Avances en el manejo de gametos caninos in vitro / Advance in handling canine gametes in vitro

Las características fisiológicas de los gametos caninos que los hace especiales respecto a los de otras especies han dificultado los estudios tendientes a incrementar los porcentajes de éxito en diversas biotecnologías reproductivas. Entre estas características está el inicio de la meiosis de los ovocitos posterior al nacimiento y la ovulación de un gameto inmaduro como ovocito primario, lo que ha complejizado la maduración in vitro de estos ovocitos y, por parte de los espermatozoides, una gran diferencia en la sobrevivencia de los espermatozoides eyaculados versus los congelados-descongelados, que hace imprescindible evaluar la biología reproductiva de estos gametos tendiente a optimizar nuevos protocolos haciendo énfasis previamente en una adecuada evaluación del crecimiento del ovocito in vivo y de la viabilidad espermática en aquellos sometidos a criopreservación(AU)

The physiological characteristics of canine gametes that make them unique compared to those of other species have hindered studies aimed at increasing the success rates in various reproductive biotechnologies. Among these characteristics is the meiosis of the oocytes after birth and the ovulation of an immature gamete as a primary oocyte, which has made the in vitro maturation of these oocytes more complex and, on the part of the spermatozoa, a significant difference in the viability of ejaculated versus frozen-thawed spermatozoa, which makes it essential to evaluate the reproductive biology of these gametes in order to optimize new protocols, previously emphasizing an adequate evaluation of in vivo oocyte growth and sperm viability in those subjected to cryopreservation.(AU)

Design and optimization of an experimental maintenance system for yellow clam broodstock Amarilladesma mactroides (Reeve, 1854)

Abstract The yellow clam is a sand-burrowing bivalve that inhabits the dissipative beaches from southern Brazil to the north coast of Argentina. In the last decades, populations of this species have been impacted by mass mortality events, overfishing and other anthropogenic activities. The production of juveniles in captivity would allow feasibility studies to be carried out to restore the natural stock as well as the production in aquaculture systems. Given the scarcity of studies on the maintenance of this species in captivity, a culture system and a management protocol were developed and tested. Wild-caught clams (total length 50 mm) were used in a series of 14 day-long trials. Survival was higher in clams that were allowed to bury into the sand. A permanent ink marker covered with a thin layer of a quick-hardening adhesive proved to be a reliable method to tag clams. The maintenance of yellow clams in this system resulted in high survival and growth, increases in the condition factor and oocyte diameter, and a relative advancement of gonadal development.

Resumo O marisco branco é um bivalve de areia que habita as praias dissipativas do sul do Brasil até a costa norte da Argentina. Nas últimas décadas, as populações desta espécie têm sido afetadas por eventos de mortalidade maciça, sobrepesca e outras atividades antropogênicas. A produção de juvenis em cativeiro permitiria a realização de estudos de viabilidade para restaurar o estoque natural, assim como a produção em sistemas de aquicultura. Dada a escassez de estudos sobre a manutenção desta espécie em cativeiro, um sistema de cultivo e um protocolo de manejo foram desenvolvidos e testados. Mariscos branco selvagens (comprimento total 50 mm) foram utilizados em uma série de ensaios de 14 dias de duração. A sobrevivência foi maior nos mariscos que podiam ser enterrados na areia. Um marcador de tinta permanente coberto com uma fina camada de adesivo de endurecimento rápido provou ser um método confiável para marcar os mariscos. A manutenção dos mariscos neste sistema resultou em alta sobrevivência e crescimento, aumento do fator de condição e do diâmetro do ovócito, e um relativo avanço do desenvolvimento gonadal.

Design and optimization of an experimental maintenance system for yellow clam broodstock Amarilladesma mactroides (Reeve, 1854) / Desenvolvimento e otimização de um sistema de manutenção experimental para reprodutores de marisco branco Amarilladesma mactroides (Reeve, 1854)

The yellow clam is a sand-burrowing bivalve that inhabits the dissipative beaches from southern Brazil to the north coast of Argentina. In the last decades, populations of this species have been impacted by mass mortality events, overfishing and other anthropogenic activities. The production of juveniles in captivity would allow feasibility studies to be carried out to restore the natural stock as well as the production in aquaculture systems. Given the scarcity of studies on the maintenance of this species in captivity, a culture system and a management protocol were developed and tested. Wild-caught clams (total length ≥50 mm) were used in a series of 14 day-long trials. Survival was higher in clams that were allowed to bury into the sand. A permanent ink marker covered with a thin layer of a quick-hardening adhesive proved to be a reliable method to tag clams. The maintenance of yellow clams in this system resulted in high survival and growth, increases in the condition factor and oocyte diameter, and a relative advancement of gonadal development.

O marisco branco é um bivalve de areia que habita as praias dissipativas do sul do Brasil até a costa norte da Argentina. Nas últimas décadas, as populações desta espécie têm sido afetadas por eventos de mortalidade maciça, sobrepesca e outras atividades antropogênicas. A produção de juvenis em cativeiro permitiria a realização de estudos de viabilidade para restaurar o estoque natural, assim como a produção em sistemas de aquicultura. Dada a escassez de estudos sobre a manutenção desta espécie em cativeiro, um sistema de cultivo e um protocolo de manejo foram desenvolvidos e testados. Mariscos branco selvagens (comprimento total ≥50 mm) foram utilizados em uma série de ensaios de 14 dias de duração. A sobrevivência foi maior nos mariscos que podiam ser enterrados na areia. Um marcador de tinta permanente coberto com uma fina camada de adesivo de endurecimento rápido provou ser um método confiável para marcar os mariscos. A manutenção dos mariscos neste sistema resultou em alta sobrevivência e crescimento, aumento do fator de condição e do diâmetro do ovócito, e um relativo avanço do desenvolvimento gonadal.

Design and optimization of an experimental maintenance system for yellow clam broodstock Amarilladesma mactroides (Reeve, 1854) / Desenvolvimento e otimização de um sistema de manutenção experimental para reprodutores de marisco branco Amarilladesma mactroides (Reeve, 1854)

The yellow clam is a sand-burrowing bivalve that inhabits the dissipative beaches from southern Brazil to the north coast of Argentina. In the last decades, populations of this species have been impacted by mass mortality events, overfishing and other anthropogenic activities. The production of juveniles in captivity would allow feasibility studies to be carried out to restore the natural stock as well as the production in aquaculture systems. Given the scarcity of studies on the maintenance of this species in captivity, a culture system and a management protocol were developed and tested. Wild-caught clams (total length ≥50 mm) were used in a series of 14 day-long trials. Survival was higher in clams that were allowed to bury into the sand. A permanent ink marker covered with a thin layer of a quick-hardening adhesive proved to be a reliable method to tag clams. The maintenance of yellow clams in this system resulted in high survival and growth, increases in the condition factor and oocyte diameter, and a relative advancement of gonadal development.

