Accelerated ageing test and enzymatic expression in the evaluation of kale seed quality / Teste de envelhecimento acelerado e expressão enzimática na avaliação da qualidade de sementes de couve

The demand for high-quality vegetable seeds and the production of vigorous seedlings has increased in recent years, as these characteristics are determining factors of production success. Vegetables are growing in national importance, and kale stands out as an important source of income for small farmers. The objective of this study was to adapt the traditional accelerated aging test methodology with a saturated NaCl solution of kale seeds and evaluate the enzymatic activity after the vigour test. Six batches of kale seeds were used, and the moisture content, weight of one thousand seeds, first germination count, germination, germination speed index, emergence, initial stand, and emergence velocity index were determined. In the accelerated ageing test, the seeds were submitted to the traditional accelerated ageing test method and the accelerated ageing test method with a saturated NaCl solution for ageing periods of 0, 24, 48, 72, and 96 hours. Electrophoretic analysis of superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), and alcohol dehydrogenase (ADH) isoenzymes was also performed. The accelerated ageing test, using the traditional method for 72 hours at 41 °C, is adequate for evaluating the physiological potential of kale seeds. The isoenzymatic analyses of SOD, CAT, and ADH demonstrate that the biochemical markers are efficient at differentiating kale seeds after accelerated ageing.(AU)

A demanda por sementes de hortaliças com alta qualidade e a obtenção de mudas vigorosas tem aumentado nos últimos anos, pois estas características constituem fatores determinantes do êxito da produção. As hortaliças têm uma importância nacional crescente, dentre elas se destaca a couve, por ser importante fonte de renda para pequenos agricultores. Objetivou-se adequar a metodologia do teste de envelhecimento acelerado tradicional e com solução saturada de NaCl em sementes de couve e avaliar a atividade enzimática após o teste de vigor. Foram utilizados seis lotes de sementes de couve e determinouse o grau de umidade, peso de mil sementes, primeira contagem de germinação, germinação, índice de velocidade de germinação, emergência, estande inicial e índice de velocidade de emergência. No teste de envelhecimento acelerado, as sementes foram submetidas ao método tradicional e com solução saturada de NaCl, por períodos de 0; 24; 48; 72 e 96 horas. Realizou-se também a análise eletroforética das isoenzimas superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT) e álcool desidrogenase (ADH). O teste de envelhecimento acelerado, utilizando o método tradicional na combinação de 72 horas a 41 °C é adequado para avaliar o potencial fisiológico de sementes de couve. As análises isoenzimáticas superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT) e álcool desidrogenase (ADH) demonstram que os marcadores bioquímicos são eficientes e promissores na diferenciação de sementes de couve após o envelhecimento acelerado.(AU)

Population structure and phylogenetic relationships in Brassica rapa L. subspecies by using isozyme markers / Estrutura populacional e relações filogenéticas em subespécies de Brassica rapa L. utilizando marcadores isoenzimáticos

The present study aimed to assess population structure and phylogenetic relationships of nine subspecies of Brassica rapa L. represented with thirty-five accessions cover a wide range of species distribution area using isozyme analysis in order to select more diverse accessions as supplementary resources that can be utilized for improvement of B. napus. Enzyme analysis resulted in detecting 14 putative polymorphic loci with 27 alleles. Mean allele frequency 0.04 (rare alleles) was observed in Cat4A and Cat4B in sub species Oleifera accession CR 2204/79 and in subspecies trilocularis accessions CR 2215/88 and CR 2244/88. The highest genetic diversity measures were observed in subspecies dichotoma, accession CR 1585/96 (the highest average of observed (H0) and expected heterozygosity (He), and number of alleles per locus (Ae)). These observations make this accession valuable genetic resource to be included in breeding programs for the improvement of oilseed B. napus. The average fixation index (F) is significantly higher than zero for the analysis accessions indicating a significant deficiency of heteozygosity. The divergence among subspecies indicated very great genetic differentiation (FST = 0.8972) which means that about 90% of genetic diversity is distributed among subspecies, while 10% of the diversity is distributed within subspecies. This coincides with low value of gene flow (Nm = 0.0287). B. rapa ssp. oleifera (turnip rape) and B. rapa ssp. trilocularis (sarson) were grouped under one cluster which coincides with the morphological classification.(AU)

O presente estudo teve como objetivo avaliar a estrutura populacional e as relações filogenéticas de nove subespécies de Brassica rapa L. representadas com 35 acessos, cobrindo uma ampla gama de áreas de distribuição de espécies usando análise isoenzimática, a fim de selecionar acessos mais diversos como recursos suplementares que podem ser utilizados para melhoria de B. napus. A análise enzimática resultou na detecção de 14 loci polimórficos putativos com 27 alelos. A frequência média de 0,04 alelo (alelos raros) foi observada em Cat4A e Cat4B, nas subespécies Oleifera CR 2204/79 e nas subespécies trilocularis CR 2215/88 e CR 2244/88. As maiores medidas de diversidade genética foram observadas na subespécie dicotômica CR 1585/96 (a média mais alta observada (H0) e heterozigosidade esperada (He) e número de alelos por locus (Ae). Essas observações tornam esse acesso um valioso recurso genético a ser incluído em programas de melhoramento de oleaginosas B. napus. O índice médio de fixação (F) é significativamente maior que 0 para os acessos à análise, indicando uma deficiência significativa de heterozigose. A divergência entre as subespécies indicou uma grande diferenciação genética (FST = 0,8972), o que significa que cerca de 90% da diversidade genética é distribuída entre as subespécies, enquanto 10% da diversidade é distribuída nas subespécies. Isso coincide com o baixo valor do fluxo gênico (Nm = 0,0287). B. rapa ssp. oleifera (nabo) e B. rapa ssp. trilocularis (sarson) foram agrupados conforme a classificação morfológica.(AU)

Diagnostic methods for identification of root-knot nematodes species from Brazil / Métodos diagnósticos usados na identificação de espécies do nematoide das galhas do Brasil

The accurate identification of root-knot nematode (RKN) species (Meloidogyne spp.) is essential for implementing management strategies. Methods based on the morphology of adults, isozymes phenotypes and DNA analysis can be used for the diagnosis of RKN. Traditionally, RKN species are identified by the analysis of the perineal patterns and esterase phenotypes. For both procedures, mature females are required. Over the last few decades, accurate and rapid molecular techniques have been validated for RKN diagnosis, including eggs, juveniles and adults as DNA sources. Here, we emphasized the methods used for diagnosis of RKN, including emerging molecular techniques, focusing on the major species reported in Brazil.(AU)

