Ultrasonography of the conceptus development from days 15 to 60 of pregnancy in non-cyclic recipient mares / Ultrassonografia do desenvolvimento do concepto entre 15 e 60 dias de gestação em éguas receptoras acíclicas

The present study evaluated the development of equine conceptus transferred to non-cyclic recipient mares treated with altrenogest. Twenty four mares were used as embryo recipients during the ovulatory phase (Control group; n=8) or anestrus/transitional phases (Altrenogest group; n=16) and were evaluated by transrectal ultrasonography, at five day intervals, to monitor the development of embryonic vesicles from 15 to 45 days of pregnancy and embryo proper/fetus from 20 to 60 days. Embryonic vesicle's features such as shape, embryo location within the vesicle and umbilical cord development were similar between cyclic and non-cyclic recipient mares. The embryonic vesicle and embryo proper/fetus growth was significant (P<0.05) between 15 and 60 days of gestation in Altrenogest and Control groups, except for days 20 to 30, where embryonic vesicle growth decrease was observed (P>0.05). The embryonic vesicle and embryo proper/fetus growth was similar (P>0.05) when gestational days were compared between groups. The similarity in conceptus growth between cyclic and non-cyclic recipient mares during early pregnancy indicates that the uterine environment of non-cyclic recipient mares treated with progestins provides similar conditions for the development of transferred embryos.(AU)

O presente trabalho avaliou o desenvolvimento de conceptos equinos transferidos para éguas receptoras acíclicas, tratadas com altrenogest. Vinte e quatro receptoras gestantes por transferência de embrião durante a fase cíclica (grupo Controle; n=8) ou acíclica (grupo Altrenogest; n=16) foram avaliadas por meio de ultrassonografia transretal, a cada cinco dias, para monitorar o desenvolvimento da vesícula embrionária entre 15 e 45 dias de gestação e embrião/feto dos 20 aos 60 dias. As características da vesícula embrionária quanto ao formato, localização do embrião dentro da vesícula e formação do cordão umbilical foram similares em receptoras cíclicas e acíclicas. O crescimento da vesícula embrionária e embrião/feto foi significativo (P<0,05) entre 15 e 60 dias de gestação nos grupos Altrenogest e Controle, com exceção dos dias 20 a 30, em que redução no crescimento da vesícula embrionária foi observada (P>0,05). O crescimento da vesícula embrionária e embrião/feto também foi similar (P>0,05) entre grupos nos diferentes dias de gestação. A similaridade no crescimento do concepto entre éguas receptoras cíclicas e acíclicas durante o início da gestação indica que o ambiente uterino de receptoras acíclicas, mantidas com progestágeno, oferece condições similares para o desenvolvimento de um embrião transferido.(AU)

Expressão endometrial de receptores de estradiol e progesterona em éguas cíclicas, gestantes e acíclicas tratadas com hormônios esteroidais / Endometrial expression of estradiol and progesterone receptors in cyclic, pregnant and non-cyclic steroid treated mares

A utilização de éguas receptoras cíclicas e acíclicas nos programas de transferência de embriões (TE) é uma prática consagrada na reprodução equina. Uma alternativa vantajosa para criadores e veterinários é o uso das receptoras acíclicas, uma vez que viabiliza a antecipação da estação de monta e reduz o manejo com as receptoras. Para se estabelecer a gestação nestas receptoras, estrógenos e progestinas são administrados, de forma a simular o ambiente hormonal uterino de éguas que se tornam naturalmente gestantes. A administração de estrógenos previamente às progestinas é baseada nos estudos em éguas cíclicas, que mostram que o estradiol, presente no período de estro, estimula a expressão dos seus próprios receptores e dos receptores para progesterona no endométrio. A progesterona, por sua vez, provoca mudanças uterinas que possibilitam o estabelecimento e manutenção da gestação e leva a redução dos receptores de estradiol e de seus próprios receptores durante o diestro e início da gestação. No entanto, pouco se sabe sobre os receptores endometriais de estradiol e progesterona em éguas acíclicas, principalmente utilizadas em programas de TE. O presente trabalho revisa o padrão de expressão gênica dos receptores endometriais de estradiol e progesterona em éguas durante o ciclo estral, início da gestação e submetidas a tratamentos hormonais com estrógenos e progestinas exógenas. (AU)

