Perfil psicossocial de acumuladores de animais e implicações na saúde pública / Psychosocial profile of animal accumulators and public health implications / Perfil psicosocial de acumuladores animales e implicaciones en salud pública

O acúmulo de animais nos domicílios humanos é um tópico emergente no contexto de Saúde Única, caracterizado como um transtorno mental, no qual o indivíduo possui dificuldades em se desfazer de seus animais. O ambiente em que os animais habitam costuma ser insalubre, favorecendo o desenvolvimento de doenças e o comprometimento do bem-estar animal, infringindo direitos legais. O presente estudo teve como objetivo avaliar cinco residências no município de Botucatu, nas quais haviam mais de dez animais. Foram realizadas visitas nessas residências e feita a colheita de fezes dos animais para pesquisar parasitas como: Ancylostoma spp., Cystoisospora sp., Toxocara sp., Trichuris spp. e Giardia spp., além disso aplicou-se um protocolo de perícia para avaliar o Bem-Estar Animal, segundo a adaptação do protocolo desenvolvido por Hammerschmidt (12) no qual o Bem-Estar é classificado em: muito alto, alto, regular, baixo e muito baixo, além disso foi elaborada uma entrevista para identificar fatores epidemiológicos sobre os acumuladores de animais. Foi constatado, por meio de exames coproparasitológicos, principalmente a presença de Ancylostoma spp., Cystoisospora sp. e Giardia spp., em relação ao Bem-estar Animal identificou-se três residências com classificação regular e uma com classificação alto. Já nas entrevistas constatamos o predomínio do sexo masculino, sendo que 60% dos entrevistados eram casados e havia o predomínio do acúmulo de cães e as justificativas para o acúmulo recairam sobre a reprodução indesejada e questões afetivas. Destacamos a importância do médico veterinário para intervir nessas situações, devido ao conhecimento sanitário relacionado à saúde pública, sobretudo em relação as doenças zoonóticas que podem estar presentes nesses ambientes, além do conhecimento que sobre Medicina Veterinária Legal com a intenção de identificar possíveis infrações que possam estar sendo cometidas e consequentemente afetando o Bem-Estar animal. Por fim, ressalta-se a necessidade da abordagem multiprofissional do assunto possibilitando que haja um ambiente em que tanto o animal como os humanos possam desfrutar de condições adequadas de saúde.(AU)

The accumulation of animals in homes is an emerging topic in the context of One Health, characterized as a mental disorder, in which the hoarder has difficulties in getting rid of his animals. The environment in which animals live is usually unhealthy, favoring the development of diseases and compromising animal welfare, infringing legal rights. The present study aimed to evaluate five residences in the municipality of Botucatu in which there were more than ten animals. Visits were made, and animal feces were collected for endoparasites research by the coproparasitological methods of simple flotation to detect helminth eggs and by the method of centrifugation-flotation in zinc sulfate to detect protozoan oocysts and cysts. An expertise protocol was also applied to evaluate animal welfare, according to an adaptation of the Hammerschmidt protocol, in which welfare is classified into levels: very high, high, regular, low, and very low. An interview was also conducted to identify characteristics of the hoarders. The presence of Ancylostoma spp., Cystoisospora sp. and Giardia spp. was verified by fecal examination. Regarding animal welfare, three residences were identified as regular, and one as high. In the interviews we observed a predominance of male hoarders, 60% were married, and there was a predominance of dog hoarding. The justifications for the accumulation were unwanted reproduction and affective issues. We highlight the importance of the veterinarian to intervene in these situations, by the knowledge, as to the zoo-sanitary management related mainly to public health, especially in relation to zoonotic diseases that may be present in these environments, in addition to the knowledge about Veterinary Forensic Medicine, to identify possible infractions that may be being committed and consequently affecting the welfare of animals. We emphasize the need for a multiprofessional approach to the subject in order to create a favorable environment in which both animals and humans can have quality of life, avoiding the occurrence of diseases for both(AU)

La acumulación de animales en los hogares es un tema emergente en el contexto de One Health, caracterizado como un trastorno mental, en el que el acaparador tiene dificultades para deshacerse de sus animales. El entorno en el que viven los animales suele ser insalubre, lo que favorece el desarrollo de enfermedades y el deterioro del bienestar animal, infringiendo los derechos legales. El presente estudio tuvo como objetivo evaluar cinco hogares del municipio de Botucatu, en los que había más de diez animales. Se realizaron visitas y se recogieron heces de animales para la investigación de endoparásitos mediante los métodos coproparasitológicos de flotación simple para detectar huevos de helmintos y mediante el método de centrifugación-flotación en sulfato de zinc para detectar ooquistes y quistes de protozoos. También se aplicó un protocolo de peritaje para evaluar el bienestar de los animales, según una adaptación del protocolo de Hammerschmidt, en el que el bienestar se clasifica en niveles: muy alto, alto, regular, bajo y muy bajo. También se realizó una entrevista para identificar las características de los acaparadores. La presencia de Ancylostoma spp., Cystoisospora sp. y Giardia spp. se observó principalmente en las heces. En cuanto al bienestar de los animales, se identificaron tres residencias con una clasificación regular y una con un nivel alto. En las entrevistas se observó un predominio de acumuladores masculinos, el 60% estaban casados y había un predominio de acumulación de perros. Las justificaciones de la acumulación eran la reproducción no deseada y las cuestiones afectivas. Destaca la importancia del veterinario para intervenir en estas situaciones, por el conocimiento, en cuanto a la gestión zoo-sanitaria relacionada principalmente con la salud pública, sobre todo en relación con las enfermedades zoonóticas que pueden estar presentes en estos entornos, además del conocimiento que, sobre la Medicina Forense Veterinaria, para identificar las posibles infracciones que se puedan estar cometiendo y que consecuentemente afecten al bienestar de los animales. Destacamos la necesidad de un enfoque multiprofesional sobre el tema abordado, que permita un entorno favorable en el que tanto los animales como los humanos puedan tener calidad de vida, evitando la aparición de enfermedades para ambos.(AU)

Sarcocystidae in wild birds of southeastern Brazil / Sarcocystidae em aves silvestres do sudeste do Brasil

This study aimed to identify members of the Sarcocystidae family in naturally infected wild birds at a rescue center in the state of Minas Gerais, southeastern Brazil. The heart and brain of 44 wild birds were evaluated by bioassay in mice to detect T. gondii, and extracted DNA was used for nested PCR of the 18S ribosomal DNA gene to detect members of the Sarcocystidae family. The positive samples were sequenced, assembled, edited and compared with sequences deposited in GenBank. Toxoplasma gondii was isolated from six (13.6%) out of 44 birds. Toxoplasma gondii DNA was identified in 10/44 (22.7%) of the birds. The amplified sequences exhibited 100% similarity with the DNA of the ME49 strain of T. gondii. Sarcocystis DNA (99% similarity) was identified in 5/44 (11.4%) of the birds. T. gondii and Sarcocystis spp. are common in wild birds in Minas Gerais, Brazil.(AU)

O objetivo deste estudo foi identificar membros da família Sarcocystidae em aves silvestres de vida livre naturalmente infectadas e resgatadas no estado de Minas Gerais, Brasil. Coração e cérebro de 44 aves silvestres foram avaliados por bioensaio em camundongos para detecção de T. gondii e extração de DNA para Nested-PCR do gene 18S do DNA ribossomal de membros da família Sarcocystidae. As amostras positivas foram sequenciadas, analisadas, editadas e comparadas com sequências depositadas no GenBank. Toxoplasma gondii foi isolado de seis (13,6%) das 44 aves. DNA de T. gondii foi identificado em 10/44 (22,7%) das 44 aves. As sequências amplificadas exibiram 100% de similaridade com o DNA da cepa ME49 de T. gondii. DNA de Sarcocystis (99% de similaridade) foi identificado em 5/44 (11,4%) das 44 aves. T. gondii e Sarcocystis spp. são encontrados, comumente, em aves silvestres no estado de Minas Gerais, Brasil.(AU)