O marisco branco é um bivalve de areia que habita as praias dissipativas do sul do Brasil até a costa norte da Argentina. Nas últimas décadas, as populações desta espécie têm sido afetadas por eventos de mortalidade maciça, sobrepesca e outras atividades antropogênicas. A produção de juvenis em cativeiro permitiria a realização de estudos de viabilidade para restaurar o estoque natural, assim como a produção em sistemas de aquicultura. Dada a escassez de estudos sobre a manutenção desta espécie em cativeiro, um sistema de cultivo e um protocolo de manejo foram desenvolvidos e testados. Mariscos branco selvagens (comprimento total ≥50 mm) foram utilizados em uma série de ensaios de 14 dias de duração. A sobrevivência foi maior nos mariscos que podiam ser enterrados na areia. Um marcador de tinta permanente coberto com uma fina camada de adesivo de endurecimento rápido provou ser um método confiável para marcar os mariscos. A manutenção dos mariscos neste sistema resultou em alta sobrevivência e crescimento, aumento do fator de condição e do diâmetro do ovócito, e um relativo avanço do desenvolvimento gonadal.

Design and optimization of an experimental maintenance system for yellow clam broodstock Amarilladesma mactroides (Reeve, 1854) / Desenvolvimento e otimização de um sistema de manutenção experimental para reprodutores de marisco branco Amarilladesma mactroides (Reeve, 1854)

The yellow clam is a sand-burrowing bivalve that inhabits the dissipative beaches from southern Brazil to the north coast of Argentina. In the last decades, populations of this species have been impacted by mass mortality events, overfishing and other anthropogenic activities. The production of juveniles in captivity would allow feasibility studies to be carried out to restore the natural stock as well as the production in aquaculture systems. Given the scarcity of studies on the maintenance of this species in captivity, a culture system and a management protocol were developed and tested. Wild-caught clams (total length ≥50 mm) were used in a series of 14 day-long trials. Survival was higher in clams that were allowed to bury into the sand. A permanent ink marker covered with a thin layer of a quick-hardening adhesive proved to be a reliable method to tag clams. The maintenance of yellow clams in this system resulted in high survival and growth, increases in the condition factor and oocyte diameter, and a relative advancement of gonadal development.(AU)

O marisco branco é um bivalve de areia que habita as praias dissipativas do sul do Brasil até a costa norte da Argentina. Nas últimas décadas, as populações desta espécie têm sido afetadas por eventos de mortalidade maciça, sobrepesca e outras atividades antropogênicas. A produção de juvenis em cativeiro permitiria a realização de estudos de viabilidade para restaurar o estoque natural, assim como a produção em sistemas de aquicultura. Dada a escassez de estudos sobre a manutenção desta espécie em cativeiro, um sistema de cultivo e um protocolo de manejo foram desenvolvidos e testados. Mariscos branco selvagens (comprimento total ≥50 mm) foram utilizados em uma série de ensaios de 14 dias de duração. A sobrevivência foi maior nos mariscos que podiam ser enterrados na areia. Um marcador de tinta permanente coberto com uma fina camada de adesivo de endurecimento rápido provou ser um método confiável para marcar os mariscos. A manutenção dos mariscos neste sistema resultou em alta sobrevivência e crescimento, aumento do fator de condição e do diâmetro do ovócito, e um relativo avanço do desenvolvimento gonadal.(AU)

Advances in reproduction of the lebranche mullet Mugil liza: maturation and spawning of F1 breeders in captivity / Avanços na reprodução da tainha Mugil liza: maturação e desova de reprodutores F1 em cativeiro

This study aimed to evaluate the reproductive response of mullets born in captivity (F1) using hormonal induction. Therefore, it was described maturation and induced spawning of mullet (Mugil liza) breeders born in captivity (F1). F1 males presented viable sperm at 11 months of age, with length of 25.7 ± 0.4 cm and weight of 205.7 ± 11.5 g. In contrast, at three years of age F1 females could be reproduced, with length of 47.4 ± 1.4 cm and weight of 1263.0 ± 64.6 g. Ten spawnings were conducted, and the average diameter of the oocytes at the time of hormonal induction, fertilization rate, total and relative fertility and hatching rate were recorded. Spawning was attained through hormonal induction in females with oocyte diameter greater than 600 µm and in males that released semen with abdominal massage. During this reproductive period, induced females produced a second group of mature oocytes so another hormonal induction was performed. The present study describes the induction of mullet breeders born in captivity and the possibility of females to be induced more than once during the same reproductive period.

O objetivo do estudo foi avaliar a resposta reprodutiva de tainhas nascidas em cativeiro (F1) através da utilização de indução hormonal. O trabalho descreve a maturação e desovas induzidas de reprodutores de tainha (Mugil liza) nascidos em cativeiro (F1), sendo o primeiro relato da reprodução de F1 da espécie. Os machos F1 apresentaram espermatozoides viáveis aos 11 meses de idade, com comprimento de 25,7 ± 0,4 cm e peso de 205,7 ± 11,5 g. Enquanto as fêmeas F1 estavam aptas para reprodução aos três anos de idade, com comprimento de 47,4 ± 1,4 cm e peso de 1263,0 ± 64,6 g. A realização das desovas ocorreu mediante indução hormonal, utilizando fêmeas com diâmetro de ovócito maior de 600 µm e machos que liberavam sêmen quando submetidos à massagem abdominal. Foram realizadas 10 desovas, e registrados o diâmetro médio dos ovócitos no momento da indução hormonal, a taxa de fertilização, a fecundidade total e relativa e a taxa de eclosão. Além disso, foi verificado que no mesmo período reprodutivo as fêmeas induzidas a reprodução maturaram um segundo grupo de ovócitos, que atingiram o tamanho recomendado para a indução hormonal, possibilitando uma segunda indução. O presente estudo descreve a indução de reprodutores de tainhas nascidos em cativeiro e a possibilidade de uma mesma fêmea ser induzida mais de uma vez no mesmo período reprodutivo.

Advances in reproduction of the lebranche mullet Mugil liza: maturation and spawning of F1 breeders in captivity / Avanços na reprodução da tainha Mugil liza: maturação e desova de reprodutores F1 em cativeiro

This study aimed to evaluate the reproductive response of mullets born in captivity (F1) using hormonal induction. Therefore, it was described maturation and induced spawning of mullet (Mugil liza) breeders born in captivity (F1). F1 males presented viable sperm at 11 months of age, with length of 25.7 ± 0.4 cm and weight of 205.7 ± 11.5 g. In contrast, at three years of age F1 females could be reproduced, with length of 47.4 ± 1.4 cm and weight of 1263.0 ± 64.6 g. Ten spawnings were conducted, and the average diameter of the oocytes at the time of hormonal induction, fertilization rate, total and relative fertility and hatching rate were recorded. Spawning was attained through hormonal induction in females with oocyte diameter greater than 600 µm and in males that released semen with abdominal massage. During this reproductive period, induced females produced a second group of mature oocytes so another hormonal induction was performed. The present study describes the induction of mullet breeders born in captivity and the possibility of females to be induced more than once during the same reproductive period.(AU)

