected to direct immunofluorescence antibody technique (DFAT) tests, viral isolation in cell culture (VICC), histopathology with hematoxylin and eosin staining (HE), immunohistochemistry (IHC), Shorr stainied neural tissue smears (DSS), Reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and polymerase chain reaction by quantitative reverse transcriptase (qRT-PCR). The areas used for analysis were the cerebellum, parietal telencephalon and thalamus. Samples with Negri bodies (NBs) or immunostaining in at least one of the analyzed areas were considered positive. For the study of the intensity of histological lesions, the lesions were classified into grades 0, 1, 2 and 3 and the positivity of the test in the presence or absence of NBs in one of the three areas analyzed. To verify the influence of the disease clinical evolution, 4-four groups of analysis were created according to the animal's clinical status at moment of the euthanasia, being: M1 = animal euthanized while standing, M2 = euthanized when in sternal recumbence, M3 = euthanized when in lateral recumbence, M4 = animal with natural death. Of the 34 brains evaluated, IHC was positive in 100% of cases, DFAT was positive in 97.05% of them, and in this negative sample the presence of RABV was confirmed by VICC. NBs ere seen in 88.23% of the cases, and the DSS test was positive in 82.35% of them.(AU)

Esta pesquisa relata a utilização de diferentes testes de diagnóstico em bovinos, naturalmente infectados pelo Rabies lyssavirus (RABV), e correlaciona a positividade dos testes com o momento clínico da eutanásia, a intensidade da lesão inflamatória, e a carga viral. Salienta também a possibilidade da eutanásia em estágios precoces da doença como forma de melhorar o bem-estar animal. Para isso amostras de 34 encéfalos bovinos foram coletados para análise, conservadas em formol tamponado 10% e sob refrigeração com posterior congelamento. As amostras foram submetidas aos testes de imunofluorescência direta (IFD), isolamento viral em cultivo de células (IVCC), histopatologia com coloração de hematoxilina e eosina (HE), imuno-histoquímica (IHQ), esfregaço direto com coloração de Shorr (EDS), reação da polimerase em cadeia por transcriptase reversa (RT-PCR) e reação da polimerase em cadeia por transcriptase reversa quantitativo (qRT-PCR). As áreas utilizadas para análise foram o cerebelo, telencéfalo parietal e tálamo. Foram consideradas positivas as amostras que apresentaram Corpúsculo de Negri (CNs) ou imuno-marcação em ao menos uma das áreas analisadas. Para o estudo da intensidade das lesões histológicas, as lesões foram classificadas em graus 0, 1, 2 e 3 e a positividade do teste na presença ou ausência de CN em uma das três áreas analisadas.(AU)

Diminuição do índice de necrose em enxertos cutâneos em coelhos mediante a aplicação de células tronco mesenquimais xenógenas / Reducing of the necrosis index in skin grafts in rabbits through application of xenogenous mesenchymal stem cells

O presente estudo teve como objetivo avaliar a inflamação em auto-enxertos cutâneos obtidos no terceiro, sétimo e décimo quarto dia de pós-operatório, além disso, buscou-se determinar diferenças no processo de cicatrização no grupo tratado com células tronco mesenquimais xenógenas em relação ao grupo controle utilizando a avaliação microscópica e imuno-histoquímico. A avaliação microscópica foi realizada utilizando cortes histológicos corados pela técnica de histoquímica com hematoxilina-eosina (HE), e a imuno-histoquímica, com cortes submetidos a anticorpos específicos. As variáveis analisadas foram quantidade de vasos, células inflamatórias, COX-2, Macrófagos e presença de necrose. Os dados foram analisados estatisticamente pelo software R. A quantidade de vasos foi maior (p<0,0001) no grupo tratamento (GT) durante o dia 3, enquanto no grupo controle (GC) foi maior no dia 7. No dia 3 houve menor porcentagem de necrose no grupo tratamento (GT) (p = 0,038). Nos demais dias avaliados não houve diferença entre a porcentagem de necrose observada nos dois tratamentos (p = 0,98), sendo de 53% para o grupo controle (GC) e 47% para o grupo tratamento (GT). Em relação ao número de macrófagos não houve diferença entre os grupos (p = 0,5637). Entretanto, entre os dias houve diferença significativa (p = 0,0223), sendo menor número de macrófagos no terceiro dia. A imunomarcação de COX-2 foi similar entre os grupos (p = 0,5637) e entre os dias (p = 0,9843). Portanto, o emprego das células tronco mesenquimais xenógenas em enxertos cutâneos promoveu menor ocorrência de necrose, favorecendo sua cicatrização, e não induziu o processo inflamatório, sendo assim factível seu uso em cirurgias reconstrutivas.