Sarcocystis neurona and related Sarcocystis spp. shed by opossums (Didelphis spp.) in South America / Sarcocystis neurona e Sarcocystis spp. relacionados, excretados por gambás (Didelphis spp.) na América do Sul

Protozoan parasites of the genus Sarcocystis are obligatory heteroxenous cyst-forming coccidia that infect a wide variety of animals and encompass approximately 200 described species. At least four Sarcocystis spp. (S. falcatula, S. neurona, S. lindsayi and S. speeri) use opossums (Didelphis spp.) as definitive hosts, and two of them, S. neurona and S. falcatula, are known to cause disease in horses and birds, respectively. Opossums are restricted to the Americas, but their distribution in the Americas is heterogeneous. Five Didelphis spp. are distributed in South America (D. aurita, D. albiventris, D. marsupialis, D. imperfecta and D. pernigra) whereas just one opossum species (D. virginiana) is found in North America. Studies conducted in the last decades show that Sarcocystis spp., derived from South American Didelphis spp., have biological and genetic differences in relation to Sarcocystis spp. shed by the North American opossum D. virginiana. The aim of this review was to address the peculiar scenario of Sarcocystis species shed by South American opossums, with a special focus on diagnosis, epidemiology, and animal infections, as well as the genetic characteristics of these parasites.(AU)

Parasitos protozoários do gênero Sarcocystis são coccídios heteroxenos formadores de cistos, que infectam variadas espécies animais e compreendem cerca de 200 espécies descritas. Pelo menos quatro Sarcocystis spp. (S. falcatula, S. neurona, S. lindsayi e S. speeri) utilizam gambás (Didelphis spp.) como hospedeiros definitivos; e duas delas, S. neurona and S. falcatula são conhecidas por causarem doença em equinos e aves, respectivamente. Gambás didelfídeos são restritos ao continente americano, contudo são distribuídos de forma heterogênea nas Américas. Cinco Didelphis spp. são distribuídos na América do Sul (D. aurita, D. albiventris, D. marsupialis, D. imperfecta e D. pernigra), enquanto somente uma espécie (D. virginiana) é encontrada na América do Norte. Trabalhos conduzidos, nas últimas décadas, mostram que Sarcocystis spp. derivados de Didelphis spp. sul-americanos possuem diferenças biológicas e genéticas, quando comparados a Sarcocystis spp. excretados pelo gambá norte-americano D. virginiana. O objetivo desta revisão é discutir a situação peculiar das espécies de Sarcocystis na América do Sul com um foco especial em diagnóstico, epidemiologia e infecções animais, assim como nas características genéticas desses parasitos.(AU)

Sarcocystis neurona and related Sarcocystis spp. shed by opossums (Didelphis spp.) in South America / Sarcocystis neurona e Sarcocystis spp. relacionados, excretados por gambás (Didelphis spp.) na América do Sul

Abstract Protozoan parasites of the genus Sarcocystis are obligatory heteroxenous cyst-forming coccidia that infect a wide variety of animals and encompass approximately 200 described species. At least four Sarcocystis spp. (S. falcatula, S. neurona, S. lindsayi and S. speeri) use opossums (Didelphis spp.) as definitive hosts, and two of them, S. neurona and S. falcatula, are known to cause disease in horses and birds, respectively. Opossums are restricted to the Americas, but their distribution in the Americas is heterogeneous. Five Didelphis spp. are distributed in South America (D. aurita, D. albiventris, D. marsupialis, D. imperfecta and D. pernigra) whereas just one opossum species (D. virginiana) is found in North America. Studies conducted in the last decades show that Sarcocystis spp., derived from South American Didelphis spp., have biological and genetic differences in relation to Sarcocystis spp. shed by the North American opossum D. virginiana. The aim of this review was to address the peculiar scenario of Sarcocystis species shed by South American opossums, with a special focus on diagnosis, epidemiology, and animal infections, as well as the genetic characteristics of these parasites.

Resumo Parasitos protozoários do gênero Sarcocystis são coccídios heteroxenos formadores de cistos, que infectam variadas espécies animais e compreendem cerca de 200 espécies descritas. Pelo menos quatro Sarcocystis spp. (S. falcatula, S. neurona, S. lindsayi e S. speeri) utilizam gambás (Didelphis spp.) como hospedeiros definitivos; e duas delas, S. neurona and S. falcatula são conhecidas por causarem doença em equinos e aves, respectivamente. Gambás didelfídeos são restritos ao continente americano, contudo são distribuídos de forma heterogênea nas Américas. Cinco Didelphis spp. são distribuídos na América do Sul (D. aurita, D. albiventris, D. marsupialis, D. imperfecta e D. pernigra), enquanto somente uma espécie (D. virginiana) é encontrada na América do Norte. Trabalhos conduzidos, nas últimas décadas, mostram que Sarcocystis spp. derivados de Didelphis spp. sul-americanos possuem diferenças biológicas e genéticas, quando comparados a Sarcocystis spp. excretados pelo gambá norte-americano D. virginiana. O objetivo desta revisão é discutir a situação peculiar das espécies de Sarcocystis na América do Sul com um foco especial em diagnóstico, epidemiologia e infecções animais, assim como nas características genéticas desses parasitos.

Detecção molecular de Neospora caninum em macaco-da-noite (Aotus azarae) de vida livre no estado do Mato Grosso: relato de caso / Molecular detection of Neospora caninum in azara's night monkey (Aotus azarae) of wildlife in the state of Mato Grosso: Case report

Estudos indicam, por meio de infecção experimental, que primatas não humanos são susceptíveis à infecção por Neospora caninum. Relata-se um caso de um macaco-da-noite (Aotus azarae infulatus), que apresentou sinais inespecíficos e não respondeu à terapêutica clínica de suporte, evoluindo a óbito, encaminhado em seguida para exame anatomopatológico. Amostras de tecidos foram coletadas e processadas rotineiramente para confecção de lâminas histológicas. Microscopicamente, a principal lesão foi observada no coração e consistia em miocardite necrótica multifocal por protozoário, com a presença de estruturas compatíveis com o estágio de taquizoítos de protozoários dos gêneros Neospora sp. ou Toxoplasma sp. No sistema nervoso central, predominantemente no tronco encefálico, havia estruturas semelhantes às descritas no coração. Os resultados da reação em cadeia pela polimerase (PCR) foram positivos para N. caninum e negativos para Toxoplasma gondii, usando DNA extraído do sangue e dos tecidos. Este relato de caso fornece evidências histológicas e moleculares de que o primata em questão foi susceptível a uma infecção natural, porém estudos devem ser realizados para investigar o real papel dos primatas no ciclo de vida de N. caninum.(AU)

Studies indicate through experimental infection that non-human primates are susceptible to infection by Neospora caninum. This report is of a case of a night monkey (Aotus azarae infulatus) that presented nonspecific signs and did not respond to supportive clinical therapy evolving to death, followed by a pathology examination. Tissue specimens were routinely collected and processed for the preparation of histological slides. Microscopically, the main lesion was observed in the heart and consisted of multifocal necrotic myocarditis by protozoa, with the presence of structures compatible with the stage of protozoan tachyzoites of the genus Neospora sp. or Toxoplasma sp. In the central nervous system, predominantly in the brainstem there were structures similar to those described in the heart. Polymerase chain reaction (PCR) results were positive for N. caninum and was negative for Toxoplasma gondii using DNA extracted from blood and tissues. This case report provides histological and molecular evidence that the primate in question was susceptible to a natural infection, but studies should be conducted to investigate the real role of primates in the life cycle of N. caninum.(AU)

