Assessment of caseous lymphadenitis in goats in a slaughterhouse in the Brazilian semi-arid region and estimates of economic losses due to carcass condemnation / Avaliação da linfadenite caseosa em caprinos em um abatedouro na região do semiárido brasileiro e estimativas de perdas econômicas por condenação de carcaças

Caseous lymphadenitis (CLA) caused by the pathogenic bacterium, Corynebacterium pseudotuberculosis, results in economic loss in goat farming. Its prevalence in Brazilian herds varies from 5 to 50%, generating expenses with treatment, loss in production, carcass and organ condemnation, and reduced price of the hide. This study aimed to describe the distribution of lesions and quantify the loss associated with CLA in goat breeding due to condemnation in a slaughterhouse located in a semiarid region. The study was conducted at the municipal slaughterhouse of the city of Patos, State of Paraíba, Northeastern Brazil, where goats from this intermediate geographical region are slaughtered. In 2017, 3,662 animals were slaughtered, an average of 305 per month. During the study period, from March to August 2017, 304 goats of both sexes and different ages of undefined breed were assessed. In the ante-mortem examination, inspection and palpation of the superficial lymph nodes was done; in the post-mortem examination, organ and viscera were assessed. The caseous material collected was sent for microbiological analysis. Of the 304 individuals, 227 [74.67% (95% CI: 69.50-79.23)] did not have any lesions, while 77 [25.33% (95% CI: 20.77-30.50)] showed abscesses suggestive of CLA, which was confirmed in 65 goats [84.41% (95% CI: 76.30-92.50)]. Sex (P = 0.044) and age (P = 0.002) were associated with infection. While the sex of the animals affected carcass and viscera weights and carcass yield, their age affected live weight, carcass, organ, and viscera weights; conversely, the incidence of CLA did not affect these variables. The average price in Real (R$) of a kilogram (kg) of goat meat cuts and “offal” was used to calculate the economic loss. Considering the average carcass weight (11,485 kg), organ weight (1,085 kg), and viscera weight (2,013 kg), 4,433.232 kg of meat was produced, resulting in R$ 72,945.43. The condemnations resulted in the loss of 269.894 kg, which is equivalent to R$ 4,540.33. CLA is responsible for a negative impact of 6.09% on production. Implementing control measures for this disease is important to increase the financial return in goat farming.

Linfadenite Caseosa (LC) causada pela bactéria patogênica Corynebacterium pseudotuberculosis resulta em perda econômica na caprinocultura. No rebanho brasileiro sua prevalência varia de 5 a 50%, gerando gastos com tratamento, queda de produção, condenação de carcaça e órgãos, e desvalorização da pele. O objetivo deste trabalho foi quantificar a perda associada à LC na caprinocultura de corte por condenação em abatedouro do semiárido, bem como caracterizar a distribuição das lesões. O trabalho foi realizado no Abatedouro Municipal da cidade de Patos, Estado da Paraíba, Nordeste do Brasil, onde ocorre abate de caprinos provenientes desta região geográfica intermediária. No ano de 2017 foram abatidos 3.662 animais, uma média de 305 por mês. Durante o período de estudo, março a agosto do mesmo ano, avaliou-se 304 caprinos sem padrão racial definido, ambos os sexos e idades diversas. No exame ante mortem foram submetidos à inspeção e palpação de linfonodos superficiais; post mortem, órgãos e vísceras. O material caseoso coletado foi submetido à análise microbiológica para diagnóstico. Dos 304 indivíduos, 227 [74,67% (IC 95%: 69,50-79,23)] não apresentaram qualquer lesão, enquanto 77 [25,33% (IC 95%: 20,77-30,50)] evidenciaram abscessos sugestivos de LC, com confirmação em 65 [84,41% (IC 95%: 76,30-92,50)]. Constatou-se associação de sexo (P = 0,044) e idade (P = 0,002) à infecção. Foi verificado efeito do sexo dos animais nas variáveis peso de carcaça, peso de vísceras e rendimento de carcaça, bem como houve efeito da idade nas variáveis peso vivo, peso de carcaça, peso de órgãos e peso de vísceras; no entanto, não houve efeito da ocorrência de LC nessas variáveis. Para cálculo de perda econômica adotou-se o preço médio em Real (R$) do quilograma (kg) dos cortes de carne caprina, e “miúdos”. Considerando o peso médio de carcaça (11,485 kg), órgãos (1,085 kg) e vísceras (2,013 kg), houve produção de 4.433,232 kg, resultando em R$ 72.945,43. As condenações subtraíram 269,894 kg, equivalente a R$ 4.540,33. Atribui-se à LC um impacto negativo de 6,09% na produção. Implementar medidas de controle para essa doença é importante para que se amplie o retorno financeiro à atividade.

Assessment of caseous lymphadenitis in goats in a slaughterhouse in the Brazilian semi-arid region and estimates of economic losses due to carcass condemnation / Avaliação da linfadenite caseosa em caprinos em um abatedouro na região do semiárido brasileiro e estimativas de perdas econômicas por condenação de carcaças

Caseous lymphadenitis (CLA) caused by the pathogenic bacterium, Corynebacterium pseudotuberculosis, results in economic loss in goat farming. Its prevalence in Brazilian herds varies from 5 to 50%, generating expenses with treatment, loss in production, carcass and organ condemnation, and reduced price of the hide. This study aimed to describe the distribution of lesions and quantify the loss associated with CLA in goat breeding due to condemnation in a slaughterhouse located in a semiarid region. The study was conducted at the municipal slaughterhouse of the city of Patos, State of Paraíba, Northeastern Brazil, where goats from this intermediate geographical region are slaughtered. In 2017, 3,662 animals were slaughtered, an average of 305 per month. During the study period, from March to August 2017, 304 goats of both sexes and different ages of undefined breed were assessed. In the ante-mortem examination, inspection and palpation of the superficial lymph nodes was done; in the post-mortem examination, organ and viscera were assessed. The caseous material collected was sent for microbiological analysis. Of the 304 individuals, 227 [74.67% (95% CI: 69.50-79.23)] did not have any lesions, while 77 [25.33% (95% CI: 20.77-30.50)] showed abscesses suggestive of CLA, which was confirmed in 65 goats [84.41% (95% CI: 76.30-92.50)]. Sex (P = 0.044) and age (P = 0.002) were associated with infection. While the sex of the animals affected carcass and viscera weights and carcass yield, their age affected live weight, carcass, organ, and viscera weights; conversely, the incidence of CLA did not affect these variables. The average price in Real (R$) of a kilogram (kg) of goat meat cuts and “offal” was used to calculate the economic loss. Considering the average carcass weight (11,485 kg), organ weight (1,085 kg), and viscera weight (2,013 kg), 4,433.232 kg of meat was produced, resulting in R$ 72,945.43. The condemnations resulted in the loss of 269.894 kg, which is equivalent to R$ 4,540.33. CLA is responsible for a negative impact of 6.09% on production. Implementing control measures for this disease is important to increase the financial return in goat farming.(AU)

Linfadenite Caseosa (LC) causada pela bactéria patogênica Corynebacterium pseudotuberculosis resulta em perda econômica na caprinocultura. No rebanho brasileiro sua prevalência varia de 5 a 50%, gerando gastos com tratamento, queda de produção, condenação de carcaça e órgãos, e desvalorização da pele. O objetivo deste trabalho foi quantificar a perda associada à LC na caprinocultura de corte por condenação em abatedouro do semiárido, bem como caracterizar a distribuição das lesões. O trabalho foi realizado no Abatedouro Municipal da cidade de Patos, Estado da Paraíba, Nordeste do Brasil, onde ocorre abate de caprinos provenientes desta região geográfica intermediária. No ano de 2017 foram abatidos 3.662 animais, uma média de 305 por mês. Durante o período de estudo, março a agosto do mesmo ano, avaliou-se 304 caprinos sem padrão racial definido, ambos os sexos e idades diversas. No exame ante mortem foram submetidos à inspeção e palpação de linfonodos superficiais; post mortem, órgãos e vísceras. O material caseoso coletado foi submetido à análise microbiológica para diagnóstico. Dos 304 indivíduos, 227 [74,67% (IC 95%: 69,50-79,23)] não apresentaram qualquer lesão, enquanto 77 [25,33% (IC 95%: 20,77-30,50)] evidenciaram abscessos sugestivos de LC, com confirmação em 65 [84,41% (IC 95%: 76,30-92,50)]. Constatou-se associação de sexo (P = 0,044) e idade (P = 0,002) à infecção. Foi verificado efeito do sexo dos animais nas variáveis peso de carcaça, peso de vísceras e rendimento de carcaça, bem como houve efeito da idade nas variáveis peso vivo, peso de carcaça, peso de órgãos e peso de vísceras; no entanto, não houve efeito da ocorrência de LC nessas variáveis. Para cálculo de perda econômica adotou-se o preço médio em Real (R$) do quilograma (kg) dos cortes de carne caprina, e “miúdos”. Considerando o peso médio de carcaça (11,485 kg), órgãos (1,085 kg) e vísceras (2,013 kg), houve produção de 4.433,232 kg, resultando em R$ 72.945,43. As condenações subtraíram 269,894 kg, equivalente a R$ 4.540,33. Atribui-se à LC um impacto negativo de 6,09% na produção. Implementar medidas de controle para essa doença é importante para que se amplie o retorno financeiro à atividade.(AU)

Prevalence of bovine tuberculosis in the Aksu Region of Xinjiang, China, between 1985 and 2016 / Prevalência de tuberculose bovina na região Aksu de Xinjiang, China, entre 1985 e 2016

Prevalence of bovine tuberculosis infection in cattle in Aksu Prefecture determined by intradermal tuberculin skin test (TST), between 1985 and 2016. Cattle were analyzed according to region, feeding pattern, herds and age. A total of 890,009 cattle were tested, with overall bovine tuberculosis prevalence of 0.13% (1172/890009). Statistically significant difference was found in feeding pattern and herds. Prevalence in cows (0.19%, 615/327022) was higher than that in beeves (P< 0.01, OR= 1.903, 95% CI = 1.696 to 2.134). Significant difference (P< 0.01; OR= 2.238, 95%; CI= 1.937 to 2.585) was evident for rates for bovine tuberculosis in the peasant household (0.12%, 942/802343) and farm groups (0.26%, 230/87666). The overall prevalence of bTB was decreased in the Aksu Prefecture, especially the positive rate was under 0.1% in 2010s. We concluded that the control measures forbovine tuberculosis in the Aksu region cattle herds are effective.(AU)

