Atividade dos desinfetantes cloreto de benzalcônio e iodóforo sobre cepas de Escherichia coli patogênica aviária isoladas em frangos de corte / Activity of the disinfectants benzalkonium chloride and iodophor on “Escherichia coli” avianpathogenic strains isolated in broilers

Os objetivos deste estudo foram avaliar a eficácia dos desinfetantes cloreto de benzalcônio (QAC) e iodóforo (I) sobre 10 cepas APEC (Escherichia coli patogênica aviária), bem como verificar se a característica alta patogenicidade está associada a uma maior resistência a estes compostos. O método utilizado foi o de diluição através do teste qualitativo de suspensão. As variáveis estudadas foram: concentrações do QAC (300, 150, 75 e 50 ppm) e do I (100, 75, 50 e 25 ppm), tempos de contato (5, 10 e 20 minutos) e temperatura ±20°C. O QAC inativou todos os isolados nas concentrações de 300 e 150 ppm, em todos os tempos de contato, porém a 75 e 50 ppm no tempo de 5 minutos o desinfetante não foi eficaz para uma e quatro amostras, respectivamente. O I a 100 e 75 ppm inativou os isolados em todos os tempos avaliados, mas a 50 ppm um foi resistente e a 25 ppm oito foram resistentes em todos os tempos de exposição. A característica alta patogenicidade não pareceu promover resistência, quando comparado com a cepa padrão. Concluiu-se, nas condições do experimento, que os dois desinfetantes podem ser usados em procedimentos de higiene frente às cepas APEC, apenas levando-se em consideração a concentração de uso e o tempo de contato.(AU)

The objectives of this study were to evaluate the effectiveness of the disinfectant benzalkonium chloride (QAC) and iodophor (I) on 10 strains APEC (Escherichia coli pathogenic avian) and verify that the high feature pathogenicity provides protection factor against these compounds. The method used was the dilution by the qualitative suspension test. The variables studied were: the concentrations of QAC (300, 150, 75 and 50 ppm) and I (100, 75, 50 and 25 ppm), contact times (5, 10 and 20 minutes) and room temperature (20°C). The QAC inactivated all strains at concentrations of 300 and 150 ppm at all contact times, but at 75 and 50 ppm in time of 5 minutes was not effective disinfectant for one and four APEC strains, respectively. The I 100 and 75 ppm inactivated isolates in all time periods, but 50 ppm one was tough and 25ppm eight were resistant in all exposure times. The highly pathogenic feature does not appear to promote resistance when compared with the standard strain. It was concluded, under the experimental conditions, the two disinfectants can be used in front of the hygiene procedures APEC strains, only taking into account the use concentration and contact time.(AU)

Atividade dos desinfetantes cloreto de benzalcônio e iodóforo sobre cepas de Escherichia coli patogênica aviária isoladas em frangos de corte / Activity of the disinfectants benzalkonium chloride and iodophor on “Escherichia coli” avianpathogenic strains isolated in broilers

Os objetivos deste estudo foram avaliar a eficácia dos desinfetantes cloreto de benzalcônio (QAC) e iodóforo (I) sobre 10 cepas APEC (Escherichia coli patogênica aviária), bem como verificar se a característica alta patogenicidade está associada a uma maior resistência a estes compostos. O método utilizado foi o de diluição através do teste qualitativo de suspensão. As variáveis estudadas foram: concentrações do QAC (300, 150, 75 e 50 ppm) e do I (100, 75, 50 e 25 ppm), tempos de contato (5, 10 e 20 minutos) e temperatura ±20°C. O QAC inativou todos os isolados nas concentrações de 300 e 150 ppm, em todos os tempos de contato, porém a 75 e 50 ppm no tempo de 5 minutos o desinfetante não foi eficaz para uma e quatro amostras, respectivamente. O I a 100 e 75 ppm inativou os isolados em todos os tempos avaliados, mas a 50 ppm um foi resistente e a 25 ppm oito foram resistentes em todos os tempos de exposição. A característica alta patogenicidade não pareceu promover resistência, quando comparado com a cepa padrão. Concluiu-se, nas condições do experimento, que os dois desinfetantes podem ser usados em procedimentos de higiene frente às cepas APEC, apenas levando-se em consideração a concentração de uso e o tempo de contato.

The objectives of this study were to evaluate the effectiveness of the disinfectant benzalkonium chloride (QAC) and iodophor (I) on 10 strains APEC (Escherichia coli pathogenic avian) and verify that the high feature pathogenicity provides protection factor against these compounds. The method used was the dilution by the qualitative suspension test. The variables studied were: the concentrations of QAC (300, 150, 75 and 50 ppm) and I (100, 75, 50 and 25 ppm), contact times (5, 10 and 20 minutes) and room temperature (20°C). The QAC inactivated all strains at concentrations of 300 and 150 ppm at all contact times, but at 75 and 50 ppm in time of 5 minutes was not effective disinfectant for one and four APEC strains, respectively. The I 100 and 75 ppm inactivated isolates in all time periods, but 50 ppm one was tough and 25ppm eight were resistant in all exposure times. The highly pathogenic feature does not appear to promote resistance when compared with the standard strain. It was concluded, under the experimental conditions, the two disinfectants can be used in front of the hygiene procedures APEC strains, only taking into account the use concentration and contact time.

