Antibacterial activity of Thymus vulgaris (thyme) essential oil against strains of Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae and Staphylococcus saprophyticus isolated from meat product / Atividade antibacteriana do óleo essencial de Thymus vulgaris (tomilho) contra cepas de Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae e Staphylococcus saprophyticus isoladas de produtos cárneos

Meat products represent an important component of the human diet and are a good source of nutrients. Food-borne microorganisms are the main pathogens that cause human diseases as a result of food consumption, especially products of animal origin. The objective of the present research was to verify the antibacterial activity of the essential oil of Thymus vulgaris against strains of Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus saprophyticus isolated from meat products. For this, the analyses of Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC) were performed in microdilution plates. The association of the product with antimicrobials was also studied using disk diffusion. And the anti-adherent activity, which was determined in the presence of sucrose, in glass tubes. Thyme oil showed a strong inhibitory activity against K. pneumoniae, P. aeruginosa and S. saprophyticus, with the MIC values ranging from 64 to 512 µg/mL, and bactericidal effect for most strains, with MBC values ranging from 256 to 1,024 µg/mL. T. vulgaris oil exhibited varied interactions in association with the antimicrobials, with synergistic (41.67%), indifferent (50%) and antagonistic (8.33%) effects. Regarding the anti-adherent activity, the test product was effective in inhibiting the adherence of all bacterial strains under study. Therefore, thyme oil presents itself as an antibacterial and anti-adherent agent against K. pneumoniae, P. aeruginosa and S. saprophyticus, being a natural product that can represent an interesting alternative in the efforts to combat foodborne diseases.

Os produtos cárneos representam um importante componente da dieta humana e constituem uma boa fonte de nutrientes. Microrganismos de origem alimentar são os principais patógenos que causam doenças humanas como resultado do consumo de alimentos, principalmente, produtos de origem animal. O objetivo da presente pesquisa foi verificar a atividade antibacteriana do óleo essencial de Thymus vulgaris frente às cepas de Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa e Staphylococcus saprophyticus isoladas de produtos cárneos. Para isso, foram realizadas as análises de Concentração Inibitória Mínima (CIM) e a Concentração Bactericida Mínima (CBM) em placas de microdiluição. Assim como, o estudo de associação do produto com antimicrobianos, realizado por difusão em disco. E a atividade antiaderente, que foi determinada na presença de sacarose, em tubos de vidro. O óleo de tomilho apresentou uma forte atividade inibitória contra K. pneumoniae, P. aeruginosa e S. saprophyticus, com os valores de CIM variando entre 64 a 512 µg/mL, e efeito bactericida para a maioria das cepas, com valores de CBM entre 256 a 1.024 µg/mL. O óleo de T. vulgaris exibiu interações variadas na associação com os antimicrobianos, com efeitos sinérgicos (41,67%), indiferente (50%) e antagonista (8,33%). Em relação a atividade antiaderente, o produto teste foi eficaz na inibição a aderência de todas cepas bacterianas em estudo. Portanto, o óleo de tomilho apresenta-se como agente antibacteriano e antiaderente frente a K. pneumoniae, a P. aeruginosa e a S. saprophyticus, sendo um produto natural que pode representar uma alternativa interessante nos esforços para combater doenças transmitidas por alimentos.

Morphomolecular identification and considerations of the infestation site adaptations of Pricea multae (Thoracocotylidae: Priceinae) from Scomberomorus commerson, off Arabian Gulf, Saudi Arabia / Identificação morfomolecular e considerações sobre as adaptações ao local de infestação de Pricea multae (Thoracocotilidae: Priceinae) coletado de Scomberomorus commerson, no Golfo Árabe, Arábia Saudita

Monogeneans Pricea multae naturally infested 42 of the 120 (35%) mackerel fish (Scomberomorus commerson) examined. For the first time, an infestation was discovered off the coast of Jubil in the Arabian Gulf of Saudi Arabia. Based on the structure clarified through light and electron microscopy of mounted specimens and molecular analysis of rDNA and measurements of this monogenean parasite was identified as P. multae. The tegumental surface of the parasite was characterized by tegumental ridges running transversally, generating folds in both the dorsal and ventral surfaces of the body at regular intervals. The study clarified the importance and function of the micro-structures, such as tegumental folds, perforations, sensory ganglia present on the parasite's surface, and the larger hamulus supported by a relatively unmodified internal spine. This monogenean parasite has adapted to its host infestation site uniquely.(AU)

Monogenéticos Pricea multae infestaram naturalmente 42 dos 120 (35%) peixes cavala (Scomberomorus commerson) examinados. Pela primeira vez, uma infestação foi descoberta na costa de Jubil, no Golfo Árabe, Arábia Saudita. Com base no entendimento de suas estruturas, por meio da microscopia de luz e de varredura eletrônica em amostras analisadas pela biologia molecular do rDNA e as medições, esse parasito monogenético foi identificado como P. multae. A superfície tegumental do parasito foi caracterizada por cristas tegumentais dispostas transversalmente, gerando dobras nas superfícies dorsal e ventral do corpo em intervalos regulares. O estudo esclareceu a importância e a função das microestruturas, como dobras e perfurações no tegumento, gânglios sensoriais que estavam presentes na superfície do parasito e o hâmulo maior apoiado por uma coluna interna relativamente não modificada. Esse parasito monogenético se adaptou exclusivamente ao local de infestação no hospedeiro.(AU)

Molecular detection of visceral leishmaniasis in dogs from Barão de Melgaço, Pantanal region of Mato Grosso, Brazil / Detecção molecular de leishmaniose visceral em cães do município de Barão de Melgaço, Pantanal Mato-Grossense, Brasil

The increasing expansion of visceral leishmaniasis (VL) in the Brazilian territory evidences the need for studies focused on the main reservoir of this parasite: the dog. This study aimed to conduct an epidemiological survey in the municipality of Barão de Melgaço, Pantanal region of the state of Mato Grosso (MT), Brazil. Conventional polymerase chain reaction (PCR) and qualitative SYBR®Green real-time PCR (qPCR) were used to diagnose canine VL (CVL) and characterize the factors associated with this infection. Of the 402 dogs that had blood samples collected, 31 presented the parasite DNA, representing a prevalence of 7.71% in the population studied. Positivity indices for PCR and qPCR were 3.48 (14/402) and 7.21% (29/402), respectively. Comparison of the results obtained by both techniques showed moderate agreement (Kappa = 0.5364). Of the independent variables analyzed, presence of clinical signs (p≤0.05) was the only one associated with CVL. Based on this study, we conclude that VL is a circulating disease, with relatively low prevalence, in dogs of Barão de Melgaço/MT, and that the presence of clinical signs is the only variable associated with canine infection.(AU)