A identificação acurada de espécies do nematoide das galhas (NG) (Meloidogyne spp.) é essencial para a implementação de estratégias de manejo. Métodos baseados na morfologia de adultos, fenótipos de isoenzimas e análise de DNA podem ser usados para a diagnose do NG. Tradicionalmente, as espécies de NG são identificadas pela análise do padrão perineal e fenótipos de esterase. Em ambos os procedimentos, fêmeas maduras são necessárias. Nas últimas décadas, técnicas moleculares acuradas e rápidas têm sido validadas para a diagnose de NG, incluindo ovos, juvenis e adultos como fontes de DNA. Aqui, nós destacamos os métodos usados para a diagnose de NG, incluindo técnicas moleculares emergentes, focando nas principais espécies encontradas no Brasil.(AU)

Aplicação de silício no solo: efeito na expressão enzimática de sementes oriundas de plantas de arroz sob estresse salino / Application of silicon to the soil: effect on enzymatic expression in rice seed produced under salt stress

A utilização de silício pode acarretar em aumento da capacidade biológica da planta em resistir às condições adversas do meio ambiente. Diante disso, o presente trabalho teve por objetivo avaliar a expressão isoenzimática de sementes oriundas de plantas cultivadas com aplicação de cinza da casca de arroz, via solo, sob estresse salino. O delineamento utilizado foi em blocos casualizados, em esquema fatorial A x B (Fator A- Cinco doses de cinza da casca de arroz aplicada via solo: 0; 500; 1000; 1500 e 2000 kg ha-¹; Fator B- Três concentrações salinas: 0, 4 e 8 mM), com quatro repetições. Foram realizados os testes de primeira contagem de germinação e germinação, e expressão dos sistemas isoenzimáticos glutamato oxaloacetato transaminase, álcool desidrogenase, glutamato desidrogenase e sorbitol. Variações nos quatro sistemas eletroforéticos analisados podem estar associados ao estresse salino causado durante o crescimento e desenvolvimento de plantas de arroz. O sistema isoenzimático glutamato oxaloacetato transaminase é uma ferramenta complementar à avaliação do potencial fisiológico de sementes de arroz.

The silicon utilization may result in the increased biological ability of the plants to withstand the harsh conditions of the environment. In this sense, the study aimed to evaluate the effect of the application of rice husk ash to the soil in rice plants under salt stress on isoenzymes expression. The experimental design was a randomized block in factorial A x B (Factor A- Five doses of rice husk ash applied to soil: 0.0, 500, 1000, 1500, and 2000 kg ha-¹, Factor B- Three salt concentrations: 0, 4, and 8 mM), with four replications. Tests were the first count of germination and germination, and expression of isozyme systems glutamate oxaloacetate transaminase, alcohol dehydrogenase, glutamate dehydrogenase, and sorbitol. Variations in the all analyzed electrophoretic systems may be associated with salt stress caused during the growth and development of rice plants. The isoenzyme system glutamate oxaloacetate transaminase is a complementary tool to assess the physiological rice seed quality.

Aplicação de silício no solo: efeito na expressão enzimática de sementes oriundas de plantas de arroz sob estresse salino / Application of silicon to the soil: effect on enzymatic expression in rice seed produced under salt stress

A utilização de silício pode acarretar em aumento da capacidade biológica da planta em resistir às condições adversas do meio ambiente. Diante disso, o presente trabalho teve por objetivo avaliar a expressão isoenzimática de sementes oriundas de plantas cultivadas com aplicação de cinza da casca de arroz, via solo, sob estresse salino. O delineamento utilizado foi em blocos casualizados, em esquema fatorial A x B (Fator A- Cinco doses de cinza da casca de arroz aplicada via solo: 0; 500; 1000; 1500 e 2000 kg ha-¹; Fator B- Três concentrações salinas: 0, 4 e 8 mM), com quatro repetições. Foram realizados os testes de primeira contagem de germinação e germinação, e expressão dos sistemas isoenzimáticos glutamato oxaloacetato transaminase, álcool desidrogenase, glutamato desidrogenase e sorbitol. Variações nos quatro sistemas eletroforéticos analisados podem estar associados ao estresse salino causado durante o crescimento e desenvolvimento de plantas de arroz. O sistema isoenzimático glutamato oxaloacetato transaminase é uma ferramenta complementar à avaliação do potencial fisiológico de sementes de arroz.(AU)

The silicon utilization may result in the increased biological ability of the plants to withstand the harsh conditions of the environment. In this sense, the study aimed to evaluate the effect of the application of rice husk ash to the soil in rice plants under salt stress on isoenzymes expression. The experimental design was a randomized block in factorial A x B (Factor A- Five doses of rice husk ash applied to soil: 0.0, 500, 1000, 1500, and 2000 kg ha-¹, Factor B- Three salt concentrations: 0, 4, and 8 mM), with four replications. Tests were the first count of germination and germination, and expression of isozyme systems glutamate oxaloacetate transaminase, alcohol dehydrogenase, glutamate dehydrogenase, and sorbitol. Variations in the all analyzed electrophoretic systems may be associated with salt stress caused during the growth and development of rice plants. The isoenzyme system glutamate oxaloacetate transaminase is a complementary tool to assess the physiological rice seed quality.(AU)

New human case reports of cutaneous leishmaniasis by Leishmania (Viannia) naiffi in the Amazon region, Brazil / Novos relatos de casos de leishmaniose cutânea por Leishmania (Viannia) naiffi na região amazônica, Brasil

Few cases of human cutaneous leishmaniasis (CL) caused by Leishmania naiffi were described in the medical literature. The aim of this study was to report and analyze new cases of L. naiffi in the period between the years 1992 to 2011. The strains were characterized by isoenzyme analysis. All patients assisted had small lesions; ranging from 1.0x1.0 mm and 13.5x11.5 mm. The lesions observed were widely distributed: 55.5% on the lower limb, 5.5% in the abdominal area, 16.6% on upper limb and 22.2% in upper limb and back. Seventy-two percent of patients had ulcerated lesions. Clinical course of the disease varied from 1 to 10 months. According to gender, most infected individuals were men (83.3%). The patients came from Amazonas (10), Pará (01) and Rondônia (01), north States of Brazil. Five patients were infected in experimental stations of the National Institute of Amazonian Research (INPA). Although the results of this study were similar to other reports in the literature, some of the patients had more of one skin lesion. It is also reported the first case of CL caused by L. naiffi in the State of Rondônia and identified an area of disease transmission in the experimental station of INPA.(AU)