Micro-organismos isolados em superfícies de mesas de exames e procedimentos descontaminadas de hospital veterinário e a inativação in vitro por desinfetantes / Microorganismos aislados en superficies de mesas de exámenes y procedimientos descontaminadas de hospital veterinario, y su inactivación in vitro por desinfectantes / Microorganisms isolated from decontaminated surfaces of exam and procedure tables of veterinary hospital and their in vitro inactivation by disinfectants

Superfícies fixas de hospitais e clínicas veterinárias podem servir como locais de infecção para micro-organismos, muitos potencialmente patogênicos comuns entre animais e seres humanos, promovendo riscos para a saúde tanto dos pacientes quanto dos profissionais veterinários. O presente estudo teve como objetivos isolar e identificar a microbiota presente em superfícies inox de mesas de exames e procedimentos de áreas do setor de pequenos animais de um hospital veterinário de ensino, sobre as quais rotineiramente é procedida a descontaminação (desinfecção sem prévia limpeza), e verificar in vitro a capacidade de inativação microbiana dos grupos químicos desinfetantes ácido peracético, iodóforo, hipoclorito de sódio, quaternário de amônio, fenol sintético, clorhexidina e álcool. Quinze coletas, em três dias de meses diferentes, procederam-se com swabs rolados sobre as superfícies, de onde foram isolados Staphylococcus spp. coagulase (+) e (-), Sphingomonas paucimobilis, Streptococcus spp. (não grupo D), Enterobacter spp., Acinetobacter Iwoffii, Bacillus cereus, Pseudomonas spp., Micrococcus spp., Enterococcus spp., Cocobacilo não fermentador, Bacillus spp., Citrobacter spp. e Candida guilliermondii. O método da avaliação desinfetante foi o de diluição, pela técnica de suspensão microbiana, composta por três pools de bactérias (um por dia de coleta) e uma cultura de levedura, em três concentrações dos desinfetantes nos tempos de contato 1, 5 e 10 minutos. Observou-se que todos os desinfetantes inativaram todos os micro-organismos, tendo quaternário de amônio, fenol sintético, clorhexidina e álcool inativado nas menores concentrações e tempos de contato testados. Concluiu-se que nas superfícies das mesas de todos os ambientes puderam ser isolados micro-organismos, muitos destes de importância à saúde humana e animal; os testes in vitro evidenciaram que todos os grupos químicos avaliados podem ser usados no procedimento de desinfecção para inativar os isolados; a descontaminação, adotada como único procedimento de higienização de rotina nas superfícies onde os veterinários e seus pacientes entram em contato, pareceu não ser segura para proteger a saúde dos animais e dos profissionais de saúde animal.

Inanimate surfaces of hospitals and veterinary clinics can be a source of infection by microorganisms, many potentially pathogenic common between animals and humans, promoting the health risks of both patients and veterinary professionals. The aims of the present study were to isolate and identify the microbiota found on stainless steel surfaces of exam and procedure tables of the small animal ward of a veterinary teaching hospital, on which decontamination (disinfection without prior cleaning) is carried out on a routine basis, and to check in vitro inactivation by chemical disinfectants. Fifteen collections in three days of different months, we proceeded with swabs rolled over the surfaces of which were isolated coagulase-positive and coagulase-negative Staphylococcus spp., Sphingomonas paucimobilis, (non-group D) Streptococcus spp., Enterobacter spp., Acinetobacter Iwoffii, Bacillus cereus, Pseudomonas spp., Micrococcus spp., Enterococcus spp., non-fermenting coccobacilli, Bacillus spp., Citrobacter spp. and Candida guilliermondii. The inactivation capacity of peracetic acid, iodophor, sodium hypochlorite, quaternary ammonium, synthetic phenol, chlorhexidine and alcohol was assessed. The dilution method by microbial suspension test was performed using an experimental design consisting of three pools of bacteria (one per collection day) and a yeast culture at three disinfectant concentrations at 1, 5 and 10 minutes. All disinfectants inactivate all microorganisms, with quaternary ammonium, synthetic phenol, chlorhexidine and alcohol inactivated at lower concentration and contact times. It may be concluded that microorganisms - many of them deleterious to human and animal health - could be isolated from all of the sampled surfaces; the in vitro tests showed that all of the assessed chemicals can be used to inactivate the isolates; decontamination, as a unique hygiene routine procedure used on surfaces in direct contact with health professionals and patients, did not seem to safely protect the health of animals and health professionals.

Superficies fijas de hospitales y clínicas veterinarias pueden servir de fuente de infección por microorganismos, muchos potencialmente patogénicos comunes entre animales y seres humanos, promoviendo riesgos para la salud tanto de los pacientes como de los profesionales veterinarios. El presente estudio tuvo como objetivos aislar e identificar la microbiota presente en superficies inox de mesas de exámenes y procedimientos de áreas del sector de pequeños animales de un hospital veterinario de enseñanza, sobre las cuales rutinariamente es procedida la descontaminación (desinfección sin previa limpieza), y verificar in vitro la capacidad de inactivación microbiana de los grupos químicos desinfectantes ácido peracético, yodóforo, hipoclorito de sodio, cuaternario de amonio, fenol sintético, clorhexidina y alcohol. Fueron realizadas quince colectas, en tres días de meses diferentes, con swabs rodados sobre las superficies, de donde fueron aislados Staphylococcus spp. coagulasa (+) y (-), Sphingomonas paucimobilis, Streptococcus spp. (no grupo D), Enterobacter spp., Acinetobacter Iwoffii, Bacillus cereus, Pseudomonas spp., Micrococcus spp., Enterococcus spp., Cocobacilo no fermentador, Bacillus spp., Citrobacter spp. y Candida guilliermondii. El método de la evaluación desinfectante fue el de dilución, por la técnica de suspensión microbiana, compuesta por tres pools de bacterias (uno por día de colecta) e una cultura de levadura, en tres concentraciones de los desinfectantes en los tiempos de contacto 1, 5 y 10 minutos. Fue observado que todos los desinfectantes inactivaron todos los microorganismos, teniendo el cuaternario de amonio, fenol sintético, clorhexidina y alcohol inactivado con las menores concentraciones y tiempos de contacto. Se concluye que en las superficies de las mesas de todos los ambientes pudieron aislarse microorganismos, muchos de los cuales de importancia para la salud humana y animal; las pruebas in vitro evidenciaron que todos los grupos químicos evaluados pueden ser usados en el procedimiento desinfección para inactivar los aislados; la descontaminación, adoptada como único procedimiento de higienización de rutina en las superficies donde los veterinarios y sus pacientes entran en contacto, pareció no ser seguro para proteger la salud de los animales y de los profesionales de salud animal.