A crescente expansão da leishmaniose visceral (LV) no território brasileiro evidencia a necessidade de estudos voltados ao principal reservatório doméstico do parasito: o cão. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi realizar um inquérito epidemiológico no município de Barão de Melgaço, região do Pantanal Mato-grossense, utilizando as técnicas de reação em cadeia pela polimerase convencional (PCR) e teste qualitativo SYBR®Green real-time PCR (qPCR) para o diagnóstico da LV canina (LVC), além de caracterizar os fatores associados a infecção. Do total de 402 cães que tiveram amostras sanguíneas coletadas, 31 apresentaram o DNA do parasito, perfazendo uma prevalência de 7,71% na população estudada. Os índices de positividade para a PCR e qPCR foram de 3,48% (14/402) e 7,21% (29/402), respectivamente. A comparação dos resultados obtidos por ambas técnicas apresentou moderada concordância (Kappa = 0,5364). Das variáveis independentes analisadas, a presença de sinais clínicos (p≤0,05) foi a única associada a ocorrência de LVC. Com base neste estudo, concluímos que a LV está circulando, com prevalência relativamente baixa, em cães de Barão de Melgaço/MT, sendo a presença de sinais clínicos a única variável associada à infecção canina.(AU)

Molecular detection of visceral leishmaniasis in dogs from Barão de Melgaço, Pantanal region of Mato Grosso, Brazil / Detecção molecular de leishmaniose visceral em cães do município de Barão de Melgaço, Pantanal Mato-Grossense, Brasil

The increasing expansion of visceral leishmaniasis (VL) in the Brazilian territory evidences the need for studies focused on the main reservoir of this parasite: the dog. This study aimed to conduct an epidemiological survey in the municipality of Barão de Melgaço, Pantanal region of the state of Mato Grosso (MT), Brazil. Conventional polymerase chain reaction (PCR) and qualitative SYBR®Green real-time PCR (qPCR) were used to diagnose canine VL (CVL) and characterize the factors associated with this infection. Of the 402 dogs that had blood samples collected, 31 presented the parasite DNA, representing a prevalence of 7.71% in the population studied. Positivity indices for PCR and qPCR were 3.48 (14/402) and 7.21% (29/402), respectively. Comparison of the results obtained by both techniques showed moderate agreement (Kappa = 0.5364). Of the independent variables analyzed, presence of clinical signs (p≤0.05) was the only one associated with CVL. Based on this study, we conclude that VL is a circulating disease, with relatively low prevalence, in dogs of Barão de Melgaço/MT, and that the presence of clinical signs is the only variable associated with canine infection.(AU)

A crescente expansão da leishmaniose visceral (LV) no território brasileiro evidencia a necessidade de estudos voltados ao principal reservatório doméstico do parasito: o cão. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi realizar um inquérito epidemiológico no município de Barão de Melgaço, região do Pantanal Mato-grossense, utilizando as técnicas de reação em cadeia pela polimerase convencional (PCR) e teste qualitativo SYBR®Green real-time PCR (qPCR) para o diagnóstico da LV canina (LVC), além de caracterizar os fatores associados a infecção. Do total de 402 cães que tiveram amostras sanguíneas coletadas, 31 apresentaram o DNA do parasito, perfazendo uma prevalência de 7,71% na população estudada. Os índices de positividade para a PCR e qPCR foram de 3,48% (14/402) e 7,21% (29/402), respectivamente. A comparação dos resultados obtidos por ambas técnicas apresentou moderada concordância (Kappa = 0,5364). Das variáveis independentes analisadas, a presença de sinais clínicos (p≤0,05) foi a única associada a ocorrência de LVC. Com base neste estudo, concluímos que a LV está circulando, com prevalência relativamente baixa, em cães de Barão de Melgaço/MT, sendo a presença de sinais clínicos a única variável associada à infecção canina.(AU)

Validation of Alternative Methods of Detection of Salmonella Spp. in Experimentally Contaminated Poultry Environmental Samples

The analysis of Salmonella in the feces and the birds environment is a way of monitoring the colonization in the flocks and verifying the need for the introduction of stricter controls, in such a way that the results of the tests should be known before being sent for slaughter. The polymerase chain reaction (PCR), as well as other rapid methods represent alternatives increasingly used to detect enteric pathogens, but they need proof of effectiveness for their wide use. The aim of this study was to evaluate the equivalence between the results obtained by the methods: real-time PCR (BAX® System), Modified Rappaport-Vassiliadis Semi-solid Medium (MSRV) (ISO 6579) and the traditional method of official reference in Brazil for research of S. Typhimurium and S. Enteritidis in poultry samples. Two hundred and fifty-two samples of disposable shoe covers (DSC) and 252 samples of feces were infected with an average of 2 to 3 log CFU/g of each serovar, and the same samples without fortification were evaluated by the three methods. Five hundred and four diagnoses were obtained with satisfactory results in terms of repeatability (greater than 80%), reproducibility (mean 83,1%), sensitivity (81% to 100%), specificity (95% to 100%), and accuracy (90% to 100%). The compliance test verified that there was not a significant difference between the alternative and the official methods, allowing us to state that the methodologies have had equivalent performances.(AU)

Validation of Alternative Methods of Detection of Salmonella Spp. in Experimentally Contaminated Poultry Environmental Samples

The analysis of Salmonella in the feces and the birds environment is a way of monitoring the colonization in the flocks and verifying the need for the introduction of stricter controls, in such a way that the results of the tests should be known before being sent for slaughter. The polymerase chain reaction (PCR), as well as other rapid methods represent alternatives increasingly used to detect enteric pathogens, but they need proof of effectiveness for their wide use. The aim of this study was to evaluate the equivalence between the results obtained by the methods: real-time PCR (BAX® System), Modified Rappaport-Vassiliadis Semi-solid Medium (MSRV) (ISO 6579) and the traditional method of official reference in Brazil for research of S. Typhimurium and S. Enteritidis in poultry samples. Two hundred and fifty-two samples of disposable shoe covers (DSC) and 252 samples of feces were infected with an average of 2 to 3 log CFU/g of each serovar, and the same samples without fortification were evaluated by the three methods. Five hundred and four diagnoses were obtained with satisfactory results in terms of repeatability (greater than 80%), reproducibility (mean 83,1%), sensitivity (81% to 100%), specificity (95% to 100%), and accuracy (90% to 100%). The compliance test verified that there was not a significant difference between the alternative and the official methods, allowing us to state that the methodologies have had equivalent performances.