Poucos casos de leishmaniose cutânea humana (LC) causada por Leishmania naiffi foram descritos na literatura médica. Assim, o objetivo deste estudo foi relatar e analisar novos casos de infecção por L. naiffi no período compreendido entre os anos de 1992 a 2011. As cepas foram caracterizadas por análise de isoenzimas. Todos os pacientes atendidos apresentavam lesões pequenas; variando entre 1,0x1,0 mm e 13,5x11,5 mm. As lesões observadas foram amplamente distribuídas: 55,5% no membro inferior, 5,5% na área abdominal, 16,6% no membro superior e 22,2% no membro superior e para trás. Setenta e dois por cento dos pacientes tiveram lesões ulceradas. O curso clínico da doença variou de 1 a 10 meses. De acordo com o sexo, a maioria dos indivíduos infectados eram homens (83,3%). Os pacientes vieram de Amazonas (10), Pará (01) e Rondônia (01), estados do norte do Brasil. Cinco pacientes foram infectados em estações experimentais do Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia (INPA). Embora os resultados encontrados neste estudo fossem semelhantes às outras descrições na literatura, alguns dos pacientes apresentavam mais de uma lesão cutânea. Também é relatado o primeiro caso de LC causada por L. naiffi no Estado de Rondônia e identificada uma área de transmissão da doença na estação experimental do INPA.(AU)

New human case reports of cutaneous leishmaniasis by Leishmania (Viannia) naiffi in the Amazon region, Brazil / Novos relatos de casos de leishmaniose cutânea por Leishmania (Viannia) naiffi na região amazônica, Brasil

Few cases of human cutaneous leishmaniasis (CL) caused by Leishmania naiffi were described in the medical literature. The aim of this study was to report and analyze new cases of L. naiffi in the period between the years 1992 to 2011. The strains were characterized by isoenzyme analysis. All patients assisted had small lesions; ranging from 1.0x1.0 mm and 13.5x11.5 mm. The lesions observed were widely distributed: 55.5% on the lower limb, 5.5% in the abdominal area, 16.6% on upper limb and 22.2% in upper limb and back. Seventy-two percent of patients had ulcerated lesions. Clinical course of the disease varied from 1 to 10 months. According to gender, most infected individuals were men (83.3%). The patients came from Amazonas (10), Pará (01) and Rondônia (01), north States of Brazil. Five patients were infected in experimental stations of the National Institute of Amazonian Research (INPA). Although the results of this study were similar to other reports in the literature, some of the patients had more of one skin lesion. It is also reported the first case of CL caused by L. naiffi in the State of Rondônia and identified an area of disease transmission in the experimental station of INPA.

Poucos casos de leishmaniose cutânea humana (LC) causada por Leishmania naiffi foram descritos na literatura médica. Assim, o objetivo deste estudo foi relatar e analisar novos casos de infecção por L. naiffi no período compreendido entre os anos de 1992 a 2011. As cepas foram caracterizadas por análise de isoenzimas. Todos os pacientes atendidos apresentavam lesões pequenas; variando entre 1,0x1,0 mm e 13,5x11,5 mm. As lesões observadas foram amplamente distribuídas: 55,5% no membro inferior, 5,5% na área abdominal, 16,6% no membro superior e 22,2% no membro superior e para trás. Setenta e dois por cento dos pacientes tiveram lesões ulceradas. O curso clínico da doença variou de 1 a 10 meses. De acordo com o sexo, a maioria dos indivíduos infectados eram homens (83,3%). Os pacientes vieram de Amazonas (10), Pará (01) e Rondônia (01), estados do norte do Brasil. Cinco pacientes foram infectados em estações experimentais do Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia (INPA). Embora os resultados encontrados neste estudo fossem semelhantes às outras descrições na literatura, alguns dos pacientes apresentavam mais de uma lesão cutânea. Também é relatado o primeiro caso de LC causada por L. naiffi no Estado de Rondônia e identificada uma área de transmissão da doença na estação experimental do INPA.

Physiological performance and electrophoretic pattern of isoenzymes in Phaseolus vulgaris Lam. seeds treated with essential oil of Moringa oleifera Lam / Desempenho fisiológico e padrão eletroforético de isoenzimas em sementes de Phaseolus vulgaris Lam. tratadas com óleo essencial de Moringa oleifera Lam

In order to investigate the effect of different doses of essential oil of Moringa oleifera (EOM) on physiological potential and the expression of isoenzymes in bean seeds, an experiment was conducted with two cultivars (Colibri and Campos Gerais) and seven treatments (bactericidal, fungicide and the doses 0, 0.1, 0.2, 0.4 and 0.8% EOM). Germination, first count of germination, germination speed index (GSI), emergence and emergence rate index (ERI) were evaluated in addition to the enzymes esterase (EST), alcohol dehydrogenase (ADH), superoxide dismutase (SOD) and isocitrate lyase (ICL) by electrophoresis. In an experiment conducted in the laboratory, the dose containing 0.4% EOM promoted germination and higher averages for first germination in seeds and GSI in the Colibri cultivar. However, the highest dose used (0.8%) was responsible for the worst physiological performance by the cultivar. For Campos Gerais, increasing doses of essential oil stimulated germination, first count of germination and GSI. In the field, higher doses of essential oil gave higher germination percentages for the Colibri cultivar, not influencing the seeds of Campos Gerais. The ERI was not altered by the treatments with OEM and changes in the molecular forms of the isoenzymes were observed, with low expression values of bands for EST, ICL and ADH-related vigor, the germination of both cultivars, as well as increased expression of SOD, which is associated with reductions in germination.(AU)