Prevalência de infecção por tuberculose bovina em gado na prefeitura de Aksu determinada por teste cutâneo tuberculínico (TST) entre 1985 e 2016 foi avaliada. O gado foi analisado de acordo com região, padrão alimentar, rebanho e idade. Um total de 890009 animais foram testados, com prevalência de 0,13% de tuberculose bovina (1172/890009). Diferença estatisticamente significativa foi encontrada em padrão alimentar e rebanhos. Prevalência em vacas (0,19%, 615/327022) foi mais alta que em bois (P< 0,01, OR= 1,903, 95% CI = 1,696 a 2,134). Diferenças significativas (P< 0,01; OR= 2,238, 95%; CI= 1,937 a 2,585) foram evidentes em taxas para tuberculose bovina em casas de camponeses (0,12%, 942/802343) e grupos de fazendeiros (0,26%, 230/87666). A prevalência de bTB caiu na prefeitura Aksu, a taxa positiva se encontrava abaixo de 0.1% a partir de 2010. Conclui-se que as medidas de controle para tuberculose bovina na região de Aksu foram eficazes.(AU)

Prevalence of bovine tuberculosis in the Aksu Region of Xinjiang, China, between 1985 and 2016 / Prevalência de tuberculose bovina na região Aksu de Xinjiang, China, entre 1985 e 2016

Prevalence of bovine tuberculosis infection in cattle in Aksu Prefecture determined by intradermal tuberculin skin test (TST), between 1985 and 2016. Cattle were analyzed according to region, feeding pattern, herds and age. A total of 890,009 cattle were tested, with overall bovine tuberculosis prevalence of 0.13% (1172/890009). Statistically significant difference was found in feeding pattern and herds. Prevalence in cows (0.19%, 615/327022) was higher than that in beeves (P< 0.01, OR= 1.903, 95% CI = 1.696 to 2.134). Significant difference (P< 0.01; OR= 2.238, 95%; CI= 1.937 to 2.585) was evident for rates for bovine tuberculosis in the peasant household (0.12%, 942/802343) and farm groups (0.26%, 230/87666). The overall prevalence of bTB was decreased in the Aksu Prefecture, especially the positive rate was under 0.1% in 2010s. We concluded that the control measures forbovine tuberculosis in the Aksu region cattle herds are effective.(AU)

Prevalência de infecção por tuberculose bovina em gado na prefeitura de Aksu determinada por teste cutâneo tuberculínico (TST) entre 1985 e 2016 foi avaliada. O gado foi analisado de acordo com região, padrão alimentar, rebanho e idade. Um total de 890009 animais foram testados, com prevalência de 0,13% de tuberculose bovina (1172/890009). Diferença estatisticamente significativa foi encontrada em padrão alimentar e rebanhos. Prevalência em vacas (0,19%, 615/327022) foi mais alta que em bois (P< 0,01, OR= 1,903, 95% CI = 1,696 a 2,134). Diferenças significativas (P< 0,01; OR= 2,238, 95%; CI= 1,937 a 2,585) foram evidentes em taxas para tuberculose bovina em casas de camponeses (0,12%, 942/802343) e grupos de fazendeiros (0,26%, 230/87666). A prevalência de bTB caiu na prefeitura Aksu, a taxa positiva se encontrava abaixo de 0.1% a partir de 2010. Conclui-se que as medidas de controle para tuberculose bovina na região de Aksu foram eficazes.(AU)

Implicações no diagnóstico da mastite subclínica bovina de vacas em lactação coinfectadas por Streptococcus agalactiae e Staphylococcus aureus

Os patógenos da mastite podem ocasionar diferentes faixas de contagem de células somáticas (CCS) e podem ser liberados pela glândula mamária em quantidades e padrões específicos. Devido a esta dinâmica, a infecção intramamária mista por Streptococcus agalactiae e Staphylococcus aureus pode gerar interferência no isolamento de S. aureus na cultura microbiológica. Esteestudo teve como objetivos avaliar a variação dos parâmetros de avaliação do exame microbiológico para diagnóstico de S. aureus em vacas naturalmente infectadas por S. aureus e S. agalactiae durante a erradicação de S. agalactiae e estimar médias de CCS e liberação de bactérias de acordo com patógenos isolados.Um rebanho foi selecionado e coletas mensais e exames microbiológicos do leite foram realizados durante cinco meses. Através dos resultados obtidos, o protocolo de blitz terapia foi implementado em vacas positivas S. agalactiae. Para estimativa dos parâmetros de avaliação do teste, os resultados do exame microbiológico a cada dois meses foram comparados. Logo, a sensibilidade, especificidade, valores preditivos e acurácia foram estimados para o diagnóstico de S. aureus através do exame microbiológico. Prevalência, incidência, taxa de eliminação e taxa de infecções crônicas foram calculados para S. aureus e S. agalactiae ao decorrer do estudo. O padrão de liberação de bactérias encontrado para S. agalactiae foi 2,3 vezes maior do que S. aureus, embora ambos os patógenos implicarem em altos valores de CCS. A sensibilidade do exame microbiológico para S. aureus aumentou de 50,0% para 76,5% no final do estudo. Todavia, no momento em que houve queda abrupta da prevalência de S. agalactiae, a sensibilidade chegou ao auge de 89,7%. Ao decorrer dos 5 meses de estudo, a especificidade aumentou de 79,0% para 91,4%. Valores preditivos positivo e negativo foram de 62,2% e 69,5% no inicio do estudo, enquanto na última comparação apresentaram as estimativas 85,7% e 85,2%, respectivamente. Acurácia aumentou de 67,1% para 85,4% após 4 procedimentos de tratamento de S. agalactiae. A prevalência de S. agalactiae diminuiu de 61,0% para 3,8% enquanto a de S. aureus aumentou de 28,3% para 35,0%. A taxa de infecções crônicas por S. aureus se elevou de 19,4% para 28,7%. De acordo com a melhora das estimativas de avaliação da cultura microbiológica enquanto o tratamento de S. agalactiae ocorria, é possível confirmar a interferência que este patógeno implicava no exame microbiológico de S. aureus. Após cinco meses de blitz terapia, a sensibilidade do exame microbiológico para S. aureus aumentou de forma significante, melhorando o diagnóstico de infecções crônicas, impactando a prevalência estimada para este patógeno.

Mastitis pathogens cause differents levels of somatic cell counts (SCC) and can be shedded by mammary gland in quantity and specific patterns. Through this dynamic, the mixed intramammary infection by Streptococcus agalactiae and Staphylococcus aureus can cause interference in S. aureus isolation in microbiological culture. The objectives of this study were evaluate the variation of evaluation parameters of microbiological culture to diagnose S. aureus in naturally infected cows by S. aureus and S. agalactiae during S. agalactiae eradication; and estimate SCC means and shedding patterns according to pathogens isolated. A herd was selected and monthly milk collection were proceeded during five months. Through obtained results, the blitz therapy protocol was implemented in cows positive to S. agalactiae. To estimate the evaluation parameters of the test, the microbiological exam results of each two months were compared. Sensitivity, specificity, predictive values and accuracy were estimated to S. aureus diagnose by microbiological culture. Prevalence, incidence, elimination and chronic infected rates were determined to S. aureus and S. agalactiae during the study. Shedding pattern of S. agalactiae was 2.3 times higher than S. aureus, although both pathogens implied in a high SCC pattern. Sensitivity of microbiological exam to S. aureus raised from 50.0% to 76.5% at final of the study. However, at the same time that S. agalactiae prevalence had sudden decrease, the sensitivity reached the peak of 89.7%. During the five months of study, specificity raised from 79.0% to 91.4%. Predictive positive and predictive negative values were 62.2% and 69.5% at first results, while the last comparison these parameters showed 85.7% and 85.2%, respectively. Accuracy increased from 67.1% to 85.4% after four S. agalactiae treatment procedures. S. agalactiae prevalence decreased from 61.0% to 3.8%, while S. aureus prevalence raised from 28.3% to 35.0%.Chronic infection rate of S. aureus raised from 19.4% to 28.7%. According to the better estimatives results of microbiological culture during S. agalactiae treatment, it is possible to confirm the interference that this pathogen implied S. aureus microbiological exam. After 5 months of blitz therapy protocol, microbiological exam sensitivity to S. aureus significantly improved, as well as the diagnose of chronic infections, affecting the prevalence of this pathogen

Molecular characterization of Staphylococcus aureus and Streptococcus uberis isolates of intramammary infections of dairy cows

A mastite bovina é a doença mais frequente em vacas leiteiras, o que resulta em significativas perdas econômicas. Staphyloccoccus aureus e Streptococcus uberis estão entre as principais causas de mastite clínica (MC) e subclínica (MSC), pois são de difícil controle por medidas convencionais, já que ambos possuem mecanismos de evasão do sistema imune, aderência e internalização nos tecidos mamários. Sendo assim, esta tese foi organizada em três experimentos: 1) Caracterização genotípica de S. aureus isolados de mastite de rebanhos brasileiros e de outros países; 2) Caracterização genotípica e sensibilidade aos antimicrobianos de isolados de S. aureus identificados antes e após o tratamento de MSC durante a lactação e 3) Diversidade genotípica e fatores de virulência de S. uberis cepas de infecções intramamárias de vacas leiteiras no Brasil. No experimento 1, 70 isolados de S. aureus (35 de MC e 35 de MSC) foram isoladas de amostras de leite de quartos mamários de vacas em 16 rebanhos do Brasil. Estes isolados foram agrupados à isolados provenientes da Argentina, Colômbia, Alemanha, Itália, EUA, África do Sul e Tunísia para genotipagem por RS-PCR, baseada na amplificação do espaço intergênico 16S-23S rRNA e investigados em relação a 26 fatores de virulência. No experimento 2, 79 isolados de S. aureus foram genotipados por eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE) e avaliados quanto à concentração inibitória mínima (CIM) para determinação dos perfis de resistência aos antimicrobianos. No experimento 3, 44 isolados de S. uberis foram avaliados por hibridização de DNA através da metodologia dot blot para determinação da diversidade genotípica. Os resultados do experimento 1 indicaram alta variabilidade genotípica de S. aureus de acordo com os países avaliados, e prevalência de genes relacionados à invasão ao organismo do hospedeiro (clfA, nuc, lukE, lukE-lukD, lukS/F-P, scn, chp, fmtB, sak, cna) e genes associados à evasão da resposta imune (tsst, eta, etb, sea, sec, sed, seg, seh, sei, sej, sel, mecA). Além disso, foi demonstrado que o padrão genotípico de isolados de S. aureus foi específico para cada país, sugerindo que as estratégias de controle devem ser formuladas de acordo com a região em questão e com a virulência das cepas envolvidas na infecção. No experimento 2, foi identificada alta similaridade entre os isolados de um mesmo rebanho indicando especificidade genotípica dentro de uma mesma região, mesmo após os tratamentos durante a lactação. Além disso, grande porcentagem dos isolados se mostrou suscetível à gentamicina, enrofloxacina, ciprofloxacina e tetraciclina, embora alta resistência para a amoxicilina e cefalexina tenha sido também observada. No experimento 3, foram observados nove padrões de dot blot, indicando alta heterogeneidade dos isolados de S. uberis. Foi possível observar alta prevalência dos genes reguladores de fatores de virulência, como sua e gapC, responsáveis pela aderência e internalização de S. uberis nos tecidos da glândula mamária. Assim, após a conclusão dos três experimentos desta tese, foi possível concluir que há alta diversidade genotípica em S. aureus e S. uberis isolados de infecções intramamárias no Brasil e em outros países. Além disso, foi confirmado que estas duas espécies apresentam inúmeros fatores de virulência que contribuem para sua permanência na glândula mamária e dificultam o controle da mastite por meio de medidas convencionais. As técnicas moleculares são eficientes na identificação e caracterização genética de isolados bacterianos e são ferramentas auxiliares no diagnóstico e epidemiologia da mastite.