The use of cyclic and non cyclic recipient mares in embryo transfer (ET) programs is a well established practice in equine reproduction. An advantageous alternative for horse owners and veterinarians is the use of non-cyclic recipients, since it makes possible the anticipation of the breeding season and reduces handling with the recipients. In order to establish pregnancy in the non-cyclic recipients, estrogens and progestins are administered to allow the induction of similar endometrial changes to those which occur in naturally pregnant mares. Administration of estradiol prior to progestins is based on cyclic mares researches, where estradiol produced during estrous stimulates the expression of estrogen and progesterone receptors in the endometrium. On the other hand, progesterone causes uterine changes that allow pregnancy establishment and maintenance. In addition, progesterone leads to reduction of estrogen and progesterone receptors during diestrous in cyclic mares. However, little is known about estrogen and progesterone endometrial receptors in non-cyclic mares, especially used in ET programs. The current study revises the gene expression pattern of estradiol and progesterone endometrial receptors in mares during estrous cycle, early pregnancy and submitted to estrogens and progestins hormonal treatments. (AU)

Expressão endometrial de receptores de estradiol e progesterona em éguas cíclicas, gestantes e acíclicas tratadas com hormônios esteroidais / Endometrial expression of estradiol and progesterone receptors in cyclic, pregnant and non-cyclic steroid treated mares

A utilização de éguas receptoras cíclicas e acíclicas nos programas de transferência de embriões (TE) é uma prática consagrada na reprodução equina. Uma alternativa vantajosa para criadores e veterinários é o uso das receptoras acíclicas, uma vez que viabiliza a antecipação da estação de monta e reduz o manejo com as receptoras. Para se estabelecer a gestação nestas receptoras, estrógenos e progestinas são administrados, de forma a simular o ambiente hormonal uterino de éguas que se tornam naturalmente gestantes. A administração de estrógenos previamente às progestinas é baseada nos estudos em éguas cíclicas, que mostram que o estradiol, presente no período de estro, estimula a expressão dos seus próprios receptores e dos receptores para progesterona no endométrio. A progesterona, por sua vez, provoca mudanças uterinas que possibilitam o estabelecimento e manutenção da gestação e leva a redução dos receptores de estradiol e de seus próprios receptores durante o diestro e início da gestação. No entanto, pouco se sabe sobre os receptores endometriais de estradiol e progesterona em éguas acíclicas, principalmente utilizadas em programas de TE. O presente trabalho revisa o padrão de expressão gênica dos receptores endometriais de estradiol e progesterona em éguas durante o ciclo estral, início da gestação e submetidas a tratamentos hormonais com estrógenos e progestinas exógenas.

The use of cyclic and non cyclic recipient mares in embryo transfer (ET) programs is a well established practice in equine reproduction. An advantageous alternative for horse owners and veterinarians is the use of non-cyclic recipients, since it makes possible the anticipation of the breeding season and reduces handling with the recipients. In order to establish pregnancy in the non-cyclic recipients, estrogens and progestins are administered to allow the induction of similar endometrial changes to those which occur in naturally pregnant mares. Administration of estradiol prior to progestins is based on cyclic mares’ researches, where estradiol produced during estrous stimulates the expression of estrogen and progesterone receptors in the endometrium. On the other hand, progesterone causes uterine changes that allow pregnancy establishment and maintenance. In addition, progesterone leads to reduction of estrogen and progesterone receptors during diestrous in cyclic mares. However, little is known about estrogen and progesterone endometrial receptors in non-cyclic mares, especially used in ET programs. The current study revises the gene expression pattern of estradiol and progesterone endometrial receptors in mares during estrous cycle, early pregnancy and submitted to estrogens and progestins hormonal treatments.