A fim de investigar o efeito de diferentes doses de óleo essencial de Moringa oleifera (OEM) no potencial fisiológico e expressão de isoenzimas em sementes de feijão, conduziu-se um experimento com duas cultivares (Campos Gerais e Colibri) e sete tratamentos (bactericida, fungicida e as doses 0, 0.1, 0.2, 0.4 e 0.8% de óleo essencial). Foram avaliados a germinação, primeira contagem de germinação, índice de velocidade de germinação (IVG), emergência e índice de velocidade de emergência (IVE), além das enzimas esterase (EST), álcool desidrogenase (ADH), superóxido dismutase (SOD) e isocitrato liase (ICL) por meio de eletroforese. Em experimento conduzido em laboratório, a dose contendo 0.4% de OEM promoveu incremento na germinação e maiores médias para primeira contagem de germinação e IVG nas sementes da cultivar Colibri. No entanto, a maior dose utilizada (0.8%) foi responsável pelo pior desempenho fisiológico para a cultivar. Para Campos Gerais, as doses crescentes de óleo essencial estimularam a germinação, a primeira contagem de germinação e IVG. À campo, as doses de óleo essencial conferiram maior porcentagem de emergência para a cultivar Colibri, não influenciando as sementes da cultivar Campos Gerais. O IVE não sofreu alteração e modificações nas formas moleculares das isoenzimas foram observadas, estando os baixos valores de expressão de bandas para EST, ICL e ADH, relacionadas ao maior vigor e germinação das sementes de ambas as cultivares, bem como, maior expressão de SOD, associada à redução na germinação.(AU)

Esterase isozymes patterns of grape vine (Vitis vinifera L) are altered in response to fungicide exposure / Padrões de isozimas Esterases de videira (Vitis vinifera L) alterados em resposta à exposição a fungicidas

Current analysis characterizes the effect of different fungicides often applied for pest control on a-and b-esterase patterns of four economically important table-wine grape cultivars (Italia, Rubi, Benitaka and Brasil) of Vitis vinifera. The a- and b-esterase patterns in bud leaves of the cultivars were assessed by native PAGE analysis. Cabrio Top® compound inhibited Est-2, Est-5, Est-6, Est-7, Est-8, Est-9 and Est-10 carboxylesterases, whereas Est-4, Est-11, Est-12, Est-13, Est-14 acetylesterases and Est-16 carboxylesterase were detected as weakly stained bands. Carboxylesterases and acetylesterases were also detected as weakly stained bands when exposed to fungicides Orthocide 500®, Positron Duo® and Folicur PM®. No changes in a- and b-esterase patterns were reported when the vines were exposed to the fungicides Rovral SC®, Kumulus DF®, Curzate M®, Score® or Cuprogarb 500®. The evidence of functional changes in carboxylesterase and acetylesterase levels in current study is a warning to grape producers on the dangers inherent in the indiscriminate use of potent and modern fungicides extensively used in agriculture. The inhibition effect of fungicides on esterase isozyme molecules seems to be independent of the fungicide chemical.(AU)

O presente estudo caracterizou o efeito de diferentes fungicidas comumente aplicados como medidas de controle de pragas sobre padrões de - e -esterases de quatro importantes cultivares de uva de mesa (Itália, Rubi, Benitaka e Brasil) de Vitis vinifera. Os padrões de - e -esterases de brotos foliares das cultivares foram avaliados por PAGE. O composto Cabrio Top® inibiu as carboxilesterases EST-2, EST-5, EST-6, EST-7, EST-8, EST-9 e EST-10, enquanto as acetilesterases EST-4, EST-11, EST-12, EST-13, EST-14 e a carboxilesterase EST-16 foram detectadas como bandas fracamente coradas. As carboxilesterases e acetilesterases também foram detectadas como bandas fracamente coradas quando expostas aos fungicidas Orthocide 500®, Positron Duo® e Folicur PM®. Não foram observadas alterações nos padrões de - e -esterases quando as videiras foram expostas aos fungicidas Rovral SC®, Kumulus DF®, Curzate M®, Score® ou Cuprogarb 500®. A evidência de alterações em nível funcional em carboxilesterases e acetilesterases, apresentada neste estudo, pode servir como um alerta aos produtores de uva dos perigos inerentes ao uso indiscriminado de fungicidas potentes e modernos amplamente utilizados hoje na agricultura. O efeito dos fungicidas sobre as enzimas esterases parece ser independente do grupo químico ao qual pertence o fungicida.(AU)

Enzyme Polymorphism in Sitophilus oryzae (Linnaeus, 1763) and Sitophilus zeamais (Motschulsky, 1855) (Coleoptera, Curculionidae) in southern Brazil / Polimorfismo Enzimático em Sitophilus oryzae (Linnaeus, 1763) e Sitophilus zeamais (Motschulsky, 1855) (Coleoptera, Curculionidae) no sul do Brasil

Beetles of the species Sitophilus oryzae and S. zeamais are pests of great economic importance since they attack not only rice and maize but also several other cereals. In fact, these beetles are one of the most visible threats to sustainable food production. Current study estimated the genetic variability of S. oryzae in two samples, one from the State of Paraná (PR), Brazil, and another from the state of Rio Grande do Sul (RS), Brazil, and a sample of S. zeamais from the State of Santa Catarina (SC), Brazil. Isozyme electrophoresis in starch gel technique was employed to analyze eight enzyme systems (AAT, ACP, GDH, GPI, IDH, MDH, PGM and ME). Average heterozygosity rates were 0.0091, 0.0100 and 0.0000 and expected heterozygosity rates were 0.0419, 0.0452 and 0.0000 respectively for the samples of PR, SC and RS samples. The percentage of polymorphic loci was 30% in the PR sample, 0% in the RS sample and 30% in the SC sample. Genetic identity rates were I=0.9983 between samples from PR and RS; I = 0.6892 between PR and SC, and I = 0.6925 between SC and RS. Nei´s (1978) genetic distance rates  were 0.0017, 0.3722 and 0.3675. Samples presented low genetic variability.(AU)

Os besouros Sitophilus oryzae e S. zeamais são considerados pragas de grande importância econômica. Além do arroz e do milho, eles atacam outros diversos cereais. São uma das ameaças mais visíveis para a produção sustentável de alimentos. Este trabalho teve como objetivo estimar a variabilidade genética de S. oryzae em duas amostras, uma do Estado do Paraná (PR), e outra do Rio Grande do Sul (RS) e uma amostra de S. zeamais de Santa Catarina (SC). Utilizou-se a técnica de eletroforese de isozimas em gel de amido para a análise de oito sistemas enzimáticos (AAT, ACP, GDH, GPI, IDH, MDH, ME e PGM). A heterozigosidade média observada foi de 0,0091, 0,0100 e 0,0000 e a esperada foi de 0,0419, 0,0452 e 0,0000 para as amostras do PR, SC e RS, respectivamente. A porcentagem de locos polimórficos foi de 30, 0 e 30% nas amostras do PR, RS e SC, respectivamente. Os valores para identidade genética foram de I = 0,9983 entre as amostras do PR e RS; I = 0,6892 entre PR e SC e I = 0,6925 entre SC e RS, e os valores da distância genética de Nei (1978) foram 0,0017, 0,3722 e 0,3675, respectivamente. As amostras apresentaram pouca variabilidade genética.(AU)

