An RT-rtPCR assay for detection of rabies virus in bovine specimens / Um ensaio RT-rtPCR para detecção de vírus da raiva em espécimes bovinos

ABSTRACT: Bovine rabies is endemic in most Brazilian States, including Rio Grande do Sul (RS), which has faced an unprecedented rabies outbreak between 2011 and 2018. We described a real-time reverse transcription quantitative PCR (RT-rtPCR) for detection of rabies virus (RABV) in bovine samples. The primers were designed targeting a highly conserved region of the nucleoprotein (N) gene of RABV obtained from cattle. The detection limit corresponded to 13 DNA copies and the intra- and inter-run repeatability was adequate (CV<9%) in all dilutions tested. Amplification of other pathogens associated with neurological disease in cattle or cross-contamination was not observed. Brain samples from cattle suspicious of rabies (n=21) were tested in triplicate by the RT-rtPCR and by the gold-standard direct fluorescent antibody test (DFAT), resulting in 100% of sensitivity and specificity of the RT-rtPCR. Testing of additional 41 bovine brain samples submitted to the routine DFAT testing yielded 37 (90.2%) concordant results (30 positive/7 negative) and 4 (9.7%) inconclusive in DFAT and RT-rtPCR positive. These results showed a good concordance between the tests and a higher sensitivity of the RT-rtPCR. This assay represents an alternative for RABV detection, either as a confirmatory test or for large-scale diagnosis in endemic regions.

RESUMO: A raiva bovina é endêmica na maioria dos estados brasileiros, inclusive no Rio Grande do Sul (RS), que enfrentou um surto de raiva sem precedentes entre 2011 e 2018. Descrevemos um PCR quantitativo de transcrição reversa em tempo real (RT-rtPCR) para detecção do vírus da raiva (RABV) em bovinos. Os primers foram desenhados visando uma região altamente conservada do gene da nucleoproteína (N) de RABV obtido de bovinos. O limite de detecção correspondeu a 13 cópias de DNA e a repetibilidade intra e inter-ensaios foi adequada (CV <9%) em todas as diluições testadas. Não foi observada amplificação de outros patógenos associados a doenças neurológicas em bovinos ou contaminação cruzada. Amostras de cérebro de bovinos com suspeita de raiva (n = 21) foram testadas em triplicata no RT-rtPCR e pelo teste de anticorpo fluorescente padrão ouro (DFAT), resultando em 100% de sensibilidade e especificidade do RT-rtPCR. O teste de 41 amostras de cérebro bovino adicionais submetidas ao teste de DFAT de rotina rendeu 37 (90,2%) resultados concordantes (30 positivos / sete negativos) e quatro (9,7%) inconclusivos em DFAT e RT-rtPCR positivo. Esses resultados mostraram boa concordância entre os testes e maior sensibilidade do RT-rtPCR. Este ensaio representa uma alternativa para a detecção do vírus da raiva, seja como teste confirmatório ou para diagnóstico em larga escala em regiões endêmicas.

Pesticide residues in strawberries cultivated in the state of Rio Grande do Sul, Brazil / Resíduos de agrotóxicos em morangos produzidos no estado do Rio Grande do Sul, Brasil

ABSTRACT: Strawberries are of high social and economic importance and the crop is mainly produced at small family enterprises. Strawberries are repetitively amongst products in which unauthorized pesticide residues are determined. The PARA program launched in Brazil by ANVISA has disclosed that many samples have residues above the maximum residue limit (MRL). The present study appraised the pesticide residues detected in strawberries produced in the state of Rio Grande do Sul and marketed at the CEASA / RS. Along the harvesting seasons of 2018 and 2019, 62 strawberry samples were collected at the CEASA-pavilion destined for growers from the state of Rio Grande do Sul. Each sample was tested for 238 active ingredients of pesticides. Of the 62 samples retrieved, 40% were considered satisfactory and 60% resulted as unsatisfactory. Of the 25 satisfactory samples, three samples did not present any residues, and 22 had residues below the MRL. Of the 37 samples with an unsatisfactory outcome, 11 had active ingredients not allowed (NA) for use on strawberries, 13 presented active ingredients above the MRL and 13 reports presented the sum of both: residues above the MRL and NA. Thirty five different active ingredients were detected in the samples summing up to a total of 303 detection events. The active ingredients detected most frequently were procymidone (66.13%); carbendazim (53.22%) and difenoconazole (50%).

RESUMO: A cultura do morangueiro tem grande participação econômica e social no estado do Rio Grande do Sul, especialmente devido a sua importância na agricultura familiar. No entanto, o morango está constantemente entre as principais culturas com resíduos de agrotóxicos não autorizados ou acima do limite máximo de resíduos no principal Programa de Análise de Resíduos de Agrotóxicos em Alimentos (PARA) do Brasil. O presente estudo teve por objetivo avaliar os resíduos de agrotóxicos encontrados em morangos produzidos no estado do Rio Grande do Sul comercializados na CEASA/RS. Nos anos de 2018 e 2019 foram coletadas 62 amostras de morangos no pavilhão destinado aos produtores gaúchos desta central de abastecimento. Cada amostra foi analisada para presença de 238 ingredientes ativos de agrotóxicos. Das 62 amostras, 40% foram consideradas satisfatórias e 60% apresentaram resultado insatisfatório. Das 25 amostras satisfatórias, três amostras não continham resíduos de agrotóxicos e 22 apresentaram resíduos abaixo do limite máximo de resíduos (LMR) estipulado pela ANVISA. Dos 37 casos de amostras insatisfatórias, 11 foram por ingrediente ativo não permitido para a cultura (NPC), 13 por ingrediente ativo acima do LMR e 13 laudos apresentaram o somatório de resíduos acima do LMR e NPC. Foram encontrados 35 diferentes ingredientes ativos nas 62 amostras de morango, totalizando 303 eventos de detecção. Os ingredientes ativos detectados com maior frequência nas 62 amostras de morango foram procimidona (66,13%); carbendazim (53,22%) e difenoconazol (50%).