ATIVIDADE ANTIBACTERIANA DE ANTIBIÓTICOS, DE DESINFETANTES E DE EXTRAÇÕES VEGETAIS SOBRE SALMONELLA PADRÃO E SALMONELAS ISOLADAS EM PRODUTOS DE ORIGEM ANIMAL

O gênero Salmonella constitui um problema para a saúde animal e humana. Com a finalidade de evitar a ocorrência da transmissão deste microrganismo e a interrupção da doença provocada por eles, deve-se utilizar desinfetantes e antibióticos. A exposição continuada a estes agentes pode resultar no surgimento de resistência microbiana. Tendo em vista este fenômeno, a pesquisa por novos agentes antimicrobianos a partir de extratos vegetais se faz necessária, pois existe a possibilidade de se encontrar substâncias eficazes contra a resistência de micro-organismos já disseminados no ambiente. Os objetivos deste estudo foram: monitorar a resistência das 134 amostras de Salmonella isoladas em produtos de origem animal frente a antibióticos comumente utilizados na rotina veterinária; testar a atividade dos desinfetantes frente às Salmonellas resistentes; testar a hipótese de resistência cruzada entre grupos antibióticos e desinfetantes; avaliar a atividade bactericida de extratos de plantas medicinais nativas no Rio Grande do Sul sobre salmonelas padrão; avaliar a atividade antibacteriana do macerado hidroalcoólico de Achyrocline satureioides frente às salmonelas resistentes; fazer prospecção fitoquímica do macerado hidroalcoólico e do decocto de Achyrocline satureioides, Realizou-se o teste de sensibilidade a antibióticos frente a 134 amostras de Salmonella spp. isoladas em produtos de origem animal. Cinquenta e uma (51) salmonelas foram resistentes a pelo menos um antibiótico. Após, utilizou-se o teste de suspensão da avaliação quantitativa da atividade bactericida de desinfetantes. Foram testados os desinfetantes cloreto de cetil trimetilamônio (amônia quaternária), digluconato de clorexidina (clorexidina), hipoclorito de sódio e iodóforo, em quatro concentrações frente salmonelas resistentes, nos tempos 5, 15 e 60 minutos, densidade populacional 107 UFC/ mL. O iodóforo e o hipoclorito de sódio inativaram os isolados na maior parte dos experimentos. Porém, cloreto de cetil trimetilamônio (amônia quaternária) e digluconato de clorexidina (clorexidina) mesmo nas maiores concentrações do desinfetante, houveram micro-organismos resistentes. Pode-se perceber que não houveram relações concomitantes de resistência entre antibióticos e desinfetantes, levando-se em consideração todas as variáveis testadas. Na triagem inicial da atividade antibacteriana das plantas medicinais, utilizou-se a proporção de 10 g de planta para 100 mL do líquido extrator, em 8 e 24 horas, densidade populacional de Salmonella Choleraesuis (ATCC 10.708) 107, 106 e 105 UFC/ mL e formas decocção e maceração hidroalcoólica das plantas Achyrocline satureioides, Bidens pilosa, Conyza bonariensis, Jacaranda micrantha, Myrciaria cuspidata e Smilax cognata. A. satureioides, como macerado hidroalcoólico apresentou inativação nos tempos 8 e 24 horas, mostrando maior redução logarítmica. A. satureioides no macerado hidroalcoólico foi testada frente a 51 salmonelas resistentes. Observou-se que quanto maior o tempo de contato, nas menores densidades populacionais, maior foi o número de inativações. A atividade antibactericida do macerado hidroalcoólico de A. satureioides sugere o seu uso como ingrediente antisséptico em pomadas para uso animal ou humano, ou ser empregado na imersão de utensílios e partes removíveis de maquinários das indústrias alimentícias, frigoríficos, tendo como objetivo promover a desinfecção destes insumos. A prospecção fitoquímica realizada com o decocto e com o macerado hidroalcoólico de A. satureioides detectou a presença de compostos fenólicos, taninos hidrolisáveis e condensados, flavonóis e saponinas. O decocto de A. satureioides, diferentemente do macerado hidroalcoólico, não apresentou taninos hidrolisáveis e saponinas