On the origin and diversification of Venezuelan freshwater fishes: the genus Gephyrocharax (Ostariophysi: Characidae) a case study

We conducted a phylogeographic analysis of the genus Gephyrocharax in Venezuela to evaluate geomorphologic evidence for the formation of the country's main watersheds and to establish a biogeographical hypothesis of possible diversification mechanisms of the Neotropical freshwater fish fauna. We assayed eight enzyme systems and general proteins to estimate genetic variability (H, P), intraspecific structuring in several Gephyrocharax valencia and G. venezuelae populations (FIS, FIT, and FST), and a phylogenetic approach for the three species of Gephyrocharax in Venezuela, using Corynopoma riisei as the external group. Fourteen presumptive loci indicate that populations of the three species of Gephyrocharax analyzed show a clear genetic inter-specific differentiation, determined by four loci with fixed alleles (GPI-B*, IDH*, ME-1*, and ME-2*). The resulting cladogram shows two major clades: a monophyletic group consisting of Gephyrocharax n. sp. and G. venezuelae (restricted to the northwest of the country) and a group formed exclusively by G. valencia (distributed along the largest geographic range). Speciation of the Venezuelan lineages of the genus Gephyrocharax could be explained by the origin and course movements of the present Orinoco River together with geomorphologic processes that have occurred in northern Venezuela since the Miocene.(AU)

Foi feita uma análise filogeográfica do gênero Gephyrocharax na Venezuela a fim de avaliar as evidências geomorfológicas que levaram à formação dos principais sistemas hidrográficos do país, além de estabelecer uma hipótese biogeográfica com os possíveis mecanismos de diversificação da fauna de peixes de água doce Neotropical. Foram analisados oito sistemas enzimáticos e proteínas gerais para conhecer a variabilidade genética (H, P), estruturação intraespecífica em populações de Gephyrocharax valencia e G. venezuelae (FIS, FIT e FST), e uma abordagem filogenética com base na análise isozimática para as três espécies de Gephyrocharax na Venezuela, com Corynopoma riisei como grupo externo. Quatorze loci presumíveis indicam que as populações das três espécies de Gephyrocharax analisados revelam uma diferenciação inter-específica genética, determinada por quatro loci com alelos fixos (GPI-B*, IDH*, ME-1* e ME-2*). O cladograma resultante apresenta dois clados principais: um grupo monofilético composto por Gephyrocharax n. sp. e G. venezuelae (restrita ao noroeste do país) e um grupo formado exclusivamente por G. valencia (distribuídos ao longo da maior área geográfica). A especiação das linhagens de Gephyrocharax na Venezuela poderia ser explicada pela origem e movimentos do curso atual da bacia do rio Orinoco, associado a processos geomorfológicos que ocorrem no norte da Venezuela desde o Mioceno.(AU)

Genetic Analysis of Izoenzymes Polymorphisms in Silkworm (Bombyx mori L. ) Strains / Análise genética de polimorfismos bioquímicos em linhagens do bicho da seda (Bombyx mori L. )

This work carried out to evaluates the polymorhism in the silkworm of different lineages using the isoenzymes electrophoresis to detect biochemical markers and to investigate the genetics of populations for those lineages. They were used as samples individual extracts of silk glands of second day old larvas of the fifth instar, originating from seven Japanese lineages and eight pure Chinese lineages maintained by the Cocamar-Cooperativa Agroindustrial de Maringل. The isozymes acid phosphatase (ACP), alkaline phosphatase (AKP) and carbonic anhydrase (CA) they were submitted to the electrophoresis in starch gels 14%. The esterases (EST) were analyzed in polyacrylamide gels to 10% and stained with and â-naphtyl acetate. The total of 21 loci was detected, and 04 (19.05%) they are polymorphic, Est-11, Acp, Akp, Ca. The fixation index (Fis) for the analyzed isozymes it was 0.0751, indicating excess of homozygotes. The value of Fst (0.6128) it shows that the lineages are well differentiated. The dendrogram obtained with the values of genetic distance didn"t separate the Chinese and Japanese lineages analyzed totally. That preliminary evaluation of the lineages of B. mori shows that they present genetic material that it can be used in breeding programs that have the purpose of producing hybrid for silk production.(AU)

Este trabalho teve como objetivo avaliar o polimorfismo em lagartas do bicho-da-seda de diferentes linhagens utilizando a eletroforese de isoenzimas para detectar marcadores bioquيmicos e investigar a genética de populaçُes para essas linhagens. Foram utilizados como amostras extratos individuais de glândulas sericيgenas de lagartas do segundo dia da quinta idade, de sete linhagens japonesas e oito linhagens chinesas puras mantidas pela Cocamar-Cooperativa Agroindustrial de Maringل. As isozimas fosfatase لcida (ACP), fosfatase alcalina (AKP) e anidrase carbônica (CA) foram avaliadas por meio de eletroforese em géis de amido de milho a 14%. As esterases (EST) foram analisadas por meio de eletroforese vertical em géis de poliacrilamida a 10% e coloraçمo com ل e â-naftil acetato. Foram observados 21 locos, dentre os quais quatro (19.05%) sمo polimَrficos, Est-11, Acp, Akp, Ca. O يndice de fixaçمo (Fis) para as isozimas analisadas foi 0.0751, indicando excesso de homozigotos. O valor de Fst (0.6128) permite sugerir que as linhagens estمo bem diferenciadas. O dendograma obtido a partir dos valores de distância genética nمo separou totalmente as linhagens chinesas e japonesas analisadas. Essa avaliaçمo preliminar das linhagens de B. mori mostra que elas apresentam material genético que pode ser utilizado em programas de cruzamentos que tenham a finalidade de produzir hيbridos para prara produção de seda.(AU)

Comparative electrophoretic profile of proteins and esterases in healthy silkworm larvae (Bombyx mori Lineu, 1758) and infected with nucleopolyhedrovirus / Perfil eletroforético comparativo de proteínas e esterases em lagartas de bicho da seda (Bombyx mori Lineu, 1758) saudáveis e infectadas por nucleopoliedrovírus