Macroscopic, histological, and molecular aspects of Sarcocystis spp. infection in tissues of cattle / Aspecto Macroscópico, histológico e molecular de Sarcocystis spp. em tecidos de bovinos e ovinos

The macroscopic, histological, and molecular aspects of Sarcocystis spp. were examined in the tissues of two cattle and four sheep, 16 and eight fragments analyzed respectively, condemned in the slaughterhouse. All 24 samples were collected and analyzed for detecting macrocysts and macroscopic lesions. Subsequently, subdivided for direct examination, polymerase chain reaction and histopathological examination. All sheep tissues samples had grossly white round to oval tissue cysts, ranging from 0.3 to 1 cm in diameter. In contrast, cattle tissues did not present grossly visible cysts but had randomly distributed white-yellow foci with irregular contours. All samples from cattle and sheep had microscopic cysts. In the histological examination of sheep tissues, circular to elongated, encapsulated, basophilic structures ranging from 30 to 3,000 µm in length and 20 to 1,000 µm in width were observed within the skeletal muscle fibers. In cattle tissues, all cardiac muscle four fragments analyzed contained circular to elongated basophilic structures inside cardiomyocytes and in some Purkinje fibers. PCR were performed using the primers: 2L and 3H. In conclusion, all 24 tissues were infected with Sarcocystis spp., and S. gigantea (in sheep) and S. cruzi (in cattle). were the identified species by sequencing.(AU)

Os aspectos macroscópicos, histológicos e moleculares de Sarcocystis spp. foram examinados nos tecidos de dois bovinos e quatro ovinos, 16 e oito fragmentos analisados, respectivamente, condenados no matadouro. Todas as 24 amostras foram coletadas e analisadas para detecção de macrocistos e lesões macroscópicas. Posteriormente, subdivididas para exame direto, reação em cadeia da polimerase e exame histopatológico. Todas as amostras de tecidos de ovelha apresentavam cistos grosseiramente visíveis, caracterizados como brancos, de redondos a ovais e estruturas variando de 0,3 a 1 cm de diâmetro. Em contraste, os tecidos de bovinos não apresentavam cistos grosseiramente visíveis, mas tinham focos branco-amarelos com contornos irregulares, distribuídos aleatoriamente. Todas as amostras de bovinos e ovinos apresentavam cistos microscópicos. No exame histológico de tecidos ovinos foram observadas estruturas basofílicas circulares a alongadas, encapsuladas, variando de 30 a 3.000 µm de comprimento e 20 a 1.000 µm de largura dentro das fibras do músculo esquelético. Nos tecidos de bovinos, todos os quatro fragmentos de músculo cardíaco analisados continham estruturas basofílicas circulares a alongadas, dentro dos cardiomiócitos e em algumas fibras de Purkinje. PCRs foram realizadas utilizando-se os "primers" 2L e 3H. Em conclusão, todos os 24 tecidos estavam infectados com Sarcocystis spp., sendo S. gigantea (em ovinos) e S. cruzi (em bovinos) as espécies identificadas por sequenciamento.(AU)

Preparation and process optimization of microbial organic copper as a feed additive / Preparação e otimização do processo de cobre orgânico microbiano como aditivo alimentar

As an essential trace element for animals, copper significantly contributes to the growth and health of animals. Compared to inorganic trace elements, organic trace elements are better supplements; notably, they are acquired through microbial transformation. Therefore, we screened for copper-enriched microorganisms from high copper content soil to obtain organic copper. Sodium diethyldithio carbamate trihydrate was applied as a chromogenic agent for determining micro amounts of intracellular copper through spectrophotometry. In total, 50 fungi were isolated after the successful application of the screening platform for copper-rich microbes. Following morphological and molecular biology analyses, the N-2 strain, identified as Aspergillus niger sp. demonstrated showed better copper enrichment potential than others. Notably, the strain tolerance to copper was nearly thrice that of Saccharomyces cerevisiae, up to 1600mg/L. The content of the organic bound copper was 22.84mg Cu/g dry cell. Using the Central Composite Design (CCD) response surface method, we optimized the fermentation condition (inoculation amount, 13%; temperature, 28(C; pH, 5.0). Compared to the original strain results under the single factor fermentation condition, we reported an increase by 24.18% under the optimized conditions. Collectively, these findings provide a reference for uncovering new and low-cost organic copper additives.(AU)

Como elemento traço essencial para os animais, o cobre contribui significativamente para o crescimento e saúde dos animais. Comparado aos oligoelementos inorgânicos, os oligoelementos orgânicos são melhores suplementos; notavelmente, eles são adquiridos através de transformação microbiana. Portanto, nós selecionamos microorganismos enriquecidos com cobre de solos com alto teor de cobre para obter cobre orgânico. O carbamato de sódio diethyldithio trihidratado foi aplicado como agente cromogênico para a determinação de micro quantidades de cobre intracelular através da espectrofotometria. No total, 50 fungos foram isolados após a aplicação bem sucedida da plataforma de triagem para micróbios ricos em cobre. Após análises morfológicas e de biologia molecular, a cepa N-2, identificada como Aspergillus niger sp. demonstrou um melhor potencial de enriquecimento de cobre do que outras. Notavelmente, a tolerância da estirpe ao cobre foi quase três vezes maior que a da Saccharomyces cerevisiae, até 1600mg/L. O conteúdo de cobre ligado orgânico era de 22,84mg Cu/g de célula seca. Usando o método de superfície de resposta Central Composite Design (CCD), nós otimizamos a condição de fermentação (quantidade de inoculação, 13%; temperatura, 28C; pH, 5,0). Em comparação com os resultados da deformação original sob a condição de fermentação de fator único, relatamos um aumento de 24,18% sob as condições otimizadas. Coletivamente, estas descobertas fornecem uma referência para descobrir novos aditivos de cobre orgânico de baixo custo.(AU)