The genus Salmonella constitutes a problem for animal and human health. In order to prevent the transmission of this organism and the interruption of the disease caused by them, you should use disinfectants and antibiotics. Continued exposure to these agents can result in the emergence of microbial resistance. In view of this phenomenon, the search for new antimicrobials from plant extracts is necessary, because there is a possibility to find effective substances against the resistance of microorganisms already disseminated in the environment. The objectives of this study were: to monitor the resistance of 134 samples of Salmonella isolated in products of animal origin in front of antibiotics commonly used in veterinary routine; test the activity of disinfectants against the salmonellas resistant; test the hypothesis of cross-resistance between antibiotics and disinfectants; evaluate the bactericidal activity of extracts of medicinal plants native to the Rio Grande do Sul on Salmonella standard; evaluate the antibacterial activity of hydroalcoholic macerate to Achyrocline satureioides to Salmonella resistant; do the hydroalcoholic macerate phytochemical prospecting and to Achyrocline satureioides vegetable water, antibiotic sensitivity testing in front of 134 samples of Salmonella spp. isolated in products of animal origin. Fifty-one (51) Salmonella were resistant to at least one antibiotic. After, we used the suspension test of quantitative evaluation of bactericidal activity of disinfectants. Have been tested the disinfectants cetyl trimetilamônio chloride (quaternary ammonia), chlorhexidine digluconate (chlorhexidine), sodium hypochlorite, iodophor in four concentrations Salmonella resistant front, 5 times, 15 and 60 minutes, population density 107 CFU/ mL. The iodophor and sodium hypochlorite inactivated isolates in most experiments. However, cetyl trimetilamônio chloride (quaternary ammonia) and chlorhexidine digluconate (chlorhexidine) even in the largest concentrations of disinfectant, there were resistant microorganisms. One can notice that there were no concurrent relationships of resistance between antibiotics and disinfectants, taking into account all the variables tested. In the initial screening of antibacterial activity of medicinal plants, the proportion of 10 g of plant for 100 mL of liquid Extractor, in 8 and 12:00 hour, population density of Salmonella Choleraesuis (ATCC 10,708) 107, 106 and 105 CFU/ mL decoction and hydroalcoholic maceration and the plants Achyrocline satureioides, Bidens pilosa, Conyza bonariensis, Jacaranda micrantha, Myrciaria cuspidata and Smilax cognate. A. satureioides hydroalcoholic macerate as presented 8 and 12 hour in inactivation, showing greater logarithmic reduction. A. satureioides in hydroalcoholic macerate has been tested in front of Salmonella resistant 51. It was observed that the longer the time of contact, the smallest population densities, higher number of inactivation. The antibacterial activity of hydroalcoholic macerate of A. satureioides suggests its use as an antiseptic ingredient in ointments for human or animal use, or be employed in the immersion of utensils and removable parts of machinery of food industries, refrigerators, aiming to promote the disinfection of these inputs. The phytochemical held prospecting with the vegetable water and hydroalcoholic macerate of A. satureioides detected the presence of phenolic compounds, hydrolysable and condensed tannins, flavonols and saponins. The vegetable water of A. satureioides, unlike the hydroalcoholic macerate, hydrolysable tannins and failed to provide saponins.

Avaliação da oleuropeína e de sanitizantes químicos, isolados ou associados, para eliminação de biofilmes de Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes e Escherichia coli em superfícies inertes

Este estudo avaliou a eficiência da oleuropeína (OLE) (composto fenólico extraído das folhas de Oliveira) isolada e associada aos sanitizantes comerciais ácido peracético 2% (APA), hipoclorito de sódio 2% (HS), peróxido de hidrogênio 3% (PH), digluconato de clorexidina 2% (DC), cloreto de benzalcônio 1% (CB) e iodofor 2% (IO), para inativação de células em suspensão e biofilmes monoespécie e multiespécie formados em superfícies de aço inoxidável ou microplaca de poliestireno por Listeria monocytogenes (ATCC 7644), Staphylococcus aureus (ATCC 25923) e Escherichia coli (ATCC 25922), todas classificadas como fortes produtores de biofilmes. Os isolados foram semeados em caldo TSB (caldo tripticase soja), incubados (37oC/24h) e corrigidos a ~108células/mL (escala 0,5 McFarland). Para bactérias em suspensão, a resistência a sanitizantes foi determinada pela Concentração Inibitória Mínima (CIM) em tubos e pelo método de Disco Difusão em Ágar (DDA), no qual as bactérias foram plaqueadas em ágar TSA contendo discos de 6mm de papel filtro embebidos nos sanitizantes. Após a incubação, a medição dos halos de inibição foi feita com paquímetro. Para os ensaios de resistência dos biofilmes aos compostos sanitizantes, foram utilizadas microplacas de poliestireno 96 poços, as quais foram preparadas para incubação-fixação dos biofilmes e submetidas à leitura em espectrofotômetro de ELISA (600 nm). Em seguida, as placas foram lavadas com solução salina tamponada (PBS, pH 7.4) e os sanitizantes inseridos por 1 minuto. Após neutralização com tiossulfato de sódio (5 minutos), as placas foram lavadas com PBS e metanol, coradas com cristal violeta 1% e coradas com ácido acético glacial (33%) para nova leitura a 570nm. A eficácia da remoção do biofilme pelos sanitizantes foi comparada pelo índice de formação de biofilme (IFB). As imagens do aço inoxidável após tratamento com sanitizante foram feitas através de Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) eMicroscopia Confocal, para visualizar a persistência dos biofilmes. Os valores de CIM (diluição 1:2) mostraram que OLE não teve atividade bactericida. No método DDA, L. monocytogenes, foi resistente à OLE, enquanto E. coli e S. aureus apresentaram resistência intermediária. Os sanitizantes comerciais apresentaram boa atividade bactericida nos ensaios de CIM e DDA, sendo que as associações de OLE aos sanitizantes comerciais aumentaram o efeito germicida. Nos ensaios com biofilmes em monoespécie, somente os sanitizantes comerciais, isolados ou associados com OLE, foram eficazes de reduzir o valor de BFI em microplaca de poliestireno. Em biofilmes multiespécie, OLE apresentou efeito antimicrobiano, sobretudo sobre a associação de L. monocytogenes + E. coli + S. aureus (redução: 91,49%). Nenhum dos compostos avaliados foi capaz de inativar completamente os biofilmes nas superfícies de aço inoxidável, uma vez que células viáveis foram observadas após os tratamentos com os sanitizantes, indicando persistência dos biofilmes. Os resultados indicam que a oleuropeína apresentou potencial para incrementar o efeito bactericida de sanitizantes comerciais para eliminação de biofilmes em superfícies inertes, sendo necessários estudos para compreender os mecanismos de ação dessas combinações.