Pesticide residues in strawberries cultivated in the state of Rio Grande do Sul, Brazil / Resíduos de agrotóxicos em morangos produzidos no estado do Rio Grande do Sul, Brasil

Strawberries are of high social and economic importance and the crop is mainly produced at small family enterprises. Strawberries are repetitively amongst products in which unauthorized pesticide residues are determined. The PARA program launched in Brazil by ANVISA has disclosed that many samples have residues above the maximum residue limit (MRL). The present study appraised the pesticide residues detected in strawberries produced in the state of Rio Grande do Sul and marketed at the CEASA / RS. Along the harvesting seasons of 2018 and 2019, 62 strawberry samples were collected at the CEASA-pavilion destined for growers from the state of Rio Grande do Sul. Each sample was tested for 238 active ingredients of pesticides. Of the 62 samples retrieved, 40% were considered satisfactory and 60% resulted as unsatisfactory. Of the 25 satisfactory samples, three samples did not present any residues, and 22 had residues below the MRL. Of the 37 samples with an unsatisfactory outcome, 11 had active ingredients not allowed (NA) for use on strawberries, 13 presented active ingredients above the MRL and 13 reports presented the sum of both: residues above the MRL and NA. Thirty five different active ingredients were detected in the samples summing up to a total of 303 detection events. The active ingredients detected most frequently were procymidone (66.13%); carbendazim (53.22%) and difenoconazole (50%).

A cultura do morangueiro tem grande participação econômica e social no estado do Rio Grande do Sul, especialmente devido a sua importância na agricultura familiar. No entanto, o morango está constantemente entre as principais culturas com resíduos de agrotóxicos não autorizados ou acima do limite máximo de resíduos no principal Programa de Análise de Resíduos de Agrotóxicos em Alimentos (PARA) do Brasil. O presente estudo teve por objetivo avaliar os resíduos de agrotóxicos encontrados em morangos produzidos no estado do Rio Grande do Sul comercializados na CEASA/RS. Nos anos de 2018 e 2019 foram coletadas 62 amostras de morangos no pavilhão destinado aos produtores gaúchos desta central de abastecimento. Cada amostra foi analisada para presença de 238 ingredientes ativos de agrotóxicos. Das 62 amostras, 40% foram consideradas satisfatórias e 60% apresentaram resultado insatisfatório. Das 25 amostras satisfatórias, três amostras não continham resíduos de agrotóxicos e 22 apresentaram resíduos abaixo do limite máximo de resíduos (LMR) estipulado pela ANVISA. Dos 37 casos de amostras insatisfatórias, 11 foram por ingrediente ativo não permitido para a cultura (NPC), 13 por ingrediente ativo acima do LMR e 13 laudos apresentaram o somatório de resíduos acima do LMR e NPC. Foram encontrados 35 diferentes ingredientes ativos nas 62 amostras de morango, totalizando 303 eventos de detecção. Os ingredientes ativos detectados com maior frequência nas 62 amostras de morango foram procimidona (66,13%); carbendazim (53,22%) e difenoconazol (50%).

An RT-rtPCR assay for detection of rabies virus in bovine specimens / Um ensaio RT-rtPCR para detecção de vírus da raiva em espécimes bovinos

Bovine rabies is endemic in most Brazilian States, including Rio Grande do Sul (RS), which has faced an unprecedented rabies outbreak between 2011 and 2018. We described a real-time reverse transcription quantitative PCR (RT-rtPCR) for detection of rabies virus (RABV) in bovine samples. The primers were designed targeting a highly conserved region of the nucleoprotein (N) gene of RABV obtained from cattle. The detection limit corresponded to 13 DNA copies and the intra- and inter-run repeatability was adequate (CV<9%) in all dilutions tested. Amplification of other pathogens associated with neurological disease in cattle or cross-contamination was not observed. Brain samples from cattle suspicious of rabies (n=21) were tested in triplicate by the RT-rtPCR and by the gold-standard direct fluorescent antibody test (DFAT), resulting in 100% of sensitivity and specificity of the RT-rtPCR. Testing of additional 41 bovine brain samples submitted to the routine DFAT testing yielded 37 (90.2%) concordant results (30 positive/7 negative) and 4 (9.7%) inconclusive in DFAT and RT-rtPCR positive. These results showed a good concordance between the tests and a higher sensitivity of the RT-rtPCR. This assay represents an alternative for RABV detection, either as a confirmatory test or for large-scale diagnosis in endemic regions.

A raiva bovina é endêmica na maioria dos estados brasileiros, inclusive no Rio Grande do Sul (RS), que enfrentou um surto de raiva sem precedentes entre 2011 e 2018. Descrevemos um PCR quantitativo de transcrição reversa em tempo real (RT-rtPCR) para detecção do vírus da raiva (RABV) em bovinos. Os primers foram desenhados visando uma região altamente conservada do gene da nucleoproteína (N) de RABV obtido de bovinos. O limite de detecção correspondeu a 13 cópias de DNA e a repetibilidade intra e inter-ensaios foi adequada (CV <9%) em todas as diluições testadas. Não foi observada amplificação de outros patógenos associados a doenças neurológicas em bovinos ou contaminação cruzada. Amostras de cérebro de bovinos com suspeita de raiva (n = 21) foram testadas em triplicata no RT-rtPCR e pelo teste de anticorpo fluorescente padrão ouro (DFAT), resultando em 100% de sensibilidade e especificidade do RT-rtPCR. O teste de 41 amostras de cérebro bovino adicionais submetidas ao teste de DFAT de rotina rendeu 37 (90,2%) resultados concordantes (30 positivos / sete negativos) e quatro (9,7%) inconclusivos em DFAT e RT-rtPCR positivo. Esses resultados mostraram boa concordância entre os testes e maior sensibilidade do RT-rtPCR. Este ensaio representa uma alternativa para a detecção do vírus da raiva, seja como teste confirmatório ou para diagnóstico em larga escala em regiões endêmicas.

Padronização de uma PCR multiplex para a detecção de fraude em leite bubalino e caprino por adição de leite bovino / Standardization of a multiplex PCR for detection of fraud in buffalo and goat milk by addition of bovine milk

O consumo de leite de espécies como bubalino e caprino tem se popularizado por representarem uma alternativa para indivíduos que possuem restrições alimentares relacionadas ao leite bovino e em virtude das propriedades nutricionais desses alimentos. No entanto, fatores como a baixa produção e a sazonalidade predispõem a adulterações destes alimentos, principalmente pela adição de leite bovino, visando maior rendimento e lucratividade. Assim, o objetivo do estudo foi padronizar um método de PCR multiplex para autenticação de leites bubalino e caprino. Para isso, amostras de leite exclusivamente de cada espécie foram utilizados para a padronização da técnica. Em seguida, foi realizada a fraude pela adição de leite bovino ao caprino e ao bubalino, em proporções de 0,1% até 100%. A técnica foi eficaz, precisa, rápida e prática para a detecção do DNA de bovino, bubalino e caprino, separadamente e em conjunto. Na fraude experimental, o limite de detecção da técnica ocorreu a partir do menor percentual testado (0,1%) tanto no leite caprino quanto no bubalino. Dessa forma, a PCR multiplex testada mostrou ser uma importante ferramenta para a autenticação de leite, pendendo ser utilizada para fins de fiscalização por órgãos competentes.