The present study aimed to assess inflammation in skin autografts obtained on the third, seventh and fourteenth postoperative day, in addition, it sought to determine differences in the healing process in the group treated with xenogenous mesenchymal stem cells in relation to to the control group using microscopic and immunohistochemical evaluation. Microscopic evaluation was performed using histological sections, stained by the hematoxylin-eosin (HE) histochemistry technique, and immunohistochemistry with sections were subjected to specific antibodies. The variables analyzed were the number of vessels, inflammatory cells (COX-2 and Macrophages) and the presence of necrosis. The data were analyzed statistically by software R. The number of vessels was higher (p< 0.0001) ) in the treatment group (GT) during day 3, while in the control group (CG) it was higher on day 7. On day 3 there was a lower percentage of necrosis in the treatment group (GT) (p = 0.038). On the other evaluated days, there was no difference between the percentage of necrosis observed in the two treatments (p = 0.98), being 53% for the control group (CG) and 47% for the treatment group (GT). Regarding the number of macrophages, there was no difference between groups (p = 0.5637). However, between days there was a significant difference (p = 0.0223), with a lower number of macrophages on the third day. The immunostaining of COX-2 was similar between groups (p = 0.5637) and between days (p = 0.9843). Therefore, the use of xenogenous mesenchymal stem cells in skin grafts promoted a lower occurrence of necrosis, favoring its healing, and did not induce the inflammatory process, thus making its use in reconstructive surgery feasible.

Influence of euthanasia, the intensity of inflammatory lesion and viral load in the laboratory diagnosis of rabies in cattle / Influência da eutanásia, intensidade da lesão inflamatória e carga viral no diagnóstico laboratorial da raiva em bovinos

This research reports the use of different diagnostic tests in cattle, naturally infected by Rabies lyssavirus (RABV), and correlates the positivity of the tests with the clinical moment of euthanasia, the intensity of the inflammatory lesion and viral load. It also highlights the possibility of euthanasia in early stages of the disease as a way to improve animal welfare. For that, samples of 34 bovine brains were collected for analysis, preserved in 10% buffered formaline and refrigerated with subsequent freezing. The samples were subjected to direct immunofluorescence antibody technique (DFAT) tests, viral isolation in cell culture (VICC), histopathology with hematoxylin and eosin staining (HE), immunohistochemistry (IHC), Shorr stainied neural tissue smears (DSS), Reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and polymerase chain reaction by quantitative reverse transcriptase (qRT-PCR). The areas used for analysis were the cerebellum, parietal telencephalon and thalamus. Samples with Negri bodies (NBs) or immunostaining in at least one of the analyzed areas were considered positive. For the study of the intensity of histological lesions, the lesions were classified into grades 0, 1, 2 and 3 and the positivity of the test in the presence or absence of NBs in one of the three areas analyzed. To verify the influence of the disease clinical evolution, 4-four groups of analysis were created according to the animal's clinical status at moment of the euthanasia, being: M1 = animal euthanized while standing, M2 = euthanized when in sternal recumbence, M3 = euthanized when in lateral recumbence, M4 = animal with natural death. Of the 34 brains evaluated, IHC was positive in 100% of cases, DFAT was positive in 97.05% of them, and in this negative sample the presence of RABV was confirmed by VICC. NBs ere seen in 88.23% of the cases, and the DSS test was positive in 82.35% of them. All diagnostic techniques showed positive cases in all groups analyzed. Each case was positive in at least two diagnostic methods. All cases that contained NBs were positive for rabies in the other tests. In this study, it was observed that the variables analyzed (intensity of injury and clinical evolution at the moment of euthanasia) had an influence only on HE and DSS techniques, which are based on NB research to form the diagnosis, but did not interfere with the effectiveness of the diagnosis performed by detecting the viral antigen performed by DFAT and IHC. All isolated RABV samples included in the present study have a genetic lineage characteristic of hematophagous bats Desmodus rotundus. The evaluation of qRT-PCR showed that the amount of virus did not interfere in the positivity of the tests. This work shows that IHC and DFAT are safe diagnostic techniques. They are capable of detecting RABV even in euthanized animals in the early stages of clinical evolution with mild intensities of histological lesions.(AU)