Evaluation of an active and early surveillance methodology for visceral leishmaniasis by molecular detection in road-killed wild fauna / Avaliação de metodologia de vigilância ativa e precoce da leishmaniosevisceral por detecção molecular em fauna silvestre atropelada

The present study aimed to evaluate a methodology for active surveillance of visceral leishmaniasis by detecting Leishmania DNA in organs of wild road-killed animals from November 2016 to October 2018 in the North of Paraná, Brazil. The collection points of road-killed wild animals were georeferenced. The animals were autopsied and samples of bone marrow, lymph node, liver, spleen, and ear skin were collected. Genomic DNA was extracted and subjected to PCR for amplification of Leishmania spp. 18S, kinetoplastic DNA (kDNA), HSP70, and ITS1 genes, and DNA sequencing was performed. The primers used for the amplification of kDNA, ITS1, and HSP70 genes presented non-specific results. Of the 66 mammals collected from 24 different municipalities, one Southern Tamandua (Tamandua tetradactyla) presented DNA of Leishmania spp. in lymph nodes by 18S PCR. DNA sequencing confirmed the results of the subgenus, Viannia, identification. We suggest using the methodology showed in the present study in the active and early surveillance of visceral leishmaniasis in a non-endemic area.(AU)

O objetivo do presente estudo foi avaliar uma metodologia de vigilância ativa da leishmaniose visceral por meio da detecção de DNA de Leishmania em órgãos de animais silvestres atropelados, de novembro de 2016 a outubro de 2018, no Norte do Paraná, Brasil. Os pontos de coleta dos animais silvestres atropelados foram georreferenciados. Os animais foram autopsiados e amostras de medula óssea, linfonodo, fígado, baço, e pele de orelha foram coletados. DNA genômico foi extraído e submetido à PCR para amplificação de quatro diferentes regiões de Leishmania spp.: 18S, kDNA, HSP70 e ITS1, sequenciamento de DNA foi realizado. Os iniciadores utilizados para a amplificação dos genes kDNA, ITS1 e HSP70 apresentaram resultados inespecíficos. Dos 66 mamíferos coletados em 24 diferentes municípios, um tamanduá-mirim (Tamandua tetradactyla) apresentou DNA de Leishmania spp. em linfonodo na PCR, que amplificou o gene 18S. O sequenciamento de DNA confirmou o resultado e demonstrou a presença do subgênero Viannia. Sugere-se o uso da metodologia apresentada no presente estudo na vigilância ativa e precoce da leishmaniose visceral em área não endêmica.(AU)

Effect of management (ecological and conventional) on functional groups of soil microorganisms in coffee agroecosystems with different resilience to climate variability, Colombia

The effect of management (ecological and conventional) on functional groups of microorganisms of soil in agroecosystems with different resilience scores reported to climate variability in Anolaima, Colombia was evaluated. Were found clustering associated with management and cellulolytic bacteria and fungi abundances. No differences found in diversity of phosphate solubilizing or nitrogen-fixing microorganisms, related to management. The diversity of microbial functional groups was affected by the climatic condition of sampling season. Management was relevant in relationships between resilience scores to climate variability and cellulolytic microorganisms; in ecological agroecosystems, biodiversity knowledge, agroecological main structure, and the participation of farmers in organizations were important.

Effect of management (ecological and conventional) on functional groups of soil microorganisms in coffee agroecosystems with different resilience to climate variability, Colombia

The effect of management (ecological and conventional) on functional groups of microorganisms of soil in agroecosystems with different resilience scores reported to climate variability in Anolaima, Colombia was evaluated. Were found clustering associated with management and cellulolytic bacteria and fungi abundances. No differences found in diversity of phosphate solubilizing or nitrogen-fixing microorganisms, related to management. The diversity of microbial functional groups was affected by the climatic condition of sampling season. Management was relevant in relationships between resilience scores to climate variability and cellulolytic microorganisms; in ecological agroecosystems, biodiversity knowledge, agroecological main structure, and the participation of farmers in organizations were important.(AU)

Listeria monocytogenes en leche de vaca producida por granjas lecheras familiares / Listeria monocytogenes in cow's milk produced by family-owned dairy farms / Listeria monocytogenes em leite de vaca produzido por propriedades leiteiras familiares

Refrigeration is an important milk preservation method. However, milk quality may deteriorate if the product is refrigerated for long periods, mainly due to the growth of psychrotrophic bacteria. This group of microorganisms includes pathogenic genera, most notably Listeria monocytogenes. The detection of this bacterium in food is important, given its pathogenic effects on human and animal health and also its economic relevance. This study focused on detecting the presence of L. monocytogenes in milk samples collected at small family-owned dairy farms. Samples were cultivated on PALCAM and ALOA agars for microbiological analysis and a molecular analysis by polymerase chain reaction was performed for the detection of L. monocytogenes. Despite the negative results obtained in both these analyses, further studies are recommended to confirm or refute the negligible effect of L. monocytogenes on small dairy farms.

A refrigeração é um método importante de preservação do leite. No entanto, a qualidade do leite pode piorar se o produto for mantido sob refrigeração por longos períodos, principalmente devido ao crescimento de bactérias psicrotróficas. Este grupo de microorganismos inclui gêneros patogênicos, mais notavelmente Listeria monocytogenes. A detecção dessa bactéria em alimentos é importante, tendo em vista seus efeitos patogênicos na saúde humana e animal e também sua relevância econômica. Este estudo teve como objetivo detectar a presença de L. monocytogenes em amostras de leite coletadas em pequenas fazendas leiteiras de propriedade familiar. As amostras foram cultivadas em ágar PALCAM e ALOA para análise microbiológica e análise molecular por reação em cadeia da polimerase para detecção de L. monocytogenes. Apesar dos resultados negativos obtidos em ambas as análises, estudos adicionais são recomendados para confirmar ou refutar o efeito insignificante de L. monocytogenes em pequenas fazendas leiteiras.