This study evaluated the efficiency of oleuropein (OLE) (a phenolic compound extracted from Oliveira leaves) alone or in association with commercial sanitizers peracetic acid 2% (PPA), sodium hypochlorite 2% (SH), hydrogen peroxide 3% (HP), chlorhexidine digluconate 2% (CD), benzalkonium chloride 1% (BC) and iodophor 2% (IO), for inactivation of suspended cells and monospecies or multispecies biofilms formed on stainless steel surfaces or microplate polystyrene by Listeria monocytogenes (ATCC 7644), Staphylococcus aureus (ATCC 25923) and Escherichia coli (ATCC 25922), all classified as strong producers of biofilms. The isolates were grown in TSB (trypticase soy broth), incubated (37°C/24 h) and adjusted to ~108 cells/mL (0.5 McFarland scale). For the bacterial suspensions, resistance to sanitizers was determined by Minimum Inhibitory Concentration (MIC) in tubes and by Agar Disk Diffusion (ADD), in which the bacteria were plated on TSA agar containing 6mm disks of filter paper soaked in sanitizers. After incubation, measurement of the inhibition halos was done using a caliper rule. For the sanitizer resistance assays with biofilms, polystyrene 96-well microplates were prepared for incubation-fixing of biofilms and read in an ELISA spectrophotometer (600 nm). After, the plates were washed with phosphate buffered saline (PBS, pH 7.4) and the sanitizers were placed for 1 minute. After neutralization with sodium thiosulfate (5 minutes), the plates were washed with PBS and methanol, stained with 1% crystal violet and stained with glacial acetic acid (33%) for a new reading at 570 nm. The effectiveness of biofilm removal by each sanitizer was compared using a Biofilm Formation Index (IFB). The images from stainless steel coupons after treatments with sanitizers were obtained by Scanning Electron Microscopy (SEM) and Confocal Microscopy, to view the persistence of biofilms. MIC values (dilution 1: 2) showed that OLE had no bactericidal activity. In the ADD assays, L. monocytogenes was resistant to OLE, while E. coli and S. aureus showed intermediate resistance. Commercial sanitizers showed good bactericidal activity in both CIM and DDA assays, and the associations of OLE with commercial sanitizers increased their germicidal effect. In the monospecies biofilm assays, only commercialsanitizers, isolated or associated with OLE, were effective for reducing the BFI values in polystyrene microplates. In multispecies biofilms, OLE had an antimicrobial effect, especially on the association of L. monocytogenes + E. coli and S. aureus (reduction: 91.49%). None of the compounds evaluated was able to completely inactivate the biofilms on the stainless steel surfaces, since viable cells of bacteria were observed after treatment with sanitizers, indicating persistence of biofilms. The results indicate that oleuropein has the potential to enhance the bactericidal effect of commercial sanitizers to eliminate biofilms on inert surfaces. Further studies are needed to understand the mechanisms of action of these combinations.

Atividade in vitro de três agentes químicos frente a diferentes espécies de aspergillus

ABSTRACT Aspergillosis is caused by ubiquitous and opportunist moulds of the genus Aspergillus, which contaminate the atmosphere by liberating thousands of conidia in the air, making it extremely important to use air filters and to implement proper programs of antisepsis and disinfection for the prevention of this disease. This study evaluated the in-vitro effectiveness of the chemical agents iodophor, quaternary ammonia and chlorexidine against A. fumigatus (8), A. niger (8), A. flavus (6) and A. terreus (1). Successive dilutions of disinfectants/antiseptics (log2) were prepared in RPMI for the test, and the suspension was adjusted until a final concentration of 5 x 104 UFC/mL. The microdilution test was done in agreement with NCCLS M-38 adapted for chemical agents, with microplates incubation at 35° C in constant agitation. The visual results were evaluated after 96 hours, and all Aspergillus spp. isolates used were resistant to iodophor at all concentrations tested. Quaternary ammonia and chlorexidine showed effectiveness against Aspergillus spp. isolates, except for one A. fumigatus and one A. terreus. According to these results the use of quaternary ammonia and chlorexidine is indicated for the prevention of aspergillosis, while the use of iodophor is questionable.

RESUMO A aspergilose é causada por fungos ubíquos e oportunistas do gênero Aspergillus, que liberam milhares de conídios no ar, contaminando o ambiente, sendo de extrema importância a utilização de filtros de ar e programas corretos de anti-sepsia e desinfecção para prevenção da enfermidade. Este estudo avaliou a eficácia in vitro dos agentes químicos, iodóforo, amônia quaternária e clorexidina, frente a isolados de Aspergillus fumigatus (8), Aspergillus niger (8), Aspergillus flavus (6) e Aspergillus terreus (1). Para o teste foram preparadas diluições sucessivas dos desinfetantes/antisépticos (log2) em caldo RPMI, e os inóculos foram ajustados até uma concentração final de 5 x 104 UFC/mL. Foi realizada a técnica de microdiluição em caldo de acordo com NCCLS M-38, adaptada para agentes químicos, com incubação das microplacas a 35° C em agitação constante. A leitura visual dos resultados foi realizada após 96 horas, e os isolados de Aspergillus spp. utilizados foram resistentes ao iodóforo nas concentrações testadas. A amônia quaternária e a clorexidina mostraram-se eficazes contra os isolados de Aspergillus spp., com exceção de um A. fumigatus e um A. terreus. Com estes resultados indica-se a utilização da amônia quaternária e da clorexidina na prevenção da aspergilose, questionando-se o uso de iodóforos para este fim.