Detecção molecular de Neospora caninum em macaco-da-noite (Aotus azarae) de vida livre no estado do Mato Grosso: relato de caso / Molecular detection of Neospora caninum in azara's night monkey (Aotus azarae) of wildlife in the state of Mato Grosso: Case report

Estudos indicam, por meio de infecção experimental, que primatas não humanos são susceptíveis à infecção por Neospora caninum. Relata-se um caso de um macaco-da-noite (Aotus azarae infulatus), que apresentou sinais inespecíficos e não respondeu à terapêutica clínica de suporte, evoluindo a óbito, encaminhado em seguida para exame anatomopatológico. Amostras de tecidos foram coletadas e processadas rotineiramente para confecção de lâminas histológicas. Microscopicamente, a principal lesão foi observada no coração e consistia em miocardite necrótica multifocal por protozoário, com a presença de estruturas compatíveis com o estágio de taquizoítos de protozoários dos gêneros Neospora sp. ou Toxoplasma sp. No sistema nervoso central, predominantemente no tronco encefálico, havia estruturas semelhantes às descritas no coração. Os resultados da reação em cadeia pela polimerase (PCR) foram positivos para N. caninum e negativos para Toxoplasma gondii, usando DNA extraído do sangue e dos tecidos. Este relato de caso fornece evidências histológicas e moleculares de que o primata em questão foi susceptível a uma infecção natural, porém estudos devem ser realizados para investigar o real papel dos primatas no ciclo de vida de N. caninum.(AU)

Studies indicate through experimental infection that non-human primates are susceptible to infection by Neospora caninum. This report is of a case of a night monkey (Aotus azarae infulatus) that presented nonspecific signs and did not respond to supportive clinical therapy evolving to death, followed by a pathology examination. Tissue specimens were routinely collected and processed for the preparation of histological slides. Microscopically, the main lesion was observed in the heart and consisted of multifocal necrotic myocarditis by protozoa, with the presence of structures compatible with the stage of protozoan tachyzoites of the genus Neospora sp. or Toxoplasma sp. In the central nervous system, predominantly in the brainstem there were structures similar to those described in the heart. Polymerase chain reaction (PCR) results were positive for N. caninum and was negative for Toxoplasma gondii using DNA extracted from blood and tissues. This case report provides histological and molecular evidence that the primate in question was susceptible to a natural infection, but studies should be conducted to investigate the real role of primates in the life cycle of N. caninum.(AU)

Avispora mochogalegoi n. sp. (Apicomplexa: Sarcocystidae) in the little owl, Athene noctua (Strigiformes: Strigidae), in mainland Portugal / Avispora mochogalegoi n. sp. (Apicomplexa: Eimeriidae) no mocho-galego, Athene noctua (Strigiformes: Strigidae), em Portugal Continental

The little owl Athene noctua (Scopoli, 1769) is a small raptor that is widely distributed from northern to southern Portugal and several other countries in Europe, Asia and North Africa, and which has been introduced into New Zealand. In the current study, 18 fecal samples were collected from little owls kept at the Lisbon Center for Wild Animal Recovery, which is located in Monsanto Forest Park, Lisbon, Portugal. Twelve (67%) of them were found to be passing an undescribed species of Avispora in their feces. The oocysts of Avispora mochogalegoi n. sp. were ellipsoidal with a bilayered wall and measured 38.9 × 32.9 µm, with a shape index of 1.18. No micropyle, oocyst residuum or polar granule was present. The sporocysts were subspherical, measuring 21.1 × 20.1 µm. Stieda, sub-Stieda and para-Stieda bodies were absent. The sporocyst residuum was composed of a compact subspherical mass of granules. This is the fourth species of Avispora reported in Strigiformes.(AU)

O mocho-galego Athene noctua (Scopoli, 1769) é uma pequena ave de rapina amplamente distribuída de norte a sul de Portugal, em vários países da Europa, Ásia e norte da África, e foi introduzida na Nova Zelândia. No presente trabalho, 18 amostras de fezes foram coletadas de mochos-galegos mantidos no Centro de Recuperação de Animais Silvestres de Lisboa, localizado no Parque Florestal de Monsanto, Lisboa, Portugal. Doze (67%) deles eliminaram uma espécie não descrita de Avispora em suas fezes. Os oocistos de Avispora mochogalegoi n. sp. foram elipsóides, com parede de dupla camada, medindo 38,9 × 32,9 µm, e índice morfométrico de 1,18. A micrópila, resíduo do oocisto e grânulo polar foram ausentes. Os esporocistos foram subesféricos, medindo 21,1 × 20,1 µm. Corpos de Stieda, substieda e parastieda foram ausentes. O resíduo do esporocisto foi composto de uma massa subesférica compacta de grânulos. Esta é a quarta espécie Avispora relatada em Strigiformes.(AU)

Molecular phylogeny of Toxoplasmatinae: comparison between inferences based on mitochondrial and apicoplast genetic sequences / Filogenia molecular de Toxoplasmatinae: comparação entre inferências baseadas em sequências genéticas mitocondriais e de apicoplasto

Phylogenies within Toxoplasmatinae have been widely investigated with different molecular markers. Here, we studied molecular phylogenies of the Toxoplasmatinae subfamily based on apicoplast and mitochondrial genes. Partial sequences of apicoplast genes coding for caseinolytic protease (clpC) and beta subunit of RNA polymerase (rpoB), and mitochondrial gene coding for cytochrome B (cytB) were analyzed. Laboratory-adapted strains of the closely related parasites Sarcocystis falcatula and Sarcocystis neurona were investigated, along with Neospora caninum, Neospora hughesi, Toxoplasma gondii (strains RH, CTG and PTG), Besnoitia akodoni, Hammondia hammondiand two genetically divergent lineages of Hammondia heydorni. The molecular analysis based on organellar genes did not clearly differentiate between N. caninum and N. hughesi, but the two lineages of H. heydorni were confirmed. Slight differences between the strains of S. falcatula and S. neurona were encountered in all markers. In conclusion, congruent phylogenies were inferred from the three different genes and they might be used for screening undescribed sarcocystid parasites in order to ascertain their phylogenetic relationships with organisms of the family Sarcocystidae. The evolutionary studies based on organelar genes confirm that the genusHammondia is paraphyletic. The primers used for amplification of clpC and rpoB were able to amplify genetic sequences of organisms of the genus Sarcocystisand organisms of the subfamily Toxoplasmatinae as well.(AU)

A filogenia da subfamília Toxoplasmatinae tem sido amplamente investigada com diversos marcadores moleculares. Neste estudo, a filogenia molecular da subfamília Toxoplasmatinae foi analisada através de genes de apicoplasto e mitocondriais. Foram analisadas sequências parciais de genes de apicoplasto codificadores da protease caseinolítica (clpC), e da subunidade beta da RNA polimerase (rpoB) e de gene mitocondrial codificador de citocromo B (cytB). Foram investigadas cepas adaptadas em laboratório de Sarcocystis neurona eSarcocystis falcatula, parasitos estreitamente relacionados, além de Neospora caninum, Neospora hughesi, Toxoplasma gondii (cepas RH, CTG e PTG),Besnoitia akodoni, Hammondia hammondi e duas linhagens geneticamente divergentes de Hammondia heydorni. A análise molecular, baseada em genes de organelas, não diferenciou claramenteN. caninum de N. hughesi, porém foi possível confirmar as duas linhagens de H. heydorni. Foram encontradas pequenas diferenças entre as cepas adaptadas em laboratório deS. falcatula e S. neurona em todos os marcadores moleculares avaliados. Concluindo, filogenias congruentes foram reconstruídas com os três diferentes genes que podem ser úteis em triagem de parasitos sarcocistídeos não identificados, para identificar sua relação com organismos da família Sarcocystidae. Os estudos evolutivos com genes organelares confirmam que o gênero Hammondia é parafilético. Osprimers utilizados para amplificação declpC e rpoB foram capazes de amplificar sequências genéticas de organismos do gênero Sarcocystis e da subfamília Toxoplasmatinae.(AU)