La refrigeración es un método importante de conservación de la leche. Sin embargo, la calidad de la leche puede deteriorarse si el producto se refrigera durante períodos prolongados, principalmente debido al crecimiento de bacterias psicrotróficas. Este grupo de microorganismos incluye géneros patógenos, más notablemente Listeria monocytogenes. La detección de esta bacteria en los alimentos es importante, dados sus efectos patógenos sobre la salud humana y animal y también su relevancia económica. Este estudio se centró en detectar la presencia de L. monocytogenes en muestras de leche recolectadas en pequeñas granjas lecheras familiares. Las muestras se cultivaron en agares PALCAM y ALOA para análisis microbiológico y se realizó un análisis molecular por reacción en cadena de la polimerasa para la detección de L. monocytogenes. A pesar de los resultados negativos obtenidos en ambos análisis, se recomiendan más estudios para confirmar o refutar el efecto insignificante de L. monocytogenesen pequeñas granjas lecheras.

Listeria monocytogenes en leche de vaca producida por granjas lecheras familiares / Listeria monocytogenes in cow's milk produced by family-owned dairy farms / Listeria monocytogenes em leite de vaca produzido por propriedades leiteiras familiares

Refrigeration is an important milk preservation method. However, milk quality may deteriorate if the product is refrigerated for long periods, mainly due to the growth of psychrotrophic bacteria. This group of microorganisms includes pathogenic genera, most notably Listeria monocytogenes. The detection of this bacterium in food is important, given its pathogenic effects on human and animal health and also its economic relevance. This study focused on detecting the presence of L. monocytogenes in milk samples collected at small family-owned dairy farms. Samples were cultivated on PALCAM and ALOA agars for microbiological analysis and a molecular analysis by polymerase chain reaction was performed for the detection of L. monocytogenes. Despite the negative results obtained in both these analyses, further studies are recommended to confirm or refute the negligible effect of L. monocytogenes on small dairy farms.(AU)

A refrigeração é um método importante de preservação do leite. No entanto, a qualidade do leite pode piorar se o produto for mantido sob refrigeração por longos períodos, principalmente devido ao crescimento de bactérias psicrotróficas. Este grupo de microorganismos inclui gêneros patogênicos, mais notavelmente Listeria monocytogenes. A detecção dessa bactéria em alimentos é importante, tendo em vista seus efeitos patogênicos na saúde humana e animal e também sua relevância econômica. Este estudo teve como objetivo detectar a presença de L. monocytogenes em amostras de leite coletadas em pequenas fazendas leiteiras de propriedade familiar. As amostras foram cultivadas em ágar PALCAM e ALOA para análise microbiológica e análise molecular por reação em cadeia da polimerase para detecção de L. monocytogenes. Apesar dos resultados negativos obtidos em ambas as análises, estudos adicionais são recomendados para confirmar ou refutar o efeito insignificante de L. monocytogenes em pequenas fazendas leiteiras.(AU)

La refrigeración es un método importante de conservación de la leche. Sin embargo, la calidad de la leche puede deteriorarse si el producto se refrigera durante períodos prolongados, principalmente debido al crecimiento de bacterias psicrotróficas. Este grupo de microorganismos incluye géneros patógenos, más notablemente Listeria monocytogenes. La detección de esta bacteria en los alimentos es importante, dados sus efectos patógenos sobre la salud humana y animal y también su relevancia económica. Este estudio se centró en detectar la presencia de L. monocytogenes en muestras de leche recolectadas en pequeñas granjas lecheras familiares. Las muestras se cultivaron en agares PALCAM y ALOA para análisis microbiológico y se realizó un análisis molecular por reacción en cadena de la polimerasa para la detección de L. monocytogenes. A pesar de los resultados negativos obtenidos en ambos análisis, se recomiendan más estudios para confirmar o refutar el efecto insignificante de L. monocytogenesen pequeñas granjas lecheras.(AU)

First report of detection of Toxoplasma gondii DNA in oysters (Crassostrea sp) in the state of Maranhão / Primeiro relato da detecção de DNA de Toxoplasma gondii em ostras (Crassostrea sp) no Estado do Maranhão

The aim of this study was to report on detection of Toxoplasma gondii DNA in oysters (Crassostrea sp.) in the state of Maranhão. To conduct this study, 200 farmed oysters were acquired in the municipality of Raposa and 100 in Paço do Lumiar; and a further 100 oysters were taken from the natural stock in the municipality of Primeira Cruz. This total of 400 specimens sampled was divided into 80 pools composed of five animals each. The gills and visceral mass of each oyster were removed for DNA extraction (per pool of oysters), using a commercial kit. The nested PCR technique (with the primer SAG-1) was then used to investigate any presence of protozoa. This molecular technique demonstrated the presence of DNA of T. gondii in 2.5% of the pools of oysters (n = 2/80): these oysters were exclusively from farms. The results from this study allow the conclusion that oysters of the genus Crassostrea that are farmed in the state of Maranhão are capable of filtering oocysts of T. gondii and maintaining them in their tissues. They are therefore potential sources of contamination for humans and other animals.(AU)

Objetivou-se com este estudo relatar a detecção do DNA de Toxoplasma gondii em ostras (Crassostrea sp.) no estado do Maranhão. Para a realização do estudo foram adquiridas 200 ostras de cultivo do município de Raposa, e 100 de Paço do Lumiar, além de 100 ostras extraídas de estoque natural do município de Primeira Cruz. Do total de 400 exemplares amostrados, formaram-se 80 pools em que cada pool foi constituído por cinco animais. De cada ostra foi procedida à retirada das brânquias e massa visceral, seguido da extração de DNA de cada pool de ostras, com a utilização de kit comercial. Posteriormente, realizou-se a pesquisa do protozoário por meio da técnica de nested PCR (primer SAG-1). Com a técnica molecular utilizada, foi diagnosticado o DNA do protozoário pesquisado em 2,5% (n=2/80) pools de ostras oriundas exclusivamente de cultivo. Com os resultados obtidos neste estudo, conclui-se que ostras do gênero Crassostrea sp., cultivadas no estado do Maranhão, são capazes de filtrar e manter nos seus tecidos oocistos de T. gondii, sendo, portanto, fontes potenciais de contaminação para seres humanos e outros animais.(AU)

