Immunohistochemical, lectin histochemical and ultrastructural studies of canine transmissible venereal tumor in Brazil

ABSTRACT: Canine transmissible venereal tumor (CTVT) is a naturally occurring contagious round-cell neoplasia, with poorly understood origin and transmission. This study aims to further investigate the tumor nature through immunohistochemistry, lectin histochemistry and transmission electron microscopy (TEM) analysis, and to provide support for diagnostic and differential diagnoses of CTVT. Immunohistochemistry was performed in 10 genital and six exclusively extragenital tumors, which were previously diagnosed by citology and histopathology. CTVT samples were incubated with biotinylated antibodies to specific membrane and cytoplasmic antigens (anti-lysozyme, anti-macrophage, anti-vimentin, anti-CD18, monoclonal anti-CD117, monoclonal anti-CD3, polyclonal anti-CD117, polyclonal CD3 and anti-CD79a), followed by the avidin-biotin-peroxidase complex technique. The lectins Con A, DBA, SBA, PNA, UEA-1, WGA, sWGA, GSL, JSA, PSA, PHA-L, PHA-E and RCA were additionally tested in four genital CTVTs and TEM was performed in eight genital tumors. The anti-vimentin antibody revealed strong immunoreactivity to neoplastic cells in all the assessed samples (16/16). The polyclonal anti-CD3 antibodies showed moderate to strong immunoreactivity in fourteen (14/16) and the polyclonal anti-CD117 in fifteen cases (15/16). There was no immunoreactivity to anti-lysozyme, anti-macrophage, anti-CD18, monoclonal anti-CD117, monoclonal anti-CD3 and anti-CD79a antibodies. At lectin histochemistry, it was observed strong staining of tumor cells to Con-A, PHA-L and RCA. There was no histopathological and immunoreactivity differences between genital and extragenital CTVTs. These findings do not support the hypothesis of histiocytic origin of CTVT. In contrast, the lectin histochemical results were similar to cells from lymphoid/myeloid origin.

RESUMO: O Tumor Venéreo Transmissível Canino (CTVT) é uma neoplasia de células células redondas, contagiosa, com origem e transmissão ainda mal compreendidas. Com a finalidade de aprofundar a investigação sobre a natureza (origem) do TVTC, bem como fornecer subsídios para o estabelecimento do diagnóstico e diagnóstico diferencial, realizaram-se avaliações imuno-histoquímica, lectino-histoquímica e ultraestrutural de TVTC(s). A avaliação imuno-histoquímica foi feita em 10 TVTCs genitais e em 6 exclusivamente extragenitais previamente diagnosticados através de citologia e da histopatologia. Os TVTCs foram testados para reagentes específicos de antígenos de membrana e citoplasmáticos (anti-lisozima, anti-macrófago, anti-vimentina, anti-CD18, anti-CD3, anti-CD79, anti-CD117) com utilização da técnica complexo avidina-biotina-peroxidase. Adicionalmente, foram utilizadas as lectinas Con A, DBA, SBA, PNA, UEA-1, WGA, sWGA, GSL, SJA, PSA, PHA-L, PHA-E e RCA em quatro TVTCs genitais. Microscopia eletrônica foi realizada em oito TVTC genitais. Em 100% dos tumores testados (16/16) com anticorpo anti-vimentina (mono e policlonal) houve forte imuno-reatividade. Não houve reatividade para os anticorpos anti-lisozima, anti-macrófago, anti-CD18, anti-CD3, anti-CD79a e anti-CD117 quando empregamos anticorpos monoclonais, entretanto, com a utilização de anticorpos policlonais verificou-se marcação dos tumores com os anticorpos anti-CD3 e anti-CD117. Na avaliação lectino-histoquímica foi verificada forte marcação das células tumorais com Con-A, PHA-L e RCA. Não houve diferença histopatológica e de imuno-reatividade entre os TVTCs genitais e extragenitais. Estes achados não corroboram com a hipótese da origem histiocítica do CTVT (ausência de reatividade dos anticorpos anti-lisozima, anti-macrófago e anti-CD18), entretanto, os resultados da avaliação lectino-histoquímica foram em parte similares aos obtidos quando células de origem linfóide/mielóide (ConA, PHA-L e RCA) foram analisadas (Gimeno et al. 1995).