Molecular detection of protozoa of the Sarcocystidae family in sheep from the state of Rio Grande do Sul, Brazil / Detecção molecular de protozoários da família Sarcocystidae em ovinos no estado do Rio Grande do Sul, Brasil

Infections caused by protozoa belonging to the Sarcocystidae family have worldwide distribution and are common in ruminants, leading to considerable economic losses. This study evaluates Sarcocystis spp., Toxoplasma gondii and Neospora caninum infections in sheep from Southwest region of Rio Grande do Sul, Brazil. Myocardium samples of 80 sheep raised on extensive system were collected. Tissue cysts were detected by direct examination and presence of infective agents was confirmed by PCR. Macroscopic evaluation did not reveal changes, but direct microscopic examination showed cysts in 76.2% (61/80, 95% CI: 66.9 - 85.9) samples, and all cysts were morphologically similar to those caused by Sarcocystis tenella or Sarcocystis arieticanis. PCR detected Sarcocystis spp. DNA in 21.2% (17/80, CI: 12.3-30.2) of the tested samples and T. gondii DNA in 15% (12/80, CI: 7.2-22.8). Moreover, 6.2% (5/80, CI: 2.1-13.9) samples contained DNA of both protozoan. The presence of N. caninum nucleic acids was not observed in tested samples. However, all PCR-positive samples (23.7%-19/80, CI: 14.4-33.1) were also positive by direct examination (microscopic cysts). Thus, a high occurrence of microscopic tissue cysts was detected in sheep from southwest region of Rio Grande do Sul State. Although PCR did not show good sensitivity to identify the causative agents of these cysts, it revealed the presence of Sarcocystis spp. and T. gondii in ovine cardiac muscle samples. This may predispose the contamination of animals and humans by these protozoa.(AU)

Infecções causadas por protozoários da família Sarcocystidae apresentam distribuição mundial, sendo comuns em ruminantes, responsáveis por causar importantes perdas econômicas. Este estudo avaliou infecções de Sarcocystis spp., Toxoplasma gondii e Neospora caninum em ovinos da região sudoeste do Rio Grande do Sul, Brasil. Foram coletadas amostras de miocárdio de 80 ovinos criados em sistema extensivo. Cistos teciduais foram detectados por exame direto, com a presença dos agentes confirmada por PCR. A avaliação macroscópica não revelou alterações, porém, no exame microscópico direto, foram verificados cistos em 76,2% (61/80, 95% IC: 66,9-85,9) das amostras, sendo todos morfologicamente semelhantes ao Sarcocystis tenella ou Sarcocystis arieticanis. A PCR detectou DNA de Sarcocystis spp. em 21,2% (17/80, IC: 12,3-30,2) das amostras testadas e DNA de T. gondii em 15% (12/80, IC: 7,2-22,8). Em 6,2% (5/80, IC: 2,1-13,9), foram detectados DNA de ambos os protozoários. Todas as amostras positivas no PCR (23,7%-19/80, IC: 14,4-33,1) também foram positivas no exame direto (cistos microscópicos). Assim, uma alta ocorrência de cistos teciduais microscópicos em ovinos da região sudoeste do Rio Grande do Sul foi detectada. Apesar de a PCR não ter mostrado uma boa sensibilidade na identificação dos agentes causadores desses cistos, foi possível verificar a presença de Sarcocystis spp. e T. gondii em amostras do músculo cardíaco de ovinos. Dessa maneira, a presença destes protozoários pode predispor a contaminação de humanos e animais.(AU)

Molecular phylogeny of Toxoplasmatinae: comparison between inferences based on mitochondrial and apicoplast genetic sequences

Abstract Phylogenies within Toxoplasmatinae have been widely investigated with different molecular markers. Here, we studied molecular phylogenies of the Toxoplasmatinae subfamily based on apicoplast and mitochondrial genes. Partial sequences of apicoplast genes coding for caseinolytic protease (clpC) and beta subunit of RNA polymerase (rpoB), and mitochondrial gene coding for cytochrome B (cytB) were analyzed. Laboratory-adapted strains of the closely related parasites Sarcocystis falcatula and Sarcocystis neurona were investigated, along with Neospora caninum, Neospora hughesi, Toxoplasma gondii (strains RH, CTG and PTG), Besnoitia akodoni, Hammondia hammondiand two genetically divergent lineages of Hammondia heydorni. The molecular analysis based on organellar genes did not clearly differentiate between N. caninum and N. hughesi, but the two lineages of H. heydorni were confirmed. Slight differences between the strains of S. falcatula and S. neurona were encountered in all markers. In conclusion, congruent phylogenies were inferred from the three different genes and they might be used for screening undescribed sarcocystid parasites in order to ascertain their phylogenetic relationships with organisms of the family Sarcocystidae. The evolutionary studies based on organelar genes confirm that the genusHammondia is paraphyletic. The primers used for amplification of clpC and rpoB were able to amplify genetic sequences of organisms of the genus Sarcocystisand organisms of the subfamily Toxoplasmatinae as well.

Resumo A filogenia da subfamília Toxoplasmatinae tem sido amplamente investigada com diversos marcadores moleculares. Neste estudo, a filogenia molecular da subfamília Toxoplasmatinae foi analisada através de genes de apicoplasto e mitocondriais. Foram analisadas sequências parciais de genes de apicoplasto codificadores da protease caseinolítica (clpC), e da subunidade beta da RNA polimerase (rpoB) e de gene mitocondrial codificador de citocromo B (cytB). Foram investigadas cepas adaptadas em laboratório de Sarcocystis neurona eSarcocystis falcatula, parasitos estreitamente relacionados, além de Neospora caninum, Neospora hughesi, Toxoplasma gondii (cepas RH, CTG e PTG),Besnoitia akodoni, Hammondia hammondi e duas linhagens geneticamente divergentes de Hammondia heydorni. A análise molecular, baseada em genes de organelas, não diferenciou claramenteN. caninum de N. hughesi, porém foi possível confirmar as duas linhagens de H. heydorni. Foram encontradas pequenas diferenças entre as cepas adaptadas em laboratório deS. falcatula e S. neurona em todos os marcadores moleculares avaliados. Concluindo, filogenias congruentes foram reconstruídas com os três diferentes genes que podem ser úteis em triagem de parasitos sarcocistídeos não identificados, para identificar sua relação com organismos da família Sarcocystidae. Os estudos evolutivos com genes organelares confirmam que o gênero Hammondia é parafilético. Osprimers utilizados para amplificação declpC e rpoB foram capazes de amplificar sequências genéticas de organismos do gênero Sarcocystis e da subfamília Toxoplasmatinae.