The bovine mastitis is the disease more frequent of dairy cows, which results in significant economic losses. Staphyloccoccus aureus and Streptococcus uberis are among the main causes of clinical (CM) and subclinical (MSC) mastitis, because they are difficult to control by conventional measures, since both have mechanisms of immune system evasion, adherence and internalization in the mammary tissues. Therefore, this thesis was organized in three experiments: 1) Genotypic characterization of S. aureus isolated from mastitis from Brazilian herds and from other countries; 2) Genotypic characterization and antimicrobial sensitivity of S. aureus isolates identified before and after treatment of MSC during lactation; and 3) Genotypic diversity and virulence factors of S. uberis isolated from intramammary infections of dairy cows in Brazil. In experiment 1, 70 S. aureus isolates (35 from MC and 35 from MSC) were identified in milk samples from cows' mammary quarters in 16 herds in Brazil. These isolates were grouped with isolates from Argentina, Colombia, Germany, Italy, USA, South Africa and Tunisia for genotyping by RS-PCR, based on the amplification of the 16S-23S rRNA intergenic space and investigated in relation to 26 virulence factors. In experiment 2, 79 S. aureus isolates were genotyped by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) and evaluated by minimum inhibitory concentration (MIC) to assess antimicrobial resitance profiles. In experiment 3, 44 isolates of S. uberis were evaluated by DNA hybridization using the dot blot methodology, to determine the genotypic diversity. The results of experiment 1 indicated high genotypic variability of S. aureus according to the countries evaluated, prevalence of genes related to invasion to the host organism (clfA, nuc, lukE, lukE-lukD, lukS / FP, scn, chp, fmtB, sak, cna) and presence of genes associated to the evasion of the immune response (tsst, eta, etb, sea, sec, sed, sec, seh, sei, sej, sel, mecA). In addition, it was shown that the genotype pattern os S. aureus isolates were specific to each country, suggesting that control strategies should be formulated according to the region in question and the virulence of the strains involved in the infection. In experiment 2, a high similarity was identified between the isolates of the same herd, indicating genotypic specificity within the same region, even after treatments during lactation. In addition, a large percentage of the isolates were susceptible to gentamicin, enrofloxacin, ciprofloxacin and tetracycline, although high resistance to amoxicillin and cephalexin has also been observed. In experiment 3, nine dot blot patterns were observed, indicating high heterogeneity of S. uberis isolates. It was possible to observe a high prevalence of genes regulating virulence factors, such as sua and gapC, responsible for the adherence and internalization of S. uberis in the mammary gland tissues. Thus, after the conclusion of the three experiments in this thesis, it was possible to conclude that there is a high genotypic diversity in S. aureus and S. uberis isolated from intramammary infections in Brazil and other countries. In addition, it has been confirmed that these two species have numerous virulence factors that contribute to their permanence in the mammary gland and that hinder the conventional mastitis control measures. The molecular techniques are efficient in the identification and genetic characterization of bacterial isolates and are auxiliary tools in the diagnosis and epidemiology of mastitis.

Investigação metagenômica em queijos artesanais produzidos com leite não pasteurizado

INVESTIGAÇÃO METAGENÔMICA EM QUEIJOS ARTESANAIS PRODUZIDOS COM LEITE NÃO PASTEURIZADO Autor: Ezequiel Davi dos Santos Orientador: Elci Lotar Dickel Passo Fundo, 30 de Julho de 2019 Os queijos artesanais informais/clandestinos são produzidos com leite cru oriundo de vacas muitas vezes sem status sanitário e possivelmente obtido sem boas práticas de ordenha, e fabricado sem cuidados higiênicos. Isso pode permitir a disseminação tanto de agentes prejudiciais à tecnologia de produção de lácteos como de microrganismos zoonóticos e/ou que podem causar intoxicação, infecção ou toxinfecção alimentar. Verificar a qualidade microbiológica de produtos artesanais legais ou informais é sempre um desafio, pois são alimentos que precisam da atuação de um microbioma diverso para manifestação de características ligadas ao aroma, sabor, cor, textura e tempo de prateleira. Até pouco tempo era utilizada somente análises dependentes de cultivo microbiano, o que limitava a identificação do microbioma. Entretanto, nos últimos anos estão sendo utilizadas técnicas moleculares cada vez mais modernas tais como o sequenciamento gênico e a metagenômica, pois essas ferramentas conseguem fornecer uma identificação ampla dos microrganismos que estão na amostra, sem a necessidade de cultivo. Nesse contexto, o presente estudo buscou investigar e descrever o bacterioma de cinco amostras de leite cru e 45 amostras de queijos artesanais informais/clandestinos, de municípios do Norte do Rio Grande do Sul. O leite era recém-obtido, com controle sanitário do rebanho e oriundo de cinco propriedades distintas de um mesmo município, servindo como grupo controle. Os queijos informais foram adquiridos em nove municípios, sendo cinco queijos de cada localidade. Os queijos foram avaliados quanto ao seu aspecto visual, e as amostras de leite e queijos foram submetidas a sequenciamento de nova geração (NGS) e metagenômica. Visualmente os queijos apresentaram ausência de padrão de formato, casca, maturação, massa interna e número de olhaduras. As análises moleculares identificaram 199 espécies difundidas em 59 gêneros bacterianos distintos. Onze gêneros foram classificados como benéficos ao aroma, sabor, cor e textura dos queijos, enquanto outros 31 gêneros foram classificados como prejudiciais para essas características. Também foram identificados 17 gêneros com potencial patogênico para a saúde humana e animal. Os testes KruskalWallis e Dunn mostraram diferença significativa (p<0,05) entre a quantidade de gêneros bacterianos encontrados no grupo controle (leite) e queijos informais de dois municípios amostrados, inferindo que nesses locais a aquisição desses lácteos possui maior risco relativo. Diante dos resultados, o presente estudo demonstrou que as ferramentas moleculares utilizadas foram de grande eficácia na detecção e identificação do microbioma de queijos artesanais informais, bem como na aferição de riscos aos consumidores desses produtos lácteos.

METAGENOMIC INVESTIGATION IN ARTISANAL CHEESES PRODUCED WITH UNPASTEURIZED MILK Author: Ezequiel Davi dos Santos Advisor: Elci Lotar Dickel Passo Fundo, 30 de Julho de 2019 Informal/clandestine artisanal cheeses are produced from raw cow milk that is often unhealthy and possibly obtained without good milking practices and manufactured without hygienic care. This may allow the spread of both harmful dairy technology and zoonotic microorganisms and/or agents that may cause food poisoning, infection or toxinfection. Checking the microbiological quality of legal or informal artisanal products is always a challenge since they are foods that need the action of a diverse microbiome to manifest characteristics related to aroma, taste, color, texture and shelf time. Until recently, only microbial culture-dependent analyses were used, which limited microbiome identification. However, in recent years, increasingly modern molecular techniques such as gene sequencing and metagenomics have been used, as these tools can provide a broad identification of the microorganisms in the sample without the need for cultivation. In this context, the present study sought to investigate and describe the bacterioma of five samples of raw milk and 45 samples of informal/clandestine artisanal cheeses from municipalities of northern Rio Grande do Sul. The milk was recently obtained, with sanitary control of the herd. and coming from five different properties of the same municipality, serving as a control group. Informal cheeses were purchased in nine municipalities, five of them from each locality. The cheeses were evaluated for visual appearance, and the milk and cheese samples were subjected to next-generation sequencing (NGS) and metagenomics. Visually the cheeses had no pattern shape, rind, maturation, internal mass and number of eyes. Molecular analyses identified 199 species spread in 59 distinct bacterial genera. Eleven genus were classified as beneficial to cheese aroma, taste, color, and texture, while 31 other genus were classified as harmful to these characteristics. Seventeen genus with pathogenic potential for human and animal health were also identified. Kruskal-Wallis and Dunn tests showed a significant difference (p <0.05) between the amount of bacterial genera found in the control group (milk) and informal cheese from two sampled municipalities, inferring that in these places the acquisition of these dairy products has a higher relative risk. Given the results, the present study demonstrated that the molecular tools used were very effective in detecting and identifying the informal artisanal cheese microbiome, as well as in assessing risks to consumers of these dairy products.