Immunohistochemical, lectin histochemical and ultrastructural studies of canine transmissible venereal tumor in Brazil / Estudos imuno-histoquímico, lectino-histoquímico e ultraestrutural do Tumor Venéreo Transmissível Canino no Brasil

Canine transmissible venereal tumor (CTVT) is a naturally occurring contagious round-cell neoplasia, with poorly understood origin and transmission. This study aims to further investigate the tumor nature through immunohistochemistry, lectin histochemistry and transmission electron microscopy (TEM) analysis, and to provide support for diagnostic and differential diagnoses of CTVT. Immunohistochemistry was performed in 10 genital and six exclusively extragenital tumors, which were previously diagnosed by citology and histopathology. CTVT samples were incubated with biotinylated antibodies to specific membrane and cytoplasmic antigens (anti-lysozyme, anti-macrophage, anti-vimentin, anti-CD18, monoclonal anti-CD117, monoclonal anti-CD3, polyclonal anti-CD117, polyclonal CD3 and anti-CD79a), followed by the avidin-biotin-peroxidase complex technique. The lectins Con A, DBA, SBA, PNA, UEA-1, WGA, sWGA, GSL, JSA, PSA, PHA-L, PHA-E and RCA were additionally tested in four genital CTVTs and TEM was performed in eight genital tumors. The anti-vimentin antibody revealed strong immunoreactivity to neoplastic cells in all the assessed samples (16/16). The polyclonal anti-CD3 antibodies showed moderate to strong immunoreactivity in fourteen (14/16) and the polyclonal anti-CD117 in fifteen cases (15/16). There was no immunoreactivity to anti-lysozyme, anti-macrophage, anti-CD18, monoclonal anti-CD117, monoclonal anti-CD3 and anti-CD79a antibodies. At lectin histochemistry, it was observed strong staining of tumor cells to Con-A, PHA-L and RCA. There was no histopathological and immunoreactivity differences between genital and extragenital CTVTs. These findings do not support the hypothesis of histiocytic origin of CTVT. In contrast, the lectin histochemical results were similar to cells from lymphoid/myeloid origin.(AU)

O Tumor Venéreo Transmissível Canino (CTVT) é uma neoplasia de células células redondas, contagiosa, com origem e transmissão ainda mal compreendidas. Com a finalidade de aprofundar a investigação sobre a natureza (origem) do TVTC, bem como fornecer subsídios para o estabelecimento do diagnóstico e diagnóstico diferencial, realizaram-se avaliações imuno-histoquímica, lectino-histoquímica e ultraestrutural de TVTC(s). A avaliação imuno-histoquímica foi feita em 10 TVTCs genitais e em 6 exclusivamente extragenitais previamente diagnosticados através de citologia e da histopatologia. Os TVTCs foram testados para reagentes específicos de antígenos de membrana e citoplasmáticos (anti-lisozima, anti-macrófago, anti-vimentina, anti-CD18, anti-CD3, anti-CD79, anti-CD117) com utilização da técnica complexo avidina-biotina-peroxidase. Adicionalmente, foram utilizadas as lectinas Con A, DBA, SBA, PNA, UEA-1, WGA, sWGA, GSL, SJA, PSA, PHA-L, PHA-E e RCA em quatro TVTCs genitais. Microscopia eletrônica foi realizada em oito TVTC genitais. Em 100% dos tumores testados (16/16) com anticorpo anti-vimentina (mono e policlonal) houve forte imuno-reatividade. Não houve reatividade para os anticorpos anti-lisozima, anti-macrófago, anti-CD18, anti-CD3, anti-CD79a e anti-CD117 quando empregamos anticorpos monoclonais, entretanto, com a utilização de anticorpos policlonais verificou-se marcação dos tumores com os anticorpos anti-CD3 e anti-CD117. Na avaliação lectino-histoquímica foi verificada forte marcação das células tumorais com Con-A, PHA-L e RCA. Não houve diferença histopatológica e de imuno-reatividade entre os TVTCs genitais e extragenitais. Estes achados não corroboram com a hipótese da origem histiocítica do CTVT (ausência de reatividade dos anticorpos anti-lisozima, anti-macrófago e anti-CD18), entretanto, os resultados da avaliação lectino-histoquímica foram em parte similares aos obtidos quando células de origem linfóide/mielóide (ConA, PHA-L e RCA) foram analisadas (Gimeno et al. 1995).(AU)

Immunohistochemical, lectin histochemical and ultrastructural studies of canine transmissible venereal tumor in Brazil / Estudos imuno-histoquímico, lectino-histoquímico e ultraestrutural do Tumor Venéreo Transmissível Canino no Brasil