O objetivo do estudo foi avaliar a resposta reprodutiva de tainhas nascidas em cativeiro (F1) através da utilização de indução hormonal. O trabalho descreve a maturação e desovas induzidas de reprodutores de tainha (Mugil liza) nascidos em cativeiro (F1), sendo o primeiro relato da reprodução de F1 da espécie. Os machos F1 apresentaram espermatozoides viáveis aos 11 meses de idade, com comprimento de 25,7 ± 0,4 cm e peso de 205,7 ± 11,5 g. Enquanto as fêmeas F1 estavam aptas para reprodução aos três anos de idade, com comprimento de 47,4 ± 1,4 cm e peso de 1263,0 ± 64,6 g. A realização das desovas ocorreu mediante indução hormonal, utilizando fêmeas com diâmetro de ovócito maior de 600 µm e machos que liberavam sêmen quando submetidos à massagem abdominal. Foram realizadas 10 desovas, e registrados o diâmetro médio dos ovócitos no momento da indução hormonal, a taxa de fertilização, a fecundidade total e relativa e a taxa de eclosão. Além disso, foi verificado que no mesmo período reprodutivo as fêmeas induzidas a reprodução maturaram um segundo grupo de ovócitos, que atingiram o tamanho recomendado para a indução hormonal, possibilitando uma segunda indução. O presente estudo descreve a indução de reprodutores de tainhas nascidos em cativeiro e a possibilidade de uma mesma fêmea ser induzida mais de uma vez no mesmo período reprodutivo.(AU)

Histomorphometric analysis of gonads of green turtles (chelonia mydas) stranded on the coast of Espírito Santo state, Brazil / Análise histomorfométrica das gônadas de tartarugas verdes (Chelonia Mydas) provenientes de encalhe no litoral do Espírito Santo, Brasil

Studies on reproduction in sea turtles are important due to its life cycle, migratory patterns, high juvenile mortality and environmental impacts. This study aimed to analyse histomorphometrically gonads of C. mydas from the coastline of the Espírito Santo State, Brazil. Ovaries and testicles were collected between 2014 and 2015 from stranded animals. The material was fixed in formalin 10%, assessed macroscopically and processed for histomorphometrical evaluation. Gonads from 34 individuals were evaluated, twenty-four females and ten males. Macroscopic sexual identification presented 100% accuracy confirmed by histology. Sexual dimorphism was observed in one individual, which was considered as adult (CCL=1.023 m). Microscopy of female gonads revealed predominant previtellogenic follicles; oocyte diameter ranged between 161µm and 750µm and a positive correlation between ovarian length, largest oocyte and CCL was found. In males, autolysis was verified in five individuals. Viable testicles revealed predominant spermatogonia, primary spermatocytes and Sertoli cells in the seminiferous tubules and, Leydig cells and fibroblasts in the stroma. There was a positive correlation between tubular diameter and CCL and testicle length and CCL. Maturation of stromal tissue and a positive correlation between tubular lumen and CCL were also observed. Gonad development is proportional to individual growth.(AU)

Estudos em reprodução de tartarugas marinhas são importantes devido ao ciclo de vida, ao padrão migratório, à alta mortalidade juvenil e aos impactos ambientais. Objetivou-se analisar histomorfometricamente gônadas de C. mydas no litoral do Espírito Santo. Foram coletados ovários e testículos dessa espécie, entre 2014 e 2015. O material foi fixado em formol a 10% e avaliado macroscopicamente. Em seguida, foi processado para avaliação histomorfométrica. Foram avaliadas gônadas de 34 indivíduos, 24 fêmeas e 10 machos. Verificaram-se 100% de acurácia na identificação sexual à macroscopia, confirmada pela histologia. Observou-se dimorfismo sexual em um macho, que foi considerado adulto (CCC=1,023m). A microscopia dos ovários revelou folículos pré-vitelogênicos, cujos ovócitos apresentaram diâmetro médio entre 161µm e 750µm. Houve correlação positiva entre comprimento ovariano e diâmetro do maior ovócito e CCC. Nos machos, verificou-se autólise em cinco indivíduos. Os testículos viáveis revelaram espermatogônias, espermatócitos primários e células de Sertoli nos túbulos seminíferos, além de células de Leydig e fibroblastos no estroma. Houve correlação positiva entre diâmetro tubular e CCC e comprimento testicular e CCC. Verificou-se maturação do tecido estromal e correlação positiva entre o diâmetro do lúmen tubular e o CCC. Verifica-se que o desenvolvimento das gônadas é proporcional ao crescimento dos indivíduos.(AU)

Histomorphometric analysis of gonads of green turtles (chelonia mydas) stranded on the coast of Espírito Santo state, Brazil / Análise histomorfométrica das gônadas de tartarugas verdes (Chelonia Mydas) provenientes de encalhe no litoral do Espírito Santo, Brasil

Studies on reproduction in sea turtles are important due to its life cycle, migratory patterns, high juvenile mortality and environmental impacts. This study aimed to analyse histomorphometrically gonads of C. mydas from the coastline of the Espírito Santo State, Brazil. Ovaries and testicles were collected between 2014 and 2015 from stranded animals. The material was fixed in formalin 10%, assessed macroscopically and processed for histomorphometrical evaluation. Gonads from 34 individuals were evaluated, twenty-four females and ten males. Macroscopic sexual identification presented 100% accuracy confirmed by histology. Sexual dimorphism was observed in one individual, which was considered as adult (CCL=1.023 m). Microscopy of female gonads revealed predominant previtellogenic follicles; oocyte diameter ranged between 161µm and 750µm and a positive correlation between ovarian length, largest oocyte and CCL was found. In males, autolysis was verified in five individuals. Viable testicles revealed predominant spermatogonia, primary spermatocytes and Sertoli cells in the seminiferous tubules and, Leydig cells and fibroblasts in the stroma. There was a positive correlation between tubular diameter and CCL and testicle length and CCL. Maturation of stromal tissue and a positive correlation between tubular lumen and CCL were also observed. Gonad development is proportional to individual growth.(AU)

Estudos em reprodução de tartarugas marinhas são importantes devido ao ciclo de vida, ao padrão migratório, à alta mortalidade juvenil e aos impactos ambientais. Objetivou-se analisar histomorfometricamente gônadas de C. mydas no litoral do Espírito Santo. Foram coletados ovários e testículos dessa espécie, entre 2014 e 2015. O material foi fixado em formol a 10% e avaliado macroscopicamente. Em seguida, foi processado para avaliação histomorfométrica. Foram avaliadas gônadas de 34 indivíduos, 24 fêmeas e 10 machos. Verificaram-se 100% de acurácia na identificação sexual à macroscopia, confirmada pela histologia. Observou-se dimorfismo sexual em um macho, que foi considerado adulto (CCC=1,023m). A microscopia dos ovários revelou folículos pré-vitelogênicos, cujos ovócitos apresentaram diâmetro médio entre 161µm e 750µm. Houve correlação positiva entre comprimento ovariano e diâmetro do maior ovócito e CCC. Nos machos, verificou-se autólise em cinco indivíduos. Os testículos viáveis revelaram espermatogônias, espermatócitos primários e células de Sertoli nos túbulos seminíferos, além de células de Leydig e fibroblastos no estroma. Houve correlação positiva entre diâmetro tubular e CCC e comprimento testicular e CCC. Verificou-se maturação do tecido estromal e correlação positiva entre o diâmetro do lúmen tubular e o CCC. Verifica-se que o desenvolvimento das gônadas é proporcional ao crescimento dos indivíduos.(AU)