Frequency of antibodies against bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1) in beef cattle not vaccinated / Frequência de anticorpos contra o herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) em bovinos de corte não vacinados

Bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1), is responsible for clinical manifestations such as infectious bovine rhinotracheitis, abortion, conjunctivitis, infectious pustular vulvovaginitis and balanoposthitis. This virus has been responsible for major losses in different productive and reproductive herds in the country. Thus, the objective of this study was to estimate the frequency of antibodies against BoHV-1 in beef heifers not vaccinated in Microregion of Imperatriz, Maranhao, and identify the age group most affected by the virus, as well as a study of factors associated with virus infection and to evaluate the indirect ELISA using the serum neutralization (SN) as a reference standard. The study was conducted in 48 herds, cutting, distributed in 12 counties of Microregion of Imperatriz. The samples were collected from female cattle stratified into three age groups, ? 12 months, between 12 and 36 months and ? 36 months of age. The samples were subjected to two serological tests, ELISA and SN. In each herd, an epidemiological questionnaire was applied in order to obtain information on management and reproductive sanitary, for the study of risk factors. The frequency of antibodies against BoHV-1 in Microregion of Imperatriz was 63.23%, and the municipalities of Açailândia Buritirana showed the highest frequencies, both with 80.44%, the most affected age group, the Microregion, was animals aged ≥ 36 months (69.65%). Based on the results we can conclude that the frequency of antibodies against BoHV-1 is high, between the age groups most affected were the animals aged ≥ 36 months were considered risk factors for virus transmission, return to estrus (OR=1.874), recovery of animals from other states / region (OR=1.365) and the creation of goat / sheep associated with bovine (OR=1.348), the indirect ELISA technique showed moderate concordance when compared to SN technique, which is the gold standard technique for diagnosis of BoHV-1.(AU)

O herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1), é responsável por manifestações clínicas como a rinotraqueíte infecciosa bovina, abortamentos, conjuntivite, balanopostite e vulvovaginite pustular infecciosa. Esse vírus tem sido responsável por grandes prejuízos produtivos e reprodutivos em diversos rebanhos do país. Deste modo, o objetivo desse trabalho foi estimar a frequência de anticorpos contra o BoHV-1 em fêmeas bovinas de corte não vacinadas, identificar a faixa etária mais acometida, bem como, realizar um estudo dos fatores associados à infecção do vírus e avaliar a técnica ELISA indireto utilizando a soroneutralização (SN) como padrão de referência. O estudo foi realizado em 48 rebanhos de corte, distribuídos em 12 municípios da Microrregião de Imperatriz, Maranhão. As amostras foram coletadas de fêmeas bovinas estratificadas em três faixas etárias, ? 12 meses, entre 12 e 36 meses e ? 36 meses de idade. Os testes empregados foram: ELISA indireto e SN. Em cada rebanho, foi aplicado um questionário epidemiológico, com o objetivo de obter informações sobre manejo sanitário e reprodutivo, para o estudo de fatores de risco. A frequência de anticorpos contra o BoHV-1 na Microrregião de Imperatriz foi de 63,23% (n=698), os municípios de Açailândia e Buritirana, apresentaram maiores frequências, ambos com 80,44% (n=74). a faixa etária mais acometida, foram a dos animais com idade ≥ 36 meses; foram considerados fatores de risco para a transmissão do vírus, retorno ao cio (OR=1,874), reposição de animais oriundos de outros estados/região (OR=1,365) e a criação de caprinos/ovinos associados com bovinos (OR=1,348); a técnica ELISA indireta apresentou concordância moderada quando comparada a técnica de SN, que é a técnica padrão ouro de diagnóstico para BoHV-1.(AU)

CARACTERIZAÇÃO MOLECULAR E ANTIGÊNICA DE Clostridium chauvoei ISOLADOS DE CASOS DE CARBÚNCULO SINTOMÁTICO EM BOVINOS

As clostridioses formam o grupo de infecções e intoxicações causadas por micro-organismos anaeróbios do gênero Clostridium. Dentre estas enfermidades, a principal doença que determina mionecrose é o carbúnculo sintomático, uma infecção endógena e aguda que acomete principalmente os bovinos, cujo agente etiológico é Clostridium chauvoei. O controle desta enfermidade se baseia em medidas adequadas de manejo e vacinações sistemáticas de todo o rebanho. As vacinas contra o carbúnculo sintomático comercializadas no Brasil são, no geral, compostas de múltiplos antígenos e seguem as normas para o controle da qualidade e eficiência definidas na legislação publicada pela Secretaria de Defesa Agropecuária (SDA) do Ministério de Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA). No entanto, são escassos os trabalhos com evidências científicas que comprovem a eficiência da vacina, assim como trabalhos que indiquem o grau de similaridade entre cepas de C. chauvoei utilizadas na produção destas vacinas, cepas de maior ocorrência no campo e a cepa padrão utilizada no teste de eficiência da vacina pelo MAPA. Da mesma forma os relatos acerca de falhas vacinais são informais e as circunstâncias destas falhas não são claramente elucidadas. Os principais fatores de virulência de C. chauvoei são a neuraminidase, citotoxina A (CctA) e a flagelina, sendo que a CctA parece ser o principal. Esta tese teve por objetivo avaliar a eficácia protetiva de vacinas comerciais frente ao desafio com C. chauvoei, bem como realizar a comparação genômica das cepas utilizadas no desafio vacinal (manuscrito 2). A diversidade molecular foi investigada, a partir do sequenciamento parcial dos genes da neuraminidase (nanA), CctA (cctA) e flagelina (fliC) de dezessete cepas de C. chauvoei isoladas de casos clínicos em bovinos (manuscrito 3). Também pretendeu à comparação genômica de seis cepas isoladas de casos de carbúnculo sintomático no Brasil com vistas a pesquisar diferenças moleculares na única cepa com apresentação clínica visceral (manuscrito 4). Dessa forma, discutir as implicações da caracterização molecular e antigênica no entendimento do carbúnculo sintomático, e subsidiar futuras pesquisas a fim de melhorar o controle da doença. Concluímos que o desempenho equivalente das duas cepas de C. chauvoei após o desafio in vivo e a incapacidade de infectar os animais vacinados estão correlacionados com a homologia genética das cepas, sugerindo que as falhas vacinais não estão relacionadas à variabilidade antigênica. O sequenciamento parcial dos genes nanA e cctA mostrou alta homologia entre as cepas. Por essa razão, estes antígenos solúveis são bons candidatos a antígenos vacinais. Além disso, três alelos foram detectados no gene fliC. Na comparação genômica as seis cepas brasileiras se mostraram altamente conservadas, tal como foi observado no sequenciamento parcial dos genes e na comparação das cepas utilizadas no desafio vacinal. Os resultados apresentados nesta tese podem ser um indicativo de que neste momento evolutivo C. chauvoei não está sendo desafiado a desenvolver mutações

Clostridioses are the group of infections and intoxications caused by anaerobic microorganisms of the genus Clostridium. Among these diseases, the main disease that causes myonecrosis is blackleg, an endogenous and acute infection that mainly affects cattle, whose etiological agent is Clostridium chauvoei. Control of this disease is based on adequate management measures and systematic vaccinations of herd. Vaccines against blackleg marketed in Brazil are, in general, composed of multiple antigens and follow the standards for quality and efficiency control defined in the legislation published by the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply (MAPA). However, there are few studies with scientific evidence to prove the effectiveness of the vaccine, as well as studies indicating the degree of similarity between strains of C. chauvoei used in the production of these vaccines, strains occurring in the field and the standard strain. Likewise reports of vaccine failures are informal and the circumstances of these failures are not clearly elucidated. The main virulence factors of C. chauvoei are neuraminidase, cytotoxin A (CctA) and flagellin, and CctA appears to be the main. This thesis aimed to evaluate the protective efficacy of commercial vaccines against the challenge with C. chauvoei, as well as to carry out the genomic comparison of the strains used in the vaccine challenge (manuscript 2). The molecular diversity, from the partial sequencing of the neuraminidase (nanA), CctA (cctA) and flagellin (fliC) genes of seventeen strains of C. chauvoei isolated from clinical cases in cattle was investigated (manuscript 3). It also aimed to the genomic comparison of six strains isolated from cases of blackleg in Brazil with a view to investigate molecular differences in the only strain with visceral clinical presentation (manuscript 4). Thus, to discuss the implications of molecular and antigenic characterization in the understanding of blackleg, and to support future research with the objective of improving disease control. We concluded that the similar performance observed between the strains in challenge in vivo and the inability to infect the vaccinated animals are correlated with the genetic homology of the strains, suggesting that vaccine failures are not related to antigenic variability. Partial sequencing of nanA and cctA genes showed high homology between strains. For this reason, these soluble antigens are good candidates for vaccine antigens. Moreover, three different fliC alleles were detected among the strains studied. In the genomic comparison, the six Brazilian strains were highly conserved, as observed in the partial sequencing of the genes and in the comparison of the strains used in the vaccine challenge. The results presented in this thesis may be indicative that at this evolutionary time C. chauvoei is not being challenged to develop mutations.

Seasonal distribution of gastrointestinal nematode infections in sheep in a semiarid region, northeastern Brazil / Distribuição sazonal de infecção por nematóides gastrintestinais em ovinos em área semiárida, nordeste do Brasil

The objective of this study was to determine the seasonal distribution and gastrointestinal nematode parasite load in crossbred Santa Inês tracer lambs, and to correlate the rainfall during the study period with occurrences of parasitic infections. Sixty-four male tracer lambs between the ages of four and eight months were used in the study. Two tracer lambs were inserted into the herd every 28 days to determine the pattern of infective larvae available in the environment. Variation in the fecal egg count (FEC) of nematodes was observed at the study site, with many samples containing undetectable parasite loads during the dry season. The larvae identified in coprocultures were Haemonchus sp., Trichostrongylus sp., Cooperia sp., Strongyloides sp. and Oesophagostomum sp. The nematodes recovered at necropsy were Haemonchus contortus, Trichostrongylus colubriformis, Cooperia punctata, C. pectinata, Trichuris sp., Oesophagostomum sp. and Skrajabinema ovis. The total number of larvae and the total number of immature and adult forms recovered from the tracers showed seasonal distributions that significantly correlated with the amount of rainfall received that month (p value ≅ 0.000 in all cases ). The species H. contortus was predominant in the herd and should be considered to be main pathogenic nematode species in these hosts under these conditions.

O objetivo deste estudo foi determinar a distribuição sazonal e a carga parasitária de nematóides gastrintestinais em cordeiros traçadores, mestiços da raça Santa Inês, e relacionar a ocorrência dessas infecções com a variável chuva no mês. Foram utilizados 64 animais, machos, com idade variando entre quatro e oito meses. Em intervalos de 28 dias, dois traçadores foram inseridos no rebanho para determinar o padrão de disponibilidade de larvas infectantes no ambiente. Variação na contagem de ovos por grama (OPG) de nematóides foi observada no local do estudo, com alta frequência de amostras com carga parasitária indetectável no período seco. Das coproculturas foram identificadas larvas de Haemonchus sp., Trichostrongylus sp., Cooperia sp.,Strongyloides sp. e Oesophagostomum sp. Os nematóides recuperados à necropsia foram Haemonchus contortus, Trichostrongylus colubriformis, Cooperia punctata, C. pectinata, Trichurissp., Oesophagostomum sp. e Skrajabinema ovis. O total de larvas, de formas imaturas e de adultos recuperados dos traçadores, mostraram distribuição sazonal significativamente relacionada com a ocorrência de chuva no mês (valor-p ≅ 0,000, para todos os casos, ). A espécie H. contortus foi predominante no rebanho e deve ser considerada a espécie de nematóide mais importante nesses hospedeiros, sob as condições do estudo.