Canine transmissible venereal tumor (CTVT) is a naturally occurring contagious round-cell neoplasia, with poorly understood origin and transmission. This study aims to further investigate the tumor nature through immunohistochemistry, lectin histochemistry and transmission electron microscopy (TEM) analysis, and to provide support for diagnostic and differential diagnoses of CTVT. Immunohistochemistry was performed in 10 genital and six exclusively extragenital tumors, which were previously diagnosed by citology and histopathology. CTVT samples were incubated with biotinylated antibodies to specific membrane and cytoplasmic antigens (anti-lysozyme, anti-macrophage, anti-vimentin, anti-CD18, monoclonal anti-CD117, monoclonal anti-CD3, polyclonal anti-CD117, polyclonal CD3 and anti-CD79a), followed by the avidin-biotin-peroxidase complex technique. The lectins Con A, DBA, SBA, PNA, UEA-1, WGA, sWGA, GSL, JSA, PSA, PHA-L, PHA-E and RCA were additionally tested in four genital CTVTs and TEM was performed in eight genital tumors. The anti-vimentin antibody revealed strong immunoreactivity to neoplastic cells in all the assessed samples (16/16). The polyclonal anti-CD3 antibodies showed moderate to strong immunoreactivity in fourteen (14/16) and the polyclonal anti-CD117 in fifteen cases (15/16). There was no immunoreactivity to anti-lysozyme, anti-macrophage, anti-CD18, monoclonal anti-CD117, monoclonal anti-CD3 and anti-CD79a antibodies. At lectin histochemistry, it was observed strong staining of tumor cells to Con-A, PHA-L and RCA. There was no histopathological and immunoreactivity differences between genital and extragenital CTVTs. These findings do not support the hypothesis of histiocytic origin of CTVT. In contrast, the lectin histochemical results were similar to cells from lymphoid/myeloid origin.(AU)

O Tumor Venéreo Transmissível Canino (CTVT) é uma neoplasia de células células redondas, contagiosa, com origem e transmissão ainda mal compreendidas. Com a finalidade de aprofundar a investigação sobre a natureza (origem) do TVTC, bem como fornecer subsídios para o estabelecimento do diagnóstico e diagnóstico diferencial, realizaram-se avaliações imuno-histoquímica, lectino-histoquímica e ultraestrutural de TVTC(s). A avaliação imuno-histoquímica foi feita em 10 TVTCs genitais e em 6 exclusivamente extragenitais previamente diagnosticados através de citologia e da histopatologia. Os TVTCs foram testados para reagentes específicos de antígenos de membrana e citoplasmáticos (anti-lisozima, anti-macrófago, anti-vimentina, anti-CD18, anti-CD3, anti-CD79, anti-CD117) com utilização da técnica complexo avidina-biotina-peroxidase. Adicionalmente, foram utilizadas as lectinas Con A, DBA, SBA, PNA, UEA-1, WGA, sWGA, GSL, SJA, PSA, PHA-L, PHA-E e RCA em quatro TVTCs genitais. Microscopia eletrônica foi realizada em oito TVTC genitais. Em 100% dos tumores testados (16/16) com anticorpo anti-vimentina (mono e policlonal) houve forte imuno-reatividade. Não houve reatividade para os anticorpos anti-lisozima, anti-macrófago, anti-CD18, anti-CD3, anti-CD79a e anti-CD117 quando empregamos anticorpos monoclonais, entretanto, com a utilização de anticorpos policlonais verificou-se marcação dos tumores com os anticorpos anti-CD3 e anti-CD117. Na avaliação lectino-histoquímica foi verificada forte marcação das células tumorais com Con-A, PHA-L e RCA. Não houve diferença histopatológica e de imuno-reatividade entre os TVTCs genitais e extragenitais. Estes achados não corroboram com a hipótese da origem histiocítica do CTVT (ausência de reatividade dos anticorpos anti-lisozima, anti-macrófago e anti-CD18), entretanto, os resultados da avaliação lectino-histoquímica foram em parte similares aos obtidos quando células de origem linfóide/mielóide (ConA, PHA-L e RCA) foram analisadas (Gimeno et al. 1995).(AU)