Maturação Oocitária Em Bovinos: Efeito Dos Ácidos Graxos Poli-Insaturados / Oocyte Maturation In Cattle: The Effect Of Polyunsaturated Fatty Acids / Maturación Oocitaria En Bovinos: Efecto De Los Ácidos Graxos Poliinsaturados

Objetivou-se com a presente revisão descrever os eventos que compõe a maturação de oócitos bovinos, pois esta é uma fase crucial da produção in vitro de embriões (PIVE) e o efeito da adição de ácidos graxos poli-insaturados (AGPI) nos meios de cultivo ou na alimentação de bovinos. Dentre os diversos, o ácido linolênico (C18:3; ômega-3) e linoléico (C18:2; ômega-6) são os mais importantes no contexto reprodutivo. A PIVE é uma biotécnica reprodutiva em que todo o processo ocorre mediante etapas sincrônicas, sendo maturação in vitro (MIV), fertilização in vitro (FIV) e cultivo de embriões in vitro (CIV) e para que todo o processo obtenha sucesso é necessária que haja interação e sincronismo entre as etapas cuja maturação oocitária é uma fase essencial e limitante para a PIVE, visto que é através da maturação nuclear e citoplasmática que ocorre o controle sistêmico de todo potencial de desenvolvimento oocitário e, consequentemente garantia do desenvolvimento embrionário.(AU)

The objective of this review was to describe the events that compose the maturation of bovine oocytes, as this is a crucial phase of in vitro embryo production (IVP) and the effect of the addition of polyunsaturated fatty acids (PUFAs) on culture media or in feed for cattle. Among them, linolenic acid (C18: 3; omega-3) and linoleic acid (C18: 2; omega-6) are the most important in the reproductive context. IVP is a reproductive biotechnology in which the whole process takes place through synchronic stages, being in vitro maturation (IVM), in vitro fertilization (IVF) and in vitro embryo culture (IVC) and for the whole process to be successful it is necessary that there is interaction and synchronism between the stages whose oocyte maturation is the essential and limiting phase for IVP since it is through nuclear and cytoplasmic maturation that the systemic control of any oocyte development potential occurs and consequently warranty of embryonic development.(AU)

En el presente trabajo se describen los eventos que componen la maduración de ovocitos bovinos, pues esta es una fase crucial de la producción in vitro de embriones (PIVE) y el efecto de la adición de ácidos grasos poliinsaturados (AGPI) en los medios de cultivo o En la alimentación de bovinos. Entre los diversos, el ácido linolénico (C18: 3, omega-3) y linoleico (C18: 2, omega-6) son los más importantes en el contexto reproductivo. La PIVE es una biotécnica reproductiva en que todo el proceso ocurre mediante etapas sincrónicas, siendo maduración in vitro (MIV), fertilización in vitro (FIV) y cultivo de embriones in vitro (CIV) y para que todo el proceso obtenga éxito es necesario que haya interacción y sincronismo entre las etapas cuya maduración oocitaria es la fase esencial y limitante para la PIVE, ya que es a través de la maduración nuclear y citoplasmática que ocurre el control sistémico de todo potencial de desarrollo oocitario y por consiguiente, garantía del desarrollo embrionario.(AU)

Maturação Oocitária Em Bovinos: Efeito Dos Ácidos Graxos Poli-Insaturados / Oocyte Maturation In Cattle: The Effect Of Polyunsaturated Fatty Acids / Maturación Oocitaria En Bovinos: Efecto De Los Ácidos Graxos Poliinsaturados

Objetivou-se com a presente revisão descrever os eventos que compõe a maturação de oócitos bovinos, pois esta é uma fase crucial da produção in vitro de embriões (PIVE) e o efeito da adição de ácidos graxos poli-insaturados (AGPI) nos meios de cultivo ou na alimentação de bovinos. Dentre os diversos, o ácido linolênico (C18:3; ômega-3) e linoléico (C18:2; ômega-6) são os mais importantes no contexto reprodutivo. A PIVE é uma biotécnica reprodutiva em que todo o processo ocorre mediante etapas sincrônicas, sendo maturação in vitro (MIV), fertilização in vitro (FIV) e cultivo de embriões in vitro (CIV) e para que todo o processo obtenha sucesso é necessária que haja interação e sincronismo entre as etapas cuja maturação oocitária é uma fase essencial e limitante para a PIVE, visto que é através da maturação nuclear e citoplasmática que ocorre o controle sistêmico de todo potencial de desenvolvimento oocitário e, consequentemente garantia do desenvolvimento embrionário.

The objective of this review was to describe the events that compose the maturation of bovine oocytes, as this is a crucial phase of in vitro embryo production (IVP) and the effect of the addition of polyunsaturated fatty acids (PUFAs) on culture media or in feed for cattle. Among them, linolenic acid (C18: 3; omega-3) and linoleic acid (C18: 2; omega-6) are the most important in the reproductive context. IVP is a reproductive biotechnology in which the whole process takes place through synchronic stages, being in vitro maturation (IVM), in vitro fertilization (IVF) and in vitro embryo culture (IVC) and for the whole process to be successful it is necessary that there is interaction and synchronism between the stages whose oocyte maturation is the essential and limiting phase for IVP since it is through nuclear and cytoplasmic maturation that the systemic control of any oocyte development potential occurs and consequently warranty of embryonic development.

En el presente trabajo se describen los eventos que componen la maduración de ovocitos bovinos, pues esta es una fase crucial de la producción in vitro de embriones (PIVE) y el efecto de la adición de ácidos grasos poliinsaturados (AGPI) en los medios de cultivo o En la alimentación de bovinos. Entre los diversos, el ácido linolénico (C18: 3, omega-3) y linoleico (C18: 2, omega-6) son los más importantes en el contexto reproductivo. La PIVE es una biotécnica reproductiva en que todo el proceso ocurre mediante etapas sincrónicas, siendo maduración in vitro (MIV), fertilización in vitro (FIV) y cultivo de embriones in vitro (CIV) y para que todo el proceso obtenga éxito es necesario que haya interacción y sincronismo entre las etapas cuya maduración oocitaria es la fase esencial y limitante para la PIVE, ya que es a través de la maduración nuclear y citoplasmática que ocurre el control sistémico de todo potencial de desarrollo oocitario y por consiguiente, garantía del desarrollo embrionario.