Milk consumption of species such as buffalo and goat has become popular due to the nutritional properties of these foods and because they represent an alternative for individuals who have dietary restrictions related to bovine milk. However, factors such as low production and seasonality predispose to adulteration, mainly by the addition of bovine milk, aiming at higher yield and profitability. Thus, the aim of the present study was to standard a multiplex PCR method for buffalo and goat milks authentication. For this, the milks exclusively of each species were used to standardize the technique. Subsequently, fraud was performed by the addition of bovine milk to goat and buffalo in proportions from 0.1% to 100%. The technique was effective and accurate for detecting bovine, buffalo and goat DNA separately and together quickly and practically. In experimental fraud, the detection limit of the technique occurred from the lowest percentage tested (0.1%) in both goat and buffalo milk. Thus, the multiplex PCR tested proved to be an important tool for milk authentication, pending to be used for supervision by competent agencies.

Optimized broad-range real-time PCR-based method for bacterial screening of platelet concentrates / Otimização de um método baseado em PCR em tempo real para rastreamento de bactérias em concentrados de plaquetas

Bacterial contamination of blood components remains a major challenge in transfusion medicine, particularly, platelet concentrates (PCs) due to the storage conditions that support bacterial proliferation. In this study, we develop a rapid, sensitive and specific real-time PCR protocol for bacterial screening of PCs. An internally controlled real-time PCR-based method was optimized and validated with our proprietary 16S Universal PCR Master Mix (IBMP/Fiocruz), which targets a conserved region of the bacterial 16S rRNA gene. Nonspecific background DNA was completely eliminated by treating the PCR Master Mix with ethidium monoazide (EMA). A lower limit of detection was observed for 10 genome equivalents with an observed Ct value of 34±1.07 in calibration curve generated with 10-fold serial dilutions of E. coli DNA. The turnaround time for processing, including microbial DNA purification, was approximately 4 hours. The developed method showed a high sensitivity with no non-specific amplification and a lower time-to-detection than traditional microbiological methods, demonstrating it to be an efficient means of screening pre-transfusion PCs.(AU)

A contaminação bacteriana dos componentes sanguíneos é um grande desafio na medicina transfusional, principalmente nos concentrados de plaquetas (PCs) devido às condições de armazenamento que favorecem a proliferação bacteriana. Neste estudo, desenvolvemos um protocolo de PCR em tempo real rápido, sensível e específico para a triagem bacteriana de PCs. Um método baseado em PCR em tempo real, controlado internamente, foi otimizado e validado com um Master Mix Universal PCR 16S (IBMP / Fiocruz), que detecta uma região conservada do gene 16S rRNA bacteriano. O background de DNA não específico foi completamente eliminado tratando a PCR Master Mix com monoazida de etídio (EMA). O limite de detecção inferior observado foi de 10 cópias equivalentes do genoma com um valor de Ct 34 ± 1,07, a curva de calibração foi gerada com diluições seriada de 10 vezes do DNA de E. coli. O tempo de processamento, incluindo a purificação microbiana do DNA, foi de aproximadamente 4 horas. O método desenvolvido mostrou alta sensibilidade sem amplificação inespecífica e menor tempo de detecção do que os métodos microbiológicos tradicionais, demonstrando ser um meio eficiente de triagem de PCs pré-transfusionais.(AU)

Daily activity patterns and occurrence of Leopardus guttulus (Carnivora, Felidae) in Lami Biological Reserve, southern Brazil

ABSTRACT Daily activity patterns are important elements of species behavior that reflect how they interact with their environment and with other related species. To investigate these patterns is crucial to understand how environmental or community changes may affect this behavior in each particular species. Within the Felidae family, research becomes fundamental to assess how small wild cats respond to local conditions and pressures, once there is a large gap in studies addressing such issues. Leopardus guttulus (Hensel, 1872) is an endangered species classified as Vulnerable (VU) at a regional and global level, being threatened mainly by the loss and fragmentation of its habitats. The aim of this study is to document the daily activity patterns of L. guttulus at the Lami Biological Reserve, and the influence of seasonality and temperature on those patterns. We also aimed to quantify how many individuals were using the Biological Reserve during the study period and evaluate their permanence in the area. We obtained 25 independent records for L. guttulus, which was the only cat species recorded at the site during the study period. In general, the species presented a cathemeral habit, being active throughout the 24 hours of the day, but with a more crepuscular/nocturnal activity in the spring and summer. The relationship between the species activity and temperature showed that more than 70% of the records were obtained in a narrow range of 10-17°C. We identified at least two individuals that remained at the site from four to six months of the year, with a higher detection frequency between August and November. Our results showed some interesting trends for the temporal activity of L. guttulus, suggesting flexibility related to seasonality, and the importance of the biological reserve to the preservation of this cat species in the southern limit of its distribution.

RESUMO Os padrões de atividade diária são elementos importantes do comportamento das espécies que refletem como elas interagem com seu ambiente e com outras espécies relacionadas. Investigar esses padrões é crucial para entender como as mudanças ambientais ou na comunidade podem afetar esse comportamento em cada espécie em particular. Dentro da família Felidae, os felinos silvestres de menor porte sofrem com uma grande lacuna de estudos nesse sentido, e pesquisas se tornam fundamentais para avaliar como eles respondem às condições e pressões locais. Leopardus guttulus (Hensel, 1872) é uma espécie ameaçada de extinção classificada como Vulnerável (VU) em nível regional e mundial, sendo ameaçada principalmente pela perda e fragmentação de seus habitats. O objetivo deste estudo é documentar o padrão de atividade diária de L. guttulus na Reserva Biológica do Lami e verificar a influência da sazonalidade e da temperatura nestes padrões. Nós também tentamos identificar o número de indivíduos usando a reserva biológica durante o período monitorado e avaliar o tempo de permanência destes na área. Obtivemos 25 registros independentes para L. guttulus, sendo a única espécie de felídeo silvestre registrada no local durante o período amostrado. No geral a espécie apresentou um hábito catemeral com atividade ao longo das 24 horas do dia, mas com uma maior atividade crepuscular/noturna nas estações da primavera e verão. A relação entre a atividade da espécie e a temperatura mostrou que mais de 70% dos registros foram obtidos em uma estreita faixa de temperatura de 10-17°C. Nós identificamos pelo menos dois indivíduos que permaneceram no local durante quatro a seis meses no ano, com maior frequência de detecção nos meses entre agosto e novembro. Nossos resultados demonstram algumas tendências interessantes sobre a atividade temporal de L. guttulus, sugerindo uma flexibilidade sazonal, e demonstram também a importância da reserva biológica para a preservação desta espécie no limite sul de sua distribuição.