Esta pesquisa relata a utilização de diferentes testes de diagnóstico em bovinos, naturalmente infectados pelo Rabies lyssavirus (RABV), e correlaciona a positividade dos testes com o momento clínico da eutanásia, a intensidade da lesão inflamatória, e a carga viral. Salienta também a possibilidade da eutanásia em estágios precoces da doença como forma de melhorar o bem-estar animal. Para isso amostras de 34 encéfalos bovinos foram coletados para análise, conservadas em formol tamponado 10% e sob refrigeração com posterior congelamento. As amostras foram submetidas aos testes de imunofluorescência direta (IFD), isolamento viral em cultivo de células (IVCC), histopatologia com coloração de hematoxilina e eosina (HE), imuno-histoquímica (IHQ), esfregaço direto com coloração de Shorr (EDS), reação da polimerase em cadeia por transcriptase reversa (RT-PCR) e reação da polimerase em cadeia por transcriptase reversa quantitativo (qRT-PCR). As áreas utilizadas para análise foram o cerebelo, telencéfalo parietal e tálamo. Foram consideradas positivas as amostras que apresentaram Corpúsculo de Negri (CNs) ou imuno-marcação em ao menos uma das áreas analisadas. Para o estudo da intensidade das lesões histológicas, as lesões foram classificadas em graus 0, 1, 2 e 3 e a positividade do teste na presença ou ausência de CN em uma das três áreas analisadas. Para verificar a influência da evolução clínica da doença foram criados 4 grupos de análise conforme o estado clínico do animal no momento da eutanásia, sendo: M1 = animal eutanasiado em estação, M2 = eutanasiado em decúbito esternal, M3 = eutanasiado em decúbito lateral, M4 = animal com morte natural. Dos 34 encéfalos avaliados a IHQ foi positiva em 100% dos casos, a IFD foi positiva em 97,05%, sendo que na amostra negativa a presença de RABV foi confirmada por IVCC. A histologia com HE, através da visualização das CNs, foi positiva em 88,23 % dos casos, e o teste de EDS, foi positivo em 82,35%. Todas as técnicas de diagnóstico apresentaram casos positivos em todos os grupos analisados. Cada caso foi positivo em, pelo menos, dois métodos de diagnóstico. Todos os casos que continham CN foram positivos para raiva nos demais testes. Nesse estudo observou-se que as variáveis analisadas intensidade de lesão e evolução clínica no momento da eutanásia tiveram influência somente nas técnicas de HE e EDS, que se baseiam na pesquisa do CN para formação do diagnóstico, mas não interferiram na eficácia do diagnóstico realizado através da detecção do antígeno viral realizado por IFD e IHQ. Todas as amostras RABV isoladas incluídas no presente estudo apresentam linhagem genética característica de morcegos hematófagos Desmodus rotundus. A avaliação de qRT-PCR demostrou que a quantidade de vírus não interferiu na positividade dos testes. Esse trabalho mostra que a IHQ e a IFD são técnicas seguras de diagnóstico e que mesmo em animais eutanasiados em estágios iniciais de evolução clínica com intensidades leve de lesões histológicas, são capazes de detectar o RABV.(AU)

Diminuição do índice de necrose em enxertos cutâneos em coelhos mediante a aplicação de células tronco mesenquimais xenógenas / Reducing of the necrosis index in skin grafts in rabbits through application of xenogenous mesenchymal stem cells

O presente estudo teve como objetivo avaliar a inflamação em auto-enxertos cutâneos obtidos no terceiro, sétimo e décimo quarto dia de pós-operatório, além disso, buscou-se determinar diferenças no processo de cicatrização no grupo tratado com células tronco mesenquimais xenógenas em relação ao grupo controle utilizando a avaliação microscópica e imuno-histoquímico. A avaliação microscópica foi realizada utilizando cortes histológicos corados pela técnica de histoquímica com hematoxilina-eosina (HE), e a imuno-histoquímica, com cortes submetidos a anticorpos específicos. As variáveis analisadas foram quantidade de vasos, células inflamatórias, COX-2, Macrófagos e presença de necrose. Os dados foram analisados estatisticamente pelo software R. A quantidade de vasos foi maior (p<0,0001) no grupo tratamento (GT) durante o dia 3, enquanto no grupo controle (GC) foi maior no dia 7. No dia 3 houve menor porcentagem de necrose no grupo tratamento (GT) (p = 0,038). Nos demais dias avaliados não houve diferença entre a porcentagem de necrose observada nos dois tratamentos (p = 0,98), sendo de 53% para o grupo controle (GC) e 47% para o grupo tratamento (GT). Em relação ao número de macrófagos não houve diferença entre os grupos (p = 0,5637). Entretanto, entre os dias houve diferença significativa (p = 0,0223), sendo menor número de macrófagos no terceiro dia. A imunomarcação de COX-2 foi similar entre os grupos (p = 0,5637) e entre os dias (p = 0,9843). Portanto, o emprego das células tronco mesenquimais xenógenas em enxertos cutâneos promoveu menor ocorrência de necrose, favorecendo sua cicatrização, e não induziu o processo inflamatório, sendo assim factível seu uso em cirurgias reconstrutivas.(AU)