Total proteins and esterases from silk gland extracts of Bombyx mori silkworm were characterized and compared with electrophoretic profiles of prepared extracts with silkworm glands infected with nucleopolyhedrovirus (BmNPV). SDS-PAGE (7%) gels was used for the total proteins, and 10% native PAGE for esterases. In the silk glands extracts of healthy silkworms, it was observed seven protein zones with molecular weight varying between 10 kDa (P1) and 60 kDa (P7). In the infected silkworms, a new zone named P8 (90 kDa) was also detected. Esterases activity at 5th instar larvae underwent changes after the infection with BmNPV, since there was a reduction (EST-6 and EST-7) and an increase (EST-8) in the intensity of the regions of esterases activity, and specificity of EST-9 to -naphthyl acetate. Those alterations observed in the expression of genes after the infection with the nucleoplyhedrovirus can be used as markers to detect infections in B. mori.(AU)

Nesse estudo foram identificadas e comparadas as alteraçُes das proteيnas totais e esterases em extratos de glândula sericيgena de lagartas de Bombyx mori sadias e infectadas por nucleopoliedrovيrus (BmNPV), empregando eletroforese SDS-PAGE com géis a 7% para proteيnas totais, e PAGE a 10% para esterases. Nos extratos de glândulas sericيgenas de lagartas saudلveis, foram observadas sete regiُes proteicas com peso molecular que variam entre 10 kDa (P1) a 60 kDa (P7). Naquelas infectadas pelo BmNPV, uma nova regiمo denominada de P8 (90 kDa) foi detectada. A atividade das esterases no 5؛ instar larval sofreu alteraçُes apَs a infecçمo pelo BmNPV porque houve reduçمo (EST-6 e EST-7) e aumento (EST-8) na intensidade das regiُes de atividade de esterases; e especificidade da EST-9 com o substrato -naftil acetato. Essas alteraçُes na expressمo gênica, apَs a infecçمo pelo nucleopoliedrovيrus, poderمo ser utilizadas como marcadores para detecçمo da infecçمo em B. mori.(AU)

Genetic variability of wild and captivity populations of Colossoma macropomum (Cuvier, 1818) / Variabilidade genética de populações selvagens e de cativeiro de Colossoma macropomum (Cuvier, 1818)

Tambaqui (Colossoma macropomum) is among the most important fish species of the Amazon and one of the most cultivated in Brazil. In the present work we have evaluated the genetic variability of wild and captivity populations of C. macropomum. Enzymatic markers were used to estimate the genetic variability of 41 specimens from a wild group; and 30, 33 and 45 from three captivity groups, which came from Pentecostes (Ceará State), Jaboticabal (São Paulo State) and Itacoatiara (Amazonas State), respectively. Nine isoenzymic systems were used to evaluate the genetic variability of these populations. Using zimogram data we obtained the polymorphism level, allele number, allelic frequency, observed and expected heterozigosity, Wright F statistics (FIS, FST), genetic distance, level of similarity and group analysis. The isoenzymic data showed that, from the nine systems, six presented polymorphic loci (Fbp-2, G6pdh-2, G6pdh-3, Pgi-1, Pgi-2 and Pgm-1). The populations from Pentecostes and Jaboticabal presented loss of genetic variability and low heterozigosity, compared to the wild population and to the artificial population acquired at Itacoatiara fish farm. Based on these results and on fish farmer information we could consider the population from Itacoatiara as recently derived from a wild population. Concluding, we suggest that the artificial populations of tambaqui, which contain animals originated from this funding population at Pentecostes, should be renewed with the introduction of a new group of individuals with genetic variability equivalent to the wild population.

O tambaqui é uma espécie de peixe bastante importante na região amazônica e uma das espécies mais cultivadas no Brasil. O objetivo deste trabalho foi avaliar a variabilidade genética do Colossoma macropomum de cativeiro e selvagem, utilizando marcadores isoenzimáticos. Utilizamos 41 indivíduos de uma população da natureza e 30, 33 e 45 de populações de cativeiro de Pentecoste, Jaboticabal e Itacoatiara, respectivamente. Nove sistemas isoenzimáticos foram utilizados para verificar a variabilidade genética do tambaqui, bem como os níveis de polimorfismos, números de alelos, freqüências alélicas, heterozigosidade observada e esperada, estatística F de Wright (FIS e FST), distância e similaridade genética, e análise de agrupamento. Das nove isoenzimas analisadas apenas seis sistemas apresentaram polimorfismo (Fbp-2, G6pdh-2, G6pdh-3, Pgi-1, Pgi-2 and Pgm-1). Verificamos que as populações de Pentecostes e Jaboticabal estão com falta de heterozigotos e apresentam-se estruturadas geneticamente em relação às populações de Itacoatiara e da Natureza que apresentam excesso de heterozigotos e não são estruturadas. Concluímos que os indivíduos de Itacoatiara são provenientes de populações selvagens e sugerimos que se realize uma renovação dos plantéis de tambaqui de Pentecostes e Jaboticabal, com o intuito de recuperar a variabilidade genética perdida.

Enzyme expression in indica and japonica rice cultivars under saline stress / Expressão de enzimas em cultivares de arroz indica e japonica sob estresse salino

The southern State of Rio Grande do Sul (RS) is the main rice producer in Brazil with a 60% participation of the national production and 86% participation of the region. Rice culture irrigation system is done by flooding, which leads to soil salinization, a major environmental constraint to production since it alters the plants' metabolism exposed to this type of stress. The indica cultivar, widely used in RS, has a higher sensitivity to salinity when compared to that of the japonica cultivar in other physiological aspects. Current research analyzes enzymes expression involved in salt-subjected indica and japonica rice cultivars' respiration. Oryza sativa L. spp. japonica S.Kato (BRS Bojuru, IAS 12-9 Formosa and Goyakuman) and Oryza sativa L. spp. indica S. Kato (BRS Taim-7, BRS Atalanta and BRS Querencia) were the cultivars employed. Seedlings were transferred to 15 L basins containing 50% Hoagland nutrient solution increased by 0, 25, 50, 75 and 100 mM NaCl, and collected at 14, 28 and 42 days after transfer (DAT). Plant tissues were macerated and placed in eppendorf tubes with Scandálios extractor solution. Electrophoresis was performed in 7% of the polyacrylamide gels in vertical vats. Bands were revealed for the following enzymes systems: esterase, alcohol dehydrogenase, phosphoglucoisomerase, malate dehydrogenase, malic enzyme and alpha amylase. The enzymes expression was greater in subspecies japonica, with more intense bands in proportion to salinity increase. Results show that enzyme systems are involved in the salinity defense mechanisms in O. sativa spp. japonica cultivar.