Seroepidemiology of Sarcocystis neurona, Toxoplasma gondii and Neospora spp. among horses in the south of the state of Minas Gerais, Brazil / Soroepidemiologia de Sarcocystis neurona, Toxoplasma gondii e Neospora spp. em Equinos no Sul do Estado de Minas Gerais, Brasil

The present study used the indirect fluorescent antibody test (IFAT) to determine the seroprevalence of Sarcocystis neurona, Toxoplasma gondii and Neospora spp., and evaluated the variables associated with these infections among 506 apparently healthy horses, reared in the south of the state of Minas Gerais, Brazil. This study was conducted between April 2012 and October 2013. Among the horses, the true prevalence of S. neurona was 26% (95% CI: 22.0-30.4%), T. gondii 19.9% (95% CI: 15.5-24.8%) and Neospora spp. 23.9% (95% CI: 19.9-28.1%); and among the farms, 88.3% (95% CI: 74.4-91.6%), 71.6% (95% CI: 41-92.8%) and 85% (95% CI: 70.7-96.1%), respectively. Regarding mixed infection, 17 horses (3.4%) were seropositive for both S. neurona and T. gondii, 16 (3.2%) for T. gondii and Neospora spp. and 14 (2.8%) for S. neurona and Neospora spp. The associations between seropositivity and variables relating to the structure of the farm, management and health were analyzed using the logistic regression analysis, through the generalized estimating equations (GEE). The results suggest that the south of Minas Gerais is an enzootic area for S. neurona, T. gondii and Neospora spp. among horses, with prevalence of asymptomatic subclinical or chronic infections.(AU)

Este estudo determinou, pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI), a soroprevalência de Sarcocystis neurona, Toxoplasma gondii e Neospora spp., e avaliou as variáveis associadas com a infecção, em 506 equinos, aparentemente sadios, criados no Sul de Minas, Brasil. O estudo foi realizado no período de abril de 2012 a outubro de 2013. Entre equinos, a prevalência verdadeira para S. neurona foi de 26% (IC 95%= 22,0-30,4%); para T. gondii de 19,9% (IC 95%= 15,5-24,8%); e para Neospora spp. de 23,9% (IC 95%= 19,9-28,1%); e entre propriedades, 88,3% (IC 95%= 74,4-91,6%), 71,6% (IC 95% = 41-92,8%), e 85% (IC 95%= 70,7-96,1%), respectivamente. Em relação à infecção mista, 17 (3,4%) equinos foram soropositivos para S. neurona e T. gondii, 16 (3,2%) para T. gondii e Neospora spp., e 14 (2,8%) para S. neurona e Neospora spp. A associação entre soropositividade e variáveis relacionadas à estrutura da propriedade, manejo e sanidade, foi analisada, utilizando-se a análise de regressão logística estimada por Generalized Estimating Equations (GEE). Os resultados sugerem que o Sul de Minas é área enzoótica para S. neurona, T. gondii e Neospora spp. em equinos, com predomínio de infecções subclínicas ou crônicas, assintomáticas.(AU)

Antibodies against Neospora caninum, Sarcocystis spp. and Toxoplasma gondii detected in buffaloes from Rio Grande do Sul, Brazil / Anticorpos contra Neospora caninum, Sarcocystis spp. e Toxoplasma gondii detectados em búfalos no Rio Grande do Sul

The presence of antibodies against Neospora caninum, Sarcocystis spp. and Toxoplasma gondii was evaluated in buffaloes (Bubalus bubalis) from Rio Grande do Sul state (RS), southern Brazil. Serum samples (n=220) were analyzed for antibodies by indirect fluorescent antibody test (IFAT). Antibody presence was considered when the titers were equal or higher than 100 for these protozoa. A total of 60.5% (133/220) buffalo serum samples were positive for at least one of the protozoa evaluated in this study. Antibodies for N. caninum, Sarcocystis spp. and T. gondii were found in 36.4% (80/220), 25.5% (56/220) and 16.8% (37/220) of the buffaloes respectively, indicating a higher frequency of N. caninum infection (p=0.0133). The IFAT is a suitable method to diagnose N. caninum, Sarcocystis spp. and T. gondii infection in buffaloes for detecting IgG antibodies. This study demonstrates the presence of these three protozoa in buffalo herds in RS, Brazil, which may be source of infection to other animals. The high frequency of animals positive for N. caninum is important and could be related to reproductive problems. Additionally, the presence of Sarcocystis spp. and T. gondii in buffaloes can be a possible public health issue.(AU)

A presença de anticorpos contra Neospora caninum, Sarcocystis spp. e Toxoplasma gondii foi avaliada em búfalos (Bubalus bubalis) no estado do Rio Grande do Sul (RS), Região Sul do Brasil. Amostras de soro de 220 bubalinos foi analisada para presença de anticorpos, através de reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Foram consideradas positivas as amostras que apresentaram títulos de anticorpos maiores ou iguais a 100, para os protozoários estudados. Um total de 60,5% (133/220) das amostras sorológicas dos búfalos foram positivas para pelo menos um dos parasitas pesquisados. Anticorpos para N. caninum, Sarcocystis spp. e T. gondii foram encontrados em 36,4% (80/220); 25,5% (56/220) e 16,8% (37/220) dos búfalos respectivamente, indicando que houve uma maior frequência de infecção de N. caninum em relação aos demais protozoários (p=0.0133). A RIFI é um método adequado para o diagnóstico sorológico da infecção por N. caninum, Sarcocystis spp. e T. gondii em búfalos. Este estudo demonstrou a presença destes três protozoários em bubalinos no RS, Brasil, que pode ser fonte de infecção para outros animais. A elevada ocorrência de animais positivos para N. caninum é importante e pode estar relacionada a problemas reprodutivos. Adicionalmente, a presença de Sarcocystis spp. e T. gondii em búfalos, pode significar um possível problema de saúde pública.(AU)

Antibodies against Neospora caninum, Sarcocystis spp. and Toxoplasma gondii detected in buffaloes from Rio Grande do Sul, Brazil / Anticorpos contra Neospora caninum, Sarcocystis spp. e Toxoplasma gondii detectados em búfalos no Rio Grande do Sul

The presence of antibodies against Neospora caninum, Sarcocystis spp. and Toxoplasma gondii was evaluated in buffaloes (Bubalus bubalis) from Rio Grande do Sul state (RS), southern Brazil. Serum samples (n=220) were analyzed for antibodies by indirect fluorescent antibody test (IFAT). Antibody presence was considered when the titers were equal or higher than 100 for these protozoa. A total of 60.5% (133/220) buffalo serum samples were positive for at least one of the protozoa evaluated in this study. Antibodies for N. caninum, Sarcocystis spp. and T. gondii were found in 36.4% (80/220), 25.5% (56/220) and 16.8% (37/220) of the buffaloes respectively, indicating a higher frequency of N. caninum infection (p=0.0133). The IFAT is a suitable method to diagnose N. caninum, Sarcocystis spp. and T. gondii infection in buffaloes for detecting IgG antibodies. This study demonstrates the presence of these three protozoa in buffalo herds in RS, Brazil, which may be source of infection to other animals. The high frequency of animals positive for N. caninum is important and could be related to reproductive problems. Additionally, the presence of Sarcocystis spp. and T. gondii in buffaloes can be a possible public health issue.(AU)

A presença de anticorpos contra Neospora caninum, Sarcocystis spp. e Toxoplasma gondii foi avaliada em búfalos (Bubalus bubalis) no estado do Rio Grande do Sul (RS), Região Sul do Brasil. Amostras de soro de 220 bubalinos foi analisada para presença de anticorpos, através de reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Foram consideradas positivas as amostras que apresentaram títulos de anticorpos maiores ou iguais a 100, para os protozoários estudados. Um total de 60,5% (133/220) das amostras sorológicas dos búfalos foram positivas para pelo menos um dos parasitas pesquisados. Anticorpos para N. caninum, Sarcocystis spp. e T. gondii foram encontrados em 36,4% (80/220); 25,5% (56/220) e 16,8% (37/220) dos búfalos respectivamente, indicando que houve uma maior frequência de infecção de N. caninum em relação aos demais protozoários (p=0.0133). A RIFI é um método adequado para o diagnóstico sorológico da infecção por N. caninum, Sarcocystis spp. e T. gondii em búfalos. Este estudo demonstrou a presença destes três protozoários em bubalinos no RS, Brasil, que pode ser fonte de infecção para outros animais. A elevada ocorrência de animais positivos para N. caninum é importante e pode estar relacionada a problemas reprodutivos. Adicionalmente, a presença de Sarcocystis spp. e T. gondii em búfalos, pode significar um possível problema de saúde pública.(AU)

Evaluation of the accuracy of parasitological techniques for the diagnosis of intestinal parasites in cats / Avaliação da acurácia de técnicas parasitológicos para o diagnóstico de parasitos intestinais em gatos