Media preferences, micro-morphometric analysis, and cardinal growth temperature determination for Phytophthora infestans sensu lato isolated from different hosts in Colombia / Preferências de mídia, análise micro-morfométricos e determinação da temperature cardeal de crescimento para Phytophthora infestans sensu lato isolada de diferentes hospedeiros na Colômbia

During the last years Phytophthora infestans sensu lato (Mont. De Bary) has caused epidemics in Colombia in Andean fruit crops such as Solanum quitoense and Solanum betaceum. Establishment of new or modified experimental procedures to study this pathogen is a mandatory subject for scientists. Twelve isolates of Phytophthora spp. obtained from six different Solanum hosts in Colombia were used to evaluate the effect of five different solid media for growth and ability to produce sporangia and liberate zoospores. Determination of the best media culture and optimal growth temperature were necessary to perform measurements and correlate the provenance of isolates with phenotypic traits. Modifications were made to use ingredients available in local markets on the following media: lime bean agar (LBA), Tree tomato or tree tomato agar (TA), carrot agar (AZ), Rye A modified agar and 32% non-clarified V8 agar. Cardinal temperature determination was performed at 10, 15, 20, and 25 °C. Morphometric traits were measured once the optimal media culture and temperature were defined. Correlation analysis showed that there is a relationship between the host and isolate's preferences for media culture and optimal growth temperature. In addition, the production of characteristic sporangia, sporangiophore and mycelia was related with the media type used and host from which the isolate was collected. In this work useful information was provided to make studies about the biology and development of isolates gathered from cultivated and wild non-traditional hosts.(AU)

Durante os últimos anos Phytophthora infestans sensu lato causou epidemias na Colômbia em lavouras de frutos andinos, como Solanum quitoense e Solanum betaceum. Estabelecimento de procedimentos experimentais novos ou modificados para estudar este patógeno é um assunto obrigatório para os cientistas. Doze isolados de Phytophthora spp. obtidos de seis diferentes hosts Solanum na Colômbia foram usados para avaliar o efeito de cinco diferentes mídias sólidas para o crescimento e a capacidade de produzir esporângios e libertar zoósporos. Determinação da melhor cultura de mídia e temperatura de crescimento ideal foram necessárias para realizar medições e correlacionar a proveniência de isolados com traços fenotípica. Foram feitas modificações para usar os ingredientes disponíveis nos mercados locais nos seguintes meios: ágar do feijão de cal (LBA), tomate da árvore ou ágar do tomate da árvore (TA), ágar da cenoura (AZ), centeio um ágar modificado e 32% de ágar-V8 não-esclarecido. A determinação da temperatura Cardeal foi realizada em 10, 15, 20 e 25 °C. Traços morfométricos foram medidos uma vez que a cultura de mídia ideal e temperatura foram definidos. Análise de correlação mostrou que há uma relação entre o hospedeiro e isolar as preferências para a cultura de mídia e temperatura de crescimento ideal. Além disso, a produção de esporângios característica, esporangióforo e mycelia foi relacionada com o tipo de mídia utilizado e hospedeiros a partir do qual o isolado foi coletado. Neste trabalho foram fornecidas informações úteis para fazer estudos sobre a biologia e o desenvolvimento de isolados recolhidos de hospedeiros não-tradicionais cultivados e selvagens.(AU)

Detecção molecular de grupos de bactérias fermentadoras no rúmen de bovinos e bubalinos em Santarém-PA / Molecular detection of groups of fermentative bacteria in the rumen of cattle and buffaloes in Santarém-PA

O objetivo deste trabalho foi detectar grupos de bactérias do conteúdo ruminal de bubalinos e bovinos utilizando técnicas de Biologia Molecular. As coletas foram realizadas no Frigorífico Mararu, na cidade de Santarém-PA. Foram coletadas 10 amostras de líquido ruminal, sendo 5 de bovinos e 5 de bubalinos. A extração de DNA foi realizada segundo o protocolo do Kit Brasílica baseado em sílica. Para a detecção das bactérias, foram utilizados os primers 16S L2 e 1472, AR e BR. Foi utilizado para a PCR, num volume de 25 µl, o kit PCR Mix LGC 2X. As amostras foram corridas em gel de agarose 3% corado com Azul de Bromofenol e GelRed. Após a corrida, o gel foi visualizado em radiação UV. Os primers utilizados na amplificação da região do gene 16S rRNA se mostraram eficientes para os estudos de detecção das bactérias ruminais. Foi observada a diferença entre bovinos e bubalinos, onde os primers L2 e 1472 amplificaram em bovinos o grupo de bactérias fibrolíticas e em bubalinos o grupo de bactérias não fibrolíticas. Enquanto os primers AR e BR amplificaram o grupo de bactérias não fibrolíticas para bovinos e o grupo de bactérias fibrolíticas para bubalinos. Os trabalhos de identificação de bactérias ruminais em bubalinos é escasso, por isso a importância dos resultados encontrados. Houve diferença nos grupos de microrganismos encontrados nos ruminantes entre bubalinos e bovinos, e no tipo de primer utilizado, mostrando a importância do estudo das bactérias presentes no rúmen. O estudo realizado necessita de uma abordagem maior, como o sequenciamento das amostras de DNA para se identificar melhor as espécies presentes dentro dos diferentes grupos detectados. Outras técnicas de Biologia Molecular podem ser utilizadas para uma melhor acurácia dos dados encontrados, como o uso da PCR em tempo real.