A Mula (Equus mulus) como Receptora de Embriões Equinos (Equus caballus): Aspectos Reprodutivos, Hormonais e Ultrassonográficos da Gestação

O Brasil é um dos países com o maior número de transferências de embriões de equinos do mundo, mas as éguas receptoras são escassas e caras. Uma alternativa é usar mulas acíclicas como receptoras de embriões equinos. O objetivo deste estudo foi comparar pela primeira vez o desenvolvimento embrionário e fetal precoce em mulas e éguas receptoras do 10º ao 60º dia de gestação. Este estudo foi realizado na Fazenda Experimental Gralha Azul da Pontifícia Universidade Católica do Paraná. Cinco éguas de doadores de embriões com idades entre 4 e 10 anos foram utilizadas. Foram utilizados dois grupos de receptores: 10 éguas cíclicas com idades entre 4 e 15 anos (grupo controle) e 7 mulas acíclicas com idades entre 6 e 12 anos. Os animais foram mantidos em piquetes e/ou estábulos e tiveram acesso a água e sal mineral ad libitum, bem como a uma fonte de volumoso e concentrado. As éguas doadoras foram monitoradas diariamente por ultrassonografia transretal (transdutor linear de 5 MHz, A6V Sonoscape, China) após o início do estro. As éguas foram inseminadas artificialmente usando sêmen fresco de um garanhão com fertilidade comprovada. A coleta de embriões das éguas foi realizada 8 dias após a ovulação. Antes da transferência do embrião, as éguas receptoras cíclicas eram examinadas diariamente por ultrassonografia para usar a melhor sincronia com a ovulação da doadora. As mulas acíclicas foram preparadas antes da transferência do embrião com a administração de 17 beta-estradiol (10 mg/mL, 1 mL, im) no dia da ovulação da doadora, e após 2 dias quando a presença de edema uterino foi confirmada, com a administração de Altrenogest (60 mg/mL, 5 mL, im). O diagnóstico de gestação foi realizado por ultrassonografia, 10 dias após a ovulação da doadora. Quando o diagnóstico foi confirmado, a avaliação ultrassonográfica foi realizada diariamente até o 60º dia de gestação. O primeiro dia de detecção da vesícula embrionária foi o Dia 10 por ultrassonografia em ambas as espécies e Dia 20,9 ± 1,3 (Média ± DP) e 21,9 ± 0,9 por palpação transretal em mulas e éguas respectivamente. A fixação da vesícula ocorreu em média no dia 15,7 ± 1,1 em mulas e 16,6 ± 1,7 em éguas. O embrião propriamente dito foi detectado pela primeira vez em mulas (no dia 19,9 ± 1,1) em comparação com as éguas (20,4 ± 1,3). O batimento cardíaco foi observado posteriormente em muares (23,4 ± 1,4) do que em éguas (22,6 ± 0,8). O saco alantóide foi detectado pela primeira vez entre os dias 23 e 26 (25,3 ± 1,1 e 24,6 ± 1,0 em mulas e éguas, respectivamente) e o cordão umbilical foi detectado pela primeira vez no dia 39 (39,7 ± 2,1 x 39,6 ± 1,5 em mulas e éguas, respectivamente). Os diâmetros ovarianos para os ovários esquerdo e direito foram semelhantes para as mulas (21,4 ± 0,4 vs. 21,8 ± 0,4 mm) e para as éguas (45,1 ± 0,4 vs 46,0 ± 0,4). Entretanto, o diâmetro ovariano das éguas (45,5 ± 0,3 mm) foi duas vezes maior (P <0,0001) que as mulas (21,6 ± 0,3 mm). Apenas duas mulas apresentaram o CL acessório que foi observado pela primeira vez nos dias 49 e 51. Dentro dos grupos não houve diferenças entre os cornos esquerdo e direito, gravídicos e não-gravídicos. A média geral não foi diferente entre as mulas (24,6 ± 3,1 mm) e as éguas (25,4 ± 0,1 mm). Como conclusão, de acordo com o nosso conhecimento, este é o primeiro estudo comparativo sobre desenvolvimento embrionário e fetal precoce entre mulas acíclicas e éguas receptoras de embriões equinos. Numerosas semelhanças foram encontradas nos aspectos estudados. Tais achados, associados ao fato de que potros vivos e sadios foram produzidos, sugerem que o uso de mulas acíclicas pode ser considerado como uma alternativa para aumentar a disponibilidade de receptoras em programas equinos de TE.

