Perfil proteico do líquido folicular coletado de ovários em diferentes fases do ciclo estral de bovinos / Proteic profile of follicular fluid from ovaries in different phases of bovine estrous cycle

O microambiente do gameta feminino é o líquido folicular e, portanto, as proteínas ali presentes devem interferir na qualidade do oócito. Este experimento foi delineado com o objetivo de verificar o perfil proteico do líquido folicular de folículos em diferentes fases do ciclo estral de bovinos. Para tanto, os líquidos foliculares provenientes de ovários de vacas de abatedouro foram alocados em 5 diferentes fases do ciclo estral, levando em conta a presença ou ausência do corpo lúteo (CL) e sua caracterização morfológica. “Pools” de líquido folicular foram coletados de folículos de 2 a 7 mm de ovários em 5 diferentes fases do ciclo estral (1=CL inicial, hemorrágico; 2=CL em desenvolvimento; 3=CL maduro; 4=CL em regressão e 5=ausência de CL). O perfil proteico foi avaliado por eletroforese em gel de poliacrilamida e determinado em porcentagens nas amostras de cada fase. Os polipeptídeos de 35, 32, 30 e 18 KDa variaram consideravelmente nas amostras. O polipeptídeo de mesmo peso molecular que o IGFBP-2 está mais presente nas amostras de líquido folicular ao final do ciclo estral. Maior número de polipeptídeos foi observado em folículos antrais pequenos de ovários em que o CL está em regressão.

The female gamete’s microenvironment is the follicular fluid. The proteins in the follicular fluid must interfere in the oocyte quality. The objective of this study was to verify the protein profile in the follicular fluid of different phases of bovine estrous cycle. The follicular fluid was taken from follicles of bovine ovaries obtained at slaughterhouse. The ovaries were classified into five different phases of estrous cycle, according to presence or absence of corpus luteum (CL) and the morphologic characteristics. Pools of follicular fluid were collected from follicles ranging from 2 to 7mm in diameter from ovaries in five different phases of estrous cycle (1=initial CL, hemorrhagic; 2= developing CL; 3= mature CL; 4=regressing CL and 5=absence CL). The protein profile was evaluated by poliacrilamide eletrophoresis and determined by percentages of samples from each phase. The polypeptides with molecular weigh of 35, 32, 30 and 18 KDa changed considerably in samples from different phases of estrous cycle. The polypeptide with the same molecular weight of IGFBP-2 is more observed in samples from follicular fluid in the end of estrous cycle. The most polypeptides were observed in small follicles from ovaries with regressing CL.

Perfil proteico do líquido folicular coletado de ovários em diferentes fases do ciclo estral de bovinos / Proteic profile of follicular fluid from ovaries in different phases of bovine estrous cycle

O microambiente do gameta feminino é o líquido folicular e, portanto, as proteínas ali presentes devem interferir na qualidade do oócito. Este experimento foi delineado com o objetivo de verificar o perfil proteico do líquido folicular de folículos em diferentes fases do ciclo estral de bovinos. Para tanto, os líquidos foliculares provenientes de ovários de vacas de abatedouro foram alocados em 5 diferentes fases do ciclo estral, levando em conta a presença ou ausência do corpo lúteo (CL) e sua caracterização morfológica. “Pools” de líquido folicular foram coletados de folículos de 2 a 7 mm de ovários em 5 diferentes fases do ciclo estral (1=CL inicial, hemorrágico; 2=CL em desenvolvimento; 3=CL maduro; 4=CL em regressão e 5=ausência de CL). O perfil proteico foi avaliado por eletroforese em gel de poliacrilamida e determinado em porcentagens nas amostras de cada fase. Os polipeptídeos de 35, 32, 30 e 18 KDa variaram consideravelmente nas amostras. O polipeptídeo de mesmo peso molecular que o IGFBP-2 está mais presente nas amostras de líquido folicular ao final do ciclo estral. Maior número de polipeptídeos foi observado em folículos antrais pequenos de ovários em que o CL está em regressão.(AU)