Protocol optimization for the detection of Trypanosoma cruzi DNA in açai (Euterpe oleraceae) pulp / Otimização de protocolo para detecção de DNA de Trypanosoma cruzi em polpa de açaí (Euterpe oleracea)

Chagas disease, caused by the protozoan Trypanosoma cruzi, has often been linked to oral transmission through açai consumption. Molecular methods that allow fast and accurate identification of the pathogen are important for the detection of the presence of the parasite in this food. This study aimed to optimize polymerase chain reaction (PCR)-based detection of T. cruzi DNA in açai pulp. Several dilutions of T. cruzi DTU TcI trypomastigote forms were cultured in liver infusion tryptose (LIT) medium. Trypanosoma cruzi DNA was extracted from the cells and subjected to PCR. Subsequently, culture dilutions were added to açai pulp to evaluate the detection threshold of the optimized PCR assay. We demonstrate that our assay can detect T. cruzi DNA in açai pulp at a concentration of 1.08 × 10-10 ng µL-1. We conclude that our optimized protocol is effective and can be used as an important tool for the detection of T. cruzi contamination in açaí.(AU)

A doença de Chagas, enfermidade causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, tem sido relacionada com frequência à transmissão oral pelo consumo de açaí. Métodos moleculares que fornecem uma identificação rápida e precisa do patógeno para a detecção da presença do parasita são de extrema importância para a detecção da presença do parasita neste alimento. Este estudo teve como objetivo otimizar a detecção de DNA de T. cruzi em polpa de açaí por meio da reação em cadeia da polimerase (PCR). Foram preparadas várias diluições das formas tripomastigotas de T. cruzi DTU TcI cultivadas em meio de cultivo Liver Infusion Tryptose. O DNA de T. cruzi foi extraído das células e submetido à PCR. Posteriormente, as diluições da cultura foram adicionadas às polpas de açaí para avaliar o limite de detecção do novo ensaio de PCR otimizado. Mostramos que nosso ensaio pode detectar DNA de T. cruzi em polpas de açaí na concentração de 1.08 × 10-10 ng µL-1. Concluímos que a metodologia desenvolvida se mostra eficaz e pode ser uma ferramenta importante para a detecção de contaminação por T. cruzi em açaí.(AU)

Daily activity patterns and occurrence of Leopardus guttulus (Carnivora, Felidae) in Lami Biological Reserve, southern Brazil / Padrões de atividade diária e ocorrência de Leopardus guttulus (Carnivora, Felidae) na Reserva Biológica do Lami, sul do Brasil

Daily activity patterns are important elements of species behavior that reflect how they interact with their environment and with other related species. To investigate these patterns is crucial to understand how environmental or community changes may affect this behavior in each particular species. Within the Felidae family, research becomes fundamental to assess how small wild cats respond to local conditions and pressures, once there is a large gap in studies addressing such issues. Leopardus guttulus (Hensel, 1872) is an endangered species classified as Vulnerable (VU) at a regional and global level, being threatened mainly by the loss and fragmentation of its habitats. The aim of this study is to document the daily activity patterns of L. guttulus at the Lami Biological Reserve, and the influence of seasonality and temperature on those patterns. We also aimed to quantify how many individuals were using the Biological Reserve during the study period and evaluate their permanence in the area. We obtained 25 independent records for L. guttulus, which was the only cat species recorded at the site during the study period. In general, the species presented a cathemeral habit, being active throughout the 24 hours of the day, but with a more crepuscular/nocturnal activity in the spring and summer. The relationship between the species activity and temperature showed that more than 70% of the records were obtained in a narrow range of 10-17°C. We identified at least two individuals that remained at the site from four to six months of the year, with a higher detection frequency between August and November. Our results showed some interesting trends for the temporal activity of L. guttulus, suggesting flexibility related to seasonality, and the importance of the biological reserve to the preservation of this cat species in the southern limit of its distribution.(AU)

Os padrões de atividade diária são elementos importantes do comportamento das espécies que refletem como elas interagem com seu ambiente e com outras espécies relacionadas. Investigar esses padrões é crucial para entender como as mudanças ambientais ou na comunidade podem afetar esse comportamento em cada espécie em particular. Dentro da família Felidae, os felinos silvestres de menor porte sofrem com uma grande lacuna de estudos nesse sentido, e pesquisas se tornam fundamentais para avaliar como eles respondem às condições e pressões locais. Leopardus guttulus (Hensel, 1872) é uma espécie ameaçada de extinção classificada como Vulnerável (VU) em nível regional e mundial, sendo ameaçada principalmente pela perda e fragmentação de seus habitats. O objetivo deste estudo é documentar o padrão de atividade diária de L. guttulus na Reserva Biológica do Lami e verificar a influência da sazonalidade e da temperatura nestes padrões. Nós também tentamos identificar o número de indivíduos usando a reserva biológica durante o período monitorado e avaliar o tempo de permanência destes na área. Obtivemos 25 registros independentes para L. guttulus, sendo a única espécie de felídeo silvestre registrada no local durante o período amostrado. No geral a espécie apresentou um hábito catemeral com atividade ao longo das 24 horas do dia, mas com uma maior atividade crepuscular/noturna nas estações da primavera e verão. A relação entre a atividade da espécie e a temperatura mostrou que mais de 70% dos registros foram obtidos em uma estreita faixa de temperatura de 10-17°C. Nós identificamos pelo menos dois indivíduos que permaneceram no local durante quatro a seis meses no ano, com maior frequência de detecção nos meses entre agosto e novembro. Nossos resultados demonstram algumas tendências interessantes sobre a atividade temporal de L. guttulus, sugerindo uma flexibilidade sazonal, e demonstram também a importância da reserva biológica para a preservação desta espécie no limite sul de sua distribuição.(AU)