Brazil is one of the countries with the largest number of equine embryo transfers in the world, but recipients mares are scarce and expensive. One alternative is to use acyclic mules as recipients for equine embryos. The aim of this study was to compare for the first time the embryonic and early fetal development in recipient mules and mares from day 10 to 60 of pregnancy. This study was conducted at the Experimental Farm Gralha Azul of the Pontifical Catholic University of Paraná. Five embryo donor mares aged 4 to 10 years were used. Two groups of recipients were used: 10 cyclic mares aged 4 to 15 years (control group), and 7 acyclic mules aged 6 to 12 years. Animals were kept in paddocks and/or stables and had access to water and mineral salt ad libitum, as well as to a source of roughage and concentrate. Donor mares were monitored daily by transrectal ultrasonography (5-MHz linear transducer, A6V Sonoscape, China) after the beginning of estrus. The mares were artificially inseminated using fresh semen from a stallion with proven fertility. Embryo collection from the mares was performed 8 days after ovulation. Before embryo transfer, cyclic recipient mares were examined daily by ultrasonography to use the most synchronous with the donor's ovulation and have not received any hormonal treatment. The acyclic mules were prepared before the embryo transfer with the administration of 17 beta-estradiol (10 mg/mL, 1 mL, i.m.) on the day of the donor's ovulation, and after 2 days when the presence of uterine edema was confirmed, with the administration of Altrenogest (60 mg/mL, 5 mL, i.m.). The pregnancy diagnosis was carried out by ultrasonography 10 days after ovulation in the donor. When the diagnosis was confirmed, ultrasonographic assessment was carried out daily until day 60 of pregnancy. The first day of detection of an embryonic vesicle was Day 10 by ultrasound in both species and day 20.9 ± 1.3 (Mean ±SD), and 21.9 ± 0.9 by transrectal palpation in mules and mares respectively. Fixation of the vesicle occurred on mean day 15.7 ± 1.1 in mules and 16.6 ± 1.7 in mares. The embryo proper was first detected in mules (on day 19.9 ± 1.1) compared to mares (20.4 ± 1.3) The heart beat was observed later in mules (23.4 ± 1.4) than in mares (22.6 ± 0.8). The allantoic sac was first detected between days 23 and 26 (25.3 ± 1.1 and 24.6 ± 1.0 in mules and mares, respectively) and the umbilical cord was first detected on day 39 (39.7 ± 2.1 x 39.6 ± 1.5 in mules and mares, respectively). The ovarian diameters for left and right ovaries were similar for mules (21.4 ± 0.4 vs. 21.8 ± 0.4 mm) and for mares (45.1 ± 0.4 vs. 46.0 ± 0.4). However, the ovarian diameter of the mares (45.5 ± 0.3 mm) was two times larger (P<0.0001) than the mules (21.6 ± 0.3 mm). Within groups there were no differences between left and right and gravid and non-gravid horns. Data were combined for comparison of the endometrial diameter between mules and mares. The overall mean was not different between mules (24.6 3.1 ± 0.1 mm) and mares (25.4 ± 0.1 mm). However, day (P<0.003) and group-by-day (P<0.0001) effects were detected. Only two mules presented accessory CL that was observed for the first time on days 49 e 51. In conclusion, to the best of our knowledge, this is the first comparative study on embryo and early fetal development between noncycling mules and mares used as ET recipients of horse-horse embryos. Numerous similarities in embryo and early fetal development, and endocrinology aspects were seen. The findings of this study in mules, associated with the fact that alive and healthy offspring were produced, the use of mules may be considered as an alternative to increase the availability of recipients in equine ET programs.