O Estado do Rio Grande do Sul (RS) destaca-se como principal produtor de arroz, participando com 60% da produção nacional e 86% da regional. O sistema de irrigação da cultura é por inundação, que induz o solo à salinização, um dos maiores limitadores ambientais à produção, alterando o metabolismo da plantas expostas a este tipo de estresse. As cultivares indicas amplamente utilizadas no RS demonstram maior suscetibilidade à salinidade quando comparadas às japonicas em outros aspectos fisiológicos. O objetivo da pesquisa foi analisar a expressão de enzimas envolvidas na respiração de cultivares de arroz, indica e japonica, submetidas à salinidade. Foram utilizadas cultivares de Oryza sativa L. spp. japonica S. Kato (BRS Bojuru, IAS 12-9 Formosa e Goyakuman) e de Oryza sativa L. spp. indica S. Kato (BRS-7 Taim, BRS Querência e BRS Atalanta). As plântulas foram transferidas para bacias de 15 L, contendo solução nutritiva de Hoagland meia força acrescida de 0, 25, 50, 75 e 100 mM de NaCl. A coleta foi aos 14, 28 e 42 dias. Os tecidos vegetais foram macerados e colocados em tubos eppendorf com solução extratora de Scandálios. A eletroforese foi realizada em géis de poliacrilamida 7% em cubas eletroforéticas verticais. As bandas foram reveladas para os sistemas enzimáticos esterase, álcool desidrogenase, fosfoglico isomerase, malato desidrogenase, enzima málica e alfa amilase. A expressão das enzimas foi maior na subespécie japonica, com bandas mais intensas conforme o aumento da salinidade. Conclui-se que tais sistemas enzimáticos estejam envolvidos em mecanismos de tolerância ao estresse salino nas cultivares de O. sativa spp. japonica.

Padronização da técnica de eletroforese de isoenzimas para certificação de linhagens celulares / Standardization of isoenzymes electrophoresis technique for cell lines certification

A comprovação da espécie de origem é um dos itens da certificação de linhagens celulares, que pode ser feita por meio de técnica de eletroforese de isoenzimas. Com o objetivo de padronizar essa técnica, o grupo de estudo do Núcleo de Cultura de Células do IAL utilizou extratos celulares de diferentes espécies animais, que foram submetidos à eletroforese horizontal ou vertical em géis de poliacrilamida ou agarose, 100 V e4 oC. A revelação das bandas para a enzima glicose 6-fosfato desidrogenase foi realizada com o auxílio de sais de tetrazólio. Observou-se a presença de uma única banda para cada linhagem celular testada, com os padrões de migração esperados para as diferentes espécies utilizadas, com exceção da linhagem bovina MDBK, que não apresentou uma das bandas, provavelmente em função de menor expressão dessa enzima. Após a avaliação dos resultados obtidos com os diferentes sistemas de eletroforese e géis testados, optou-se pelo uso de eletroforese horizontal em géis de agarose a 2. A padronização e a implantação dessa técnica permitirão que o laboratório forneça linhagens celulares com o devido controle de qualidade.(AU)

Tartrate-resistant acid phosphatase as a biomarker of bone turnover in dog / Fosfatase ácida resistente ao tartarato como biomarcador do metabolismo ósseo no cão

Values of serum tartrate-resistant acid phosphatase ( TRAP) activity were obtained in adult dogs and its biological variability was assessed. Nine healthy skeletally mature Portuguese Podengo dogs were used for the determination of TRAP, total and bone alkaline phosphatase serum activities, and also to study their relationship with serum minerals, namely calcium (Ca), phosphorous (P), and magnesium (Mg). The serum TRAP activity was 2.19±0.56IU/mL, with intra-individual variation of 18.3 percent and inter-individual variation of 25.6 percent. Significant correlations were observed between serum TRAP activity and Ca (r=-0.3431; P<0.05), Ca and Mg (r=-0.787; P<0.01), and TRAP and Mg (r=0.397; P<0.05). The results indicate that serum TRAP activity in dog could be of great value in research and in clinical practice, providing complementary non-invasive information on bone metabolism.(AU)

Determinaram-se os valores da atividade da fosfatase ácida resistente ao tartarato (FART) e avaliou-se a sua variabilidade biológica. Neste estudo, foram utilizados nove cães adultos e saudáveis de raça Podengo Português para as determinações das atividades da FART, da fosfatase alcalina total, da isoenzima óssea da fosfatase alcalina e da concentração dos minerais séricos - cálcio, fósforo e magnésio. A atividade sérica obtida da FART foi de 2,19±0,56 UI/mL, com uma variação intra-individual de 18,3 por cento e interindividual de 25,6 por cento. Foram observadas correlações significativas ao longo do tempo entre FART e cálcio (r=-0,3431; P<0,05), entre FART e magnésio (r=0,3974; P<0,05) e entre cálcio e magnésio (r=-0,787; P<0,01). Os resultados indicam que este marcador de reabsorção óssea pode ser de grande valor na prática clínica e na investigação e, ainda, ser utilizado como um método auxiliar não invasivo para avaliação do metabolismo ósseo.(AU)

Estudo da isoenzima creatina quinase CKMB sérica em equinos de enduro após exercício físico prolongado / Study of serum creatine kinase isoenzyme Ckmb in endurance horses after prolonged physical exercise

Com o objetivo de estudar a influência do exercício físico prolongado na indução de lesão miocárdica e na desqualificação de eqüinos em provas de enduro, colheram-se 87 amostras de sangue de eqüinos adultos Árabes e mestiços para determinação da concentração sérica da isoenzima MB (CKMB), da atividade sérica de creatina quinase (CK) e do índice CKMB/CK. Dividiram-se as amostras da seguinte forma: C (controle, n=34): eqüinos em repouso, no dia anterior à competição; G1 (n=24): eqüinos que finalizaram as competições; G2 (n=14): eqüinos desqualificados durante as competições por causa metabólica e G3 (n=15): eqüinos desqualificados durante as competições por claudicação. Os valores medianos obtidos de CKMB, para os grupos C, G1, G2 e G3, foram respectivamente 2,25; 2,95; 1,95 e 2,40 ng/mL; para a atividade de CK, os resultados foram 164,2; 1228,0; 840,0 e 581,0 U/L a 30oC; e para o índice CKMB/CK, os resultados foram 1,41; 0,21; 0,23 e 0,42%. Houve média correlação positiva entre distância percorrida e CKMB e CK, e negativa entre distância e índice CKMB/CK. O exercício físico de resistência não leva a aumento significante dos valores da isoenzima CKMB, mas sim da atividade sérica da enzima CK, indicando dano à musculatura esquelética. Animais desqualificados por causa metabólica parecem não apresentar envolvimento de lesão miocárdica na causa de desqualificação. Não foi possível verificar a presença de lesão cardíaca induzida pelo exercício em eqüinos de enduro e sua relação com causas metabólicas de desqualificação a partir da utilização de CKMB como único marcador cardíaco.(AU)