The objective of this work was to detect groups of bacteria in the rumen content of buffaloes and cattle using molecular biology techniques. The samplings were carried out in the Fridge Mararu, in the city of Santarém-PA. Were collected 10 samples of ruminal fluid, being 5 to buffaloes and 5 of cattle. DNA extraction was performed according to the protocol of the Kit Brasílica based on silica. For the detection of bacteria, we used primers 16S L2 and 1472, AR and BR. It was used for PCR, a volume of 25 µl PCR kit Mix LGC 2X. The samples were run on 3% agarose gel stained with bromophenol blue and GelRed. The gel was visualized on a UV radiation. The primers used in the amplification of the region of the 16S rRNA gene was shown to be effective for the studies of detection of ruminal bacteria. It was observed the difference between cattle and buffalo, where the primers L2 and 1472 amplified in cattle the group of fibrolytic bacteria and in buffaloes the group of not fibrolytic bacteria. While the primers AR and BR amplified the group of not fibrolytic bacteria forcattle and the group of fibrolytic bacteria to Buffalo. The work of identification of ruminal bacteria in buffaloes is scarce, so the importance of the results found. There was a difference in the groups of microorganisms found in ruminants between buffaloes and cattle, and the type of primer used, showing the importance of the study of bacteria in the rumen. The study requires a larger approach, such as the sequencing of the DNA samples to better identify the species present within the different groups were detected. Other Molecular Biologytechniques can be used for better accuracy of data found, such as the use of PCR in real time.

Detecção molecular de grupos de bactérias fermentadoras no rúmen de bovinos e bubalinos em Santarém-PA / Molecular detection of groups of fermentative bacteria in the rumen of cattle and buffaloes in Santarém-PA

O objetivo deste trabalho foi detectar grupos de bactérias do conteúdo ruminal de bubalinos e bovinos utilizando técnicas de Biologia Molecular. As coletas foram realizadas no Frigorífico Mararu, na cidade de Santarém-PA. Foram coletadas 10 amostras de líquido ruminal, sendo 5 de bovinos e 5 de bubalinos. A extração de DNA foi realizada segundo o protocolo do Kit Brasílica baseado em sílica. Para a detecção das bactérias, foram utilizados os primers 16S L2 e 1472, AR e BR. Foi utilizado para a PCR, num volume de 25 µl, o kit PCR Mix LGC 2X. As amostras foram corridas em gel de agarose 3% corado com Azul de Bromofenol e GelRed. Após a corrida, o gel foi visualizado em radiação UV. Os primers utilizados na amplificação da região do gene 16S rRNA se mostraram eficientes para os estudos de detecção das bactérias ruminais. Foi observada a diferença entre bovinos e bubalinos, onde os primers L2 e 1472 amplificaram em bovinos o grupo de bactérias fibrolíticas e em bubalinos o grupo de bactérias não fibrolíticas. Enquanto os primers AR e BR amplificaram o grupo de bactérias não fibrolíticas para bovinos e o grupo de bactérias fibrolíticas para bubalinos. Os trabalhos de identificação de bactérias ruminais em bubalinos é escasso, por isso a importância dos resultados encontrados. Houve diferença nos grupos de microrganismos encontrados nos ruminantes entre bubalinos e bovinos, e no tipo de primer utilizado, mostrando a importância do estudo das bactérias presentes no rúmen. O estudo realizado necessita de uma abordagem maior, como o sequenciamento das amostras de DNA para se identificar melhor as espécies presentes dentro dos diferentes grupos detectados. Outras técnicas de Biologia Molecular podem ser utilizadas para uma melhor acurácia dos dados encontrados, como o uso da PCR em tempo real.(AU)

The objective of this work was to detect groups of bacteria in the rumen content of buffaloes and cattle using molecular biology techniques. The samplings were carried out in the Fridge Mararu, in the city of Santarém-PA. Were collected 10 samples of ruminal fluid, being 5 to buffaloes and 5 of cattle. DNA extraction was performed according to the protocol of the Kit Brasílica based on silica. For the detection of bacteria, we used primers 16S L2 and 1472, AR and BR. It was used for PCR, a volume of 25 µl PCR kit Mix LGC 2X. The samples were run on 3% agarose gel stained with bromophenol blue and GelRed. The gel was visualized on a UV radiation. The primers used in the amplification of the region of the 16S rRNA gene was shown to be effective for the studies of detection of ruminal bacteria. It was observed the difference between cattle and buffalo, where the primers L2 and 1472 amplified in cattle the group of fibrolytic bacteria and in buffaloes the group of not fibrolytic bacteria. While the primers AR and BR amplified the group of not fibrolytic bacteria forcattle and the group of fibrolytic bacteria to Buffalo. The work of identification of ruminal bacteria in buffaloes is scarce, so the importance of the results found. There was a difference in the groups of microorganisms found in ruminants between buffaloes and cattle, and the type of primer used, showing the importance of the study of bacteria in the rumen. The study requires a larger approach, such as the sequencing of the DNA samples to better identify the species present within the different groups were detected. Other Molecular Biologytechniques can be used for better accuracy of data found, such as the use of PCR in real time. (AU)

Detection of a putative novel genotype of Ehrlichia sp. from opossums (Didelphis aurita) from Brazil / Detecção de um suposto novo genótipo de Ehrlichia sp. em gambás (Didelphis aurita) do Brasil

Erlichiosis affects humans and animals worldwide. Its distribution and prevalence depends on the presence of tick vectors and hosts in one geographic area. The aim of the present study was to investigate the occurrence of Ehrlichia spp. and Anaplasma spp. in opossums (Didelphis sp.) from the State of Rio de Janeiro, southeast Brazil. Blood samples from 37 animals were tested for these two pathogens using molecular methods. One animal (2.7%) was positive for Ehrlichia sp. by 16S rRNA-based nested PCR. In a phylogenetic analysis based on the 16S rRNA gene using the maximum likelihood method and the GTRGAMMA+I evolutionary model, we detected a novel Ehrlichia sp. genotype closely related to genotypes of E. canis previously reported in dogs from Brazil. To the authors knowledge, this is the first molecular detection of Ehrlichia sp. in opossums from this State in the southeastern region of the country.(AU)

A erliquiose afeta seres humanos e animais em todo o mundo. Sua distribuição e prevalência dependem da presença de vetores de carrapatos e hospedeiros em uma área geográfica. O objetivo do presente estudo foi investigar a ocorrência de Ehrlichia sp. e Anaplasma sp. em gambás (Didelphis sp.) do Estado do Rio de Janeiro, sudeste do Brasil. Amostras de sangue de 37 animais foram testadas para estes dois patógenos usando métodos moleculares. Um animal (2,7%) foi positivo para Ehrlichia sp. baseado em 16S rRNA-nested PCR. Em uma análise filogenética baseada no gene 16S rRNA usando o método de máxima verossimilhança e o modelo evolutivo GTRGAMMA + I, detectamos um novo genótipo de Ehrlichia sp. intimamente relacionado a genótipos de E. canis previamente relatados em cães do Brasil. Para o conhecimento dos autores, esta é a primeira detecção molecular de Ehrlichia sp. em gambás deste estado na região sudeste do país.(AU)