The present study aimed to assess inflammation in skin autografts obtained on the third, seventh and fourteenth postoperative day, in addition, it sought to determine differences in the healing process in the group treated with xenogenous mesenchymal stem cells in relation to to the control group using microscopic and immunohistochemical evaluation. Microscopic evaluation was performed using histological sections, stained by the hematoxylin-eosin (HE) histochemistry technique, and immunohistochemistry with sections were subjected to specific antibodies. The variables analyzed were the number of vessels, inflammatory cells (COX-2 and Macrophages) and the presence of necrosis. The data were analyzed statistically by software R. The number of vessels was higher (p< 0.0001) ) in the treatment group (GT) during day 3, while in the control group (CG) it was higher on day 7. On day 3 there was a lower percentage of necrosis in the treatment group (GT) (p = 0.038). On the other evaluated days, there was no difference between the percentage of necrosis observed in the two treatments (p = 0.98), being 53% for the control group (CG) and 47% for the treatment group (GT). Regarding the number of macrophages, there was no difference between groups (p = 0.5637). However, between days there was a significant difference (p = 0.0223), with a lower number of macrophages on the third day. The immunostaining of COX-2 was similar between groups (p = 0.5637) and between days (p = 0.9843). Therefore, the use of xenogenous mesenchymal stem cells in skin grafts promoted a lower occurrence of necrosis, favoring its healing, and did not induce the inflammatory process, thus making its use in reconstructive surgery feasible.(AU)

Immunoexpression of metalloproteinases 9 (MMP-9) and 2 (MMP-2) and their inhibitors (TIMP-1 and TIMP-2) in normal and neoplastic canine mammary tissue / Imunomarcação de metaloproteinases 9 (MMP-9) e 2 (MMP-2) e seus inibidores (TIMP-1) e (TIMP-2) no tecido mamário canino e neoplásico

The aim of this study was to perform the immunostaining of MMP-9 and MMP-2 and its inhibitors, TIMP-1 and TIMP-2, on normal and neoplastic canine mammary tissue in order to evaluate the behavior of these proteins in extracellular matrix (ECM) remodeling in different neoplastic mammary types. Thus, 48 samples of canine mammary tissue were analyzed, 14 of which complex carcinomas, 13 tubulopapillary carcinomas, six single adenomas and 15 normal mammary tissue. There were differences in MMP-9, TIMP-1 and TIMP-2 according to mammary histomorphology, and MMP-9 presented increased immunoexpression in epithelial and stromal cells in tubulopapillary and complex carcinomas. TIMP-1 exhibited reduced immunostaining in the stromal cells of the complex carcinomas and TIMP-2 enhanced immunostaining in the epithelial cells of tubulopapillary carcinomas. There was a positive correlation between MMP-9 and TIMP-1 in epithelial and stromal cells regarding immunostaining intensity and number of labeled cells in the normal breast. There was a positive correlation between MMP-9 and TIMP-2 in the epithelial cells of tubulopapillary carcinomas. It is concluded that balanced activity between MMP-9, MMP-2, TIMP-1 and TIMP-2 maintains normal canine mammary tissue homeostasis while increased immunoexpression of MMP-9 and TIMP-2 and reduced TIMP- 1 in carcinomas suggest a favorable condition for tumor evolution.

Este estudo teve como objetivo realizar a imunomarcação de MMP-9 e MMP-2 e seus inibidores, TIMP-1 e TIMP-2, no tecido mamário canino normal e neoplásico, a fim de avaliar o comportamento dessas proteínas no remodelamento da matriz extracelular (MEC) em diferentes tipos neoplásicos mamários. Foram analisadas 48 amostras de tecido mamário canino, sendo 14 carcinomas complexos, 13 carcinomas tubulopapilares, seis de adenomas simples e 15 mamas sem alterações. Houve diferença em MMP-9, TIMP-1 e TIMP-2 de acordo com a histomorfologia mamária, sendo que MMP-9 apresentou maior imunoexpressão em células epiteliais e estromais em carcinomas tubulopapilares e complexos. TIMP-1 exibiu menor imunomarcação nas células estromais dos carcinomas complexos e TIMP-2 maior imunomarcação nas células epiteliais dos carcinomas tubulopapilares. Houve correlação positiva entre MMP-9 e TIMP-1 nas células epiteliais e estromais quanto à intensidade de imunomarcação e número de células marcadas na mama normal. Houve correlação positiva entre MMP-9 e TIMP-2 nas células epiteliais dos carcinomas tubulopapilares. Conclui-se que a atividade equilibrada entre MMP-9, MMP-2, TIMP-1 e TIMP-2 mantém a homeostase do tecido mamário canino normal enquanto a imunoexpressão aumentada de MMP-9 e TIMP-2 e a imunoexpressão reduzida de TIMP-1 nos carcinomas sugere condição propícia à evolução tumoral.