Evaluación histopatológica de los ganglios linfáticos axilar y superficie inguinal en perras (Canis familiaris) debajo mastectomía terapéutica / Histopathological evaluation of axillary and superficial inguinal lymph nodes in bitches (Canis familiaris) underwent to therapy mastectomy / Avaliação histopatológica dos linfonodos axilares e inguinais superficiais em cadelas (Canis familiaris) submetidas à mastectomia terapêutica

Los tumores mamarios son las neoplasias más comunes en perros, que constituyen alrededor del 50% de las neoplasias de la especie canina. Los tumores de mama malignos pueden establecer metástasis a los ganglios linfáticos regionales y se extendió a otros sitios. La reactividad de los ganglios linfáticos en los alrededores del tumor es un factor relacionado con el pronóstico del cáncer. El objetivo de este estudio fue evaluar la incidencia de los cambios histopatológicos de lesiones de mama en perros, especialmente la metástasis de los tumores malignos de mama en los ganglios linfáticos axilares e inguinales superficiales sin cambios macroscópicos. La retirada del ganglio linfático inguinal se llevó a cabo junto con la glándula inguinal debido a la íntima asociación de estas dos estructuras. Para la localización y la escisión de la linfa axilar aplicado colorante azul de metileno 2% alrededor de la mama torácica craneal a la lesión. La biopsia excisional de ganglios centinela, axilar y inguinal superficial, durante la mastectomía y posterior análisis histopatológico de los ganglios linfáticos y cadena mamaria permitió el diagnóstico del tipo de tumor primario, el grado de reactividad linfoide y la identificación de metástasis linfática. [...](AU)

Mammary tumors are the most common neoplasms in dogs, corresponding to 50% of neoplasms of the canine specie. Malignant breast tumors may metastasize to regional lymph nodes and spread to other sites. The reactivity of lymph nodes in the tumor surroundings is a factor related to the prognosis of cancer. The objective of this study was to evaluate the incidence of histopathological changes in dogs with breast lesions, especially metastasis of malignant breast tumors in axillary and superficial inguinal lymph nodes without macroscopic changes. The removal of the inguinal lymph node was held together with the inguinal gland due to the intimate association of these two structures. For localization and excision of axillary lymph node was necessary to inject the dye methylene blue 2% around the ipsilateral cranial breast to chest injury. The excisional biopsy of sentinel nodes, axillary and superficial inguinal, during mastectomy and subsequent histopathological analysis of the mammary chain and lymph nodes allowed the diagnosis of the type of primary tumor, the degree of lymphoid reactivity and lymphatic metastasis. [...](AU)

Os tumores mamários são as neoplasias mais comuns em cadelas, constituindo cerca de 50% do total de neoplasias da espécie canina. Neoplasias mamárias malignas podem estabelecer metástases para os linfonodos regionais e se disseminarem para outros sítios. A reatividade de linfonodos nas adjacências do tumor é um fator relacionado ao prognóstico da neoplasia. O objetivo deste trabalho foi avaliar a incidência de alterações histopatológicas das lesões mamárias em cadelas, principalmente metástase de neoplasias mamárias malignas, nos linfonodos axilar e inguinal superficial sem alterações macroscópicas. A remoção do linfonodo inguinal foi realizada juntamente com a da glândula inguinal devido à íntima associação dessas duas estruturas. Já para a localização e exérese do linfonodo axilar, preconizou-se a ejeção do corante azul de metileno a 2% ao redor da mama torácica cranial ipsilateral à lesão. A biópsia excisional dos linfonodos sentinela, axilar e inguinal superficial, no mesmo tempo cirúrgico da mastectomia e a posterior análise histopatológica da cadeia mamária e dos linfonodos permitiu o diagnóstico do tipo de neoplasia primária, do grau de reatividade linfoide e da metástase linfática. [...](AU)

Evaluación histopatológica de los ganglios linfáticos axilar y superficie inguinal en perras (Canis familiaris) debajo mastectomía terapéutica / Histopathological evaluation of axillary and superficial inguinal lymph nodes in bitches (Canis familiaris) underwent to therapy mastectomy / Avaliação histopatológica dos linfonodos axilares e inguinais superficiais em cadelas (Canis familiaris) submetidas à mastectomia terapêutica