The female gametes microenvironment is the follicular fluid. The proteins in the follicular fluid must interfere in the oocyte quality. The objective of this study was to verify the protein profile in the follicular fluid of different phases of bovine estrous cycle. The follicular fluid was taken from follicles of bovine ovaries obtained at slaughterhouse. The ovaries were classified into five different phases of estrous cycle, according to presence or absence of corpus luteum (CL) and the morphologic characteristics. Pools of follicular fluid were collected from follicles ranging from 2 to 7mm in diameter from ovaries in five different phases of estrous cycle (1=initial CL, hemorrhagic; 2= developing CL; 3= mature CL; 4=regressing CL and 5=absence CL). The protein profile was evaluated by poliacrilamide eletrophoresis and determined by percentages of samples from each phase. The polypeptides with molecular weigh of 35, 32, 30 and 18 KDa changed considerably in samples from different phases of estrous cycle. The polypeptide with the same molecular weight of IGFBP-2 is more observed in samples from follicular fluid in the end of estrous cycle. The most polypeptides were observed in small follicles from ovaries with regressing CL.(AU)

Molecular analysis of endophytic bacteria from the genus Bacillus isolated from tropical maize (Zea mays L.)

Endophytic bacteria play an important role in agriculture by improving plant performance and adaptation against biotic and abiotic stresses. In the present study molecular methods were used for identifying Bacillus endophytic bacteria isolated from Brazilian sweet corn. SDS-PAGE of wholecell protein extract of fortytwo isolates revealed a high number of scrutinable bands. Twenty-four isolates were identified in nine different groups of duplicated bacteria and eighteen were identified as unique. Some high-accumulated polipeptides with variable length were observed in almost isolates. Partial sequencing of 16S ribosomal gene revealed that all isolates are Bacillus sp. and among thirteen isolates with similar protein profiles, two were different strains. Among the forty-two isolates identified by rDNA sequencing, Bacillus subitilis and B. pumilus were the most frequenty species (15 and 12 isolates, respectively) followed by B. licheniformes (7 isolates), B. cereus (5 isolates) and B. amiloliquefascens (3 isolates). According to present results, SDS-PAGE technique could be used as a fast and cheap first tool for identifying interspecific variation in maize endophytic bacterial collections while rDNA sequencing could be applied for analyzing intraspecific variation among isolates with similar protein profile as well as for taxonomic studies.

Bactérias endofíticas desempenham papel importante na agricultura, melhorando a performance e adaptação de plantas contra estresses bióticos e abióticos. No presente estudo, métodos moleculares foram empregados para identificar bactérias endofíticas do gênero Bacillus isoladas de cultivares de milho doce brasileiro. SDS-PAGE de extratos protéicos totais de quarenta e dois isolados revelaram elevado número de bandas escrutináveis. Vinte e quatro isolados formaram nove grupos diferentes de réplicas bactérianas e dezoito foram considerados como únicos. Entre os isolados, alguns polipeptídios, de tamanhos variados, foram altamente acumulados. Seqüenciamento parcial do gene ribosomal 16S revelou que todos os isolados pertencem ao gênero Bacillus e que, entre treze isolados com padrão protéico similar, dois eram linhagens diferentes. Entre os quarenta e dois isolados identificados por seqüenciamento de rDNA, Bacillus subtilis e B. pumilus foram mais frequentes (15 e 12 isolados, respectivamente), seguido por, B. licheniformes (7 isolados), B. cereus (5 isolados) e B. amiloliquefascens (3 isolados). Baseado nos resultados, conclui-se que a técnica de SDS-PAGE poderá ser usada como primeiro procedimento, rápido e barato, para identificar variação inter-específica em coleções de bactérias endofíticas isoladas do milho, enquanto o método de seqüenciamento de rDNA poderá ser aplicado para analisar variações intra-específica entre isolados com padões similares de proteínas e estudos de taxonomia.