In vitro fertilization of porcine oocytes is affected by spermatic coincubation time / A fertilização in vitro de ovócitos suínos é afetada pelo tempo de coincubação espermático

The aim was to study the effects of different gamete coincubation times on porcine in vitro fertilization (IVF), and to verify whether efficiency could be improved by reducing oocyte exposure time to spermatozoa during IVF. In groups of 50, a total of 508 immature cumulus-oocyte complexes (COCs) were matured in NCSU-37 medium. The COCs were cultured for 44 hours and then inseminated with in natura semen (2,000 spermatozoa/oocyte). The sperm and oocytes were coincubated according to the following treatments (T): T1 = oocytes exposed to spermatozoa for one hour (173 oocytes), T2 = oocytes exposed to spermatozoa for two hours (170 oocytes), and T3 = oocytes exposed to spermatozoa for three hours (165 oocytes). After these coincubation periods, the oocytes were washed in fertilization medium (TALP medium) to remove spermatozoa not bound to the zona pellucida and cultured in another similar medium (containing no sperm). Eighteen to twenty hours after fertilization, the putative zygotes were stained in Hoechst-33342 to evaluate the IVF results. The penetration rate was higher (P<0.05) after two hours of coincubation time than it was for one or three hours. Furthermore, 68.60% of the ova coincubated with the spermatozoa for two hours were monospermic. The oocytes exposed to spermatozoa for one hour (T1) presented a higher (P<0.01) rate of polyspermy than those in T2 and T3. Fertilization performance (%) did not differ (P>0.05) between oocytes exposed to spermatozoa for one (T1) and three hours (T3). However, optimum (P=0.048) results were obtained after two hours of coincubation, when the rate of fertilization performance was 50.16±8.52%. The number of penetrated sperm per oocyte, as well as male pronucleus formation, did not differ (P>0.05) between the treatments evaluated. Under these assay conditions, especially in relation to the sperm concentration used, gamete coincubation for a period of two hours appears to be optimal for monospermy and fertilization performance. Thus, it is the optimal time period for obtaining a large number of pig embryos capable of normal development.(AU)

Esse estudo foi realizado para avaliar os efeitos de diferentes tempos de coincubação dos gametas sobre a fertilização in vitro (FIV) de suínos e se a eficiência dessa técnica poderia ser melhorada pela redução no período que os ovócitos são expostos aos espermatozoides durante a FIV. Um total de 508 (em grupos de 50) complexos cumulus-ovócito (COCs) imaturos foram maturados no meio NCSU-37. Os COCs foram cultivados por 40-44 horas e então inseminados com sêmen in natura (2.000 espermatozoides/ovócito). Os espermatozoides e ovócitos foram coincubados de acordo com os seguintes tratamentos (T): T1 = ovócitos expostos aos espermatozoides por uma hora (173 ovócitos); T2 = ovócitos expostos aos espermatozoides por duas horas (170 ovócitos) e T3 = ovócitos expostos aos espermatozoides por três horas (165 ovócitos). Após esses períodos de coincubação, os ovócitos foram lavados em meio de fertilização (meio TALP) para remoção dos espermazoides não ligados a zona pelúcida e cultivados em outro mesmo meio (não contendo espermatozoides). Após 18-20 horas de fertilização, os prováveis zigotos foram corados com Hoechst-33342 para avaliação dos resultados da FIV. A taxa de penetração foi maior (P<0,05) após o tempo de coincubação de duas horas em comparação a uma e três horas. Além disso, 68,60% dos ovócitos coincubados com os espermatozoides por duas horas foram monospérmicos. Os ovócitos expostos aos espermatozoides por uma hora (T1) apresentaram elevada (P<0,01) taxa de polispermia em comparação com o T2 e T3. A eficiência da fertilização (%) não diferiu (P>0,05) entre os ovócitos expostos aos espermatozoides por uma (T1) e três horas (T3). Entretanto, ótimos (P=0,048) resultados foram obtidos após duas horas de coincubação, quando a taxa da eficiência da fertilização foi 50,16 ± 8,52%. O número de espermatozoides penetrados por ovócito e a formação de pro-núcleo masculino não diferiu (P>0,05) entre os tratamentos avaliados. Sob as condições de ensaio realizadas, especialmente em relação à concentração espermática utilizada, a coincubação dos gametas por um período de duas horas parece ser ótima para as taxas de monospermia e eficiência da fertilização. Portanto, um tempo provavelmente ótimo para obter um elevado número de embriões suínos capazes de ter um desenvolvimento normal.(AU)

In vitro fertilization of porcine oocytes is affected by spermatic coincubation time / A fertilização in vitro de ovócitos suínos é afetada pelo tempo de coincubação espermático

The aim was to study the effects of different gamete coincubation times on porcine in vitro fertilization (IVF), and to verify whether efficiency could be improved by reducing oocyte exposure time to spermatozoa during IVF. In groups of 50, a total of 508 immature cumulus-oocyte complexes (COCs) were matured in NCSU-37 medium. The COCs were cultured for 44 hours and then inseminated with in natura semen (2,000 spermatozoa/oocyte). The sperm and oocytes were coincubated according to the following treatments (T): T1 = oocytes exposed to spermatozoa for one hour (173 oocytes), T2 = oocytes exposed to spermatozoa for two hours (170 oocytes), and T3 = oocytes exposed to spermatozoa for three hours (165 oocytes). After these coincubation periods, the oocytes were washed in fertilization medium (TALP medium) to remove spermatozoa not bound to the zona pellucida and cultured in another similar medium (containing no sperm). Eighteen to twenty hours after fertilization, the putative zygotes were stained in Hoechst-33342 to evaluate the IVF results. The penetration rate was higher (P<0.05) after two hours of coincubation time than it was for one or three hours. Furthermore, 68.60% of the ova coincubated with the spermatozoa for two hours were monospermic. The oocytes exposed to spermatozoa for one hour (T1) presented a higher (P<0.01) rate of polyspermy than those in T2 and T3. Fertilization performance (%) did not differ (P>0.05) between oocytes exposed to spermatozoa for one (T1) and three hours (T3). However, optimum (P=0.048) results were obtained after two hours of coincubation, when the rate of fertilization performance was 50.16±8.52%. The number of penetrated sperm per oocyte, as well as male pronucleus formation, did not differ (P>0.05) between the treatments evaluated. [...] (AU)