Assessing the histopathology to depict the different stages of bovine tuberculosis infection in a naturally infected herd / Avaliação da histopatologia na descrição dos diferentes estágios da tuberculose bovina em rebanhos naturalmente infectados

The standard method for detection of bovine tuberculosis (TB) is the single intradermal tuberculin test (SITT). Nevertheless, current studies suggest that a single test is not enough to detect all cattle infected by TB, particularly when animals present different stages of infection. A dairy herd comprised of 270 cows was studied and 15 were reactive to SITT plus nine inconclusive animals. Blood samples (for IFN and ELISA) were collected from these 24 cows. At 30 days after injection of PPD, all the cows that were reactive to any of the employed tests were slaughtered, and tissues were processed by Bacteriology, Histopathology (HP) and PCR. According to HP 33.4% of the animals were positive, 45.8% inconclusive and 20.8% were negative. The inconclusive samples came from IFN positive animals, signalizing recent infection. Regarding the animals that were negative to HP, all of them were identified by IFN while ELISA was negative. Immune responses are different in recent and advanced infections, what supports the identification between chronically or recently infected animals. This multidisciplinary approach is mandatory for the interpretation of the various tools that are frequently employed for the diagnosis of TB and mainly to identify all infected animals.(AU)

O método padrão para detecção de tuberculose bovina (TB) é o Teste Cervical Simples (TCS). No entanto, estudos atuais sugerem que um único teste não é su[1]iciente para detectar todos os bovinos infectados por TB, particularmente quando os animais de uma rebanho apresentam diferentes estágios de infecção. Um rebanho leiteiro composto de 270 vacas foi estudado e no TCS 15 animais foram reagentes e nove animais inconclusivos. Amostras de sangue (para IFN e ELISA) foram coletadas destas 24 vacas. Trinta dias após a injeção do PPD, todas as vacas que foram reativas a qualquer um dos testes utilizados foram abatidas e os tecidos foram processados por bacteriologia, histopatologia (HP) e PCR. De acordo com a HP 33,4% dos animais foram positivos, 45,8% inconclusivos e 20,8% foram negativos. As amostras classi- [1]icadas como inconclusivas foram provenientes de animais IFN positivo, sinalizando infecção recente. Em relação aos animais negativos na HP, todos eles foram identi[1]icados por IFN enquanto no ELISA apresentaram resultados negativos. Respostas imunes são diferentes em infecções recentes e avançadas, o que suporta a identi[1]icação entre os animais cronicamente ou recentemente infectados. Esta abordagem multidisciplinar é obrigatória para a interpretação das várias ferramentas que são freqüentemente empregadas para o diagnóstico da TB e, principalmente, para identi[1]icar todos os animais infectados em um rebanho.(AU)

Risk factors relating to helminth infections in cows during the peripartum / Fatores de risco relacionados à infecção por helmintos em vacas durante o periparto

The aim of this study was to investigate whether season, lactation number, breed standard and milk production were risk factors relating to occurrences of gastrointestinal nematodes in dairy cows during the peripartum period. Eighty-four cows were randomly selected through proportional stratified sampling. In order to analyze the fecal egg per gram (EPG) count, the data were subjected to the Spearman test, Kruskal-Wallis test at 5% significance and linear regression. At the time of calving, the cows showed high EPG counts in relation to all variables analyzed. Among the animals studied, we observed that purebred Holstein cows at their first lactation and with high milk production showed high EPG counts (600) and comprised the group most at risk within the herd studied. In this group, the animals showed moderate EPG during the prepartum period (300) and a significant increase (p < 0.01) in EPG count from the time of calving (900), i.e. an increase of the order of 300%. Selection of animals for milk production in tropical countries should be based not only on productive potential, but also on adaptive features.(AU)

O objetivo foi investigar a estação do ano, número de lactações, padrão racial e produção de leite como fatores de risco relacionados à ocorrência de helmintos gastrintestinais em vacas durante o periparto. Foram selecionadas randomicamente 84 vacas através de amostragem estratificada proporcional. Para análise dos resultados da contagem de ovos por grama de fezes (OPG), foram utilizados os testes de Spearman , Kruskal-Wallis a 5% de significância e regressão linear. Entre os fatores de risco avaliados, o parto esteve associado à elevada contagem de OPG em todos os grupos estudados. Por ocasião do parto, as vacas apresentaram alta contagem de OPG em relação a todas as variáveis analisadas. Dentre os animais estudados, observou-se que vacas holandesas puras de primeira lactação e de alta produção leiteira apresentaram elevada contagem de OPG (600), constituindo o grupo de maior risco dentro do rebanho estudado. Nesse grupo, observou-se que os animais apresentaram contagem de OPG moderada no pré-parto (300), com aumento significativo (p < 0.01) na contagem de OPG a partir do parto (900), na ordem de 300%. A seleção de animais para produção de leite, nos países tropicais, deve ser baseada não somente no potencial produtivo, mas também nas características adaptativas.(AU)

POLIMORFISMO DO GENE GOLA-DRB.2 E DETECÇÃO DE MYCOPLASMA AGALACTIAE E MYCOPLASMA MYCOIDES CLUSTER EM REBANHOS CAPRINOS NOS ESTADOS DE PERNAMBUCO E PARAÍBA, BRASIL

O programa de seleção de caprinos com aptidão leiteira tem sido, basicamente, voltado ao aumento na quantidade de leite, negligenciando fatores relacionados à resistência a doenças e à composição do leite. Este comportamento vem ocasionando o direcionamento a estudos voltados à rápida detecção de micro-organismos e à identificação de genes ou regiões cromossômicas relacionadas a doenças infectocontagiosas da glândula mamária. Diante do exposto, a presente tese teve como objetivo inicial, detectar Mycoplasma agalactiae (Ma) e Mycoplasma mycoides cluster (Mmcluster) em amostras de leite caprino e avaliar a composição e a contagem de células somáticas provenientes de animais positivos para Ma e Mmcluster (Experimento 1). Além disso, buscou-se identificar os polimorfismos do gene Goat Lymphocyte Antigen (GoLA-DRB.2) e associar com características do leite de cabra (Experimento 2). Para realização do Experimento 1, foram colhidas 373 amostras de leite de caprinos de diferentes raças pertencentes a rebanhos localizados nos estados de Pernambuco e da Paraíba. O DNA genômico das amostras de leite foi extraído pelo método sílica/isotiocianato de guanidina, seguida da amplificação genérica e espécie-específica por reação em cadeia da polimerase. A identificação da presença ou não de produtos gênicos foi realizada através de observação direta das bandas dos produtos de PCR visualizados em gel de eletroforese. Análises de variância e testes de comparação de médias foram realizados para verificar os efeitos da positividade sobre as características de composição e contagem de células somáticas. As frequências para Ma e Mmcluster foram de 43,21% e 5,70%, nos rebanhos avaliados, respectivamente. Foram considerados fatores de risco o sistema de criação (p<0,001) e o padrão racial (p<0,001). Em todos os grupos genéticos foram detectadas amostras positivas para Ma, sendo observada maior ocorrência na raça Marota. Amostras positivas para Mmc só foram observadas em animais das raças Moxotó (18,28%), Parda Sertaneja (1,92%) e SPRD (3,12%). No estudo de associação entre a positividade e composição do leite, observou-se diferença estatística para as médias de proteína, caseína e contagem de células somáticas. A detecção de Mycoplasma em amostras de leite caprino sugere a introdução de animais infectados nos rebanhos avaliados, como também o possível contato com os agentes etiológicos em feiras e exposições. Além disso, o sistema de criação adotado na propriedade influencia a disseminação da infecção no rebanho. Para execução do Experimento 2, um total de 181 fêmeas caprinas de diferentes raças provenientes do estado de Pernambuco e da Paraíba foram selecionadas. Amostras de leite foram colhidas e submetidas à extração do DNA genômico como descrito no Experimento 1. A genotipagem dos animais para o fragmento de 285 pb do gene GoLADRB. 2 foi resultante da amplificação pela técnica de PCR-RFLP, utilizando as enzimas de restrição PstI e TaqI. A frequência alélica encontrada para a população total com a utilização da enzima PstI foi de A igual a 0,7254 e B a 0,2746, sendo as frequências dos genótipos AA, AB e BB de 0,6740, 0,0387 e 0,2873, respectivamente. As frequências alélicas obtidas a partir da digestão com a enzima TaqI foi de C = 0,8149 e D = 0,1851, sendo as frequências dos genótipos: 0,7403 (CC), 0,1492 (CD) e 0,1105 (DD), com predominância do genótipo CC em todos os padrões raciais avaliados. Os valores da Heterozigosidade observada foram menores do que os encontrado para Heterozigosidade esperada em todas as populações testadas, com rebanhos fora do equilíbrio de Hardy-Weinberg. Houve variação genética significativa entre raças, entre indivíduos da mesma raça e dentro da população. Não houve diferença significativa entre os genótipos e os padrões de haplótipos sobre os valores de gordura, proteína, lactose, sólidos totais, caseína e contagem de células somáticas. O gene GoLA-DRB.2 foi polimórfico na avaliação com as enzimas PstI e TaqI estudadas, mas não desempenhou efeitos sobre nenhumas das características de composição e contagem de células somáticas avaliadas.