Sensibilidade e resistência de amostras de Salmonella Typhimurium isoladas de suínos abatidos no Rio Grande do Sul/Brasil frente aos desinfetantes químicos quaternário de amônio e iodofor

For prevention of infectious diseases common to man and animals such as salmonellosis, the successful use of disinfectants is of great importance. However, intrinsic or acquired resistance presented by microorganism against these compounds may constitute a limiting aspect in disinfections protocols. This study was aimed at monitoring the sensitivity of 96 Salmonella Typhimurium strains isolated from slaughter pigs in the state of Rio Grande do Sul, Brazil. The isolates were tested against quaternary ammonium and iodophor, which represent two commercial disinfectants commonly used in animal production. The tested disinfectants were used in the concentration recommended by the fabricant and in a sub-concentration in order to simulate a possible field situation. Dilution suspension tests were conducted, observing the inactivation of each S.Typhimurium isolate after 5, 15, 30 and 60 minutes of contact with each compound. All tested isolates were inactivated by the quaternary ammonium compound in both concentrations. Four isolates revealed resistant to iodophor in the recommended concentration and 59 isolates when a sub-concentration was tested. The testing of resistance against disinfectants in microorganisms present on farm and in food processing plants might be an important step on monitoring the effectiveness of adopted disinfections protocols.

Na prevenção da ocorrência ou na interrupção da evolução de enfermidades infecto-transmissíveis comuns aos animais e aos seres humanos, como é o caso da salmonelose, o uso de um desinfetante capaz de agir sobre o agente causal quando em vida livre, no ambiente, exerce grande importância. No entanto, a resistência microbiana, intrínseca ou adquirida, pode apresentar-se como um limitante no uso deste instrumento sanitário. Objetivando monitorar a sensibilidade da Salmonella Typhimurium, 96 amostras isoladas de suínos abatidos no Estado do Rio Grande do Sul,Brasil, foram confrontadas com dois compostos químicos desinfetantes (origem comercial) de uso freqüente em ambientes de produção animal e de transformação de seus subprodutos: um quaternário de amônio e o iodofor. Foram usadas as concentrações indicadas pelo fabricante e uma menor para simular possível situação de sub-concentração. O método de verificação foi o de diluição através do teste de suspensão, observando a inativação bacteriana nos tempos de contato 5, 15, 30 e 60 minutos. Como resultados obtidos, todas as amostras foram inativadas quando utilizado o composto quaternário de amônio, em ambas as concentrações. Frente ao iodofor, 4 (quatro) amostras mostraram-se resistentes a este composto na concentração indicada e 59 frente à sub-concentração. Conclui-se ser necessário, seja para a eleição ou para o monitoramento da eficácia, o confronto dos desinfetantes/anti-sépticos com bactérias presentes nos ambientes específicos de produção animal ou mesmo nos de transformação de seus subprodutos.

Sensibilidade e resistência de amostras de Salmonella Typhimurium isoladas de suínos abatidos no Rio Grande do Sul/Brasil frente aos desinfetantes químicos quaternário de amônio e iodofor

For prevention of infectious diseases common to man and animals such as salmonellosis, the successful use of disinfectants is of great importance. However, intrinsic or acquired resistance presented by microorganism against these compounds may constitute a limiting aspect in disinfections protocols. This study was aimed at monitoring the sensitivity of 96 Salmonella Typhimurium strains isolated from slaughter pigs in the state of Rio Grande do Sul, Brazil. The isolates were tested against quaternary ammonium and iodophor, which represent two commercial disinfectants commonly used in animal production. The tested disinfectants were used in the concentration recommended by the fabricant and in a sub-concentration in order to simulate a possible field situation. Dilution suspension tests were conducted, observing the inactivation of each S.Typhimurium isolate after 5, 15, 30 and 60 minutes of contact with each compound. All tested isolates were inactivated by the quaternary ammonium compound in both concentrations. Four isolates revealed resistant to iodophor in the recommended concentration and 59 isolates when a sub-concentration was tested. The testing of resistance against disinfectants in microorganisms present on farm and in food processing plants might be an important step on monitoring the effectiveness of adopted disinfections protocols.

Na prevenção da ocorrência ou na interrupção da evolução de enfermidades infecto-transmissíveis comuns aos animais e aos seres humanos, como é o caso da salmonelose, o uso de um desinfetante capaz de agir sobre o agente causal quando em vida livre, no ambiente, exerce grande importância. No entanto, a resistência microbiana, intrínseca ou adquirida, pode apresentar-se como um limitante no uso deste instrumento sanitário. Objetivando monitorar a sensibilidade da Salmonella Typhimurium, 96 amostras isoladas de suínos abatidos no Estado do Rio Grande do Sul,Brasil, foram confrontadas com dois compostos químicos desinfetantes (origem comercial) de uso freqüente em ambientes de produção animal e de transformação de seus subprodutos: um quaternário de amônio e o iodofor. Foram usadas as concentrações indicadas pelo fabricante e uma menor para simular possível situação de sub-concentração. O método de verificação foi o de diluição através do teste de suspensão, observando a inativação bacteriana nos tempos de contato 5, 15, 30 e 60 minutos. Como resultados obtidos, todas as amostras foram inativadas quando utilizado o composto quaternário de amônio, em ambas as concentrações. Frente ao iodofor, 4 (quatro) amostras mostraram-se resistentes a este composto na concentração indicada e 59 frente à sub-concentração. Conclui-se ser necessário, seja para a eleição ou para o monitoramento da eficácia, o confronto dos desinfetantes/anti-sépticos com bactérias presentes nos ambientes específicos de produção animal ou mesmo nos de transformação de seus subprodutos.

Effect of an iodophor in chilling water on the bacterial counts of processed poultry / Efeito de um iodophor na descontaminação de carcaças de frangos industrializados

The experiment was conducted to determine whether or not the iodophor is effective in the decontamination of poultry carcases immersed in the treated chilling water. 1,5 carcases were used at weekly intervals, allocated in 9 groups of 5 each. 8 groups were treated by iodophor solutions in the chilling tank at the following dilutions: 1:250; 1:500; 1.750; 1:1000; 1:1250; 1:1500; 1:1750; 1:2000. One group remained as control. The samples for bacteriological examinations were collected by swabs. The use of iodophor in the water from the chilling tank resulted in the decontamination of the poultry carcases at dilutions from 1:250 to 1:250. The experiments were repeated 10 times.