Esse estudo foi realizado para avaliar os efeitos de diferentes tempos de coincubação dos gametas sobre a fertilização in vitro (FIV) de suínos e se a eficiência dessa técnica poderia ser melhorada pela redução no período que os ovócitos são expostos aos espermatozoides durante a FIV. Um total de 508 (em grupos de 50) complexos cumulus-ovócito (COCs) imaturos foram maturados no meio NCSU-37. Os COCs foram cultivados por 40-44 horas e então inseminados com sêmen in natura (2.000 espermatozoides/ovócito). Os espermatozoides e ovócitos foram coincubados de acordo com os seguintes tratamentos (T): T1 = ovócitos expostos aos espermatozoides por uma hora (173 ovócitos); T2 = ovócitos expostos aos espermatozoides por duas horas (170 ovócitos) e T3 = ovócitos expostos aos espermatozoides por três horas (165 ovócitos). Após esses períodos de coincubação, os ovócitos foram lavados em meio de fertilização (meio TALP) para remoção dos espermazoides não ligados a zona pelúcida e cultivados em outro mesmo meio (não contendo espermatozoides). Após 18-20 horas de fertilização, os prováveis zigotos foram corados com Hoechst-33342 para avaliação dos resultados da FIV. A taxa de penetração foi maior (P<0,05) após o tempo de coincubação de duas horas em comparação a uma e três horas. Além disso, 68,60% dos ovócitos coincubados com os espermatozoides por duas horas foram monospérmicos. Os ovócitos expostos aos espermatozoides por uma hora (T1) apresentaram elevada (P<0,01) taxa de polispermia em comparação com o T2 e T3. A eficiência da fertilização (%) não diferiu (P>0,05) entre os ovócitos expostos aos espermatozoides por uma (T1) e três horas (T3). Entretanto, ótimos (P=0,048) resultados foram obtidos após duas horas de coincubação, quando a taxa da eficiência da fertilização foi 50,16 ± 8,52%. O número de espermatozoides penetrados por ovócito e a formação de pro-núcleo masculino não diferiu (P>0,05) entre os tratamentos avaliados. [...] (AU)

Dose inseminante e resfriamento de embriões de peixes de água doce / Insemination dose and conservation of freshwater fish embryos

A aquicultura tem sido utilizada como importante ferramenta para suprir o constante aumento doconsumo de pescado. Um dos principais aspectos para a intensificação da produção piscícola, acompanhada dasustentabilidade tanto econômica quanto ambiental, é a utilização de técnicas de propagação artificial. Dessaforma, para otimizar a reprodução artificial têm-se investido em estudos afim de definir a proporção ideal deespermatozoides por ovócito e os melhores métodos de conservação para embriões de espécies de peixes de águadoce. Objetivou-se fazer uma breve revisão sobre as doses inseminantes e a biotecnologia de resfriamento deembriões de peixes de água doce que já foram estabelecidas.(AU)

Aquaculture has been used as an important tool to meet the steady increase in fish consumption. Amajor aspect for the intensification of fish production, accompanied by both economic and environmentalsustainability, is the use of techniques of artificial propagation. Thus, to optimize artificial reproduction havebeen invested in research in order to define the optimal ratio the sperm to oocyte and the best conservationmethods for embryos species of freshwater fish. The objective was to make a brief review of the inseminationdoses cooling biotechnology freshwater fish embryos that have already been established.(AU)

Inseminating dose and water volume applied to the artificial fertilization of Steindachneridion parahybae (Steindachner, 1877) (Siluriformes: Pimelodidae): Brazilian endangered fish

The Steindachneridion parahybae is an endangered catfish from Brazil and strategies applied for gametes optimization are necessary. The aim of this study was to assess inseminating doses and water volume upon the fertilization, hatching rates and percentage of normal larvae in S. parahybae . Was used a randomized design in factorial scheme (4×4) with four inseminating doses: 1.0×104, 1.0×105, 1.0×106, 1.0×107spermatozoa oocyte-1 and four volumes of water: 1, 35, 65 and 95mL of water g-1 of oocytes. The combination of doses and volumes were performed in triplicates (n=48). Each incubator (1.5L of useful volume) with 1g of oocytes was considered as an experimental unit. Significant interaction between inseminating doses and volumes of water to the values of the fertilization rates and quadratic effect of doses and volume for the values of hatching rates were observed. The doses and volumes did not influence the percentage of normal larvae (87.70±5.06%). It is recommended the use of 5.5×106 spermatozoa oocyte-1 and 1mL of water g-1 of oocytes during in vitro fertilization procedure. These results allowed us to develop new biotechnological strategies applied to the conservation of S. parahybae.(AU)

O Steindachneridion parahybae é um bagre ameaçado de extinção no Brasil e estratégias aplicadas para a otimização de gametas são necessárias. O objetivo deste estudo foi avaliar doses inseminantes e volume de água sobre os valores das taxas de fertilização, eclosão e larvas normais em S. parahybae. Utilizando-se um delineamento experimental casualizado em esquema fatorial (4×4), com quatro doses inseminantes: 1,0×104; 1,0×105; 1,0×106; 1,0×107 espermatozóides ovócito-1 e quatro volumes de água: 1; 35; 65 e 95mL de água g-1 de ovócitos. As combinações de doses e volumes foram realizadas em triplicatas (n=48). Cada incubadora (1,5L de volume útil) contendo 1g de ovócitos foi considerada como uma unidade experimental. Interações significativas entre doses inseminantes e volumes de água para os valores das taxas de fertilização e efeito quadrático das doses e do volume para os valores das taxas de eclosão foram verificadas. As dosagens e os volumes aplicados não influenciaram no percentual de larvas normais (87,70±5,06). Recomenda-se a aplicação de 5,5×106 espermatozoides ovócito-1 e a utilização de 1mL de água.g-1 de ovócitos no procedimento de fertilização artificial in vitro. Estes resultados permitiram desenvolver novas estratégias biotecnológicas aplicadas na conservação do S. parahybae.(AU)

Dose inseminante e resfriamento de embriões de peixes de água doce / Insemination dose and conservation of freshwater fish embryos

A aquicultura tem sido utilizada como importante ferramenta para suprir o constante aumento doconsumo de pescado. Um dos principais aspectos para a intensificação da produção piscícola, acompanhada dasustentabilidade tanto econômica quanto ambiental, é a utilização de técnicas de propagação artificial. Dessaforma, para otimizar a reprodução artificial têm-se investido em estudos afim de definir a proporção ideal deespermatozoides por ovócito e os melhores métodos de conservação para embriões de espécies de peixes de águadoce. Objetivou-se fazer uma breve revisão sobre as doses inseminantes e a biotecnologia de resfriamento deembriões de peixes de água doce que já foram estabelecidas.

Aquaculture has been used as an important tool to meet the steady increase in fish consumption. Amajor aspect for the intensification of fish production, accompanied by both economic and environmentalsustainability, is the use of techniques of artificial propagation. Thus, to optimize artificial reproduction havebeen invested in research in order to define the optimal ratio the sperm to oocyte and the best conservationmethods for embryos species of freshwater fish. The objective was to make a brief review of the inseminationdoses cooling biotechnology freshwater fish embryos that have already been established.