Los tumores mamarios son las neoplasias más comunes en perros, que constituyen alrededor del 50% de las neoplasias de la especie canina. Los tumores de mama malignos pueden establecer metástasis a los ganglios linfáticos regionales y se extendió a otros sitios. La reactividad de los ganglios linfáticos en los alrededores del tumor es un factor relacionado con el pronóstico del cáncer. El objetivo de este estudio fue evaluar la incidencia de los cambios histopatológicos de lesiones de mama en perros, especialmente la metástasis de los tumores malignos de mama en los ganglios linfáticos axilares e inguinales superficiales sin cambios macroscópicos. La retirada del ganglio linfático inguinal se llevó a cabo junto con la glándula inguinal debido a la íntima asociación de estas dos estructuras. Para la localización y la escisión de la linfa axilar aplicado colorante azul de metileno 2% alrededor de la mama torácica craneal a la lesión. La biopsia excisional de ganglios centinela, axilar y inguinal superficial, durante la mastectomía y posterior análisis histopatológico de los ganglios linfáticos y cadena mamaria permitió el diagnóstico del tipo de tumor primario, el grado de reactividad linfoide y la identificación de metástasis linfática. [...]

Mammary tumors are the most common neoplasms in dogs, corresponding to 50% of neoplasms of the canine specie. Malignant breast tumors may metastasize to regional lymph nodes and spread to other sites. The reactivity of lymph nodes in the tumor surroundings is a factor related to the prognosis of cancer. The objective of this study was to evaluate the incidence of histopathological changes in dogs with breast lesions, especially metastasis of malignant breast tumors in axillary and superficial inguinal lymph nodes without macroscopic changes. The removal of the inguinal lymph node was held together with the inguinal gland due to the intimate association of these two structures. For localization and excision of axillary lymph node was necessary to inject the dye methylene blue 2% around the ipsilateral cranial breast to chest injury. The excisional biopsy of sentinel nodes, axillary and superficial inguinal, during mastectomy and subsequent histopathological analysis of the mammary chain and lymph nodes allowed the diagnosis of the type of primary tumor, the degree of lymphoid reactivity and lymphatic metastasis. [...]

Os tumores mamários são as neoplasias mais comuns em cadelas, constituindo cerca de 50% do total de neoplasias da espécie canina. Neoplasias mamárias malignas podem estabelecer metástases para os linfonodos regionais e se disseminarem para outros sítios. A reatividade de linfonodos nas adjacências do tumor é um fator relacionado ao prognóstico da neoplasia. O objetivo deste trabalho foi avaliar a incidência de alterações histopatológicas das lesões mamárias em cadelas, principalmente metástase de neoplasias mamárias malignas, nos linfonodos axilar e inguinal superficial sem alterações macroscópicas. A remoção do linfonodo inguinal foi realizada juntamente com a da glândula inguinal devido à íntima associação dessas duas estruturas. Já para a localização e exérese do linfonodo axilar, preconizou-se a ejeção do corante azul de metileno a 2% ao redor da mama torácica cranial ipsilateral à lesão. A biópsia excisional dos linfonodos sentinela, axilar e inguinal superficial, no mesmo tempo cirúrgico da mastectomia e a posterior análise histopatológica da cadeia mamária e dos linfonodos permitiu o diagnóstico do tipo de neoplasia primária, do grau de reatividade linfoide e da metástase linfática. [...]