The program of selection of goats with milk aptitude has been focused on the increase in milk quantity, neglecting factors related to resistance to diseases and milk composition. This behavior has led to studies aimed at the rapid detection of microorganisms and the identification of genes or chromosomal regions related to infectious diseases of the mammary gland. The objective of the present thesis was to detect Mycoplasma agalactiae (Ma) and Mycoplasma mycoides cluster (Mmcluster) in goat milk samples and to evaluate the composition and counting of somatic cells from Ma and Mmcluster positive animals (Experiment 1). In addition, we sought to identify Goat Lymphocyte Antigen (GoLA-DRB.2) gene polymorphisms and to associate them with goat milk characteristics (Experiment 2). To perform the experiment 1, 373 samples of goat milk of different races belonging to herds located in the states of Pernambuco and Paraiba were collected. The genomic DNA of the milk samples was extracted by the silica / guanidine isothiocyanate method, followed by the generic and species-specific amplification by polymerase chain reaction. Identification of the presence or absence of gene products was performed by direct observation of the bands of the PCR products visualized on electrophoresis gel. Analysis of variance and comparison tests of averages were performed to verify the effects of positivity on somatic cell composition and counting characteristics. The frequencies for Ma and Mmcluster were 43.21% and 5.70%, respectively, in the herds evaluated. The breeding system was considered as risk factors (p <0.001) and the racial pattern (p <0.001). Ma positive samples were detected in all genetic groups, with higher occurrence in the and Marota race. Positive samples for Mmcluster were only observed in Moxotó (18.28%), Parda Sertaneja (1.92%) and SPRD (3.12%) rats. In the study of association between positivity and milk composition, a statistical difference was observed for protein, casein and somatic cell counts. The detection of Mycoplasma in samples of goat milk suggests the introduction of infected animals in the evaluated herds, as well as the possible contact with the etiological agents in fairs and exhibitions. In addition, the breeding system adopted on the property influences the spread of the infection in the herd. For the execution of Experiment 2, a total of 181 female goats of different races from the state of Pernambuco and Paraiba were selected. Milk samples were harvested and extracted from genomic DNA as described in Experiment 1. The genotyping of the animals for the 285bp fragment of the GoLA-DRB.2 gene was the result of amplification by PCR-RFLP technique, using the enzymes of Restriction PstI and TaqI. The allelic frequency found for the total population using the PstI enzyme was A equal to 0.7254 and B at 0.2746, with the frequencies of the AA, AB and BB genotypes being 0.6740, 0.0387 and 0, 2873 respectively. The allele frequencies obtained from the digestion with the TaqI enzyme were C = 0.8149 and D = 0.1851, with the frequencies of the genotypes: 0.7403 (CC), 0.1492 (CD) and 0.1105 ( DD), with predominance of the CC genotype in all the racial standards evaluated. The observed Heterozygosity values were lower than those found for expected Heterozygosity in all tested populations with herds out of Hardy-Weinberg equilibrium. There was significant genetic variation between races, among individuals of the same race and within the population. There was no significant difference between genotypes and haplotype patterns on the values of fat, protein, lactose, total solids, casein and somatic cell counts. The GoLA-DRB.2 gene was polymorphic in the evaluation with the PstI and TaqI enzymes studied but had no effect on any of the somatic cell composition and counting characteristics evaluated.

INVESTIGAÇÃO SOROLÓGICA E MOLECULAR DE Leptospira sp. EM BÚFALOS (Bubalus bubalis) NO LESTE DA ILHA DO MARAJÓ, PARÁ, BRASIL.

A leptospirose é um problema de saúde pública mundial, sendo uma zoonose causada por bactérias do gênero Leptospira. Esta enfermidade possui grande importância para a produção animal, pois pode comprometer a sanidade do rebanho, causar problemas reprodutivos e queda na produção com consequente s impactos econômicos negativos. A bubalinocultura no Brasil é uma prática rentável, além de estar em plena expansão. Os búfalos são suscetíveis a diversas enfermidades infecciosas que podem comprometer a sanidade do rebanho, causando prejuízos econômicos ao produtor, além de oferecer riscos a saúde pública. Dessa forma, estudos sobre doenças que acometem os bubalinos são essenciais para determinar medidas sanitárias específicas. A Ilha do Marajó possui o maior rebanho de bubalinos do Brasil, refletindo a importância de estudos da epidemiologia da leptospirose na região. A soroaglutinação microscópica (SAM) é a técnica considerada padrão ouro e detecta anticorpos contra diversos sorovares de Leptospira sp. A reação em cadeia da polimerase (PCR) é um método de diagnóstico direto, rápido e atende aos requisitos de especificidade e sensibilidade. Nesse sentido, o objetivo do presente trabalho foi comparar as técnicas de soroaglutinação microscópica (SAM) e reação em cadeia da polimerase (PCR) em amostras de rim, fígado, sangue total e urina no diagnóstico de Leptospira sp. em búfalos na Ilha do Marajó. Em um primeiro estudo foram coletadas 212 amostras de soro e 140 amostras de sangue total de búfalos provenientes de 21 propriedades dos municípios de Salvaterra, Soure, Cachoeira do Arari e Muaná, localizados na Ilha do Marajó, Pará. Todas as amostras de sangue total foram negativas pela técnica de PCR, pela técnica de SAM 20,75% (44/212) dos animais foram positivos e 76,19% (16/21) das propriedades apresentaram ao menos um animal reagente. Os sorovares mais prevalentes foram Pomona (40%) e Hardjo CTG (26%) e o maior título encontrado (800) foi destes sorovares. Em um segundo estudo foram analisadas através das mesmas técnicas amostras de soro, sangue total, rim e fígado e urina, esses materiais foram provenientes de búfalos abatidos em um frigorífico no município de Soure. Das amostras de soro 45% (18/40) foram reagentes na técnica de SAM e os sorovares mais prevalentes foram Pomona (31,6%) e Hardjo CTG (31,6%). Na PCR 32,5% (13/40) das amostras foram positivas, sendo 10 amostras do rim, duas amostras do rim e fígado simultaneamente e apenas uma do fígado. Todas as amostras de sangue total e urina foram negativas. As análises das duas técnicas em conjunto, bem como o uso da PCR nas diferentes amostras, permitiram identificar a provável fase de infecção em que se encontravam os animais, além de ressaltar a importância do uso dessas técnicas de forma complementar no diagnóstico da leptospirose. Os resultados obtidos com provam a participação dos búfalos no ciclo epidemiológico da leptospirose, inclusive como portadores renais do agente.

Leptospirosis is a worldwide public health problem and is a zoonosis caused by bacteria of the genus Leptospira. This disease is very important for livestock production because it can compromise the health of the herd, cause reproductive problems and decline in production with consequent negative economic impacts. The buffalo raising in Brazil is a profitable practice, besides being in full expansion. Buffaloes are susceptible to a variety of infectious that can compromise the health of the herd, causing economic losses to the producer, besides offering risks to public health. Thus, studies on diseases that affect buffaloes are essential to determine specific sanitary measures. The Marajó Island has the largest buffalo herd in Brazil, highlighting the importance of leptospirosis epidemiology studies in the region. The microscopic agglutination test (MAT) is considered the gold standard technique and detects antibodies against a variety Leptospira sp. serovars. The polymerase chain reaction (PCR) is a direct diagnostic method, fast and complies with requirements of specificity and sensitivity. Therefore, the aim of this study was to compare the techniques of microscopic agglutination test (MAT) and polymerase chain reaction (PCR) in samples of kidney, liver, whole blood and urine in the diagnosis of Leptospira sp. in buffaloes Marajó Island. In a first study were collected 212 serum samples and 140 whole blood samples of buffalo from 21 properties from the municipalities of Salvaterra, Soure, Cachoeira do Arari and Muana, located on the Marajó Island, Pará. All whole blood samples were negative by PCR technique, for the SAM technique 20.75% (44/212) of the animals were positive and 76.19% (16/21) of the properties presented at least one reagent animal. The most prevalent serovars were Pomona (40%) and Hardjo CTG (26%) and the highest titer found (800) was of these serovars. In a second study were analyzed by the same techniques samples of serum, whole blood, kidney, liver and urine, these materials were obtained from slaughtered buffalo in the municipality of Soure. In serum samples 45% (18/40) were reactants to SAM technique and the most prevalent serovars were Pomona (31.6%) and Hardjo CTG (31.6%). In PCR 32.5% (13/40) of the samples were positive, with 10 samples from kidney, two samples from kidney and liver simultaneously, and only one from liver. All samples of whole blood and urine were negative. The analyzes of the two techniques together, as well as the use of PCR in the different samples, allowed to identify the probable stage of infection in which the animals were, in addition to highlighting the importance of using these techniques in the diagnosis of leptospirosis. The results confirm the participation of buffaloes in the epidemiological cycle of leptospirosis, even as kidney agent carriers.

ETIOPATOLOGIA DO COMPLEXO DE DOENÇAS RESPIRATÓRIAS EM SUÍNOS VACINADOS PARA O VÍRUS INFLUENZA A

O complexo de doenças respiratórias dos suínos (CRDS) resulta de uma miscelânea de fatores e é um dos maiores e mais frequentes desafios na produção e sanidade de suínos. Este estudo testou a efetividade de uma vacina monovalente para o vírus A(H1N1)pdm09 quanto à resposta humoral, ocorrência de lesões e interação entre a patologia e patógenos no CDRS. Para tanto, foram avaliados entre os meses de Janeiro a Junho, quatrocentos e vinte suínos foram divididos em quatro grupos (n= 105 cada grupo): Grupo 1 (G1) controle com aplicação de PBS; Grupo 2 (G2) vacinado com duas doses de vacina com adjuvante Emulsigen - D®; Grupo 3 (G3) vacinado com duas doses de vacina com adjuvante hidróxido de alumínio; Grupo 4 (G4) vacinado com uma dose de vacina contendo adjuvante Emulsigen - D®. A vacina foi produzida na Embrapa Suínos e Aves (Concórdia-SC) a partir do vírus A(H1N1)pdm09 oriundo de uma granja em Santa Catarina com caso de doença respiratória. A vacinação deu-se pela via intramuscular na fase de creche, aos 35 e 55 dias de idade. Durante o período experimental foram realizadas avaliações zootécnicas (ganho de peso, conversão alimentar, consumo de ração) e clínicas (contagem de tosse e espirro) semanais e colheitas de sangue aos 21, 35, 56, 77 e 98 dias de idade. Uma amostragem dos animais foi necropsiada aos 70 e 126 dias e o restante foi avaliado por ocasião do abate (156 dias de idade). Amostras pulmonares foram colhidas para avaliação histológica, imuno-histoquímica e molecular. Os suínos do G2 foram os que apresentaram melhor resposta humoral à vacinação. A consolidação pulmonar crânio-ventral, especialmente no lobo cardíaco, foi o padrão de lesão macroscópica mais frequente nos grupos testados. Na microscopia a pneumonia broncointersticial associada à hiperplasia de BALT foi observada na maioria dos pulmões e teve relação com a detecção do Mycoplasma hyopneumoniae por técnicas moleculares e imuno-histoquímica. O vírus influenza circulou no rebanho em pelo menos dois momentos ocasionando uma infecção sub-clínica. Foi possível identificar o vírus em pequenas quantidades no pulmão com o uso de técnicas moleculares, entretanto, sem lesão compatível com infecção na histopatologia. Outro agente frequentemente identificado foi o PCV2, e, na maior parte dos casos associado com M. hyopneumoniae. A partir das observações conclui-se que duas doses da vacina com o adjuvante Emulsigen - D® apresentou melhor capacidade de induzir a resposta humoral, e, pela frequência de lesões macroscópicas e histológicas, as pneumonias são altamente prevalentes, mesmo em um rebanho com controle ambiental, bom manejo e com protocolo de vacinação que inclui M. hyopneumoniae, PCV2 e influenza A.