The accuracy of the parasitological techniques of Willis, Hoffman-Pons-Janer or Lutz (HPLJ), Sheather and Faust was evaluated in fecal samples from stray cats caught by the Zoonosis Control Center in Goiânia, Goiás, Brazil. These four techniques were applied separately to analyze 154 fecal samples, and their accuracy was analyzed based on an evaluation of their sensitivity, specificity, positive and negative predictive values, and Kappa index, resulting in the selection of the Willis technique as the nominal gold standard. Of the 154 samples, 115 (74.68%) tested positive for intestinal parasites. The analysis of the frequency of positivity indicated that the HPLJ technique detected 86.1% of the positive samples and was the closest to the gold standard. The analysis of the accuracy of the techniques was evaluated using the most prevalent parasites. The Sheather technique showed the highest accuracy in the detection of Ancylostomatidae, while the Sheather and HPLJ techniques showed similar accuracies in the detection of Cystoisospora spp. when compared to the gold standard. Lastly, the Faust technique showed the highest accuracy in the detection of Toxoplasma gondii when compared to the gold standard. This study underscores the importance of combining parasitological techniques in the diagnosis of intestinal parasites in cats.(AU)

A avaliação da acurácia das técnicas parasitológicas de Willis, Hoffman-Pons-Janer ou Lutz (HPJL), Sheather e Faust foram realizadas em amostras fecais de gatos capturados pelo Centro de Controle de Zoonoses em Goiânia, Goiás. Essas quatro técnicas foram utilizadas separadamente para análise de 154 amostras fecais. A análise de acurácia foi empregada, avaliando-se a sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo, valor preditivo negativo e índice kappa, sendo a técnica de Willis eleita como padrão-ouro. Das amostras analisadas 74,68% (115/154) foram positivas para enteroparasitos. A análise de frequência de positividade demonstrou que a técnica HPJL detectou 86,1% dos positivos, aproximando-se do padrão-ouro. A avaliação da acurácia foi realizada pela análise dos parasitos mais prevalentes, sendo que, para Ancilostomídeos, a técnica de Sheather apresentou melhor acurácia; para Cystoisospora spp., as técnicas de Sheather e HPJL foram semelhantes e para Toxoplasma gondii, a técnica de Faust apresentou melhor acurácia comparada ao padrão ouro. Este estudo demonstra a importância da associação de técnicas parasitológicas para o diagnóstico de enteroparasitos em gatos.(AU)

SOROPREVALÊNCIA DAS INFECÇÕES POR Herpesvírus equino (EHV-1/ EHV-4), Sarcocystis neurona e Brucella spp. EM CAVALOS DA MICRORREGIÃO DE ILHÉUS-ITABUNA, BAHIA-BRASIL

Objetivou-se com este estudo determinar a soroprevalência e fatores associados à infecção por Herpesvírus equino (EHV-1/EHV-2), S. neurona e Brucella spp. em cavalos, assim como, determinar a positividade de oocistos de S. neurona em Didelphis spp. Todos os animais foram provenientes da microrregião de Ilhéus-Itabuna, Bahia, Brasil. Para o diagnóstico de Herpesvírus equino (EHV- 1/EHV-2), foi utilizada a técnica de soroneutralização em microplacas, e considerados positivos animais com titulação 4 capaz de inibir 100% do efeito citopático. Para S. neurona foi utilizado a reação de imunofluorescência indireta (RIFI) utilizando merozoitas da cepa de S. neurona 138 (SN138) com o ponto de corte 1:80. E para Brucella spp. foram utilizados como triagem o teste do antígeno acidificado tamponado (AAT) e como confirmatório o teste de soroaglutinação lenta em tubos (SAT) com o ponto de corte 1:100 associado ao teste de redução pelo 2-Mercaptoetanol (2ME) em titulações (1:25, 1:50, 1:100, 1:200). Foram capturados 25 Didelphis spp. para a pesquisa de oocistos e esporocistos de S. neurona através do exame de fezes e da digestão do raspado da mucosa intestinal. Foi observado uma prevalência de 36,33% (IC95% = 32,44 40,13) de equinos soropositivos para Herpesvírus equino (EHV-1/EHV-4), com titulação de 1:4 (105), 1:8 (52), 1:16 (32), 1:32 (20), 1:64 (9), 1:128 (8). A prevalência de anticorpos anti- S. neurona nos equinos amostrados foi de 7,92% (IC 95%= 5,99 10,23), com titulação encontrada de 1:80 (94,3%), 1:160 (3,8%) e 1:320 (1,9%). A positividade de anticorpos contra Brucella spp. encontrados nos equinos foi de 0,15% (1 animal) com (IC 95%= 0-0,83) na titulação 1:100 (SAT) e 1:50 (2ME). Todos os Didelphis spp. analisados foram negativos para a presença de S. neurona. Este é o primeiro estudo que avalia os três agentes em cavalos.

The objective of this study was to determine seroprevalence and factors associated with infection by Equine Herpesvirus (EHV-1 / EHV-2), S. neurona and Brucella spp. in horses, as well as to determine the positivity of S. neurona oocysts in Didelphis spp. All animals came from the micro region of IlhéusItabuna, Bahia, Brazil. For the diagnosis of Equine Herpesvirus (EHV-1 / EHV-2), the micro-plate seroneutralization technique was used, and animals with a titre 4 capable of inhibiting 100% of the cytopathic effect were considered positive. For S. neurona, the indirect immunofluorescence reaction (IFAT) was used using merozoites from the S. neurona 138 (SN138) strain with a cutoff point of 1:80. And for Brucella spp. the buffered acidified antigen (AAT) test was used as a screening test and the slow serum agglutination test (SAT) with the cut-off point 1: 100 associated with the 2-Mercaptoethanol (2ME) reduction test in titrations (1 : 25, 1:50, 1: 100, 1: 200). 25 Didelphis spp. for the investigation of oocysts and sporocysts of S. neurona through the examination of feces and digestion of the scrape of the intestinal mucosa. It was observed a prevalence of 36.33% (95% CI = 32.44 - 40.13) of horses seropositive for Equine Herpesvirus (EHV-1 / EHV- 4), with a titre of 1:4 (105), 1:8 (52), 1:16 (32), 1:32 (20), 1:64 (9), 1:128 (8). The prevalence of anti-S. neurona antibodies in the sampled horses was 7.92% (95% CI = 5.99 - 10.23), with a titre found of 1:80 (94.3%), 1: 160 ( 3.8%) and 1: 320 (1.9%). The positivity of antibodies against Brucella spp. found in horses was 0.15% (1 animal) with (95% CI = 0-0.83) in the titration 1: 100 (SAT) and 1:50 (2ME). All Didelphis spp. analyzed were negative for the presence of S. neurona. This is the first study to evaluate the three agents in horses.