Molecular detection of Bartonella, Ehrlichia and Mycoplasma in feral dogs of El Pedregal de San Angel Ecological Reserve in Mexico City / Detecção molecular de Bartonella, Ehrlichia e Mycoplasma em cães selvagens da Reserva Ecológica El Pedregal de San Angel, na Cidade do México

Free-ranging and feral dogs represent a group of unattended companion animals. They impact wild animal populations by predating native species, displacing predators and introducing exotic pathogens. The aim of this work was to describe the molecular occurrence of Rickettsia, Ehrlichia, Anaplasma, Mycoplasma and Bartonella in feral dogs. The study was carried out in the last relict of a protected area in Mexico City. Blood clots samples from 19 dogs were obtained and analyzed for detection of specific fragments of the 16S-rRNA gene for Anaplasma, Ehrlichia and Mycoplasma and citrate synthase (gltA) for Bartonella and Rickettsia. Our results showed that DNA from three bacteria species (Bartonella vinsonii subsp. berkhoffii, Ehrlichia canis and Mycoplasma haemocanis) was present with frequencies ranging from 5.3 to 15.8%. This is the first record of B. vinsonii subsp. berkhoffii and M. haemocanis in dogs from México, and also the first finding of Ehrlichia canis in Mexico City. It is important to perform surveillance of feral dog populations in order to identify the impact of these pathogens on wild animal populations and Public Health in order to establish prevention and protection programs.(AU)

Cães errantes e selvagens representam um grupo de animais de companhia livres. Eles impactam as populações de animais selvagens pela predação de espécies nativas, deslocando predadores e introduzindo patógenos exóticos. O objetivo deste trabalho foi descrever a ocorrência molecular de Rickettsia, Ehrlichia, Anaplasma, Mycoplasma e Bartonella em cães selvagens. O estudo foi realizado no último ecossistema de uma área protegida na Cidade do México. Amostras de coágulos sanguíneos de 19 cães foram obtidas e analisadas para detecção de fragmentos específicos do gene 16S-rRNA para Anaplasma, Ehrlichia e Mycoplasma e citrato sintase (gltA) para Bartonella e Rickettsia. Nossos resultados mostraram que o DNA de três espécies de bactérias (Bartonella vinsonii subsp. berkhoffii, Ehrlichia canis e Mycoplasma haemocanis) estava presente com frequências variando de 5,3 a 15,8%. Este é o primeiro registro de B. vinsonii subsp. berkhoffii e M. haemocanis em cães do México, e também a primeira descrição de Ehrlichia canis na Cidade do México. É importante realizar a vigilância das populações de cães selvagens para identificar o impacto desses patógenos nas populações de animais silvestres e na Saúde Pública, a fim de estabelecer programas de prevenção e proteção.(AU)

Media preferences, micro-morphometric analysis, and cardinal growth temperature determination for Phytophthora infestans sensu lato isolated from different hosts in Colombia

Abstract During the last years Phytophthora infestans sensu lato (Mont. De Bary) has caused epidemics in Colombia in Andean fruit crops such as Solanum quitoense and Solanum betaceum. Establishment of new or modified experimental procedures to study this pathogen is a mandatory subject for scientists. Twelve isolates of Phytophthora spp. obtained from six different Solanum hosts in Colombia were used to evaluate the effect of five different solid media for growth and ability to produce sporangia and liberate zoospores. Determination of the best media culture and optimal growth temperature were necessary to perform measurements and correlate the provenance of isolates with phenotypic traits. Modifications were made to use ingredients available in local markets on the following media: lime bean agar (LBA), Tree tomato or tree tomato agar (TA), carrot agar (AZ), Rye A modified agar and 32% non-clarified V8 agar. Cardinal temperature determination was performed at 10, 15, 20, and 25 °C. Morphometric traits were measured once the optimal media culture and temperature were defined. Correlation analysis showed that there is a relationship between the host and isolates preferences for media culture and optimal growth temperature. In addition, the production of characteristic sporangia, sporangiophore and mycelia was related with the media type used and host from which the isolate was collected. In this work useful information was provided to make studies about the biology and development of isolates gathered from cultivated and wild non-traditional hosts.

Resumo Durante os últimos anos Phytophthora infestans sensu lato causou epidemias na Colômbia em lavouras de frutos andinos, como Solanum quitoense e Solanum betaceum. Estabelecimento de procedimentos experimentais novos ou modificados para estudar este patógeno é um assunto obrigatório para os cientistas. Doze isolados de Phytophthora spp. obtidos de seis diferentes hosts Solanum na Colômbia foram usados para avaliar o efeito de cinco diferentes mídias sólidas para o crescimento e a capacidade de produzir esporângios e libertar zoósporos. Determinação da melhor cultura de mídia e temperatura de crescimento ideal foram necessárias para realizar medições e correlacionar a proveniência de isolados com traços fenotípica. Foram feitas modificações para usar os ingredientes disponíveis nos mercados locais nos seguintes meios: ágar do feijão de cal (LBA), tomate da árvore ou ágar do tomate da árvore (TA), ágar da cenoura (AZ), centeio um ágar modificado e 32% de ágar-V8 não-esclarecido. A determinação da temperatura Cardeal foi realizada em 10, 15, 20 e 25 °C. Traços morfométricos foram medidos uma vez que a cultura de mídia ideal e temperatura foram definidos. Análise de correlação mostrou que há uma relação entre o hospedeiro e isolar as preferências para a cultura de mídia e temperatura de crescimento ideal. Além disso, a produção de esporângios característica, esporangióforo e mycelia foi relacionada com o tipo de mídia utilizado e hospedeiros a partir do qual o isolado foi coletado. Neste trabalho foram fornecidas informações úteis para fazer estudos sobre a biologia e o desenvolvimento de isolados recolhidos de hospedeiros não-tradicionais cultivados e selvagens.