Daily activity patterns and occurrence of Leopardus guttulus (Carnivora, Felidae) in Lami Biological Reserve, southern Brazil / Padrões de atividade diária e ocorrência de Leopardus guttulus (Carnivora, Felidae) na Reserva Biológica do Lami, sul do Brasil

Daily activity patterns are important elements of species behavior that reflect how they interact with their environment and with other related species. To investigate these patterns is crucial to understand how environmental or community changes may affect this behavior in each particular species. Within the Felidae family, research becomes fundamental to assess how small wild cats respond to local conditions and pressures, once there is a large gap in studies addressing such issues. Leopardus guttulus (Hensel, 1872) is an endangered species classified as Vulnerable (VU) at a regional and global level, being threatened mainly by the loss and fragmentation of its habitats. The aim of this study is to document the daily activity patterns of L. guttulus at the Lami Biological Reserve, and the influence of seasonality and temperature on those patterns. We also aimed to quantify how many individuals were using the Biological Reserve during the study period and evaluate their permanence in the area. We obtained 25 independent records for L. guttulus, which was the only cat species recorded at the site during the study period. In general, the species presented a cathemeral habit, being active throughout the 24 hours of the day, but with a more crepuscular/nocturnal activity in the spring and summer. The relationship between the species’ activity and temperature showed that more than 70% of the records were obtained in a narrow range of 10-17°C. We identified at least two individuals that remained at the site from four to six months of the year, with a higher detection frequency between August and November. Our results showed some interesting trends for the temporal activity of L. guttulus, suggesting flexibility related to seasonality, and the importance of the biological reserve to the preservation of this cat species in the southern limit of its distribution.

Os padrões de atividade diária são elementos importantes do comportamento das espécies que refletem como elas interagem com seu ambiente e com outras espécies relacionadas. Investigar esses padrões é crucial para entender como as mudanças ambientais ou na comunidade podem afetar esse comportamento em cada espécie em particular. Dentro da família Felidae, os felinos silvestres de menor porte sofrem com uma grande lacuna de estudos nesse sentido, e pesquisas se tornam fundamentais para avaliar como eles respondem às condições e pressões locais. Leopardus guttulus (Hensel, 1872) é uma espécie ameaçada de extinção classificada como Vulnerável (VU) em nível regional e mundial, sendo ameaçada principalmente pela perda e fragmentação de seus habitats. O objetivo deste estudo é documentar o padrão de atividade diária de L. guttulus na Reserva Biológica do Lami e verificar a influência da sazonalidade e da temperatura nestes padrões. Nós também tentamos identificar o número de indivíduos usando a reserva biológica durante o período monitorado e avaliar o tempo de permanência destes na área. Obtivemos 25 registros independentes para L. guttulus, sendo a única espécie de felídeo silvestre registrada no local durante o período amostrado. No geral a espécie apresentou um hábito catemeral com atividade ao longo das 24 horas do dia, mas com uma maior atividade crepuscular/noturna nas estações da primavera e verão. A relação entre a atividade da espécie e a temperatura mostrou que mais de 70% dos registros foram obtidos em uma estreita faixa de temperatura de 10-17°C. Nós identificamos pelo menos dois indivíduos que permaneceram no local durante quatro a seis meses no ano, com maior frequência de detecção nos meses entre agosto e novembro. Nossos resultados demonstram algumas tendências interessantes sobre a atividade temporal de L. guttulus, sugerindo uma flexibilidade sazonal, e demonstram também a importância da reserva biológica para a preservação desta espécie no limite sul de sua distribuição.

Optimized broad-range real-time PCR-based method for bacterial screening of platelet concentrates

Abstract Bacterial contamination of blood components remains a major challenge in transfusion medicine, particularly, platelet concentrates (PCs) due to the storage conditions that support bacterial proliferation. In this study, we develop a rapid, sensitive and specific real-time PCR protocol for bacterial screening of PCs. An internally controlled real-time PCR-based method was optimized and validated with our proprietary 16S Universal PCR Master Mix (IBMP/Fiocruz), which targets a conserved region of the bacterial 16S rRNA gene. Nonspecific background DNA was completely eliminated by treating the PCR Master Mix with ethidium monoazide (EMA). A lower limit of detection was observed for 10 genome equivalents with an observed Ct value of 34±1.07 in calibration curve generated with 10-fold serial dilutions of E. coli DNA. The turnaround time for processing, including microbial DNA purification, was approximately 4 hours. The developed method showed a high sensitivity with no non-specific amplification and a lower time-to-detection than traditional microbiological methods, demonstrating it to be an efficient means of screening pre-transfusion PCs.

Resumo A contaminação bacteriana dos componentes sanguíneos é um grande desafio na medicina transfusional, principalmente nos concentrados de plaquetas (PCs) devido às condições de armazenamento que favorecem a proliferação bacteriana. Neste estudo, desenvolvemos um protocolo de PCR em tempo real rápido, sensível e específico para a triagem bacteriana de PCs. Um método baseado em PCR em tempo real, controlado internamente, foi otimizado e validado com um Master Mix Universal PCR 16S (IBMP / Fiocruz), que detecta uma região conservada do gene 16S rRNA bacteriano. O background de DNA não específico foi completamente eliminado tratando a PCR Master Mix com monoazida de etídio (EMA). O limite de detecção inferior observado foi de 10 cópias equivalentes do genoma com um valor de Ct 34 ± 1,07, a curva de calibração foi gerada com diluições seriada de 10 vezes do DNA de E. coli. O tempo de processamento, incluindo a purificação microbiana do DNA, foi de aproximadamente 4 horas. O método desenvolvido mostrou alta sensibilidade sem amplificação inespecífica e menor tempo de detecção do que os métodos microbiológicos tradicionais, demonstrando ser um meio eficiente de triagem de PCs pré-transfusionais.