EXPRESSÃO DOS RECEPTORES ENDOMETRIAS DE ESTRÓGENO E PROGESTERONA EM ÉGUAS ACÍCLICAS APÓS ADMINISTRAÇÃO DE PROGESTERONA

A progesterona (P4) é frequentemente utilizada, após a administração de estradiol, para preparo de éguas acíclicas sazonais como receptoras de embrião, entretanto estudos anteriores relataram gestação de éguas acíclicas sazonais tratadas somente com P4. O objetivo do presente estudo foi avaliar a expressão gênica e proteica dos receptores de estrógeno alfa (ER), estrógeno beta (ER) e progesterona (PR) no endométrio de éguas acíclicas sazonais tratadas com progesterona de longa ação (P4LA). Foram utilizadas 8 éguas durante a fase de anestro sazonal, nas quais foram realizadas biópsias uterinas imediatamente antes e cinco dias após a administração de 1,5 g de P4LA. Coletas de sangue foram realizadas diariamente para dosagem da concentração plasmática de P4. Para avaliação da expressão proteica dos receptores foi realizada a técnica de imunoistoquimica (IHQ) e o percentual da área imunomarcada foi determinado pelo software ImageJ. As abundâncias dos transcritos para ER (ESR1), ER (ESR2) e PR (PGR) foram determinadas por RT-qPCR. Os ER apresentaram maior expressão proteica (p<0,05) após a administração de P4LA, porém não houve alteração da abundância dos mRNA que codificam esse gene (p>0,05). Quanto aos ER, foi observada tendência a menor expressão proteica (p=0,07) e inibição da expressão gênica (p<0,05) após o tratamento, já os PR não apresentaram alteração (p>0,05). A concentração plasmática de P4 apresentou maior concentração 24 horas após a aplicação de P4LA (D1) com posterior declínio desses valores (p<0,05). A dose de 1,5 g de P4LA atingiu as concentrações mínimas de P4 necessárias para o estabelecimento e manutenção da gestação.

Progesterone (P4) is frequently used after the administration of estradiol, to prepare seasonal non-cyclic mares as embryo recipients, however previous studies have reported gestation of seasonal non-cyclic mares treated only with P4. The objective of the present study was to evaluate the gene and protein expression of estrogen receptor alpha (ER), estrogen beta (ER) and progesterone (PR) in the endometrium of seasonal non-cyclic mares treated with long acting progesterone (LAP4). Eight mares were used during the seasonal anoestrus phase, uterine biopsies were performed immediately before and five days after administration of 1,5 g of LA P4. Blood samples were taken daily for the determination of plasma P4 concentration. The protein expression of the receptors was evaluated by the immunohistochemistry and the immunostaining area percentage was determined by the ImageJ software. Transcripts abundance for ER (ESR1), ER (ESR2) and PR (PGR) were determined by RT-qPCR. ER showed higher protein expression (p <0.05) after administration of P4LA, but there was no change in mRNA abundance encoding this gene (p> 0,05). Tendency to lower protein expression was observed (p=0,07) and gene expression inhibition (p <0,05) for ER, PR did not changes (p>0,05). The plasma concentration of P4 presented a higher concentration 24 hours after the application of LA P4 (D1), with subsequent decline in these values (p<0,05). The 1.5 g dose of LA P4 reached the minimum concentrations of P4 required for the establishment and maintenance of gestation.

INFLUÊNCIA DE DIFERENTES DOSES DE ACETATO DE DESLORRELINA NO PROCESSO DE OVULAÇÃO DAS EGUAS

O presente estudo teve o objetivo de avaliar o efeito da aplicação de diferentes doses de acetato de deslorrelina em éguas cíclicas apresentando folículos de 35 mm e presença de edema uterino, caracterizando estro, para induzir a ovulação dentro de 48 horas, induzindo assim a ovulação em tempo limitado. Foram utilizados um ciclo estral de 20 éguas SRD (sem raça definida) aptas à reprodução pelo exame ultrassonográfico, totalizando 20 amostras. Foram utilizadas diferentes doses de acetato de deslorrelina, totalizando cinco tratamentos: grupo controle sem aplicação de acetato de deslorrelina; e diferentes doses do acetato de deslorrelina; 0,25, mg; 0,5 mg ; 0,75 mg e 1 mg. Foram realizados exames ultrassonagraficos a cada 24 horas até a detecção da ovulação. Os resultados encontrados mostraram que os animais desafiados com a dose de 0,5 mg, 0,75mg e 1mg de deslorrelina foram capazes de desenvolver ovulação em 100% dos casos, no grupo desafiado com 0,25 mg de deslorrelina ocorreram ovulações em 50 % dos casos, e no grupo controle 25% dos animais ovularam. As observações do experimento mostraram que o uso de acetato de deslorrelina, mesmo em doses mais baixas do que as tradicionalmente utilizadas, foram capazes de promover ovulação em um período de 48 horas. Além disso, não existe consenso em relação à dose mínima efetiva deste medicamento para promover a ovulação em 48 horas. Com base nestas observações conclui-se que o uso de acetato de deslorrelina, mesmo em doses mais baixas do que as tradicionais, é capaz de promover ovulação em um período de 48 horas o que reduz custos em programas de reprodução de equinos, assim como o número de visitas técnicas nas propriedades para esta finalidade.