With the purpose of studying the influence of prolonged phyisical exercise causing myocardial lesion and disqualifying horses in endurance competitions, 87 blood samples were collected from adult Arabian and crossbred horses, to determine the serum concentration of the isoenzyme MB (CKMB), the serum activity of creatine kinase (CK), and the CKMB/CK index. Samples were divided as follows: C (control, n=34): horses at rest, one day before competition; G1 (n=24): horses which finished competitions; G2 (n=14): horses disqualified during competitions by metabolic causes, and G3 (n=15): horses disqualified during competitions after lameness was diagnosed. Median values obtained for CKMB, for groups C, G1, G2, and G3, were, respectively, 2.25; 2.95; 1.95, and 2.40 ng/mL; for CK activity, the results were 164.2; 1228.0; 840.0, and 581.0 in U/L at 30oC; and for CKMB/CK index, the results were 1.41; 0.21; 0.23, and 0.42%. There was mean positive correlation between distance and CKMB and CK, and negative correlation between distance and CKMB/CK index. It was concluded that endurance exercise does not cause significant increases in CKMB values, but in CK serum activity, indicating skeletal muscle injury. Horses disqualified by metabolic causes seem not to present myocardial injury involved in the cause of disqualification. It was not possible to verify the presence of exercise-induced cardiac injury in endurance horses and its relationship with metabolic causes of disqualification only by the utilization of CKMB as the only cardiac marker.(AU)

Cardiorespiratory evaluation of juvenile rats experimentally envenomed with Tityus serrulatus venom

Accidental envenomation caused by Tityus serrulatus scorpions is very common in Brazil and may result in serious cardiorespiratory alterations that are frequently fatal to children. In the present study, the effects of T. serrulatus venom on the cardiorespiratory system of recently weaned male Wistar rats were evaluated. Fifteen animals were distributed into three groups (n = 5). The control group A received 400 μL ultrapure water by subcutaneous injection, while the experimental groups B and C were injected with scorpion venom (100 and 450 μg, respectively, in 400 μL water). Electrocardiogram (ECG) traces were obtained prior to the experiment, at five-minute intervals up to 30 minutes after treatment. At 40 minutes after envenomation, the animals had severe acute symptoms and were subsequently anesthetized for blood collection by means of intracardiac puncture. Biochemical profiles for the cardiac muscle were established by colorimetric analysis of creatine kinase (CK) and CK-MB isoenzyme. Semiquantitative analysis of troponin was performed using the immunochromatographic assay. Following euthanasia, the lungs and hearts were removed and subjected to histopathological examination. All experimental animals had ECG alterations compatible with electrolytic imbalance, myocarditis and alterations of the cardiac conduction system. Envenomed animals had accentuated bradycardia at 25 and 30 minutes after venom inoculation. All experimental animals had myocardial lesions, which were confirmed by increased serum levels of CK and CK-MB, although there were no alterations in the serum concentration of troponin. Pulmonary hemorrhage was detected in whole lungs and microscopically confirmed by the presence of congested capillaries and erythrocytes in the alveolar parenchyma. In conclusion, T. serrulatus venom caused great cardiorespiratory damage to weaned rats.(AU)

Variabilidade genética em algumas criações comerciais brasileiras de escargots (Helix aspersa, Müller, 1774) / Genetic variation at eight isoenzyme loci in subpopulations of the edible snail (Helix aspersa, Müller, 1774)

Descreveram-se os marcadores isoenzimáticos e estimou-se a variabilidade genética de 20 subpopulações brasileiras de escargots (Helix aspersa). O estudo dos oito locos foi feito por eletroforese em gel de amido, em amostras com 30 indivíduos cada, obtidas em criatórios dos estados de Santa Catarina, São Paulo e Rio de Janeiro (uma, duas e 17 amostras, respectivamente). Observou-se polimorfismo nos locos das enzimas LAP, 6-PGD, PEP 2, PEP 1 e MDH, com três alelos nos três primeiros locos e dois nos demais. Os locos da ME, da SOD e da PGI apresentaram-se monomórficos. As freqüências gênicas de sete amostras ajustaram-se ao modelo de Hardy-Weinberg (P<0,05), e as de outras seis amostras ajustaram-se ao modelo de Wright (P<0,05), indicando que elas estão submetidas a diferentes regimes reprodutivos. Os desvios da panmixia para toda a população (F IT ) e dentro das subpopulações (F IS) não foram significativos (P³0,05). O desvio entre as subpopulações (F ST=0,0485) foi significativo (P<0,05) e apontou pequena diferenciação entre elas. As estimativas de diversidade total (Ht), entre subpopulações (Dst) e dentro das subpopulações (Hs), indicaram que a diversidade genética é reduzida e sua maior parte encontra-se dentro das subpopulações, sugerindo uma base genética estreita para essa população. As distâncias genéticas também foram pequenas, não permitindo a construção de um dendrograma.(AU)

In order to assess genetic variability in subpopulations of Helix aspersa, eight isoenzyme loci in 30 individuals in each of 20 subpopulations, obtained from breeders in Santa Catarina (1), São Paulo(2) and Rio de Janeiro (17) states of Brazil, were examined. Polymorphic loci included LAP, 6-PGD, PEP 2, PEP 1 and MDH, with three alelles at each of the first three loci and two at each of the others. The ME, SOD and PGI loci were monomorphic. Gene frequencies in 7 of 20 subpopulations were consistent with the Hardy-Wienberg equilibrium (P<0.05), and 6 were consistent with Wright model, indicating that these subpopulations did not meet requirements for genotypic equilibrium to be achieved. Despite the fact that some F values were high, FIS and FIT were not significantly different from zero (P³0.05). Although small, the FST value (0.0485) was significant, suggesting small differences among populations. Most of the low genetic variation at isoenzyme loci was observed within subpopulations rather than among subpopulations, suggesting a small genetic basis for these samples. Estimated genetic distances among pairs of subpopulations also were low.(AU)