Correlação estatística entre parâmetros microscópicos e microbiológicos em pimenta-do-reino moída (Piper nigrum L) comercializada em Minas Gerais / Statistical correlation between microscopic and microbiological parameters in ground black pepper (Pipper nigrum L) sold in Minas Gerais

A ausência de Boas Práticas de Fabricação durante a colheita, processamento e manuseio da pimenta-do-reino pode acarretar a contaminação do produto com sujidades microscópicas e microrganismos. Foram analisadas 227 amostras de pimenta-do-reino, comercializadas em Minas Gerais, coletadas entre 2008 e 2018, quanto à presença de fragmentos de pelo de roedor e de insetos, coliformes a 45°C ou Escherichia coli e Salmonella spp. Para verificar se havia correlação entre os contaminantes, foi empregado método estatístico de regressão linear múltipla. As análises microscópicas evidenciaram presença de fragmentos de pelo de roedor e de insetos em 26,0% e 30,5% das amostras, respectivamente, em valores superiores ao limite tolerado pela RDC 14/2014. Quanto às análises microbiológicas, 10% das amostras apresentaram coliformes a 45°C ou E. coli acima dos limites tolerados pela RDC 12/2001 e em 8,8% das amostras foi detectada presença de Salmonella spp. A avaliação estatística mostrou que houve correlação entre presença de fragmentos de insetos e de pelos de roedor e a contaminação por Salmonella spp. em pimenta-do-reino. Os resultados demonstraram a importância das análises microscópica e microbiológica simultaneamente para detecção dos contaminantes presentes bem como das possíveis relações existentes entre eles e a melhor compreensão dos fatores que favorecem as contaminações.

The absence of Good Manufacturing Practices during harvesting, processing and handling of black pepper can lead to contamination of the product with microscopic dirt and microrganisms. Two hundred and twenty seven black pepper samples, commercialized in Minas Gerais, collected between 2008 and 2018, were analyzed for the presence of rodent and insect fragments, coliforms at 45°C or Escherichia coli and Salmonella spp. To verify whether there was a correlation between the contaminants, a statistical method of multiple linear regression was used. Microscopic analysis showed the presence of rodent and insect fragments in 26.0% and 30.5% of the samples, respectively, in values above the limit tolerated by RDC14/2014. As for the microbiological analysis, 10% of the samples presented coliforms at 45°C or E.coli above the limits tolerated by the RDC 12/2001 and in 8.8% of the samples Salmonella spp. were detected. The statistical evaluation showed that there was a relationship between the presence of insect fragments and rodent hair and contamination by Salmonella spp. in black pepper. The results demonstrated the importance of simultaneous microscopic and microbiological analysis to detect the contaminants present, as well as the possible relationships between them and better understanding of the factors that favor contamination.

Correlação estatística entre parâmetros microscópicos e microbiológicos em pimenta-do-reino moída (Piper nigrum L) comercializada em Minas Gerais / Statistical correlation between microscopic and microbiological parameters in ground black pepper (Pipper nigrum L) sold in Minas Gerais

A ausência de Boas Práticas de Fabricação durante a colheita, processamento e manuseio da pimenta-do-reino pode acarretar a contaminação do produto com sujidades microscópicas e microrganismos. Foram analisadas 227 amostras de pimenta-do-reino, comercializadas em Minas Gerais, coletadas entre 2008 e 2018, quanto à presença de fragmentos de pelo de roedor e de insetos, coliformes a 45°C ou Escherichia coli e Salmonella spp. Para verificar se havia correlação entre os contaminantes, foi empregado método estatístico de regressão linear múltipla. As análises microscópicas evidenciaram presença de fragmentos de pelo de roedor e de insetos em 26,0% e 30,5% das amostras, respectivamente, em valores superiores ao limite tolerado pela RDC 14/2014. Quanto às análises microbiológicas, 10% das amostras apresentaram coliformes a 45°C ou E. coli acima dos limites tolerados pela RDC 12/2001 e em 8,8% das amostras foi detectada presença de Salmonella spp. A avaliação estatística mostrou que houve correlação entre presença de fragmentos de insetos e de pelos de roedor e a contaminação por Salmonella spp. em pimenta-do-reino. Os resultados demonstraram a importância das análises microscópica e microbiológica simultaneamente para detecção dos contaminantes presentes bem como das possíveis relações existentes entre eles e a melhor compreensão dos fatores que favorecem as contaminações.(AU)

The absence of Good Manufacturing Practices during harvesting, processing and handling of black pepper can lead to contamination of the product with microscopic dirt and microrganisms. Two hundred and twenty seven black pepper samples, commercialized in Minas Gerais, collected between 2008 and 2018, were analyzed for the presence of rodent and insect fragments, coliforms at 45°C or Escherichia coli and Salmonella spp. To verify whether there was a correlation between the contaminants, a statistical method of multiple linear regression was used. Microscopic analysis showed the presence of rodent and insect fragments in 26.0% and 30.5% of the samples, respectively, in values above the limit tolerated by RDC14/2014. As for the microbiological analysis, 10% of the samples presented coliforms at 45°C or E.coli above the limits tolerated by the RDC 12/2001 and in 8.8% of the samples Salmonella spp. were detected. The statistical evaluation showed that there was a relationship between the presence of insect fragments and rodent hair and contamination by Salmonella spp. in black pepper. The results demonstrated the importance of simultaneous microscopic and microbiological analysis to detect the contaminants present, as well as the possible relationships between them and better understanding of the factors that favor contamination.(AU)

Detection of virulence factors in coagulase-negative Staphylococcus spp. strains isolated from Emmental cheese / Detecção de fatores de virulência em cepas de Staphylococcus spp. coagulase negativos isoladas de queijo Emmental

Food prepared with products derived from animals are involved in most cases of staphylococcal poisoning; therefore, the research of Staphylococcus spp. in Emmental cheese is more applicable. The objective of this study was to identify coagulase-negative Staphylococcus spp. (CNS) in cheese using biochemical and molecular techniques to detect the presence of nine genes responsible for the production of enterotoxins. From 180 samples analyzed, 204 CNS strains were obtained and identified as being 46 (22.6%) S. saprophyticus strains, 27 (13.2%) S. hominis spp. hominis strains, 22 (10.8%) S. sciuri strains, 21 (10.3%) S. xylosus strains, 19 (9.3%) S. epidermidis strains, 19 (9.3%) S. haemolyticus strains, 17 (8.3%) S. lentus strains, 17 (8.3%) S. warneri strains, 11 (5.4%) S. equorum strains and 5 (2.5%) S. cohnni . Using the PCRm protocol, 14 (6.9%) strains with the presence of the genes on the enterotoxin E (SEE)11 (78.6%), J (SEJ) 1 (7%), C (SEC) 1 (7%) and I (SEI) 1 (7%) were detected. Based on the results, the type of package is not interfered of growth and isolated that Staphylococcus spp. in cheese. It was observed that bacteria capacity to produce coagulase cannot be understood as an indicative of enterotoxigenicity; therefore, the CNS should be considered as a target of importance in the epidemiology of staphylococcal intoxications. It can be concluded that CNS need to be included in bacterial foodborne disease research, since the genes responsible for the production of toxins were detected and none of the studied samples presented Staphylococcus spp. counting above the limits allowed by legislation.(AU)