Porcine respiratory disease complex (PRDC) is one of the most important health concern for swine producers. This study tested the effectiveness of a monovalent A(H1N1)pdm09 vaccine, evaluating the humoral response, lesions occurrence and the interaction between pathology and pathogens in the PRDC. Therefore, four hundred and twenty pigs were divided in four groups, (n= 105): Group 1 (G1) PBS control; Group 2 (G2) vaccinated with two vaccine doses with an Emulsigen - D® adjuvant; Group 3 (G3) vaccinated with two vaccine doses with aluminum hydroxide adjuvant; Group 4 (G4) vaccinated with one vaccine dose with Emulsigen - D® adjuvant and evaluated between January to June. The vaccine was produced at Embrapa Swine and Poultry (Concórdia SC) with A(H1N1)pdm09 virus isolated from a clinical case of respiratory disease in a farm in Santa Catarina. The vaccination was done by intrammuscular route at nursery stage, at 35 and 55 days of age. During the experimental period, zootecnic evaluations (weight gain, feed conversion ratio and feed intake) and clinical monitoring (number of cough and sneeze) were performed weekly. Blood samples were collected at 21, 35, 56, 77 and 98 days-old. Some animals were necropsied at 70 and 126 days and the remaining pigs were evaluated at slaughter (156 days of age). Lungs were macroscopically evaluated and samples were taken for histological, immunohistochemical and molecular analysis. Pigs from G2 showed better humoral response to vaccination. The cranio-ventral lung consolidation, particularly in cardiac lobe, was the most frequent macroscopic lesion observed, except for G1 that showed lower incidence of gross lesions. In microscopy, broncointersticial pneumonia associated to BALT hyperplasia was observed in most lungs and was related to M. hyopneumoniae detection by molecular and immunohistochemical techniques. Influenza A virus circulated in the herd for at least two times, but resulting in a subclinical infection. It was possible to identify the virus in small amount in the lung by molecular techniques, however no lesion were observed in the histopathology. Another frequently agent identified was PCV2, and in the most cases it was associated with M. hyopneumoniae. Based on that, the use of two vaccine doses with an Emulsigen - D® adjuvant showed better humoral response. The frequency of macroscopic and histological lesions demonstrated that pneumonia are highly prevalent even in a herd with environmental control, good management and with a vaccination protocol including M. hyopneumoniae, PCV2 and influenza A virus.

PERFIL PRODUTIVO DA PECUÁRIA E SITUAÇÃO EPIDEMIOLÓGICA DA TUBERCULOSE EM FÊMEAS BOVINAS ADULTAS NO ESTADO DE GOIÁS

A tuberculose bovina, antropozoonose de ocorrência mundial, causada pelo Mycobacterium bovis, é uma enfermidade de evolução crônica que acomete principalmente bovinos e bubalinos e caracteriza-se pelo desenvolvimento progressivo de lesões nodulares, denominadas tubérculos. Considerando que esta doença traz prejuízos econômicos à pecuária e tem impacto na saúde pública, realizou-se este estudo com o objetivo de caracterizar a situação epidemiológica da tuberculose em fêmeas bovinas adultas no Estado de Goiás, avaliando sua prevalência, distribuição regional e a interação dos fatores de risco relacionados com a enfermidade, visando fornecer subsídios para ações de vigilância mais eficientes na detecção e saneamento de focos residuais. Objetivou-se também, através de um estudo transversal descritivo, caracterizar o perfil produtivo da bovinocultura goiana e identificar aspectos relacionados a agravos em saúde pública. O Estado foi estratificado em três circuitos produtores, de acordo com a principal aptidão do rebanho bovino daquela região, categorizada em corte, leite e misto. Em cada estrato foram amostradas aleatoriamente 300 propriedades, nas quais, após concordância do produtor, foi sorteado um número pré-estabelecido de animais em função do quantitativo de fêmeas bovinas acima de 24 meses ali existentes. Os animais sorteados foram submetidos à tuberculinização, pela técnica cervical comparada. Foi aplicado, em cada propriedade, questionário epidemiológico para verificar as práticas sanitárias e de manejo que poderiam estar associadas ao risco de infecção pela doença. Observou-se na análise descritiva, que a maioria do rebanho leiteiro goiano não apresenta padrão racial definido, possui baixa produtividade, obtida com uma ordenha diária, de forma manual. No aspecto de saúde pública, concluiu-se que ainda são preocupantes os índices de consumo e venda de leite cru e seus derivados e o abate de reprodutores de descarte em abatedouros sem inspeção sanitária oficial. Foram testados 18.659 animais, oriundos de 900 propriedades. No estrato 1, não foi detectado nenhum animal reagente ao teste. No estrato 2, a prevalência foi de 8,67% [5,7312,74] para propriedades e de 0,9% [0,211,58] para animais. No estrato 3, obteve-se 1,00% [0,212,89] para propriedades e 0,30% [0,100,49] para animais. A prevalência global foi de 3,43% [2,204,67] para propriedades e de 0,30% [0,10 0,49] para animais. Os fatores de risco associados à condição de foco, após realização de análise uni e multivariada, foram: localização da propriedade no estrato 2 (OR = 12,05 [3,52 41,28]), realização de duas ou três ordenhas diárias (OR = 6,27 [2,7214,44]). A assistência veterinária se apresentou como fator de proteção (OR = 0,38 [0,15-0,94]). Concluiu-se que a tuberculose tem baixa prevalência em fêmeas bovinas adultas, em Goiás e que a enfermidade está mais presente nas regiões sul e sudeste do Estado, onde se concentram as propriedades de exploração leiteira. A baixa prevalência verificada propicia a implantação de um programa de erradicação, com adoção de um sistema de vigilância ativa considerando os fatores de risco.

The bovine tuberculosis, a worldwide anthropozoonosis caused by Mycobacterium bovis, is a disease of chronic evolution that affects mainly cattle and buffalo and is characterized by the progressive development of nodular lesions called tubercles. Considering that this disease brings economic losses to livestock and impacts public health, this study was carried out to characterize the epidemiological situation of tuberculosis in adult cows in the State of Goias, evaluating its prevalence, regional distribution, and interaction of risk factors related to the disease, to provide data for more efficient surveillance activities for the detection and sanitation of residual foci. A descriptive cross-sectional study was also conducted to characterize the productive profile of Goias herds and identify management practices related to impacts on public health. The State was divided in three regions, according to the main characteristic of cattle in each region, categorized as beef, milk and mixed. In each stratum 300 farms were randomly sampled , after having the producer`s agreement. A predetermined number of animals was drawn depending on the amount of females over 24 months of age therein. The randomly selected animals underwent tuberculin by comparative cervical technique. An epidemiological questionnaire was applied in each property, to check health and management practices that could be associated with the risk of infection by the disease. The descriptive analysis showed that most of Goias dairy herds have no defined breed, have a low productivity, attained by manual daily milking. In terms of public health, there are still worrying rates of consumption and sale of raw milk and dairy products, as well as the disposal of breeders in slaughterhouses without official sanitary inspection. 18,659 animals from 900 farms were tested. No animal reagent to the test was detected in region 1. For region 2, the herd prevalence was 8.67% [5.73-12.74%], and the animal prevalence was 0.9% [0.21- 1.58%]. For region 3, the herd prevalence was 1.00% [0.21-2.89] and the animal prevalence was 0.30% [0.10-0.49%]. For the whole state, the herd prevalence was 3.43% [2.20-4.67%], and the animal prevalence 0.30% [0.10-0.49%]. The risk factors (odds ratio, OR) associated with the presence of the infection after univariate and multivariate analysis were: location of the property in region 2 (OR = 12.05 [3.52-41.28]), milking two or three times a day (OR = 6.27 [2.72 to 14.44]). The veterinary assistance was presented as a protective factor (OR = 0.38 [0.15-0.94]). In conclusion, tuberculosis has a low prevalence in adult cows in the State of Goias and it is more prevalent in the south and southeast region of the State, where dairy farms are concentrated. The low prevalence verified favors the implantation of an eradication program, with the adoption of an active surveillance system considering the risk factors.

ESTUDO DO NÍVEL DE INFECÇÃO POR Babesia bovis E Babesia bigemina EM BOVINOS DA RAÇA CANCHIM NATURALMENTE INFESTADOS COM O CARRAPATO Rhipicephalus (Boophilus) microplus

Entre as principais causas de perdas produtivas em bovinos criados nos trópicos está a infestação pelo carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus e, consequentemente, dos hemoparasitas transmitidos por ele. A resistência dos zebuínos e de animais cruzados com raças taurinas à infestação por esse ácaro é amplamente conhecida. Entretanto, no que se refere à suscetibilidade às babesioses bovinas, existem evidências de que o grupo genético também pode interferir na resistência, seguindo o mesmo padrão observado para o carrapato vetor, com os taurinos apresentando maior sensibilidade. Assim, este estudo teve por objetivo avaliar a parasitemia por Babesia bovis e Babesia bigemina em 50 novilhas da raça Canchim ( Charolês + Zebu) naturalmente infestadas pelo R. (B.) microplus nas quatro estações do ano durante 24 meses, além de caracterizar o perfil de citocinas que podem estar associados ao fenótipo de resistência e suscetibilidade aos hemoparasitas do gênero Babesia spp. Foram realizadas contagens de fêmeas adultas de carrapatos com tamanho igual ou superior a 4,5 mm de diâmetro, presentes no lado esquerdo de cada bovino. As amostras de DNA extraídas foram submetidas à amplificação por meio da Reação em Cadeia da Polimerase Quantitativa em Tempo Real (qPCR), utilizando iniciadores que flanqueiam fragmentos dos genes mitocondriais do citocromo b (mt-cyt B), específicos para B. bovis e B. bigemina. O RNA extraído do sangue, foi usado para sintetizar o DNA complementar (cDNA) para análise de expressão dos genes do IFN-, TNF-, IL-10 e IL-12B por meio da quantificação relativa (RT-qPCR). Foram observadas diferenças significativas (P<0,05) entre os meses das avaliações para a contagem de carrapatos. Entretanto, não houve efeito significativo (P>0,05) nas colheitas realizadas entre novembro de 2013 a janeiro de 2014 e entre os meses janeiro e fevereiro de 2015. A frequência da parasitemia no rebanho foi de 98%. Dentre as amostras de DNA que puderam ser quantificadas pela qPCR, 98% e 95,4% foram positivas para B. bovis e B. bigemina, respectivamente. Com relação ao número de cópias (NC) dos fragmentos dos genes mt-cyt B específicos para B. bovis e B. bigemina foram observados efeitos significativos (P<0,05) para ambas as espécies e interação das mesmas com as colheitas realizadas nas diferentes estações do ano. A análise do nível de expressão de mRNA do IFN-, TNF- e IL-12B revelou que houve um efeito siginificativo (P<0,05) da interação entre animais dos extremos de resistência/suscetibilidade e estações do ano, exceto para IL-10. Conclui-se que, a qPCR apresenta alta sensibilidade e especificidade para o diagnóstico das babesioses bovinas em amostras de sangue e que a oscilação na carga parasitária nas diferentes estações do ano pode estar associada com o perfil de expressão de citocinas apresentada pelos animais do rebanho Canchim durante o período experimental.