Transmissão vertical de Toxoplasma gondii, Neospora spp. e Sarcocystis neurona em éguas da raça Puro Sangue Inglês (PSI)

As doenças infecto-parasitárias causam prejuízos na criação de equinos. Os protozoários Toxoplasma gondii, Neospora spp. e Sarcocystis neurona estão relacionados às doenças neurológicas e reprodutivas em equinos. Em cavalos, T. gondii e Neospora spp. podem ser transmitidos via horizontal e vertical. Sarcocystis neurona causa a Mieloencefalite Protozoária Equina (MEP). Existem poucos estudos que avaliaram a presença dos protozoários em placentas de éguas e até o presente, não foram encontrados trabalhos em amostras de líquido amniótico. A presente dissertação foi dividida em dois capítulos. O capítulo I objetivou detectar e monitorar os anticorpos anti-Toxoplasma gondii, anti-Neospora spp. e anti-Sarcocystis neurona em éguas prenhas e verificar a exposição intra-uterina dos parasitas, pela pesquisa de anticorpos específicos em amostras pré colostrais de potros. Amostras de soro de 31 éguas prenhas foram avaliadas em três momentos: (1º) dois meses antes do parto; (2º) um mês antes do parto e (3º) no dia do parto. As amostras séricas dos potros foram analisadas antes da ingestão do colostro. O método RIFI (Reação de Imunofluorescência Indireta), nos soros maternos foi realizado nas diluições 1:64 para T. gondii, 1:50 para Neospora spp. e 1:16 para S. neurona. Os soros pré colostrais dos potros foram avaliados sem diluição e na diluição 1:16 para os três protozoários. Nenhuma égua apresentou anticorpos para T. gondii. Em 19,35% das éguas, verificou-se anticorpos anti-Neospora spp. e 29,03% anticorpos anti-S. neurona. Nenhum anticorpo foi detectado nas amostras pré colostrais dos potros. Durante o período gestacional, as éguas apresentaram flutuações nos títulos de anticorpos anti-Neospora spp. e anti-S. neurona, com maior soroprevalência no 9º mês para ambos. Neste estudo constatou a presença de anticorpos anti-Neospora spp. e anti-S. neurona em éguas. Nos potros não foram detectados anticorpos. O monitoramento das éguas prenhas soropositivas é importante para a sanidade do animal. O capítulo II objetivou detectar os protozoários Toxoplasma gondii, Neospora spp e Sarcocystis neurona em placentas equinas e líquido amniótico, e descrever lesões causadas pelos parasitas. Amostras de soro de 31 éguas prenhas foram avaliadas pelo método de RIFI como descrito anteriormente. A PCR para os três protozoários foi realizada em amostras de placentas (pool) de 31 éguas e em 30 amostras de líquido amniótico. Para análise histológica foram coletadas quatro regiões da placenta (corno prenhe, corno não prenhe, corpo do útero e estrela cervical). Estruturas parasitárias (cistos) foram observadas em cinco placentas. Na PCR quatro amostras de placenta foram positivas para Neospora spp. e uma para S. neurona. A PCR dos líquidos amnióticos resultou em sete amostras positivas, uma para T. gondii, cinco para Neospora spp. e uma S. neurona. Neospora spp. e Sarcocystis neurona foram detectados em tecidos placentários, demonstrando que estes infectam placenta equina. T. gondii, Neospora spp. e S. neurona foram detectados em amostras de líquido amniótico. Sugere-se que a transmissão transplacentária de T. gondii, Neospora spp. e Sarcocystis neurona ocorra em éguas.

Infectious-parasitic diseases cause damage to horse breeding. Toxoplasma gondii, Neospora spp. and Sarcocystis neurona are related to neurological and reproductive diseases in horses. In horse T. gondii and Neospora spp. can be transmitted through horizontal and vertical routes. S. neurona causes Equine Protozoan Myeloencephalitis (EPM). There are few studies that have evaluated the presence of protozoa in mares placentas and to date, no studies have been found in samples of amniotic fluid. This dissertation had been divided into two chapters. Chapter I aimed to detect and monitor the antibodies anti-Toxoplasma gondii, antiNeospora spp. and anti-Sarcocystis neurona in pregnant mares and to verify the intrauterine exposure of the parasites by detecting specific antibodies in pre-colostral samples of the foals. Serum samples from 31 pregnant mares were evaluated in three moments: (1st) two months before delivery; (2nd) one month before delivery and (3rd) on the day of the birth. The serum samples from foals were analyzed before ingesting colostrum. The IFAT method (Indirect Immunofluorescence Antibody Test) in maternal serum was performed at 1:64 dilutions for T. gondii, 1:50 for Neospora spp. and 1:16 for S. neurona. Pre colostral serum from foals were tested pure and at 1:16 dilution for the three protozoa. No mare showed antibodies to T. gondii. In 19.35% of the mares were verified anti-Neospora spp.; and 29.03% were verified with anti-S. neurona antibodies. No antibodies were detected in the pre colostral samples of the foals. During the gestational period, the mares showed fluctuations in the anti-Neospora spp. and anti-S. neurona, with higher seroprevalence in the 9th month for both. This study has established the presence of anti-Neospora spp. and anti-S. neurona in mares.This study has established the presence of anti-Neospora spp. and anti-S. neurone in mares. In foals, no antibodies were detected. Monitoring of pregnant seropositive mares is important for the animal's health. Chapter II aimed to detect the protozoa Toxoplasma gondii, Neospora spp. and Sarcocystis neurona in equine placentas and amniotic fluid, and to describe the lesions caused by the parasites. Serum samples from 31 pregnant mares were evaluated by the IFAT method as previously described. PCR, for the three protozoans, was performed from the placental samples (pool) of 31 mares and 30 samples of amniotic fluid. For histological analysis, four regions (pregnant horn, not pregnant horn, body of the uterus and cervical star) of the placenta were collected. Parasitic structures (cysts) were observed in five placentas. In PCR, four placenta samples were positive for Neospora spp., and one for S. neurona. The amniotic fluids PCR resulted in seven positive sample, one for T gondii, five for Neospora spp. and a S. neurona. Neospora spp. and Sarcocystis neurona were detected in placental tissues, demonstrating that these infect mares placentas. T. gondii, Neospora spp. and S. neurona were detected in samples of amniotic fluid. It is suggested that the transplacental transmission of Toxoplasma gondii, Neospora spp. and Sarcocystis neurona occurs in mares.

ANTICORPOS CONTRA Toxoplasma gondii E Sarcocystis spp. PRODUZIDOS POR INFECÇÃO EXPERIMENTAL EM ROEDORES: CARACTERIZAÇÃO E AVALIAÇÃO DE REATIVIDADE CRUZADA COM PROTOZOÁRIOS CORRELATOS

Toxoplasma gondii e Sarcocystis spp. são parasitos do filo Apicomplexa, formadores de cistos teciduais e excretados por Didelphis spp. Toxoplasma gondii apresenta-se amplamente difundido em todas as regiões do planeta, infectando diversas espécies de mamíferos e aves, enquanto que Sarcocystis spp. excretadas por gambás encontram-se limitadas às Américas, acompanhando a área de distribuição dos seus hospedeiros definitivos. O aprimoramento do diagnóstico sorológico para ambos os gêneros de parasitos é essencial, visando tanto identificar a forma infectante envolvida nos casos de toxoplasmose humana, quanto avaliar a possibilidade de reatividade sorológica cruzada entre Sarcocystis spp. filogeneticamente correlatas. Objetivou-se com este estudo caracterizar anticorpos monoclonais desenvolvidos contra esporozoítos de T. gondii testando-os contra diferentes estágios do parasito e de outros coccídios correlatos pelas técnicas de imunofluorescência indireta e Imunoblot, assim como avaliar o uso do gerbil como hospedeiro experimental de uma cepa de Sarcocystis falcatula-like isolada na Bahia e investigar a possível reatividade dos seus anticorpos contra antígeno de Sarcocystis neurona na imunofluorescência indireta e no Imunoblot. Um dos anticorpos monoclonais (G1/19) reconheceu apenas antígeno de esporozoítos de T. gondii, enquanto que o outro (K3/7-13) identificou proteínas de taquizoítos e esporozoítos. Os gerbis não se mostraram susceptíveis à infecção por S. falcatula-like, mas soroconverteram e apresentaram reatividade sorológica cruzada com antígeno de S. neurona no Imunoblot. Estes achados indicam que o monoclonal G1/19 é promissor para o desenvolvimento de um diagnóstico específico para exposição a oocistos de T. gondii, bem como existe reação sorológica cruzada entre S. falcatula-like e S. neurona no Imunoblot, impactando na interpretação dos resultados sorológicos para este último parasito.