Os alimentos preparados com produtos de origem animal são os mais envolvidos em casos de intoxicação alimentar estafilocócica; portanto a pesquisa do Staphylococcus spp. em queijos tipo Emmental é relevante. O objetivo foi isolar e identificar espécies de Staphylococcus coagulase negativas (CNS)de queijo Emmental acondicionado em vários tipos de embalagem, por meio de técnicas bacteriológicas e bioquímicas e detectar, por PCR, a presença de nove genes responsáveis pela produção de enterotoxinas. Das 180 amostras, foram isoladas 204 cepas de CNS, que foram identificadas por provas bioquímicas como: 46 (22,6%) S. saprophyticus, 27 (13,2%) S. hominis spp. hominis, 22 (10,8%) S. sciuri, 21 (10,3%) S. xylosus, 19 (9,3%) S. epidermidis , 19 (9,3%) S. haemolyticus , 17 (8,3%) S. lentus , 17 (8,3%) S. warneri , 11(5,4%) S. equorum e 5 (2,5%) S. cohnii . Na PCR multiplex, em 14 (6,9%) isolados foi detectada a presença dos genes para enterotoxina E (SEE), em 11 (78,6%) J (SEJ), em 1 (7%) C (SEC) e em 1 (7%) I (SEI). Com base nos resultados, o tipo de embalagem não interferiu na multiplicação dos Staphylococcus spp. isolados dos queijos. Neste estudo, verificou-se que a capacidade para a produção de coagulase pela bactéria não pode ser concebida como indicativa de enterotoxigenicidade, portanto devem-se considerar os CNS como objeto de importância na epidemiologia das intoxicações estafilocócicas, fazendo-se necessária a atenção com relação à pesquisa dos CNS nos alimentos, uma vez que foram detectados genes responsáveis pela produção de toxinas, e nenhuma das amostras apresentou contagem para Staphylococcus spp. acima do limite permitido pela legislação.(AU)

Detection of virulence factors in coagulase-negative Staphylococcus spp. strains isolated from Emmental cheese / Detecção de fatores de virulência em cepas de Staphylococcus spp. coagulase negativos isoladas de queijo Emmental

Food prepared with products derived from animals are involved in most cases of staphylococcal poisoning; therefore, the research of Staphylococcus spp. in Emmental cheese is more applicable. The objective of this study was to identify coagulase-negative Staphylococcus spp. (CNS) in cheese using biochemical and molecular techniques to detect the presence of nine genes responsible for the production of enterotoxins. From 180 samples analyzed, 204 CNS strains were obtained and identified as being 46 (22.6%) S. saprophyticus strains, 27 (13.2%) S. hominis spp. hominis strains, 22 (10.8%) S. sciuri strains, 21 (10.3%) S. xylosus strains, 19 (9.3%) S. epidermidis strains, 19 (9.3%) S. haemolyticus strains, 17 (8.3%) S. lentus strains, 17 (8.3%) S. warneri strains, 11 (5.4%) S. equorum strains and 5 (2.5%) S. cohnni . Using the PCRm protocol, 14 (6.9%) strains with the presence of the genes on the enterotoxin E (SEE)11 (78.6%), J (SEJ) 1 (7%), C (SEC) 1 (7%) and I (SEI) 1 (7%) were detected. Based on the results, the type of package is not interfered of growth and isolated that Staphylococcus spp. in cheese. It was observed that bacteria capacity to produce coagulase cannot be understood as an indicative of enterotoxigenicity; therefore, the CNS should be considered as a target of importance in the epidemiology of staphylococcal intoxications. It can be concluded that CNS need to be included in bacterial foodborne disease research, since the genes responsible for the production of toxins were detected and none of the studied samples presented Staphylococcus spp. counting above the limits allowed by legislation.(AU)

Os alimentos preparados com produtos de origem animal são os mais envolvidos em casos de intoxicação alimentar estafilocócica; portanto a pesquisa do Staphylococcus spp. em queijos tipo Emmental é relevante. O objetivo foi isolar e identificar espécies de Staphylococcus coagulase negativas (CNS)de queijo Emmental acondicionado em vários tipos de embalagem, por meio de técnicas bacteriológicas e bioquímicas e detectar, por PCR, a presença de nove genes responsáveis pela produção de enterotoxinas. Das 180 amostras, foram isoladas 204 cepas de CNS, que foram identificadas por provas bioquímicas como: 46 (22,6%) S. saprophyticus, 27 (13,2%) S. hominis spp. hominis, 22 (10,8%) S. sciuri, 21 (10,3%) S. xylosus, 19 (9,3%) S. epidermidis , 19 (9,3%) S. haemolyticus , 17 (8,3%) S. lentus , 17 (8,3%) S. warneri , 11(5,4%) S. equorum e 5 (2,5%) S. cohnii . Na PCR multiplex, em 14 (6,9%) isolados foi detectada a presença dos genes para enterotoxina E (SEE), em 11 (78,6%) J (SEJ), em 1 (7%) C (SEC) e em 1 (7%) I (SEI). Com base nos resultados, o tipo de embalagem não interferiu na multiplicação dos Staphylococcus spp. isolados dos queijos. Neste estudo, verificou-se que a capacidade para a produção de coagulase pela bactéria não pode ser concebida como indicativa de enterotoxigenicidade, portanto devem-se considerar os CNS como objeto de importância na epidemiologia das intoxicações estafilocócicas, fazendo-se necessária a atenção com relação à pesquisa dos CNS nos alimentos, uma vez que foram detectados genes responsáveis pela produção de toxinas, e nenhuma das amostras apresentou contagem para Staphylococcus spp. acima do limite permitido pela legislação.(AU)

New record of the fringed leaf frog, Cruziohyla craspedopus (Anura: Phyllomedusidae) extends its eastern range limit / Novo registro de ocorrência da perereca-franjada, Cruziohyla craspedopus (Anura: Phyllomedusidae) estende o limite oriental de sua distribuição