O trabalho foi conduzido com o propósito de testar a eficiência de um iodophor na descontaminação da água do tanque de pré-resfriamento utilizado na industrialização de carcaças de aves. Foram usadas 45 carcaças de frangos, a intervalos semanais, distribuídas em 9 grupos de carcaças cada. 8 grupos foram tratados pelo iodophor adicionado à água do tanque de pré-resfriamento nas seguintes diluições-. 1:250; 1:500; 1:750; 1:1000; 1:1250; 1:1500; 1:1750 e 1:2000. Um grupo foi reservado como controle. amostras para o exame bacteriológico foram colhidas por swab da pele das carcaças. A utilização do iodophor diluído na água do tanque resultou na descontaminação das carcaças, quando as diluições localizaram-se entre 1:250 e 1:1250. O experimento foi replicado dez vezes.

Effect of an iodophor in chilling water on the bacterial counts of processed poultry / Efeito de um iodophor na descontaminação de carcaças de frangos industrializados

The experiment was conducted to determine whether or not the iodophor is effective in the decontamination of poultry carcases immersed in the treated chilling water. 1,5 carcases were used at weekly intervals, allocated in 9 groups of 5 each. 8 groups were treated by iodophor solutions in the chilling tank at the following dilutions: 1:250; 1:500; 1.750; 1:1000; 1:1250; 1:1500; 1:1750; 1:2000. One group remained as control. The samples for bacteriological examinations were collected by swabs. The use of iodophor in the water from the chilling tank resulted in the decontamination of the poultry carcases at dilutions from 1:250 to 1:250. The experiments were repeated 10 times.

O trabalho foi conduzido com o propósito de testar a eficiência de um iodophor na descontaminação da água do tanque de pré-resfriamento utilizado na industrialização de carcaças de aves. Foram usadas 45 carcaças de frangos, a intervalos semanais, distribuídas em 9 grupos de carcaças cada. 8 grupos foram tratados pelo iodophor adicionado à água do tanque de pré-resfriamento nas seguintes diluições-. 1:250; 1:500; 1:750; 1:1000; 1:1250; 1:1500; 1:1750 e 1:2000. Um grupo foi reservado como controle. amostras para o exame bacteriológico foram colhidas por swab da pele das carcaças. A utilização do iodophor diluído na água do tanque resultou na descontaminação das carcaças, quando as diluições localizaram-se entre 1:250 e 1:1250. O experimento foi replicado dez vezes.

Physical, organoleptic and bacteriological properties o f processed poultry carcasses treated by an "iodophor / Propriedades fisico-organolépticas e bacteriológicas de carcaças de frangos tratadas por um " iodophor"

It was analyzed physical, organoleptic and bacteriological properties of processed broiler carcasses (cooled and frozen) in which it was used an iodophor at 1:1,250 dilution in the pre-cooling phase. At the same time it was determined the number of bacteria in the carcasses (total number of aerobics, coliforms and enterococcus) from the daughter to the 25th day of storage in the cooling room for periodical analysis from 5 to 5 days. The results permit to summarize the following conclusions: a) there is no depreciation of the physical and organoleptic characteristics of the treated carcasses; b) the iodophor there was no detected in the external area of the treated carcasses: c) the bacterial number of the treated carcasses it was lower than the control; d) there was no higher level of enterococcus than coliforms in the treated and control carcasses.

Foram analisadas as propriedades físico-organolépticas de carcaças de frangos industrializados (resfriados e congelados), em cuja fase de pré-resfriamento utilizou-se como substância desinfetante uma solução de "iodophor" na proporção de 1:1 .250. Paralelamente, foi determinada a carga bacteriana das carcaças (número global de aeróbios, de coliformes e de enterococos), desde o dia do abate até o vigésimo quinto dia de armazenagem sob congelação, em avaliações regulares de 5 em 5 dias. Os resultados obtidos permitem sumarizar as seguintes conclusões: a) não houve depreciação das características físico-organoléticas das carraças; b ) não houve detecção do iodophor sobre a superfície externa das carcaças; c ) a carga microbiana das carcaças tratadas foi relativamente menor do que a das carcaças testemunhas; d ) houve supremacia numérica dos enterococos sobre os coliformes, tanto nas carcaças tratadas quanto nas testemunhas.

Physical, organoleptic and bacteriological properties o f processed poultry carcasses treated by an "iodophor / Propriedades fisico-organolépticas e bacteriológicas de carcaças de frangos tratadas por um " iodophor"

It was analyzed physical, organoleptic and bacteriological properties of processed broiler carcasses (cooled and frozen) in which it was used an iodophor at 1:1,250 dilution in the pre-cooling phase. At the same time it was determined the number of bacteria in the carcasses (total number of aerobics, coliforms and enterococcus) from the daughter to the 25th day of storage in the cooling room for periodical analysis from 5 to 5 days. The results permit to summarize the following conclusions: a) there is no depreciation of the physical and organoleptic characteristics of the treated carcasses; b) the iodophor there was no detected in the external area of the treated carcasses: c) the bacterial number of the treated carcasses it was lower than the control; d) there was no higher level of enterococcus than coliforms in the treated and control carcasses.

Foram analisadas as propriedades físico-organolépticas de carcaças de frangos industrializados (resfriados e congelados), em cuja fase de pré-resfriamento utilizou-se como substância desinfetante uma solução de "iodophor" na proporção de 1:1 .250. Paralelamente, foi determinada a carga bacteriana das carcaças (número global de aeróbios, de coliformes e de enterococos), desde o dia do abate até o vigésimo quinto dia de armazenagem sob congelação, em avaliações regulares de 5 em 5 dias. Os resultados obtidos permitem sumarizar as seguintes conclusões: a) não houve depreciação das características físico-organoléticas das carraças; b ) não houve detecção do iodophor sobre a superfície externa das carcaças; c ) a carga microbiana das carcaças tratadas foi relativamente menor do que a das carcaças testemunhas; d ) houve supremacia numérica dos enterococos sobre os coliformes, tanto nas carcaças tratadas quanto nas testemunhas.