The present study had the objective of evaluating the effect of different doses of deslorelin acetate in cyclic mares presenting 35 mm follicles and the presence of uterine edema, characterizing estrus, to induce ovulation within 48 hours, thus inducing ovulation in limited time. An estrous cycle of 20 SRD mares (non-breed) was used for reproduction by ultrasound examination, totaling 20 samples. Different doses of deslorelin acetate were used, totaling five treatments: control group without application of deslorelin acetate; And different doses of deslorelin acetate; 0.25, mg; 0.5mg; 0.75 mg and 1 mg. Ultrasound examinations were performed every 24 hours until ovulation was detected. The results showed that animals challenged at the dose of 0.5 mg, 0.75 mg and 1 mg of deslorelin were able to develop ovulation in 100% of the cases, in the group challenged with 0.25 mg of deslorelin, ovulations occurred in 50% Of the cases, and in the control group 25% of the animals ovulated. Observations from the experiment showed that the use of deslorelin acetate even at lower doses than those traditionally used were able to promote ovulation within 48 hours. In addition, there is no consensus regarding the effective minimum dose of this drug to promote ovulation within 48 hours. Based on these observations, it is concluded that the use of deslorelin acetate even at lower doses than traditional doses is able to promote ovulation in a period of 48 hours, which reduces costs in equine reproduction programs, as well as the number of Technical visits on the properties for this purpose.

EFEITO DA ADMINISTRAÇÃO DE DIFERENTES DOSES DE ESTRADIOL SEGUIDO DE PROGESTERONA SOBRE A EXPRESSÃO DE RECEPTORES ENDOMETRIAIS DE ESTRÓGENO E PROGESTERONA EM ÉGUAS RECEPTORAS ACÍCLICAS

Diferentes tratamentos hormonais com a utilização de estrógenos e progestágenos são comumente utilizados para aumentar a oferta de receptoras nos programas de TE. Porém, pouco se sabe sobre a ação destes hormônios na expressão gênica e proteica dos receptores endometriais de estrógeno e progesterona em éguas acíclicas. O presente estudo teve como objetivo avaliar os efeitos de três tratamentos hormonais utilizados durante a preparação de éguas acíclicas sobre o edema, tônus uterino e expressão gênica e proteica de receptores de estrógeno e progesterona endometriais. Éguas em anestro foram divididas em três grupos: Dose Total 10 mg BE+P4, (n=7), Dose Total 5 mg BE+P4 (n=7), Priming Hormonal (n=7) e comparadas com o grupo de éguas cíclicas (n=7). Foram avaliados: a expressão proteica e gênica relativa dos transcritos para os receptores de estrógeno e progesterona presentes no endométrio por meio das técnicas de imunohistoquímica e RT-qPCR; e as características morfológicas do útero por palpação retal e ultrassonografia em modo B. Os tratamentos hormonais utilizados no presente estudo foram eficazes em promover edema e tônus uterinos semelhante ao que ocorre em éguas cíclicas. Adicionalmente, o grupo Priming Hormonal demonstrou induzir características uterinas similares as observadas nos grupos 5 mg BE+P4 e no grupo controle, após 14 dias de intervalo. O tratamento hormonal com dose total de 10 mg de BE+P4 LA utilizando para o preparo de éguas acíclicas, demonstrou ser similar no tônus e edema uterinos, expressão proteica e expressão gênica relativa dos transcritos, para os receptores endometriais de E2 e P4 quando comparado as éguas cíclicas.(...)