ANÁLISE HISTOMORFOLÓGICA E IMUNOFENOTÍPICA POR PCR - PARR EM TEMPO REAL DOS LINFOMAS CANINOS

O linfoma é uma neoplasia de origem hematopoiética que frequentemente acomete caninos. O estabelecimento adequado do prognóstico e a rápida instituição do tratamento são essenciais para propiciarem melhor qualidade de vida ao paciente, sendo a imunofenotipagem uma das ferramentas utilizadas para este fim. Objetivou-se com este trabalho classificar histomorfologicamente e imunofenotipicamente pela técnica de Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real para Ensaio dos Receptores de Rearranjo Gênico (PCR PARR) casos de linfoma caninos obtidos no Laboratório de Histopatologia da Área de Patologia Departamento de Medicina Veterinária da Universidade Federal Rural de Pernambuco. Foram obtidas 37 amostras no total; 25 emblocadas em parafina, duas amostras de tecido congelado e 10 aspirados pela citologia aspirativa por agulha fina. Nas análises histomorfológicas considerando 25 amostras; 28,00% (7/25) foram caracterizadas como linfoma difuso de grandes células, 28,00% (7/25) linfoma cutâneo epiteliotrópico, 12,00% (3/25) linfoma cutâneo não-epiteliotrópico, 8,00% (2/25) linfoma difuso de células intermediárias, 8,00% (2/25) linfoma difuso de pequenas células e 4,00% (1/25) foram classificados como plasmocitoma, hiperplasia linfóide, linfoma folicular de grandes células e mastocitoma pouco diferenciado. Já na análise imunofenotípica pela técnica de PCR-PARR em Tempo Real, 85,71% (30/35) das amostras demonstraram amplificação clonal, sendo 53,33% (16/30) para linfoma de células B, 23,33% (7/23) para células T e 23,33% (7/23) para ambos os fenótipos (B e T). Em 14,28% (5/35) as amostras foram consideradas como reatividade linfóide, por demonstrar picos irregulares e policlonais. A PCR em Tempo Real se demonstrou mais sensível as amostras antigas em bloco de parafina, podendo ser uma técnica de escolha a ser utilizada em estudos retrospectivos de amostras fixadas em formol e parafina. O uso da PCR-PARR associado ao exame histopatológico na rotina veterinária pode ser de grande auxílio aos patologistas, principalmente quando há possibilidade de diferenciação entre hiperplasia e neoplasia, sendo assim a importância desta técnica na rotina médica é essencial para um rápido diagnóstico e prognóstico ao paciente.

Lymphoma is a hematopoietic neoplasm that frequently affects canines. The establishing appropriate prognosis and rapid initiation of treatment are essential to propitiate better quality of life for the patient, and immunophenotyping of the tools used for this purpose. The objective of this work was to classify histomorphologically and immunophenotypically by the Real Time Polymerase Chain Reaction technique for Assay for Rearrangement of Antigen Receptors (PCR - PARR) cases of canine lymphoma obtained at the Histopathology Laboratory of the Pathology Department, Medicine Department Veterinary of the Federal Rural University of Pernambuco in the period from 2002 to 2019. A total of 37 samples were obtained; 25 embedded in paraffin, two samples of frozen tissue and 10 aspirated by fine needle aspiration cytology. In histomorphological analyzes considering 25 samples 28.00% (7/25) were characterized as diffuse large cell lymphoma, 28.00% (7/25) epitheliotropic cutaneous lymphoma, 12.00% (3/25) non-cutaneous lymphoma epitheliotropic, 8.00% (2/25) diffuse intermediate cell lymphoma, 8.00% (2/25) diffuse small cell lymphoma and 4.00% (1/25) were plasmacytoma, lymphoid hyperplasia, follicular lymphoma of large cells and poorly differentiated mastocytoma In the immunophenotypic analysis by PCR Real-Time PARR, 85.71% (30/35) of the samples showed clonal amplification, and 53.33% (16/30) for B-cell lymphoma, 23.33% ( 7/23) to T cells and 23.33% (7/23) for both phenotypes (B and T). In 14.28% (5/35) the samples were considered as lymphoid reactivity, as they demonstrate irregular and polyclonal peaks. Real-time PCR was shown to be more sensitive to old paraffin block samples, and may be a technique of choice to be used in retrospective studies of samples fixed in formaldehyde and paraffin. The use of PCR-PARR associated with histopathological examination in the veterinary routine can be of great help to pathologists, especially when there is a possibility of differentiation between hyperplasia and neoplasia, so the importance of this technique in the medical routine is essential for a quick diagnosis and prognosis when patient.

IMPORTÂNCIA DOS GENES fliC e motB DE Salmonella enterica subsp. enterica sorovar Enteritidis NA COLONIZAÇÃO INTESTINAL E INVASÃO SISTÊMICA EM AVES (Gallus gallus domesticus)

Salmonella Enteritidis (SE) causa o paratifo aviário em aves e frequentemente está relacionada aos surtos de infecção alimentar em seres humanos. A contribuição do flagelo versus motilidade na interação patógeno-hospedeiro requer estudos mais aprofundados. Para melhor entendimento da contribuição individual desses fatores de virulência em aves, pintinhos de um dia de vida foram desafiados oralmente com estirpe selvagem de SE, uma mutante não-móvel mas flagelada (SE motB) e outra mutante aflagelada (SE fliC). Excreção fecal e colonização de fígado, baço e conteúdo cecal pelas estirpes de SE foram avaliadas. Além disso, também foi realizada a avaliação das alterações macroscópicas e microscópicas. Nos estágios iniciais da infecção, ambos mutantes mostraram menor capacidade de colonizar o ceco, além de menor recuperação no baço por SE fliC comparando a estirpe selvagem SE. Após 7 dpi não havia diferenças na contagem das três estirpes em conteúdo cecal, fígado e baço. Análises histopatológicas demonstraram que estirpes flageladas (SE motB e SE) induziram reatividade linfóide em inglúvio, ceco, íleo e fígado. No entanto, nos estágios iniciais da infecção a estirpe SE fliC não estimulou a reatividade linfóide em lâmina própria de ceco e íleo mas induziu discretos focos necróticos em fígado. Portanto, neste estudo a presença de estrutura flagelar e motilidade parece exercer um papel nos estágios iniciais da colonização intestinal e infecção sistêmica por SE nas aves.