Influência do horário de aplicação e da variedade genética em fêmeas de tilápias Oreochromis niloticus submetidas à indução hormonal com hCG / Influence of application time and genetic variability in tilapias Oreochromis niloticus submitted to hormonal induction with hCG

Objetivou-se com este trabalho avaliar a influência do horário de aplicação e da variedade genética de fêmeas submetidas à indução com hCG. O experimento foi realizado nos meses de julho e agosto de 2012. Utilizou-se delineamento inteiramente ao acaso, com esquema fatorial 2x4x2 (duas variedades, quatro horários de aplicação, com e sem hCG), sendo quatro repetições para os tratamentos controle e seis para induzidos com hCG. Foram utilizadas 40 fêmeas das variedades GIFT e UFLA, microchipadas, alojadas em um sistema com recirculação de água. Foram utilizados quatro horários de aplicação: seis; 12; 18 e 24 horas. A dosagem de hCG foi de 5UI/grama de peso de peixe, dividida em duas aplicações. A extrusão dos ovócitos foi realizada 720 horas-graus após a última aplicação, sendo observado o número de animais de cada tratamento que apresentaram desova. Os dados obtidos foram submetidos à análise de variância, e as médias comparadas pelo teste SNK a 5% de significância. A indução com hCG proporcionou melhores (P<0,05) resultados paras as variáveis: índice de desova (ID), fecundidade absoluta relativa ao comprimento (FARC) e peso de desova (PD), independentemente da variedade utilizada. A variedade UFLA não foi influenciada pelo horário de aplicação (P>0,05). Já a GIFT apresentou maior ID (P<0,05) quando a indução hormonal foi realizada às 24h em relação à aplicação realizada às 18h. O diâmetro do ovócito da variedade UFLA é maior do que o da GIFT (P<0,05). Ao se observar o grupo controle, verificou-se que a variedade UFLA apresentou maior porcentagem de ovócitos com posição periférica de vesícula germinativa (P<0,05) em relação à GIFT. A indução hormonal com hCG foi influenciada pela variedade e pelo horário de aplicação.(AU)

The aim of this work was to evaluate the influence of the application time and genetic variability of females submitted to hormonal induction with hCG. The experiment was performed in the months of July and August 2012. We used a completely randomized design, with a 2x4x2 (two varieties, four application times, with or without hCG) factorial scheme, with four replicates for the control treatments and six replicated for those with hCG induction. Forty females of the GIFT and UFLA varieties, with microchips, were housed in a water recirculation system. Four application times were used: 6; 12; 18 and 24 hours. The hCG dosage was 5UI/gram of fish, divided into two applications. Oocyte extrusion was performed 720 hours after the last application, observing the number of animals in each treatment which presented spawning. The obtained data were submitted to variance analysis and the means compared by the SNK test at 5% significance. The induction with hCG provided better (P<0.05) results for the variables: spawning index (SI), absolute fecundity relative to length (AFRL) and spawning weight (SW), regardless of the variety used. The UFLA variety was not influenced by the time of application (P>0.05), while GIFT presented higher SI (P<0.05) when the hormonal induction was performed at 24 h in relation to the application performed at 18 h. The diameter of the oocytes of the UFLA variety was larger than that of the GIFT variety (P<0.05). Observing the control group, the UFLA variety presented a higher percentage of oocytes with peripheral position of the germinal vesicle (P<0.05) in relation to GIFT. The hormonal induction with hCG was influenced by the variety and the time of application.(AU)

Adição da proteína específica do oviduto de porcas (pOSP) e da melatonina em meios de maturação e o efeito na clivagem in vitro de embriões suínos / Addition of the oviduct specific protein of porcine (pOSP) and melatonin in maturation media and their effect on the in vitro production of pig embryos

No presente estudo, utilizou-se a melatonina e a proteína específica do oviduto (pOSP) nos meios de maturação in vitro. Foram avaliadas a expansão do complexo cumulus-ovócito (CCOs), as concentrações intracelulares de espécies reativas de oxigênio (ROS) e o desenvolvimento embrionário nos diferentes grupos (C = controle; T1 = somente com melatonina; T2 = com melatonina e pOSP e T3 somente com pOSP). No tocante à expansão do CCOs, houve diferença (P<0,05) dos valores obtidos no grupo C em relação aos valores médios dos grupos T1, T2 e T3, porém não houve diferença entre os valores obtidos nos tratamentos (P>0,05). Na dosagem de ROS, não houve diferença entre os valores médios obtidos no grupo C (26,4±10,9) e o valor verificado no grupo T1 (23,4±7,8), porém no grupo T2 (21,3±9,7) o valor médio mostrou-se satisfatório em relação ao valor do grupo C. No entanto, o valor médio do grupo T3 (16,6±10,5) foi o que demonstrou resultado mais satisfatório quando comparado aos demais grupos (P<0,05). A produção de embriões foi avaliada por meio da taxa de clivagem. Não houve diferença (P >0,05) entre os valores obtidos entre o grupo C (48,9 %) e os valores verificados nos grupos T1 (51,5 %), T2 (50 %), T3 (57,7 %), nem destes entre si. Este estudo permitiu concluir que a proteína específica do oviduto recombinante e a melatonina foram eficientes em melhorar a expansão dos CCOs. Além disso, as células tratadas com pOSP mostraram-se com menor quantidade de ROS, podendo a pOSP ser considerada um antioxidante proteico.(AU)

The present study used melatonin and recombinant oviduct specific protein (pOSP) in in vitro maturation medium (IVM). The expansion of the cumulus-oocyte complexes (COCs), the intracellular concentrations of reactive oxygen species (ROS) and embryo development of the different groups were evaluated (C = control; T1 = melatonin; T2 = melatonin and pOSP and T3 = pOSP). Regarding the COCs expansion, the groups T1, T2 and T3 showed satisfactory results compared with group C (P<0.05), but there was no difference between treatments (P>0.05). In the ROS dosage, there was no difference between the mean values obtained in group C (26.4 ± 10.9) and group 1 (23.4 ± 7.8). However, in group 2 (21.3 ± 9.7), the average value was found to be satisfactory in relation group C. Despite that, the average value of treatment 3 (16.6 ± 10.5) was the most satisfactory result found compared to the other groups (P<0.05). The production of embryos was evaluated by cleavage rate, there was no difference between the values obtained in group C and the values recorded in groups T1 (51.5 %), T2 (50 %), T3 (57.7 %), and among them. This study showed that the pOSP and the melatonin were effective in the improvement of the expansion of COCs cells. In addition, the cells that were treated with pOSP presented a lower amount of ROS, allowing the pOSP to be considered a proteic antioxidant.(AU)

Adição da proteína específica do oviduto de porcas (pOSP) e da melatonina em meios de maturação e o efeito na clivagem in vitro de embriões suínos / Addition of the oviduct specific protein of porcine (pOSP) and melatonin in maturation media and their effect on the in vitro production of pig embryos