The fringed leaf frog, Cruziohyla craspedopus is rarely sampled in the Brazilian Amazon, probably due to low detection probability associated with its arboreal habit. The knowledge about the species distribution stems from successive additions of occasional occurrence records, which indicate that the species is widely distributed throughout Amazonia. We present new occurrence records to update the geographic range of the species, which is hereby extended 224 km to the northeast. We also present morphological data from collected specimens and discuss the updated range from the geographic and ecological points of view. We show that the range of the leaf frog crosses several main tributaries along the southern bank of the Amazonas River, although the species occurrence is apparently limited by a minimum tree cover of 70%.(AU)

A perereca franjada, Cruziohyla craspedopus é raramente amostrada na Amazônia brasileira, provavelmente devido à baixa probabilidade de detecção associada ao seu hábito arborícola. A distribuição geográfica conhecida da espécie é resultado da adição sucessiva de registros ocasionais de ocorrência, que indicam que ela é amplamente distribuída na Amazônia. Nós apresentamos novos pontos de ocorrência para atualizar a distribuição geográfica da espécie, estendendo-a em 224 km na direção nordeste. Nós também apresentamos dados morfológicos dos espécimes coletados e discutimos a distribuição atualizada sob pontos de vista geográfico e ecológico. Mostramos que a distribuição de pererecas franjadas cruza vários tributários da margem sul do Rio Amazonas, embora esteja aparentemente limitada por cobertura arbórea mínima de 70%.(AU)

Análise da qualidade físico-química com ênfase na detecção de fraudes em méis comercializados no Estado do Rio de Janeiro / Analysis of the physical-chemical quality with an emphasis in the detection of frauds in means marketed in the State of Rio de Janeiro

O presente estudo avaliou a qualidade e a possível ocorrência de fraudes em méis comercializados no Estado do Rio de Janeiro. Dez amostras de méis foram adquiridas em comércios da região, onde foram submetidas às analises de qualidade (HMF, Açucares Redutores, Sacarose aparente e Umidade) estabelecidas pela Normativa nº11 de outubro de 2000 do MAPA (BRASIL, 2000), bem como a analises específicas para detecção de fraudes (Reação de Fiehe, Reação de Lund e Teste de Lugol). Os resultados demonstraram que os níveis de sacarose aparente e umidade apresentaram-se acima do limite estabelecido pela normativa. Os outros parâmetros de qualidade avaliados estavam dentro do permitido. Nos testes específicos de adulteração apenas uma amostra (10%) foi positiva, tanto para o Teste de Lugol, quanto para Reação de Fiehe, confirmando a presença de fraude e a necessidade de maior fiscalização desses produtos.(AU)

Análise da qualidade físico-química com ênfase na detecção de fraudes em méis comercializados no Estado do Rio de Janeiro / Analysis of the physical-chemical quality with an emphasis in the detection of frauds in means marketed in the State of Rio de Janeiro

O presente estudo avaliou a qualidade e a possível ocorrência de fraudes em méis comercializados no Estado do Rio de Janeiro. Dez amostras de méis foram adquiridas em comércios da região, onde foram submetidas às analises de qualidade (HMF, Açucares Redutores, Sacarose aparente e Umidade) estabelecidas pela Normativa nº11 de outubro de 2000 do MAPA (BRASIL, 2000), bem como a analises específicas para detecção de fraudes (Reação de Fiehe, Reação de Lund e Teste de Lugol). Os resultados demonstraram que os níveis de sacarose aparente e umidade apresentaram-se acima do limite estabelecido pela normativa. Os outros parâmetros de qualidade avaliados estavam dentro do permitido. Nos testes específicos de adulteração apenas uma amostra (10%) foi positiva, tanto para o Teste de Lugol, quanto para Reação de Fiehe, confirmando a presença de fraude e a necessidade de maior fiscalização desses produtos.

Determinação de baixas concentrações de lítio em águas de abastecimento público por cromatografia de íons: validação de método / Determination of low concentrations of lithium in public water supply by the ion chromatography: method validation

Esta nota apresenta a validação de um método para realizar a determinação de lítio em concentrações menores do que 40 μg L-1 em amostras de águas de abastecimento público, utilizandose cromatografia de íons e calibração externa, com a curva analítica obtida por regressão linear (mínimos quadrados ordinários). O método é seletivo, e apresenta limite de detecção igual a 1,0 μg L-1 e limite de quantificação igual a 2,0 μg L-1 . Os ensaios de recuperação em três níveis de concentração apresentaram resultados entre 99,4 e 101,9%. Na avaliação da precisão nos mesmos três níveis de concentração, os coeficientes de variação exibiram valores entre 1,1 e 4,0%.

This note presents the validation of a method for determining the lithium at concentrations less than 40 μg L-1 in the public water supply, by using the ion chromatography and external calibration, and the analytical curve was obtained by the linear regression (ordinary least squares). The employed method is selective, showing the detection limit equal to 1.0 μg L-1 and the quantification limit equal to 2.0 μg L-1 . Recovery tests in three concentration levels presented results from 99.4 to 101.9%. On the precision evaluation in the same three concentration levels, the coefficients of variation exhibited values between 1.1 and 4.0%.

Determinação de baixas concentrações de lítio em águas de abastecimento público por cromatografia de íons: validação de método / Determination of low concentrations of lithium in public water supply by the ion chromatography: method validation

Esta nota apresenta a validação de um método para realizar a determinação de lítio em concentrações menores do que 40 μg L-1 em amostras de águas de abastecimento público, utilizandose cromatografia de íons e calibração externa, com a curva analítica obtida por regressão linear (mínimos quadrados ordinários). O método é seletivo, e apresenta limite de detecção igual a 1,0 μg L-1 e limite de quantificação igual a 2,0 μg L-1 . Os ensaios de recuperação em três níveis de concentração apresentaram resultados entre 99,4 e 101,9%. Na avaliação da precisão nos mesmos três níveis de concentração, os coeficientes de variação exibiram valores entre 1,1 e 4,0%.(AU)

This note presents the validation of a method for determining the lithium at concentrations less than 40 μg L-1 in the public water supply, by using the ion chromatography and external calibration, and the analytical curve was obtained by the linear regression (ordinary least squares). The employed method is selective, showing the detection limit equal to 1.0 μg L-1 and the quantification limit equal to 2.0 μg L-1 . Recovery tests in three concentration levels presented results from 99.4 to 101.9%. On the precision evaluation in the same three concentration levels, the coefficients of variation exhibited values between 1.1 and 4.0%.(AU)