Different hormonal treatments with the use of estrogen and progestogen are commonly used to increase the supply of receiving the TE programs. However, little is known about the effect of these hormones on gene and protein expression of endometrial receptors for estrogen and progesterone in non-cyclic mares. This study aimed to evaluate the effects of three hormonal treatments used for the preparation of non-cyclic mares on the edema and uterine tone and gene and protein expression of estrogen and endometrial progesterone receptors. Mares anestrus were divided into three groups: total dose 10 mg EB + P4 (n = 7) total dose 5 mg EB + P4 (n = 7) Hormonal Priming (n = 7) and compared with the group of cyclic mares (n = 7). Were evaluated: protein expression and gene transcripts related to the estrogen and progesterone receptors present in the endometrium by the techniques of immunohistochemistry and RT-qPCR; and the morphological characteristics of the uterus by rectal palpation and ultrasound in B mode. Hormonal treatments used in this study were effective in promoting edema and uterine tone similar to what occurs in cyclic mares. Additionally, the Hormonal Priming group demonstrated induce uterine similar characteristics observed in the groups 5 mg EB + P4 and control group, after 14 days apart. Hormonal treatment with a total dose of 10 mg EB + P4 LA using for the preparation of non-cyclic mares, was shown to be similar in tone and uterine edema, protein expression and relative gene expression on the transcript for endometrial receptors E2 and P4 as compared cyclic mares.(...)

EFEITOS DA ADMINISTRAÇÃO DE ESTRADIOL E PROGESTERONA SOBRE A CONCENTRAÇÃO HORMONAL E EXPRESSÃO ENDOMETRIAL DOS RECEPTORES DE ESTRÓGENO E PROGESTERONA EM ÉGUAS RECEPTORAS ACÍCLICAS

Com o objetivo de investigar os efeitos da administração de 2,5 mg de benzoato de estradiol (BE) seguido de 1500 mg de progesterona de longa ação (P4 LA) sobre a dinâmica molecular endometrial, características morfológicas do útero e concentrações plasmáticas de estrógeno e progesterona em éguas receptoras acíclicas, foram avaliados: a expressão proteica e as alterações na abundância relativa dos transcritos para os receptores de estrógeno (ER) e progesterona (PR) no endométrio por meio da RT-qPCR e imunohistoquímica; as características morfológicas do útero por ultrassonografia e palpação retal; e as concentrações plasmáticas do estrógeno e progesterona por meio de radioimunoensaio. A aplicação de 2,5 mg, 5 mg ou 10 mg de BE foram eficazes em causar edema uterino máximo 24 h após a administração. A dose de 2,5 mg de BE provocou picos de concentração de estradiol similares aos de éguas tratadas com 5 mg, 10 mg e aos de éguas cíclicas, sem elevar a concentração de estrógeno conjugado como observado com as outras doses de BE. Ainda, a concentração de P4 foi reduzida após a aplicação da P4 LA quando 10 mg de BE foram utilizados. A administração dos tratamentos hormonais alterou a abundância relativa dos transcritos para ER¿, ERß e PR de forma similar às alterações encontradas em éguas cíclicas quando o final do estro e início do diestro foram comparados. Em conclusão, o uso de 2,5 mg de BE seguido de 1500 mg de P4 LA provoca alterações similares na morfologia uterina, abundância relativa dos transcritos para ER¿, ERß e PR no endométrio, e de concentrações circulantes de estrógeno e progesterona às encontradas em éguas cíclicas.

To investigate the effects of the administration of 2.5 mg of estradiol benzoate (EB) followed by 1500 mg of long acting progesterone (LA P4) on endometrial molecular dynamics, uterine morphological characteristics, as well as estrogen and progesterone plasma concentrations in non-cyclic recipient mares, we evaluated: protein expression and changes in relative abundance of transcripts for estrogen (ER) and progesterone receptors (PR) in the endometrium by RT-qPCR and immunohistochemistry; uterine morphological characteristics by ultrasonography and rectal palpation; and estrogen and progesterone plasma concentrations by radioimmunoassay. The administration of 2.5 mg, 5 mg or 10 mg of EB were effective at promoting maximum uterine edema 24 h after their injection. The dose of 2.5 mg of EB caused similar estradiol concentration peaks to those observed in mares treated with 5 mg or10 mg of EB and to those observed in cyclic mares, which was not followed by increased concentrations of estrogen conjugate as observed for the other doses. Moreover, P4 concentration was reduced 24 h after LA P4 administration when the dose of 10 mg of EB was injected. The administration of the hormonal protocols altered the relative abundance of transcripts for ER¿, ERß and PR in non-cyclic mares as observed in cyclic ones when late estrus and early diestrus were compared. In conclusion, the use of 2.5 mg of EB followed by 1500 mg of LA P4 causes similar uterine morphology changes, relative abundance of transcripts for ER¿, ERß and PR, and estrogen and progesterone circulating concentrations to those found in cyclic mares.