Among the main causes of production losses in cattle is in the tropics infestation by Rhipicephalus (Boophilus) microplus, and consequently the hemoparasites transmitted by it. The resistance of zebu and crossbred with European breeds to infestation by this mite is widely known. However, as regards susceptibility to bovine babesiosis, there is evidence that genetic group can also interfere in resistance following the same pattern observed in the tick vector, with the taurine presenting greater sensitivity. This study aimed to evaluate parasitaemia by Babesia bovis and Babesia bigemina in 50 heifers Canchim ( Charolais + Zebu) naturally infested by R. (B.) microplus in four seasons for 24 months, and characterize the profile of cytokines that may be associated with phenotype resistance and susceptibility by gender hemoparasites Babesia spp. Adult female ticks counts with size equal to or greater than 4.5 mm in diameter, present in the left side of each calf were performed. The extracted DNA samples were subjected to amplification by Reaction Polymerase Chain Quantitative Real Time (qPCR), using primers flanking fragments of mitochondrial gene cytochrome B (mt-cyt B) specific for B. bovis and B. bigemina. The RNA extracted from the blood was used to synthesize complementary DNA (cDNA) for expression analysis of genes IFN-, TNF-, IL-10 and IL-12B by relative quantification (RT-qPCR). Significant differences were observed (P <0.05) between the months of reviews for the tick count. However, there was no significant effect (P>0.05) in samples taken between november 2013 and january 2014 and between the months january and february 2015. The frequency of parasitaemia in the herd was 98%. Among the samples of DNA that could be quantified by qPCR, 98% and 95.4% were positive for B. bovis and B. bigemina, respectively. Regarding the number of copies (NC) of fragments of genes mt-cyt B, specific to B. bovis and B. bigemina significant effects were observed (P<0.05) for both species and interaction between those harvests in different seasons. Analysis of the mRNA expression level of IFN-, TNF- and IL-12B showed that there was a significant effect (P<0.05) interaction between the animal extreme resistance/susceptibility and seasons, except for IL-10. It is concluded that the qPCR has high sensitivity and specificity for the diagnosis of bovine babesiosis in blood samples and that the fluctuation in the parasitic load in the different seasons of the year may be associated with the profile of cytokine expression presented by herd animals Canchim during the experimental period.

Excreção e transmissão do vírus da diarréia viral bovina por bezerros persistentemente infectados / Shedding and transmission of bovine viral diarrhea virus by persistently infected calves

Bezerros persistentemente infectados (PI) nascidos de vacas infectadas com amostras não-citopáticas do vírus da diarréia viral bovina (BVDV) se constituem nos principais reservatórios do vírus na natureza. Este trabalho relata uma investigação do padrão de excreção e transmissão viral por cinco bezerros PI produzidos experimentalmente pela inoculação de vacas prenhes com isolados brasileiros do BVDV. Cinco bezerros que sobreviveram a infecção intrauterina nasceram saudáveis, soronegativos e com a presença de vírus no sangue. Após o desmame - e desaparecimento dos anticorpos colostrais - os bezerros PI foram monitorados semanalmente durante 150 dias para a presença de vírus e títulos virais no soro e em secreções (ocular, oral, nasal e genital). Os títulos virais no soro de cada animal apresentaram pequenas variações durante o período (com exceção de um animal que apresentou um aumento de título tardiamente), mas os títulos variaram amplamente entre os animais (entre 10² e 10(6)TCID50/ml). O vírus também foi excretado continuamente nas secreções de todos os animais, com pequenas variações de título entre as coletas. Os maiores títulos virais foram geralmente detectados nas secreções nasais e oculares (títulos de 10(4) a 10(6)TCID50/mL), enquanto as secreções orais e genitais usualmente continham títulos virais baixos (10² a 10³TCID50/mL). Com o objetivo de avaliar a dinâmica de transmissão viral, um bezerro PI foi introduzido em um grupo de 10 bezerros soronegativos, mantido com uma alta densidade animal e submetido a manejo diário para simular as condições de manejo semi-intensivo. Após 30 dias de convívio com o bezerro PI, todos os demais animais haviam soroconvertido ao BVDV. Para investigar a transmissão viral sob condições extensivas, outro bezerro PI foi incorporado a um rebanho de 48 animais mantido a campo, com baixa densidade animal e submetido a manejo extensivo. Dentre estes animais, 8/48 (16,6 por cento) foram soropositivos ...(AU)

Persistently infected (PI) calves born to cows infected with non-cytopathic bovine virus diarrhea virus (BVDV) represent the main reservoir of the virus in nature. We herein report an investigation on the patterns of virus shedding and transmission by five PI calves produced experimentally through inoculation of pregnant cows with Brazilian BVDV isolates. Five calves that survived intrauterine infection were born healthy, lacking neutralizing antibodies to BVDV and harboring virus in the blood. After weaning - and following the disappearance of colostral antibodies - PI calves were monitored for virus in serum and body secretions (ocular, oral, nasal and genital) at weekly intervals for up to 150 days. For each animal, the virus titers in serum showed minor variations throughout the collections (with one exception that presented an increase late in infection), yet the titers varied widely among animals (from 10² to 10(6)TCID50/mL). Virus shedding in secretions was detected steadily during all the observation period with minor titer variations for each particular animal. The highest titers were generally detected in nasal and ocular secretions (titers 10(4) to 10(6)TCID50mL) whereas genital and oral secretions usually contained low amount of virus (10² to 10³TCID50mL). To evaluate the kinetics of virus transmission by these animals, one PI was introduced on a group of 10 seronegative calves maintained with a high animal density simulating the conditions of an intensive management. All 10 contact calves seroconverted to BVDV by day 30. Another PI calf was introduced into a 48-head herd kept under a low animal density, extensive grass management. Among these animals, 8/48 (16.6 percent) seroconverted by day 10, 26/48 (54.1 percent) by day 40 and 37/48 (77 percent) were seropositive at day 100, when the monitoring was discontinued. These results show that continuous viremia and virus shedding in high titers in secretions by PI animals assure ...(AU)

Frequência de anticorpos contra o herpesvírus bovino tipo 1 (bohv-1) em bovinos de corte não vacinados na microrregião de imperatriz

O herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1), é responsável por manifestações clínicas como a rinotraqueíte infecciosa bovina, abortamentos, conjuntivite, balanopostite e vulvovaginite pustular infecciosa. Esse vírus tem sido responsável por grandes prejuízos produtivos e reprodutivos em diversos rebanhos do país. Deste modo, o objetivo desse trabalho foi estimar a frequência de anticorpos contra o BoHV-1 em fêmeas bovinas de corte, não vacinadas na Microrregião de Imperatriz, Maranhão; além de identificar a faixa etária mais acometida pelo vírus, bem como realizar um estudo dos fatores associados à infecção do vírus e avaliar a técnica ELISA indireto utilizando a soroneutralização (SN) como padrão de referência. O estudo foi realizado em 48 rebanhos de corte, distribuídos em 12 municípios da Microrregião de Imperatriz. As amostras foram coletadas de fêmeas bovinas estratificadas em três faixas etárias, ? 12 meses, entre 12 e 36 meses e ? 36 meses de idade. As amostras foram submetidas a dois testes sorológicos, ELISA indireto e SN. Em cada rebanho, foi aplicado um questionário epidemiológico, com o objetivo de obter informações sobre manejo sanitário e reprodutivo, para o estudo de fatores de risco. A frequência de anticorpos contra o BoHV-1 na Microrregião de Imperatriz foi de 63,23%, os municípios de Açailândia e Buritirana, apresentaram as maiores frequências, ambos com 80,44%, a faixa etária mais acometida, na Microrregião, foi a dos animais com idade ? 36 meses (69,65%). Com base nos resultados obtidos pode-se concluir que a frequência de anticorpos contra o BoHV-1 é alta; entre as faixas etárias mais acometidas foram a dos animais com idade ? 36 meses; foram considerados fatores de risco para a transmissão do vírus, retorno ao cio, reposição de animais oriundos de outros estados/região e a criação de caprinos/ovinos associados com bovinos; a técnica ELISA indireta apresentou concordância moderada quando comparada a técnica de SN, que é a técnica padrão ouro de diagnóstico para BoHV-1

Frequência de anticorpos contra o herpesvírus bovino tipo 1 (bohv-1) em bovinos de corte não vacinados na microrregião de imperatriz

O herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1), é responsável por manifestações clínicas como a rinotraqueíte infecciosa bovina, abortamentos, conjuntivite, balanopostite e vulvovaginite pustular infecciosa. Esse vírus tem sido responsável por grandes prejuízos produtivos e reprodutivos em diversos rebanhos do país. Deste modo, o objetivo desse trabalho foi estimar a frequência de anticorpos contra o BoHV-1 em fêmeas bovinas de corte, não vacinadas na Microrregião de Imperatriz, Maranhão; além de identificar a faixa etária mais acometida pelo vírus, bem como realizar um estudo dos fatores associados à infecção do vírus e avaliar a técnica ELISA indireto utilizando a soroneutralização (SN) como padrão de referência. O estudo foi realizado em 48 rebanhos de corte, distribuídos em 12 municípios da Microrregião de Imperatriz. As amostras foram coletadas de fêmeas bovinas estratificadas em três faixas etárias, ? 12 meses, entre 12 e 36 meses e ? 36 meses de idade. As amostras foram submetidas a dois testes sorológicos, ELISA indireto e SN. Em cada rebanho, foi aplicado um questionário epidemiológico, com o objetivo de obter informações sobre manejo sanitário e reprodutivo, para o estudo de fatores de risco. A frequência de anticorpos contra o BoHV-1 na Microrregião de Imperatriz foi de 63,23%, os municípios de Açailândia e Buritirana, apresentaram as maiores frequências, ambos com 80,44%, a faixa etária mais acometida, na Microrregião, foi a dos animais com idade ? 36 meses (69,65%). Com base nos resultados obtidos pode-se concluir que a frequência de anticorpos contra o BoHV-1 é alta; entre as faixas etárias mais acometidas foram a dos animais com idade ? 36 meses; foram considerados fatores de risco para a transmissão do vírus, retorno ao cio, reposição de animais oriundos de outros estados/região e a criação de caprinos/ovinos associados com bovinos; a técnica ELISA indireta apresentou concordância moderada quando comparada a técnica de SN, que é a técnica padrão ouro de diagnóstico para BoHV-1(AU)