Salmonella Enteritidis (SE) causes fowl paratyphoid in poultry often related to outbreaks of food-borne diseases in humans. The contribution of flagella and motility in host pathogen interaction require further investigation. To better understand the individual contribution of these virulence factors in poultry, one day old chickens were challenged orally with wildtype strain of SE, a nonmotile but fully flagellated (SE motB) and aflagellated mutant (SE fliC). Faecal excretion and colonization of liver, spleen and cecal contents by the SE strains were assessed. Additionally, the assessment of gross and microscopic alterations was also performed. At the early stages of infection both mutants showed lower capacity to colonize the ceca, besides the lower recovering in spleen of SE fliC comparing to the wild type of SE. After 7 dpi there were no differences among the counts of the three strains in ceca, liver and spleen. Histopathological analyses demonstrated that flagellated strains (wild type SE and SE motB) induced lymphoid reactivity in crop, ceca, ileum and liver. On the other hand, in the early stages of infection, SE fliC strain did not stimulate lymphoid reactivity in lamina propria of ceca and ileum but induced discrete necrotic foci in liver. Thus in the present study the flagellar structure and motility seemed to play a role at the early stages of the intestinal colonization and systemic infection by SE in the chicken.

Apoptose em linfonodos de cães com Leishmaniose Visceral

A linfadenomegalia generalizada é um aspecto da Leishmaniose Visceral Canina (LVC), mas existem poucos estudos enfocando alterações no linfonodo. O objetivo deste estudo foi analisar os linfonodos de cães com LVC, considerando a densidade de células apoptóticas. Utilizou-se 32 cães naturalmente infectados, de área endêmica para LVC, classificados nos grupos sintomático (S), assintomático (A) e oligossintomático (O). Os linfonodos foram colhidos para análise histopatológica. A avaliação da carga parasitária e porcentagem de apoptose foi feita pelo método de imunoistoquímica. Na avaliação histopatológica, no infiltrado dos linfonodos dos grupos O e S predominaram macrófagos e plasmócitos, envolvendo todas as regiões do linfonodo e causando distorção deste órgão pela presença de granulomas atípicos associados à atrofia linfóide nos casos crônicos. A carga parasitária e a densidade de células apoptóticas foram maiores nos cães sintomáticos, podendo estar associado à causa de atrofia linfóide, deixando-os mais susceptíveis a LVC. Os linfonodos subescapular e poplíteo foram os que apresentaram maior reatividade, porém a atrofia linfóide foi mais evidente neste último. Conclui-se que independente do quadro clínico, a resposta predominante foi granulomatosa e de plasmócitos. A associação entre a apoptose e a carga parasitária não foi significativa (P<0,05), mas parece ter importância biológica, já que cães (grupo S) com a maior carga parasitária, também tiveram o maior número de células apoptóticas, sugerindo um mecanismo de evasão imune do parasito, favorecendo sua sobrevivência e multiplicação no hospedeiro

The generalized lymphadenopathy is an aspect of Canine Visceral Leishmaniasis (CVL), but there are few studies focusing on changes in the lymph node. The aim of this study was to examine the lymph nodes of dogs with CVL, considering the density of apoptotic cells. We used 32 dogs naturally infected in an endemic area for CVL, classified in groups symptomatic (S), asymptomatic (A) and oligosymptomatic (O). The lymph nodes were collected for histopathological analysis. The evaluation of parasite load and percentage of apoptosis was performed by immunohistochemistry. Histopathology, macrophages and plasma cells predominated in the infiltrate of the lymph nodes of groups O and S, involving all regions of the lymph node and forming granulomas associated with lymphoid atrophy in chronic cases. The parasite load and the density of apoptotic cells were higher in symptomatic dogs, which may be linked to causing lymphoid atrophy, leaving the dog more susceptible to LVC. The subscapular and popliteal lymph nodes were those with higher reactivity, but the lymphoid atrophy was most evident in the popliteal lymph node. It follows that regardless of the clinical picture, the predominant response was granulomatous and plasma cells. The association between apoptosis and the parasite load was not significant (P <0.05), but seems to have biological importance, since it was observed that dogs (group S) with the highest parasite load, also had the highest number of apoptotic cells, suggesting a mechanism for immune evasion of the parasite, promoting their survival and multiplication in the host