Efeito de dois períodos de tratamaneto com altrenogest sobre a manutenção da gestação em éguas receptoras acíclicas

Pouco se sabe sobre o perfil de progesterona (P4) sintetizada pelos corpos lúteos suplementares (CLS) e de que forma tais estruturas se relacionam com a gestação em receptoras gestantes acíclicas tratadas com progestágeno. Sendo assim, os principais objetivos deste estudo foram avaliar o efeito do tratamento com altrenogest durante 70 ou 120 dias de gestação sobre a manutenção da gestação em receptoras acíclicas e correlacionar os achados com o número de CLS, tempo de formação e concentração de P4 encontrada no momento da interrupção do tratamento, visando melhorar a compreensão da fisiologia da gestação e avaliar a possibilidade de redução do tempo da administração de progestágenos em receptoras acíclicas gestantes. Foram avaliadas 25 éguas, gestantes por transferência de embrião (TE) na fase de anestro, transição e durante a estação de monta, distribuídas em diferentes agrupamentos, de acordo com a variável estudada: tempo de tratamento hormonal com altrenogest (grupos 70ALT, 120ALT e Controle), período de formação dos CLS e perfil de P4 (grupos Anestro, Transição e Controle). Os animais foram avaliados por meio de ultrassonografia e quantificação de P4 plasmática até os 130 dias de gestação. Após interrupção hormonal aos 70 dias no grupo 70ALT, observou-se manutenção de cinco gestações e dois abortamentos. No grupo 120ALT não ocorreu abortamento após a interrupção do tratamento aos 120 dias de gestação. O período médio (dias) da primeira formação dos CLS foi similar (p=0,32) nos grupos 70ALT e 120ALT e maior (p<0,01) que o encontrado no Controle. As médias da primeira formação dos CLS foram diferentes (p<0,01) entre os grupos Anestro, Transição e Controle. Nas éguas acíclicas a síntese de P4 ocorreu em período mais avançado...

There are few reports about progesterone (P4) synthesis by supplementary corpora lutea (SCL) and how these structures interfere with gestation in noncyclic pregnant recipient mares treated with progestagens. Therefore, the main objectives of this study were to evaluate the effect of altrenogest treatment during 70 or 120 days of gestation on pregnancy maintenance in non-cyclic recipient mares and to correlate these findings with SCL number, formation period and P4 concentration at the moment of treatment interruption, in order to improve the understanding of pregnancy physiology and to evaluate the possibility of progestagens treatment reduction in non-cyclic recipient mares. Twenty five pregnant mares by embryo transfer (ET) in anestrous, transitional and ovulatory phase were evaluated and distributed into different groups, according to the studied variable: altrenogest treatment period (70ALT, 120ALT and Control groups), SCL formation period and P4 profile (Anestrous, Transition and Control groups). Mares were evaluated by ultrassonography and quantification of plasma progesterone until 130 days of gestation. After hormonal withdrawal on group 70ALT, five pregnancy maintenance and two abortions were observed at 75 days of gestation. No abortion was noted on group 120ALT after treatment interruption. The mean period (days) of first SCL formation was similar (p=0,32) in 70ALT and 120ALT groups and greater (p<0.01) than Control group. Means of the first SCL formation were different (p<0.01) among Anestrous, Transition and Control groups. Progesterone synthesis in non-cyclic mares occurred in more advanced gestational period and showed lower concentration during the 130 days in relation to cyclic mares. It is suggested that progestagen treatment interruption in...