Toxoplasma gondii and Sarcocystis spp. are cyst-forming parasites of the Apicomplexa phylum excreted by Didelphis spp. While T. gondii is widespread in all regions of the world, infecting several species of mammals and birds, Sarcocystis spp. excreted by opossums are limited to the Americas, accompanying the distribution area of their definitive hosts. Improvement of the serological diagnosis for both parasite genera is essential, aiming both to identify the infective stage involved in cases of human toxoplasmosis, and to evaluate the possibility of cross-reactivity between Sarcocystis spp. phylogenetically correlated. The aims of this study were to characterize monoclonal antibodies against sporozoites of T. gondii with antigen of different stages of the parasite and other related-coccidia; to evaluate the use of gerbil as an experimental host of Sarcocystis falcatula-like strain isolated in Bahia, and to investigate the possible serologic cross-reactivity using Sarcocystis neurona and S. falcatula-like antigens. One of the monoclonal antibodies (G1/19) recognized only T. gondii sporozoite antigen, while the other (K3/7-13) identified tachyzoite and sporozoite proteins. The gerbils were not susceptible to infection by S. falcatula-like, but seroconverted and showed cross-reactivity with S. neurona antigen on Immunoblot. These findings indicate that the monoclonal G1/19 is promising for the development of a specific diagnosis for exposure to T. gondii oocysts, as well that cross-reactive occurs between S. falcatula-like and S. neurona in Immunoblot, impacting the interpretation of serological results for this last parasite.

Caracterização molecular de Sarcocystis spp. em aves silvestres de diversas classes taxonômicas: relações entre Sarcocystis falcatula, Sarcocystis neurona e organismos correlacionados prevalentes no Brasil

Sarcocystis são parasitos coccidios intracelulares caracterizados por um ciclo de vida obrigatório em dois hospedeiros. Multiplicação assexuada do parasito ocorre em hospedeiros intermediários, geralmente onívoros, com formação de cistos na musculatura. A fase sexual, com formação de oocistos/esporocistos, ocorre no intestino delgado de hospedeiros definitivos, geralmente carnívoros. Mais de 30 espécies de Sarcocystis são reconhecidas em aves e algumas delas, como S. falcatula e S. calchasi, podem ser patogênicas para hospedeiros aberrantes. Em aves que atuam como hospedeiros intermediários, a infecção ocorre pela ingestão de alimentos ou água contaminados com esporocistos. Aves que atuam como hospedeiros definitivos se infectam pelo consumo de tecidos contendo cistos. Poucos estudos em sarcocistose aviária têm sido realizados na América do Sul. No presente estudo, investigamos a presença de coccidios formadores de cistos na musculatura de aves silvestres coletadas pela Divisão Técnica de Medicina Veterinária e Gestão da Fauna Selvagem (DEPAVE-3) no estado de São Paulo, Brasil. Amostras de músculo peitoral de 400 aves pertencentes a 103 espécies foram submetidas a extração e amplificação de DNA pela nPCR-ITS1 direcionada à sequência do primeiro espaço transcrito interno do DNA ribossômico para triagem das amostras. Estes primers permitem a detecção de uma ampla diversidade de organismos pertencentes a família Sarcocystidae, pois hibridizam em regiões conservadas dos genes codificadores de DNA ribossômico 18S e 5.8S. Em amostras positivas na nPCR-ITS1, outros fragmentos gênicos foram amplificados por PCR. Amostras relacionadas com S. falcatula foram caracterizadas com sequências gênicas codificadoras de antígenos de superfície (SAGs) e nas demais amostras, genes mais conservados como citocromo c oxidase subunidade I (COX1) e a fração do gene do DNA ribossômico (18S rDNA) foram amplificados. Os produtos amplificados foram sequenciados, em todos os casos. Com esta metodologia, 36 amostras positivas na nPCR-ITS1, foram relacionadas com S. falcatula, das quais 28 foram identificadas como S. falcatula (10 Piciformes, 8 Psittaciformes, 5 Columbiformes, 2 Accipitriformes, 1 Anseriformes, 1 Passeriformes, 1 Strigiformes), 7 como Sarcocystis sp. ex Cacicus haemorrhous (6 Passeriformes, 1 Piciformes), e uma como Sarcocystis sp. ex Guira guira (1 Cuculiforme). As duas últimas espécies são inéditas. Dez amostras de outros Sarcocystídeos também foram amplificadas na nPCR-ITS1, das quais uma foi identificada como S. halieti (1 Accipitriformes), seis como Toxoplasma gondii (3 Pelecaniformes, 2 Falconiformes, 1 Columbiformes), uma como Sarcocystis sp. ex Coragyps atratus (1 Cathartiformes) e uma como Atoxoplasma sp. ex Icterus jamacaii (1 Passeriformes). As duas últimas espécies são inéditas. Este estudo é a primeira pesquisa extensiva em aves silvestres no Brasil para espécies de Sarcocistídeos, relatando pela primeira vez infecção natural com S. falcatula em 14 espécies incluindo a Ordem Piciformes e mostrando a ampla diversidade de hospedeiros intermediários da América do Sul para Sarcocystis spp.

Sarcocystis are intracellular coccidial parasites characterized by an obligatory life cycle in two hosts. Asexual multiplication of the parasite occurs in intermediate hosts, usually omnivores, with formation of cysts in the musculature. The sexual phase, with formation of oocysts / sporocysts, occurs in the small intestine of definitive hosts, usually carnivores. More than 30 species of Sarcocystis are recognized in birds and some of them, such as S. falcatula and S. calchasi, may be pathogenic for aberrant hosts. In birds that act as intermediate hosts, infection occurs by ingesting food or water contaminated with sporocysts. Birds that act as definitive hosts become infected by consuming tissue containing cysts. Few studies on avian sarcocystosis have been conducted in South America. Herein, we investigated the presence of cyst-forming coccidia in wild bird musculature collected by the Technical Division of Veterinary Medicine and Management of Wild Fauna (DEPAVE-3) in the state of São Paulo Brazil. Pectoral muscle samples from 400 birds belonging to 103 species were subjected to DNA extraction, and amplification by nPCR-ITS1 directed to the sequence of the first internal transcribed ribosomal DNA space for sample screening. These primers allow the detection of a wide diversity of organisms belonging to the Sarcocystidae family, as they hybridize in conserved regions of 18S and 5.8S ribosomal DNA coding genes. In nPCR-ITS1 positive samples, other gene fragments were amplified by PCR. S. falcatula-related samples were characterized with surface antigen coding gene sequences (SAGs), and in the other samples, more conserved genes such as cytochrome c oxidase subunit I (COX1) and the ribosomal DNA gene fraction (18S rDNA) were amplified. Amplified products were sequenced in all cases. With this methodology, 36 nPCR-ITS1 positive samples were related to S. falcatula, of which 28 were identified as S. falcatula (10 Piciformes, 8 Psittaciformes, 5 Columbiformes, 2 Accipitriformes, 1 Anseriformes, 1 Passeriformes, 1 Strigiformes), 7 as Sarcocystis sp. ex Cacicus haemorrhous (6 Passeriformes, 1 Piciformes), and one as Sarcocystis sp. ex Guira guira (1 Cuculiformes). The last two species are unpublished. Ten samples of other Sarcocystids were also amplified in nPCR-ITS1, one of which was identified as S. halieti (1 Accipitriformes), six as Toxoplasma gondii (3 Pelecaniformes, 2 Falconiformes, 1 Columbiformes), one as Sarcocystis sp. ex Coragyps atratus (1 Cathartiformes) and one as Atoxoplasma sp. ex Icterus jamacaii (1 Passeriformes). The last two species are unpublished. This study is the first extensive survey of wild birds in Brazil for Sarcocistydae species, reporting for the first-time natural S. falcatula infection in 14 species including the Order Piciformes and showing the wide diversity of South American intermediate hosts for Sarcocystis spp.