Immunophenotyping of canine lymphoma in paraffin embedded tissue / Imunofenotipagem dos linfomas caninos em tecido incluído em parafina

The use of immunohistochemistry techniques to c1assify canine lymphomas in paraffin embedded tissues was the object of this study. Anti-CD3 antibodies for T-cells and anti-CD79a antibodies for B-cells were used. T-cell lymphomas were more frequent (60.2%), followed by B-cell lymphomas (32.6%) and T/B-cell lymphomas (7.2%). Using the lymphoid anti-CD3 (Dako A0452) and anti-CD79a (Dako M7051) markers specific for humans, we concluded that these antibodies showed cross-reactivity with canine tissue and can be used in determining the lymphoid line of canine lymphomas. We also showed that the immunohistochemistry technique used in paraffin embedded tissues had excellent results, specially with the development of new mono and polyclonal antibodies with cross reactivity between species.

O presente estudo teve como objetivo a utilização da técnica de imunoistoquúnica para realizar a imunofenotipagem dos linfomas caninos em tecido incluído em parafina. Para isso, foram utilizados os anticorpos anti-CD3 para células T e anti-CD79a para células B. Os resultados demonstraram que os linfomas T são os de maior ocorrência (60,2%), seguidos pelos linfomas B (32,6%) e TIB (7,2%). Realizando a classificação imunofenotípica destes linfomas, concluiu-se que os marcadores linfóides anti-CD3 (Dako A0452) e anti-CD79a (Dako M7051), espécie-específicos para humanos, apresentam reatividade cruzada com a espécie canina, sendo eficientes na determinação da linhagem linfóide dos linfomas caninos. Constatou-se ainda, que a técnica de imunoistoquímica aplicada em tecido incluído em parafina, apresenta excelentes resultados, principalmente com o avanço na descoberta de novos anticorpos mono e policlonais espécie-específicos ou que apresentem reatividade cruzada entre as espécies.

Immunophenotyping of canine lymphoma in paraffin embedded tissue / Imunofenotipagem dos linfomas caninos em tecido incluído em parafina

The use of immunohistochemistry techniques to c1assify canine lymphomas in paraffin embedded tissues was the object of this study. Anti-CD3 antibodies for T-cells and anti-CD79a antibodies for B-cells were used. T-cell lymphomas were more frequent (60.2%), followed by B-cell lymphomas (32.6%) and T/B-cell lymphomas (7.2%). Using the lymphoid anti-CD3 (Dako A0452) and anti-CD79a (Dako M7051) markers specific for humans, we concluded that these antibodies showed cross-reactivity with canine tissue and can be used in determining the lymphoid line of canine lymphomas. We also showed that the immunohistochemistry technique used in paraffin embedded tissues had excellent results, specially with the development of new mono and polyclonal antibodies with cross reactivity between species.

O presente estudo teve como objetivo a utilização da técnica de imunoistoquúnica para realizar a imunofenotipagem dos linfomas caninos em tecido incluído em parafina. Para isso, foram utilizados os anticorpos anti-CD3 para células T e anti-CD79a para células B. Os resultados demonstraram que os linfomas T são os de maior ocorrência (60,2%), seguidos pelos linfomas B (32,6%) e TIB (7,2%). Realizando a classificação imunofenotípica destes linfomas, concluiu-se que os marcadores linfóides anti-CD3 (Dako A0452) e anti-CD79a (Dako M7051), espécie-específicos para humanos, apresentam reatividade cruzada com a espécie canina, sendo eficientes na determinação da linhagem linfóide dos linfomas caninos. Constatou-se ainda, que a técnica de imunoistoquímica aplicada em tecido incluído em parafina, apresenta excelentes resultados, principalmente com o avanço na descoberta de novos anticorpos mono e policlonais espécie-específicos ou que apresentem reatividade cruzada entre as espécies.