No presente estudo, utilizou-se a melatonina e a proteína específica do oviduto (pOSP) nos meios de maturação in vitro. Foram avaliadas a expansão do complexo cumulus-ovócito (CCOs), as concentrações intracelulares de espécies reativas de oxigênio (ROS) e o desenvolvimento embrionário nos diferentes grupos (C = controle; T1 = somente com melatonina; T2 = com melatonina e pOSP e T3 somente com pOSP). No tocante à expansão do CCOs, houve diferença (P<0,05) dos valores obtidos no grupo C em relação aos valores médios dos grupos T1, T2 e T3, porém não houve diferença entre os valores obtidos nos tratamentos (P>0,05). Na dosagem de ROS, não houve diferença entre os valores médios obtidos no grupo C (26,4±10,9) e o valor verificado no grupo T1 (23,4±7,8), porém no grupo T2 (21,3±9,7) o valor médio mostrou-se satisfatório em relação ao valor do grupo C. No entanto, o valor médio do grupo T3 (16,6±10,5) foi o que demonstrou resultado mais satisfatório quando comparado aos demais grupos (P<0,05). A produção de embriões foi avaliada por meio da taxa de clivagem. Não houve diferença (P >0,05) entre os valores obtidos entre o grupo C (48,9 %) e os valores verificados nos grupos T1 (51,5 %), T2 (50 %), T3 (57,7 %), nem destes entre si. Este estudo permitiu concluir que a proteína específica do oviduto recombinante e a melatonina foram eficientes em melhorar a expansão dos CCOs. Além disso, as células tratadas com pOSP mostraram-se com menor quantidade de ROS, podendo a pOSP ser considerada um antioxidante proteico.(AU)

The present study used melatonin and recombinant oviduct specific protein (pOSP) in in vitro maturation medium (IVM). The expansion of the cumulus-oocyte complexes (COCs), the intracellular concentrations of reactive oxygen species (ROS) and embryo development of the different groups were evaluated (C = control; T1 = melatonin; T2 = melatonin and pOSP and T3 = pOSP). Regarding the COCs expansion, the groups T1, T2 and T3 showed satisfactory results compared with group C (P<0.05), but there was no difference between treatments (P>0.05). In the ROS dosage, there was no difference between the mean values obtained in group C (26.4 ± 10.9) and group 1 (23.4 ± 7.8). However, in group 2 (21.3 ± 9.7), the average value was found to be satisfactory in relation group C. Despite that, the average value of treatment 3 (16.6 ± 10.5) was the most satisfactory result found compared to the other groups (P<0.05). The production of embryos was evaluated by cleavage rate, there was no difference between the values obtained in group C and the values recorded in groups T1 (51.5 %), T2 (50 %), T3 (57.7 %), and among them. This study showed that the pOSP and the melatonin were effective in the improvement of the expansion of COCs cells. In addition, the cells that were treated with pOSP presented a lower amount of ROS, allowing the pOSP to be considered a proteic antioxidant.(AU)

Características moleculares e qualidade de complexos cumulus-ovócito de doadoras de diferentes genótipos no verão e inverno.

A produção in vitro de embriões (PIVE) é uma biotecnologia importante para auxiliar na disseminação da genética de animais de interesse zootécnico, resultando em maior produtividade do rebanho. Entretanto, animais Bos taurus apresentam pior resultado na PIVE em relação aos Bos indicus em condições de clima tropical, possivelmente por serem mais suscetíveis ao estresse e apresentarem metabolismo diferente, o qual pode influir de forma negativa na competência dos ovócitos. Deste modo, o objetivo deste trabalho foi quantificar a abundância de mRNA de genes relacionados ao estresse térmico (HSPA5), estresse oxidativo (SOD2, GPX3), metabolismo de glicose (SLC2A3) e apoptose (CASP3, FOSL1) em ovócitos e células do cumulus (CC) de doadoras das raças Gir (n=10), Holandês (n=7) e ½ Sangue Gir-Holandês (n=12) ao final das estações de verão e inverno. Para isto, cada doadora foi submetida à 4 sessões consecutivas de aspiração folicular (OPU) com 72 horas de intervalo entre elas. Após a OPU, os complexos cumulus-ovócito (COCs) foram classificados de acordo com qualidade (graus 1, 2, 3 e 4) sendo os graus 1 e 2, e suas respectivas CC utilizados para análise molecular. A expressão dos genes SLC2A3, HSPA5, SOD2 e FOSL1 para CCs e ovócitos, GPX3 para CCs e CASP3 para ovócitos foi quantificada por PCR em tempo real. Animais zebuínos e mestiços apresentaram maior média de COCs viáveis recuperados (3,3±0,3 e 3,6±0,6, respectivamente) em relação aos taurinos (1,3±0,3). A estação de inverno provocou redução na média de COCs totais em zebuínos (7,5±0,7 vs. 5,9±0,9) e mestiços (17,8±3,4 vs. 11,2±0,5), em quanto o verão foi prejudicial para taurinos (2,7±0,9 vs. 4,2±1,9). Com relação a expressão dos genes, as estações do ano não apresentaram efeito sob nenhuma das raças. Ao avaliar a diferença na expressão dos genes entre as raças, independente da estação do ano, os genes HSPA5 e SLC2A3 em ovócitos apresentaram maior expressão em Holandês em relação aos ovócitos de doadoras ½ sangue Gir-Holandês. Para as CC não foi observada diferença na expressão dos genes entre as raças. Conclui-se que a estação do ano apresenta influência na quantidade de COCs recuperados, mas não na expressão de genes relacionados ao estresse. Além disso, ovócitos de animais taurinos apresentam maior expressão de genes relacionados ao estresse em relação às outras raças, sem que haja diferença na expressão desses genes em células do cumulus.

In vitro embryo production (IVEP) is an important biotechnology to assist in the geneticdissemination of animals of zootechnical interest, resulting in greater productivity of the herd. However, Bos taurus show worse results in IVEP compared with Bos indicus in tropical climate conditions, possibly because they are more susceptible to stress and presents different metabolism, which can negatively influence the oocyte competence. Thus, the objective with this work was to quantify the mRNA of genes related to heat stress (HSPA5), oxidative stress (GPX3, SOD2), glucose metabolism (SLC2A3) and apoptosis (CASP3, FOSL1) in oocytes and cumulus cells (CC) of Gir (n=10), Holstein (n=7) and ½ Holstein-Gir (n=12) donors at the end of summer and winter seasons. For this, each donor was submitted to 4 consecutive follicular aspiration session (OPU) with 72-hour interval between them. After OPU, the cumulus-oocyte complexes (COCs) were classified according to the quality (grades 1, 2, 3 and 4) with grades 1 and 2, and their respective CC used for molecular analysis. The expression of SLC2A3, HSPA5, SOD2 and FOSL1 genes for CCs and oocytes, GPX3 for CCs and CASP3 for oocytes was quantified by real-time PCR. Zebu and crossbred animal had higher average of viable COCs recovered (3.3±0.3 and 3.6±0.6, respectively) compared to Taurine (1.3±0.3). The winter season caused a reduction in the average of total COCs in zebu (7.5±0.7 vs. 5.9±0.9) and crossbred (17.8±3.4 vs. 11.2±0.5), while the summer was harmful for Taurine (2.7±0.9 vs. 4.2±1.9). Regarding the gene expression, the season had no effect on any breed. Assessing the difference in gene expression between breeds, regardless of the season, the HSPA5 and SLC2A3 genes in oocyte showed greater expression in Holstein compared to oocytes from ½ Holstein-Gir donors. For CCs, no difference was observed in gene expression between breeds. It is concluded that the season has an influence on the amount of COCs recovered, but not on the expression of stress-related genes. In addition, oocytes from Taurine animals show greater expression of stress-related genes than other breeds, with no difference in the expression of these genes in cumulus cells.