Influence of the organic matter on the mycobactericidal activity of five chemical disinfectants used for livestock / Influência da matéria orgânica na atividade micobactericida de cinco desinfetantes de uso pecuário

The influence of the organic matter on the mycobactericidal activity of five proprietary disinfectant of veterinary use was evaluated using a 0.0005% (moist weight) suspension of Mycobacterium fortuitum; the organic matter was represented either by bovine faeces or serun. The five disinfectant products tested uere: "A" - sodiun hypochloride; "B" - amixture of phenols and cresylic acid; "C" - a mixture of aldehydes; "D" - iodophor; "E" - phenolyc compounds. The contact period of each disinfectant with the suspension of M. fortuimm in the presence of the organic matter was 60 minutes at temperature between 4 to 8 ºC. The disinfectant action was interrupted after the established time using nutrient broth containing 5% sterilized rabbit serun added with 0.05% Tween 80 for the disinfectants "C", "D" and "E"; disinfectant "B" was neutralized with nutrient broth enriched with rabbit serun added with 3.0% Tween 80; disinfectant "A" was treated by 5% sodium thiosulphate added with 0.05% Tween 80. The isolation of the viable microorganisms was carried out by culturing in the Lowenstein-Jensen medium and counting the Colonies Forming Unit (CFU). Disinfectants "A", "B" and "C" were found to be highly effective even in the presence of the serun or faeces; the percentage of the CFU reduction was above 55.0% when compared to controls. Disinfectant "D" was found to have a varied behavior with

Tendo em vista que a maioria dos desinfetantes químicos tem a sua atuação antimicrobiana prejudicada pela presença de matéria orgânica, o objetivo do presente trabalho foi o de investigar, comparativamente, a influência da presença de fezes ou de soro de bovinos sobre a atividade micobactericida de desinfetantes químicos de uso pecuário. Foram ensaiados cinco desinfetantes: A - hipoclorito de sódio; B - combinação de fenóis e cresóis; C - combinação de aldeídos e amorno quaternário; D - iodóforo; E - composto fenólico. A suspensão microbiana foi representada por uma cultura de Mycobactenum fortuitum na concentração de 0,0005% (peso úmido). 0 período de atuação dos desinfetantes foi de 60 minutos, à temperatura de 4 a 8 C. A interrupção da ação dos desinfetantes foi estabelecida pelo emprego de inativantes. A recuperação dos microrganismos remanescentes foi obtida por cultivo em meio de Lowenstein-Jensen, com quantificação do número de unidades formadoras de colônias (U.F.C.). Os produtos "A", B" e "C" revelaram possuir atividade micobactericida em presença de matéria orgânica, com percentuais de redução do número de U.F.C. em relação aos controles, superiores a 55,0%. O produto "D" apresentou variabilidade de comportamento frente ao sistema de ensaio adotado. 0 produto "E" mostrou-se destituído de poder micobactericida. A despeito de apresentar percentuais de redução de U.F.C

Analysis of in vitro antimicrobial activity of antiseptics products by means of time kill assay / Atividade antimicrobiana in vitro de produtos antissépticos por meio de técnica time kill

Many chemicals (alcohol, iodophor, chlorhexidine, etc) are used in laboratories and industries. Unlike disinfectants, no specific norms and criteria have been standardized for evaluating the antiseptics activity. This study analyzed the antimicrobial activity of antiseptics using Time Kill Test (Hobson & Bolsen). This assay assessed the evolution of a population of aerobic microorganisms in a specific period of time when tested against antimicrobial agents. Two different recovery methodologies were evaluated: membrane filtration and pour plate technique The membrane filtration assay was less sensitive. Pour plate technique showed high sensitivity with high colonies counts. Of 25 samples of products analyzed, only the chlorhexidine digluconate-based antiseptics were unsatisfactory, showing no efficacy on all reference micro-organisms strains, and corresponded to 20 % of analyzed samples. However, they were efficacious against clinical strains. Therefore, these products should be used with caution and further studies are needed, as data on its efficacy have still been scarce. These findings might give support to the health surveillance and public health in establishing the future legislation, as these products have been available on the market, but without following any specific legislation.

Inúmeros agentes químicos (álcoois, iodóforos, clorexidina, etc.) são utilizados em laboratórios e indústrias. Ao contrário dos desinfetantes, não há padrões e critérios específicos para avaliar a atividade de antissépticos. Neste trabalho foi estudada a atividade antimicrobiana de antissépticos, utilizando-se o ensaio Time Kill (Hobson & Bolsen), que avalia a população de micro-organismos aeróbios em período de tempo específico, diante de agentes antimicrobianos. Foram avaliadas duas metodologias de recuperação dos micro-organismos: filtração por membrana e semeadura em profundidade. A filtração por membranafoi menos sensível. A semeadura em profundidade demonstrou maior sensibilidade com maior contagem de colônias. De 25 amostras de produtos, os antissépticos à base de digluconato de clorexidina foram insatisfatórios e ineficazes para todas as cepas de micro-organismos de referência, correspondendo a 20% das amostras analisadas. Estes produtos apresentaram-se satisfatórios frente às cepas de origem clínica. Portanto, estes produtos devem ser utilizados com cautela e estudos adicionais são necessários, pois são escassas as informações sobre sua eficácia. Os dados deste estudo poderão auxiliar as ações de vigilância sanitária e de saúde pública na elaboração de futuras legislações, pois estes produtos são encontrados no comércio, mas sem seguir nenhuma legislação específica